CN102741317A - 蛋白，多肽或肽药物递送用高分子及其制备方法，及蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物及其制备方法 - Google Patents

蛋白，多肽或肽药物递送用高分子及其制备方法，及蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及蛋白，多肽或肽药物递送用高分子及其制备方法，及包括其的蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物，更详细而言，涉及数平均分子量是7,000道尔顿以下的化学式1的聚乳酸衍生物化合物及其制备方法，及利用其的蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物及其制备方法。

Description

蛋白,多肽或肽药物递送用高分子及其制备方法,及蛋白,多肽或肽药物的缓释型组合物及其制备方法
【技术领域】
本发明涉及蛋白，多肽或肽药物递送用高分子及其制备方法，及包含其的蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物，更详细而言，涉及数平均分子量是7,000道尔顿以下的下示化学式1的聚乳酸衍生物化合物及其制备方法，及利用其的蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物及其制备方法：
［化学式1］
Figure BDA00001981662000011
在所述化学式1中，X，X’，Y，Z，R，m，n，a及b如在本说明书中定义。
【背景技术】
得益于生命工程学领域的飞跃性的发展，蛋白或肽的功能和作用被解明，这些的大量生产成为可能，从而诸蛋白或肽药物被商品化，另外，为适用这些的新药开发的努力在继续。
在蛋白或肽被经口施用的情况中，肠壁的通过困难，在消化道内容易地改性或被酶分解，所以活体利用率非常低，被开发成注射剂的形态。
在注射剂型的情况中，为解除因频繁的施用所致的患者的不便，尝试了为开发以1次施用持续长期药效的缓释型制剂的多样的方法，文献中介绍了这样的尝试的例（Khaled Al-Tahami et al.,"SmartPolymer Based Delivery Systems for Peptides and Proteins",RecentPatents on Drug Delivery&Formulation 2007,Vol.1,No.1,pp.65-71,2007;Fei Wu et al.,"Polymer-Based Sustained-Release Dosage Formsfor Protein Drugs,Challenges,and Recent Advances",AAPSPharmSciTech,Vol.9,No.4,pp.1218-1229,2008）。
作为商品化的缓释型蛋白制剂，有将接合（conjugation）聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）和蛋白的聚乙二醇化技术适用于干扰素
Figure BDA00001981662000021
GCSF
Figure BDA00001981662000022
天冬酰胺酶
Figure BDA00001981662000023
腺苷脱氨酶
Figure BDA00001981662000024
等的产品，这些是分子量5,000～50,000道尔顿的PEG和蛋白的接合体，对应于新颖的化合物，为应用于别的蛋白，必需要求生物学安全性及有效性的检验，在生产中有消耗高价的费用的缺点。
另一方面，虽然有将作为可生物降解性高分子的聚乳酸或聚乳酸-乙醇酸高分子作为微粒递送体利用而对于乙酸亮丙立德（
Figure BDA00001981662000025
Depot），奥曲肽
Figure BDA00001981662000026
乙酸戈舍瑞林双羟萘酸曲普瑞林（
Figure BDA00001981662000028
Depot）等的肽药物的缓释型制剂被商品化，但其持续释放效果等仍不令人满意。
对于蛋白药物，有人生长激素的缓释型剂型（
Figure BDA00001981662000029
Depot）唯一地取得US FDA的承认，但相比每天施用的剂型效果微小而在2004年从市场完全地撤出。
如此，对于蛋白或肽药物，利用至目前开发的聚乳酸或聚乳酸-乙醇酸高分子微粒的剂型仍具有初期过多释放及微小的持续释放效果等作为缓释型制剂应解决的课题。另外，因制备步骤中药物的改性及过多的药物损失所致的制备成本的上升等经济上的因素也被指为问题。
【发明概述】
【技术课题】
本发明旨在解决如所述的以往技术的问题，以提供无初期过多释放的问题，药物的持续释放性优秀，无毒性，从而作为蛋白，多肽或肽药物的缓释型递送用特别适合的高分子及药物递送体，包含其的蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物作为技术课题。
本发明的再另一侧面以提供不使用有机溶剂而效率性地制备根据本发明的缓释型组合物的方法作为技术课题。
【解决课题的技术方案】
为了解决所述的技术课题，本发明提供数平均分子量是7,000道尔顿以下的下示化学式1的聚乳酸衍生物化合物：
［化学式1］
Figure BDA00001981662000031
在所述化学式1中，
X及X'独立地是氢，烷基或芳基，
Y及Z独立地不存在或是碱金属，
m及n独立地是0～95的整数，且5<m+n<100，
a及b独立地是1～6的整数，
R是取代或未取代的-(CH2)k-，碳原子数是2～10的2价烯基（divalent alkenyl），碳原子数是6～20的2价芳基（divalent aryl）或这些的组合，其中k是0～10的整数。
其中“Y及Z独立地不存在”是指独立地连接到Y及Z的氧是带有负电荷的形态，即意指是-O-的形态。
根据本发明的另一侧面提供下示化学式2的聚乳酸衍生物化合物的制备方法，包括：（1）聚合游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物和二羧酸而得到在两侧末端具有羧酸的聚乳酸衍生物的阶段；及（2）将在所述（1）阶段得到的聚乳酸衍生物溶解于有机溶剂之后，向其中添加碱金属盐水溶液而得到聚乳酸衍生物的盐的阶段。
［化学式2］
Figure BDA00001981662000041
在所述化学式2中，X，X'，R，m，n，a及b如在本说明书中定义，Y’及Z’独立地是碱金属。
根据本发明的再另一侧面，提供数平均分子量是7,000道尔顿以下的下示化学式1的聚乳酸衍生物化合物和多价金属离子的络合物（complex）及包含其的缓释型组合物。
