CN102669118A - 汉防己甲素抗真菌生物被膜的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了汉防己甲素抗真菌生物被膜的新用途，涉及汉防己甲素在抗真菌生物被膜治疗药物领域的应用。本发明化合物汉防己甲素(又名粉防己碱)的化学结构式如下：

Description

汉防己甲素抗真菌生物被膜的新用途

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，是汉防己甲素(又名粉防己碱)在抗真菌生物被膜中的新用途。 

背景技术：

汉防己甲素(又名粉防己碱)来源于防己科植物粉防己(Stephania tetrandra S.Moore)的根，其结构如式(I)所示，为无色针状结晶，熔点217～218℃，临床主要用于治疗早期轻度高血压。有报道汉防己甲素(又名粉防己碱)对氟康唑抗白念珠菌有增效作用(李丰霞，张宏，汉防己甲素对氟康唑抗白念珠菌活性的增效作用，中华皮肤科杂志，2006，39(8)：454-456)，但汉防己甲素(又名粉防己碱)单用抗真菌生物被膜的研究未见报道。 

生物被膜是一个微生物聚集群体，是微生物不可逆地与无活力物体或活组织表面接触，由自身产生的细胞外基质包裹着活菌细胞形成的微生态，其具有高度耐药性的特异表型，是相对于单个分散游离状态真菌细胞而言的另一种独特的微生物生存方式。从患者体内取出的导管或生物装置表面可见真菌以生物被膜的形式黏附生长。对体外建立的真菌形成生物被膜的模型进行抗真菌药物敏感性实验时发现，菌株对常用药物均表现为高度耐药。因此，以生物被膜形式生长并表现出高度耐药性的体内导管或生物装置相关性真菌感染给临床治疗带来很大难度，迫使临床医师在进行抗真菌治疗的同时必须从患者体内取出导管或生物装置，从而影响到患者的预后。 

我们发现汉防己甲素在体外单独使用能有效抑制真菌生物被膜的生长增殖，对已形成真菌生物被膜有很好的抑制作用，至今未见汉防己甲素单用抗真菌生物被膜的报道。 

发明内容：

本发明提供一种植物提取成分汉防己甲素(又名粉防己碱)抗真菌生物被膜的新用途，可用于预防真菌生物被膜的形成和抑制已形成的真菌生物被膜。 

真菌在聚苯乙烯等材料表面形成生物被膜后，对多数抗真菌药耐药，氟康唑单用抗白念珠菌生物被膜的SMIC(Sessile Minimum Inhibitory Concentration)值＞1024μg/ml，两性霉素B单用抗白念珠菌生物被膜的SMIC值为0.25～4μg/ml，具有抗酵母相真菌活性的中药单体化合物大多无抗真菌生物被膜活性。 

经实验证明，汉防己甲素(又名粉防己碱)在体外具有显著的抗真菌生物被膜活性，不仅能抑制真菌生物被膜的粘附、生长增殖，而且对已形成真菌生物被膜具有抑制作用，SMIC值为32μg/ml～128μg/ml。 

本发明为汉防己甲素开辟了新用途，也为抗真菌生物被膜提供了一种有效的抑制剂。 

附图说明：

图1为本发明实施例1中汉防己甲素以0～64μg/ml浓度单独使用抑制白念珠菌SC5314生物被膜形成的效果。在图1中，横坐标为汉防己甲素浓度(μg/ml)，纵坐标为生物被膜形成率(％)。*代表P＜0.05，**代表P＜0.01。 

图2为本发明实施例1中汉防己甲素以0～128μg/ml浓度单独使用抑制白念珠菌SC5314成熟24h生物被膜的效果。在图中，横坐标为汉防己甲素浓度(μg/ml)，纵坐标为生物被膜形成率(％)。*代表P＜0.05，**代表P＜0.01。 

