CN111574618B - 美白复合蛋白肽酶解液的制备方法、美白复合蛋白肽饮品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,包括下述步骤:(1)配备原料;(2)蛋白酶解液的制备,其中酶解用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分两步进行,碱性蛋白酶的用量为料液干重的1‑3%,木瓜蛋白酶的用量为料液干重的0.5‑1.5%,中性蛋白酶的用量为料液干重的1‑3%;(3)离心;(4)脱色;(5)过滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。本发明能够使每种蛋白都能够充分得到酶解,并保留活性肽,使所得的复合蛋白肽容易被快速吸收,速补充营养,且具有增进皮肤美白的功能。本发明还提供含有美白复合蛋白肽酶解液的美白复合蛋白肽饮品,以及这种美白复合蛋白肽饮品的一种制备方法。美白复合蛋白肽饮品具有显著的增进皮肤美白效果,且较为可口。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白肽及蛋白肽饮品技术领域,具体涉及一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,以及应用这种美白复合蛋白肽酶解液制成的美白复合蛋白肽饮品,及该美白复合蛋白肽饮品的制备方法。
背景技术
皮肤的肤色主要由皮肤黑色素细胞的多少和细胞黑色素含量决定。黑色素细胞占比少,黑色素含量低,则皮肤就会显得白。黑色素细胞占比多,黑色素含量高,则皮肤就显得黑。在黑色素细胞内,受到酪氨酸酶的催化作用,酪氨酸先后被氧化成多巴和多巴醌,多巴醌又进一步转化成多巴色素,在DHI酶、多巴色素互变酶和DHICA氧化酶的分别催化作用下,多巴色素逐步形成黑色素。
螺旋藻(Spirulina) 属于蓝藻门,颤藻科,是一类由单细胞或多细胞组成的螺旋形原核藻类,蛋白质含量高达60-70%,同时还含有丰富的VA、VB以及矿物质。研究表明,螺旋藻具有补充优质蛋白、维生素和矿物质,缓解疲劳,促进造血母细胞的分化和增殖,促进蛋白合成的作用;对增加皮肤胶原蛋白的吸收和合成,软化角质层,促进血液循环和皮肤再生起一定作用。以上各方面的功效已经得到普遍的认可,被广泛用于保健食品和医药开发。目前市场上主要以螺旋藻粉、片剂和胶囊为主,由于螺旋藻溶解性差、腥味浓重,蛋白质稳定性较差,易发生沉淀和变性,进而导致生物活性的丧失,同时蛋白分子量较大,不易于人体的消化吸收等原因,使螺旋藻在保健食品和医药领域的进一步发展受到限制。
胶原蛋白肽是一种透明的浅黄色的胶原蛋白提取物,由二至二十个的氨基酸组成,肽的分子量、氨基酸排列顺序不同所表现的功能会各不相同。胶原蛋白是人体的重要组成部分,是修复受损组织的重要原料物质。已经有大量的研究证明其能够解决人体衰老细胞分裂、衰竭、萎缩,微整形术后损伤、新细胞再生受阻、细胞生长变异、增生等多项细胞修复相关的功能障碍问题。当真皮层的胶原蛋白被氧化、断裂后,对表皮的支撑作用就消失了,因此造成不均一的塌陷,这样皱纹就产生了。补充胶原蛋白的观念深入国人心中几千年,人们通常通过猪蹄、鱼胶、阿胶等来补充胶原蛋白,但由于胶原蛋白结构紧密,消化吸收利用率低,效果较差。而胶原蛋白肽具有可被直接快速吸收利用转化的特点,能够补充并修复胶原蛋白,抗氧化,补水锁水,是女士的最爱补品之一。一般认为分子量为2-7的小分子肽更够被小肠直接吸收,而大分子蛋白需要经过消化系统的进一步分解才能吸收。因此小分子肽更容易被肠胃,血管及肌肤吸收。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,采用这种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法能够使每种蛋白都能够充分得到酶解,并保留活性肽,使所得的复合蛋白肽容易被快速吸收,速补充营养,且具有增进皮肤美白的功能;在此基础上提供含有这种美白复合蛋白肽酶解液的美白复合蛋白肽饮品及其制备方法,该美白复合蛋白肽饮品具有显著的增进皮肤美白效果,且较为可口。采用的技术方案如下:
一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征在于包括下述步骤:
(1)按干重计,配备下述原料:螺旋藻18-30%,鳕鱼皮45-55%,大米蛋白粉15-25%,燕窝0.5-2%;
(2)蛋白酶解液的制备
(2-1)原料预处理
(2-1a)螺旋藻预处理
将螺旋藻粉碎,得到螺旋藻粉;然后将螺旋藻粉与纯化水按1:4-1:10的重量比例混合,并搅拌均匀后进行溶胀;
(2-1b)鳕鱼皮预处理
将鳕鱼皮用水清洗干净,再加入水浸泡5-10分钟,加入碳酸氢钠溶液后再浸泡6-9小时;然后用水清洗干净,加入双氧水脱色3-6小时;再用水清洗干净,加入重量为鳕鱼皮干重的3-5倍的纯化水,用搅碎机将鳕鱼皮搅碎,得到鳕鱼皮浆液;
(2-1c)燕窝预处理
将燕窝与纯化水按1:4-1:8的重量比例混合,并用打浆机打浆,得到燕窝浆;
(2-2)均质
将经过溶胀的螺旋藻粉、鳕鱼皮浆液和燕窝浆混合,并用高压均质机处理(优选高压均质机在转子转速为1200-1600转/分钟、压力为40-60MPa的条件下处理20-30分钟),得到预处理料液;
(2-3)酶解
将步骤(2-2)得到的预处理料液加入酶反应釜中,并加入大米蛋白粉,然后加入纯化水配制成干物质含量8-15%的料液,再将料液的pH值调节至9.2-9.5;
然后用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分两步进行酶解,碱性蛋白酶的用量为料液干重的1-3%,木瓜蛋白酶的用量为料液干重的0.5-1.5%,中性蛋白酶的用量为料液干重的1-3%;
先加入碱性蛋白酶在47-62℃下酶解3-6小时,然后将酶解液升温至80-90℃灭酶20-30分钟;再将酶解液降温到38-55℃,加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解3-6小时,然后将酶解液升温至80-90℃灭酶20-30分钟,得到蛋白酶解液;
(3)离心
将蛋白酶解液用离心机进行离心,获得上清液;
(4)脱色
将上清液抽入脱色罐中,进行脱色处理;
(5)过滤
对经脱色处理后的上清液进行过滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
