CN104155162A - 动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品的制备方法，包括以下步骤：对实验动物进行药物饲养，药物饲养方式为饲喂、注射或药浴一种或多种药物，控制养殖时间，经动物体代谢，获得含有原药和/或代谢物的样品材料，加维生素C溶液搅碎匀浆制成肉糜、真空冷冻干燥、粉碎过筛、充氮气包装后真空封装，根据动物基质脂肪含量在粉碎过筛后含或不含脱脂重新混匀过筛步骤。本发明得到的标准样品可以在常温下运输，保质期长，目标物和基体结合情形与真实检测样品一致，可用于相关检测分析的质量控制，样品均匀稳定，运输方便，使用可靠，产品具有显著的经济价值和市场竞争力。
Description
技术领域
本发明属于药物残留检测的动物源基体标准样品技术领域，具体是以常见的兽药对动物进行养殖，获得相当药物浓度的动物基体，真空冷冻干燥成冻干粉标准样品的方法。
背景技术
典型的兽药是指用于预防和治疗畜禽疾病的药物。但是，随着集约化养殖生产的开展，一些化学的、生物的药用成分被开发成具有某些功效的动物保健品或饲料添加剂，也属于兽药的范畴。兽药的主要用途有防病治病、促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质等。兽药残留是指兽药的原形化合物及其代谢物在动物的细胞、组织、器官或可食性产品（如奶、蛋）中的蓄积、贮存，除兽药外还包括非法使用违禁药物如克伦特罗、己烯雌酚、苏丹红、三聚氰胺等在动物体内的残留，以及通过食物链进入动物体内的农药（如杀虫剂、除草剂等）和环境污染物(如重金属、霉菌毒素等)。常见的兽药残留种类有抗生素类药物 、磺胺类药物、硝基呋喃类药物、氯霉素类药物、三苯甲烷类染料、砷制剂如硝苯砷酸和洛克沙砷、抗寄生虫类药物如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等、激素类药物如孕酮、睾酮、雌二醇等。
在国际上，一种兽药残留量的分析方法需要经3种类型的样品测试：受控组织或液体、用药物强化至或接近最大容许水平(MRL)的样品和本身具有药物残留的组织样品，从而保证分析方法能具有一定的样品基质适用范围和重复性。目前国内残留分析实验室由于常常无法获得实际污染样品，往往以添加兽药标准溶液至分析样品中进行质控，这样不能真实地重现药物经过自然代谢后在动物体内的提取效率，无法反映方法的准确性，得到的检测结果也就不足以令人信服。欧盟对兽药残留分析方法与结果表达的法规2002/657/EC中明确指出了需要采用标准样品进行过程控制，国外残留分析实验室已普遍使用标准物质样品进行实验室质量控制和结果评判，主要由欧共体标准物质和测量研究所(IRMM)、英国弗帕斯检测技术研究所(FAPAS)等提供，相关样品也已产业化，但由于国外标准样品或质控样品价格非常昂贵，且存在运输问题，国内的残留分析实验室无法定期使用其进行质控。本发明可以成功研制我国的动物源基体残留标准样品，应用到残留分析的质控过程中，将会普遍降低检测成本，是提高我国残留分析实验室的检测水平、实现检测的等效性、与国际同领域接轨的有效手段之一。
发明内容
本发明的目的是提供一种动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品的制备方法。对实验动物进行药物饲养，药物饲养方式为饲喂、注射或药浴一种或多种药物，控制养殖时间，经动物体代谢，获得含有原药及代谢物（如果有）的样品材料，加维生素C溶液匀浆制成肉糜，真空冷冻干燥，粉碎过筛，根据基质中脂肪含量含或不含脱脂重新混匀步骤，在厌氧工作站中充氮气装瓶，真空封装，制备成一种均匀性好、稳定性好、易保存且目标物和基体结合情形与真实检测样品一致的标准样品。
所述动物基体标准样品中的兽药浓度约0-100ug/kg，同一标准样品有多残留时将药物浓度保持在同一数量级。
所述动物基体包括猪、牛、鸡、鱼、虾。
所述药物饲养包括饲喂（将药物拌在料中喂食，如猪、牛、鸡）、药浴（将药放入水中，如鱼、虾）、注射（将药物进行肌肉注射，如猪、牛、鸡）。
所选包装方式为充氮包装后真空封装。将厌氧工作站内灭菌、氮气浓度调整到99%备用。先将包装瓶放入无菌室用紫外灯灭菌，在无菌室内将干粉准确称量到瓶中，扣上盖子不拧，将所有装好干粉样品的包装瓶分批移入厌氧工作站中，重新将厌氧工作站氮气浓度调整至99%，在厌氧工作站内拧紧包装瓶的盖子，完成充氮包装取出。再用铝箔袋将包装瓶进行真空封装。
所述兽药包括：a.磺胺类药物：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺吡啶、磺胺噻唑等；b.喹诺酮类药物：诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、培氟沙星、二氟沙星、达诺沙星、马波沙星、氟甲喹等；c.硝基呋喃类药物：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因等；d.氯霉素类药物：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等；e.三苯甲烷类染料：结晶紫、孔雀石绿等；f.砷制剂：阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷等；g.抗寄生虫类药物：甲硝唑、苯并咪唑、左旋咪唑、伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、克球酚、吡喹酮、地克珠利、妥曲珠利、氯羟吡啶等；h. β兴奋剂药物：克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、喷布特罗、特布它林、齐帕特罗等；i激素类药物：孕酮、睾酮、雌二醇等；j.四环素族药物：土霉素、四环素、金霉素、强力霉素。
动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）选中目标兽药或违禁添加物对动物进行养殖添加，经代谢后控制时间使动物体内含有药物浓度保持在一定程度；
（2）将动物宰杀，取肌肉部分去皮沥血，加维生素C溶液（或其他稳定剂）匀浆制成肉糜，真空冷冻干燥；
（3）粉碎过筛，根据基质中脂肪含量含或不含脱脂重新混匀步骤、重新混匀过筛；
（4）在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，制备得到冻干粉标准样品。
