CN105738636B - 一种液体pa质控血清保存液及其制备方法 - Google Patents

一种液体pa质控血清保存液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种液体PA质控血清保存液及其制备方法，属于医学免疫学领域。其组合物包括：乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸三钠、甘氨酸、庶糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、曲拉通 X‑100、NaN3、NaOH或HCl。其制备方法包含以下步骤，步骤1：液体PA稀释液的配制；步骤2：将质控血清做离心预处理；步骤3：经步骤1和步骤2制得产物充分混合均匀；步骤4：将步骤3的溶液分装并存放。通过本发明生产的液体PA质控血清保存液，相比于冻干质控血清方式具有较小的变异系数，稳定性优异，可长时间贮存。

Description

一种液体PA质控血清保存液及其制备方法
技术领域
本发明涉及医学免疫学领域，更具体地说，它涉及一种液体PA质控血清保存液及其制备方法。
背景技术
前白蛋白，简称PA，又称转甲状腺素蛋白，由肝细胞合成，在电泳分离时，常显示在白蛋白的前方，其半衰期很短，仅约1.9天。因此，测定其在血浆中的浓度对于了解蛋白质的营养不良、肝功能不全、比之白蛋白和转铁蛋白具有更高的敏感性。
作为一种灵敏的营养蛋白质指标，在肝脏疾病中，有30%的白蛋白正常的肝病患者的前白蛋白均减少；在肝癌中，前白蛋白的降低程度与病情有密切关系；结合转氨酶、胆红素等对不同类型的肝脏疾病有鉴别意义，如前白蛋白、转氨酶、胆红素均增高多属急性肝脏疾病；肾病中前白蛋白不减少，而且在饮食充分时还可升高。总之，前白蛋白在临床领域诊断急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化或肾炎等均有很灵敏的前兆，是发现疾病的放大镜，更是医生的不可多得的帮手。
我国对前白蛋白质控血清的研究大多仍使用冻干的方式质控血清的应用研究。冻干血清是通过冷冻干燥方法将血清的水分去除，使血清的稳定性延长。但冻干质控血清由于在制备、重建等环节可能出现差异，另外冻干血清在使用前需要重新溶解，操作繁琐，同时，可受到水质、加量准确性的影响，增加瓶间差，从而造成检验结果的误差，或因复溶、保存等不当，造成假失控。而由于液体质控血清是通过加入特定成分使血清的冰点大大降低，从而使得质控血清在制备、保存、使用过程中不必经历分装、冷冻干燥、复溶等可能引起误差的操作过程，因此液体质控血清有其独特的优点。
虽然，液体质控血清弥补了冻干质控血清的一些不足，现已成为国内外质控领域研究的新宠，我国医学研究学者对液体质控血清的研究还只是出于初级阶段，孙关忠等人以丙三醇作为稳定剂制备了液体质控血清，并对十八项生化成分的RCV%进行了测定，结果表明十八项生化成分中有十七项成分具有可接受的稳定性，效果可观。明德松等人制备了糖化血红蛋白液体质控物，利用高压液相硼酸盐亲和层析法和高压液相法观察其稳定性，结果表明该质控物与人全血性状相近，不需复溶，储存时间长。中国民航飞行学院医院检验科的王宇等人制备了特种蛋白液质控血清并与冻干血清进行对比，结果表明特种蛋白90天的CV%<2%，低于冻干血清的CV%，稳定性很好，精密度高。以乙二醇或者丙三醇作为保护剂制备的液体质控血清，在某些检测项目比如ALT、AST、CK、Glu、BUN、CR、CA、P、K、NA、TC、TBA等中的稳定性在期望的有效期内仍存在波动。
目前国内关于液体PA质控血清的研究还处于空白阶段，因为PA对于治疗肝脏疾病领域具有难以取代的作用，许多关于液体PA质控血清的商品都需要进口，相关方面的核心技术也只有少数国家掌握，并且对该技术进行封锁和垄断，使我们面临严峻的挑战。因此，自主研发、制备一种液体PA质控血清保存液仍然是本领域的技术人员所应致力于攻克的难关并研究其在检测项目中的各种指标波动性以及稳定机理具有重要的意义。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种具有优异的稳定性的液体PA质控血清保存液及其制备方法。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
1、一种液体PA质控血清保存液，其特征在于：包括下列重量份的组分构成：
乙二胺四乙酸盐：0.2~1.2质量份
柠檬酸三钠：0.5~1.5质量份
甘氨酸：0~1质量份
甜味剂：100~200质量份
磷酸二氢钾：0~2质量份
磷酸氢二钠：20~40质量份
氯化钠：1~5质量份
曲拉通X-100：0~1质量份
叠氮钠：0.5~1.5质量份。
一种权利要求1所述的液体PA质控血清保存液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1：按照乙二胺四乙酸盐0.2~1.2质量份；柠檬酸三钠0.5~1.5质量份；甘氨酸0~1质量份；甜味剂100~200质量份；磷酸二氢钾0~2质量份；磷酸氢二钠20~40质量份；氯化钠1~5质量份；曲拉通 X-100 0~1质量份；叠氮钠0.5~1.5质量份进行配料；
