CN111366715A

CN111366715A - 抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒

Info

Publication number: CN111366715A
Application number: CN201811591539.3A
Authority: CN
Inventors: 王红; 王嘉鹏; 张裕平
Original assignee: Shenzhen Mindray Bio Medical Electronics Co Ltd
Current assignee: Shenzhen Mindray Bio Medical Electronics Co Ltd
Priority date: 2018-12-25
Filing date: 2018-12-25
Publication date: 2020-07-03
Anticipated expiration: 2038-12-25
Also published as: CN111366715B

Abstract

本申请公开了一种抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒。本发明的用于血液样本检测中消除肝素干扰的抗肝素干扰剂包括1g/L～100g/L的至少一种式I所示的化合物，其中n为大于等于10的整数。

Description

抗肝素干扰剂及抗肝素干扰的试剂盒

技术领域

本申请涉及在对血液样本的检测中消除肝素的干扰的试剂，特别涉及对葡萄糖和胆红素的测定中肝素干扰的消除。

背景技术

在临床检验工作中，为缩短样本周转时间(TAT)和防止生化仪器样本针被堵，不少临床检验场景下均会使用肝素锂或者肝素钠抗凝管采集常规生化项目血样本。然而肝素会对很多生化检测产生干扰，也已经开展了很多消除肝素干扰的研究。

然而生化试剂种类繁多，不同生化试剂由于反应原理的限制其缓冲体系、pH值等因素不同，甚至是同一种生化试剂因不同厂家不同体系等原因也常常会出现试剂抗肝素干扰的能力千差万别。还有些生化试剂项目具备一定抗肝素干扰的能力，却由于同规格样本管采集样本量过少，肝素浓度被放大，造成抗肝素干扰能力不足，进而导致检测结果与实际结果相差甚远，影响临床判断。

因此，仍存在能更有效消除肝素对血液样本检测的干扰的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在对血液样本检测中、尤其是在葡萄糖和胆红素的检测中能够更有效消除肝素干扰的抗肝素干扰剂和能够消除肝素干扰的试剂盒。

为此，本发明的第一方面提供一种用于血液样本检测中消除肝素干扰的抗肝素干扰剂，所述抗肝素干扰剂包括1g/L～100g/L的至少一种式I所示的化合物：

其中，n为大于等于10的整数。

式I所示的化合物中n的取值越大，越有利于消除肝素的干扰。然而n值过大一方面可能影响正常的检测，另一方面对环境不利。

根据优选的实施方式，式I所示的化合物中，n为10～40的整数，优选n为21～40的整数。

根据本发明，所述抗肝素干扰剂优选包括5g/L～100g/L，更优选10g/L～80g/L的式I所示化合物。

式I所示化合物在抗肝素干扰剂中的浓度可在一定范围内变化。总的来说，式I化合物适宜的浓度与所具体选择的式I化合物相关。为获得理想的抗肝素干扰的效果，尤其是在有可能因采样量的波动造成的肝素浓度增加的情况下，可通过选择合适的式I化合物和与合适的浓度来实现。

举例来说，当选择n值较小的式I化合物时，可选择较大的浓度，以获得优化的效果。而n值较大的式I化合物则可在相对较低的浓度下获得较佳效果。

可列举的实例有：

n＝35～40的式I化合物的较佳浓度为1～50g/L，更佳地为5～20g/L。具体的浓度例如：5g/L、8g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L等；

n＝10～34的式I化合物的较佳浓度为20～100g/L，优选50～100g/L，特别优选50～80g/L，具体地例如：20g/L、30g/L、40g/L、50g/L、60g/L、70g/L等。

更具体地，n＝40的式I化合物的较佳浓度为1～50g/L，更佳地为5～20g/L；n＝21的式I化合物的较佳浓度为20～80g/L；以及n＝10的式I化合物的较佳浓度为50～100g/L。

根据进一步的实施方式，所述抗肝素干扰剂还可包括0.1～5g/L的至少一种式II所示的化合物：

RCONH(CH₂)_mN⁺(CH₃)₂CH₂COO^- (II),

其中R为C12～C18烷基，m＝2或3。

式II所示化合物为一种两性离子表面活性剂。该表面活性剂有助于以上式I所示化合物的溶解和分散，从而使式I所示化合物更好地起到消除肝素干扰的作用。特别是在以上式I所示化合物的浓度较高的情况下，式II所示化合物能够使式I所示化合物更好地溶解，抵抗由于外界温度、缓冲体系pH值等变化引起的对均一稳定性的不利影响。尤其当选择n值较小的式I化合物或者采用较大浓度的式I化合物时，为获得检测体系的均一稳定，可组合使用式II所示的化合物。

