CN102670777A - 月季花用于制备抗真菌产品的用途 - Google Patents

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antifungal
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林辉
王耘
安毛毛
顾文文
刘伟
林小红
曹永兵
姜远英
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Second Military Medical University SMMU
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Abstract

本发明涉及医药技术领域,是月季花用于制备抗真菌产品的用途。经体外实验,对耐药真菌和其他真菌的生长有一定的抑制作用。因此月季花具有制备抗真菌产品的用途。

Description

月季花用于制备抗真菌产品的用途
技术领域:
本发明涉及医药技术领域,是月季花用于制备抗真菌产品的用途。
背景技术
月季花为蔷薇科蔷薇属植物月季的花,其根、叶也入药。月季花味甘、性温,入肝经,有活血调经、消肿解毒之功效。由于月季花的祛瘀、行气、止痛作用明显,故常被用于治疗月经不调、痛经等病症。未见其用于制备抗真菌产品的报道。
发明内容
本发明提供一种月季花用于制备抗真菌产品的用途。经体外细胞实验证实,其对对耐药真菌和其他真菌的生长有一定的抑制作用。因此月季花具有制备抗真菌产品的前景,用于不同深部和浅部真菌感染的治疗。
发明效果:
本发明为月季花开辟了新的用途,在临床治病真菌耐药性日趋普遍,耐药程度日趋严重的情况,月季花对耐药真菌的生长有一定的抑制作用,具有良好的临床应用前景。
实施方式:
以下所列实施例,仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明,但不以任何方式限制本发明。
实施例1:月季花对不同临床真菌的作用
材料和方法
1.试药:
月季花的药材原料是蔷薇科植物月季的干燥花。提取过程:把粉碎后的药材粉末加入1000ml圆底烧瓶中,加入70%乙醇水浴回流2h,回流液过滤,放入已称重的烧瓶中,50℃左右减压旋蒸至粘稠浸膏状。在烧瓶中加入蒸馏水,加热使充分溶解(取出少许作为水提液,得到1g/ml的生药浓度),再加入与蒸馏水等量的无水乙醇,加热充分混匀,合并提取液混匀,得0.5g/ml的生药浓度,取少许到EP管中做体外实验。
试药置于-20℃保存。实验前,将药物取出置于35℃温箱融化,充分混匀,分别进行药效学检验。
2.菌株:
临床株:耐药白念珠菌(100、904、953),近平滑念珠菌(90018),克柔念珠菌(4996),热带念珠菌(2718),均由上海长海医院真菌室提供,分别采自长海医院不同科室临床样本,并经形态学和生化学鉴定。
所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化,白念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌等球状菌于30℃培养2周后,分别挑取单克隆再次划板活化,取第二次所得单克隆置SDA斜面,用上述方法培养后于4℃保存备用。
3.培养液:
RPMI 1640液体培养液:
RPMI1640(Gibco BRL)10g,NaHCO3 2.0g,吗啡啉丙磺酸(MOPS)(Sigma)34.5g(0.165M),加三蒸水900ml溶解,1N NaOH调pH至7.0(25℃),三蒸水定容至1000ml,0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装后于4℃保存备用。
沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA):
蛋白胨10g,葡萄糖40g,琼脂18g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml,调整pH至7.0,以三蒸水定容至1000ml,高压灭菌(121℃,15min)后于4℃保存备用。
YEPD培养液:
酵母浸膏10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml,三蒸水定容至1000ml,高压灭菌(121℃,15min)后于4℃保存备用。
4.仪器设备:
Multiskan MK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems产品)
隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)
THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)
SW-CT-IF型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)
5.菌液制备:
实验前,用接种圈从4℃保存的SDA培养基上挑取白念珠菌、热带念珠菌等球状菌少量,接种至1ml YEPD培养液,于30℃,200rpm振荡培养,活化16h,使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至1mlYEPD培养液中,用上述方法再次活化,16h后,用血细胞计数板计数,以RPMI 1640培养液调整菌液浓度至1×103~5×103CFU/ml。
6.药敏板制备:
取无菌96孔板,于每排1号孔加RPMI 1640培养液200μl作空白对照;96孔板每排3~12号孔各加RPMI 1640培养液100μl;2号孔分别加RPMI 1640培养液180μl和640μg/ml抗真菌化合物溶液20μl,充分混匀;第一排为月季花提取物;第二排为质控氟康唑;
2~11号孔10级倍比稀释,得到相应浓度,各孔中DMSO含量均低于1%;12号孔不含药物,作阳性对照;
7.MIC80值判定:
在30℃恒温箱中,念珠菌培养48h后,用酶标分析仪于630nm测各孔OD值。与阳性对照孔比,以OD值下降80%以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC80(真菌生长80%被抑制时的药物浓度)。当药物的MIC80值超过测定浓度范围时,按以下方法进行统计:MIC80值高于最高浓度64μg/ml时,计为“>64μg/ml”MIC80值为最低浓度或在最低浓度以下时,不作区别,均计为“≤0.125μg/ml”。
上述实验均平行操作2到3次,当MIC80值能准确重复或只差一个浓度时才被接受,并以较高浓度作为MIC80值;当MIC80值相差两个浓度以上时,则需重新实验,直到符合要求为止。
实验结果见表1
表1月季花对不同临床真菌的MIC80值(μg/ml)
Figure BSA00000449268500031
从表1可以看出月季花提取物在4.88-312.5μg/ml对耐药白念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌和热带念珠菌的生长都有一定的抑制作用。

Claims (7)

1.月季花在制备抗真菌产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的月季花的应用,其特征在于,所述的月季花的药材原料是蔷薇科植物月季的干燥花。
3.根据权利要求1所述的月季花的应用,其特征在于,所述的月季花是月季花药材水提物或乙醇提取物的一种。
4.根据权利要求3所述的月季花的应用,其特征在于,所述的乙醇提取是指用70%乙醇提取。
5.根据权利要求1所述的月季花的应用,其特征在于,所述的抗真菌的应用中的真菌包括1)敏感菌株:敏感白色念珠菌(Y0109,SC5314),敏感近平滑念珠菌(90018,22090);2)耐药菌株:耐药白色念珠菌(103,100,904,953,J28),耐药热带念珠菌(2718),天然耐药克柔念珠菌(44996,46)。
6.根据权利要求5所述的月季花的应用,其特征在于,所述的抗真菌的应用中的耐药菌株是对氟康唑耐受。
7.根据权利要求5所述的月季花的应用,其特征在于,所述的抗真菌的应用中的敏感菌株是对氟康唑敏感。
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