CN101721458A - 一种人胎盘组织液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种胎盘组织液的制备方法，该方法包括如下顺序进行的步骤：1)收集健康胎盘组织，依次用氯化钠溶液进行浸泡，清水漂洗，得到预处理胎盘组织；2)对预处理胎盘组织进行烘干、粉碎，制成粉碎胎盘；3)粉碎胎盘与水混合后依次进行超声提取、离心过滤，得到粗分胎盘组织液；4)对粗分胎盘组织液进行酸水解，过滤，得到酸水解胎盘组织液；5)向酸水解胎盘组织液中加入氯化钠，调节氯化钠含量后，进行碱水解，过滤，得到碱水解胎盘组织液；6)调节碱水解胎盘组织液pH，进行精滤，得到精滤胎盘组织液；7)对精滤胎盘组织液进行灭菌。本发明方法工艺简单，条件温和，产品中的活性成分含量高，活性高，安全性好，产品生产成本低。

Description

一种人胎盘组织液的制备方法

技术领域

本发明涉及一种含有其有不明结构的原材料的医用配制品及其制备方，特别涉及一种胎盘的生物制剂及其制备方法。

背景技术

胎盘中药名为紫河车，具有调节人体机能，增强抵抗力，大补元气精血的作用。性温，味甘、咸，归心、肺、肾经。具有温肾补精，益气养血的功效，用于虚劳羸瘦，骨蒸盗汗，咳嗽气喘，食少气短，阳痿遗精，不孕少乳。

人胎盘被誉为保健品之王，还能治疗多种疾病。现代科技研究表明：人胎盘是内源性生物活性物质中重要的优良的人源性药物，是最符合人体生物学调节的药物。人体胎盘无化学和激素等添加成分，在修复重建人体各个系统生理功能的同时，没有任何毒、副作用、过敏反应和依赖性，不良反应少。

人胎盘的成分较复杂，功效多样。它含有多种抗体蛋白，具有功能多样并且高效的免疫作用；含有干扰素，有抑制病毒对人体细胞的侵袭作用；含有与血液凝固有关的成分，有类似凝血因子XII的纤维蛋白稳定因子；含有尿激酶抑制物(能抑制尿激酶活化纤维蛋白溶酶原的作用)和纤维蛋白溶酶原活化物。人胎盘中还含有多种激素：促性腺激素A和B，催乳素，促甲状腺激素，催产素样物质，多种甾体激素和雌酮，雌二醇，雌三醇，孕甾酮，睾丸甾酮，去氧皮质甾酮，11-去氢此质甾酮，可的松，17-羟皮质甾酮，四氢皮质甾酮，4-孕烯-20，21-二醇-3，11-二酮，绒毛膜促腺激素(一种蛋白质的多肽激素)等及促肾上腺皮质激素等；还含有多种酶，如溶菌酶，激肽酶，组胺酶，催产素酶，清蛋白酶，α-球蛋白酶，β-球蛋白酶，γ-球蛋白酶等；含有红胞生成素，磷脂，β-内啡肽，氨基多糖体(由8分子乙酰氨葡萄糖、6分子甘露糖所组成)。胎盘乳原(多肽化合物)含多种氨基酸，并含微量维生素B12，乙酰胆碱及碘等。

从人胎盘的酸性抽提物中还可得到较多量的松弛大鼠十二指肠和降大鼠血压的成分，其性质同前列腺素E1。催乳素与垂体生长激素的化学机构上相关，有免疫交叉反应，在垂体切除的大鼠中人胎盘催乳素与生长激素有明显的协同作用，促进生长。

人胎盘制品在临床上应用广泛，中医学认为人胎盘具有滋补强壮、养血填精、滋肾壮阳、益气健脾的功能，可用于营养不良、食欲不振、神经衰弱、血少体虚、神虚阳痿、雀斑、面暗皮黑及一切内分泌失调等方面的治疗。人胎盘制品多用于皮肤科、妇科、外科，以及更年期综合症和多种慢性疾病。