步骤2：将步骤1中的混合物制成溶液，并混合均匀；
步骤3：用当量质量份的NaOH或HCl，调节溶液的PH；
步骤4：将质控血清做离心预处理；
步骤5：将步骤3的稀释液与步骤4处理后的质控血清充分混匀；
步骤6：分装并存放。
完成发明目的的必要方案及原理：
在配方组分中，磷酸二氢钾和磷酸氢二钠形成稳定的缓冲液，利于试剂中各种成分的分散稳定性；乙二胺四乙酸盐和柠檬酸三钠，可络合微量元素等金属离子保护蛋白的酶解；氯化钠，模拟人体内真实的生化环境，对于样本中成分保持原有空间构像；曲拉通X-100 表面活性剂，是非水溶性间胆的增溶剂，是反应的促进剂、润滑剂，它提高检测的灵敏度，促进样本中各种物质溶解，减少样本脂浊等对测定的影响；甘氨酸，主要是保护蛋白质氨基酸的损伤；甜味剂，主要是避免蛋白质的氧化和空间构象的稳定；叠氮钠，主要起防腐剂的作用。
本发明具有如下优点：
本发明所提供一种液体PA质控血清保存液及其制备方法，取代传统的冷冻为主的PA质控血清，该液体PA质控血清能够在4℃冰箱中长期贮存，质量稳定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施过程作进一步说明：
对制得的液体PA质控血清保存液的性能检测方法如下：
试验条件(以日立7100分析仪为例)
a)试剂样本比 样本∶试剂R1∶试剂R2＝2∶210∶70
b)反应温度 37℃
c)检测方法 两点终点法，测定点选取17、34
d)测试波长 波长340nm(主)/700nm(副)
e)校准方式 非线性多点校准模式
f)反应方向 上升
注：不同型号的生化分析仪使用的参数可能不同，主要是测光点与测试波长在不同分析仪上有不同的设计，而试剂样本相对比例一般不会改变。可提供各种分析仪的具体分析参数。
图1是检测方法的示意图；
结果计算：根据校准曲线计算；
校准：校准采用第三方合格的校准品，推荐使用上海捷门生物技术合作公司提供的校准品，其PA的赋值最终可溯源至国际参考标准物质CRM-470，校准频率根据相关SOP而定。
配制稀释液：称量
乙二胺四乙酸二钠0.5质量份；
柠檬酸三钠1质量份；
甘氨酸0.5质量份；
蔗糖150质量份；
磷酸二氢钾1质量份；
磷酸氢二钠32质量份；
氯化钠2.5质量份；
曲拉通 X-100 0.5质量份；
叠氮钠1质量份；
加水1000ml，充分混匀，用当量NaOH或HCl在温度为20℃调节PH值为7.4。
实施例一：
步骤1：称取浓度为760mg/L的质控血清10ml ；
步骤2：加入稀释液10ml；
步骤3：充份混匀，分装成1ml/支，浓度为380mg/L。
实施例二
步骤1：称取浓度为360mg/L的质控血清10ml ；
步骤2：加入稀释液10ml；
步骤3：充份混匀，分装成1ml/支，浓度为180mg/L。
实施例三
步骤1：按照乙二胺四乙酸二钾0.5质量份；柠檬酸三钠1质量份；甘氨酸0.5质量份；木糖醇150质量份；磷酸二氢钾1质量份；磷酸氢二钠32质量份；氯化钠2.5质量份；曲拉通 X-100 0.5质量份；叠氮钠1质量份进行配料；
步骤2：加水1000ml，充分混匀，用当量NaOH或HCl在温度为20℃调节PH值为7.4；
步骤3：称取浓度为760mg/L的质控血清10ml，做离心预处理；
步骤4：称取经步骤2制得的溶液10ml与步骤3的质控血清充分混匀，分装成1ml/支，浓度为380mg/L。
实施例四
步骤1：按照乙二胺四乙酸三钾0.5质量份；柠檬酸三钠1质量份；甘氨酸0.5质量份；异麦芽酮糖醇150质量份；磷酸二氢钾1质量份；磷酸氢二钠32质量份；氯化钠2.5质量份；曲拉通 X-100 0.5质量份；叠氮钠1质量份进行配料；
步骤2：加水1000ml，充分混匀，用当量NaOH或HCl在温度为20℃调节PH值为7.4；
步骤3：称取浓度为760mg/L的质控血清10ml，做离心预处理；
步骤4：称取经步骤2制得的溶液10ml与步骤3的质控血清充分混匀，分装成1ml/支，浓度为380mg/L。
实施例五
步骤1：称取浓度为760mg/L的质控血清10ml做离心预处理；
步骤2：将稀释液用当量NaOH或HCl，在室温20℃下调节溶液的PH值为7.3，并称取10ml；
步骤3：将步骤1和步骤2充分混匀，分装成1ml/支，浓度为380mg/L。
实施例六
步骤1：称取浓度为760mg/L的质控血清10ml做离心预处理；
步骤2：将稀释液用当量NaOH或HCl，在室温20℃下调节溶液的PH值为7.5，并称取10ml；
步骤3：将步骤1和步骤2充分混匀，分装成1ml/支，浓度为380mg/L。
对比例一
步骤1：市购浓度为760mg/L质控血清的离心预处理；
步骤2：配制生理盐水10质量份；
步骤3：将步骤1处理后的质控血清与步骤2的生理盐水充分混匀；
步骤4：分装并存放。
对比例二
步骤1：市购浓度为380mg/L质控血清的离心预处理；
步骤2：配制生理盐水10质量份；
步骤3：将步骤1处理后的质控血清与步骤2的生理盐水充分混匀；
