CN103040852B - 赖氨酸作为增效剂在制备抗真菌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，是赖氨酸作为增效剂在制备多烯类或棘白菌素类抗真菌药物中的应用，所说抗真菌药物为两性霉素B、制霉菌素或卡泊芬净，赖氨酸或其药学上可接受的盐在抗真菌药物有效浓度中的用量为0.03～0.5mM。实验表明，赖氨酸与两性霉素B、制霉菌素、卡泊芬净等抗真菌药物合用，能在减少用药量的情况下同样确保其对浅表部或深部真菌感染的治疗效果，因此可用作抗真菌药物的增效剂。赖氨酸作为抗真菌药物的增效剂，可降低多烯类或棘白菌素类等抗真菌药物的用药剂量，从而减轻了药物的毒副作用，有效治疗真菌感染，具有重要的临床应用价值。

Description

赖氨酸作为增效剂在制备抗真菌药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是赖氨酸作为增效剂在制备抗真菌药物中的应用。

背景技术

近年来临床上深部真菌感染率大幅上升，已成为免疫功能低下患者死亡的主要原因之一。目前可供临床选择的治疗深部真菌感染药物较少且毒副作用大，再加上日益严重的真菌耐药现象使其防治成为临床上的棘手难题。多烯类（如两性霉素B、制霉菌素）及棘白菌素类（如卡泊芬净）等抗真菌药物是临床上常用的能有效治疗深部及浅部真菌感染的抗真菌药。但由于众所周知的原因，临床上的耐药菌株越来越普遍，致使不得不加大用药剂量，某些抗真菌药物甚至加大用药剂量也无效。加大用药剂量必然会增加毒副作用。

两性霉素B抗真菌作用强，抗真菌谱广，对几乎所有真菌都有较好活性，被称为抗真菌感染的“金标准”，但是其严重的毒副作用如不可逆的肾脏毒性严重限制了两性霉素B的临床应用。临床分离的卡泊芬净耐药真菌也日益增多，致使不得不加大用药剂量，但加大用药剂量的同时毒副作用不可避免。

赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。但至今未见赖氨酸用于多烯类或棘白菌素类抗真菌药物增效剂的报道。

发明内容

本发明的目的是对赖氨酸提供一种作为抗真菌药物增效剂的新用途。所说的抗真菌药物是多烯类或棘白菌素类等抗真菌药物，赖氨酸或其药学上可接受的盐的用量为在抗真菌药物有效浓度中加入0.03～0.5mM，优选用量为0.06～0.25mM。

例如在应用时，每毫升液体制剂（或每毫克固体制剂）中含赖氨酸0.06～0.25微摩尔，含两性霉素B、制霉菌素或卡泊芬净0.03～4微克。

经实验证明，当抗真菌药物与赖氨酸或其药学上可接受的盐合用时，赖氨酸能降低抗真菌药物的用药剂量。因此，在制备抗真菌药物时，可加入赖氨酸作为抗真菌药物的增效剂。

本发明为赖氨酸开辟了一种新用途，赖氨酸或其药学上可接受的盐作为抗真菌药物的增效剂，可降低多烯类或棘白菌素类抗真菌药物的用药剂量，从而减轻了药物的毒副作用，特别是两性霉素B、制霉菌素及卡泊芬净等，具有重要的临床应用价值。

具体实施方式

现结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不限于实施例。

实施例1：两性霉素B单用及与赖氨酸合用对不同临床真菌分离株的抗菌效果对比实验

材料和方法

1．试药：

赖氨酸：美国sigma试剂公司。

两性霉素B：中国药品生物制品检定所（下同）。

二甲亚砜：中国医药（集团）上海化学试剂公司。

赖氨酸的浓度为40mM,两性霉素B的浓度为2mg/ml,受试药物于-20℃保存。实验前,将药物贮存液取出置35℃温箱融化,充分混匀,分别进行药效学试验。

2．菌株:

白念珠菌、克柔氏念珠菌和羊毛状小孢子菌临床株，由上海长海医院真菌室提供,均经形态学和生化学鉴定。

所有实验用菌株均按常规于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化,于35℃培养3天后，于4℃保存备用。

3．培养液:

沙堡葡萄糖琼脂(SDA)培养基:蛋白胨10g,葡萄糖40g,琼脂18g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml,调整pH至7.0,定容至1000ml,高压灭菌后4℃保存。

YEPD培养液:酵母浸膏10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml,定容至1000ml,高压灭菌后4℃保存。

4．仪器:

隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂);

THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂);

511型酶标分析仪(上海第三分析仪器厂);

5．菌液制备:

(1)念珠菌菌液

从4℃保存的SDA培养基上挑取念珠菌少量,接种至1ml YEPD培养液,于30℃以200rpm振荡培养活化,使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至1ml YEPD培养液中,用上述方法再次活化16小时后,用血细胞计数板计数,以YEPD培养液调整菌液浓度至3×10³～5×10³个/ml。