人胎盘组织液是人胎盘制品中应用最广泛的药物，它含有人体生理必须的多种活性物质和人体生理必须的酶类物质，对维持人体内分泌的正常功能起到重要的调节作用。它可以保证人体处于健康的状态，改善各个器官的功能低下，延缓生理机能的衰退，延缓衰老；其中富含的多种氨基酸、矿物质，补充人体后天需要的各种养分，激活人体细胞；含有的拮抗黑色素因子、透明质酸保湿因子，具有强大的养颜、美白、保湿效果，从根本上延缓衰老；含有的免疫调节因子、干扰素a、干扰素β、促红细胞生长素、神经生长因子、白介素、类胰岛素生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、集落刺激因子等具有促进细胞分化、增值作用，能有效加强免疫修复；含有的丰富的蛋白质，如白蛋白、球蛋白、巨球蛋白和多种胎盘球蛋白抗体，能显著提高人体免疫力，有效地预防疾病发生，把疾病扼杀在萌芽状态；含有各种维生素和超氧化物歧化酶，有效维持人体各种功能的正常，保证正常的新陈代谢，及时清除衰老细胞和随时产生的变异细胞，消除自由基对人体的损害，防治癌变，有效预防癌症的发生。

人胎盘组织液等制品的生物疗法调控人体的作用活跃，针对异常细胞的靶向作用准确，调整和加强人体组织细胞的新陈代谢、调节人体免疫力和内分泌、消除自由基、修复人体基因，创建优良的人体内环境，提高集体抵抗风、寒、暑、湿和病原微生物侵袭，广泛用于癌症、术后、妇科疾病、皮肤疾病、内分泌紊乱、更年期、不孕不育等领域。由于人胎盘及其制品的巨大的药用价值，对胎盘及其制品的研究众多，但是目前，人胎盘组织液的提取多采用煎煮浓缩方法，这种方法不但提取出的药用成分含量低，而且能耗大、成本高，并且胎盘中的一些活性基因调控因子和部分代谢调控酶会因高温作用而失活，使得胎盘组织液的利用价值明显降低。

例如，授权公告号为CN1030528C的发明专利公开了一种制备人胎盘胶原的方法，该制备人胎盘胶原的方法利用健康产妇的胎盘无胎粪污染的周边部分胎盘组织，经清洗、打碎、加胃蛋白酶消化、提取、混匀等处理后，可以制得无菌无副作用的人胎盘胶原。该方法采用胃蛋白酶进行消化作用，使得人胎盘中的蛋白含量降低，使得人胎盘制品的药理作用范围缩小，药效降低。

授权公告号为CN1289164C的发明专利公开了一种胎盘素二氧化碳超临界萃取方法，该萃取方法依次包括如下步骤：将胎盘在-5℃～-6℃条件下经过冷冻干燥5～6h，研成粉末；将胎盘粉末装入萃取釜中，通入30～40Mpa的二氧化碳，在30～40℃条件下萃取；进行二级减压分离，获得胎盘素，一级减压分离条件为8～12Mpa，温度为30～35℃；二级减压分离条件为6Mpa以下，温度为15～25℃。该发明方法提取胎盘素工艺复杂，制备工艺条件苛刻，需要特殊的提取设备，制备的胎盘制品的生产成本高，而且容易降低产品活性，产品中的有些病毒不能被去除或灭活，致使产品的安全性降低。

授权公告号为CN100475841C的发明专利申请公开了一种注射用胎盘多肽的制备方法，该方法包括原料收集、研磨、破碎、病毒灭活、酸化水解、离心分离、澄清过滤、超滤、除菌过滤和冻干等步骤。该发明方法需要反复的低温冷冻和高温融合交替处理，以及在pH为2-4的条件下长时间保温处理，不仅制备工艺繁杂，而且在酸性条件下胎盘中的活性物质的生物活性降低。