螺旋藻经合适的酶进行水解,获得的小分子肽不但大大提高溶解性,改善了口感,更重要的是获得了高活性的功能肽,可被直接快速吸收,提高了消化吸收利用率。螺旋藻蛋白肽可提高皮肤细胞的免疫力,保护皮肤的自我调节功能,防止水分流失,抵抗紫外线侵害,消除皮肤表面自由基,增加皮肤胶原蛋白的吸收和合成,软化角质层,促进血液循环和皮肤再生,可增加皮肤弹性、润肤保湿、除皱、祛斑,再辅以胶原蛋白肽、大米蛋白肽和燕窝肽等成分,功能协调,优势互补,能够起到很好的美白护肤作用。
鳕鱼皮中所含胶原蛋白经合适的酶进行水解,获得的胶原蛋白肽可被快速吸收并转化利用,能够快速有效补充胶原蛋白。胶原蛋白肽具有可被直接快速吸收利用转化的特点,能够补充并修复胶原蛋白,抗氧化,补水锁水。
燕窝经过酶解后,小分子肽含量90%以上,同时保留了唾液酸糖肽等有益成分,水溶性高,吸收效果更好,可直接渗透到皮肤真皮层,重整肌肤纤维组织机构,促进细胞新陈代谢,延缓细胞衰老,使细小皱纹得到舒缓,让肌肤紧致祛皱、消除细纹;大量的唾液酸及微量元素,能够有效滋养肌肤、加速肌肤新陈代谢、延缓衰老。
大米蛋白经过酶解后,获得丰富的抗氧化肽和保水肽,不但能够起到保护肌肤不受氧化损伤,有抗衰老的作用,同时还能起到保水作用,增强细胞活力。
碱性蛋白酶是一种丝氨酸型的内切蛋白酶,它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸,在pH值为5-10时较稳定,对底物有高度专一性,只能水解蛋白质肽链,并对切开点羧基侧具有专一性,具有较强的分解蛋白质的能力。木瓜蛋白酶由木瓜乳胶提取粗制,主要含有木瓜蛋白酶,木瓜凝乳蛋白酶以及溶菌酶,同时还含有少量半胱氨酸蛋白酶、纤维素酶、谷氨酞胺等蛋白酶,木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶,可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端,并能优先水解在肽键的N端具有2个羧基的氨基酸或芳香L氨基酸的肽键;具有耐高温、活性强、稳定性好、蛋白质水解能力强等特性,对pH值变化和金属离子及去垢剂不敏感;具有蛋白酶和酯酶的活性,有较广泛的特异性,对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的酶解能力,同时还具有合成的能力,可把蛋白质水解物再合成蛋白质类物质,这种能力可用来改善动植物蛋白的营养价值或功能性质。中性蛋白酶为细菌源蛋白酶,为一种内切蛋白酶,水解能力强、速度快,水解产物产生苦味少等特点,可分解蛋白质肽链中的肽键,中性蛋白酶同时属于金属酶,Ca2+是必不可缺的,Mg2+、Zn2+、Mn2+对其生成量亦有促进作用,本发明选用的动物蛋白含有高含量的钙和多种有益矿物质,中性蛋白酶不受矿物质抑制,并有利于发挥作用。本发明对蛋白采用多种酶分步水解,内切酶和外切酶相结合,使各种蛋白都能够充分得到水解,并保留活性肽。申请人经过多年的实验室研究和生产实践,通过选择合适种类的酶及其比例、添加顺序,以及酶解工艺条件,得到一种利用复合酶分步酶解多种蛋白以获得复合蛋白肽的工艺,使每种蛋白都能够充分得到水解,并保留活性肽。
优选步骤(2-1a)中,以30-50转/分钟的速度对螺旋藻粉与纯化水的混合物进行搅拌;在45-65℃溶胀1-2小时。
优选步骤(2-1a)中,将螺旋藻粉与纯化水共同加入到不锈钢罐中,不锈钢罐带有搅拌系统和循环水系统;搅拌系统用于对不锈钢罐中的物料进行搅拌;循环水系统系统使不锈钢罐内部温度保持在45-65℃,进行溶胀。
通常,步骤(2-1b)中所用的碳酸氢钠溶液和双氧水均为食品级。优选步骤(2-1b)中,碳酸氢钠溶液的重量百分比浓度为2-5%。优选步骤(2-1b)中,双氧水的重量百分比浓度为3-6%。
优选步骤(2-1c)中,打浆机在3000-5000转/分钟下打浆5-10分钟。
步骤(2-3)中,通常用氢氧化钠调节料液的pH值。
优选步骤(2-3)中,碱性蛋白酶的活力单位为20-50万单位,木瓜蛋白酶的活力单位为50-80万单位,中性蛋白酶的活力单位为10-30万单位。
优选步骤(3)中,离心机采用碟式离心机,在转速4500-6000转/分钟的条件下进行离心。碟式离心机功率可为4-15kW。
优选步骤(4)中,脱色罐中加入有活性炭和硅藻土,活性炭的用量为上清液的1-3%,硅藻土的用量为上清液的1-3%(优选2%);以30-50转/分钟的转速进行搅拌,在50-60℃下脱色40-60分钟。更优选步骤(4)中使用的活性炭为植物活性炭,其粒径大小为300-800目≥90%。
优选方案中,步骤(5)中过滤包括下述步骤:
(5-1)将脱色液用板框过滤,获得复合蛋白肽溶液;
(5-2)将复合蛋白肽溶液加入不锈钢储罐中,用管式陶瓷微滤设备进行预处理;
(5-3)超滤:用超滤设备对经步骤(5-2)预处理的复合蛋白肽溶液进行超滤,获得小分子复合蛋白肽溶液;
(5-4)纳滤:对步骤(5-3)获得的小分子复合蛋白肽溶液进行纳滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
步骤(5-1)主要过滤去脱色过程中加入的脱色剂,获得的复合蛋白肽溶液通常为浅黄色至橙红色,且透亮。进一步,步骤(5-1)中,板框过滤所用滤布的材质为尼龙材料,滤布的孔径为1-10微米。
步骤(5-2)用管式陶瓷微滤设备进行预处理,目的在于除去复合蛋白肽溶液中的大分子蛋白、色素分子等大分子物质,以及残留的脱色剂,为超滤做准备。进一步,步骤(5-2)中,管式陶瓷微滤设备所用陶瓷膜过滤滤芯的孔径为0.1-0.2微米。
优选步骤(5-3)中,超滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于5000-10000Da(道尔顿)的物质通过。
优选步骤(5-4)中,纳滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于150-300Da的物质通过,进行连续三级纳滤,一级纳滤后的截留液为二级纳滤的料液,二级纳滤的截留液为三级的纳滤的料液;一级纳滤压力为0.35MPa,二级纳滤压力为0.4MPa,三级纳滤压力为0.5MPa。通过连续三级纳滤,通过纳滤膜过滤去除钠等一价阳离子,一级纳滤后的截留液为二级纳滤的料液,二级纳滤的截留液为三级的纳滤的料液,三级纳滤的截留液为所需的美白复合蛋白肽酶解液。三级纳滤大大提高了盐离子去除效率和浓缩效率,避免了蛋白肽长期处理引起的活性降低、变性、变质等情况,同时能够高效浓缩,使复合蛋白肽的含量达到25-30%以上,纳滤不仅很好的保护了复合蛋白肽的活性,大大减少了能源的利用,并且成本仅为降膜浓缩成本的十分之一。