步骤4：分装并存放。
对比例三
步骤1：市购浓度为760mg/L冻干质控血清；
步骤2：配制生理盐水2质量份对步骤1中的冻干血清进行复溶；
步骤3：将步骤2的溶液充分混匀；
步骤4：分装并存放。
对比例四：
步骤1：市购浓度为380mg/L冻干质控血清；
步骤2：配制生理盐水2质量份对步骤1中的冻干血清进行复溶；
步骤3：将步骤2的溶液充分混匀；
步骤4：分装并存放。
试验数据：
测定次数 理论值（mg/L） 测定结果（mg/L） CV%
实施例一 20 360 358.5 1.1
实施例二 20 180 181.2 1.8
实施例三 20 360 356.3 4.1
实施例四 20 360 355.1 4.6
实施例五 20 360 358.1 1.4
实施例六 20 360 358.3 1.3
对比例一 20 360 357.8 1.5
对比例二 20 180 179.7 1.3
对比例三 20 360 359.2 1.8
对比例四 20 180 181.1 1.1
稳定性评价：将样品均放置在4℃的冰箱内存放，分别于第0d、30d、60d、90d、……240d、270d、300d时取出每种浓度质控血清20支，取平均值。
测定次数 0d（mg/L） 30d（mg/L） 60d（mg/L） 90d（mg/L） 120d（mg/L）
实施例一 20 358.5 358 360.6 356.7 356.6
实施例二 20 181.2 180.2 179.8 181.1 178.8
对比例一 20 357.8 348.3 320.4 300.2 287.3
对比例二 20 179.7 169.1 160.2 154.9 147.8
对比例三 20 359.2 359.0 359.2 357.9 358.7
对比例四 20 181.1 179.8 178.7 178.6 178.2
150d（mg/L） 180d（mg/L） 210d（mg/L） 240d（mg/L） 270d（mg/L） 300d（mg/L） CV%
实施例一 356.0 355.9 355.6 355.6 354.7 354.0 1.3
实施例二 178.2 178.8 178.0 177.8 177.8 177.2 2.3
对比例一 259.1 220.5 200.4 189.2 176.0 150.0 59.1
对比例二 135.2 110.8 89.8 75.3 70.1 60.2 67.5
对比例三 357.5 357.5 356.3 356.2 355.6 354.9 2.2
对比例四 178.9 179.2 177.8 178.2 179.2 177.4 2.1
通过上述试验数据可以得出，通过本发明制备的液体PA质控血清保存液，具有较低的变异系数，具有优异的稳定性，可长时期存放不失效。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种液体PA质控血清保存液的制备方法，其特征在于，所述液体PA质控血清保存液包括如下质量份的组分：乙二胺四乙酸盐0.2～1.2份、柠檬酸三钠0.5～1.5份、甘氨酸0～1份、甜味剂100～200份、磷酸二氢钾0～2份、磷酸氢二钠20～40份、氯化钠1～5份、曲拉通X-100 0～1份、叠氮钠0.5～1.5份；
所述乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾中的一种或多种；
所述甜味剂为蔗糖、木糖醇、异麦芽酮糖醇中的一种或多种；
所述制备方法包括如下步骤：
步骤1：按照乙二胺四乙酸盐0.2～1.2质量份；柠檬酸三钠0.5～1.5质量份；甘氨酸0～1质量份；甜味剂100～200质量份；磷酸二氢钾0～2质量份；磷酸氢二钠20～40质量份；氯化钠1～5质量份；曲拉通X-100 0～1质量份；叠氮钠0.5～1.5质量份进行配料；
步骤2：将步骤1中的混合物制成溶液，并混合均匀；
步骤3：用NaOH或HCl，调节溶液的pH值为7.3～7.5；
步骤4：将质控血清做离心预处理；
步骤5：将步骤3制得的溶液与步骤4处理后的质控血清充分混匀；
步骤6：分装并存放。
2.根据权利要求1所述的一种液体PA质控血清保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤3调节pH过程在室温20℃～30℃下进行。
3.根据权利要求1所述的一种液体PA质控血清保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤4中质控血清的浓度为300～900mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种液体PA质控血清保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤4中离心预处理转速为3000～4000r/min，离心10～30min。
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