CN108387416A - 鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品及其制备方法，所述标准样品的制备方法包括如下步骤：(1)取样品背肉切成小块，加入L‑半胱氨酸水溶液，匀浆后静置30min；(2)步骤(1)所得产物于‑80℃冷冻处理，至水分质量含量低于1％；(3)步骤(2)所得产物经研磨过0.18mm孔筛，得到冻干粉；(4)步骤(3)所得冻干粉分装后以60Co 5kGy辐照1h灭菌，室温保存。所制得的标准样品中甲基汞标准样品均匀性和稳定性良好，量值可靠，可以满足实验室间甲基汞测试项目的能力验证活动及定性、定量检测的要求，可用于检测方法的验证、测试仪器的校准、测试结果的质量控制与考核，保证实验室检测结果的准确性、可靠性和可比性。

Description

鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品及其制备方法
技术领域
本发明属于生物标准物质研发技术领域。涉及一种污染物残留标准样品及其制备方法。
背景技术
标准物质在保证分析方法的准确性及可溯源性方面具有重要作用。食品与农产品本身固有的易变化的特性，使得单纯采用传统的纯化学物质标准品的检测方法的可靠性难以满足要求，需要同时采用纯化学物质标准品与基体标准物质对检测体系进行评价。
汞及其化合物是环境中广泛存在的一类持久性污染物。自20世纪50年代日本水俣病爆发后，对于汞毒性的研究备受关注。有机汞因其具有亲脂性和生物放大效应，毒性大于无机汞，以甲基汞最强。因其为剧毒物质，世界各国对甲基汞的出入境有严格的控制管理规定，不同形态的汞在环境中和生物体中可以相互转化，其在动物体内代谢复杂，与动物体结合形式多样，在提取方式、提取剂的使用等均同人为添加物残留的检测不同。自20世纪80年代，国外已开始研究其中关键性的技术问题。在我国，标准样品的研制多数集中在无机元素方面，对有害元素形态标准样品的研制未见类似文献报道。本文以天然污染的水产品样本为原料，经制备得到实物标准样品，该标准样品均匀、稳定，易保存，有利于对水产品中甲基汞的有效监测。
发明内容
本发明旨在针对天然污染样品的回溯性研究提出合理的样品获得及存续方案。并提供甲基汞的有效监测方案。
为此，本发明首先提供一种鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品的制备方法，包括如下步骤：
(1)取鲨鱼肉样品背肉切成小块，加入L-半胱氨酸水溶液，匀浆后静置30min；
(2)步骤(1)所得产物于-80℃冷冻处理，至水分质量含量低于1％；
(3)步骤(2)所得产物经研磨过0.18mm孔筛，得到冻干粉；
(4)步骤(3)所得冻干粉分装后以60Co 5kGy辐照1h灭菌，室温保存。
基于此，本发明进一步提供由上述方法制得的标准样品，即鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品。
本发明建立了用于鲨鱼肉中甲基汞残留检测的可保留保准品的研制方法。所制得的标准样品中甲基汞标准样品均匀性和稳定性良好，量值可靠，可以满足实验室间甲基汞测试项目的能力验证活动及定性、定量检测的要求，可用于检测方法的验证、测试仪器的校准、测试结果的质量控制与考核，保证实验室检测结果的准确性、可靠性和可比性，为食品安全、环境监测及卫生检验检疫等方面的测量和研究工作提供了技术支撑和量值溯源保障。
具体实施方式
本发明所提供的鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品的制备方法，包括如下步骤：
(1)取鲨鱼肉样品背肉切成小块，加入L-半胱氨酸水溶液，匀浆后静置30min；
具体实施方式中，所述的鲨鱼肉优选采用黄渤海海域生长的鲨鱼样品。
所述的L-半胱氨酸优选配制为浓度50g/L的水溶液备用，其用量标准为：使L-半胱氨酸总量为样品中总汞摩尔含量的2～2.5倍；优选2.1～2.2倍；最为优选2.16倍。
(2)步骤(1)所得产物于-80℃冷冻处理，至水分质量含量低于1％；
(3)步骤(2)所得产物经研磨过0.18mm孔筛，得到冻干粉；
(4)步骤(3)所得冻干粉分装后以60Co 5kGy辐照1h灭菌，室温保存。
更为具体的实施方式中，本发明所述的鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品的制备方法，包括如下步骤：
(1)取采自黄渤海海域生长的鲨鱼样品，去皮、去内脏，然后取背肉切成小块，加入浓度为50g/L的L-半胱氨酸水溶液，使L-半胱氨酸的用量为样品中总汞摩尔含量的2～2.5倍，匀浆后静置30min；
(2)步骤(1)所得产物于-80℃冷冻处理，预冻约4小时至水分质量含量低于1％，制得冻干粉粗样；
(3)将步骤(2)所得冻干粉粗样研磨过0.18mm孔筛，得到冻干粉；
(4)步骤(3)所得冻干粉分装入洁净的高密度聚乙烯容器，以60Co 5kGy辐照1h灭菌后室温保存。
当让，上述关于鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品的制备方法的任意具体的技术方案所制备得到的标准样品，均包含在本发明中。下述非限制性实施例用于对本发明的技术方案作进一步的说明，不应当理解为对本发明任意形式的限定。