实施方式： 

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。 

实施例1：汉防己甲素单用对不同白念珠菌菌株生物被膜的作用。 

材料和方法 

1、试药 

汉防己甲素：购自Sigma公司。 

氟康唑：购自Sigma公司。 

两性霉素B：购自生工生物工程有限公司。 

XTT：购自Sigma公司。 

甲萘醌(menadione)：购自Sigma公司。 

二甲亚砜(DMSO)：中国医药(集团)上海化学试剂公司，用前重蒸。 

丙酮：购自Sigma公司。 

汉防己甲素用二甲亚砜配成6.4mg/ml、12.8mg/ml溶液，两性霉素B用二甲亚砜配成4mg/ml溶液，氟康唑用二甲亚砜配成102.4mg/ml溶液，受试药物于-20℃保存。实验前，将药物贮存液取出置35℃温箱融化，充分混匀，分别进行药效学实验。 

XTT用灭菌的PBS配成0.5mg/ml的饱和溶液，用0.22μm孔径的滤器滤过除菌，甲萘醌(menadione)用100％丙酮配成10mM溶液，XTT、甲萘醌(menadione)于-80℃保存。实验前，将药物贮存液取出置4℃冰箱、35℃温箱梯度融化，充分混匀，进行药效学实验。

2、菌株 

ATCC标准株：白念珠菌(Candida albicans)SC5314由William A.Fonzi(Department ofMicrobiology and Immunology，Georgetown University，Washington，DC)赠送。 

临床株：白念珠菌(C.albicans)由长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。 

所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌于35℃培养48h后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4℃保存备用。 

3、培养液 

RPMI 1640培养液：RPMI 1640(Gibco BRL)10g，NaHCO₃ 2.0g，吗啡啉丙磺酸(morpholinepropanesulfonic acid，MOPS)(Sigma)34.5g(0.165M)，加三蒸水900ml溶解，1N NaOH调pH至7.0(25℃)，定容至1000ml，滤过除菌，4℃保存。 

沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)：蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后4℃保存。 

YEPD培养液：酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解定容至1000ml，高压灭菌后4℃保存。 

4、仪器 

隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)； 

THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)； 

511型酶标分析仪(上海第三分析仪器厂)； 

5、白念珠菌生物被膜制备 

实验前，用接种圈从4℃保存的SDA培养基上挑取白念珠菌少量，接种至1ml YEPD培养液，于30℃，200rpm振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至玻璃试管中，离心(3000g，5min，4℃)，吸弃上清液，用1ml PBS吹打混匀，离心(3000g，5min，4℃)，吸弃上清液，重复用PBS洗一次，用1ml RPMI 1640培养液吹打混匀，用血细胞计数板计数，调整菌液浓度至10⁶个/ml，将菌液接种到96孔板1～11号孔，37℃恒温箱中静置培养90min或24h。 

6、抗白念珠菌生物被膜药敏板制备 

(1)抗白念珠菌生物被膜增殖药敏板制备 

取无菌96孔板，于每排11号孔加RPMI 1640培养液150μl作阳性对照；2～10号孔各加RPMI 1640培养液150μl；1号孔分别加RPMI 1640培养液297μl和汉防己甲素溶液3μl或RPMI 1640培养液297μl和氟康唑溶液3μl或RPMI 1640培养液298.8μl和两性霉素B溶液1.2μl。1～10号孔10级倍比稀释，使各孔的汉防己甲素最终药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/ml，氟康唑最终药物浓度分别为1024、512、256、128、64、32、16、8、4和2μg/ml，两性霉素B最终药物浓度分别为16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625和0.03125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％；取出培养90min的生物被膜板，用PBS洗3次，取配好的含药物培养液100μl加入到被膜板对应的孔中，12号孔不培养生物被膜，作阴性对照。各药敏板于37℃培养。 