具体地，式II所示的化合物可为选自月桂酰胺丙基甜菜碱、椰油酰胺丙基甜菜碱和十八酰胺丙基甜菜碱中的至少一种。

根据较佳的实施方式，当组合使用式I和式II所示的化合物时，所述抗肝素干扰剂包括1g/L～5g/L的式II所示的化合物。

根据该较佳的实施方式，所述抗肝素干扰剂包括20g/L～100g/L，优选50g/L～80g/L的式I所示的化合物。

可列举的实例有：

浓度为50g/L～100g/L的n＝10～20的式I化合物与浓度2g/L～5g/L的式II化合物的组合；

浓度为20g/L～100g/L的n＝21～35的式I化合物与浓度1g/L～5g/L的式II化合物的组合；优选浓度为50g/L～80g/L的n＝21～35的式I化合物与浓度2g/L～5g/L的式II化合物的组合。

特别优选的式II所示的化合物为月桂酰胺丙基甜菜碱或椰油酰胺丙基甜菜碱，尤其是椰油酰胺丙基甜菜。

有利地，可以根据式I所示的化合物的n值和浓度来选择式II所示的化合物的浓度。例如在式I所示的化合物的浓度相同的情况下，n值越小，则需要选择浓度越高的II所示的化合物，以达到较好的抗干扰效果。

根据另一种进一步的实施方式，所述抗肝素干扰剂由10g/L～80g/L的所述式I所示化合物组成，其中，n为大于等于21的整数，优选n＝21～40，尤其优选n＝21和/或40。优选地，所述抗肝素干扰剂由10g/L～50g/L的所述式I所示化合物组成，其中，n为21～40的整数，特别优选n为40。

可列举的实例有：

n＝35～40的式I化合物的较佳浓度为1～50g/L，更佳地为5～20g/L。具体的浓度例如：5g/L、8g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L等。

更具体地，如n＝40的式I化合物的较佳浓度为1～20g/L，更佳地为5～20g/L。具体的浓度例如：5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、15g/L、20g/L等。

本发明的抗肝素干扰剂可单独加入到所述血液样本中，或者所述抗肝素干扰剂与至少一种所述用于血液样本检测的试剂一起加入到所述血液样本中。

本发明的第二方面提供一种血液样本检测试剂盒，所述试剂盒包括以上定义的抗肝素干扰剂。

根据具体实施方式，所述血液样本检测试剂盒是葡萄糖检测试剂盒或胆红素检测试剂盒。

所述葡萄糖检测试剂盒包括用于己糖激酶法的第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述抗肝素干扰剂，所述第二试剂包含己糖激酶。

所述胆红素检测试剂盒可为直接胆红素检测试剂盒，也可为总胆红素检测试剂盒。

所述胆红素检测试剂盒包括用于钒酸盐氧化法的第一试剂和第二试剂，其中所述第一试剂包含所述抗肝素干扰剂，所述第二试剂包括偏钒酸盐。

本发明采用含有式I所示化合物的抗肝素干扰剂能够有效消除血液样本检测中肝素对检测的干扰。特别是对于采血量较低的情况下(此时肝素的干扰浓度较高)，仍可有效消除肝素的干扰。进一步地，本发明进一步采用式I所示化合物和式II所示化合物的组合的实施方式，能够获得式I化合物(特别是乙氧基单元数较低的式I化合物)在检测体系中的良好溶解和分散，从而进一步增加了本发明的抗肝素干扰剂消除肝素干扰的能力，具有更优的效果。

附图说明

图1分别示出了实施例1中采用市售葡萄糖检测试剂盒分别对血清和血浆样本检测的血浆/血清样本拟合回归图(A)和经本发明抗肝素干扰剂优化的葡萄糖检测试剂盒分别对血清和血浆样本检测的血浆/血清样本拟合回归图(B)。

图2分别示出了实施例2中采用市售直接胆红素检测试剂盒分别对血清和血浆样本检测的血浆/血清样本拟合回归图(A)和经本发明抗肝素干扰剂优化的直接胆红素检测试剂盒分别对血清和血浆样本检测的血浆/血清样本拟合回归图(B)。