公开号CN101306018A的发明专利申请公开了一种超浓缩胎盘素组织液冻干胶囊的生产方法，包括：a)将胎盘组织原液经过二氧化碳超临界流体萃取，得到胎盘素萃取物；b)利用生物酶处理所述胎盘素萃取物，将分子量降低到6000道尔顿以下；c)将步骤b)中得到的小分子萃取物冷冻干燥，得到冻干粉；以及d)采用脂质体制备方法将所述冻干粉制成超浓缩胎盘素组织液冻干胶囊。

公开号为CN1110128A的发明专利申请公开了一种活性胎盘粉制备方法，该制备方法包括有预处理、冷冻粉碎、干燥、过筛等四个工艺流程，其中的干燥工艺采用了真空冷冻干燥技术。干燥工艺分为预冻、升华脱水(主干燥)、干燥(第二阶段干燥)三个工艺步骤，其干燥温度低于0℃，真空度为＜13.3Pa。

公开号为CN1235026A的发明专利申请公开了一种胎盘肽注射液的制备方法及其所制产品。制备方法包括取胎盘用水冼净、清理后制成匀浆，置反复冻融7-10次，在2-8℃下离心20-30分钟，取上清液经透析或超滤，再用0.22或0.3微米的微孔滤膜过滤即得。该方法需要反复的低温冷冻和高温融合交替处理，特殊的透析设备，活性成分保留率低，产品的生产成本高。

授权公告号为CN1259059C的发明专利公开了一种胎盘提取物的制备方法，该方法包括：取健康胎盘捣碎，用重量比1∶1的20～95％乙醇浸泡1-7天，过滤，得滤液a；加入1-5倍20-95％的乙醇，在-4℃～40℃陈化2～10天，过滤，得滤液b；将滤液b陈化2～5天，过滤，得滤液为胎盘提取物。该胎盘提取物的制备方法使用高浓度乙醇和长时间的高温陈化处理，使得提取液中的活性成分含量降低，产品的生物活性减弱，影响提取液的药理作用效果。

发明内容

本发明的目的是针对上述现有问题提供一种人胎盘生物制剂的制备方法和由该方法制备的人胎盘生物制剂。本发明方法制备的人胎盘生物制剂在低温下进行，产品中的活性成分含量高，产品的生物活性高，而且在低温超声提取过程中，影响产品质量的病毒被去除、灭活，产品的安全性高。

