CN106908612A - 一种抗肝素稳定的白蛋白检测试剂盒 - Google Patents
一种抗肝素稳定的白蛋白检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明试剂盒涉及到蛋白检测领域,主要是涉及到一种白蛋白检测试剂,试剂R中的链霉素和组胺物质按照一定比例组合,有效的结合了肝素分子,近而从一定程度上抑制了肝素分子在白蛋白检测时产生干扰影响,保证了检测的准确性。本发明试剂盒从很大程度上解决了目前白蛋白检测试剂不能准确的检测肝素类抗凝血浆样本的问题,从而为白蛋白检测方法学提供了新的研究资料,在不同层次上进一步完善了白蛋白检测方法学。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域,特别涉及到血清或血浆中白蛋白的含量检测。
背景技术
白蛋白是肝功能检测的一项重要指标,白蛋白含量是否正常能够反映出肝功能代谢是否发生紊乱,进而反映出肝脏的储备能力。正常人白蛋白含量一般在35-55g/L,加入检测结果高于或者低于这个范围,只能说明肝脏收到一定的损伤,咨询医生查明病因,保证机体的正常运行。
随着生活发展和社会进步,各种全自动生化分析仪的诞生和使用,白蛋白检测已经趋向于自动化检测。白蛋白的检测原理:白蛋白在pH4.2的环境中呈现离子状态,离子状态下的白蛋白能够与溴甲酚绿结合形成一种蓝绿色的大分子物质,该物质在600nm波长处有最大的吸光度,通过检测吸光度变化,吸光度变化与白蛋白的含量成线性关系,所以通过计算吸光度变化可以间接的计算出白蛋白的含量。但是该方法存在一定缺陷,当人体血液经肝素类处理后形成抗凝血浆检测时,检测值偏低,甚至出现负值,一直以来甘肃问题成为白蛋白检测的一个重要障碍。
鉴于以上问题,本人发明了一种抗肝素稳定的白蛋白检测试剂盒,该发明是基于白蛋白检测原理加入了能够与肝素分子螯合的物质,导致检测肝素抗凝血浆样本时,螯合掉肝素分子,排除其在检测时引起的干扰,进而保证了检测结果的准确性。
发明内容
本发明公开了一种抗肝素稳定的白蛋白检测试剂盒,在很大程度上解决了白蛋白检测试剂不抗肝素的问题,同时为白蛋白检测方法学的完善提供新的研究资料。
检验原理
在pH4.2的环境中,白蛋白以阳离子状态呈现,该白蛋白阳离子可以与溴甲酚绿结合形成一种蓝绿色大分子物质,该物质能够引起600nm处的吸光度变化,吸光度变化与白蛋白阳离子含量成线性关系,通过计算吸光度变化来计算白蛋白阳离子含量,根据标准液浓度进而计算出白蛋白的含量。
缓冲液 PH4.2
白蛋白 蓝绿色大分子物质
溴甲酚绿
应用本发明检测血清或血浆中白蛋白的含量,检测参数设置如下: 主波长600nm,辅波长750nm,样本量5μL,试剂R量300μL。
本发明一种抗肝素稳定的白蛋白检测试剂盒是一种液体型单试剂试剂盒:
试剂R组成为:
三羧甲基氨基缓冲液 0.01-0.1mol/L(pH4.0-4.5)
Triton X-405 0.1-1ml/L
叠氮钠 0.01-0.2g/L
氯化钠 0.9g/L
亚铁氰化钾 0.01-0.1g/L
链霉素 2.5-10mg/L
鱼精蛋白 2.5-10mg/L
维生素C氧化酶 2500U/L
溴甲酚绿 1-65mmol/L
羟基乙叉二膦酸 0.1-0.3g/L
本发明一种稳定的亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒,试剂R的选择依据是:三羧甲基氨基缓冲液提供一种稳定反应环境,保证白蛋白能够以白蛋白阳离子状态呈现。
Triton X-405表面活性剂,降低水几面的分子张力,加速反应进行。
叠氮钠作为防腐剂,作用防止试剂腐败变质,进而增加试剂的储藏时间。
氯化钠提供相当的盐离子浓度增强盐溶效应,0.9%的氯化钠溶液是人体血液中的氯化钠浓度,控制氯化钠的量在一定程度上模拟了人类血液内环境。
亚铁氰化钾,该物质有剧毒,但是能去除胆红素干扰,因此该物质作用主要是去除胆红素干扰。
链霉素和鱼精蛋白两者都可以与肝素分子结合,进而能去除由于肝素引起的干扰。
维生素C氧化酶主要是降低维生素在该反应中的干扰,保证检测结果准确有效。
溴甲酚绿,与白蛋白阳离子结合物质,结合的蓝绿色物质在600nm处波长下引起吸光度变化。
羟基乙叉二膦酸液体型水质稳定剂,增强试剂稳定性。
本发明可以应用到迪瑞、迈瑞、日立、东芝等系列的全自动化分析仪中进行自动化检测。
本发明试剂配合朗道校准品和质控品使用,主波长600nm,辅波长750nm,样本量5μL,试剂R量300μL,一般设置读数点为32-33点,不同仪器请做相应改动,本发明使用仪器为日立7180。和目前市场上的流通白蛋白检测试剂盒相比,本发明试剂盒可以处理肝素类的血浆样本问题。
附图说明:
图1是本发明试剂盒与对照试剂盒检测普通血清样本时相关性图谱。
图2是本发明试剂盒与对照试剂盒检测普通样本(含有肝素样本)时相关性图谱。
具体实施方式:
以下结合图表,实施例对本发明进行说明
实施例1
本发明在具体实施中,试剂R组成为:
三羧甲基氨基缓冲液 0.1mol/L(pH4.2)
Triton X-405 0.5ml/L
叠氮钠 0.05g/L
氯化钠 0.9g/L
亚铁氰化钾 0.05g/L
链霉素 2.5mg/L
鱼精蛋白 2.5mg/L
维生素C氧化酶 2500U/L