本发明将复合蛋白原料通过前处理并选取适宜的酶在合适条件下分两步酶解,通过离心、脱色、板框过滤获得复合蛋白肽粗酶解液,然后通过陶瓷滤芯过滤前处理去除大分子蛋白、活性炭、色素分子等大分子杂质,再通过5000-10000Da的超滤膜过滤去除较大的肽段,使小于1000Da的小分子肽含量大于90%以上,再通过纳滤膜过滤去除矿物质,去除率达到80%以上,从而使所得的复合蛋白肽具有可被直接吸收,吸收快,易溶解,同时保留复合蛋白中的活性多糖、维生素等活性物质。
一种美白复合蛋白肽饮品,其特征在于含有下述重量配比的组分:美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计6-18%,赤藓糖1-5%,蜂蜜2-8%,γ-氨基丁酸0.1-0.4%,维生素C0.1-0.5%,覆盆子提取物0.5-2%,人参提取物0.1-0.3%,酵母提取物0.5-3%,针叶樱桃果粉2-6%,玫瑰花汁粉1-3%,水蜜桃果粉0-2%,蓝莓浓缩果汁0-6%,蔓越莓浓缩果汁0-4%,黑加仑浓缩果汁0-4%,苹果酸0.2-0.5%,柠檬酸0.03-0.06%,果胶0.1-0.3%,黄原胶0.05-0.1%,羧甲基纤维素钠0.1-0.2%,三氯蔗糖0.01-0.15%,余量为蒸馏水。
优选方案中,上述赤藓糖、蜂蜜、γ-氨基丁酸、维生素C(VC)、苹果酸、柠檬酸、果胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠、三氯蔗糖均为食品级,覆盆子提取物为覆盆子10-30倍提取物,人参提取物为人参10-30倍提取物,酵母提取物为酵母破壁提取物,针叶樱桃果粉提取物为针叶樱桃果汁喷雾干燥粉,玫瑰花汁粉为玫瑰花汁喷雾干燥粉,水蜜桃果粉为水蜜桃10-30倍提取物,蓝莓浓缩果汁蓝莓压榨浓缩果汁,蔓越莓浓缩果汁蔓越莓压榨浓缩果汁,黑加仑浓缩果汁为黑加仑压榨浓缩果汁。
本发明还提供上述美白复合蛋白肽饮品的一种制备方法,其特征在于包括下述步骤:
(1’)按重量计,配备下述原料:美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计6-18%,赤藓糖1-5%,蜂蜜2-8%,γ-氨基丁酸0.1-0.4%,维生素C 0.1-0.5%,覆盆子提取物0.5-2%,人参提取物0.1-0.3%,酵母提取物0.5-3%,针叶樱桃果粉2-6%,玫瑰花汁粉1-3%,水蜜桃果粉0-2%,蓝莓浓缩果汁0-6%,蔓越莓浓缩果汁0-4%,黑加仑浓缩果汁0-4%,苹果酸0.2-0.5%,柠檬酸0.03-0.06%,果胶0.1-0.3%,黄原胶0.05-0.1%,羧甲基纤维素钠0.1-0.2%,三氯蔗糖0.01-0.15%,余量为蒸馏水;
(2’)将步骤(1’)配备的各种原料混合,并搅拌均匀,然后用灌装机分装入棕色玻璃瓶中,得到瓶装美白复合蛋白肽饮品;
(3’)将瓶装美白复合蛋白肽饮品在110-121℃下灭菌15-25分钟。
上述步骤(3’)中,可用高温高压灭菌锅对瓶装美白复合蛋白肽饮品进行灭菌,灭菌后得到美白复合蛋白肽饮品的成品。
酵母抽提物是以食品用酵母为主要原料,以酵母自身的酶或外加食品级酶的共同作用下,酶解自溶或破壁后得到的产品,物富含蛋白肽、氨基酸、以及核苷酸、B族维生素、谷胱甘肽、微量元素等人体可直接吸收利用的可溶性营养及风味物质。本发明采用的酵母提取物含有8-10%的谷胱甘肽,具有明显的美白效果。
人参甘温能补,可大补元气,归脾、肺经、心经。可以补气生血,养血能补益心气,安神益智,是女士补血气的极佳补品。人参总甙是人参提取物的主要成分,可使皮肤光滑,柔软有弹性,延缓衰老,还可以抑制黑色素的产生,保护心肌细胞,促进体内酶系的再生。
γ-氨基丁酸(GABA)是一种天然活性成分,是一种非蛋白组成氨基酸,广泛分布于动植物体内,主要分布在人体神经组织中,是中枢神经系统中很重要的抑制性神经递质,具有促进脑的活化性,健脑益智,促进睡眠,美容润肤,延缓脑衰老机能,能补充人体抑制性神经递质,促进肾机能改善和保护作用。γ-氨基丁酸研究证实具有镇静神经、抗焦虑,助睡眠的作用。睡眠是最好的美容,充足的睡眠有利于营养吸收,有利于各营养物质更好的发挥作用。
玫瑰花具有养颜功效,对干性、敏感性、老化肌肤效果尤其明显。它能增强肌肤免疫机能,改善肌肤天然保湿系统能力;能增强弹力纤维、胶原纤维活性;能有效调节内分泌系统平衡,以内养外淡化斑点,促进分解及代谢黑色素,让女性拥有白皙、充满弹性地健康肌肤。
本发明通过生物酶解获得富含螺旋藻肽、胶原蛋白肽、大米肽、燕窝肽的复合蛋白肽,容易被快速吸收,速补充营养,且具有增进皮肤美白的功能;在此基础上添加覆盆子提取物、人参提取物、玫瑰花汁粉、针叶樱桃果粉等草本精华,以及富含谷胱甘肽的酵母提取物和VC等抗氧化成分,具有显著的美白效果,再辅以多种果粉和浓缩果汁口感酸甜可口。
本发明具有如下的技术优点和效果:
本发明通过合适的生物酶解工艺获得含有螺旋藻肽、胶原蛋白肽、牦牛骨肽、大豆肽、绿豆肽、小麦肽、乳清蛋白肽的增强免疫复合蛋白肽酶解液,容易被快速吸收,且具有快速补充营养、提高免疫力的作用。目前市面上蛋白肽饮品主要通过直接购买蛋白肽粉原料后复配为蛋白肽饮品,成本高,且各种蛋白肽品质良莠不齐,质量无法保证,本发明开发出增强免疫复合蛋白肽酶解液的制备方法,不但使蛋白肽的品质得到保证,同时所用蛋白肽不经过干燥制粉大大降低了成本,更多的保留了有益成分的活性。
本发明制取的复合蛋白肽液经试验验证具有抑制黑色素素细胞的功能,同时能够抑制酪氨酸酶黑色素合成,从而降低黑色素细胞内的黑色素,起到美白的效果。
每种蛋白原料各种氨基酸比例有很大的差异,含有不同的活性肽,选用合适的酶并控制酶解条件,在保证酶解效率的同时能够避免活性肽被酶解。申请人经过多年的实验室研究和生产实践,在每种蛋白原料都进行了合适酶的选择、酶的比例、添加顺序及酶解条件的实验的基础上,开发出专门用于酶解动物蛋白和植物蛋白的酶和酶解工艺,对蛋白分开进行酶解,从而使每种蛋白都能够充分得到水解,并保留活性肽。
每种酶都有专一的酶解位点,多种蛋白混合酶解可以提高蛋白的利用率,获得更多的活性肽。采用多种酶分步进行酶解,具有多个酶切位点,内切酶和外切酶相结合,相互补充,能够更彻底的酶解,同时采用两步酶解使每种酶都能在适宜的酶解条件下发挥作用,减少酶之间的相互抑制作用,提高酶解效率。
本发明通过生物酶解和多步精制工艺获得含有螺旋藻肽、胶原蛋白肽、大米肽、燕窝肽的复合蛋白肽液,具有容易被快速吸收,且具有快速补充营养、增进美白的作用;添加覆盆子提取物、人参提取物、玫瑰花汁粉等草本精华,以及富含谷胱甘肽的酵母提取物和VC等抗氧化成分,具有显著的美白效果,再辅以针叶樱桃果粉、水蜜桃果粉、蓝莓浓缩果汁、蔓越莓浓缩果汁、黑加仑浓缩果汁、苹果酸等,使得饮品口感酸甜可口。
具体实施方式
实施例1
本实施例中,美白复合蛋白肽酶解液的制备方法包括下述步骤:
(1)按干重计,配备下述原料:螺旋藻25%,鳕鱼皮50%,大米蛋白粉24%,燕窝1%;
(2)蛋白酶解液的制备
(2-1)原料预处理
(2-1a)螺旋藻预处理
将螺旋藻粉碎,得到螺旋藻粉;然后将螺旋藻粉与纯化水按1:6的重量比例混合,并搅拌均匀后进行溶胀(以50转/分钟的速度对螺旋藻粉与纯化水的混合物进行搅拌;在50℃溶胀2小时);
本步骤(2-1a)中,将螺旋藻粉与纯化水共同加入到不锈钢罐中,不锈钢罐带有搅拌系统和循环水系统;搅拌系统用于对不锈钢罐中的物料进行搅拌;循环水系统系统使不锈钢罐内部温度保持在50℃,进行溶胀;
(2-1b)鳕鱼皮预处理
将鳕鱼皮用水清洗干净,再加入水浸泡8分钟,加入碳酸氢钠溶液后再浸泡7小时(碳酸氢钠溶液的重量约为鳕鱼皮干重的5倍);然后用水清洗干净,加入双氧水脱色6小时(双氧水的重量约为鳕鱼皮干重的5倍);再用水清洗干净,加入重量为鳕鱼皮干重的4倍的纯化水,用搅碎机将鳕鱼皮搅碎,得到鳕鱼皮浆液;
本步骤(2-1b)中所用的碳酸氢钠溶液和双氧水均为食品级;碳酸氢钠溶液的重量百分比浓度为4%;双氧水的重量百分比浓度为5%;
(2-1c)燕窝预处理
将燕窝与纯化水按1:8的重量比例混合,并用打浆机打浆(打浆机在5000转/分钟下打浆5分钟),得到燕窝浆;
(2-2)均质
将经过溶胀的螺旋藻粉、鳕鱼皮浆液和燕窝浆混合,并用高压均质机处理(高压均质机在转子转速为1600转/分钟、压力为40MPa的条件下处理30分钟),得到预处理料液;
(2-3)酶解
将步骤(2-2)得到的预处理料液加入酶反应釜中,并加入大米蛋白粉,然后加入纯化水配制成干物质含量8%的料液,再将料液的pH值调节至9.5(用氢氧化钠调节料液的pH值);
然后用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分两步进行酶解,碱性蛋白酶的用量为料液干重的2%(碱性蛋白酶的活力单位为30万单位),木瓜蛋白酶的用量为料液干重的1%(木瓜蛋白酶的活力单位为50万单位),中性蛋白酶的用量为料液干重的1%(中性蛋白酶的活力单位为10万单位);
先加入碱性蛋白酶在52℃下酶解4小时,然后将酶解液升温至80℃灭酶20分钟;再将酶解液降温到48℃,加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解5小时,然后将酶解液升温至80℃灭酶20分钟,得到蛋白酶解液;
(3)离心
将蛋白酶解液用离心机进行离心,获得上清液;
本步骤(3)中,离心机采用碟式离心机,在转速6000转/分钟的条件下进行离心,碟式离心机功率为10kW;
(4)脱色
将上清液抽入脱色罐中,进行脱色处理;
本步骤(4)中,脱色罐中加入有活性炭(活性炭为植物活性炭,其粒径大小为300-800目≥90%)和硅藻土,活性炭的用量为上清液的2%,硅藻土的用量为上清液的2%;以35转/分钟的转速进行搅拌,在50℃下脱色40分钟;
(5)过滤
对经脱色处理后的上清液进行过滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
上述步骤(5)中过滤包括下述步骤:
(5-1)将脱色液用板框过滤,获得复合蛋白肽溶液;
本步骤(5-1)中,板框过滤所用滤布的材质为尼龙材料,滤布的孔径为5微米;
(5-2)将复合蛋白肽溶液加入不锈钢储罐中,用管式陶瓷微滤设备进行预处理;
本步骤(5-2)中,管式陶瓷微滤设备所用陶瓷膜过滤滤芯的孔径为0.1微米;
(5-3)超滤:用超滤设备对经步骤(5-2)预处理的复合蛋白肽溶液进行超滤,获得小分子复合蛋白肽溶液;
本步骤(5-3)中,超滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于5000Da的物质通过;
(5-4)纳滤:对步骤(5-3)获得的小分子复合蛋白肽溶液进行纳滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
步骤(5-4)中,纳滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于300Da的物质通过,进行连续三级纳滤,一级纳滤后的截留液为二级纳滤的料液,二级纳滤的截留液为三级的纳滤的料液;一级纳滤压力为0.35MPa,二级纳滤压力为0.4MPa,三级纳滤压力为0.5MPa。通过连续三级纳滤,通过纳滤膜过滤去除钠等一价阳离子,一级纳滤后的截留液为二级纳滤的料液,二级纳滤的截留液为三级的纳滤的料液,三级纳滤的截留液为所需的美白复合蛋白肽酶解液。
上述美白复合蛋白肽酶解液粗蛋白中小于1000Da的小分子蛋白肽含量为91.3%。粗蛋白中小于1000Da的蛋白肽含量(%)=小于1000Da百分比-游离氨基酸含量/粗蛋白含量。蛋白肽分子量分布测量方法根据GB 31645~2018食品安全国家标准 胶原蛋白肽采用高效体积排阻色谱法测定。游离氨基酸含量用氨基酸分析仪检测。
本实施例的蛋白质提取率为61.4%。蛋白肽提取率(%)=(酶解上清液中总蛋白质含量/原料中总蛋白含量)*100。
本实施例的美白复合蛋白肽饮品含有下述重量配比的组分:按以上美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计12%,赤藓糖3%,蜂蜜5%,γ-氨基丁酸0.2%,维生素C 0.3%,覆盆子提取物1%,人参提取物0.2%,酵母提取物1.5%,针叶樱桃果粉4%,玫瑰花汁粉2%,水蜜桃果粉1%,蔓越莓浓缩果汁2%,黑加仑浓缩果汁3%,苹果酸0.5%,柠檬酸0.04%,果胶0.2%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.04%,余量为蒸馏水。
本实施例中,美白复合蛋白肽饮品的制备方法包括下述步骤:
(1’)按重量计,配备下述原料:按以上美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计12%,赤藓糖3%,蜂蜜5%,γ-氨基丁酸0.2%,维生素C 0.3%,覆盆子提取物1%,人参提取物0.2%,酵母提取物1.5%,针叶樱桃果粉4%,玫瑰花汁粉2%,水蜜桃果粉1%,蔓越莓浓缩果汁2%,黑加仑浓缩果汁3%,苹果酸0.5%,柠檬酸0.04%,果胶0.2%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.04%,余量为蒸馏水;
(2’)将步骤(1’)配备的各种原料混合,并搅拌均匀,然后用灌装机分装入棕色玻璃瓶(每瓶30毫升)中,得到瓶装美白复合蛋白肽饮品;
(3’)将瓶装美白复合蛋白肽饮品在116℃下灭菌20分钟。