为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种人胎盘组织液的制备方法，包括如下步骤：

1)收集健康胎盘组织，将其依次用氯化钠溶液进行浸泡，清水漂洗，得到预处理胎盘组织；

2)对预处理胎盘组织进行烘干处理，然后进行粉碎处理，制成粉碎胎盘；

3)粉碎胎盘与水混合后依次进行超声提取、离心过滤，得到粗分胎盘组织液；

4)对粗分胎盘组织液进行酸水解，过滤，得到酸水解胎盘组织液；

5)首先向酸水解胎盘组织液中加入氯化钠，调节酸水解胎盘组织液中的氯化钠含量，然后进行碱水解，过滤，得到碱水解胎盘组织液；

6)调节碱水解胎盘组织液的pH后，进行精滤，得到精滤胎盘组织液；

7)对精滤胎盘组织液进行灭菌，即得。

其中，步骤1)所述的氯化钠溶液的质量百分比浓度为4-9％，健康胎盘组织与氯化钠溶液的重量份之比为1∶0.4-0.9。

特别是，清水漂洗后的胎盘组织用手挤压没有血迹。

其中，步骤2)中所述的烘干处理的温度为40-50℃，烘干时间为8-10小时，烘干处理的相对真空度为-0.08～-0.095MPa。

特别是，进行所述的粉碎处理时控制粉碎温度为30-40℃，粉碎胎盘的粒度小于20目。

其中，步骤3)中所述粉碎胎盘与水的重量份之比为1∶7-12；超声提取温度为30-45℃，超声提取时间为60-80分钟。

特别是，所述的水为注射用水。

尤其是，超声提取时的超声波提取设备的功率2000W，脉冲频率200Hz。

其中，步骤3)中采用离心分离过滤后的粗分胎盘组织液中的颗粒粒度小于或等于1.5um。

特别是，离心过滤的滤布孔径小于或等于1.5um。

其中，步骤4)中所述的酸水解包括如下顺序进行的步骤：

A)向粗分胎盘组织液中加入盐酸溶液，调节其pH为2.6-3.6；

B)对调节pH后的粗分胎盘组织液进行超声处理，粗分胎盘组织液水解，其中，超声处理温度为40-50℃，超声处理时间为20-40分钟。

特别是，步骤A)中所述的盐酸溶液的摩尔浓度为1-2mol/L，pH优选为3.0；

特别是，步骤4)中所述的过滤为板框过滤，板框过滤的滤布的孔径为0.8-1.0um；

尤其是，板框过滤过程中采用加压过滤，加压过滤的绝对压力为1-2MPa。

其中，步骤5)中所述酸水解胎盘组织液中的氯化钠的质量百分比含量为0.8-0.9％，优选为0.85％。

特别是，步骤5)中所述的碱水解包括如下顺序进行的步骤：

A)向酸水解胎盘组织液中加入氢氧化钠溶液，调节其pH为6.8-8.0；

B)对调节pH后的粗分胎盘组织液进行超声处理，酸水解胎盘组织液水解，其中，超声处理温度为40-50℃，超声处理时间为20-40分钟。

尤其是，步骤A)中所述的氢氧化钠溶液的摩尔浓度为1-2mol/L。

特别是，步骤5)中所述的过滤为采用微孔滤膜进行的过滤，微孔滤膜的孔径为0.45-0.65um；

尤其是，采用减压微孔过滤，减压过滤的相对真空度为-0.08～-0.095MPa。

其中，步骤6)中将碱水解胎盘组织液的pH调节为7.0后，采用0.22um微孔滤膜进行所述的精滤。

其中，步骤7)中所述的灭菌温度为114℃，灭菌时间为20-40分钟。

特别是，采用整体灭菌柜进行所述的灭菌处理。

本发明另一方面提供一种按照上述方法制备而成的胎盘组织液。

本发明方法制备的胎盘组织液具有如下优点：

1、本发明方法制备的胎盘组织液在低温条件下制备而成，产品中的活性成分含量高，产品的生物活性高。

2、本发明方法制备的胎盘组织液中影响产品质量的病毒被去除、灭活，产品的安全性高。

3、本发明方法采用低温超声提取，生物活性成分提取完全，提取效率高，胎盘组织液中氮含量达到2-3g/L。

4、本发明方法工艺简单，工艺控制条件温和，生产设备普通，产品生产成本低。

具体实施方式

实施例1

1、筛选健康胎盘

收集健康产妇足月分娩的胎盘，经乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒等病毒检验后，筛选病毒检验结果为阴性的胎盘作为原料，备用；

2、胎盘的浸泡、漂洗

首先：将合格的胎盘组织浸入氯化钠溶液中，浸泡去除胎盘中的血液、剔除血管、黏膜以及脐带，制得浸泡胎盘组织，其中，氯化钠溶液的质量百分比浓度为4％，浸泡时间为4小时，胎盘组织与氯化钠溶液的重量之比为1∶0.4，浸泡温度为18℃，相对湿度为45％；

然后：将浸泡胎盘组织置于清水中漂洗，漂洗后的胎盘组织用手挤压没有血迹，得到漂洗胎盘组织，其中，漂洗温度为18℃，相对湿度为45％；

3、胎盘烘干

将漂洗胎盘组织滤干水分后置于FZG系列低温真空干燥箱(南方欧制机械有限公司)内进行烘干处理，得到烘干胎盘组织，其中，烘干温度为40℃，烘干时间为9小时，烘干处理的相对真空度为-0.09MPa；