溴甲酚绿 50mmol/L
羟基乙叉二膦酸 0.3g/L
实施例2
试剂R组成为:
三羧甲基氨基缓冲液 0.1mol/L(pH4.1)
Triton X-405 0.5ml/L
叠氮钠 0.05g/L
氯化钠 0.9g/L
亚铁氰化钾 0.01g/L
链霉素 5mg/L
鱼精蛋白 2.5mg/L
维生素C氧化酶 2500U/L
溴甲酚绿 45mmol/L
羟基乙叉二膦酸 0.3g/L
实施例3
试剂R组成为:
三羧甲基氨基缓冲液 0.05mol/L(pH4.0)
Triton X-405 0.5ml/L
叠氮钠 0.05g/L
氯化钠 0.9g/L
亚铁氰化钾 0.01g/L
链霉素 5mg/L
鱼精蛋白 2.5mg/L
维生素C氧化酶 4000U/L
溴甲酚绿 60mmol/L
羟基乙叉二膦酸 1g/L
本发明试剂盒性能检测实验
肝素样本检测
为了检测本发明试剂盒和市场现流通的白蛋白检测试剂盒对肝素类样本的检测,我们从医院采取的血清样本和肝素样本,因为取得血清样本较多,分别将血清样本分成十份,制备成混合血清,一半加入肝素(肝素浓度与肝素抗凝管中相当),分别编号1、2、3、4、5、;肝1、肝2、肝3、肝4、肝5。肝素类抗凝血浆样本编号为6、7、8、9、10。采用配方为实施例1所述,检测结果如表1所示:
表1本发明试剂盒对照试剂对肝素和非肝素类样本检测结果
样本编号 | 本发明(g/L) | 对照(g/L) | 样本编号 | 本发明(g/L) | 对照(g/L) | 样本编号 | 本发明(g/L) | 对照(g/L) |
1 | 42.1 | 42.2 | 肝1 | 42.0 | 40.0 | 6 | 38.8 | 34.3 |
2 | 45.6 | 45.5 | 肝2 | 45.6 | 41.3 | 7 | 53.4 | 48.0 |
3 | 44.7 | 44.7 | 肝3 | 44.5 | 39.4 | 8 | 45.7 | 40.2 |
4 | 48.9 | 49.0 | 肝4 | 48.7 | 42.5 | 9 | 44.8 | 43.9 |
5 | 50.2 | 50.2 | 肝5 | 50.3 | 45.0 | 10 | 42.3 | 36.0 |
结合表1,说明本发明试剂在检测肝素类抗凝血浆时,基本不发生值的偏移,对结果几乎不产生影响,相比之下,对照试剂盒处理普通血清样本时本发明试剂盒与对照试剂盒基本没有区别,当普通样本中加入肝素类物质,对照试剂检测结果有了不同程度降低,部分样本偏出了正常范围,所以从侧面反映出本发明试剂盒处理肝素类样本的一种优势。
重复性实验
用本发明试剂盒与市场上流通的白蛋白检测试剂盒进行对比,以朗道938UN为校准品进行校准,朗道1005UN质控品作为样本进行重复性检测,采用实施例2配方进行检测,结果如表2所示:
结合表2说明,本发明试剂盒与对照试剂盒都能满足行业标准,变异系数在5%以内,但是分析不难发现,本发明试剂盒与对照试剂盒相比略占优势。
临床样本检测
本发明试剂盒同对比试剂盒对随进N=40个样本(带*为肝素抗凝血浆样本)进行测试,测试结果以表格的形式在下表进行体现,通过该表3录的数值,进而计算出,本发明试剂盒与市场流通的试剂盒的相关性。试剂采用实施例3配方。
表3本发明试剂与对照试剂临床检测结果
结合图表3、图1和图2说明本发明试剂盒对照试剂检测普通血清样本时,相关性r=0.9957,但是由于对照试剂不能有效的排除肝素引起的干扰,以至于普通样本和肝素类样本共同检测时,本发明试剂与对照试剂的相关性r=0.8167。
综上所述,本发明试剂盒,在很大程度上解决了白蛋白检测肝素类抗凝血浆结果偏低或者出现负值的情况,但是目前尚不是很确定本发明试剂盒能抵抗多少浓度的肝素类物质,所以本发明有待改进。
Claims (6)
1.一种抗肝素稳定的白蛋白检测试剂盒,其特征在于本发明试剂盒是单试剂液体型试剂盒。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于本发明试剂盒R试剂是由0.01-0.1mol/L的三羧甲基氨基缓冲液(pH4.0-4.5);表面活性剂为0.1-1ml/L;氯化钠0.9g/L;叠氮钠为0.01-0.2g/L;亚铁氰化钾为0.01-0.1g/L;肝素螯合剂2.5-10mg/L;维生素C氧化酶为2500U/L;溴甲酚绿为1-65mmol/L;稳定剂为0.1-0.3g/L。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于肝素螯合剂由硫酸铵、链霉素、组胺、鱼精蛋白中的一种或几种组成。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于肝素螯合剂是由链霉素和鱼精蛋白按照一定比例组成。
5.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于稳定剂是由D-吡喃葡萄糖苷,D-吡喃葡萄糖,羟基乙叉二膦酸中一种或几种组成。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于本发明试剂中的稳定剂是羟基乙叉二膦酸。
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