无特殊说明，本说明书中所述及的仪器和药品包括：原子荧光形态分析仪(中国吉天)；超纯水处理系统(美国Millipore)；冷冻干燥机(德国Christ)；超声波清洗器(上海精密仪器)；涡旋振荡器(德国IKA公司)；空气浴振荡摇床(上海琪特公司)；离心机(上海安亭科学仪器厂)。
汞标准液(1000μg/mL，中国计量科学研究院)、甲基汞标准液(86.2μg/g)，中国计量科学研究院)。
本说明书中所述及的参数的测定方法包括：参照GB/T 5009.17-2014“食品中总汞和有机汞的测定”，采用盐酸超声水浴提取样品，液相色谱-原子荧光光谱联用测定样品中甲基汞。
实施例1
建立鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品的制备方法:
(1)选取采自黄渤海海域生长的鲨鱼样品，去皮、去内脏，然后取背肉切成小块为水产品样本。
(2)向鱼肉样本中加入浓度为50g/L L-半胱氨酸水溶液，使L-半胱氨酸与样品中总汞的摩尔量的比值为2.16，匀浆，混匀后静置30min。
(3)然后将样品置于-80℃预冻4小时，冷冻干燥至水分含量低于1％的冻干粉粗样，将粗样研磨过0.18mm孔筛，得到冻干粉。
(4)再次混匀后装入洁净的高密度聚乙烯，分装好的样品以60Co 5kGy辐照1h灭菌，室温保存。
所得样品即本发明所述的鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品(本说明书中简称为标准样品)
实施例2
L-半胱氨酸中的S与Hg结合的理论比例关系为2:1，原则上加入L-半胱氨酸的量大于所含Hg的含量的2倍即可，考虑需要足够的L-半胱氨酸的络合环境，样本匀浆过程中加入半胱氨酸对标准样品中甲基汞含量的影响进行了分析对比实验。
参照实施例1所建立的方法，平行称取5组鲨鱼肉样本各100g，步骤(2)中分别加入10mL不同浓度的L-半胱氨酸，L-半胱氨酸水溶液质量浓度分别为0.0％、0.5％、1.0％、2.0％、5.0％、8.0％和10.0％，使L-半胱氨酸添加量各不相同。并按照实施例1所建立的标准样品的制备方法中的其它后续步骤制备不同L-半胱氨酸添加量条件下的标准样品。
对所制得的不同L-半胱氨酸添加量条件下的标准样品中的总汞和甲基汞(MeHg)含量进行测定，实验结果如表1所示。可见：标准样品制备过程中加入L-半胱氨酸可以显著提高样本中甲基汞的含量，当加入L-半胱氨酸量第5组时，样本中甲基汞的含量基本稳定。当L-半胱氨酸加入量为总汞含量的2.16倍时(摩尔比)，络合效果最佳。
表1
实施例3.均匀性检测
按照实施例1的方法制备标准样品共200瓶，从其中随机抽取15瓶，每瓶样品重复测试3次，测定样品中甲基汞的含量。所有试料以随机次序在重复性条件下测试。
采用方差分析和F检验对上述检测结果进行标准样品均匀性检验，检验结果见表2。从结果可知，当α＝0.05，f1＝14，f2＝15，2.04>F0.015(14,30)＝1.08，表明本发明的方法所制备的标准样品的样品内及样品间无显著性差异，样品是均匀的。
表2
实施例4.稳定性检验
首先按照实施例1所建立的方法制备参测样品。稳定性检验分为长期稳定性与短期稳定性进行。
长期稳定性研究进行12个月，隔月抽取室温存放的3个独立包装的样本、每个样本重复测定2次，共6个数据，以平均值作为检测结果。检测结果如表3所示。
表3
本实施例中的长期稳定性实验设计为经典稳定性研究，即同时制备的样品在相同条件下随着时间的推移进行测量。以直线为经验模型，截距(在不确定度内)等于测定得到的值，而斜率趋近于零。在95％置信水平上，|b1|＜t0.95,n-2·s(b1)，斜率是不显著的，即未观测到不稳定性，说明本发明的制备方法所制得的标准样品是长期稳定的。
短期稳定性研究时模拟样品运输的极端条件，取出10个独立包装样品置于-60℃冰柜中放置60d，取出于室温下放置30d，再于60℃烘箱中放置48h后测定。检测结果如表4所示。
表4 短期稳定性结果
本实施例中，短期稳定性实验测定结果与均匀性实验结果采用t检验进行比较，在95％置信水平上，二者无显著差异，说明本发明的制备方法所制得的标准样品在极端条件下短期内是稳定的。
实施例5.样本的定值
本批标准物质采用多家实验室协同定值的方案，邀请华测检测认证集团股份有限公司、河北省食品检验研究院、浙江省检验检疫科学技术研究院、黑龙江出入境检验检疫局、吉林出入境检验检疫局、延边出入境检验检疫局、广东出入境检验检疫局7家检验检测机构与标准样品研制单位共同定值，结果见表5(鲨鱼肉中甲基汞标准样品定值结果统计分析表)。检测结果经过柯克伦检验和格拉布斯检验，所有单元的数据均可保留并参与最终定值。
表5
由于该批标准样品中参与协同定值的所有数据均被采纳。因此，由协同定值实验室所带来的批测定不确定度的主要分量是标准偏差。
由瓶间均匀性带来的不确定度在计算时可采用单因素方差分析，瓶间标准偏差是该方差的平方根，加合瓶内重复性标准偏差即得到由瓶间均匀性带来的不确定度。稳定性研究是采用直线为经验模型，因此稳定性不确定度是通过将自变量初始值、时间和相对降解速率的不确定度传播给因变量特性值而得到。定值数据及均匀性、稳定性引入的不确定度分析统计结果见表5。采用“标准值±扩展不确定度”的方式表示，标准样品的定值结果为：3.59±0.13mg/kg，k＝2。