根据本发明的再另一侧面，提供包含：（i）蛋白，多肽或肽作为活性成分，（ii）所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物作为药物递送体，及（iii）多价金属离子的，蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物。
根据本发明的再另一侧面，提供包含（i）蛋白，多肽或肽作为活性成分，及（ii）化学式1的聚乳酸衍生物化合物和多价金属离子的络合物（complex）作为药物递送体的，蛋白，多肽，或者肽药物的缓释型组合物。此缓释型组合物包括在所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物和多价金属离子形成的复合体中包裹蛋白，多肽或肽等的活性成分的微粒。
根据本发明的再另一侧面提供制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其包括：（a）制备含有（i）蛋白，多肽或肽作为活性成分，及（ii）所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物的水溶液的阶段；及（b）将所述（a）阶段的水溶液滴加到包含多价金属离子的水溶液中而得到沉淀物的阶段。
【发明效果】
利用根据本发明的高分子的缓释型药物递送组合物，使作为活性成分的蛋白，多肽或肽的缓释型释放成为可能。另外，制备所述组合物的方法由于不使用有机溶剂，从而防止制备步骤中药物的改性，从而极大化药理效果，另外，不要求另外的有机溶剂除去步骤，进而可使蛋白，多肽或肽的包裹效率达到90%以上，从而可最小化制备步骤中药物的损失。
【附图说明】
图1是将在制备例1中制备的聚乳酸衍生物化合物溶解于CDCl3而得到的1H-NMR谱。
图2是将在实施例1中制备的所述化学式1的聚乳酸衍生物钠盐溶解于CDCl3而得到的1H-NMR谱。
图3是示在实验例1中得到的，在大鼠中试验含有人生长激素的剂型的药代动力学的结果的图。
图4是示在实验例2中得到的，给摘出脑垂体的大鼠皮下注射含有人生长激素的剂型之后测定生成的血中IGF 1浓度的结果的图。
图5是示在实验例2中得到的，给摘出脑垂体的大鼠皮下注射含有人生长激素的剂型之后测定体重的增加的结果的图。
图6是示在实验例3中得到的，在大鼠中试验含有红细胞生成素的剂型的药代动力学的结果的图。
图7是示在实验例4中得到的，在大鼠中试验含有依泽那肽的剂型的药代动力学的结果的图。
【发明详述】
以下，对于本发明更详细地说明。
【1．聚乳酸衍生物化合物及其制备方法】
根据本发明提供的，蛋白，多肽或肽药物的缓释型递送用聚乳酸衍生物化合物在两侧末端具有羧基，以下示化学式1表示：
［化学式1］
Figure BDA00001981662000061
在所述化学式1中，
X及X'独立地是氢，烷基或芳基，
Y及Z独立地不存在，或是碱金属，
m及n独立地是0～95的整数，且5<m+n<100，
a及b独立地是1～6的整数，
R是取代或未取代的-(CH2)k-，碳原子数是2～10的2价烯基（divalent alkenyl），碳原子数是6～20的2价芳基（divalent aryl）或这些的组合，其中k是0～10的整数。
其中“Y及Z独立地不存在”是指独立地连接到Y及Z的氧是带有负电荷的形态，即意指是-O-的形态。
根据本发明的1具体例，在所述化学式1中，X及X'独立地是用氢，碳原子数1～4的烷基或碳原子数1～4的烷基取代或未取代的碳原子数6的芳基，更具体而言是氢，甲基或苯基，再更具体而言是甲基。
根据本发明的1具体例，在所述化学式1中，Y及Z独立地不存在或是碱金属。Y及Z是碱金属的情况中，可具体性地以化学式2所示，不存在的情况中，化学式1的高分子末端意指阴离子形态，具体而言，可以化学式3所示，碱金属具体而言独立地是钠，钾或锂。
［化学式2］
Figure BDA00001981662000062
在所述化学式2中，X，X'，R，m，n，a及b如上定义，Y’及Z’独立地是碱金属；
［化学式3］
Figure BDA00001981662000071
在所述化学式3中，X，X'，R，m，n，a及b如上定义；
根据本发明的1具体例，R是-(CH2)k-，其中k是0～10的整数。
在所述化学式1中，在R是碳原子数是2～10的2价烯基或是碳原子数是6～20的2价芳基的情况中，这些可各自独立地被羟基或C1～C5烷基取代。
在所述化学式1中，m及n优选而言满足10<m+n<70。
根据本发明的优选的1具体例，所述聚乳酸衍生物化合物以下示化学式4表示：
［化学式4］
Figure BDA00001981662000072
在所述化学式4中，Y，Z，R，m，n，a及b如在本说明书中定义。
本发明的化学式1的聚乳酸衍生物化合物是水溶性，其数平均分子量是7,000道尔顿以下，优选而言500～7,000道尔顿，更优选而言700～5,000道尔顿，更加更优选而言1,000～4,000道尔顿。数平均分子量超过7,000道尔顿，则聚乳酸衍生物化合物不溶于水而不适合作为药物递送体利用。另外，数平均分子量是500道尔顿以下，则分子量小而体内分解太快而难以期待药物的持续释放。
本发明的聚乳酸衍生物化合物以二羧酸为中心，包含选自例如，聚乳酸，聚丙交酯，聚乙交酯，聚扁桃酸，聚己内酯及这些的共聚物的2个段。根据本发明的一实施例，所述聚乳酸衍生物化合物包含选自聚乳酸，乳酸和扁桃酸的共聚物，乳酸和乙醇酸的共聚物及乳酸和己内酯的共聚物的2个段。更具体性地，所述聚乳酸化合物包含聚乳酸的2个段。
作为所述二羧酸，优选而言可使用碳原子数3～10个的二羧酸，例如，草酸，丙二酸，苹果酸，琥珀酸，戊二酸，己二酸，庚二酸，辛二酸，壬二酸（azelaic acid），癸二酸（sebacic acid），十二碳二酸（dodecanedioic acid），或者这些的混合物，也可使用富马酸或马来酸等的C4～C12不饱和二羧酸，酞酸或对苯二甲酸等的C8～22芳基二羧酸。
本发明的化学式1的聚乳酸衍生物化合物的两末端是离子性，且两末端与碱金属离子经离子键合或未键合的，具体性地可各自是化学式2或化学式3的形态。所述末端的阴离子直接与多价金属离子键合，或在碱金属离子的情况中，发挥被多价金属离子取代而使可形成离子结合络合物（complex）的作用。
根据本发明的另一侧面提供所述化学式2的聚乳酸衍生物化合物的制备方法，其包括：（1）聚合游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物和二羧酸而得到在两侧末端具有羧酸的聚乳酸衍生物的阶段；及（2）将在所述（1）阶段得到的聚乳酸衍生物溶解于有机溶剂之后，向其中添加碱金属盐水溶液而得到聚乳酸衍生物的盐的阶段。