4、胎盘粉碎

将烘干胎盘组织采用自冷式降温粉碎机(北京环亚天元机械有限公司)进行粉碎处理，制得粉碎胎盘，其中，粉碎处理的温度为40℃，粉碎胎盘的粒度为20目；

5、提取胎盘组织液

将粉碎胎盘与注射用水混合后，置于HSOT超声波提取设备中(山东济宁恒盛制药机械有限公司)中，加热升温，进行超声提取，使胎盘组织液成分流出，得到胎盘组织液和胎盘组织剩余物，其中，粉碎胎盘与注射用水的重量之比为1∶10，超生温度为40℃，超声提取时间为80分钟，超声提取设备的输出功率2000W，脉冲频率200Hz；

6、胎盘组织液分离

将超声提取后的胎盘组织液和胎盘组织剩余物置于离心机(                             )中进行离心处理，离心管内设置有孔径为1.5um的滤布，提取液置入滤布中，启动离心机进行离心分离，使胎盘组织液与胎盘剩余物分离，得到澄清的粗分胎盘组织液，其中，离心处理的温度为18℃，相对湿度为45％，离心处理的转速为5000rpm，离心时间为40分钟，离心机的滤布孔径为1.5um，获得的粗分胎盘组织液中去除了粒度大于1.5um的颗粒；

7、酸水解

向粗分胎盘组织液中加入盐酸溶液，调节其pH值为3.0后，置于HSOT系列超声波提取机(山东济宁恒盛制药机械有限公司)中，加热升温，进行水解，得到酸水解胎盘组织液，其中，盐酸溶液的摩尔浓度为1mol/L，水解温度为40℃，水解时间为30分钟；

将酸水解胎盘组织液冷却、静置24小时后，向水解胎盘组织液加入针用活性炭并混合均匀，置于板框过滤机中进行加压过滤，得到胎盘组织液A，其中，每1L水解胎盘组织液中加入针用活性炭20g，针用活性炭的粒度为80-100目，板框过滤机的滤布的孔径为1.0um，加压过滤的绝对压力为1MPa；

8、碱水解

向胎盘组织液A中加入氯化钠，使胎盘组织液A中的氯化钠的质量百分比含量为0.85％，接着再加入氢氧化钠溶液，调节其pH值为8.0，然后将其置于HSOT系列超声提取设备(山东济宁恒盛制药机械有限公司)中，加热升温，进行碱水解，得到碱水解胎盘组织液，其中，氢氧化钠溶液的摩尔浓度为1mol/L，水解温度为40℃，水解时间为40分钟；

将碱水解胎盘组织液冷却、静置12小时后，将碱水解胎盘组织液进行减压微孔滤膜过滤，得到胎盘组织液B，其中，微孔滤膜(购自南京金日制药装备有限公司)的孔径为0.65um，微孔过滤的温度为18℃，相对湿度为45％，减压微孔滤膜过滤的相对真空度为-0.09MPa；

9、精滤

向胎盘组织液B中加入盐酸溶液，调节其pH值至7.0后，经过0.22um微孔滤膜进行精滤，得到淡黄色澄明的胎盘组织液C，其中，盐酸溶液的摩尔浓度为1mol/L，精滤的温度为18℃，相对湿度为45％，减压精滤的相对真空度为-0.09MPa；

10、分装

将胎盘组织液C以每瓶2ml定量分装于5ml的安瓿瓶中，然后于6小时内置于整体灭菌柜(张家港市环宇制药设备公司)设备中，进行灭菌处理，得胎盘组织液，其中灭菌处理温度为114℃，灭菌时间为30分钟。

制得的胎盘组织液的pH为7.0，总氮含量为2.0g/L。

实施例2

1、筛选健康胎盘

收集健康产妇足月分娩的胎盘，经乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒等病毒检验后，筛选病毒检验结果为阴性的胎盘作为原料，备用；

