CN103076214B - 糖化血红蛋白质控品的制备方法 - Google Patents
糖化血红蛋白质控品的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103076214B CN103076214B CN201210572924.XA CN201210572924A CN103076214B CN 103076214 B CN103076214 B CN 103076214B CN 201210572924 A CN201210572924 A CN 201210572924A CN 103076214 B CN103076214 B CN 103076214B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- glycosylated hemoglobin
- control product
- freeze
- quality
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，它包括以下制备步骤：1）将血红蛋白糖基化；2）透析除去血红蛋白溶液中葡萄糖防止血红蛋白进一步糖基化；3）稀释至所需质控品浓度，冷冻干燥，最后将冻干粉复溶、分装；按本发明制作出来的糖化血红蛋白控品测值稳定，能有效的监控临床检验中试剂及仪器状态；且相对于以往采用全血作为原料的方案，具有成本低、无污染、利于大批量生产的优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，具体讲是一种糖化血红蛋白质控品的制备方法。
背景技术
糖尿病是危及人类健康的重大疾病之一，其发病晚期带来的并发症（如肾病、神经系统疾病和心血管疾病等）具有致死性，已经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病，被医学界称为"沉默的杀手"，严重威胁着人类健康。
糖尿病治疗关键是血糖水平的控制与稳定，糖化血红蛋白是血红蛋白糖基化的产物，其能反映患者过去8～l2周的平均血糖水平，且不受短期血糖浓度波动的影响，已被糖尿病控制和临床实验协会（DCCT）推荐为血糖控制测试“金标准”。
糖化血红蛋白的准确测定需要一个稳定质控品来监控仪器状态及试剂的好坏。而由于糖化血红蛋白存在易氧化及进一步糖基化的缺陷，市场上现有的质控品复溶后稳定性差，人血用于作质控品的原料来源有限且可能带来HIV或者HPV等污染。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上现有技术的缺点：提供一种原料来源充足且稳定性好的糖化血红蛋白质控品的制备方法。
本发明的技术解决方案如下：
一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，它包括以下制备步骤：
1）先在反应液中加入血红蛋白，使每分升反应液中血红蛋白含量为1-40克，在15-45℃下糖基化反应1-10天后，离心除去沉淀，留取上清夜，其中所述反应液成分为：
缓冲液：20-200mM，pH 7.0-7.5
氯化钠：9g/L
葡萄糖：50-200mM
还原剂：20-200mM
金属螯合剂：0.1-10mM
防腐剂质量百分含量：0.1-5%
其中上述溶剂为水；
2）将步骤1）中制备的上清液装入透析袋，置于4℃透析液中透析至完全除去葡萄糖，离心取上清液，其中所述透析液成分为：
缓冲液：20-200mM，pH 7.0-7.5
氯化钠：9g/L
还原剂：20-200mM
金属螯合剂：0.1-10mM
防腐剂质量百分含量：0.1-5%
其中上述溶剂为水；
3）将步骤2）中制备的上清液用血红蛋白稀释液稀释至所需质控品浓度，加入赋形剂，然后进行低温预冻、冷冻干燥，制成冻干粉，最后将冻干粉复溶、分装即可使用；其中所述血红蛋白稀释液中的血红蛋白浓度等于步骤1）中糖基化反应前溶液中血红蛋白浓度，且成分区别在于血红蛋白稀释液中不含葡萄糖。
所述血红蛋白为重组人血红蛋白。
所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、Good’s缓冲液中的一种。
所述还原剂为磷酸三（β-氯乙基)酯（TCEP）、二硫苏糖醇（DTT）、β-巯基乙醇、还原型谷胱甘肽、L-半胱氨酸、维生素C中的一种。
所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸（EDTA）、乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸（EGTA）中的一种。
所述防腐剂为苯甲酸钠、叠氮钠、山梨酸钾、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、proclin300中的一种。
所述赋形剂由冻干保护剂，填充剂，抗氧化剂，酸碱调整剂组成，其中各组分以它们加入溶液后的含量计为：冻干保护剂质量百分含量0.5-10%，填充剂质量百分含量0.5-15%，抗氧化剂摩尔浓度0.1-20mM，酸碱调整剂摩尔浓度0.05-20mM。所述冻干保护剂为甘油、二甲基亚砜（DMSO）、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）中的一种；所述填充剂为甘露醇、山梨醇、PEG4000、明胶中的一种；所述抗氧化剂为维生素D、维生素E、硫代硫酸钠中的一种；所述酸碱调整剂为乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、甘氨酸、谷氨酸钠中的一种。