在本发明的聚乳酸衍生物化合物的制备方法的（1）阶段中，可作为单体使用的游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物可选自，例如，乳酸，丙交酯，乙交酯，扁桃酸，己内酯，及这些的混合物。对所述游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物和二羧酸的使用量的比无特别的限制，可在可得到化学式1的聚乳酸衍生物化合物的范围内自由地选择。根据本发明的1具体例，每100重量份的游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物可使用二羧酸1～20重量份。
更具体性地，在本发明的聚乳酸衍生物化合物的制备方法的（1）阶段中，将作为所述游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物的单体和碳原子数3-10个的二羧酸的混合物加热到80℃～180℃，经0.5～4小时除去水之后，于150～250℃的温度聚合反应10～48小时而可制备在两侧末端具有羧酸的聚乳酸衍生物。在所述的制备步骤过程中，在除去水之后的聚合反应中，当反应温度是150℃以下或反应时间是10小时以内，则得到所望的分子量的高分子变难，当反应温度是250℃以上或反应时间超过48小时，则有发生高分子的热分解的问题。
在本发明的聚乳酸衍生物化合物的制备方法的（2）阶段中，将在所述（1）阶段得到的在两侧末端具有羧酸的聚乳酸衍生物溶解于有机溶剂之后，向其中添加碱金属盐水溶液而得到化学式2的聚乳酸衍生物化合物。
所述碱金属可选自，例如碳酸氢钠，碳酸钠，碳酸氢钾，碳酸钾，碳酸锂及这些的混合物，具体而言，可使用碳酸氢钠或碳酸氢钾。作为所述有机溶剂，可使用水混溶性有机溶剂，具体而言，可使用乙腈或丙酮。在剂（2）阶段中，对所述在两侧末端具有羧酸的聚乳酸衍生物和碱金属盐的使用量的比无特别的限制，可在可得到化学式2的聚乳酸衍生物化合物的范围内自由地选择。根据本发明的1具体例，相对于在两末端具有羧酸的聚乳酸衍生物1摩尔，可使用碱金属盐2～10摩尔。
本发明的聚乳酸衍生物化合物的制备方法，在所述（2）阶段以后，可还包括向得到的高分子溶液添加例如氯化钠之后，将有机溶剂层分离并回收，从回收的有机溶剂层将有机溶剂真空干燥并除去的阶段，经此得到可化学式2的聚乳酸衍生物化合物。
【2．络合物，缓释型组合物及其制备方法】
根据本发明的另一侧面，提供作为药物递送体有用的，数平均分子量是7,000道尔顿以下的所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物和多价金属离子的络合物（complex）。
本发明的化学式1的聚乳酸衍生物如上所述，末端带有阴离子。从而，通过多价金属离子和2摩尔以上的所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物的离子键合而可形成络合物。在本发明的所述络合物中，多价金属离子可为2价或3价的金属离子，例如可为选自锌（Zinc），钙（Calcium），镁（Magnesium）及铁（Iron）的金属的多价离子。所述多价金属离子可作为例如，与这些金属的氯化盐相同的盐化合物的形态提供，但对此不特别地限制。
根据本发明的络合物的1具体例，所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物是先前说明的化学式3的聚乳酸衍生物化合物。
根据本发明的再另一侧面提供蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物，其包含：（i）多肽或肽作为活性成分蛋白，（ii）所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物作为药物递送体，及（iii）多价金属离子。
根据本发明的再另一侧面提供蛋白，多肽，或者肽药物的缓释型组合物，其包含：（i）多肽或肽作为活性成分蛋白，及（ii）化学式1的聚乳酸衍生物化合物和多价金属离子的络合物（complex）作为药物递送体。
根据本发明的缓释型组合物的1具体例，通过所述多价金属离子和2摩尔以上的所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物的离子键合而可形成络合物，此络合物发挥药物递送体的功能，在其内部包裹活性成分而形成微粒。
根据本发明的缓释型组合物的1具体例，所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物是先前说明的化学式3的聚乳酸衍生物化合物。
在本发明的缓释型组合物中，活性成分是蛋白，多肽或肽，在本说明书中这些术语中任一种单独使用的情况中，除特别地提及的情况外，应理解为指称全部蛋白，多肽或肽。
在本说明书中，术语"缓释型"，"缓释型递送"或"缓释型药物递送"意指通过1次施用长时间，例如72小时以上维持药物的有效血中浓度。尤其是多肽的一般性的施用途径是皮下，肌肉或静脉注射等，有为有效的治疗而应频繁注射的缺点。本发明的目的是开发及提供为解除因这样的频繁的施用的不便的缓释型递送体。
在本发明的缓释型组合物中，作为活性成分的例可举出：生长激素，红细胞生成素，单克隆抗体，粒细胞集落刺激因子，巨噬细胞集落刺激因子，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，血小板生成素，胰岛素样生长因子，上皮生长因子，血小板来源生长因子，成纤维细胞生长因子，转化生长因子，干扰素，白细胞介素，肿瘤坏死因子，链激酶，尿激酶，葡萄球菌激酶，DNA酶，葡萄糖脑苷脂酶，α半乳糖苷酶，依泽那肽，奥曲肽，胰岛素，高血糖素，黄体形成激素分泌激素，戈舍瑞林（Goserelin），亮丙瑞林（Leuprorelin），滤泡刺激激素，甲状腺刺激激素，夫替瑞林（Fertirelin），降钙素（Calcitonin），促皮质激素释放因子（Corticotropin Releasing Factor），脑促尿钠排泄肽（Brain Natriuretic Peptide），胸腺喷丁（Thymopentin），促皮质激素（Corticotropin），依降钙素（Elcatonin），β淀粉样蛋白（βAmyloid），曲普瑞林（Triptorelin），布舍瑞林（Buserelin），胸腺素（Thymosin），生长抑素（Somatostatin），丙氨瑞林（Alarelin），血管紧张素（Angiotensin），精氨加压素（Argipressin），阿托西班（Atosiban），比伐卢定（Bivalirudin），西曲瑞克（Cetrorelix），地洛瑞林（Deslorelin），去氨加压素（Desmopressin），依降钙素（Elcatonin），恩夫韦肽（Enfuvirtide），依替巴肽（Eptifibatide），GLP 1，戈那瑞林（Gonandorelin），赖氨酸加压素（Lyspressin），那法瑞林（Nafarelin），奈西立肽（Nesiritide），缩宫素（Oxytocin），普兰林肽（Pramlintide），胰泌素（Secretin），特立帕肽（Teriparatide），特利加压素（Terlipressin），替可克肽（Tetracosactide），伐普肽（Vapreotide）或这些的混合物。