步骤(3’)中,可用高温高压灭菌锅对瓶装美白复合蛋白肽饮品进行灭菌,灭菌后得到美白复合蛋白肽饮品的成品。
上述美白复合蛋白肽饮品为均匀的深褐色液体,蛋白肽含量12%,酸甜可口。选12名品鉴师品尝,有4人可接受,8人喜欢;随机取30瓶放在恒温恒湿箱中52℃下30天,无沉淀,无变质,颜色无明显变化,口感无明显变化。
实施例2
本实施例中,美白复合蛋白肽酶解液的制备方法与实施例1相同。
本实施例的美白复合蛋白肽饮品含有下述重量配比的组分:按实施例1美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计8%,赤藓糖1%,蜂蜜8%,γ-氨基丁酸0.2%,维生素C 0.1%,覆盆子提取物1.2%,人参提取物0.1%,酵母提取物3%,针叶樱桃果粉2.5%,玫瑰花汁粉2%,水蜜桃果粉1.5%,蓝莓浓缩果汁2.5%,黑加仑浓缩果汁1.2%,苹果酸0.2%,柠檬酸0.06%,果胶0.1%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.03%,余量为蒸馏水。
本实施例中,美白复合蛋白肽饮品的制备方法包括下述步骤:
(1’)按重量计,配备下述原料:按实施例1美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计8%,赤藓糖1%,蜂蜜8%,γ-氨基丁酸0.2%,维生素C 0.1%,覆盆子提取物1.2%,人参提取物0.1%,酵母提取物3%,针叶樱桃果粉2.5%,玫瑰花汁粉2%,水蜜桃果粉1.5%,蓝莓浓缩果汁2.5%,黑加仑浓缩果汁1.2%,苹果酸0.2%,柠檬酸0.06%,果胶0.1%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.03%,余量为蒸馏水;
(2’)将步骤(1’)配备的各种原料混合,并搅拌均匀,然后用灌装机分装入棕色玻璃瓶中(每瓶30毫升),得到瓶装美白复合蛋白肽饮品;
(3’)将瓶装美白复合蛋白肽饮品在110℃下灭菌25分钟。
步骤(3’)中,可用高温高压灭菌锅对瓶装美白复合蛋白肽饮品进行灭菌,灭菌后得到美白复合蛋白肽饮品的成品。
上述美白复合蛋白肽饮品为均匀的深褐色液体,蛋白肽含量为8%,酸甜可口。选12名品鉴师品尝,有4人可接受,8人喜欢;随机取30瓶放在恒温恒湿箱中52℃下30天,无沉淀,无变质,颜色无明显变化,口感无明显变化。
实施例3
本实施例中,美白复合蛋白肽酶解液的制备方法包括下述步骤:
(1)按干重计,配备下述原料:螺旋藻30%,鳕鱼皮54%,大米蛋白粉15.5%,燕窝0.5%;
(2)蛋白酶解液的制备
(2-1)原料预处理
(2-1a)螺旋藻预处理
将螺旋藻粉碎,得到螺旋藻粉;然后将螺旋藻粉与纯化水按1:8的重量比例混合,并搅拌均匀后进行溶胀(以50转/分钟的速度对螺旋藻粉与纯化水的混合物进行搅拌;在55℃溶胀2小时);
本步骤(2-1a)中,将螺旋藻粉与纯化水共同加入到不锈钢罐中,不锈钢罐带有搅拌系统和循环水系统;搅拌系统用于对不锈钢罐中的物料进行搅拌;循环水系统系统使不锈钢罐内部温度保持在55℃,进行溶胀;
(2-1b)鳕鱼皮预处理
将鳕鱼皮用水清洗干净,再加入水浸泡10分钟,加入碳酸氢钠溶液后再浸泡6小时(碳酸氢钠溶液的重量约为鳕鱼皮干重的8倍);然后用水清洗干净,加入双氧水脱色4小时(双氧水的重量约为鳕鱼皮干重的8倍);再用水清洗干净,加入重量为鳕鱼皮干重的3倍的纯化水,用搅碎机将鳕鱼皮搅碎,得到鳕鱼皮浆液;
本步骤(2-1b)中所用的碳酸氢钠溶液和双氧水均为食品级;碳酸氢钠溶液的重量百分比浓度为3%;双氧水的重量百分比浓度为4%;
(2-1c)燕窝预处理
将燕窝与纯化水按1:4的重量比例混合,并用打浆机打浆(打浆机在5000转/分钟下打浆8分钟),得到燕窝浆;
(2-2)均质
将经过溶胀的螺旋藻粉、鳕鱼皮浆液和燕窝浆混合,并用高压均质机处理(高压均质机在转子转速为1200转/分钟、压力为60MPa的条件下处理25分钟),得到预处理料液;
(2-3)酶解
将步骤(2-2)得到的预处理料液加入酶反应釜中,并加入大米蛋白粉,然后加入纯化水配制成干物质含量12%的料液,再将料液的pH值调节至9.2(用氢氧化钠调节料液的pH值);
然后用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分两步进行酶解,碱性蛋白酶的用量为料液干重的1.92%(碱性蛋白酶的活力单位为30万单位),木瓜蛋白酶的用量为料液干重的0.5%(木瓜蛋白酶的活力单位为50万单位),中性蛋白酶的用量为料液干重的1%(中性蛋白酶的活力单位为10万单位);
先加入碱性蛋白酶在60℃下酶解3小时,然后将酶解液升温至90℃灭酶20分钟;再将酶解液降温到52℃,加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解6小时,然后将酶解液升温至90℃灭酶20分钟,得到蛋白酶解液;
(3)离心
将蛋白酶解液用离心机进行离心,获得上清液;
本步骤(3)中,离心机采用碟式离心机,在转速6000转/分钟的条件下进行离心,碟式离心机功率为10kW;
(4)脱色
将上清液抽入脱色罐中,进行脱色处理;
本步骤(4)中,脱色罐中加入有活性炭(活性炭为植物活性炭,其粒径大小为300-800目≥90%)和硅藻土,活性炭的用量为上清液的1.6%,硅藻土的用量为上清液的1.6%;以50转/分钟的转速进行搅拌,在60℃下脱色50分钟;
(5)过滤
对经脱色处理后的上清液进行过滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
上述步骤(5)中过滤包括下述步骤:
(5-1)将脱色液用板框过滤,获得复合蛋白肽溶液;
本步骤(5-1)中,板框过滤所用滤布的材质为尼龙材料,滤布的孔径为10微米;
(5-2)将复合蛋白肽溶液加入不锈钢储罐中,用管式陶瓷微滤设备进行预处理;
本步骤(5-2)中,管式陶瓷微滤设备所用陶瓷膜过滤滤芯的孔径为0.2微米;
(5-3)超滤:用超滤设备对经步骤(5-2)预处理的复合蛋白肽溶液进行超滤,获得小分子复合蛋白肽溶液;
本步骤(5-3)中,超滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于5000Da的物质通过;
(5-4)纳滤:对步骤(5-3)获得的小分子复合蛋白肽溶液进行纳滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