(2)抗白念珠菌成熟生物被膜药敏板制备 

24h之后，取无菌96孔板，于每排11号孔加RPMI 1640培养液150μl作阳性对照；2～10号孔各加RPMI 1640培养液150μl；1号孔分别加RPMI 1640培养液297μl和汉防己甲素溶液3μl或RPMI 1640培养液297μl和氟康唑溶液3μl或RPMI 1640培养液298.8μl和两性霉素B溶液1.2μl。1～10号孔10级倍比稀释，使各孔的汉防己甲素最终药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5和0.25μg/ml，氟康唑最终药物浓度分别为1024、512、256、128、64、32、16、8、4和2μg/ml，两性霉素B最终药物浓度分别为16、8、4、2、1、 0.5、0.25、0.125、0.0625和0.03125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％；取出培养24h的生物被膜板，用PBS洗3次，取配好的含药物培养液100μl加入到被膜板对应的孔中，12号孔不培养生物被膜，作阴性对照。各药敏板于37℃培养。 

7、SMIC值判定 

白念珠菌于37℃培养24h后，取出生物被膜板，用PBS轻轻洗3次，每孔加入200μlXTT/menadione(12号孔也加)，避光，37℃孵育2-3h，取出生物被膜板，吸取100μlXTT/menadione至无菌96孔板中，用酶标分析仪于492nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80％以上的最低浓度孔中的药物浓度为SMIC₈₀(生物被膜生长80％被抑制时的药物浓度)。当药物的SMIC₈₀值超过汉防己甲素测定浓度范围时，按以下方法进行统计：SMIC₈₀值高于最高浓度64或128μg/ml时，计为“＞64或128μg/ml”；SMIC80值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.125或0.25μg/ml”。 

上述实验均平行操作5到6次，当SMIC₈₀值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为SMIC₈₀值；当SMIC₈₀值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。 

实验结果见表1和表2： 

表1：汉防己甲素、两性霉素B与氟康唑单用对5株白念珠菌生物被膜增殖的抑制效果 

TET表示汉防己甲素，AmB表示两性霉素B，FLu表示氟康唑，下同。 

表2：汉防己甲素单用对5株白念珠菌成熟生物被膜的抑制效果 

结论： 

表1、表2结果显示：汉防己甲素(又名粉防己碱)对白念珠菌生物被膜单独用药使用，当汉防己甲素(又名粉防己碱)的浓度为32、64μg/ml时，均表现出良好的抗白念珠菌生物被膜的增殖作用，当汉防己甲素(又名粉防己碱)的浓度为64、128μg/ml时，均表现出良好的抗白念珠菌成熟生物被膜作用。 

实施例2：汉防己甲素(又名粉防己碱)单用对不同新型隐球菌菌株生物被膜的作用 

材料和方法 

1、试药 

汉防己甲素：购自Sigma公司。 

氟康唑：购自Sigma公司。 

两性霉素B：购自生工生物工程有限公司。 

XTT：购自Sigma公司。 

甲萘醌(menadione)：购自Sigma公司。 

二甲亚砜(DMSO)：中国医药(集团)上海化学试剂公司，用前重蒸。 

丙酮：购自Sigma公司。 

汉防己甲素用二甲亚砜配成6.4mg/ml、12.8mg/ml，两性霉素B用二甲亚砜配成4mg/ml，氟康唑用二甲亚砜配成102.4mg/ml，受试药物于-20℃保存。实验前，将药物贮存液取出置35℃温箱融化，充分混匀，分别进行药效学实验。 

XTT用灭菌的PBS配成0.5mg/ml的饱和溶液，用0.22μm孔径的滤器滤过除菌，甲萘醌(menadione)用100％丙酮配成10mM溶液，XTT、甲萘醌(menadione)于-80℃保存。 实验前，将药物贮存液取出置4℃冰箱、35℃温箱梯度融化，充分混匀，进行药效学实验。 

2、菌株 

ATCC标准株：新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)ATCC32609、ATCC56992由长征医院菌种保存中心赠送。 