本发明的显著优点是：模拟养殖条件下对动物添加药物后选择适当时机，将动物宰杀，取肌肉部分加维生素C溶液匀浆制成肉糜，冷冻干燥，粉碎过筛，充氮气封装，均匀性检验、稳定性研究和协同定值检测，获得预期含量的目标物结合状态与实际检测样品一致的含有目标药物及其代谢物的动物基体阳性材料。采用搅碎和匀化介质相结合的工艺可以保证材料的均匀性，基质中加入维生素C、真空冷冻干燥、充氮气包装后真空封装，可以保证样品中药物不降解、稳定。本发明的产品可以在常温下运输，保质期长，目标物和基体结合情形与真实检测样品一致，可用于相关检测分析的质量控制，样品均匀稳定，运输方便，使用可靠，产品具有显著的经济价值和市场竞争力。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1，一种鸡肉中妥曲珠利及其代谢物妥曲珠利砜残留冻干粉标准样品的制备方法，本实施例以控制目标含量水平20-100ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：市购肉鸡，要求个体大小均一、均重2.2-2.7
kg，先确认肉鸡未被饲喂过妥曲珠利，随机取样，检测确认为阴性样品后进行喂养。正常饲养5天后，剔除受伤不健康的鸡。
（2）药物饲养：将妥曲珠利药粉准确称量0.2mg，装入胶囊中，每只鸡每天喂1颗胶囊，连喂2天，第2天停药后10小时宰杀，取胸肌肉检测，此时妥曲珠利及其代谢物妥曲珠利砜在鸡体内浓度相差不大，均为10-20 ug/kg之间。妥曲珠利砜在鸡体内代谢很快，时间掌握不准，两种药物的浓度上就会有很大差异，达不到预期理想的浓度。从标准样品在实验室应用的角度来看，两种药物的水平最好是控制在同一数量级，才更具实用性，因此药物的添加量和时间的控制至关重要。
（3）搅碎匀浆：将鸡肉混合搅匀，每5 kg搅碎鸡肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。维生素C溶液具有抗氧化作用，有利于样品的长期保存。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的鸡肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉。
（7）包装：将厌氧工作站内灭菌、氮气浓度调整到99%备用。先将包装瓶放入无菌室用紫外灯灭菌，在无菌室内将干粉准确称量到瓶中，每个瓶内鸡肉粉重量5±0.5g，扣上盖子不拧，将所有装好干粉样品的包装瓶分批移入厌氧工作站中，重新将厌氧工作站氮气浓度调整至99%，在厌氧工作站内拧紧包装瓶的盖子，完成充氮包装取出。再用铝箔袋将包装瓶进行真空封装。
所制备的标准样品经均匀性检验、稳定性检验、协同定值实验及不确定度合成后，获得最终成品。
本产品最终定值妥曲珠利：64.52±0.89ug/kg，其代谢物妥曲珠利砜：84.65±0.99ug/kg，最终包装数为779瓶，每瓶约5±0.5g，室温保存。
以下是本发明的具体实施实验和效果数据，以进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。
1、均匀性检验
采用单因素方差分析进行均匀性检验，随机抽取15 个样品，每个样品平行测定3次，所有的样品以随机次序在重复性条件下测试，按照上述检测方法对样品进行均匀性检测。标准样品的特性应当均匀，即在规定的细分范围内保证其特性不变。在均匀性检验过程中，一般需同时考察组间均匀性及组内均匀性，用方差分析法通过对两者的比较来判断各组测量值之间有无系统性差异，如果两者的比小于统计检验的临界值，则认为样品是均匀的。
称取1g样品，加4.0ml水还原60min以上，按SN/T 2318-2009《动物源食品中地克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利亚砜和妥曲珠利砜残留量的检测 高效液相色谱-质谱/质谱法》方法进行检测，结果如下：
（1）妥曲珠利均匀性检验数据（ug/kg）
（2）妥曲珠利均匀性检验方差分析结果
经检验，F值=2.025<
F0.05（14，30）=2.037,表明样品间无显著性差异，样品是均匀、良好的。
（3）妥曲珠利砜均匀性检验数据（ug/kg）
（4）妥曲珠利砜均匀性检验方差分析结果
经检验，F值=1.331<
F0.05（14，30）=2.037,表明样品间无显著性差异，样品是均匀、良好的。
2、稳定性研究
稳定性是标准样品研制的关键，本发明采用加速实验来考察标准样品的稳定性。标准样品稳定性研究的基本模型是
，用线性拟合模型评估标准样品的稳定性，以x代表时间，y代表标准样品中目标药物的含量，斜率b1 用下式计算：
截距可用下式计算：
直线上每点的标准偏差公式：
与斜率相关的不确定度S(b) ：
当 ，表明标准样品是稳定的。
取本标准样品正式包装，在温度为50±2℃、相对湿度为75±5%的条件下放置6个月进行加速实验，分别于每月末取3个样品，每个样品平行测定2次，用SN/T 2318-2009方法进行检测，观测其变化。检测数据如下：
(5)妥曲珠利稳定性加速实验数据（ug/kg）
经计算b1 =-0.052,S(b) =0.0242，，结论为稳定。
(6)妥曲珠利砜稳定性加速实验数据（ug/kg）
经计算，斜率b1 =0.05157，斜率的不确定度S(b) =0.0486，结论为稳定。
3、定值
以8个试验室协作检测作为定值方式，按SN/T
2318-2009《动物源食品中地克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利亚砜和妥曲珠利砜残留量的检测 高效液相色谱-质谱 质谱法》方法进行定值检测，每个实验室发3个样品，每个样品平行检测2次，以总平均值为定值结果。
（7）各实验室妥曲珠利定值数据如下:
汇总各实验室数据，将所有的数据按大小顺序排列，进行夏皮罗-威克尔检验，公式为
经计算W=0.975,当n=48时，p＝0.947，W>P，表明在显著性水平a＝0.05上不拒绝零假设。将每个实验室的数据先用Grubb's
法进行检验，无异常值；再将每个实验室的平均值组成一组数据，用Grubb's 法进行双侧情形检验，确定各实验室数据无异常值；将所有数据进行下一步统计，用Cochran 检验以确定8个实验室中没有随机误差太大的实验室，公式如下：
式中： 为各实验室测定结果的标准偏差；为中的最大值。
经检验 ，C=0.205<C(0.05，8，5)，各实验室间的测量属于等精度测量，且测量的数据结果符合正态分布，计算标准样品中妥曲珠利总平均值： =64.52ug/kg。
（8）各实验室妥曲珠利砜定值数据如下:
经计算W=0.958,当n=48时，p＝0.947，W>P，表明在显著性水平a＝0.05上不拒绝零假设。将每个实验室的数据先用Grubb's
