CN103124786A - 将葡萄糖氧化酶固定在自组装膜上的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供增加固定在自组装膜上的葡萄糖氧化酶的量的方法。本发明的方法的特征在于，在自组装膜与葡萄糖氧化酶之间夹有1分子的氨基酸。

Description

将葡萄糖氧化酶固定在自组装膜上的方法
技术领域
本发明涉及将葡萄糖氧化酶固定在自组装膜上的方法。
背景技术
为了对试样中含有的目标物质进行检测或定量，使用生物传感器。有一些生物传感器为了对葡萄糖进行检测或定量而具备葡萄糖氧化酶。
当将含有葡萄糖的试样供至具备葡萄糖氧化酶的生物传感器时，葡萄糖被葡萄糖氧化酶分解成葡糖酸内酯和过氧化氢。检测或定量该葡糖酸内酯或过氧化氢中的至少任一者，从而对试样中含有的葡萄糖进行检测或定量。
专利文献1公开了具备酶的现有生物传感器。图2表示专利文献1的图7所公开的生物传感器。
根据专利文献1的有关图7的记载，该生物传感器用于对生物体分子的活性进行筛选。该生物传感器具备单层7、亲和性标签8、衔接分子9和蛋白质10。单层7由化学式X-R-Y所示的自组装膜构成（参见段落号0080、0082、0084、0085）。X、R和Y的一个例子分别为HS-、烷烃和羧基（0084、0085和0095）。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第00/04382号公报（该公报对应于日本特表2002-520618号公报。特别是参见段落号0080、0082、0084、0085、0095、0109、0118和0119）
发明内容
发明要解决的技术问题
为了提高葡萄糖的检测灵敏度或定量精度，有必要增加固定于该生物传感器上的葡萄糖氧化酶的量。
本发明人发现了：通过使1分子的氨基酸结合在自组装膜上后再固定葡萄糖氧化酶，可以显著地增加每单位面积的葡萄糖氧化酶的固定量。本发明基于该发现而完成。
本发明的目的在于提供使固定于自组装膜上的葡萄糖氧化酶的量增加的方法及具有按照该方法固定的葡萄糖氧化酶的传感器。
用于解决技术问题的手段
以下的项目A1、B1和C1解决了上述技术问题。
（A1）一种将葡萄糖氧化酶固定在自组装膜上的方法，其中，依次含有以下的工序（a）～（b）：
准备具备1分子的氨基酸和自组装膜的基材的工序（a），这里所述1分子的氨基酸通过以下的化学式（I）所示的肽键结合在所述自组装膜上，所述1分子的氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和缬氨酸组成的20种氨基酸；
Figure BDA00002805172500021
（R表示所述1分子的氨基酸的侧链）
将葡萄糖氧化酶供给至所述基材上，发生所述1分子的氨基酸的羧基与所述葡萄糖氧化酶的氨基的反应，从而形成由以下的化学式（II）所示的肽键的工序（b）。
Figure BDA00002805172500031
（R表示所述1分子的氨基酸的侧链）
（A2）根据A1所记载的方法，其中，所述工序（a）具备以下的工序（a1）和（a2）：
准备在表面具备自组装膜的基材的工序（a1），这里所述自组装膜在一端具有羧基；将所述1分子的氨基酸供给至所述基材，发生由所述化学式（I）所示的所述自组装膜的一端的所述羧基与所述1分子的氨基酸的氨基之间的反应，从而形成肽键的工序（a2）。
（A3）根据A1所记载的方法，其中，在所述工序（a）和所述工序（b）之间进一步具备所述工序（ab）：
利用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基3-（3-二甲氧基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的混合液将所述1分子的氨基酸的羧基活化的工序（ab）。
（A4）根据A2所记载的方法，其中，在所述工序（a1）和所述工序（a2）之间进一步具备所述工序（a1a）：
利用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的混合液将所述自组装膜的羧基活化的工序（a1b）。
（A5）根据A1所记载的方法，其中，所述化学式（II）由以下的化学式（III）表示。
Figure BDA00002805172500041
（R表示所述1分子的氨基酸的侧链）
（A6）根据A1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸。
（A7）根据A1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸和缬氨酸。
（A8）根据A1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和酪氨酸。
（A9）根据A1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸和丙氨酸。
（B1）一种传感器，其为具备自组装膜、1分子的氨基酸和葡萄糖氧化酶的传感器，其中，在所述自组装膜与所述葡萄糖氧化酶之间夹有所述1分子的氨基酸，所述葡萄糖氧化酶通过以下的化学式（II）所示的2个肽键结合在自组装膜上，
Figure BDA00002805172500051
（R表示所述1分子的氨基酸的侧链）
所述1分子的氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和缬氨酸组成的20种氨基酸。
（B2）根据B1所记载的传感器，其中，所述化学式（II）由以下的化学式（III）表示。
Figure BDA00002805172500052
（R表示所述1分子的氨基酸的侧链）
（B3）根据B1的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸。