临床株：新型隐球菌(C.neoformans)9406204、9701041、0208558均由上海长海医院真菌室提供，分别采自该医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。 

所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，新型隐球菌于35℃培养一周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4℃保存备用。 

3、培养液 

DMEM高糖培养基：购自Invitrogen公司。 

沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)：蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后4℃保存。 

YEPD培养液：酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解定容至1000ml，高压灭菌后4℃保存。 

4、仪器 

隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)； 

THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)； 

511型酶标分析仪(上海第三分析仪器厂)； 

5、新型隐球菌生物被膜制备 

实验前，用接种圈从4℃保存的SDA培养基上挑取新生隐球菌少量，接种至1ml YEPD培养液，于30℃，200rpm振荡培养，活化24h，使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至玻璃试管中，离心(3000g，5min，4℃)，吸弃上清液，用1ml PBS吹打混匀，离心(3000g，5min，4℃)，吸弃上清液，重复用PBS洗一次，用1ml DMEM培养液吹打混匀，用血细胞计数板计数，调整菌液浓度至10⁷个/ml，将菌液接种到96孔板，37℃恒温箱中静置培养90min或24h。 

6、抗新型隐球菌生物被膜药敏板制备 

(1)抗新型隐球菌生物被膜增殖药敏板制备 

取无菌96孔板，于每排11号孔加DMEM培养液200μl作阳性对照；2～10号孔各加DMEM培养液150μl；1号孔分别加DMEM培养液297μl和汉防己甲素溶液3μl或DMEM培养液297μl和氟康唑溶液3μl或DMEM培养液298.8μl和两性霉素B溶液1.2μl。1～10号孔10级倍比稀释，使各孔的汉防己甲素最终药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/ml，氟康唑最终药物浓度分别为1024、512、256、128、64、32、16、8、4和2μg/ml，两性霉素B最终药物浓度分别为16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625和0.03125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％；取出培养90min的生物被膜板，用PBS洗3次，取配好的含药物培养液200μl加入到被膜板对应的孔中，12号孔不培养生物被膜，作阴性对照。各药敏板于37℃培养。 

(2)抗白念珠菌成熟生物被膜药敏板制备 

24h之后，取无菌96孔板，于每排11号孔加DMEM培养液200μl作阳性对照；2～10号孔各加DMEM培养液150μl；1号孔分别加DMEM培养液297μl和汉防己甲素溶液3μl或DMEM培养液297μl和氟康唑溶液3μl或DMEM培养液298.8μl和两性霉素B溶液1.2μl。1～10号孔10级倍比稀释，使各孔的汉防己甲素最终药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5和0.25μg/ml，氟康唑最终药物浓度分别为1024、512、256、128、64、32、16、8、4和2μg/ml，两性霉素B最终药物浓度分别为16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625和0.03125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％；取出培养24h的生物被膜板，用PBS洗3次，取配好的含药物培养液200μl加入到被膜板对应的孔中，12号孔不培养生物被膜，作阴性对照。各药敏板于37℃培养。 

7、SMIC值判定 

新型隐球菌于37℃培养24h、48h、72h后，取出生物被膜板，用PBS轻轻洗3次，每孔加入200μl XTT/menadione(12号孔也加)，避光，37℃孵育2-3h，取出生物被膜板，吸取100μl XTT/menadione至无菌96孔板中，用酶标分析仪于492nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80％以上的最低浓度孔中的药物浓度为SMIC₈₀(生物被膜生长80％被抑制时的药物浓度)。当药物的SMIC₈₀值超过汉防己甲素测定浓度范围时，按以下方法进行统计：SMIC₈₀值高于最高浓度64或128μg/ml时，计为“＞64或128μg/ml”；SMIC₈₀值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.125或0.25μg/ml”。 

上述实验均平行操作5到6次，当SMIC₈₀值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并 以较高浓度作为SMIC₈₀值；当SMIC₈₀值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。 