法进行检验，无异常值；再将每个实验室的平均值组成一组数据，用Grubb's 法进行双侧情形检验，确定各实验室数据无异常值；将所有数据进行下一步统计，用Cochran 检验以确定8个实验室中没有随机误差太大的实验室，经检验 ，C=0.344<C(0.05，8，5)，各实验室间的测量属于等精度测量，且测量的数据结果符合正态分布，计算总平均值为妥曲珠利砜标准样品的定值结果：==84.65ug/kg。
本标准样品的不确定度来源主要有以下几个方面：标准样品的不均匀性引入的不确定度，标准样品的不稳定性引入的不确定度以及标准样品定值过程中引入的不确定度，公式为：
设置信水平为P=95%，包含因子k=2，妥曲珠利的合成不确定度为0.89
ug/kg：
由均匀性引入的不确定度
由稳定性引入的不确定度为
由定值引入的不确定度
设置信水平为P=95%，包含因子k=2，妥曲珠利砜的合成不确定度为0.99
ug/kg：
由均匀性引入的不确定度
由稳定性引入的不确定度为
由定值引入的不确定度
标准样品中妥曲珠利最终定值结果为64.52±0.89ug/kg，妥曲珠利砜最终定值结果为84.65±0.99ug/kg。
实施例2
一种虾肉中氟苯尼考残留冻干粉标准样品的制备方法，本实施例以控制目标含量水平1-100ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：市购活南美白虾，要求个体大小均一、均重约20-30
g，先确认活虾未被饲喂过氟苯尼考，随机取样，检测确认为阴性样品。正常养殖2天后，剔除受伤不健康的虾。
（2）药物饲养：将氟苯尼考药粉准确称量，按池水0.5mg/L的浓度加药，全池泼洒式药浴给药，每天换一次水，第2天用药后8小时将虾全部捞出，用清水洗净，去皮取虾肉。
（3）搅碎匀浆：将虾肉混合搅匀，每5 kg搅碎虾肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。维生素C溶液具有抗氧化作用，有利于样品的长期保存。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的虾粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉。
（7）包装：每个瓶内虾粉重量5±0.5g，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有氟苯尼考的虾肉基质冻干粉标准样品。
所制备的标准样品经均匀性检验、稳定性检验、协同定值实验及不确定度合成后，获得最终成品。
本产品最终定值氟苯尼考：10.17±0.92ug/kg，最终包装数为879瓶，每瓶约5±0.5g，室温保存。
以下是本发明的具体实施实验和效果数据，以进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。
1、均匀性检测结果
标准样品的特性应当均匀，即在规定的细分范围内保证其特性不变。在均匀性检验过程中，一般需同时考察组间均匀性及组内均匀性，用F检验法对两者的标准偏差进行一致性检验。在本实验中，随机抽取15份标准样品，每份重复测定3次，对所得数据进行F检验，结果如表1和2所示。
表1 氟本尼考标准样品均匀性检验数据（单位:ug/kg）
表2 氟本尼考样品均匀性检验的单因素方差分析结果
根据方差分析原理，该统计量是自由度为（v 1 v 2）的F分布变量。由公式v 1=m-1，v 2=N-m，并已知m=15，N=45；则 v 1 = 14, v 2
= 30, F = 1.672 < F （ 0.05 ， 14 ， 30 ）=2.037,故该样品内及样品间无显著性差异，样品均匀性良好，能满足实验要求。
2、稳定性检测结果
稳定性是标准样品研制的关键，本实验同时考察了虾肉冻干粉氟苯尼考标准样品的短期稳定性和长期稳定性。
（1）短期稳定性：短期稳定性实验进行30天，按先密后疏选0、2，5、9、14、30天6个时间点，随机取18瓶放于40℃±2℃保存，模拟运输中遇到的极端温度，每次测量随机选择3瓶，平行测定2次，进行样品的短期稳定性分析。
表3是6个时间点测得的氟苯尼考含量的平均值，用线性拟合模型评估短期稳定性数据，稳定性研究的基本模型是，以x代表时间，y代表标准样品中氟苯尼考的含量，斜率用下式计算：
，截距用下式计算：，与斜率相关的不确定度S(b) ：
，分析结果见表4，，表明氟苯尼考在40℃±2℃极端运输条件下30d内无明显的降解趋势，未观测到不稳定性。
表3 氟本尼考标准样品短期稳定性检验数据
表4 氟本尼考样品短期稳定性数据的线性模型
（2）长期稳定性：将样品的存放温度设定为20℃±2℃，长期稳定性实验时间为24个月，选6个时间点0、3、6、12、18、24月，每次测量随机选择3瓶，平行测定2次，进行样品的长期稳定性分析。
表5是6个时间点测得的氟苯尼考含量的平均值，用线性拟合模型评估长期稳定性数据，分析结果见表6，表明氟苯尼考在20℃±2℃条件下24个月内无明显的降解趋势，未观测到不稳定性。
表5 氟本尼考标准样品长期稳定性检验数据
表6 氟本尼考样品长期稳定性数据的线性模型
3.定值
参照《标准样品工作导则（3） 标准样品定值的一般原则和统计方法》，标准样品的定值要求由多个实验室采用多种方法进行定值，本研究选择8家氟苯尼考检测能力得到中国国家合格评定委员会认可的实验室协作定值，每个实验室发3个样品，每个样品独立测定2次，定值方法为实验室认可的检测方法。8个认可实验室均采用液相色谱串联质谱法检测参加协同定值数据如下：
表7 各定值实验室的氟苯尼考测定数据及处理结果
将每个实验室的数据先用Grubb's 法进行检验，无异常值；汇总各实验室数据，将所有的数据按大小顺序排列，进行夏皮罗-威克尔检验，公式为
经计算W=0.959,当n=48时，p＝0.947，W>P，表明在显著性水平a＝0.05上不拒绝零假设。再将每个实验室的平均值组成一组数据，用Grubb's
法进行双侧情形检验，确定各实验室数据无异常值；将所有数据进行下一步统计，用Cochran
检验以确定8个实验室中没有随机误差太大的实验室，公式如下：
式中：为各实验室测定结果的标准偏差；为中的最大值。
经检验 ，C=0.2788<C(0.05，8，5)，各实验室间的测量属于等精度测量，且测量的数据结果符合正态分布，计算总平均值为氟苯尼考标准样品的定值结果：x ̿=10.17ug/kg。
4.不确定度评估
本标准样品的不确定度来源主要有以下几个方面：标准样品的不均匀性引入的不确定度，标准样品的不稳定性引入的不确定度以及标准样品定值过程中引入的不确定度，考虑到氟苯尼考标准样品在室温下有较好的稳定性，该保存条件在运输中比较容易实现，因此在合成不确定度中可以不考虑短期稳定性不确定度分量。公式为：
