CN104997805B - 一种防治水产动物水霉病的干粉制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于防治水产动物水霉病的干粉制剂，由下列重量百分比含量的原料组成：双乙酸钠5‑15份、醋酸洗必泰1‑3份、汉防已甲素0.5‑3份、膨润土60‑80份。在水霉病防治方面，本发明的干粉制剂在采用泼洒防治药物浓度为2.0mg/L时对草鱼水霉病的防治(保护)率为97％，浸泡方式在药物浓度为12mg/L时对草鱼水霉病的防治率为100％；在水霉病治疗方面，本发明的干粉制剂使用浸泡方式对草鱼水霉病治愈率最高为76.7％，优于泼洒治疗；安全性试验结果表明，本发明的干粉制剂毒副作用小，对养殖动物安全。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖动物疾病防治技术领域，具体地说，是一种防治水产动物水霉病的干粉制剂及其应用。
背景技术
水霉病又叫肤霉病或白毛病，主要病原为水霉、绵霉、丝囊霉属。水霉菌对寄主没有严格的选择性，可感染草鱼、花鲈、大银鱼、黄鳝、虹鳟等诸多水产养殖动物卵、苗种及成体，水霉菌在养殖水体普遍存在，对水体环境有很强的适应能力，具有巨大的危害性。水体中的水霉菌孢子附着在鱼类伤口上，在坏死组织上发芽形成菌丝，且菌丝还会蔓延侵入正常的组织及深入肌肉，而表层的菌丝则向外蔓延形成棉絮状覆盖物对深层的水霉菌形成保护，菌丝末端形成的孢子囊会释放孢子到水体中，由水传播造成二次感染。治疗水产动物水霉病不仅要较好地抑制水霉游动的孢子和菌丝的生长，且还要对深入肌肉的水霉菌丝进行有效的杀灭作用。
目前生产中一直使用孔雀石绿来治疗水霉病，并且效果显著，但是孔雀石绿具有致癌、致畸、致突变、高残留等毒副作用，我国已于2002年明令禁止在水产养殖中使用孔雀石绿。目前在疗效、经济上能与之相媲美的无公害药物一直没有问世，孔雀石绿目前仍在一些渔需用品商店非法暗地销售，2005年香港食环卫生署发现内地品牌罐头鲮鱼样本含孔雀石绿。孔雀石绿在人体残留时间长，对人体的危害是积蓄式的，有的人虽然摄入量不多，不会有明显的中毒症状，但当体内孔雀石绿积蓄到一定程度，就可能引发各种疾病。
中国期刊《水产科技情报》，2007到第34年期刊登的论文《几种常用消毒剂对水霉菌体外作用效果》，分别高锰酸钾、强氯精、苯扎溴铵、甲醛、聚维酮碘、戊二醛等6种水产常用消毒剂对水霉游动孢子及菌丝进行了体外作用效果实验。结果表明甲醛在浓度18.8mg/L以上对水霉游动孢子有明显的抑制作用，而其它5类消毒剂因灭杀浓度高于实际生产安全浓度。我们知道甲醛常温为气体，具有特殊的刺激气味，对人眼、鼻等有刺激作用，且对皮肤黏膜有一定的刺激作用，当室内甲醛达到一定浓度时，人就有不适感。大于0.08m3浓度可引起眼红、不适、嘶哑、胸闷、气喘等症状。中国专利文献201210420939.4公开了一种防治水霉病的复方干粉剂，由20-30％的磺基水杨酸、8-20％的溴硝醇、2-5％的硝酸咪抗挫、55-70％的硅藻土组成，其对水霉病具有较好的疗效，但关于该药物对水产动物的毒性尚未公布。从现有文献资料看，尚缺乏一种安全有效的水产动物水霉病防治药物。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于防治水产动物水霉病的干粉制剂。
本发明的再一的目的是，提供上述干粉制剂的制备方法。
本发明的另一的目的是，提供上述干粉制剂的用途。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种用于防治水产动物水霉病的干粉制剂，由下列重量百分比含量的原料组成：双乙酸钠5-15份、醋酸洗必泰1-3份、汉防已甲素0.5-3份、膨润土60-80份。
所述干粉制剂由下列重量百分比含量的原料组成：双乙酸钠8份、醋酸洗必泰2份、汉防已甲素1份、膨润土70份。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
如上所述的干粉制剂的制备方法，包括如下步骤：
1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；
2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；
3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
如上所述的干粉制剂在制备水产动物水霉病的防治或治疗药物中的应用；所述水产动物为草鱼。
本发明优点在于：
在水霉病防治方面，本发明的干粉制剂在采用泼洒防治药物浓度为2.0mg/L时对草鱼水霉病的防治(保护)率为97％，浸泡方式在药物浓度为12mg/L时对草鱼水霉病的防治率为100％；在水霉病治疗方面，本发明的干粉制剂使用浸泡方式对草鱼水霉病治愈率最高为76.7％，优于泼洒治疗；安全性试验结果表明，本发明的干粉制剂毒副作用小，对养殖动物安全。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作详细说明。
实施例1治疗水产动物水霉病的干粉制剂(一)
按如下质量比称取原料：双乙酸钠8份、醋酸洗必泰2份、汉防已甲素1份、膨润土70份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
实施例2治疗水产动物水霉病的干粉制剂(二)
按如下质量比称取原料：双乙酸钠5份、醋酸洗必泰1份、汉防已甲素0.5份、膨润土80份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
实施例3治疗水产动物水霉病的干粉制剂(三)
按如下质量比称取原料：双乙酸钠15份、醋酸洗必泰1份、汉防已甲素0.5份、膨润土80份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