所述低温预冻为在-50℃至-90℃的条件下，预冻3小时以上将溶液冷冻成型。
所述冷冻干燥的条件为第一次干燥阶段的升温速度采用3-10℃每小时，持续20-35小时，第二次干燥阶段的升温速度采用20-25℃每小时，持续5-10h。
本发明的有益效果是：按本发明制备的糖化血红蛋白质控品，测值稳定，能有效的监控临床检验中试剂及仪器状态；且相对于以往采用全血作为原料的方案，具有成本低、无污染、利于大批量生产的优点。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不仅局限于以下具体实施例。
实施例一
糖化血红蛋白质控品（5%）的制备：
1） 称取重组人血红蛋白2.6g，溶于20mL反应液中，37℃反应5天后，18000rpm×30min离心去除沉淀，其中反应液成分如下：
磷酸钾缓冲液：50mM，pH 7.4
葡萄糖：100mM
氯化钠：9g/L
TCEP：50 mM
EDTA：3mM
叠氮钠：1%
2）将步骤1）中制备的上清液装入透析袋，置于4℃透析液中透析，其中所述透析液成分为：
磷酸钾缓冲液：50mM，pH 7.4
氯化钠：9g/L
TCEP：50 mM
EDTA：3mM
叠氮钠：1%
透析时间24h，中间更换透析液4次，采用葡萄糖试剂测定葡萄糖含量，检测不到葡萄糖含量时，透析结束，离心取上清液并测定其中糖化血红蛋白在总血红蛋白中的质量百分含量，测得含量为20%，用130g/L的血红蛋白溶液稀释4倍得到5%质控品，并准确定值。
3）往步骤2)中稀释好的质控品中加入海藻糖：1%，甘露醇：3%、聚维酮1%、甘氨酸：0.5mM，于-60℃低温预冻5h，再放入冷冻干燥机中冷冻干燥，第一次冷冻干燥采用升温速度5℃/h，持续28h，第二次冷冻干燥采用25℃/h，持续5h后制得冻干粉。
4）将步骤3）中所制冻干粉用水复溶后分装，置于2℃环境中冷藏，每月测定一次糖化血红蛋白含量，每次重复3次，取平均值，数据如下：
| HbA1c%理论值 | 5% |
| 1月 | 5.05% |
| 2月 | 4.98% |
| 3月 | 4.95% |
| 4月 | 5.03% |
| 5月 | 4.89% |
| 6月 | 5.10% |
| 7月 | 4.95% |
| 8月 | 4.93% |
| 9月 | 5.08% |
| 10月 | 5.00% |
| 11月 | 5.02% |
| 12月 | 4.97% |
| 平均值 | 5.00% |
| CV% | 1.26% |
由上表可以看出，按照本发明的制备方法制得的糖化血红蛋白质控品具有良好的稳定性。
实施例二
糖化血红蛋白质控品（10%）的制备：
1） 称取重组人血红蛋白3g，溶于30mL反应液中，37℃反应3天后，18000rpm×30min离心去除沉淀，其中反应液成分如下：
磷酸钾缓冲液：50mM，pH 7.5
葡萄糖：50mM
氯化钠：9g/L
TCEP：50 mM
EDTA：3mM
叠氮钠：0.5%
2）将步骤1）中制备的上清液装入透析袋，置于4℃透析液中透析，其中所述透析液成分为：
磷酸钾缓冲液：50mM，pH 7.5
氯化钠：9g/L
TCEP：50 mM
EDTA：3mM
叠氮钠：0.5%
透析时间为24h，中间更换透析液4次，采用葡萄糖试剂测定葡萄糖含量，检测不到葡萄糖含量时，透析结束，离心取上清液并测定其中糖化血红蛋白在总血红蛋白中的质量百分含量，测得含量为17%，用100g/L的血红蛋白溶液稀释1.7倍得到10%质控品，并准确定值。
3）往步骤2)中稀释好的质控品中加入海藻糖：1%，甘露醇：3%、聚维酮1%、甘氨酸：0.5mM，于-60℃低温预冻5h，再放入冷冻干燥机中冷冻干燥，第一次冷冻干燥采用升温速度7℃/h，持续24h，第二次冷冻干燥采用20℃/h，持续10h后制得冻干粉。
4）将步骤3）中所制冻干粉用水复溶后分装，置于5℃环境中冷藏，每月测定一次糖化血红蛋白含量，每次重复3次，取平均值，数据如下：
| HbA1c%理论值 | 10% |
| 1月 | 10.02% |
| 2月 | 10.02% |
| 3月 | 9.95% |
| 4月 | 10.00% |
| 5月 | 9.98% |
| 6月 | 9.96% |
| 7月 | 10.08% |
| 8月 | 9.93% |
| 9月 | 9.95% |
| 10月 | 10.10% |
| 11月 | 9.89% |
| 12月 | 10.02% |
| 平均值 | 9.99% |
| CV% | 0.60% |
由上表可以看出，按照本发明的制备方法制得的糖化血红蛋白质控品具有良好的稳定性。
Claims (8)
1.一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：它包括以下制备步骤：
1)先在反应液中加入血红蛋白，使每分升反应液中血红蛋白含量为1-40克，在15-45℃下糖基化反应1-10天后，离心除去沉淀，留取上清液，其中所述反应液成分为：
缓冲液：20-200mM，pH7.0-7.5
氯化钠：9g/L
葡萄糖：50-200mM
还原剂：20-200mM