不确定度结果见表8。
由标准样品不均匀性引入的不确定度，如表2，当MSamong>MSwithin，不均匀性不确定度, ，
。
由标准样品不稳定性引入的不确定度，设长期稳定性保质期t为36个月，则由长期不稳定性带来的不确定度贡献为：=0.00623*36=0.2244
ug/kg。
由定值引入的标准样品不确
经计算，uchar =0.1345
ug/kg。
5.氟苯尼考标准样品定值结果及不确定度
表8 氟苯尼考标准样品的不确定度
设置信水平为P=99%，包含因子k=3，则标准物质的定值结果为（10.17±0.92）ug/kg。
实施例
3
一种牛肉中三种β-兴奋剂残留冻干粉标准样品的制备方法，采用克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺标准品配制溶液对牛进行肌肉注射并控制宰杀时间，使牛体内含有上述三种药物，达到基本均匀，宰杀取牛肌肉匀浆制成肉糜，冷冻干燥，脱脂，过筛，装瓶，真空封装，制备得到牛肌肉粉中同时含有三种β-兴奋剂残留的标准样品。本实施例以控制目标含量水平1-10ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：选取健康牛，体重约60-100kg，注射前7天需对牛饲喂进行控制，禁止使用其他药物，使牛体内可能残留的药物完全代谢出体外。
（2）药物饲养：克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺注射液浓度均为5mg/5ml，可配成混合溶液注射，也可分别配制单独注射。连续2天对牛进行注射，选取不同的部位6点注射，每天注射一次，第2天注射后6小时宰杀。
（3）搅碎匀浆：宰杀后取牛肌肉，须室温存放2小时，沥净血水。将牛肉混合搅匀，每5 kg搅碎牛肉中加1kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。维生素C溶液具有抗氧化作用，有利于样品的长期保存。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的牛肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；用石油醚对干粉进行脱脂，重新混匀过筛。
（7）包装：每个瓶内牛肉粉重量8±0.5g，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有三种β-兴奋剂的牛肉基质冻干粉标准样品。
所制备的标准样品用《SN/T 1924-2011 进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定 液相色谱-质谱 质谱法》进行检测，均匀性检验、稳定性检验与实施例1采用的方式相同,8个实验室进行协同定值实验，合成不确定度后，获得最终成品。
本产品最终定值克伦特罗：2.5±0.8 ug/kg，沙丁胺醇：2.7±0.7ug/kg，莱克多巴胺：3.9±0.6 ug/kg最终包装数为980瓶，每瓶约8±0.5g，室温保存。
实施例
4
一种鱼肉中磺胺甲噁唑残留冻干粉标准样品的制备方法，采用磺胺甲噁唑配制溶液对鱼进行药浴并控制捕捞时间，使鱼体内含有上述药物，达到基本均匀，杀鱼取肌肉匀浆制成肉糜，冷冻干燥，过筛，充氮装瓶，真空封装，制备得到鱼粉中含有磺胺甲噁唑残留的标准样品。本实施例以控制目标含量水平20-100ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：从市场上购买活鲤鱼，要求个体大小均一、每条重约1.2-1.5
kg。选取健康鲤鱼，从中随机取样，检测确认为阴性后进行饲养。
（2）药物饲养：养殖3天使其适应养殖环境，剔除不健康的鱼，根据预先设定的药物浓度，向鱼池中添加磺胺甲噁唑，浓度为1.5ppm，实时监控检测水体和鱼体中磺胺甲噁唑浓度，每天换1次水。
（3）搅碎匀浆：磺胺甲噁唑在鱼体的浓度不断富集增高，待鱼体内磺胺甲噁唑浓度相对稳定后，第3天换水后每隔6小时随意捕捞测定鱼糜中的磺胺甲噁唑含量，当达到10ppb时全部将鱼捞出放入-20℃冷冻2小时取出，室温下解冻，取鱼两侧肌肉部分，避免混入内脏及血液，将鱼肉混合均匀，每5kg搅碎鱼肉中加入500mg/kg维生素C溶液1kg，混匀制成肉糜。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥。冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的鱼粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉。
（7）包装：每个瓶内鱼粉重量8±0.5g，在厌氧培养箱中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有磺胺甲噁唑残留的鱼肉基质冻干粉标准样品。
所制备的标准样品用《GB/T 21316-2007 动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱/质谱法》进行检测，均匀性检验、稳定性检验与实施例1采用的方式相同,8个实验室进行协同定值实验，合成不确定度后，获得最终成品。
本产品最终定值磺胺甲噁唑：33.79±2.10ug/kg，最终包装数为875瓶，每瓶约8±0.5g，室温保存。
实施例
5
一种猪肉中诺氟沙星和氧氟沙星残留冻干粉标准样品的制备方法，采用诺氟沙星和氧氟沙星对猪进行拌料喂食并控制宰杀时间，使猪体内含有上述二种药物，宰杀取猪肌肉匀浆制成肉糜，冷冻干燥，脱脂，过筛，充氮装瓶，真空封装，制备得到猪肉粉中同时含有两种喹诺酮药物残留的标准样品。本实施例以控制目标含量水平10-100ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：选取健康猪，体重约60-70kg左右，用药前7天需对猪饲喂进行控制，禁止使用其他药物，使猪体内可能残留的药物完全代谢出体外。
（2）药物饲养：将两种药物均按5mg/kg混在料中进行饲喂，连续2天，每天2次，第2天喂食后12小时宰杀。
（3）搅碎匀浆：宰杀后取猪肌肉，须室温存放2小时，洗净血水。将猪肉混合搅匀，每5 kg搅碎猪肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的猪肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；用石油醚对干粉进行脱脂，重新混匀过筛。