（B4）根据B1的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸和缬氨酸。
（B5）根据B1的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和酪氨酸。
（B6）根据B1的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸和丙氨酸。
（C1）一种使用传感器对试样中含有的葡萄糖进行检测或定量的方法，其依次具备以下的工序（a）～（c）：
准备具备自组装膜、1分子的氨基酸和葡萄糖氧化酶的传感器的工序（a），这里在所述自组装膜与所述葡萄糖氧化酶之间夹有所述1分子的氨基酸，所述葡萄糖氧化酶通过以下的化学式（II）所示的2个肽键结合在自组装膜上，
Figure BDA00002805172500061
（R表示所述1分子的氨基酸的侧链）
所述1分子的氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和缬氨酸组成的20种氨基酸；
向所述传感器供给所述试样，通过利用所述葡萄糖氧化酶进行的所述葡萄糖的分解而产生葡糖酸内酯和过氧化氢的工序（b）；
检测或定量所述葡糖酸内酯或过氧化氢中的至少任一者，从而对所述试样中含有的葡萄糖进行检测或定量的工序（c）。
（C2）根据C1的方法，其中，所述化学式（II）由以下的化学式（III）表示。
Figure BDA00002805172500071
（R表示所述1分子的氨基酸的侧链）
（C3）根据C1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸。
（C4）根据C1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸和缬氨酸。
（C5）根据C1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和酪氨酸。
（C6）根据C1的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸和丙氨酸。
发明效果
本发明实现了每单位面积上固定的葡萄糖氧化酶量的显著增加。
附图说明
图1表示本发明方法的概略图。
图2为专利文献1的图7。
图3表示现有技术的方法的概略图。
具体实施方式
以下一边参照图1一边说明本发明的实施方式。
（实施方式1）
图1表示用于将葡萄糖氧化酶固定在自组装膜上的本发明的方法。
基材1优选为金基板。金基板的一个例子是表面上同样（均匀）地具有金的基板。具体地说，金基板可以是在玻璃、塑料或SiO2的表面上具有通过溅射法形成的金膜的基板。
首先，将基材1浸渍在含有烷烃硫醇的溶液中。优选在浸渍前将基材1进行洗涤。该烷烃硫醇在末端具有羧基。烷烃硫醇优选具有6～18范围内的碳数。这样，在基材1上形成自组装膜2。
烷烃硫醇的优选浓度约为1～10mM。只要溶解烷烃硫醇，则溶媒并无限定。优选溶媒的一个例子为乙醇、二甲基亚砜（以下记为“DMSO”）和二噁烷。优选的浸渍时间约为12～48小时。
接着，将氨基酸3供给至自组装膜2。位于自组装膜2的上端的羧基(-COOH)与氨基酸3的氨基(-NH2)发生反应，从而形成由以下的化学式（I）所示的肽键。
Figure BDA00002805172500081
（这里，R表示1分子的氨基酸的侧链）
化学式（I）中，1分子的氨基酸3与自组装膜2结合。
氨基酸3选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和缬氨酸组成的20种氨基酸。即，化学式（I）中，R为这些20种氨基酸的侧链。
在将氨基酸3供给至自组装膜2时，可以同时供给2种以上的氨基酸。即，向自组装膜2供给含有氨基酸3的溶液时，该溶液可含有2种以上的氨基酸3。如果考虑到后述的葡萄糖氧化酶在氨基酸3上的均匀结合，则该溶液优选仅含1种氨基酸。
接着，供给葡萄糖氧化酶4。葡萄糖氧化酶4的5’末端的氨基与氨基酸3的羧基发生反应。葡萄糖氧化酶4所含有的赖氨酸的NH3 +基也与氨基酸3的羧基发生反应。这样，形成由以下化学式（II）所示的2个肽键，获得传感器。
Figure BDA00002805172500091
（这里，R表示1分子的氨基酸的侧链）
1分子的葡萄糖氧化酶4仅具有1个5’末端，但1分子的葡萄糖氧化酶4具有多个赖氨酸基。因此，几乎所有的化学式（II）详细地可由以下的化学式（III）表示。
Figure BDA00002805172500101
（这里，R表示1分子的氨基酸的侧链）
所得的传感器用于对试样中含有的葡萄糖进行检测或定量。
具体地说，通过电子媒介物或过氧化物酶检测或定量葡萄糖。
首先，以下说明利用电子媒介物进行的检测或定量。
向期待含有葡萄糖的试样中加入电子媒介物（氧化型）。电子媒介物（氧化型）的例子为铁氰化钾。之后，将该试样供给至传感器。
若该试样含有葡萄糖，则如以下的反应式（IV）所示那样，葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖转变成葡糖酸。同时，电子媒介物（氧化型）转变成电子媒介物（还原型）。反应式（IV）中，作为电子媒介物（氧化型），例示了铁氰化钾。
Figure BDA00002805172500102
所得的电子媒介物（还原型）的量如以下的反应式（V）所示那样利用电化学手段测定，从而可以对葡萄糖进行检测或定量。
[Fe(CN)6]-4→[Fe(CN)6]-3+e-    (V)
接着，以下说明利用过氧化物酶进行的检测或定量。
在氧和水的存在下，将期待含有葡萄糖的试样供至传感器。若该试样含有葡萄糖，则如以下的反应式（VI）所示那样，葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖转变成葡糖酸。同时产生过氧化氢。
