CN101571537A - 一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法 - Google Patents

一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101571537A
CN101571537A CNA2009100595177A CN200910059517A CN101571537A CN 101571537 A CN101571537 A CN 101571537A CN A2009100595177 A CNA2009100595177 A CN A2009100595177A CN 200910059517 A CN200910059517 A CN 200910059517A CN 101571537 A CN101571537 A CN 101571537A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
alpha
fucosidase
interference
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2009100595177A
Other languages
English (en)
Inventor
王一
赵喻
王保宁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SICHUAN MJAKER TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
SICHUAN MJAKER TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SICHUAN MJAKER TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical SICHUAN MJAKER TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CNA2009100595177A priority Critical patent/CN101571537A/zh
Publication of CN101571537A publication Critical patent/CN101571537A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及提供一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。本发明的试剂为液体双试剂,具有良好的抗肝素干扰性能和优良的稳定性。采用速率比色法,可以在半/全自动生化仪上使用。本品采用新型底物,配方中同时加入了抗肝素干扰的抗干扰剂,试剂具有灵敏度高、抗干扰性能强的特点;本品加入选定的稳定剂,使得试剂具有良好的稳定性,温度在2-8度保存(避光密封)12个月不影响其性能。本试剂可以广泛的用于原发性肝癌的早期诊断、健康体检、肝部疾病普查等。