（7）包装：每个瓶内猪肉粉重量8±0.5g，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有两种喹诺酮药物残留的冻干粉标准样品。
所制备的标准样品用《GB/T 21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》进行检测，均匀性检验、稳定性检验与实施例1采用的方式相同,8个实验室进行协同定值实验，合成不确定度后，获得最终成品。
本产品最终定值诺氟沙星：18.7±2.8 ug/kg，氧氟沙星：27.3±2.1ug/kg，最终包装数为767瓶，每瓶约8±0.5g，室温保存。
实施例
6
一种虾肉中3-氨基-2-恶唑酮（AOZ）、5-吗啉甲基-3-氨基-2-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）残留冻干粉标准样品的制备方法。采用AOZ和AMOZ对虾进行药浴，控制时间捕捞，使虾体内含有上述二种药物，去皮取肉，匀浆，冷冻干燥，过筛，充氮装瓶，真空封装，制备得到虾肉粉中同时含有两种呋喃药物残留的标准样品。本实施例以控制目标含量水平1-10ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：市购活南美白虾，要求个体大小均一、均重约20-30
g，先确认活虾未被饲喂过呋喃药物，随机取样，检测确认为阴性样品。正常饲养2天后，剔除受伤不健康的虾。
（2）药物饲养：将AOZ和AMOZ药粉准确称量，均按池水0.2mg/L的浓度加药，全池泼洒式药浴给药，每天换一次水，第2天用药后4小时将虾全部捞出，用清水洗净，去皮取虾肉。
（3）搅碎匀浆：将虾肉混合搅匀，每5 kg搅碎虾肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的虾粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉。
（7）包装：每个瓶内虾粉重量4±0.5g，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有AOZ和AMOZ的虾肉基质冻干粉标准样品。
所制备的标准样品经均匀性检验、稳定性检验、协同定值实验及不确定度合成后，获得最终成品。
本产品最终定值AOZ：3.7±0.7 ug/kg，AMOZ：6.1±0.9ug/kg，最终包装数为672瓶，每瓶约4±0.5g，室温保存。
实施例
7
一种鱼肉中隐性结晶紫残留冻干粉标准样品的制备方法，采用结晶紫配制溶液对鱼进行药浴并控制捕捞时间，使鱼体内含有上述药物，杀鱼取肌肉匀浆制成肉糜，冷冻干燥，过筛，充氮装瓶，真空封装，制备得到鱼粉中含有隐性结晶紫残留的标准样品。本实施例以控制目标含量水平1-10ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：从市场上购买活鲤鱼，要求个体大小均一、每条重约1.2-1.5
kg。选取健康鲤鱼，从中随机取样，检测确认为阴性后进行饲养。
（2）药物饲养：养殖3天使其适应养殖环境，剔除不健康的鱼，根据预先设定的药物浓度，向鱼池中添加结晶紫溶液，浓度为1ppm，实时监控检测鱼体中显性结晶紫和隐性结晶紫浓度，每天换1次水。
（3）搅碎匀浆：显性结晶紫和隐性结晶紫在鱼体的浓度不断富集增高，待鱼体内结晶紫浓度相对稳定后，第3天换水后测定鱼糜中的隐性结晶紫含量，约为2ppb时将鱼捞出放入-20℃冷冻2小时取出，室温下解冻，取鱼两侧肌肉部分，避免混入内脏及血液，每5 kg肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥。冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的鱼粉用中药粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的鱼粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉。
（7）包装：每个瓶内鱼粉重量8±0.5g，在厌氧培养箱中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有隐性结晶紫残留的鱼肉基质冻干粉标准样品。
所制备的标准样品用《GB/T 19857—2005水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》进行检测，均匀性检验、稳定性检验与实施例1采用的方式相同,8个实验室进行协同定值实验，合成不确定度后，获得最终成品。
本产品最终定值隐性结晶紫含量：5.2±1.1ug/kg，最终包装数为765瓶，每瓶约8±0.5g，室温保存。
实施例
8
一种鱼肉中甲硝唑残留冻干粉标准样品的制备方法，采用甲硝唑配制溶液对鱼进行药浴并控制捕捞时间，使鱼体内含有上述药物，杀鱼取肌肉匀浆制成肉糜，冷冻干燥，过筛，充氮装瓶，真空封装，制备得到鱼粉中含有甲硝唑残留的标准样品。本实施例以控制目标含量水平1-10ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：从市场上购买活鲤鱼，要求个体大小均一、每条重约1.2-1.5
kg。选取健康鲤鱼，从中随机取样，检测确认为阴性后进行饲养。
（2）药物饲养：养殖3天使其适应养殖环境，剔除不健康的鱼，根据预先设定的药物浓度，向鱼池中添加甲硝唑溶液，浓度为1ppm，实时监控检测鱼体中甲硝唑浓度，每天换2次水。
（3）搅碎匀浆：甲硝唑在鱼体的浓度不断富集增高，待鱼体内甲硝唑浓度相对稳定后，第3天换水后测定鱼糜中的甲硝唑含量，约为1ppb左右将鱼捞出放入-20℃冷冻2小时取出，室温下解冻，取鱼两侧肌肉部分，每5 kg搅碎肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥。冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的鱼粉用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的鱼粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉。
（7）包装：每个瓶内鱼粉重量8±0.5g，在厌氧培养箱中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有甲硝唑残留的鱼肉基质冻干粉标准样品。
