CN101816646B - 茶黄素用作抗真菌药物增效剂的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，是将茶黄素用作抗真菌药物增效剂的新用途。经体外实验，茶黄素与氟康唑、伊曲康唑、咪康唑和酮康唑等抗真菌药合用，能不同程度地提高对浅表部和深部真菌感染的治疗效果，并能使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用。因此可用作抗真菌药物的增效剂。本发明为茶黄素开辟了新的用途，将其用于抗真菌药物的增效剂，不仅能提高药物的抗真菌作用，而且在临床真菌耐药性日趋普遍、耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，可降低抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少了药物的毒副作用。

Description

茶黄素用作抗真菌药物增效剂的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是茶黄素用作抗真菌药物增效剂的新用途。

背景技术

茶黄素为茶多酚中的一种，研究显示茶黄素具有调节血脂、预防心血管疾病的功效，有降血脂的独特功能，茶黄素不仅是一种有效的自由基清除剂和抗氧化剂，而且具有抗癌、抗突变、改善和治疗心脑血管疾病、治疗糖尿病等多种生理功能，其在食品、医药保健等领域的作用也越来越突出。茶黄素也具有抗菌作用，但无抗真菌作用，也未见其作为增效剂与抗真菌药物联合使用治疗真菌病的报道。

发明内容

本发明提供一种茶黄素作为抗真菌药物增效剂的新用途。经体外细胞实验证实，其对氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑等抗真菌药物有明显的增效作用，对于临床耐药性菌株，当抗真菌药物和茶黄素合用时，能明显降低抗真菌药物的用药剂量，增强对耐药真菌的抑制作用。因此可将茶黄素用作抗真菌药物的增效剂，用于不同深部和浅部真菌感染的治疗。

本发明为茶黄素开辟了新的用途，将其用于抗真菌药物的增效剂，不仅能提高药物的抗真菌作用，而且在临床真菌耐药性日趋普遍，耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，还可降低抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少药物的毒副作用。

具体实施方式

下面具体结合实施例，对本发明作详细描述。

实施例1：茶黄素和氟康唑联用对不同临床真菌株的作用

材料和方法

1.试药：

茶黄素：武汉远城科技发展有限公司

氟康唑注射液：辉瑞制药有限公司，批号9167802。

二甲亚砜：上海世仪生物科技有限公司。

茶黄素用二甲亚砜配成溶液，浓度为6.4mg/ml。各试药置于-20℃保存。实验前，将药物取出置于35℃温箱融化，充分混匀，分别进行药效学检验。

2.菌株：

临床株：耐药白念珠菌，包括103、17、18、38和0710448五株，热带念珠菌，包括409、936、422、0710453和0710087五株，均由上海长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。

所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌、热带念珠菌等球状菌于30℃培养2周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4℃保存备用。

3.培养液：

1)RPMI 1640液体培养液：

RPMI1640(Gibco BRL)10g，NaHCO₃ 2.0g，吗啡啉丙磺酸(Sigma)34.5g(0.165M)，加三蒸水900ml溶解，1N NaOH调pH至7.0(25℃)，三蒸水定容至1000ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装后于4℃保存备用。

2)沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA)：

蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，以三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121℃，15min)后于4℃保存备用。

3)YEPD培养液：

酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121℃，15min)后于4℃保存备用。

4.仪器设备：

Multiskan MK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems产品)

隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)

THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)

SW-CT-IF型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)

5.菌液制备：

实验前，用接种圈从4℃保存的SDA培养基上挑取白念珠菌、热带念珠菌各球状菌少量，分别接种至1ml YEPD培养液，于30℃，200rpm振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。再分别将菌液至1mlYEPD培养液中，用上述方法再次活化，培养16h，用血细胞计数板计数，以RPMI 1640培养液调整菌液浓度至1×10³～5×10³CFU/ml。

6.药敏板制备：

各菌株分别取无菌96孔板，于每排1号孔加RPMI 1640液体培养基100μl作空白对照；3～12号孔各加新鲜配制的菌液99μl；2号孔分别加菌液196μl和氟康唑2μl；12号孔不含药物，只加菌液100μl作阳性生长对照。调配不同浓度的茶黄素为：1.6mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml。在每排的2号孔加相应浓度的茶黄素2μl，3～11号孔各加1μl。

对2～11号孔进行10级倍比稀释，使各孔的最终氟康唑药物浓度分别为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％。将各药敏板于30℃恒温箱培养。

7.MIC₈₀值判定：

在30℃恒温箱中，念珠菌培养48h，用酶标分析仪于630nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80％以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC₈₀(真菌生长80％被抑制时的药物浓度)。当药物的MIC₈₀值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计：MIC₈₀值高于最高浓度64μg/ml时，计为“＞64μg/ml”；MIC₈₀值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.125μg/ml”。

上述实验均平行操作2到3次，当MIC₈₀值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC₈₀值；当MIC₈₀值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。

实验结果见表1、表2。

表1茶黄素与氟康唑合用对5株临床耐药白念珠菌的MIC₈₀值

注：FLC表示氟康唑(下同)。

表2茶黄素与氟康唑合用对5株热带念珠菌的MIC₈₀值

由表1、2可见，16μg/ml的茶黄素与氟康唑合用，即可使临床耐药白念珠菌对氟康唑的MIC₈₀值从＞64μg/ml下降到0.0625～0.125μg/ml，使临床热带念珠菌对氟康唑的MIC₈₀值从＞64μg/ml下降到0.125μg/ml，说明茶黄素能明显增强氟康唑的抗真菌作用。

实施例2：茶黄素与其他唑类抗真菌药物的联合用药

材料和方法

1.药物

伊曲康唑：第二军医大学药学院提供

酮康唑：第二军医大学药学院提供

咪康唑：第二军医大学药学院提供

伊曲康唑、酮康唑和咪康唑二甲亚砜配成6.4mg/ml，茶黄素用二甲亚砜配成6.4mg/ml，各试药置于-20℃保存。实验前，将药物取出置于35℃温箱融化，充分混匀，分别进行药效学检验。

其他实验步骤和方法同实施例1，实验结果见表3、4、5。

表3茶黄素与伊曲康唑合用对5株临床耐药白念珠菌的MIC₈₀值

注：ITR表示伊曲康唑

表4茶黄素与咪康唑合用对5株临床耐药白念珠菌的MIC₈₀值

注：MCZ表示咪康唑

表5茶黄素与酮康唑合用对5临床耐药白念珠菌的MIC₈₀值

注：KCZ表示酮康唑

由表3、4、5可见，茶黄素不仅可与氟康唑合用产生增效作用，而且与伊曲康唑、咪康唑、酮康唑等抗真菌药物同样具有抗菌增效作用。合用16μg/ml的茶黄素即可使伊曲康唑、咪康唑、酮康唑对耐药的白念珠菌的MIC₈₀值从4～64μg/ml下降到0.125～0.25μg/ml，且随茶黄素剂量增加效应增强，具有剂量依赖性。

上述实验结果表明茶黄素具有联合抗真菌药物治疗真菌感染的作用，因此可用作抗真菌药物的增效剂。

Claims (1)

1.茶黄素用作抗真菌药物增效剂在制备抗真菌药物中的应用，所说的抗真菌药物为氟康唑、伊曲康唑、咪康唑或酮康唑。