CN101571537A - 一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及提供一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。本发明的试剂为液体双试剂,具有良好的抗肝素干扰性能和优良的稳定性。采用速率比色法,可以在半/全自动生化仪上使用。本品采用新型底物,配方中同时加入了抗肝素干扰的抗干扰剂,试剂具有灵敏度高、抗干扰性能强的特点;本品加入选定的稳定剂,使得试剂具有良好的稳定性,温度在2-8度保存(避光密封)12个月不影响其性能。本试剂可以广泛的用于原发性肝癌的早期诊断、健康体检、肝部疾病普查等。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体地,涉及一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。
背景技术
α-L-岩藻糖苷酶(Fucosidase,AFU,α-L-岩藻糖苷-岩藻糖水解酶,EC3.2.1.51)属溶酶体酸性水解酶类,存在于人体肝、脑、肺、肾、胰、纤维细胞和白细胞等的溶酶体内,血清及尿液中亦含有一定量的酶。AFU的主要生理功能是参与含岩藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子的分解代谢。遗传性AFU缺乏症患者,从上述生物大分子中水解岩藻糖基的反应受阻,引起岩藻糖蓄积病,患儿多在5~6岁死亡。血清AFU测定,过去主要用于岩藻糖蓄积病的诊断,80年代以来,国内外有许多文献报道,在肝细胞癌时,血清AFU活力升高,其敏感性及特异性均较好,尤其对甲胎蛋白阴性肝细胞癌与肝脏其他占位性病变的鉴别诊断有着重要的临床参考价值
血清AFU作为原发性肝癌诊断的一个新标记物,其敏感性和特异性良好。迄今血清甲胎蛋白水平测定仍是原发性肝癌临床诊断最特异的肿瘤标记物,然而,在甲胎蛋白阴性的原发性肝癌病例中,大约有70~85%出现AFU阳性结果,而且小肝癌(肿瘤直径<3CM)患者血清AFU的阳性率高于甲胎蛋白。同时测定AFU活性与血清甲胎蛋白水平可使原发性肝癌的阳性检出率从检测甲胎蛋白的70%左右提高到90~95%左右。另外,对肝细胞癌的疗效观察、监测复发有重要参考价值。肝癌术后AFU活性很快下降,其下降速度根据切除肝标本断面血管内有无癌栓而不同。有癌栓者术后两周内AFU不能降至正常,而无癌栓者术后一周内即可恢复正常水平。若以后AFU水平再度上升,则提示肝癌复发。因此,检测血清AFU活性,对肝癌高发人群的筛查、肝癌的早期诊断以及肝癌的疗效观察均有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗干扰性好的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是:一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,所述试剂为液体双试剂,其中一种试剂R1的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸 0.10-100g/L,
磷酸盐: 0.10-100g/L,
稳定剂: 0.1-10g/L;
其中第二种试剂R2的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸MES: 0.1-100g/L,
EDTA-Na2: 0.01-10g/L,
稳定剂: 0.1-10g/L,
NaCl: 0.05-25g/L,
2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷:0.05-20g/L,
醇: 1-100g/L,
抗干扰剂: 1-10g/L。
具体地,所述稳定剂为二元醇、三元醇、多元醇中的至少一种;所述抗干扰剂为吐温-20、吐温-80、司盘-60、月桂醇聚氧乙烯醚、曲拉通-100、聚乙二醇中的至少一种;其中磷酸盐可以采用磷酸钠、磷酸二氢钠等,醇为甲醇、乙醇或多元醇等。
一种上述抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的使用方法,包括下述步骤:
(1)样品准备:样品为空腹血清或血浆或体液,样品在低温条件下保存;
(2)采用全自动生化仪对步骤(1)的样品进行检测,具体参数如下:
方法:速率法 样品/试剂:1/9
主波长:405nm 反应温度:37℃
副波长:505nm 反应时间:10min
R1:169μl R2:56μl 样品:25μl
步骤(1)中空腹血清或血浆采用肝素抗凝,0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液;或采用EDTA抗凝,1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液;样品中α-L-岩藻糖苷酶在室温条件下可稳定8小时,在2℃~8℃可稳定7天,在-20℃保存可稳定2个月。
综上,本发明的有益效果是:本发明的试剂为液体双试剂,具有良好的抗肝素干扰性能和优良的稳定性。采用速率比色法,可以在半/全自动生化仪上使用。本品采用新型底物,配方中同时加入了抗肝素干扰的抗干扰剂,试剂具有灵敏度高、抗干扰性能强的特点;本品加入选定的稳定剂,使得试剂具有良好的稳定性,温度在2-8度保存(避光密封)12个月不影响其性能。本试剂可以广泛的用于原发性肝癌的早期诊断、健康体检、肝部疾病普查等。
具体实施方式
实施例1:
(1)样品准备:样品为空腹血清或血浆(肝素抗凝,0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液;EDTA抗凝,1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液)或体液(需离心澄清)。样品应在低温条件下运输保存,样品中α-L-岩藻糖苷酶室温可稳定8小时,在2℃~8℃可稳定7天。-20℃保存可稳定2个月。
(2)按以下成分和用量配制α-L-岩藻糖苷酶诊断试剂:
R1:
2-吗啉乙磺酸(MES) 0.10-100g/L
磷酸盐: 0.10-100g/L