在本发明的缓释型组合物中，可使用以本发明的缓释型组合物干燥重量为基准至0.01～60重量%，具体性地0.05～50重量%的所述活性成分。如果活性成分的含量达不到缓释型组合物干燥重量的0.01重量%，则得到旨在的药理效果变难，如果超过60重量%，则有因药物的初期过多释放所致的问题。
在本发明的缓释型组合物中，可以本发明的缓释型组合物干燥重量为基准包含39.9～99.9重量%，具体性地50～99重量%的所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物。所述聚乳酸衍生物化合物含量达不到缓释型组合物干燥重量的39.9重量%，则可有不可得到缓释型释放效果的问题，如果超过99.9重量%，则可有超过可用常规性的方法1次施用给人体的用量的问题。
在本发明的缓释型组合物中，可以本发明的缓释型组合物干燥重量为基准包含优选而言0.01～20重量%，更优选而言0.05～15重量%的所述多价金属离子。如果多价金属离子的含量达不到缓释型组合物干燥重量的0.01重量%，则可有不可得到缓释型释放效果的问题，如果超过20重量%，则有发生由金属离子的毒性的问题。
这样地形成的含有活性成分的高分子复合体在水溶液中作为粒子沉淀。
根据本发明的，含有多肽等的缓释型微粒组合物是5～250μm，具体性地50～150μm的均一的大小的微粒。
本发明的缓释型组合物除了所述的成分以外，可还含有：防腐剂，稳定化剂，可湿性粉剂或为渗透压调节的盐和/或缓冲液等的药剂学佐剂及其他治疗性地有用的物质。可将本发明的含有蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物分散于药学可使用的分散剂而施用给人体。作为所述分散剂的例，可举出：注射用蒸馏水，5%葡萄糖，生理盐水，是矿物油，单(mono)-，二(di)-及三(tri)-甘油酯等。
根据本发明的再另一侧面提供制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其包括：（a）制备含有（i）多肽或肽作为活性成分蛋白，及（ii）所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物的水溶液的阶段；及（b）将所述（a）阶段的水溶液滴加到包含多价金属离子的水溶液中而得到沉淀物的阶段。
具体性地，在本发明的缓释型组合物制备方法的（a）阶段中，可通过将活性成分和所述化学式2的聚乳酸衍生物化合物同时添加或首先添加1种成分后添加另一成分的依次添加而制备水溶液。例如，（a-1）将活性成分及所述化学式2的聚乳酸衍生物化合物溶解于水而制备水溶液；或者（a-2）首先将两末端是羧酸的聚乳酸衍生物及碱金属盐水溶液溶解于水而制备所述化学式2的聚乳酸衍生物化合物，然后向其中投入活性成分而制备水溶液；或者（a-3）首先将两末端是羧酸的聚乳酸衍生物及活性成分溶解于水，然后向其中投入碱金属盐水溶液而制备含有所述化学式2的聚乳酸衍生物化合物及活性成分的水溶液，由此可制备水溶液。
即，本发明的缓释型组合物的制备可将所述化学式2的聚乳酸衍生物化合物作为起始物质使用（a-1），或者，可从在两侧末端具有羧酸的聚乳酸衍生物出发，将其由碱金属盐变更为所述化学式2的聚乳酸衍生物化合物之后使用（a-2及a-3）。
根据本发明的缓释型组合物制备方法的1具体例，构成所述水溶液的水性介质可为：蒸馏水，或者选自乙酸盐，柠檬酸盐，甘氨酸盐，磷酸盐及碳酸盐的缓冲液的一种以上的缓冲液。蛋白，多肽或肽药物对于剂型的组成，尤其是pH敏感地反应，由此结构变化或活性可减小。
在本发明的缓释型组合物制备方法的所述（b）阶段中，将在所述（a）阶段得到的水溶液徐徐地滴加到包含多价金属离子的水溶液而使沉淀物形成。此时，活性成分分散到所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物与多价金属离子的络合物（complex）内部而沉淀。在此阶段，多价金属离子可为选自例如锌（Zinc），钙（Calcium），镁（Magnesium）及铁（Iron）的金属的多价离子。所述多价金属离子可以例如，与这些金属的氯化盐相同的盐化合物的形态提供，但对此不特别地限制。多价离子水溶液的浓度是1～300mg/ml，具体性地是1～100mg/ml。形成高分子络合物的情况中，多价金属离子与所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物的阴离子直接离子键合，或取代碱金属离子而进行离子键合而成为络合物。而且此络合物内部包裹多肽等的活性成分，这样地形成的含有活性成分的高分子复合体在水溶液中作为微粒沉淀。根据本发明的1具体例，可将包含所述（a）阶段的活性成分及所述化学式1的聚乳酸衍生物化合物的水溶液在（b）阶段滴加到以体积比1～30倍的多价离子水溶液而沉淀。
本发明的缓释型组合物制备方法在所述（b）阶段以后，可还包括离心在所述（b）阶段得到的沉淀物之后用水洗涤的（c）阶段。此（c）阶段可通过在维持低温，例如4℃的离心机中离心（b）阶段的沉淀物而分离上清液和沉淀物之后，将沉淀物用水洗涤的方式施行。
另外，本发明的缓释型组合物制备方法在所述（c）阶段以后，可还包括冷冻干燥在所述（c）阶段分离的沉淀物的（d）阶段。在此（d）阶段冷冻干燥时可添加冷冻干燥佐剂，作为冷冻干燥佐剂，包括：糖，糖醇或这些的混合物。所述糖可为选自乳糖，麦芽糖，蔗糖及海藻糖的一种以上，所述糖醇可为选自甘露糖醇，山梨糖醇，麦芽糖醇，木糖醇及乳糖醇的一种以上。在本发明的1具体例中，冷冻干燥佐剂的含量是以冷冻干燥组合物全体干燥重量为基准1～50重量%，更优选而言1～30重量%。
根据本发明的，含有多肽等的缓释型微粒组合物任选在（b），（c）或（d）阶段以后，通过利用电筛粉碎或超声波粉碎（sonication）方法等制备优选而言5～250μm，更优选而言50～150μm的均一的大小的微粒。
本发明的缓释型组合物制备方法由于不使用有机溶剂而使用水溶液，从而步骤中不要求另外的有机溶剂除去步骤，防止制备步骤中药物的变形而有可极大化药理效果的优点。另外，由于蛋白，多肽或肽的包裹效率是90%以上，所以可最小化制备步骤中药物的损失。