具体实施方式

下面将结合本发明具体实施例及附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。

实施例1：

某市售葡萄糖(Glu)测定试剂盒(己糖激酶法)，不具备抗生素干扰能力，其说明书成份如下：

R1(试剂1)：

磷酸盐缓冲液 100mmol/L

G-6-PDH 20KU/L

ATP 10mmol/L

R2(试剂2)：

磷酸盐缓冲液 100mmol/L

己糖激酶 4.0mmol/l

NAD+ 0.5mmol/L

对该试剂盒的抗肝素干扰能力进行优化，在R1成份中分别添加本发明的抗肝素干扰剂(n值不同的式I化合物)，得到成份如下的抗肝素干扰的葡萄糖测定试剂盒：

R1：

R2：

磷酸盐缓冲液 100mmol/L

己糖激酶 4.0mmol/l

NAD+ 0.5mmol/L

分别收集40人份的用容量为5ml的非抗凝管和肝素抗凝管采集4ml血液样本。用市售的试剂盒和用添加了抗肝素干扰剂的试剂盒对用非抗凝管(即无肝素)和抗凝管(即有肝素)收集的血液样本分别进行检测。其中，抗肝素干扰剂分别使用具有不同的氧乙烯单元数(n值分别为10、21和40)的式I化合物，对比其在相同浓度下的抗肝素干扰的能力。采用经优化的葡萄糖己糖激酶法检测试剂盒与市售的葡萄糖己糖激酶法检测试剂盒分别在生化仪中对所收集的40人份的血液样本进行对比检测，抗肝素干扰能力以血浆样本(即肝素抗凝管采集的血液样本)对血清样本(即，非抗凝管采集的血液样本)的回归拟合方程及相关系数R²来表示，如下表1所示。

表1：

进一步地，图1对比了市售的试剂盒(A)和添加了n＝40的式I化合物试剂盒(B)的检测结果的拟合回归图。

由上表1和图1可见，优化后的试剂盒抗肝素干扰能力均得到提升，且随n值增大，肝素抗凝管与非抗凝管收集血液样本的检测结果具有逐渐增加的一致性。

实施例2：

某市销直接胆红素(D-bil)测定试剂盒(钒酸盐氧化法)，不具备抗高浓度肝素干扰能力，其说明书成份组成如下：

R1：

酒石酸盐缓冲液(pH2.6) 0.1mmol/L

表面活性剂

R2：

磷酸盐缓冲液(pH7.0) 10mmol/L

偏钒酸盐 4.0mmol/L

对该试剂盒的抗肝素干扰能力进行优化，在R1成份中分别添加不同浓度的本发明的抗肝素干扰剂(n＝40的式I化合物)，得到成份如下的抗肝素干扰的试剂盒：

R1：

酒石酸盐缓冲液(pH2.6) 0.1mmol/L

表面活性剂

式I化合物 5、10、20或50g/L

R2：

磷酸盐缓冲液(pH7.0) 10mmol/L

偏钒酸盐 4.0mmol/L

分别收集10人份用容量为5ml非抗凝管和肝素抗凝管采集的血液样本，其中用肝素抗凝管分别采集4ml、2ml和1ml的血液样本，以获得具有不同肝素浓度的血液样本。将市售的直接胆红素试剂盒和优化的直接胆红素试剂盒分别在生化仪中对所收集的血液样本进行对比检测。肝素干扰能力以血浆样本对血清样本的回归拟合方程及相关系数R²来表示，对比如下表2所示：

表2：

图2对比了市售的试剂盒(A)和添加了20g/L的式I化合物(n＝40)试剂盒(B)的检测结果的拟合回归图。

从表2和图2中可以看出n＝40的式I化合物在5～20g/L的浓度下，不同浓度肝素条件下试剂盒的抗肝素干扰能力(R²值)均随着式I化合物浓度的增加而得到明显的提升。在20g/L到50g/L浓度下，试剂盒的抗肝素干扰的能力基本相当，相关系数R²甚至减小，即检测体系的均一稳定性可能变差。

进一步用上述相同的方法进行实验，区别是将抗肝素干扰剂由本发明的n＝40的式I化合物分别替换为下表3所示的抗肝素干扰剂，对用肝素抗凝管采集的2ml的血液样本进行实验，肝素干扰能力以血浆样本对血清样本的回归拟合方程及相关系数R²来表示，对比如下表3所示：

表3：

CAPB：椰油酰胺丙基甜菜碱；LAPB：桂酰胺丙基甜菜碱。

由上表3可见，在仅采用n值为10或21的式I化合物来抗肝素干扰的情况下，同样出现当式I化合物的浓度增大到一定程度时，抗肝素干扰的能力变化不大，甚至R²有所下降。

加入少量本发明的式II化合物后，在一定程度上提升了试剂盒的抗肝素干扰的能力。特别是当式I所示化合物的浓度达到50g/L时，式II所示化合物的加入使R²得到提升，说明式II所示化合物增强了体系的均一稳定性。此外，随n值的降低，式I化合物消除肝素干扰的能力下降。由于较低n值的式I化合物对环境的污染较小，因此优选可以采用较大浓度的n值较低的式I化合物与少量的式II化合物一起来消除肝素的干扰。