所制备的标准样品用《GB/T 21318-2007 动物源性食品中硝基咪唑残留量检验方法》进行检测，均匀性检验、稳定性检验与实施例1采用的方式相同,8个实验室进行协同定值实验，合成不确定度后，获得最终成品。
本产品最终定值甲硝唑含量：3.2±0.7ug/kg，最终包装数为965瓶，每瓶约10±0.5g，室温保存。
实施例
9
一种鸡肉中硝苯砷酸、洛克沙砷、金霉素和强力霉素残留冻干粉标准样品的制备方法，本实施例以控制目标含量水平10-100ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：市购肉鸡，要求个体大小均一、均重约2.2-2.5
kg，先确认肉鸡未被饲喂过上述药物，随机取样，检测确认为阴性样品后进行喂养。正常饲养5天后，剔除受伤不健康的鸡。
（2）药物饲养：将硝苯砷酸、洛克沙砷、金霉素和强力霉素药粉分别准确称量0.2mg，装入胶囊中，每只鸡每天喂1颗胶囊，连喂2天，第2天停药后10小时宰杀。
（3）搅碎匀浆：将鸡肉混合搅匀，每5 kg搅碎鸡肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的鸡肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：在厌氧工作站内充氮包装取出，再用铝箔袋将包装瓶进行真空封装。
所制备的标准样品用《GB/T 21317-2007动物源性食品中四环素兽药残留量检测方法液相色谱－质谱质谱法与高效液相色谱法》、《SN/T
2316-2009 动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量检测方法 液相色谱-电感耦合等离子体 质谱法》进行检测，均匀性检验、稳定性检验与实施例1采用的方式相同,8个实验室进行协同定值实验，合成不确定度后，获得最终成品。
本产品最终定值硝苯砷酸：50.7±3.7ug/kg，洛克沙砷40.7±2.9ug/kg，金霉素33.5±1.8ug/kg，强力霉素34.65±1.8ug/kg，最终包装数为520瓶，每瓶约10±0.5g，室温保存。
实施例
10
一种牛肉中阿维菌素残留冻干粉标准样品的制备方法，采用市售阿维菌素配料对牛进行喂食，宰杀取牛肌肉匀浆制成肉糜，冷冻干燥，过筛，充氮装瓶，真空封装，制备得到牛肌肉粉中含有阿维菌素残留的标准样品。本实施例以控制目标含量水平1-20ug/kg为例，其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：选取健康牛，体重约60-100kg，用药前7天需对牛饲喂进行控制，禁止使用其他药物，使牛体内可能残留的药物完全代谢出体外。
（2）药物饲养：将阿维菌素拌入料中，按体重加药，每公斤体重0.2mg的药量进行拌食，连续喂食4天，第4天喂食后6小时宰杀。
（3）搅碎匀浆：宰杀后取牛肌肉，须室温存放2小时，洗净血水。将牛肉混合搅匀，每5 kg搅碎牛肉中加1 kg维生素C溶液（浓度为500mg/kg）混匀制成肉糜。
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥。
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀。
（6）过筛：匀质后的牛肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉。
（7）包装：每个瓶内牛肉粉重量8±0.5g，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装，得到含有阿维菌素的牛肉基质冻干粉标准样品。
所制备的标准样品用《GB/T 21320-2007 动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》进行检测，均匀性检验、稳定性检验与实施例1采用的方式相同,8个实验室进行协同定值实验，合成不确定度后，获得最终成品。
本产品最终定值阿维菌素含量：7.5±1.2 ug/kg，每瓶约8±0.5g，室温保存。
Claims (15)
1.动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品制备方法，其特征在于包括以下步骤：对实验动物进行药物饲养，药物饲养方式为饲喂、注射或药浴一种或多种药物，控制养殖时间，经动物体代谢，获得含有原药和/或代谢物的样品材料，加维生素C溶液搅碎匀浆制成肉糜、真空冷冻干燥、粉碎过筛、充氮气包装后真空封装，根据动物基质脂肪含量在粉碎过筛后含或不含脱脂重新混匀过筛步骤。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述标准样品中的兽药浓度0-100ug/kg，同一标准样品有多残留时将药物浓度保持在同一数量级。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述实验动物包括猪、牛、鸡、鱼、虾。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述包装为充氮包装、真空封装，将厌氧工作站内灭菌、氮气浓度调整到99%备用，先将包装瓶放入无菌室用紫外灯灭菌，在无菌室内将干粉准确称量到瓶中，扣上盖子不拧，将所有装好干粉样品的包装瓶分批移入厌氧工作站中，去掉盖子，重新将厌氧工作站氮气浓度调整至99%，在厌氧工作站内拧紧包装瓶的盖子，完成充氮包装取出，再用铝箔袋将包装瓶进行真空封装。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述冷冻干燥是将肉浆放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥，所述脱脂是将干粉浸于石油醚或乙醚中，静置30分钟，滤去醚层，40-50℃烘干。