Claims (6)

1.鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品的制备方法，包括如下步骤：
(1)取鲨鱼肉样品背肉切成小块，加入L-半胱氨酸水溶液，匀浆后静置30min；
(2)步骤(1)所得产物于-80℃冷冻处理，至水分质量含量低于1％；
(3)步骤(2)所得产物经研磨过0.18mm孔筛，得到冻干粉；
(4)步骤(3)所得冻干粉分装后以60Co 5kGy辐照1h灭菌，室温保存。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的L-半胱氨酸的用量为样品中总汞摩尔含量的2～2.5倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的L-半胱氨酸水溶液浓度为50g/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的水产品是采自黄渤海海域生长的鲨鱼样品。
5.根据权利要求1所述的方法，包括如下步骤：
(1)取采自黄渤海海域生长的鲨鱼样品，去皮、去内脏，然后取背肉切成小块，加入浓度为50g/L的L-半胱氨酸水溶液，使L-半胱氨酸的用量为样品中总汞摩尔含量的2～2.5倍，匀浆后静置30min；
(2)步骤(1)所得产物于-80℃冷冻处理，预冻约4小时至水分质量含量低于1％，制得冻干粉粗样；
(3)将步骤(2)所得冻干粉粗样研磨过0.18mm孔筛，得到冻干粉；
(4)步骤(3)所得冻干粉分装入洁净的高密度聚乙烯容器，以60Co 5kGy辐照1h灭菌后室温保存。
6.根据权利要求1～5中任一权利要求所述的方法制得的鲨鱼肉中甲基汞残留检测标准样品。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109613148A (zh) * 2019-01-30 2019-04-12 中国水产科学研究院黄海水产研究所 以大菱鲆肌肉为基质的aoz残留标准物质的制备方法
CN116380587A (zh) * 2023-04-07 2023-07-04 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 一种含重金属及其化学形态的香菇基质标准物质及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140248184A1 (en) * 2011-04-04 2014-09-04 Arkray, Inc. Method for Recovering Metal and Kit for Recovery of Metal for Use in the Same
CN104155162A (zh) * 2014-08-22 2014-11-19 威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品制备方法
CN104678029A (zh) * 2015-02-15 2015-06-03 电子科技大学 一种沉积物中汞化合物的提取和检测方法
CN106501382A (zh) * 2015-09-08 2017-03-15 通威股份有限公司 一种鱼肉中汞化合物的提取和检测方法
CN106813963A (zh) * 2016-04-06 2017-06-09 中国计量科学研究院 一种含有氯霉素的鱼肉粉标准物质制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140248184A1 (en) * 2011-04-04 2014-09-04 Arkray, Inc. Method for Recovering Metal and Kit for Recovery of Metal for Use in the Same
CN104155162A (zh) * 2014-08-22 2014-11-19 威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 动物源基体药物及其代谢物残留冻干粉标准样品制备方法
CN104678029A (zh) * 2015-02-15 2015-06-03 电子科技大学 一种沉积物中汞化合物的提取和检测方法
CN106501382A (zh) * 2015-09-08 2017-03-15 通威股份有限公司 一种鱼肉中汞化合物的提取和检测方法
CN106813963A (zh) * 2016-04-06 2017-06-09 中国计量科学研究院 一种含有氯霉素的鱼肉粉标准物质制备方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109613148A (zh) * 2019-01-30 2019-04-12 中国水产科学研究院黄海水产研究所 以大菱鲆肌肉为基质的aoz残留标准物质的制备方法
CN116380587A (zh) * 2023-04-07 2023-07-04 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 一种含重金属及其化学形态的香菇基质标准物质及其制备方法
CN116380587B (zh) * 2023-04-07 2024-01-23 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 一种含重金属及其化学形态的香菇基质标准物质制备方法

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