金属螯合剂：0.1-10mM
防腐剂质量百分含量：0.1-5％
其中溶剂为水；
2)将步骤1)中制备的上清液装入透析袋，置于4℃透析液中透析至完全除去葡萄糖，离心取上清液，其中所述透析液成分为：
缓冲液：20-200mM，pH7.0-7.5
氯化钠：9g/L
还原剂：20-200mM
金属螯合剂：0.1-10mM
防腐剂质量百分含量：0.1-5％
其中溶剂为水；
3)将步骤2)中制备的上清液用血红蛋白稀释液稀释至所需质控品浓度，加入赋形剂，然后进行低温预冻、冷冻干燥，制成冻干粉，最后将冻干粉复溶、分装即可使用。
2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：所述血红蛋白为重组人血红蛋白。
3.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、Good’s缓冲液中的一种。
4.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：所述还原剂为磷酸三(β-氯乙基)酯、二硫苏糖醇、β-巯基乙醇、还原型谷胱甘肽、L-半胱氨酸、维生素C中的一种。
5.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸、乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸中的一种。
6.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：所述防腐剂为苯甲酸钠、叠氮钠、山梨酸钾、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、proclin300中的一种。
7.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：所述赋形剂由冻干保护剂，填充剂，抗氧化剂，酸碱调整剂组成，其中各组分以它们加入溶液后的含量计为：冻干保护剂质量百分含量0.5-10％，填充剂质量百分含量0.5-15％，抗氧化剂摩尔浓度0.1-20mM，酸碱调整剂摩尔浓度0.05-20mM。
8.根据权利要求7所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于：所述冻干保护剂为甘油、二甲基亚砜、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮中的一种；所述填充剂为甘露醇、山梨醇、PEG4000、明胶中的一种；所述抗氧化剂为维生素D、维生素E、硫代硫酸钠中的一种；所述酸碱调整剂为乙二胺四乙酸二钠、甘氨酸、谷氨酸钠中的一种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210572924.XA CN103076214B (zh) | 2012-12-26 | 2012-12-26 | 糖化血红蛋白质控品的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210572924.XA CN103076214B (zh) | 2012-12-26 | 2012-12-26 | 糖化血红蛋白质控品的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103076214A CN103076214A (zh) | 2013-05-01 |
| CN103076214B true CN103076214B (zh) | 2015-03-11 |
Family
ID=48152819
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210572924.XA Active CN103076214B (zh) | 2012-12-26 | 2012-12-26 | 糖化血红蛋白质控品的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103076214B (zh) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104792981B (zh) * | 2014-01-20 | 2016-10-05 | 辽宁成大动物药业有限公司 | 一种酶标记抗体结合物稳定剂及其应用 |
| CN104155162A (zh) * | 2014-08-22 | 2014-11-19 | 威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品制备方法 |
| CN104808006B (zh) * | 2015-03-17 | 2016-09-07 | 卫生部北京医院 | 一种糖化血红蛋白标准物质及其制备方法 |
| CN105241728B (zh) * | 2015-09-28 | 2019-02-22 | 华南理工大学 | 一种人糖化血红蛋白的制备方法 |
| CN105716917B (zh) * | 2016-01-22 | 2020-01-31 | 杭州奥泰生物技术股份有限公司 | 一种用于保护并稳定粪便中血红蛋白的收集液及其应用 |