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于：所述药物为磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺吡啶、磺胺噻唑；诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、培氟沙星、二氟沙星、达诺沙星、马波沙星、氟甲喹；呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因；氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考；结晶紫、孔雀石绿；阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷；甲硝唑、苯并咪唑、左旋咪唑、伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、克球酚、吡喹酮、地克珠利、妥曲珠利、氯羟吡啶；克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、喷布特罗、特布它林、齐帕特罗；孕酮、睾酮、雌二醇；土霉素、四环素、金霉素、强力霉素中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于虾肉中氟苯尼考残留冻干粉标准样品的制备，目标含量水平1-100ug/kg具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：市购活南美白虾，要求个体大小均一、均重20-30 g，先确认活虾未被饲喂过氟苯尼考，随机取样，检测确认为阴性样品，正常养殖2天后，剔除受伤不健康的虾；
（2）药物饲养：将氟苯尼考药粉准确称量，按池水0.5mg/L的浓度加药，全池泼洒式药浴给药，每天换一次水，第2天用药后8小时将虾全部捞出，用清水洗净，去皮取虾肉；
（3）搅碎匀浆：将虾肉混合搅匀，每5 kg搅碎虾肉中加1 kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的虾粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：虾粉分装于聚乙烯瓶内，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于牛肉中三种β-兴奋剂残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平1-10ug/kg其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：选取健康牛，体重60-100kg，注射前7天需对牛饲喂进行控制，禁止使用其他药物，使牛体内可能残留的药物完全代谢出体外；
（2）药物饲养：克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺注射液浓度均为5mg/5ml，可配成混合溶液注射，也可分别配制单独注射，连续2天对牛进行注射，选取不同的部位6点注射，每天注射一次，第2天注射后6小时宰杀；
（3）搅碎匀浆：宰杀后取牛肌肉，须室温存放2小时，沥净血水，将牛肉混合搅匀，每5 kg搅碎牛肉中加1kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的牛肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；用石油醚对干粉进行脱脂，重新混匀过筛；
（7）包装：牛肉粉分装于聚乙烯瓶内，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于鱼肉中磺胺甲噁唑残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平20-100ug/kg,其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：从市场上购买活鲤鱼，要求个体大小均一、每条重1.2-1.5 kg，从中随机取样，检测确认为阴性后进行饲养；
（2）药物饲养：养殖3天使其适应养殖环境，剔除不健康的鱼，根据预先设定的药物浓度，向鱼池中添加磺胺甲噁唑，浓度为1.5ppm，实时监控检测水体和鱼体中磺胺甲噁唑浓度，每天换1次水；
（3）搅碎匀浆：磺胺甲噁唑在鱼体的浓度不断富集增高，待鱼体内磺胺甲噁唑浓度相对稳定后，第3天换水后每隔6小时随意捕捞测定鱼肉中的磺胺甲噁唑含量，当达到10ppb时全部将鱼捞出放入-20℃冷冻2小时取出，室温下解冻，取鱼两侧肌肉部分，避免混入内脏及血液，将鱼肉混合均匀，每5kg搅碎鱼肉中加入500mg/kg维生素C溶液1kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的鱼粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：鱼粉分装于聚乙烯瓶内，在厌氧培养箱中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于猪肉中诺氟沙星和氧氟沙星残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平10-100ug/kg其具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：选取健康猪，体重60-70kg，用药前7天需对猪饲喂进行控制，禁止使用其他药物，使猪体内可能残留的药物完全代谢出体外；
（2）药物饲养：将两种药物均按5mg/kg混在料中进行饲喂，连续2天，每天2次，第2天喂食后12小时宰杀；
（3）搅碎匀浆：宰杀后取猪肌肉，须室温存放2小时，洗净血水；将猪肉混合搅匀，每5 kg搅碎猪肉中加1 kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的猪肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；用石油醚对干粉进行脱脂，重新混匀过筛；
（7）包装：猪肉粉分装于聚乙烯瓶，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于虾肉中3-氨基-2-恶唑酮AOZ、5-吗啉甲基-3-氨基-2-氨基-2-恶唑烷基酮AMOZ残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平1-10ug/kg具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：市购活南美白虾，要求个体大小均一、均重20-30 g，先确认活虾未被饲喂过呋喃药物，随机取样，检测确认为阴性样品，正常饲养2天后，剔除受伤不健康的虾；
（2）药物饲养：将AOZ和AMOZ药粉准确称量，均按池水0.2mg/L的浓度加药，全池泼洒式药浴给药，每天换一次水，第2天用药后4小时将虾全部捞出，用清水洗净，去皮取虾肉；