当根据本发明的缓释型组合物施用于体内时，构成复合体的高分子在体内分解而徐徐地释放包裹在内部的药物。在以往，缓释型，即，为延迟药物的释放时间而应使用分子量是数万道尔顿以上的高分子量的高分子，但这样的高分子量的高分子由于不溶于水，从而有在如微粒的递送体的制备步骤中应使用可引发蛋白或肽的变形的有机溶剂的缺点。但是，由于根据本发明的缓释型微粒组合物使用溶解于水的低分子量的高分子，所以缓释型组合物制备时有机溶剂的使用不必要。另外，由于由多价金属离子而高分子可形成络合物，所以如果将本发明的缓释型组合物施用于体内，则可得到优秀的持续释放效果。
以下通过制备例，实施例及实验例等更详细地说明本发明，但这些仅为说明本发明，本发明的范围不受此限。
【制备例1：聚乳酸衍生物的制备】
将D,L-乳酸500g（5.56mol）和琥珀酸（succinic acid）18.9g（0.16mol）放入1L的2口圆底瓶，设置为可边用磁棒搅拌，边进行氮吹入。将加热用油槽（Oil bath）加热到160℃，将氮以2000mL/min的流速度吹入反应物内部。反应中生成的水随着氮的流排出反应器外。经1小时除去水，将油槽加热到200℃。使反应24小时之后终止反应。其结果，得到不纯化的状态的两末端成羧酸的D,L-聚乳酸衍生物368g。图1显示对于制备的聚乳酸衍生物的NMR谱。用下示NMR分析法测定的结果，制备的聚乳酸衍生物的数平均分子量是2,315道尔顿。
<从1H-NMR扫描的峰面积计算数平均分子量>
［数学式1］
数平均分子量（道尔顿）={(A+B)/(C/N)}×72.1
在所述数学式1中，
A是D,L-聚乳酸衍生物的亚甲基质子的峰面积，
B是高分子末端D,L-乳酸衍生物的亚甲基质子的峰面积，
C是二羧酸的亚甲基质子的峰面积，
N是二羧酸的亚甲基质子的个数。
【制备例2：聚乳酸衍生物的制备】
除使用琥珀酸39.3g(0.33摩尔)外，用与制备例1相同的方法聚合聚乳酸衍生物。其结果，得到未纯化的状态的两末端成羧酸的聚乳酸衍生物348g，用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是1,155道尔顿。
【制备例3：聚乳酸衍生物的纯化】
将在制备例1中得到的聚乳酸衍生物100g和碳酸氢钠（NaHCO3）20g放入2L烧杯而添加蒸馏水1L。将混合物加热到60℃，边搅拌边溶解高分子1小时。溶解高分子的后，在常温将氯化氢（HCl）水溶液（1N）滴加到高分子水溶液而使高分子析出。将析出的高分子过滤，并用蒸馏水洗涤。重复3次洗涤及过滤过程而除去氯化氢。将得到的高分子冷冻干燥48小时。其结果，得到在两末端具有羧酸的，纯化的聚乳酸衍生物72.4g，用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是2,703道尔顿。
【制备例4：聚乳酸衍生物的制备】
除代替琥珀酸（succinic acid）使用戊二酸（glutaric acid）21.1g（0.16mol）外，用与制备例1相同的方法得到两末端成羧酸的聚乳酸衍生物381g，用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是2,360道尔顿。
【制备例5：聚乳酸衍生物的制备】
将D,L-乳酸500g（5.56mol）放入1L的2口圆底瓶，设置为可边用磁棒搅拌边进行氮吹入。将加热用油槽（Oil bath）加热到160℃，将氮以2000mL/min的流速度吹入反应物内部。反应中生成的水随着氮的流排出到反应器外。经1小时除去水，将油槽加热到200℃。使反应24小时之后终止反应。其结果，得到未纯化的状态的两末端各自成羟基和羧酸的D,L-聚乳酸。向其中添加琥珀酸酐35g（0.35mol），于120℃加热6小时，致使与是聚乳酸末端基团的羟基反应。将制备的聚乳酸衍生物用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是2,240道尔顿。
【实施例1：聚乳酸衍生物钠盐的制备】
向在制备例1中得到的聚乳酸衍生物100g添加乙腈150mL而溶解。向其中徐徐地添加150mL碳酸氢钠水溶液（0.1g/mL）。在常温搅拌2小时而使高分子中和而制备聚乳酸衍生物钠盐。
此后，通过盐析出法（salting out）而纯化制备的高分子。即，向反应结果溶液边搅拌边添加15g氯化钠（NaCl）而溶解，在分液漏斗中分层2小时而除去水溶液层。
向得到的有机溶剂层高分子溶液再次添加蒸馏水100mL和氯化钠10g而溶解，利用分液漏斗再次分层，除去水溶液层。将包含得到的高分子的有机溶剂层溶液于50℃旋转分馏而完全地除去有机溶剂和少量的蒸馏水。
向除去有机溶剂和蒸馏水的高分子添加无水丙酮500mL而使高分子溶解，将不溶解的沉淀物利用滤纸过滤而除去。将过滤的高分子溶液于50℃旋转分馏2小时而完全地除去丙酮。
将除去丙酮的高分子在50℃真空炉内真空干燥3天。其结果，得到在两末端具有羧酸钠盐的，纯化的聚乳酸衍生物的钠盐91g。将制备的聚乳酸衍生物盐的NMR谱显示于图2。用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是2,178道尔顿。
【实施例2：聚乳酸衍生物钠盐的制备】
利用在制备例2得到的聚乳酸衍生物100g，用与实施例1相同的方法得到两末端具有羧酸钠盐的，纯化的聚乳酸衍生物的盐93g，用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是1,125道尔顿。
【实施例3：聚乳酸衍生物钠盐的制备】
利用在制备例4得到的聚乳酸衍生物100g，用与实施例1相同的方法得到两末端具有羧酸钠盐的，纯化的聚乳酸衍生物的盐91g，用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是2,250道尔顿。
【实施例4：聚乳酸衍生物钠盐的制备】
利用在制备例5得到的聚乳酸衍生物100g，用与实施例1相同的方法得到两末端具有羧酸钠盐的，纯化的聚乳酸衍生物的盐90g，用所述NMR分析法测定的结果，其数平均分子量是2,080道尔顿。
【实施例5：含有人生长激素（human growth hormone，hGH）的缓释型组合物的制备】
将在实施例1制备的聚乳酸衍生物钠盐4.5g和人生长激素（3.0IU/mg）500mg溶解于20mL的水而制备hGH-高分子水溶液。
作为多价金属盐，准备氯化锌（ZnCl2）水溶液250mL（50mg/mL），搅拌此溶液，并向其中滴加所述hGH-高分子水溶液而生成含有人生长激素的组合物的沉淀物。将此混合物利用维持4℃的离心机以3,500rpm离心10分钟而分离上清液和沉淀物。
过滤沉淀物之后，加蒸馏水500mL而2次洗涤之后冷冻干燥。将干燥的组合物利用100～400目的筛过筛而得到50～150μm的微粒组合物。
将得到的冷冻干燥微粒组合物内的人生长激素利用下示的BCA分析（Micro BCA Protein Assay Kit，Thermo Scientific）定量。定量结果，hGH含量及包裹效率分别是9.54重量%及92.6%。