Description

一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体地,涉及一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。
背景技术
α-L-岩藻糖苷酶(Fucosidase,AFU,α-L-岩藻糖苷-岩藻糖水解酶,EC3.2.1.51)属溶酶体酸性水解酶类,存在于人体肝、脑、肺、肾、胰、纤维细胞和白细胞等的溶酶体内,血清及尿液中亦含有一定量的酶。AFU的主要生理功能是参与含岩藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子的分解代谢。遗传性AFU缺乏症患者,从上述生物大分子中水解岩藻糖基的反应受阻,引起岩藻糖蓄积病,患儿多在5~6岁死亡。血清AFU测定,过去主要用于岩藻糖蓄积病的诊断,80年代以来,国内外有许多文献报道,在肝细胞癌时,血清AFU活力升高,其敏感性及特异性均较好,尤其对甲胎蛋白阴性肝细胞癌与肝脏其他占位性病变的鉴别诊断有着重要的临床参考价值
血清AFU作为原发性肝癌诊断的一个新标记物,其敏感性和特异性良好。迄今血清甲胎蛋白水平测定仍是原发性肝癌临床诊断最特异的肿瘤标记物,然而,在甲胎蛋白阴性的原发性肝癌病例中,大约有70~85%出现AFU阳性结果,而且小肝癌(肿瘤直径<3CM)患者血清AFU的阳性率高于甲胎蛋白。同时测定AFU活性与血清甲胎蛋白水平可使原发性肝癌的阳性检出率从检测甲胎蛋白的70%左右提高到90~95%左右。另外,对肝细胞癌的疗效观察、监测复发有重要参考价值。肝癌术后AFU活性很快下降,其下降速度根据切除肝标本断面血管内有无癌栓而不同。有癌栓者术后两周内AFU不能降至正常,而无癌栓者术后一周内即可恢复正常水平。若以后AFU水平再度上升,则提示肝癌复发。因此,检测血清AFU活性,对肝癌高发人群的筛查、肝癌的早期诊断以及肝癌的疗效观察均有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗干扰性好的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是:一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,所述试剂为液体双试剂,其中一种试剂R1的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸            0.10-100g/L,
磷酸盐:                0.10-100g/L,
稳定剂:                0.1-10g/L;
其中第二种试剂R2的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸MES:        0.1-100g/L,
EDTA-Na2:               0.01-10g/L,
稳定剂:                 0.1-10g/L,
NaCl:                   0.05-25g/L,
2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷:0.05-20g/L,
醇:                           1-100g/L,
抗干扰剂:            1-10g/L。
具体地,所述稳定剂为二元醇、三元醇、多元醇中的至少一种;所述抗干扰剂为吐温-20、吐温-80、司盘-60、月桂醇聚氧乙烯醚、曲拉通-100、聚乙二醇中的至少一种;其中磷酸盐可以采用磷酸钠、磷酸二氢钠等,醇为甲醇、乙醇或多元醇等。
一种上述抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的使用方法,包括下述步骤:
(1)样品准备:样品为空腹血清或血浆或体液,样品在低温条件下保存;
(2)采用全自动生化仪对步骤(1)的样品进行检测,具体参数如下:
方法:速率法     样品/试剂:1/9
主波长:405nm    反应温度:37℃
副波长:505nm    反应时间:10min
R1:169μl       R2:56μl    样品:25μl
步骤(1)中空腹血清或血浆采用肝素抗凝,0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液;或采用EDTA抗凝,1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液;样品中α-L-岩藻糖苷酶在室温条件下可稳定8小时,在2℃~8℃可稳定7天,在-20℃保存可稳定2个月。
综上,本发明的有益效果是:本发明的试剂为液体双试剂,具有良好的抗肝素干扰性能和优良的稳定性。采用速率比色法,可以在半/全自动生化仪上使用。本品采用新型底物,配方中同时加入了抗肝素干扰的抗干扰剂,试剂具有灵敏度高、抗干扰性能强的特点;本品加入选定的稳定剂,使得试剂具有良好的稳定性,温度在2-8度保存(避光密封)12个月不影响其性能。本试剂可以广泛的用于原发性肝癌的早期诊断、健康体检、肝部疾病普查等。
具体实施方式
实施例1:
(1)样品准备:样品为空腹血清或血浆(肝素抗凝,0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液;EDTA抗凝,1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液)或体液(需离心澄清)。样品应在低温条件下运输保存,样品中α-L-岩藻糖苷酶室温可稳定8小时,在2℃~8℃可稳定7天。-20℃保存可稳定2个月。
(2)按以下成分和用量配制α-L-岩藻糖苷酶诊断试剂:
R1:
2-吗啉乙磺酸(MES)        0.10-100g/L
磷酸盐:                 0.10-100g/L
稳定剂:                 0.1-10g/L
R2:
2-吗啉乙磺酸(MES):      0.1-100g/L
EDTA-Na2:               0.01-10g/L
稳定剂:                 0.1-10g/L
NaCl:                   0.05-25g/L
MG-CNPF:                0.05-20g/L
醇:                     1-100g/L
抗干扰剂:               1-10g/L
上述MG-CNPF为MG-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷,各组分及其含量具体为,R1中2-吗啉乙磺酸(MES)为0.10-100g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;磷酸盐为0.10-100g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;稳定剂为0.10-10g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10g/L均可。R2中2-吗啉乙磺酸(MES)为0.10-100g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;EDTA-Na2为0.01-10g/L之间的任意值,具体为0.01、0.1、0.5、1、2、4、8、10均可;稳定剂为0.1-10g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10均可;NaCl为0.05-25g/L之间的任意值,具体为0.05、0.1、0.5、1、2、4、8、10、15、20、24、25均可;MG-CNPF为0.05-50g/L之间的任意值,具体为0.05、0.1、0.5、1、2、4、8、10、15、20均可;醇为1-100g/L之间的任意值,具体为1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;抗干扰剂为1-10g/L之间的任意值,具体为1、2、4、8、10均可。
上述试剂溶解完全后,分装入瓶,制成液体双试剂,直接使用。在日立7170全自动生化仪上按照以下参数设定:
方法:速率法样品/试剂:1/9
主波长:405nm    反应温度:37℃
副波长:505nm    反应时间:10min
R1:169μl        R2:56μl    样品:25μl
反应方向为正反应,延迟时间约1分钟,检测时间约2分钟。
加入样品和试剂后,使之混合并发生反应,最终将反应物置于生化仪上,检测主波长405nm下的吸光度的上升速度,从而计算出α-L-岩藻糖苷酶的活性大小。
以下通过对本发明的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的相关实验数据,对其有益效果做进一步说明,具体实验数据如下:
1、抗甘油三酯干扰(mmol/L)
2、柠檬酸干扰(mol/l)
3、EDTAK2干扰(mg/ml)
Figure A20091005951700102
Figure A20091005951700111
4、VC(mg/l)干扰
Figure A20091005951700112
Figure A20091005951700121
5、血红蛋白(g/L)干扰
Figure A20091005951700122
6、胆红素(μmol/L)干扰
7、抗肝素干扰实验(U/ml)
Figure A20091005951700132
Figure A20091005951700141
8.开瓶稳定性
低值质控品:批号:050711,靶值38U/L;
高值质控品:批号:050711,靶值134U/L。
单位:U/L
结论:开瓶32天测定结果均未超出第一天结果的10%,符合设计标准的要求。
上述实验中,M代表现有技术单试剂,S代表本发明试剂,K代表现有技术双试剂。
M、S试剂的组分及含量为:
M:R:Good缓冲液        30mmol/l
稳定剂                  适量
K:R1:Good缓冲液       10mmol/l
稳定剂                  适量
R2:2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷:50mmol/l
稳定剂                             适量
通过上述实验证明,本发明试剂抗干扰性明显优于现有技术的单试剂及双试剂、具有好的抗干扰效果。