实验结果见表3 

表3：汉防己甲素单用对5株新型隐球菌菌株生物被膜生长增殖的SMIC₈₀值 

表4：汉防己甲素单用对5株新型隐球菌菌株成熟生物被膜的SMIC₈₀值 

结论： 

表3、表4结果显示：汉防己甲素对5株新型隐球菌菌株生物被膜的增殖、成熟生物被膜进行单独用药，当汉防己甲素浓度为64μg/ml时，表现出良好的抗新型隐球菌生物被膜增殖作用，当汉防己甲素浓度为128μg/ml时，表现出良好的抗新型隐球菌成熟生物被膜作用。 

实施例3：汉防己甲素(又名粉防己碱)单用对不同曲霉菌菌株生物被膜的作用 

材料和方法 

1、试药 

汉防己甲素：购自Sigma公司。 

氟康唑：购自Sigma公司。 

两性霉素B：购自生工生物工程有限公司。 

XTT：购自Sigma公司。 

甲萘醌(menadione)：购自Sigma公司。 

二甲亚砜(DMSO)：中国医药(集团)上海化学试剂公司，用前重蒸。 

丙酮：购自Sigma公司。 

汉防己甲素用二甲亚砜配成6.4mg/ml、12.8mg/ml，两性霉素B用二甲亚砜配成4mg/ml，氟康唑用二甲亚砜配成102.4mg/ml，受试药物于-20℃保存。实验前，将药物贮存液取出置35℃温箱融化，充分混匀，分别进行药效学实验。 

XTT用灭菌的PBS配成0.5mg/ml的饱和溶液，用0.22μm孔径的滤器滤过除菌，甲萘醌(menadione)用100％丙酮配成10mM溶液，XTT、甲萘醌(menadione)于-80℃保存。实验前，将药物贮存液取出置4℃冰箱、35℃温箱梯度融化，充分混匀，进行药效学实验。 

2、菌株 

临床株：烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)7544、060796、YQA、YQB均由上海长海医院真菌室提供，分别采自该医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。 

3、培养液 

RPMI 1640培养液：RPMI 1640(Gibco BRL)10g，NaHCO₃ 2.0g，吗啡啉丙磺酸(morpholinepropanesulfonic acid，MOPS)(Sigma)34.5g(0.165M)，加三蒸水900ml溶解，1N NaOH调pH至7.0(25℃)，定容至1000ml，滤过除菌，4℃保存。 

沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)：蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后4℃保存。 

YEPD培养液：酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解定容至1000ml，高压灭菌后4℃保存。 

4、仪器 

隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)； 

THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)； 

511型酶标分析仪(上海第三分析仪器厂)； 

5、烟曲霉菌生物被膜制备 

将烟曲霉菌菌接种至SDA斜面，35℃，培养一周。按本方法活化两次后，加适量RPMI 

1640培养液于SDA斜面，用吸管吹打菌落，使烟曲霉菌菌孢子游离于RPMI 1640培养液中，然后经四层无菌纱布过滤。培养液经血细胞计数板计数后，加RPMI 1640培养液调整孢子浓度至10⁵个/ml，将菌液接种到96孔板，37℃恒温箱中静置培养90min或24h。 

6、抗烟曲霉菌生物被膜药敏板制备 

(1)抗烟曲霉菌生物被膜增殖药敏板制备 

取无菌96孔板，于每排11号孔加RPMI 1640培养液200μl作阳性对照；2～10号孔各加菌液150μl；1号孔分别加RPMI 1640培养液297μl和汉防己甲素溶液3μl或RPMI 1640培养液297μl和氟康唑溶液3μl或RPMI 1640培养液298.8μl和两性霉素B溶液1.2μl。1～10号孔10级倍比稀释，使各孔的汉防己甲素最终药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/ml，氟康唑最终药物浓度分别为1024、512、256、128、64、32、16、8、4和2μg/ml，两性霉素B最终药物浓度分别为16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625和0.03125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％；取出培养90min的生物被膜板，用PBS洗3次，取配好的含药物培养液200μl加入到被膜板对应的孔中，12号孔不含药物，作阴性对照。各药敏板于37℃培养。 