<利用BCA分析（Micro BCA Protein Assay Kit,ThermoScientific）的蛋白的含量及包裹效率测定>
（1）蛋白含量的测定
［数学式2］
Figure BDA00001981662000191
（2）蛋白包裹效率的测定
［数学式3］
Figure BDA00001981662000192
【实施例6：含有人生长激素的缓释型组合物的制备】
除使用在实施例1制备的聚乳酸衍生物钠盐4.75g和人生长激素（3.0IU/mg）250mg外，用与实施例5相同的方法制备含有人生长激素的微粒组合物。将制备的组合物内的人生长激素用所述BCA分析定量的结果，hGH含量及包裹效率分别是4.72重量%及91.7%。
【实施例7：含有人生长激素的缓释型组合物的制备】
除使用在实施例1制备的聚乳酸衍生物钠盐4.9g和人生长激素（3.0IU/mg）100mg外，用与实施例5相同的方法制备含有人生长激素的微粒组合物。将制备的组合物内的人生长激素用所述BCA分析定量的结果，hGH含量及包裹效率分别是1.93重量%及93.7%。
【实施例8：含有人生长激素的缓释型组合物的制备】
除使用在实施例2制备的聚乳酸衍生物钠盐外，用与实施例6相同的方法制备含有人生长激素的微粒组合物。将制备的组合物内的人生长激素用所述BCA分析定量的结果，hGH含量及包裹效率分别是4.72重量%及91.7%。
【实施例9：含有人生长激素的缓释型组合物的制备】
将在制备例3中纯化的聚乳酸衍生物钠盐4.9g，人生长激素（3.0IU/mg）100mg溶解于20mL的水后，向其中加0.3g碳酸氢钠（NaHCO3）而制备hGH-高分子水溶液。
作为多价金属盐，准备氯化锌（ZnCl2）水溶液250mL（50mg/mL），边搅拌此溶液边向其中滴加所述hGH-高分子水溶液而生成含有人生长激素的组合物的沉淀物。将此混合物利用维持4℃的离心机以3,500rpm离心10分钟而分离上清液和沉淀物。
过滤沉淀物之后，加蒸馏水500mL而2次洗涤之后冷冻干燥。将干燥的组合物利用100～400目的筛过筛而得到50～150μm的微粒组合物。
将得到的冷冻干燥微粒组合物内的人生长激素用所述BCA分析定量的结果，hGH含量及包裹效率分别是4.86重量%及94.4%。
【实施例10：含有红细胞生成素（erythropoietin，EPO）的缓释型组合物的制备】
将在实施例1制备的聚乳酸衍生物钠盐1g和红细胞生成素（41IU/mg）0.4mg溶解于5mL的水而制备EPO-高分子水溶液。
作为多价金属盐，准备氯化锌（ZnCl2）水溶液5.5mL（12.5mg/mL），边搅拌此溶液边向其中加所述EPO-高分子水溶液而生成含有红细胞生成素的组合物的沉淀物。将此混合物利用维持4℃的离心机以3500rpm离心10分钟而分离上清液和沉淀物。
冷冻干燥完全地除去上清液之后得到的沉淀物。将干燥的组合物利用100～400目的筛过筛而得到50～150μm的微粒组合物。
将得到的冷冻干燥微粒组合物内的红细胞生成素用所述BCA分析定量的结果，红细胞生成素含量及包裹效率分别是0.038重量%及92.2%。
【实施例11：含有依泽那肽（Exenatide）的缓释型组合物的制备】
制备将在实施例1制备的聚乳酸衍生物钠盐4.9g和依泽那肽100mg溶解于45mL的水的水溶液之后，利用0.45μm滤器除去杂质。
作为多价金属盐，准备氯化锌（ZnCl2）水溶液500ml（25mg/mL），向其中以3mL/min的速度滴加所述依泽那肽-高分子水溶液，同时以120rpm的速度搅拌而得到含有依泽那肽的组合物的沉淀物。
过滤沉淀物，加蒸馏水500mL而2次洗涤之后，于室温真空干燥1天。将干燥的组合物用粉碎机粉碎之后利用100～400目的筛过筛而得到50～150μm的微粒组合物。
将得到的干燥微粒组合物内的依泽那肽用所述BCA分析定量的结果，依泽那肽含量及包裹效率分别是1.97重量%及95.6%。
【实施例12：含有依泽那肽（Exenatide）的缓释型组合物的制备】
作为多价金属盐，除代替氯化锌（ZnCl2）而使用氯化钙（CaCl2）外，以与实施例11相同的方法制备含有依泽那肽的微粒组合物。将得到的干燥微粒组合物内的依泽那肽用所述BCA分析进行定量的结果，依泽那肽含量及包裹效率分别是1.92重量%及93.2重量%。
【实施例13：含有依泽那肽（Exenatide）的缓释型组合物的制备】
除使用在实施例3制备的聚乳酸衍生物钠盐4.9g外，用与实施例11相同的方法制备含有依泽那肽的微粒组合物。将得到的干燥微粒组合物内的依泽那肽用所述BCA分析定量的结果，依泽那肽含量及包裹效率分别是1.94重量%及94.2%。
【比较例1：人生长激素（human growth hormone，hGH）水溶液组合物的制备】
将下表1记载的组合物溶解于10mL的注射用水而制备人生长激素水溶液。
表1
  hGH   0.1g
  甘氨酸(Glycine)   1.0g
  甘露糖醇(Mannitol)   0.1g
  乳糖(Lactose)   0.1g
  碳酸氢钠(Sodium bicarbonate)   0.1g
【比较例2：红细胞生成素（erythropoietin，EPO）水溶液组合物的制备】
将下表2记载的组合物溶解于1.0mL的注射用水而制备红细胞生成素水溶液。
表2
  红细胞生成素(EPO)   4,100IU(0.1g)
  人血清白蛋白(Human serum albumin)   5mg
  氯化钠(Sodium chloride)   10mg
  磷酸二氢钠二水合物(Monobasic sodium phosphate dihydrate)   5mg
  磷酸氢二钠二水合物(Dibasic sodium phosphate dihydrate)   2mg
【实验例1：含有人生长激素（human growth hormone，hGH）的组合物的药代动力学试验】
实施实施例5～9及比较例1中制备的含有人生长激素（humangrowth hormone，hGH）的组合物的药代动力学试验。
从Charles River Laboratories  （Orient，Korea）供给S.D.大鼠（190±20g，5～6周龄），在维持恒温，恒湿的饲养室中适应1周以上之后观察一般状态，选定外观上健康的动物用于实验。将实验动物以12小时间隔人工照明，照度300～500Lux，温度23±1℃，相对湿度65±10%的条件下饲养，使自由地摄取灭菌的固形饲料和自来水。
将各自的组合物以5mg/kg的剂量给大鼠皮下注射之后（n=5），以一定时间间隔经10天采集血液，用Quantikine hGH免疫测定试剂盒（R&D Systems）定量血中hGH。定量结果显示于图3。如度3所示，根据本发明的含有人生长激素的组合物经10天以上维持1ng/mL以上的血中人生长激素浓度，尸检结果，未观察到本发明的组合物所致的毒性。