步骤(5-4)中,纳滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于150Da的物质通过,进行连续三级纳滤,一级纳滤后的截留液为二级纳滤的料液,二级纳滤的截留液为三级的纳滤的料液;一级纳滤压力为0.35MPa,二级纳滤压力为0.4MPa,三级纳滤压力为0.5MPa。通过连续三级纳滤,通过纳滤膜过滤去除钠等一价阳离子,一级纳滤后的截留液为二级纳滤的料液,二级纳滤的截留液为三级的纳滤的料液,三级纳滤的截留液为所需的美白复合蛋白肽酶解液。
上述美白复合蛋白肽酶解液粗蛋白中小于1000Da的小分子蛋白肽含量为92%。粗蛋白中小于1000Da的蛋白肽含量(%)=小于1000Da百分比-游离氨基酸含量/粗蛋白含量。蛋白肽分子量分布测量方法根据GB 31645~2018食品安全国家标准 胶原蛋白肽采用高效体积排阻色谱法测定。游离氨基酸含量用氨基酸分析仪检测。
本实施例的蛋白质提取率为61.5%。蛋白肽提取率(%)=(酶解上清液中总蛋白质含量/原料中总蛋白含量)*100。
本实施例的美白复合蛋白肽饮品含有下述重量配比的组分:按以上美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计10.44%,赤藓糖3%,蜂蜜4%,γ-氨基丁酸0.3%,维生素C 0.2%,覆盆子提取物1.5%,人参提取物0.2%,酵母提取物2%,针叶樱桃果粉4%,玫瑰花汁粉3%,水蜜桃果粉2%,蔓越莓浓缩果汁2%,黑加仑浓缩果汁3%,苹果酸0.4%,柠檬酸0.04%,果胶0.2%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.01%,余量为蒸馏水。
本实施例中,美白复合蛋白肽饮品的制备方法包括下述步骤:
(1’)按重量计,配备下述原料:按以上美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计10.44%,赤藓糖3%,蜂蜜4%,γ-氨基丁酸0.3%,维生素C 0.2%,覆盆子提取物1.5%,人参提取物0.2%,酵母提取物2%,针叶樱桃果粉4%,玫瑰花汁粉3%,水蜜桃果粉2%,蔓越莓浓缩果汁2%,黑加仑浓缩果汁3%,苹果酸0.4%,柠檬酸0.04%,果胶0.2%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.01%,余量为蒸馏水;
(2’)将步骤(1’)配备的各种原料混合,并搅拌均匀,然后用灌装机分装入棕色玻璃瓶中(每瓶30毫升),得到瓶装美白复合蛋白肽饮品;
(3’)将瓶装美白复合蛋白肽饮品在116℃下灭菌20分钟。
步骤(3’)中,可用高温高压灭菌锅对瓶装美白复合蛋白肽饮品进行灭菌,灭菌后得到美白复合蛋白肽饮品的成品。
上述美白复合蛋白肽饮品为均匀的深褐色液体,蛋白肽含量为10.44%,酸甜可口。选12名品鉴师品尝,有5人可接受,7人喜欢;随机取30瓶放在恒温恒湿箱中52℃下30天,无沉淀,无变质,颜色无明显变化,口感无明显变化。
实施例4
本实施例中,美白复合蛋白肽酶解液的制备方法与实施例3相同。
本实施例的美白复合蛋白肽饮品含有下述重量配比的组分:按实施例3美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计18%,赤藓糖4%,蜂蜜6%,γ-氨基丁酸0.3%,维生素C 0.3%,覆盆子提取物2%,人参提取物0.2%,酵母提取物2%,针叶樱桃果粉2%,玫瑰花汁粉1%,水蜜桃果粉2%,蓝莓浓缩果汁4%,黑加仑浓缩果汁2%,苹果酸0.45%,柠檬酸0.05%,果胶0.2%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.015%,余量为蒸馏水。
本实施例中,美白复合蛋白肽饮品的制备方法包括下述步骤:
(1’)按重量计,配备下述原料:按实施例3美白复合蛋白肽酶解液的制备方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计18%,赤藓糖4%,蜂蜜6%,γ-氨基丁酸0.3%,维生素C 0.3%,覆盆子提取物2%,人参提取物0.2%,酵母提取物2%,针叶樱桃果粉2%,玫瑰花汁粉1%,水蜜桃果粉2%,蓝莓浓缩果汁4%,黑加仑浓缩果汁2%,苹果酸0.45%,柠檬酸0.05%,果胶0.2%,黄原胶0.05%,羧甲基纤维素钠0.1%,三氯蔗糖0.015%,余量为蒸馏水;
(2’)将步骤(1’)配备的各种原料混合,并搅拌均匀,然后用灌装机分装入棕色玻璃瓶中(每瓶30毫升),得到瓶装美白复合蛋白肽饮品;
(3’)将瓶装美白复合蛋白肽饮品在116℃下灭菌20分钟。
步骤(3’)中,可用高温高压灭菌锅对瓶装美白复合蛋白肽饮品进行灭菌,灭菌后得到美白复合蛋白肽饮品的成品。
上述美白复合蛋白肽饮品为均匀的深褐色液体,蛋白肽含量为18%,酸甜可口。选12名品鉴师品尝,有6人可接受,6人喜欢;随机取30瓶放在恒温恒湿箱中52℃下30天,无沉淀,无变质,颜色无明显变化,口感无明显变化。
实施例5 美白复合蛋白肽液美白效果验证
一、实验方法
酪氨酸酶溶液的配置:将马铃薯洗净,于4℃预冷4h左右。去皮,切成约1.0cm3 丁状,于-20℃冷冻过夜。称重,按1:1的比例加入4℃预冷的凝酸钠缓冲液,用组织捣碎机制成匀浆,3层纱布过滤,滤液于4000r/min离心10min,上清液即为所得酪氨酸酶粗酶液,4℃保存,2h内用完。
小鼠B16黑色素细胞培养:用含质量分数为10%的小牛血清的RPMI-1640培养液,在37.5℃、5%CO2的条件下培养B16黑色素细胞,细胞接种量为3x106个/L,每3天转接一代。
细胞增率的测定:选择对数期的B16黑色素细胞,用0.25%的胰蛋白酶消化,稀释细胞浓度为2x104个/L,接种于96孔板,180ul/孔,在37.5℃、5%CO2的条件下培养24小时。镜检观察生长状态良好的,分别加入不同浓度的受试物20ul/孔,继续培养48小时,于结束前4小时加入MTT 30ul/孔,4小时后弃上清液,然后加入DMSO 150ul/孔,振荡10分钟左右,用酶标仪测定475nm处的吸光度。
细胞内酪氨酸酶活力测定:取B16黑色素细胞接种于35cm2培养瓶,接种量为6x105个/瓶,培养48小时后更换成不同浓度的受试物培养基,连续培养48小时,以不加受试物为阴性对照,以加入50ul/ml的熊果苷为阳性对照。用0.25%的胰蛋白酶消化后,用pH值为6.8的PBS吹打成细胞悬液,1000转/分钟,离心10分钟,离心弃上清液,收获细胞团块,加入1ml质量百分比浓度为0.5%的脱氧胆酸钠,冰浴15分钟,裂解细胞制备含酪氨酸提取液。取提取液0.5ml,37℃预温后加入质量百分比浓度为0.3%的多巴溶液0.5ml,37℃水浴反应5分钟,在475nm处测定吸光值。