（3）搅碎匀浆：将虾肉混合搅匀，每5 kg搅碎虾肉中加1 kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的虾粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：虾粉分装于聚乙烯瓶内，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
12.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于鱼肉中隐性结晶紫残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平1-10ug/kg具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：从市场上购买活鲤鱼，要求个体大小均一、每条重1.2-1.5kg，选取健康鲤鱼，从中随机取样，检测确认为阴性后进行饲养；
（2）药物饲养：养殖3天使其适应养殖环境，剔除不健康的鱼，根据预先设定的药物浓度，向鱼池中添加结晶紫溶液，浓度为1ppm，实时监控检测鱼体中显性结晶紫和隐性结晶紫浓度，每天换1次水；
（3）搅碎匀浆：显性结晶紫和隐性结晶紫在鱼体的浓度不断富集增高，待鱼体内结晶紫浓度相对稳定后，第3天换水后测定鱼糜中的隐性结晶紫含量，为2ppb左右时将鱼捞出放入-20℃冷冻2小时取出，室温下解冻，取鱼两侧肌肉部分，避免混入内脏及血液，每5 kg肉中加1 kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥；冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的鱼粉用中药粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的鱼粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：鱼粉分装于瓶内，在厌氧培养箱中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
13.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于鱼肉中甲硝唑残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平1-10ug/kg具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：从市场上购买活鲤鱼，要求个体大小均一、每条重1.2-1.5kg，选取健康鲤鱼，从中随机取样，检测确认为阴性后进行饲养；
（2）药物饲养：养殖3天使其适应养殖环境，剔除不健康的鱼，根据预先设定的药物浓度，向鱼池中添加甲硝唑溶液，浓度为1ppm，实时监控检测鱼体中甲硝唑浓度，每天换2次水；
（3）搅碎匀浆：甲硝唑在鱼体的浓度不断富集增高，待鱼体内甲硝唑浓度相对稳定后，第3天换水后测定鱼糜中的甲硝唑含量，为1ppb左右将鱼捞出放入-20℃冷冻2小时取出，室温下解冻，取鱼两侧肌肉部分，每5
kg搅碎肉中加1 kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥；冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的鱼粉用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的鱼粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：鱼粉分装于聚乙烯瓶内，在厌氧培养箱中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
14.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于鸡肉中硝苯砷酸、洛克沙砷、金霉素和强力霉素残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平10-100ug/kg具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：市购肉鸡，要求个体大小均一、均重2.2 kg-2.7kg，先确认肉鸡未被饲喂过上述药物，随机取样，检测确认为阴性样品后进行喂养，正常饲养5天后，剔除受伤不健康的鸡；
（2）药物饲养：将硝苯砷酸、洛克沙砷、金霉素和强力霉素药粉分别准确称量0.2mg，装入胶囊中，每只鸡每天喂1颗胶囊，连喂2天，第2天停药后10小时宰杀；
（3）搅碎匀浆：将鸡肉混合搅匀，每5 kg搅碎鸡肉中加1 kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的鸡肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：在厌氧工作站内充氮包装取出，再用铝箔袋将包装瓶进行真空封装。
15.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于牛肉中阿维菌素残留冻干粉标准样品的制备，控制目标含量水平1-20ug/kg具体步骤如下：
（1）实验动物的选择：选取健康牛，体重60-100kg，用药前7天需对牛饲喂进行控制，禁止使用其他药物，使牛体内可能残留的药物完全代谢出体外；
（2）药物饲养：将阿维菌素拌入料中，按体重加药，每公斤体重0.2mg的药量进行拌食，连续喂食4天，第4天喂食后6小时宰杀；
（3）搅碎匀浆：宰杀后取牛肌肉，须室温存放2小时，洗净血水；将牛肉混合搅匀，每5 kg搅碎牛肉中加1 kg维生素C溶液，浓度为500mg/kg，混匀制成肉糜；
（4）冷冻干燥：将肉糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件：-70℃速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60℃，保持48小时，直至冻块干燥；
（5）粉碎均质:将冷冻干燥后的肉糜用粉碎机粉碎、混匀；
（6）过筛：匀质后的牛肉粉过0.5 mm孔筛，弃去筛余粗粉；
（7）包装：牛肉粉分装于聚乙烯瓶内，在厌氧工作站中充氮气包装，封口后再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装。
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