【实验例2：含有人生长激素的组合物的功效试验】
将实施例5-6及比较例1中制备的含有人生长激素的组合物施用于摘出脑垂体而诱发生长激素缺乏的大鼠（hypophysectomized rats）而实施功效试验。
作为疾病模型动物而将摘出脑垂体的S.D.大鼠（90±10g，4周龄，Japan SLC，Inc.）在维持恒温，恒湿的饲养室中适应1周之后观察一般状态，选定外观上健康、且未发生体重变化的动物而用于实验。将实验动物在12小时间隔人工照明，照度300～500Lux，温度23±1℃，相对湿度65±10%的条件下饲养，并致使自由地摄取灭菌的固形饲料和自来水。
将实施例5及6的组合物以5mg/kg的剂量1次皮下注射，将比较例1的组合物以0.71mg/kg的剂量1天1次经7天皮下注射（n=6）。以一定时间间隔采集血液而用Quantikine IGF 1免疫测定试剂盒（R&D Systems）定量血中IGF 1（Insulin Like Growth Factor-1）的浓度。另外测定动物的体重而记录体重的变化。定量及体重测定结果显示于图4及图5。
如度4所示，对于由生长激素生成的IGF-1的血中浓度，将本发明的组合物1次施用的情况中，相比将以往市售剂型的组合物7天每天1次施用的情况显示优秀的结果。
另外，如图5所示，将本发明的组合物1次施用的情况中，经2周后体重约增加20%，相比将以往市售剂型的组合物经7天每天1次施用的情况显示优秀的结果。不施用生长激素的阴性对照组（NoTreatment）未显示体重增加。尸检结果，未观察到本发明的组合物所致的毒性。
【实验例3：含有红细胞生成素（erythropoietin，EPO）的组合物的药代动力学试验】
实施实施例10及比较例2中制备的含有红细胞生成素（erythropoietin，EPO）的组合物的药代动力学试验。
S.D.大鼠（190±20g，5～6周龄）由Charles River Laboratories（Orient，Korea）供给，在与实验例1相同的条件下管理动物。
将各自的组合物以2000IU/kg的剂量给大鼠皮下注射之后（n=6），以一定时间间隔采集血液而用酶免疫测定试剂盒（DEP00，R&D systems）定量血中红细胞生成素浓度。定量结果显示于图6。如度6所示，根据本发明的含有红细胞生成素的组合物相比每天施用的市售组合物，维持血中浓度的时间延迟而显示1周持续释放效果，尸检结果未观察到本发明的组合物所致的毒性。
【实验例4：含有依泽那肽（Exenatide）的组合物的药代动力学试验】
实施在实施例11-13制备的含有依泽那肽（Exenatide）组合物的药代动力学试验。
S.D.大鼠（190±20g，5～6周龄）由Charles River Laboratories（Orient，Korea）供给，在与实验例1相同的条件下管理动物。
将实施例11的组合物（400μg/大鼠，800μg/大鼠）和实施例12及13的组合物（400μg/大鼠）给大鼠皮下注射之后（n=6），以一定时间间隔采集血液而用酶免疫测定试剂盒（EK 070 94，PhoenixPharmaceuticals，Inc.）定量血中依泽那肽浓度。定量结果显示于图7。如度7所示，根据本发明的含有依泽那肽的组合物以1次施用维持1周以上0.1ng/mL以上的血中浓度，尸检结果未观察到本发明的组合物所致的毒性。

Claims (20)

1.数平均分子量是7,000道尔顿以下的下示化学式1的聚乳酸衍生物化合物：
[化学式1]
Figure FDA00001981661900011
在所述化学式1中，
X及X'独立地是氢，烷基或芳基，
Y及Z独立地不存在，或是碱金属，
m及n独立地是0～95的整数，且5<m+n<100，
a及b独立地是1～6的整数，
R是取代或未取代的-(CH2)k-，碳原子数是2～10的2价烯基（divalent alkenyl），碳原子数是6～20的2价芳基（divalent aryl）或这些的组合，其中k是0～10的整数。
2.权利要求1的化学式1的聚乳酸衍生物化合物，其中所述化合物是下示化学式2的聚乳酸衍生物化合物：
[化学式2]
Figure FDA00001981661900012
在所述化学式2中，
X及X'独立地是氢，烷基或芳基，
Y'及Z'独立地是碱金属，
m及n独立地是0～95的整数，且5<m+n<100，
a及b独立地是1～6的整数，
R是取代或未取代的-(CH2)k-，碳原子数是2～10的2价烯基（divalent alkenyl），碳原子数是6～20的2价芳基（divalent aryl）或这些的组合，其中k是0～10的整数。
3.权利要求1的化学式1的聚乳酸衍生物化合物，其中所述化合物是下示化学式3的聚乳酸衍生物化合物：
[化学式3]
X及X'独立地是氢，烷基或芳基，
m及n独立地是0～95的整数，且5<m+n<100，
a及b独立地是1～6的整数，
R是取代或未取代的-(CH2)k-，碳原子数是2～10的2价烯基（divalent alkenyl），碳原子数是6～20的2价芳基（divalent aryl）或这些的组合，其中k是0～10的整数。
4.权利要求2的聚乳酸衍生物化合物的制备方法，其包括：
（1）聚合游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物和二羧酸而得到在两侧末端具有羧酸的聚乳酸衍生物的阶段；及
（2）将在所述（1）阶段得到的聚乳酸衍生物溶解于有机溶剂之后，向其中添加碱金属盐水溶液而得到聚乳酸衍生物的盐的阶段。
5.权利要求4的聚乳酸衍生物化合物的制备方法，其特征在于，游离酸或内酯形态的乳酸或其衍生物选自：乳酸，丙交酯，乙交酯，扁桃酸，己内酯，及这些的混合物。
6.权利要求4的聚乳酸衍生物化合物的制备方法，其特征在于，二羧酸选自：草酸，丙二酸，苹果酸，琥珀酸，戊二酸，己二酸，庚二酸，辛二酸，壬二酸（azelaic acid），癸二酸（sebacic acid），十二碳二酸（dodecanedioic acid），富马酸，马来酸，酞酸，对苯二甲酸及这些的混合物。
7.权利要求4的聚乳酸衍生物化合物的制备方法，其特征在于，碱金属盐选自：碳酸氢钠，碳酸钠，碳酸氢钾，碳酸钾，碳酸锂及这些的混合物。
8.络合物（complex），其为下列物质的络合物：
数平均分子量是7,000道尔顿以下的权利要求1的化学式1的聚乳酸衍生物化合物、和
多价金属离子。
9.权利要求8的络合物，其特征在于，多价金属离子是选自锌，钙，镁及铁的金属的多价离子。
10.蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物，其包含：
（i）多肽或肽作为活性成分蛋白，
（ii）权利要求1的聚乳酸衍生物化合物作为药物递送体，及
（iii）多价金属离子。