实施例3：

某市销总胆红素(T-bil)测定试剂盒(钒酸盐氧化法)，不具备抗肝素干扰能力，其说明书成份组成如下：

R1：

枸橼酸酸盐缓冲液 0.1mol/L

表面活性剂适量

R2：

磷酸盐缓冲液 10mmol/L

偏钒酸盐 4.0mmol/l

对该试剂盒的抗肝素干扰能力进行优化，在R1成份中分别添加不同浓度的本发明的抗肝素干扰剂(式I化合物+式II化合物)，得到成份如下的抗肝素干扰的试剂盒：

R1：

R2：

磷酸盐缓冲液(pH7.0) 10mmol/L

偏钒酸盐 4.0mmol/l

收集40人份用5ml非抗凝管和肝素抗凝管采集的血液样本，各管均为4ml。用市售的试剂盒和用添加了抗肝素干扰剂的试剂盒对用非抗凝管(即无肝素)和抗凝管(即有肝素)收集的血液样本分别进行检测。其中，抗肝素干扰剂使用式I化合物(不同n值及不同浓度)和式II化合物的组合(参见表4)，对比其在不同配比下的抗肝素干扰的能力。经优化的试剂盒与市售的试剂盒分别在生化仪中对所收集的40人份的样本进行对比检测，抗肝素干扰能力以血浆样本对血清样本的回归拟合来表示，如下表4所示。

表4：

CAPB：椰油酰胺丙基甜菜碱；LAPB：月桂酰胺丙基甜菜碱。

由上表可见在该试剂盒中使用本发明的抗肝素干扰剂取得了与实施例2类似的结果。而且，椰油酰胺丙基甜菜碱对体系的均一稳定的效果较月桂酰胺丙基甜菜碱更优。

以上所述仅为本发明的优选实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.一种用于血液样本检测中消除肝素干扰的抗肝素干扰剂，所述抗肝素干扰剂包括1g/L～100g/L的至少一种式I所示的化合物：

其中，n为大于等于10的整数。

2.根据权利要求1所述的抗肝素干扰剂，其中式I所示的化合物中，n为10～40的整数，优选n为21～40的整数。

3.根据权利要求1或2所述的抗肝素干扰剂，其中式I所示化合物的浓度为5g/L～100g/L，优选为10g/L～80g/L。

4.根据权利要求1～3所述的抗肝素干扰剂，其中所述抗肝素干扰剂进一步包括0.1～5g/L的至少一种式II所示的化合物：

RCONH(CH₂)_mN⁺(CH₃)₂CH₂COO^- (II),

其中R为C12～C18烷基，m＝2或3。

5.根据权利要求4所述的抗肝素干扰剂，其中式II所示的化合物为选自月桂酰胺丙基甜菜碱、椰油酰胺丙基甜菜碱和十八酰胺丙基甜菜碱中的至少一种。

6.根据权利要求4或5所述的抗肝素干扰剂，其中式II所示的化合物的浓度为2g/L～5g/L。

7.根据权利要求4～6中任一项所述的抗肝素干扰剂，其中式I所示的化合物的浓度为20g/L～100g/L，优选为50g/L～80g/L。

8.根据权利要求1或2所述的抗肝素干扰剂，其中所述抗肝素干扰剂由10g/L～80g/L的所述式I所示化合物组成，其中，n为大于等于21的整数。

9.一种血液样本检测试剂盒，所述试剂盒包括根据权利要求1～8中任一项所述的抗肝素干扰剂。

10.根据权利要求9所述的血液样本检测试剂盒，所述血液样本检测试剂盒是葡萄糖检测试剂盒或胆红素检测试剂盒。

11.根据权利要求10所述的血液样本检测试剂盒，其中所述葡萄糖检测试剂盒包括用于己糖激酶法的第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述抗肝素干扰剂，所述第二试剂包含己糖激酶。

12.根据权利要求10所述的血液样本检测试剂盒，其中所述胆红素检测试剂盒为直接胆红素检测试剂盒或总胆红素检测试剂盒。

13.根据权利要求12所述的血液样本检测试剂盒，其中所述胆红素检测试剂盒包括用于钒酸盐氧化法的第一试剂和第二试剂，其中所述第一试剂包含所述抗肝素干扰剂，所述第二试剂包括偏钒酸盐。