2、胎盘的浸泡、漂洗

首先：将合格的胎盘组织浸入氯化钠溶液中，浸泡去除胎盘中的血液、剔除血管、黏膜以及脐带，制得浸泡胎盘组织，其中，氯化钠溶液的质量百分比浓度为6％，浸泡时间为5小时，胎盘组织与氯化钠溶液的重量之比为1∶0.6，浸泡温度为26℃，相对湿度为65％；

然后：将浸泡胎盘组织置于清水中漂洗，漂洗后的胎盘组织用手挤压没有血迹，得到漂洗胎盘组织，其中，漂洗温度为26℃，相对湿度为65％；

3、胎盘烘干

将漂洗胎盘组织滤干水分后置于FZG系列低温真空干燥箱(南方欧制机械有限公司)内进行烘干处理，得到烘干胎盘组织，得到烘干胎盘组织，其中，烘干温度为50℃，烘干时间为10小时，烘干处理的相对真空度为-0.08MPa；

4、胎盘粉碎

将烘干胎盘组织采用自冷式降温粉碎机(北京环亚天元机械有限公司)进行粉碎处理，制得粉碎胎盘，其中，粉碎处理的温度为35℃，粉碎胎盘的粒度为50目；

5、提取胎盘组织液

将粉碎胎盘与注射用水混合后，置于HSOT系列超声波提取设备，进行超声提取，使胎盘组织液成分流出，提取胎盘组织液，得到胎盘组织混合液，其中，粉碎胎盘与注射用水的重量之比为1∶12，超声提取温度为30℃，提取时间为70分钟，超声提取设备的输出功率2000W，脉冲频率200Hz；

6、胎盘组织液分离

将超声提取后的胎盘组织液和胎盘组织剩余物置于离心机中进行离心处理，离心管内设置有孔径为1.5um的滤布，提取液置入滤布中，启动离心机进行离心分离，使胎盘组织液与胎盘剩余物分离，得到澄清的粗分胎盘组织液，其中，离心处理的温度为26℃，相对湿度为65％，离心处理的转速为10000rpm，离心时间为20分钟，离心机的滤布孔径为1.5um，获得的粗分胎盘组织液中去除了粒度大于1.5um的颗粒；

7、酸水解

向粗分胎盘组织液中加入盐酸溶液，调节其pH值为2.6后，置于HSOT系列超声波提取机(山东济宁恒盛制药机械有限公司)中，加热升温加压，进行水解，得到酸水解胎盘组织液，其中，盐酸溶液的摩尔浓度为2mol/L，水解温度为50℃，水解时间为20分钟，超声提取设备的输出功率2000W，频率200Hz；

将酸水解胎盘组织液冷却、静置24小时后，置于板框过滤机中进行加压过滤，得到胎盘组织液A，其中，板框过滤机的滤布的孔径为0.8um，加压过滤的绝对压力为2MPa；

8、碱水解

向胎盘组织液A中加入氯化钠，使胎盘组织液A中的氯化钠的质量百分比含量为0.85％，接着再加入氢氧化钠溶液，调节其pH值为6.8，然后将其置于HSOT系列超声提取设备(山东济宁恒盛制药机械有限公司)中，加热升温加压，进行碱水解，得到碱水解胎盘组织液，其中，氢氧化钠溶液的摩尔浓度为1.5mol/L，水解温度为50℃，水解时间为20分钟；

将碱水解胎盘组织液冷却、静置12小时后，将碱水解胎盘组织液进行减压微孔滤膜过滤，得到胎盘组织液B，其中，微孔滤膜(购自南京金日制药装备有限公司)的孔径为0.45um，微孔过滤的温度为26℃，相对湿度为65％，减压微孔滤膜过滤的相对真空度为-0.09MPa；

9、精滤

向胎盘组织液B中加入氢氧化钠溶液，调节其pH值至7.0后，经过0.22um微孔滤膜进行精滤，得到淡黄色澄明的胎盘组织液C，其中，氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.5mol/L，精滤的温度为26℃，相对湿度为65％，减压精滤的相对真空度为-0.09MPa；