细胞内黑色素含量测定:黑色素细胞培养同上,获得黑色素细胞团块后加入1ml质量百分比浓度为0.1mol/L的氢氧化钠(含10%的DMSO),80℃水浴30分钟,在400nm处测定吸光值。
对实施例1和3获得的美白复合蛋白肽进行实验,分别配置以下浓度:0.2%、0.4%
二、实验结果
表1 美白复合蛋白肽液对B16黑色素细胞生长的抑制率(X±SD,n=3)
组别 | 实施例1 0.2% | 实施例1 0.4% | 实施例3 0.2% | 实施例3 0.4% | 熊果苷 |
抑制率% | 35.21±2.15 | 52.54±6.26 | 35.43±3.18 | 56.78±7.17 | 42.35±4.12 |
实验选用熊果苷作为阳性对照组,是因为熊果苷,具有安全性高、美白效果明显等特点,是重要的酪氨酸酶抑制剂,能够在不具备黑素细胞毒性的浓度范围内抑制酪氨酸酶的活性,阻断多巴及多巴醌的合成,从而遏制黑素的生成,研究表明50ul/ml的熊果苷对B16黑色素细胞具有明显的影响,表现出明显的美白效果。从表1可以看出,熊果苷对B16黑色素细胞生长有明显的抑制,不同浓度的美白复合蛋白肽液对黑色素细胞生长有明显的抑制,特别是实施例1和实施例3的0.4%组均显著高于阳性对照组熊果苷(*P<0.05)。
表2美白复合蛋白肽液对B16黑色素细胞酪氨酸酶活的抑制率(X±SD,n=3)
组别 | 实施例1 0.2% | 实施例1 0.4% | 实施例3 0.2% | 实施例3 0.4% | 熊果苷 |
抑制率% | 27.84±6.36 | 43.58±5.91 | 26.1±3.83 | 43.67±7.28 | 32.51±2.79 |
从表2可以看出熊果苷对B16黑色素细胞细胞酪氨酸酶活有一定的抑制,不同浓度的美白复合蛋白肽液对黑色素细胞酪氨酸酶活有明显的抑制,实施例1和实施例3低浓度组于阳性对照组熊果苷无显著差异(*P<0.05);实施例1和实施例3高浓度组对B16黑色素细胞细胞酪氨酸酶活显著高于阳性对照组(*P<0.05)。
表3美白复合蛋白肽液对B16黑色素细胞黑色素生产的抑制率(X±SD,n=3)
组别 | 实施例1 0.2% | 实施例1 0.4% | 实施例3 0.2% | 实施例3 0.4% | 熊果苷 |
抑制率% | 16.97±3.36 | 35.85±5.91 | 21.15±3.63 | 37.71±4.36 | 25.5±2.15 |
从表3可以看出熊果苷对B16黑色素细胞细胞黑色素生产有一定的抑制,不同浓度的美白复合蛋白肽液对黑色素细胞黑色素生产有一定的抑制,实施例1和实施例3 低浓度组于阳性对照组熊果苷无显著差异(*P<0.05);实施例1和实施例3高浓度组对B16黑色素细胞细胞美白复合蛋白肽液对B16黑色素细胞黑色素产生的抑制率显著高于阳性对照组(*P<0.05)。这与美白复合蛋白肽液对B16黑色素细胞酪氨酸酶活的抑制率结果一致。
美白复合蛋白肽液对B16黑色素细胞生长的抑制,对B16黑色素细胞酪氨酸酶活的抑制,对B16黑色素细胞黑色素生产的抑制均有明显的效果,特别是0.4%浓度的效果优于具有明显美白效果的熊果苷,具有明显的美白效果。
实施例6 美白复合蛋白肽饮品人体口服美白验证实验
招募32名志愿者,纳入标准为:①对肤色不满意,非皮肤病引起的面部偏黑、皮肤干燥及脱屑者;②入组前3个月未使用过皮肤美白产品;③女性,年龄24~56岁;④知情同意并签署同意书。排除标准:①有银屑病、单纯疱疹等皮肤病;②有化妆品过敏史;③妊娠或哺乳期女性;④有系统性疾病。试用周期8周,每天口服一瓶实施例4制作的美白复合蛋白肽饮品,分别于0周、2周、4周、6周、8周进行皮肤测试,使用皮肤弹性测试仪Cotometer MPA580用Mexameter MX18测试探头测试皮肤黑色素和红色素,使用CornemeterCM825测试探头测试皮肤水分。
评价方法:皮肤黑色素和红色素测试范围0-999,中国人皮肤测试主要集中在50-300,降低30及以上为有美白效果,降低50及以上为有明显美白效果;
测试志愿者手臂内侧皮肤,测三个地方取平均值,皮肤水分含量测试范围:1-130,皮肤水分含量主要集中在10-75,提高10及以上为有保水作用,提高20及以上为有明显的保水作用。
表 4美白复合蛋白肽饮品人体口服体验数据
从美白复合蛋白肽饮品人体口服体验数据可以看出:32名志愿者中在第二周表现为有保水作用的有2人,其中有明显保水作用的1人;在第4周有保水作用的有8人,其中有明显保水作用的2人;在第6周有保水作用的有15人,其中有明显保水作用的5人;在第8周有保水作用的有26人,其中有明显保水作用的9人。美白复合蛋白肽饮品口服4周后,25%人群开始表现出保水作用,6周后46.7%人群开始表现出保水作用,8周后81.2%人群开始表现出保水作用,其中有15.6%人群表现出明显的保水作用。说明美白复合蛋白肽饮品具有明显的保水作用。手臂皮肤小于35为皮肤较干燥,35-50为皮肤正常,大于50为皮肤水分充足。志愿者12个干性皮肤的水分含量均有有一定的改善,其中有11个改变为含水量正常皮肤,2个改变为水分充足皮肤。
皮肤黑色素和红色素0-150为白皙皮肤,150-250为浅棕皮肤,250-500为棕色皮肤,大于500为黑色皮肤。从美白复合蛋白肽饮品人体口服体验数据可以看出,32名志愿者中在第2周表现为有美白效果的有5人,有明显美白效果的有4个;第4周表现为有美白效果的有14人,有明显美白效果的有6个;第6周表现为有美白效果的有24人,有明显美白效果的有20个;第8周表现为有美白效果的有26人,有明显美白效果的有20个。美白复合蛋白肽饮品口服2周后少量受试人群开始有表现为有美白效果,口服4周后有43.8%表现为有美白效果;口服6周后有75%表现为有美白效果,其中62.5%表现为有明显美白效果;口服8周后有81.3%表现为有美白效果,其中62.5%表现为有明显美白效果。口服美白复合蛋白肽饮品6周后多数人群表现为有美白效果,第8周更是81.3%表现为有美白效果,这说明本款口服液有明显的美白作用,这与表现出的保水作用结果一致,皮肤细胞含水量提高,有利于增加皮肤弹性,有利于增加皮肤的新陈代谢,有利于美白皮肤。
Claims (10)
1.一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征在于包括下述步骤:
(1)按干重计,配备下述原料:螺旋藻18-30%,鳕鱼皮45-55%,大米蛋白粉15-25%,燕窝0.5-2%;
(2)蛋白酶解液的制备
(2-1)原料预处理
(2-1a)螺旋藻预处理
将螺旋藻粉碎,得到螺旋藻粉;然后将螺旋藻粉与纯化水按1:4-1:10的重量比例混合,并搅拌均匀后进行溶胀;
(2-1b)鳕鱼皮预处理