Figure BDA00002805172500111
所产生的过氧化氢被混合在含有过氧化物酶的色原体试剂中。色原体的例子为4-氨基安替比林、2,2’-连氮-二-〔3-乙基苯并噻唑啉磺酸（6）〕、3,3’-5,5’-四甲基联苯胺和二氨基联苯胺。混合后发生显色现象，从而对葡萄糖进行检测。根据显色现象的程度，可知葡萄糖的浓度。
（实施例）
以下的实施例和比较例更为详细地说明本发明。
（比较例）
如图3所示，葡萄糖氧化酶通过酰胺偶联反应直接与位于形成于金表面上的经自组装化的烷烃硫醇的上端的羧基结合，从而将葡萄糖氧化酶固定。以下记载步骤及结果。
[试样溶液的制备]
制备具有10mM最终浓度的16-巯基十六烷酸的试样溶液。溶媒为乙醇。
[自组装膜的形成]
作为基材1，使用在玻璃上具有经蒸镀的金的金基板（GEHEALTHCARE公司制；BR-1004-05）。该基材1用含有浓硫酸和30%过氧化氢水的piranha溶液洗涤10分钟。进而，使用纯水进行洗涤并干燥。该piranha溶液中含有的浓硫酸相对于30%过氧化氢水的体积比为3。
接着，将金基板浸渍在试样溶液中18小时，在金基板的表面上形成自组装膜。最后用纯水洗涤基材1并干燥。
[葡萄糖氧化酶的固定]
葡萄糖氧化酶与位于形成自组装膜的16-巯基十六烷酸的上端的羧基结合，从而将葡萄糖氧化酶固定。
具体地说，利用0.1M NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）和0.4M EDC（1-乙基3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐)的35微升的混合液将位于16-巯基十六烷酸上端的羧基活化。之后，以5微升/分钟的流速添加35微升的葡萄糖氧化酶（40μg/ml）。这样，将16-巯基十六烷酸的羧基偶联在葡萄糖氧化酶的氨基上。
（实施例1）
除了在自组装膜的形成与葡萄糖氧化酶的固定之间供给作为1分子的氨基酸的甘氨酸之外，与比较例同样地进行实验。以下记载步骤及结果。
[氨基酸（甘氨酸）的固定化]
使甘氨酸与位于形成自组装膜2的16-巯基十六烷酸的上端的羧基结合，从而将甘氨酸固定。
具体地说，与比较例同样地将羧基活化后，以5微升/分钟的流速添加35微升的0.1M甘氨酸（pH：8.9）。这样，将16-巯基十六烷酸的羧基偶联在甘氨酸的氨基上。
[葡萄糖氧化酶的固定]
接着，使葡萄糖氧化酶与甘氨酸的羧基结合，从而将葡萄糖氧化酶固定。具体地说，与上述同样地将甘氨酸的羧基活化后，以5微升/分钟的流速添加35微升的葡萄糖氧化酶（浓度：250μg/ml）。这样，将甘氨酸的羧基偶联在葡萄糖氧化酶的5’末端的氨基上或者葡萄糖氧化酶所含有的赖氨酸的氨基上。
[固定量的比较]
使用SPR装置Biacore3000（GE HEALTHCARE公司制）测定实施例1和比较例中的葡萄糖氧化酶的固定量。
本说明书使用的用语“固定量”是指每单位面积上固定的葡萄糖氧化酶的量。
实施例1中测定的固定量与比较例中测定的固定量之比约为30.32：1。
（实施例2～20）
代替甘氨酸使用苏氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、苯基丙氨酸、色氨酸、半胱氨酸、组氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、谷氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、精氨酸和酪氨酸，与实施例1同样地测定各固定量。这些氨基酸为20种天然氨基酸。表1示出所测得的固定量。
表1
Figure BDA00002805172500131
本领域技术人员通过表1可理解以下事实。
使用20种氨基酸时，与比较例相比，固定量增加。而且，对应于所用的氨基酸，固定量发生变化。
优选半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸。其原因在于，当供给选自这些氨基酸中的1个氨基酸时，所测得的各固定量为5以上。
更优选半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸和缬氨酸。其原因在于，当供给选自这些氨基酸中的1个氨基酸时，所测得的各固定量为5以上。
进一步优选半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和酪氨酸。其原因在于，当供给选自这些氨基酸中的1个氨基酸时，所测得的各固定量为平均值（21.6）以上。
最优选半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸和丙氨酸。其原因在于，当供给选自这些氨基酸中的1个氨基酸时，所测得的各固定量超过平均值的1.2倍。
产业上的可利用性
本发明可显著增加每单位面积上固定的葡萄糖氧化酶的量。由此，能够提高生物传感器的灵敏度。该生物传感器可用于在临床现场中需要对患者来源生物体试样中所含有的葡萄糖进行检测或定量的检查和诊断中。
符号说明
1  金基材
2  烷烃硫醇
3  氨基酸
4  葡萄糖氧化酶

Claims (21)

1.一种将葡萄糖氧化酶固定在自组装膜上的方法，其中，依次含有以下的工序（a）～（b）：
准备具备1分子的氨基酸和自组装膜的基材的工序（a），这里所述1分子的氨基酸通过由以下的化学式（I）所示的肽键结合在所述自组装膜上，所述1分子的氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和缬氨酸组成的20种氨基酸；
Figure FDA00002805172400011
R表示所述1分子的氨基酸的侧链；