| CN105738636B (zh) * | 2016-01-26 | 2017-08-29 | 宁波天康生物科技有限公司 | 一种液体pa质控血清保存液及其制备方法 |
| CN105738634A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-07-06 | 深圳市雷诺华科技实业有限公司 | 糖化血红蛋白质控物的制备方法 |
| CN106771261B (zh) * | 2017-01-20 | 2019-05-24 | 深圳市雷诺华科技实业有限公司 | 糖化血红蛋白质控品的制备方法及其质控品 |
| CN107266563B (zh) * | 2017-08-01 | 2020-08-11 | 四川沃文特生物技术有限公司 | 一种血红蛋白质控品的制备方法 |
| CN107467013A (zh) * | 2017-09-20 | 2017-12-15 | 上海贞元诊断用品科技有限公司 | 一种可长期保存的质控品通用血浆基质制备方法 |
| CN109470533B (zh) * | 2018-10-24 | 2021-09-21 | 北京市临床检验中心 | 一种用于便携式血糖仪的人源全血基质质控品的制备方法 |
| CN109269858B (zh) * | 2018-11-02 | 2021-08-13 | 郑州标源生物科技有限公司 | 一种液态糖化血红蛋白质控品的制备方法 |
| CN109400701B (zh) * | 2018-11-02 | 2022-01-04 | 郑州标源生物科技有限公司 | 冻干态糖化血红蛋白质控品的制备方法 |
| CN109596845A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-09 | 贵州金玖生物技术有限公司 | 一种血栓弹力图仪质控品及其制备方法 |
| CN109734797B (zh) * | 2018-12-30 | 2022-03-29 | 山东博科生物产业有限公司 | 糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法 |
| CN110441463A (zh) * | 2019-07-04 | 2019-11-12 | 江苏奥迪康医学科技股份有限公司 | 一种离子交换层析法检测糖化血红蛋白HbA1c的试剂 |
| CN110567780A (zh) * | 2019-10-10 | 2019-12-13 | 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 | 一种糖化血红蛋白质控品及其制备方法 |
| CN110806450B (zh) * | 2019-11-14 | 2022-03-25 | 广州科方生物技术股份有限公司 | 一种糖化血红蛋白的液态校准品 |
| CN112646027B (zh) * | 2020-12-22 | 2023-05-09 | 广州沣润生物科技有限公司 | 一种血红蛋白质控品冻干品的制备方法 |
| CN113702650B (zh) * | 2021-07-13 | 2024-05-03 | 上海市临床检验中心 | 一种糖化血红蛋白全血质控品的制备方法 |
| CN113959807A (zh) * | 2021-10-26 | 2022-01-21 | 上海瀚诺威生物科技有限公司 | 一种糖化血红蛋白校准质控品的制备方法 |
| CN114112587A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-01 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法 |
| CN114279778A (zh) * | 2021-12-04 | 2022-04-05 | 南京岚煜生物科技有限公司 | 一种复合高值参考品的制备方法 |
| CN114487229A (zh) * | 2022-02-09 | 2022-05-13 | 杭州佰辰医疗器械有限公司 | 一种血浆和血清内源性小分子化合物质控品配制方法 |
| CN115656526B (zh) * | 2022-12-22 | 2023-07-04 | 北京水木济衡生物技术有限公司 | 糖化血红蛋白质控品的制备方法、复溶装置和复溶剂 |
| CN116625777B (zh) * | 2023-07-21 | 2023-10-13 | 山东新华医疗器械股份有限公司 | 低水平冻干态糖化血红蛋白质控品及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1531654A (zh) * | 2001-04-24 | 2004-09-22 | ������˹-ϣ���¹�˾ | 血红蛋白测定 |
| CN102539206A (zh) * | 2011-12-02 | 2012-07-04 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 缺血修饰白蛋白质控品的制备方法 |
| CN102566420A (zh) * | 2012-03-01 | 2012-07-11 | 北京航空航天大学 | 一种垂直起降飞行器的滑模控制方法 |