6．药敏实验:

取玻璃管分排编号，每排1号管加YEPD培养液100μl作空白对照;3～11号管加入新鲜配制的菌液100μl；2号管分别加入菌液196μl和两性霉素B溶液2μl。在2号管加入相应浓度的赖氨酸2μl,3～11号管加入赖氨酸1μl。

对2～11号管进行倍比稀释,使2～11号管的最终两性霉素B浓度分别为4、2、1、0.5、0.25、0.125和0.0625μg/ml;1号管为不含药物的YEPD培养液,作为阴性对照,12号管为不含药物的菌液,作为阳性对照，于30℃培养。

7．MIC₈₀值判定:

各管分别于30℃培养24小时后,取培养液用酶标分析仪于620nm测各孔OD值。与阳性对照管比,以OD值下降80%以上的最低浓度管中的药物浓度为MIC₈₀(真菌生长80%被抑制时的药物浓度)。

当药物的MIC₈₀值超过测定浓度范围时,按以下方法进行统计:MIC₈₀值高于最高浓度2mM时,计为“>2mM”。上述实验均平行操作2到3次,当MIC₈₀值能准确重复时才被接受;当MIC₈₀值相差一个浓度以上时,则需要重新实验,直到符合要求为止。

实验结果见表1，表2。

表1两性霉素B单用及与赖氨酸合用合用对5株临床白念珠菌的MIC₈₀值

注：AmB表示两性霉素B（下同）。

表2两性霉素B单用及与赖氨酸合用对3株临床克柔氏念珠菌和羊毛状小孢子菌的MIC₈₀值

由表1和表2可见，两性霉素B与赖氨酸合用时，0.06～0.5mM的赖氨酸可使白念珠菌对两性霉素B的MIC₈₀值下降4～16倍，0.06～0.25mM的赖氨酸可使临床克柔氏念珠菌和羊毛状小孢子菌对两性霉素B的MIC₈₀值下降4～32倍，说明赖氨酸能明显增强两性霉素B的抗真菌作用。

实施例2:制霉菌素单用及与赖氨酸合用抗真菌效果对比实验

材料和方法

1.试药:

赖氨酸：美国sigma试剂公司。

制霉菌素：美国sigma试剂公司。

二甲亚砜：中国医药（集团）上海化学试剂公司。

赖氨酸的浓度为40mM,制霉菌素的浓度为2mg/ml,受试药物于-20℃保存。实验前,将药物贮存液取出置35℃温箱融化,充分混匀,分别进行药效学试验。

其它实验步骤与方法同实施例1。

实验结果见表3。

表3制霉菌素单用及与赖氨酸合用对5株临床白念珠菌的MIC₈₀值

由表3可见，赖氨酸对多烯类抗真菌药物制霉菌素具有抗菌增效作用。赖氨酸与多烯类抗真菌药物合用时，0.0625～0.5mM的赖氨酸即可使制霉菌素对白念珠菌的MIC₈₀值从1～4μg/ml下降为0.0625～0.5μg/ml。

实施例3:卡泊芬净单用及与赖氨酸合用抗真菌效果对比实验

材料和方法

1.试药:

赖氨酸：美国sigma试剂公司。

卡泊芬净：美国Merck公司。

二甲亚砜：中国医药（集团）上海化学试剂公司。

赖氨酸的浓度为40mM,卡泊芬净的浓度为2mg/ml,受试药物于-20℃保存。实验前,将药物贮存液取出置35℃温箱融化,充分混匀,分别进行药效学试验。

其它实验步骤与方法同实施例1。

实验结果见表4。

表4卡泊芬净单用及与赖氨酸合用对5株临床白念珠菌的MIC₈₀值

由表4可见，赖氨酸对棘白菌素类抗真菌药物具有抗菌增效作用。赖氨酸与棘白菌素类抗真菌药物合用时，0.0313～0.25mM的赖氨酸即可使卡泊芬净对白念珠菌的MIC₈₀值从0.25～0.5μg/ml下降为0.0313～0.0625μg/ml。

以上实验表明，赖氨酸对两性霉素B、制霉菌素或卡泊芬净均具有显著的抗真菌增效作用，因此赖氨酸或其药学上可接受的盐可用作抗真菌药物的增效剂。

Claims (2)

1.赖氨酸在制备抗真菌药物增效剂中的应用，所说抗真菌药物为两性霉素B、制霉菌素或卡泊芬净，赖氨酸或其药学上可接受的盐在抗真菌药物有效浓度中的用量为0.03～0.5mM。

2.按权利要求1所述的赖氨酸在制备抗真菌药物增效剂中的应用，其特征在于赖氨酸或其药学上可接受的盐在抗真菌药物有效浓度中的用量为0.06～0.25mM。