Claims (5)

1、一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,其特征在于,所述试剂为液体双试剂,其中一种试剂R1的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸         0.10-100g/L,
磷酸盐:             0.10-100g/L,
稳定剂:             0.1-10g/L;
其中第二种试剂R2的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸MES:    0.1-100g/L,
EDTA-Na2:           0.01-10g/L,
稳定剂:             0.1-10g/L,
NaCl:               0.05-25g/L,
2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷:0.05-20g/L,
醇:                 1-100g/L,
抗干扰剂:           1-10g/L。
2、根据权利要求1所述的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,其特征在于,所述稳定剂为二元醇、三元醇、多元醇中的至少一种。
3、根据权利要求1所述的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,其特征在于,所述抗干扰剂为吐温-20、吐温-80、司盘-60、月桂醇聚氧乙烯醚、曲拉通-100、聚乙二醇中的至少一种。
4、一种权利要求1所述抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的使用方法,其特征在于,包括下述步骤:
(1)样品准备:样品为空腹血清或血浆或体液,样品在低温条件下保存;
(2)采用全自动生化仪对步骤(1)的样品进行检测,具体参数如下:
方法:速率法     样品/试剂:1/9
主波长:405nm    反应温度:37℃
副波长:505nm    反应时间:10min
R1:169μl    R2:56μl    样品:25μl
5、根据权利要求4所述抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的使用方法,其特征在于,所述空腹血清或血浆采用肝素抗凝,0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液;或采用EDTA抗凝,1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液。
CNA2009100595177A 2009-06-05 2009-06-05 一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法 Pending CN101571537A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2009100595177A CN101571537A (zh) 2009-06-05 2009-06-05 一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2009100595177A CN101571537A (zh) 2009-06-05 2009-06-05 一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101571537A true CN101571537A (zh) 2009-11-04

Family

ID=41230939

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2009100595177A Pending CN101571537A (zh) 2009-06-05 2009-06-05 一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101571537A (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102967571A (zh) * 2012-12-24 2013-03-13 北京利德曼生化股份有限公司 检测α-L-岩藻糖苷酶的液体单试剂及其制备方法
CN104359846A (zh) * 2014-12-05 2015-02-18 重庆中元生物技术有限公司 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒
CN104388532A (zh) * 2014-12-05 2015-03-04 重庆乾德生物技术有限公司 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒
CN104458617A (zh) * 2014-12-05 2015-03-25 重庆中元生物技术有限公司 一种α-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法
CN105238848A (zh) * 2015-10-14 2016-01-13 武汉生之源生物科技有限公司 一种α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及制备方法
CN106018303A (zh) * 2016-07-12 2016-10-12 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定α-L-岩藻糖苷酶的试剂盒
CN111366715A (zh) * 2018-12-25 2020-07-03 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒
CN112986164A (zh) * 2021-05-18 2021-06-18 上海执诚生物科技有限公司 一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用
CN114924088A (zh) * 2022-05-09 2022-08-19 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种强抗干扰且稳定的afu检测试剂盒及其制备方法