10、分装

将胎盘组织液C以每瓶2ml定量分装于5ml的西林瓶中，然后于6小时内置于整体灭菌柜(张家港市环宇制药设备公司)设备中，进行灭菌处理，得胎盘组织液，其中灭菌处理温度为114℃，灭菌时间为30分钟。

制得的胎盘组织液的pH为7.0，总氮含量为2.5g/L。

实施例3

1、筛选健康胎盘

收集健康产妇足月分娩的胎盘，经乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒等病毒检验后，筛选病毒检验结果为阴性的胎盘作为原料，备用；

2、胎盘的浸泡、漂洗

首先：将合格的胎盘组织浸入氯化钠溶液中，浸泡去除胎盘中的血液、剔除血管、黏膜以及脐带，制得浸泡胎盘组织，其中，氯化钠溶液的质量百分比浓度为9％，浸泡时间为4.5小时，胎盘组织与氯化钠溶液的重量之比为1∶0.9，浸泡温度为22℃，相对湿度为55％；

然后：将浸泡胎盘组织置于清水中漂洗，漂洗后的胎盘组织用手挤压没有血迹，得到漂洗胎盘组织，其中，漂洗温度为22℃，相对湿度为55％；

3、胎盘烘干

将漂洗胎盘组织滤干水分后置于FZG系列低温真空干燥箱内进行烘干处理，得到烘干胎盘组织，其中，烘干温度为45℃，烘干时间为8.5小时，烘干处理的相对真空度为-0.09MPa；

4、胎盘粉碎

将烘干胎盘组织采用自冷式降温粉碎机进行粉碎，制得粉碎胎盘，其中，粉碎处理的温度为30℃，粉碎胎盘的粒度为30目；

5、提取胎盘组织液

将粉碎胎盘与注射用水混合后，置于HSOT超声波提取设备中(山东济宁恒盛制药机械有限公司)中，加热升温，进行超声提取，使胎盘组织液成分流出，得到胎盘组织液和胎盘组织剩余物，其中，粉碎胎盘与注射用水的重量之比为1∶7，超声提取温度为45℃，提取时间为60分钟，超声提取时的相对湿度为55％，超声提取设备的输出功率为2000W，频率为200Hz；

6、胎盘组织液分离

将超声提取后的胎盘组织液和胎盘组织剩余物置于离心机中进行离心处理，离心管内设置有孔径为1.5um的滤布，提取液置入滤布中，启动离心机进行离心分离，使胎盘组织液与胎盘剩余物分离，得到澄清的粗分胎盘组织液，其中，离心处理的温度为22℃，相对湿度为55％，离心处理的转速为7500rpm，离心时间为30分钟，离心机的滤布孔径为1.5um，获得的粗分胎盘组织液中去除了粒度大于1.5um的颗粒；

7、酸水解

向粗分胎盘组织液中加入盐酸溶液，调节其pH值为3.6后，置于HSOT系列超声波提取机中，加热升温，进行酸水解，得到酸水解胎盘组织液，其中，盐酸溶液的摩尔浓度为1.5mol/L，水解温度为45℃，水解时间为40分钟；

将酸水解胎盘组织液冷却、静置24小时后，向水解胎盘组织液加入针用活性炭并混合均匀，置于板框过滤机中进行加压过滤，得到胎盘组织液A，其中，每1L水解胎盘组织液中加入针用活性炭10g，用活性炭的粒度为80-100目，板框过滤机的滤布的孔径为1.0um，加压过滤的绝对压力为1.5MPa；

8、碱水解

向胎盘组织液A中加入氯化钠，使胎盘组织液A中的氯化钠的质量百分比含量为0.85％，接着再加入氢氧化钠溶液，调节其pH值为7.4，然后将其置于HSOT系列超声提取设备中，加热升温，进行碱水解，得到碱水解胎盘组织液，其中，氢氧化钠溶液的摩尔浓度为2mol/L，水解温度为45℃，水解时间为30分钟；