稳定剂: 0.1-10g/L
R2:
2-吗啉乙磺酸(MES): 0.1-100g/L
EDTA-Na2: 0.01-10g/L
稳定剂: 0.1-10g/L
NaCl: 0.05-25g/L
MG-CNPF: 0.05-20g/L
醇: 1-100g/L
抗干扰剂: 1-10g/L
上述MG-CNPF为MG-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷,各组分及其含量具体为,R1中2-吗啉乙磺酸(MES)为0.10-100g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;磷酸盐为0.10-100g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;稳定剂为0.10-10g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10g/L均可。R2中2-吗啉乙磺酸(MES)为0.10-100g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;EDTA-Na2为0.01-10g/L之间的任意值,具体为0.01、0.1、0.5、1、2、4、8、10均可;稳定剂为0.1-10g/L之间的任意值,具体为0.1、0.5、1、2、4、8、10均可;NaCl为0.05-25g/L之间的任意值,具体为0.05、0.1、0.5、1、2、4、8、10、15、20、24、25均可;MG-CNPF为0.05-50g/L之间的任意值,具体为0.05、0.1、0.5、1、2、4、8、10、15、20均可;醇为1-100g/L之间的任意值,具体为1、2、4、8、10、20、40、60、80、90、100g/L均可;抗干扰剂为1-10g/L之间的任意值,具体为1、2、4、8、10均可。
上述试剂溶解完全后,分装入瓶,制成液体双试剂,直接使用。在日立7170全自动生化仪上按照以下参数设定:
方法:速率法样品/试剂:1/9
主波长:405nm 反应温度:37℃
副波长:505nm 反应时间:10min
R1:169μl R2:56μl 样品:25μl
反应方向为正反应,延迟时间约1分钟,检测时间约2分钟。
加入样品和试剂后,使之混合并发生反应,最终将反应物置于生化仪上,检测主波长405nm下的吸光度的上升速度,从而计算出α-L-岩藻糖苷酶的活性大小。
以下通过对本发明的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的相关实验数据,对其有益效果做进一步说明,具体实验数据如下:
1、抗甘油三酯干扰(mmol/L)
2、柠檬酸干扰(mol/l)
3、EDTAK2干扰(mg/ml)
4、VC(mg/l)干扰
5、血红蛋白(g/L)干扰
6、胆红素(μmol/L)干扰
7、抗肝素干扰实验(U/ml)
8.开瓶稳定性
低值质控品:批号:050711,靶值38U/L;
高值质控品:批号:050711,靶值134U/L。
单位:U/L
结论:开瓶32天测定结果均未超出第一天结果的10%,符合设计标准的要求。
上述实验中,M代表现有技术单试剂,S代表本发明试剂,K代表现有技术双试剂。
M、S试剂的组分及含量为:
M:R:Good缓冲液 30mmol/l
稳定剂 适量
K:R1:Good缓冲液 10mmol/l
稳定剂 适量
R2:2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷:50mmol/l
稳定剂 适量
通过上述实验证明,本发明试剂抗干扰性明显优于现有技术的单试剂及双试剂、具有好的抗干扰效果。
Claims (5)
1、一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,其特征在于,所述试剂为液体双试剂,其中一种试剂R1的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸 0.10-100g/L,
磷酸盐: 0.10-100g/L,
稳定剂: 0.1-10g/L;
其中第二种试剂R2的组分及含量为:
2-吗啉乙磺酸MES: 0.1-100g/L,
EDTA-Na2: 0.01-10g/L,
稳定剂: 0.1-10g/L,
NaCl: 0.05-25g/L,
2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷:0.05-20g/L,
醇: 1-100g/L,
抗干扰剂: 1-10g/L。
2、根据权利要求1所述的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,其特征在于,所述稳定剂为二元醇、三元醇、多元醇中的至少一种。
3、根据权利要求1所述的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂,其特征在于,所述抗干扰剂为吐温-20、吐温-80、司盘-60、月桂醇聚氧乙烯醚、曲拉通-100、聚乙二醇中的至少一种。
4、一种权利要求1所述抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的使用方法,其特征在于,包括下述步骤:
(1)样品准备:样品为空腹血清或血浆或体液,样品在低温条件下保存;
(2)采用全自动生化仪对步骤(1)的样品进行检测,具体参数如下:
方法:速率法 样品/试剂:1/9
主波长:405nm 反应温度:37℃
副波长:505nm 反应时间:10min
R1:169μl R2:56μl 样品:25μl
5、根据权利要求4所述抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的使用方法,其特征在于,所述空腹血清或血浆采用肝素抗凝,0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液;或采用EDTA抗凝,1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液。