将鳕鱼皮用水清洗干净,再加入水浸泡5-10分钟,加入碳酸氢钠溶液后再浸泡6-9小时;然后用水清洗干净,加入双氧水脱色3-6小时;再用水清洗干净,加入重量为鳕鱼皮干重的3-5倍的纯化水,用搅碎机将鳕鱼皮搅碎,得到鳕鱼皮浆液;
(2-1c)燕窝预处理
将燕窝与纯化水按1:4-1:8的重量比例混合,并用打浆机打浆,得到燕窝浆;
(2-2)均质
将经过溶胀的螺旋藻粉、鳕鱼皮浆液和燕窝浆混合,并用高压均质机处理,得到预处理料液;
(2-3)酶解
将步骤(2-2)得到的预处理料液加入酶反应釜中,并加入大米蛋白粉,然后加入纯化水配制成干物质含量8-15%的料液,再将料液的pH值调节至9.2-9.5;
然后用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分两步进行酶解,碱性蛋白酶的用量为料液干重的1-3%,木瓜蛋白酶的用量为料液干重的0.5-1.5%,中性蛋白酶的用量为料液干重的1-3%;
先加入碱性蛋白酶在47-62℃下酶解3-6小时,然后将酶解液升温至80-90℃灭酶20-30分钟;再将酶解液降温到38-55℃,加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解3-6小时,然后将酶解液升温至80-90℃灭酶20-30分钟,得到蛋白酶解液;
(3)离心
将蛋白酶解液用离心机进行离心,获得上清液;
(4)脱色
将上清液抽入脱色罐中,进行脱色处理;
(5)过滤
对经脱色处理后的上清液进行过滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
2.根据权利要求1所述的美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征是:步骤(2-1a)中,以30-50转/分钟的速度对螺旋藻粉与纯化水的混合物进行搅拌;在45-65℃溶胀1-2小时;
步骤(2-1b)中,所用的碳酸氢钠溶液和双氧水均为食品级;碳酸氢钠溶液的重量百分比浓度为2-5%;双氧水的重量百分比浓度为3-6%;
步骤(2-1c)中,打浆机在3000-5000转/分钟下打浆5-10分钟。
3.根据权利要求1所述的美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征是:步骤(2-2)中,高压均质机在转子转速为1200-1600转/分钟、压力为40-60MPa的条件下处理20-30分钟。
4.根据权利要求1所述的美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征是:步骤(2-3)中,碱性蛋白酶的活力单位为20-50万单位,木瓜蛋白酶的活力单位为50-80万单位,中性蛋白酶的活力单位为10-30万单位。
5.根据权利要求1所述的美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征是:步骤(3)中,离心机采用碟式离心机,在转速4500-6000转/分钟的条件下进行离心。
6.根据权利要求1所述的美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征是:步骤(4)中,脱色罐中加入有活性炭和硅藻土,活性炭的用量为上清液的1-3%,硅藻土的用量为上清液的1-3%;以30-50转/分钟的转速进行搅拌,在50-60℃下脱色40-60分钟。
7.根据权利要求1所述的美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征在于步骤(5)中过滤包括下述步骤:
(5-1)将脱色液用板框过滤,获得复合蛋白肽溶液;
(5-2)将复合蛋白肽溶液加入不锈钢储罐中,用管式陶瓷微滤设备进行预处理;
(5-3)超滤:用超滤设备对经步骤(5-2)预处理的复合蛋白肽溶液进行超滤,获得小分子复合蛋白肽溶液;
(5-4)纳滤:对步骤(5-3)获得的小分子复合蛋白肽溶液进行纳滤,得到美白复合蛋白肽酶解液。
8.根据权利要求7所述的美白复合蛋白肽酶解液的制备方法,其特征是:
步骤(5-1)中,板框过滤所用滤布的材质为尼龙材料,滤布的孔径为1-10微米;
步骤(5-2)中,管式陶瓷微滤设备所用陶瓷膜过滤滤芯的孔径为0.1-0.2微米;
步骤(5-3)中,超滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于5000-10000Da的物质通过;
步骤(5-4)中,纳滤设备所用膜过滤滤芯允许分子量低于150-300Da的物质通过,进行连续三级纳滤,一级纳滤后的截留液为二级纳滤的料液,二级纳滤的截留液为三级的纳滤的料液;一级纳滤压力为0.35MPa,二级纳滤压力为0.4MPa,三级纳滤压力为0.5MPa。
9.一种美白复合蛋白肽饮品,其特征在于含有下述重量配比的组分:权利要求1-8任一项所述的方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计6-18%,赤藓糖1-5%,蜂蜜2-8%,γ-氨基丁酸0.1-0.4%,维生素C 0.1-0.5%,覆盆子提取物0.5-2%,人参提取物0.1-0.3%,酵母提取物0.5-3%,针叶樱桃果粉2-6%,玫瑰花汁粉1-3%,水蜜桃果粉0-2%,蓝莓浓缩果汁0-6%,蔓越莓浓缩果汁0-4%,黑加仑浓缩果汁0-4%,苹果酸0.2-0.5%,柠檬酸0.03-0.06%,果胶0.1-0.3%,黄原胶0.05-0.1%,羧甲基纤维素钠0.1-0.2%,三氯蔗糖0.01-0.15%,余量为蒸馏水。
10.一种美白复合蛋白肽饮品的制备方法,其特征在于包括下述步骤:
(1’)按重量计,配备下述原料:权利要求1-8任一项所述的方法制得的美白复合蛋白肽酶解液 按蛋白肽含量计6-18%,赤藓糖1-5%,蜂蜜2-8%,γ-氨基丁酸0.1-0.4%,维生素C0.1-0.5%,覆盆子提取物0.5-2%,人参提取物0.1-0.3%,酵母提取物0.5-3%,针叶樱桃果粉2-6%,玫瑰花汁粉1-3%,水蜜桃果粉0-2%,蓝莓浓缩果汁0-6%,蔓越莓浓缩果汁0-4%,黑加仑浓缩果汁0-4%,苹果酸0.2-0.5%,柠檬酸0.03-0.06%,果胶0.1-0.3%,黄原胶0.05-0.1%,羧甲基纤维素钠0.1-0.2%,三氯蔗糖0.01-0.15%,余量为蒸馏水;
(2’)将步骤(1’)配备的各种原料混合,并搅拌均匀,然后用灌装机分装入棕色玻璃瓶中,得到瓶装美白复合蛋白肽饮品;
(3’)将瓶装美白复合蛋白肽饮品在110-121℃下灭菌15-25分钟。
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