将碱水解胎盘组织液冷却、静置12小时后，将碱水解胎盘组织液进行减压微孔滤膜过滤，得到胎盘组织液B，其中，其中，微孔滤膜(购自南京金日制药装备有限公司)的孔径为0.65um，微孔过滤的温度为22℃，相对湿度为55％，减压过滤的相对真空度为-0.095MPa；

9、精滤

向胎盘组织液B中加入盐酸溶液，调节其pH值至7.0后，经过0.22um微孔滤膜进行精滤，得到淡黄色澄明的胎盘组织液C，其中，盐酸溶液的摩尔浓度为1.0mol/L，精滤的温度为22℃，相对湿度为55％；

10、分装

将胎盘组织液C以每瓶2ml定量分装于5ml的西林瓶中，然后于6小时内置于整体灭菌柜(张家港市环宇制药设备公司)设备中，进行灭菌处理，得胎盘组织液，其中灭菌处理温度为114℃，灭菌时间为30分钟。

制得的胎盘组织液的pH为7.0，总氮含量为3.0g/L。

Claims (10)

1.一种胎盘组织液的制备方法，包括如下顺序进行的步骤：

1)收集健康胎盘组织，将其依次用氯化钠溶液进行浸泡，清水漂洗，得到预处理胎盘组织；

2)对预处理胎盘组织进行烘干处理，然后进行粉碎处理，制成粉碎胎盘；

3)粉碎胎盘与水混合后依次进行超声提取、离心过滤，得到粗分胎盘组织液；

4)对粗分胎盘组织液进行酸水解，过滤，得到酸水解胎盘组织液；

5)首先向酸水解胎盘组织液中加入氯化钠，调节酸水解胎盘组织液中的氯化钠含量，然后进行碱水解，过滤，得到碱水解胎盘组织液；

6)调节碱水解胎盘组织液的pH后，进行精滤，得到精滤胎盘组织液；

7)对精滤胎盘组织液进行灭菌，即得。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征是，步骤1)中所述的氯化钠溶液的质量百分比浓度为4-9％，健康胎盘组织与氯化钠溶液的重量份之比为1∶0.4-0.9。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征是，步骤2)中所述的烘干处理的烘干温度为40-50℃，烘干时间为8-10小时，烘干处理的相对真空度为-0.08～-0.095MPa；所述的粉碎处理时控制粉碎温度为30-40℃，粉碎胎盘的粒度小于20目。

4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是，步骤3)中所述粉碎胎盘与水的重量份之比为1∶7-12；超声提取温度为30-45℃，超声提取时间为60-80分钟。

5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是，步骤3)中所述离心过滤后的粗分胎盘组织液中的颗粒粒度小于1.5um。

6.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是，步骤4)中所述的酸水解包括如下顺序进行的步骤：

A)向粗分胎盘组织液中加入盐酸溶液，调节其pH为2.6-3.6；

B)对调节pH后的粗分胎盘组织液进行超声处理，粗分胎盘组织液水解，其中，超声处理温度为40-50℃，超声处理时间为20-40分钟。

7.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是，步骤5)中所述酸水解胎盘组织液中的氯化钠的质量百分比含量为0.8-0.9％。

8.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是，步骤5)中所述的碱水解包括如下顺序进行的步骤：

A)向酸水解胎盘组织液中加入氢氧化钠溶液，调节其pH为6.8-8.0；

B)对调节pH后的粗分胎盘组织液进行超声处理，酸水解胎盘组织液水解，其中，超声处理温度为40-50℃，超声处理时间为20-40分钟。

9.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是，步骤6)中将碱水解胎盘组织液的pH调节为7.0后，采用0.22um微孔滤膜进行所述的精滤。

10.一种胎盘组织液，其特征是按照上述任一制备方法制备而成。