11.蛋白，多肽，或者肽药物的缓释型组合物，其包含：
（i）多肽或肽作为活性成分蛋白，及
（ii）化学式1的聚乳酸衍生物化合物和多价金属离子的络合物（complex）作为药物递送体。
12.权利要求10或11的缓释型组合物，其特征在于，其以组合物干燥重量作为基准包含0.01～60重量%的活性成分。
13.权利要求10或11的缓释型组合物，其特征在于，其以组合物干燥重量作为基准包含39.9～99.9重量%的药物递送体。
14.权利要求10或11的缓释型组合物，其特征在于，活性成分是：生长激素，红细胞生成素，单克隆抗体，粒细胞集落刺激因子，巨噬细胞集落刺激因子，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，血小板生成素，胰岛素样生长因子，上皮生长因子，血小板来源生长因子，成纤维细胞生长因子，转化生长因子，干扰素，白细胞介素，肿瘤坏死因子，链激酶，尿激酶，葡萄球菌激酶，DNA酶，葡萄糖脑苷脂酶，α半乳糖苷酶，依泽那肽，奥曲肽，胰岛素，高血糖素，黄体形成激素分泌激素，戈舍瑞林（Goserelin），亮丙瑞林（Leuprorelin），滤泡刺激激素，甲状腺刺激激素，夫替瑞林（Fertirelin），降钙素（Calcitonin），促皮质激素释放因子（Corticotropin ReleasingFactor），脑促尿钠排泄肽（Brain Natriuretic Peptide），胸腺喷丁（Thymopentin），促皮质激素（Corticotropin），依降钙素（Elcatonin），β淀粉样蛋白（β Amyloid），曲普瑞林（Triptorelin），布舍瑞林（Buserelin），胸腺素（Thymosin），生长抑素（Somatostatin），丙氨瑞林（Alarelin），血管紧张素（Angiotensin），精氨加压素（Argipressin），阿托西班（Atosiban），比伐卢定（Bivalirudin），西曲瑞克（Cetrorelix），地洛瑞林（Deslorelin），去氨加压素（Desmopressin），依降钙素（Elcatonin），恩夫韦肽（Enfuvirtide），依替巴肽（Eptifibatide），GLP 1，戈那瑞林（Gonandorelin），赖氨酸加压素（Lyspressin），那法瑞林（Nafarelin），奈西立肽（Nesiritide），缩宫素（Oxytocin），普兰林肽（Pramlintide），胰泌素（Secretin），特立帕肽（Teriparatide），特利加压素（Terlipressin），替可克肽（Tetracosactide），伐普肽（Vapreotide）或这些的混合物。
15.制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其包括：
（a）制备含有下列物质的水溶液的阶段
（i）多肽或肽作为活性成分蛋白，及
（ii）权利要求1的聚乳酸衍生物化合物；及
（b）将所述（a）阶段的水溶液滴加到多价金属离子的水溶液而得到沉淀物的阶段。
16.权利要求15的制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其特征在于，活性成分是：生长激素，红细胞生成素，单克隆抗体，粒细胞集落刺激因子，巨噬细胞集落刺激因子，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，血小板生成素，胰岛素样生长因子，上皮生长因子，血小板来源生长因子，成纤维细胞生长因子，转化生长因子，干扰素，白细胞介素，肿瘤坏死因子，链激酶，尿激酶，葡萄球菌激酶，DNA酶，葡萄糖脑苷脂酶，α半乳糖苷酶，依泽那肽，奥曲肽，胰岛素，高血糖素，黄体形成激素分泌激素，戈舍瑞林（Goserelin），亮丙瑞林（Leuprorelin），滤泡刺激激素，甲状腺刺激激素，夫替瑞林（Fertirelin），降钙素（Calcitonin），促皮质激素释放因子（Corticotropin Releasing Factor），脑促尿钠排泄肽（BrainNatriuretic Peptide），胸腺喷丁（Thymopentin），促皮质激素（Corticotropin），依降钙素（Elcatonin），β淀粉样蛋白（βAmyloid），曲普瑞林（Triptorelin），布舍瑞林（Buserelin），胸腺素（Thymosin），生长抑素（Somatostatin），丙氨瑞林（Alarelin），血管紧张素（Angiotensin），精氨加压素（Argipressin），阿托西班（Atosiban），比伐卢定（Bivalirudin），西曲瑞克（Cetrorelix），地洛瑞林（Deslorelin），去氨加压素（Desmopressin），依降钙素（Elcatonin），恩夫韦肽（Enfuvirtide），依替巴肽（Eptifibatide），GLP 1，戈那瑞林（Gonandorelin），赖氨酸加压素（Lyspressin），那法瑞林（Nafarelin），奈西立肽（Nesiritide），缩宫素（Oxytocin），普兰林肽（Pramlintide），胰泌素（Secretin），特立帕肽（Teriparatide），特利加压素（Terlipressin），替可克肽（Tetracosactide），伐普肽（Vapreotide）或这些的混合物。
17.权利要求15的制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其特征在于，多价金属离子是选自锌，钙，镁及铁的金属的多价离子。
18.权利要求15的制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其特征在于，在所述（a）阶段，
将活性成分及权利要求2的聚乳酸衍生物化合物溶解于水而制备水溶液，或者
首先将两末端是羧酸的聚乳酸衍生物及碱金属盐水溶液溶解于水而制备权利要求2的聚乳酸衍生物化合物，然后向其中投入活性成分而制备水溶液，或者
首先将两末端是羧酸的聚乳酸衍生物及活性成分溶解于水，然后向其中投入碱金属盐水溶液而制备含有权利要求2的聚乳酸衍生物化合物及活性成分的水溶液
而得到（a）阶段的水溶液。
19.权利要求15的制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其特征在于，在所述（b）阶段以后，还包括在离心在所述（b）阶段中得到的沉淀物之后，用水洗涤的（c）阶段。
20.权利要求19的制备蛋白，多肽或肽药物的缓释型组合物的方法，其特征在于，在所述（c）阶段以后，还包括冷冻干燥在所述（c）阶段分离的沉淀物的（d）阶段。
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