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102967571A (zh) * 2012-12-24 2013-03-13 北京利德曼生化股份有限公司 检测α-L-岩藻糖苷酶的液体单试剂及其制备方法
CN104359846A (zh) * 2014-12-05 2015-02-18 重庆中元生物技术有限公司 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒
CN104388532A (zh) * 2014-12-05 2015-03-04 重庆乾德生物技术有限公司 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒
CN104458617A (zh) * 2014-12-05 2015-03-25 重庆中元生物技术有限公司 一种α-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法
CN105238848B (zh) * 2015-10-14 2019-03-15 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及制备方法
CN105238848A (zh) * 2015-10-14 2016-01-13 武汉生之源生物科技有限公司 一种α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及制备方法
CN106018303A (zh) * 2016-07-12 2016-10-12 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定α-L-岩藻糖苷酶的试剂盒
CN111366715A (zh) * 2018-12-25 2020-07-03 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒
CN111366715B (zh) * 2018-12-25 2024-04-12 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒
CN112986164A (zh) * 2021-05-18 2021-06-18 上海执诚生物科技有限公司 一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用
CN112986164B (zh) * 2021-05-18 2021-08-24 上海执诚生物科技有限公司 一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用
CN114924088A (zh) * 2022-05-09 2022-08-19 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种强抗干扰且稳定的afu检测试剂盒及其制备方法
CN114924088B (zh) * 2022-05-09 2023-09-26 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种强抗干扰且稳定的afu检测试剂盒及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101571537A (zh) 一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法
CN104267178B (zh) 一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒
CN109153992A (zh) 生物样本中游离核酸的保存
Matusiewicz et al. Plasma lactate dehydrogenase: a marker of disease activity in cryptogenic fibrosing alveolitis and extrinsic allergic alveolitis?
CN102141568A (zh) 一种稳定的液体单试剂血糖试剂盒
Garello et al. Evaluation of Hepatic Function in Liver Cirrhosis (Clinical Utility of Galactose Elimination Capacity, Hepatic Clearance of D-Sorbitol, and Laboratory Investigations)
CN101469344A (zh) 一种稳定的酶法测定唾液酸液体双试剂及其应用
CN102967571A (zh) 检测α-L-岩藻糖苷酶的液体单试剂及其制备方法
Dwenger et al. Bronchoalveolar lavage fluid and plasma proteins, chemiluminescence response and protein contents of polymorphonuclear leukocytes from blood and lavage fluid in traumatized patients
CN108041022A (zh) 一种新型的血浆游离dna和血细胞保存液
Magid et al. On the quantitation of Iso-amylases in serum and the diagnostic value of serum pancreatic type amylase in chronic pancreatitis
Lujambio et al. Estimation of glomerular filtration rate based on serum cystatin C versus creatinine in a Uruguayan population
Muhie Causes and Clinical Profiles of Ascites at University of Gondar Hospital, Northwest Ethiopia: Institution‐Based Cross‐Sectional Study
Tulsiani et al. Changes in plasma hydrolase activities in hereditary and streptozotocin-induced diabetes
Lugonja et al. Electrochemical monitoring of the breast milk quality
Khanna et al. Treating fungal infections.
CN102417921A (zh) 一种抗胆红素干扰的尿酸酶法测定试剂及其使用方法
Kallet et al. Urine beta glucuronidase activity in urinary tract disease
Kim et al. β-Glucuronidase studies in gastric secretions from patients with gastric cancer
Weinkove ACP Broadsheet No 127: April 1991. Measurement of catecholamines and their metabolites in urine.
CN105223192A (zh) 一种糖化血清蛋白检测试剂及其应用
Bottrill The use of biomarkers as alternatives to current animal tests on food chemicals
Lombardo et al. Plasma lysosomal glycohydrolases in a general population
CN104865210A (zh) 一种α-岩藻糖苷酶测定液体单一试剂
CN101173902A (zh) N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶诊断试剂盒及N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20091104