| CN102650591A (zh) * | 2012-04-06 | 2012-08-29 | 上海蓝怡科技有限公司 | 测定糖化血清蛋白的试剂盒 |
-
2012
- 2012-12-26 CN CN201210572924.XA patent/CN103076214B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1531654A (zh) * | 2001-04-24 | 2004-09-22 | ������˹-ϣ���¹�˾ | 血红蛋白测定 |
| CN102539206A (zh) * | 2011-12-02 | 2012-07-04 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 缺血修饰白蛋白质控品的制备方法 |
| CN102566420A (zh) * | 2012-03-01 | 2012-07-11 | 北京航空航天大学 | 一种垂直起降飞行器的滑模控制方法 |
| CN102650591A (zh) * | 2012-04-06 | 2012-08-29 | 上海蓝怡科技有限公司 | 测定糖化血清蛋白的试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 自制糖化血红蛋白质控物的实验探讨;王树辉 等;《国际检验医学杂志》;20120831;第33卷(第15期);1875-1876 * |
| 自制质控物在DS5 糖化血红蛋白分析仪中的应用评价;李坚 等;《国际检验医学杂志》;20110930;第32卷(第15期);1747 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103076214A (zh) | 2013-05-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103076214B (zh) | 糖化血红蛋白质控品的制备方法 | |
| CN103076213B (zh) | 糖化白蛋白质控品的制备方法 | |
| CN102961389B (zh) | 一种含有氨基葡萄糖的组合物及其制备方法和检测方法 | |
| CN109633010A (zh) | 一种测定全血中糖化血红蛋白的试剂盒及方法 | |
| CN103575921B (zh) | 同型半胱氨酸质控品及其制备方法 | |
| CN103251565A (zh) | 一种注射用伏立康唑冻干粉针剂及其制备方法 | |
| CN105738636B (zh) | 一种液体pa质控血清保存液及其制备方法 | |
| CN110812334A (zh) | 一种注射用伏立康唑药物组合物及其制备方法 | |
| CN105286885A (zh) | 一种用于医学临床检验的采血管及其制备方法 | |
| CN114617848A (zh) | 一种注射用环磷腺苷冻干制剂及其制备方法 | |
| CN102973524A (zh) | 一种埃索美拉唑钠冻干粉针剂及其制备方法 | |
| CN105362235B (zh) | 阿莫西林钠克拉维酸钾的复方药物组合物及其制备方法 | |
| CN116392438A (zh) | 一种普拉洛芬离子敏感型眼用原位凝胶及其制备方法 | |
| CN105287404B (zh) | 一种稳定性好的尼可地尔冻干制剂的制备方法 | |
| CN105079015B (zh) | 曲克芦丁冻干粉针剂及其制备方法 | |
| CN106866631A (zh) | 一种右旋兰索拉唑晶型及制备方法 | |
| CN102827147B (zh) | 一种奥美拉唑钠晶体化合物及含有该晶体化合物的药物组合物 | |
| CN110146603A (zh) | 一种测定奥卡西平缓释片释放度的分析方法 | |
| CN113521244A (zh) | 一种阿加曲班注射剂及其制备方法 | |
| CN106674225B (zh) | 一种核黄素磷酸钠化合物及其药物组合物 | |
| CN102327240B (zh) | 一种注射用头孢拉宗钠药物组合物及其制备方法 | |
| CN105213341A (zh) | 一种阿卡波糖片及其制备方法 | |
| CN104888207A (zh) | 一种注射用比伐芦定的制备工艺 | |
| CN103110656A (zh) | 一种注射用水溶性维生素冻干制剂及其制备方法 | |
| CN106074399B (zh) | 一种帕瑞昔布钠冻干制剂及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 315104 Zhejiang city of Ningbo province Yinzhou District Qiming Road No. 299 Patentee after: Meikang biological Polytron Technologies Inc Address before: 315104 Zhejiang city of Ningbo province Yinzhou District Qiming Road No. 299 Patentee before: Ningbo Meikang Biotechnology Co., Ltd. |