将葡萄糖氧化酶供给至所述基材上，发生所述1分子的氨基酸的羧基与所述葡萄糖氧化酶的氨基的反应，从而形成由以下的化学式（II）所示的肽键的工序（b）；
Figure FDA00002805172400012
R表示所述1分子的氨基酸的侧链。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述工序（a）具备以下的工序（a1）和（a2）：
准备在表面上具备自组装膜的基材的工序（a1），这里所述自组装膜在一端具有羧基；
将所述1分子的氨基酸供给至所述基材，发生由所述化学式（I）所示的所述自组装膜一端的所述羧基与所述1分子的氨基酸的氨基之间的反应，从而形成肽键的工序（a2）。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述工序（a）和所述工序（b）之间进一步具备所述工序（ab）：
利用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基3-（3-二甲氧基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的混合液将所述1分子的氨基酸的羧基活化的工序（ab）。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，在所述工序（a1）和所述工序（a2）之间进一步具备所述工序（a1a）：
利用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的混合液将所述自组装膜的羧基活化的工序（a1b）。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述化学式（II）由以下的化学式（III）表示，
Figure FDA00002805172400021
R表示所述1分子的氨基酸的侧链。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸和缬氨酸。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和酪氨酸。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸和丙氨酸。
10.一种传感器，其为具备自组装膜、1分子的氨基酸和葡萄糖氧化酶的传感器，其中，在所述自组装膜与所述葡萄糖氧化酶之间夹有所述1分子的氨基酸，所述葡萄糖氧化酶通过由以下的化学式（II）所示的2个肽键结合在自组装膜上，
Figure FDA00002805172400031
R表示所述1分子的氨基酸的侧链，
所述1分子的氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和缬氨酸组成的20种氨基酸。
11.根据权利要求10所述的传感器，其中，所述化学式（II）由以下的化学式（III）表示，
Figure FDA00002805172400041
R表示所述1分子的氨基酸的侧链。
12.根据权利要求10所述的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸。
13.根据权利要求10所述的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸和缬氨酸。
14.根据权利要求10所述的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和酪氨酸。
15.根据权利要求10所述的传感器，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸和丙氨酸。
16.一种使用传感器对试样中含有的葡萄糖进行检测或定量的方法，其中，依次具备以下的工序（a）～（c）：
准备具备自组装膜、1分子的氨基酸和葡萄糖氧化酶的传感器的工序（a），这里在所述自组装膜与所述葡萄糖氧化酶之间夹有所述1分子的氨基酸，所述葡萄糖氧化酶通过由以下的化学式（II）所示的2个肽键结合在自组装膜上，
Figure FDA00002805172400051
R表示所述1分子的氨基酸的侧链，
所述1分子的氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸和缬氨酸组成的20种氨基酸；
将所述试样供给至所述传感器，通过利用所述葡萄糖氧化酶进行的所述葡萄糖的分解而产生葡糖酸内酯和过氧化氢的工序（b）；
检测或定量所述葡糖酸内酯或过氧化氢中的至少任一者，从而对所述试样中含有的葡萄糖进行检测或定量的工序（c）。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述化学式（II）由以下的化学式（III）表示，
Figure FDA00002805172400061
R表示所述1分子的氨基酸的侧链。
18.根据权利要求16所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸。
19.根据权利要求16所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、酪氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、色氨酸和缬氨酸。
20.根据权利要求16所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和酪氨酸。
21.根据权利要求16所述的方法，其中，所述1分子的氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸和丙氨酸。
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