(2)抗烟曲霉菌成熟生物被膜药敏板制备 

24h之后，取无菌96孔板，于每排11号孔加RPMI 1640培养液200μl作阳性对照；2～10号孔各加菌液150μl；1号孔分别加RPMI 1640培养液297μl和汉防己甲素溶液3μl或RPMI 1640培养液297μl和氟康唑溶液3μl或RPMI 1640培养液298.8μl和两性霉素B溶液1.2μl。1～10号孔10级倍比稀释，使各孔的汉防己甲素最终药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5和0.25μg/ml，氟康唑最终药物浓度分别为1024、512、256、128、64、32、16、8、4和2μg/ml，两性霉素B最终药物浓度分别为16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625和0.03125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％；取出培养24h的生物被膜板，用PBS洗3次，取配好的含药物培养液200μl加入到被膜板对应的孔中，12号孔不含药物，作 阴性对照。各药敏板于37℃培养。 

7、SMIC值判定 

烟曲霉菌于37℃培养24h、48h后，取出生物被膜板，用PBS轻轻洗3次，每孔加入200μl XTT/menadione(12号孔也加)，避光，37℃孵育2-3h，取出生物被膜板，吸取100μlXTT/menadione至无菌96孔板中，用酶标分析仪于492nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80％以上的最低浓度孔中的药物浓度为SMIC₈₀(生物被膜生长80％被抑制时的药物浓度)。当药物的SMIC₈₀值超过汉防己甲素测定浓度范围时，按以下方法进行统计：SMIC₈₀值高于最高浓度64、128μg/ml时，计为“＞64、128μg/ml”；SMIC₈₀值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.125、0.25μg/ml”。 

上述实验均平行操作5到6次，当SMIC₈₀值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为SMIC₈₀值；当SMIC₈₀值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。 

实验结果见表5、表6 

表5：汉防己甲素单用对4株烟曲霉菌菌株生物被膜生长增殖的SMIC₈₀值 

表6：汉防己甲素单用对4株烟曲霉菌菌株成熟生物被膜的SMIC₈₀值 

结论： 

表5、表6结果显示：汉防己甲素对烟曲霉菌生物被膜的增殖、成熟生物被膜进行单独用药，当汉防己甲素浓度为64μg/ml时，表现出良好的抗烟曲霉菌生物被膜增殖作用，当汉防己甲素浓度为128μg/ml时，表现出良好的抗烟曲霉菌成熟生物被膜作用。 

Claims (6)

1.汉防己甲素(又名汉防己甲素)，化学结构通式如下：

2.如权利要求1所述的汉防己甲素(又名粉防己碱)在体外能有效抑制真菌生物被膜的生长增殖，且对已形成真菌生物被膜有很好的抑制作用。

3.如权利要求2所述的汉防己甲素作为抗真菌生物被膜药物的用途，其特征在于所述的真菌为念珠菌、新型隐球菌、曲霉菌。

4.如权利要求3所述的汉防己甲素作为抗真菌生物被膜药物的用途，其特征在于汉防己甲素在抗念珠菌生物被膜的用途中有效浓度为64微克/毫升或微克/毫克、32微克/毫升或微克/毫克。

5.如权利要求3所述的汉防己甲素作为抗真菌生物被膜药物的用途，其特征在于汉防己甲素在在抗新型隐球菌生物被膜的用途中有效浓度为128微克/毫升或微克/毫克、64微克/毫升或微克/毫克。

6.如权利要求3所述的汉防己甲素作为抗真菌生物被膜药物的用途，其特征在于汉防己甲素在在抗曲霉菌生物被膜的用途中有效浓度为128微克/毫升或微克/毫克、64微克/毫升或微克/毫克。

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