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Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102967571A (zh) * | 2012-12-24 | 2013-03-13 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 检测α-L-岩藻糖苷酶的液体单试剂及其制备方法 |
CN104359846A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-02-18 | 重庆中元生物技术有限公司 | 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒 |
CN104388532A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-04 | 重庆乾德生物技术有限公司 | 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒 |
CN104458617A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 重庆中元生物技术有限公司 | 一种α-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法 |
CN105238848A (zh) * | 2015-10-14 | 2016-01-13 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及制备方法 |
CN106018303A (zh) * | 2016-07-12 | 2016-10-12 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定α-L-岩藻糖苷酶的试剂盒 |
CN111366715A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-07-03 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒 |
CN112986164A (zh) * | 2021-05-18 | 2021-06-18 | 上海执诚生物科技有限公司 | 一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用 |
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Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102967571A (zh) * | 2012-12-24 | 2013-03-13 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 检测α-L-岩藻糖苷酶的液体单试剂及其制备方法 |
CN104359846A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-02-18 | 重庆中元生物技术有限公司 | 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒 |
CN104388532A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-04 | 重庆乾德生物技术有限公司 | 一种检测α-L-岩藻糖苷酶含量的试剂盒 |
CN104458617A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 重庆中元生物技术有限公司 | 一种α-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法 |
CN105238848B (zh) * | 2015-10-14 | 2019-03-15 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及制备方法 |
CN105238848A (zh) * | 2015-10-14 | 2016-01-13 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及制备方法 |
CN106018303A (zh) * | 2016-07-12 | 2016-10-12 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定α-L-岩藻糖苷酶的试剂盒 |
CN111366715A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-07-03 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒 |
CN111366715B (zh) * | 2018-12-25 | 2024-04-12 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒 |
CN112986164A (zh) * | 2021-05-18 | 2021-06-18 | 上海执诚生物科技有限公司 | 一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用 |
CN112986164B (zh) * | 2021-05-18 | 2021-08-24 | 上海执诚生物科技有限公司 | 一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用 |
CN114924088A (zh) * | 2022-05-09 | 2022-08-19 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种强抗干扰且稳定的afu检测试剂盒及其制备方法 |
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