实施例4治疗水产动物水霉病的干粉制剂(四)
按如下质量比称取原料：双乙酸钠15份、醋酸洗必泰3份、汉防已甲素3份、膨润土60份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
实施例5治疗水产动物水霉病的干粉制剂(五)
按如下质量比称取原料：双乙酸钠8份、醋酸洗必泰2份、汉防已甲素3份、膨润土70份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
实施例6治疗水产动物水霉病的干粉制剂(六)
按如下质量比称取原料：双乙酸钠12份、醋酸洗必泰3份、汉防已甲素2份、膨润土75份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
实施例7治疗水产动物水霉病的干粉制剂(七)
按如下质量比称取原料：双乙酸钠13份、醋酸洗必泰1份、汉防已甲素2份、膨润土60份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
对比例1
按如下质量比称取原料：双乙酸钠8份、汉防已甲素1份、膨润土70份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
对比例2
按如下质量比称取原料：双乙酸钠8份、醋酸洗必泰2份、膨润土70份。制备方法：1)按比例备好原料，先将膨润土投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述预混物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
实施例8草鱼水霉病预防及治疗实验
1.1实验药物
实施例8所用药物为按实施例1比例所制备的干粉制剂。
1.2实验用鱼
实验用鱼为购自上海市南汇县水产养殖场草鱼，体重为40-55g/尾；体长为18-26cm/尾，所有草鱼实验前先暂养一周，观察确认健康后继续实验。
1.3水霉菌株
寄生水霉菌(Saprolegnia parasitica)ATCC200013，上海海洋大学国家水生动物病原库提供。
1.4饲养管理
用200L溶剂饲暂养缸饲养，增氧器24h增氧；水源为经过曝光、消毒和去氯处理的自来水，pH为6-7.0，平均水温25℃，溶氧为9-12mg/L，其他指标符合渔业水质标准，饲养配置参照NRC营养标准。
1.5草鱼水霉病人工感染
取保藏于试管内的水霉菌丝接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(马铃薯块200-300g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL)，25℃培养72小时，使其铺满整个培养皿。取适量培养好的水霉用研钵研碎倒入用于感染的玻璃缸内的水中，将事先用水煮开裂的玉米粒放入该玻璃缸中，72h后观察到90％的玉米粒上有水霉生长，即可判断玻璃缸水体中有水霉菌存在。
用手术刀片将草鱼背鳍下方两侧的鳞片去掉，在肌肉内刮出约1cm的小口，将刮伤后的草鱼放入有水霉存在的的玻璃缸中，每个缸中放入10尾草鱼，养殖温度由25℃降至18℃，进行水霉病人工感染。
1.6草鱼水霉病预防实验
1.6.1泼洒方式用药预防草鱼水霉病
上述草鱼进行人工感染前，对草鱼进行泼洒方式用药预防水霉病实验。设置5个泼洒药物浓度：0、0.5、1、1.5、2.0mg/L，每个药物浓度设3个平行对照实验组，同时设置空白对照组及孔雀石绿0.2mg/L浓度组。每组实验草鱼数量为10尾，观察一周后统计数据。
1.6.2浸泡方式用药预防草鱼水霉病
上述草鱼进行人工感染前，对草鱼进行浸泡方式用药预防水霉病实验。设置5个干粉制剂药物浸泡浓度：0、3、6、9、12mg/L，每次浸泡1h，每天浸泡两次。每个药物浓度设3个平行对照实验组，同时设置空白对照组及孔雀石绿2mg/L浓度浸泡半小时组。每组实验草鱼数量为10尾，观察一周后统计数据。
1.7草鱼水霉病治疗实验
1.7.1泼洒方式用药治疗草鱼水霉病
选取感染成功的草鱼进行泼洒药物治疗水霉病实验。设置5个泼洒药物浓度：0、0.5、1、1.5、2.0mg/L，每个药物浓度设3个平行对照实验组，同时设置空白对照组及孔雀石绿0.2mg/L浓度组。每组实验草鱼数量为10尾，观察一周后统计数据。
1.7.2浸泡方式用药治疗草鱼水霉病
选取感染成功的草鱼进行浸泡药物治疗水霉病实验。设置5个干粉制剂药物浸泡浓度：0、3、6、9、12mg/L，每次浸泡1h，每天浸泡两次。每个药物浓度设3个平行对照实验组，同时设置空白对照组及孔雀石绿2mg/L浓度浸泡半小时组。每组实验草鱼数量为10尾，观察一周后统计数据。
1.8数据分析
根据农业部《鱼药临床实验技术规范》进行药物的保护率评价，计算公式：
保护率＝(阳性对照组发病死亡数-药物实验组发病死亡数)/阳性对照组发
病死亡数×100％
2结果
2.1草鱼水霉病预防实验结果
实验结果见表1及表2，从表中可以看出：泼洒方式在浓度为0.5mg/L时保护率仅为26.7％，当浓度升高为2.0mg/L时保护率升高至97％；浸泡方式在浓度为3mg/L时保护率仅为23.3mg/L，当浓度升高为12mg/L时保护率升高至100％。本发明的药物无论是采用泼洒还是浸泡方式用药，对水产养殖水霉病均具有非常好的预防效果。
表1泼洒药物对草鱼水霉病预防效果
表2浸泡药物对草鱼水霉病预防效果
2.2草鱼水霉病治疗实验结果
实验结果见表3及表4，从表中可以看出：泼洒方式在浓度为低于1mg/L时无治疗作用，浓度升高为2.0mg/L时治愈率为26.6％；浸泡方式在浓度为12.0mg/L时治愈率为76.7％。本发明的干粉制剂使用浸泡方式对草鱼水霉病治愈率最高为76.7％，优于泼洒治疗。
表3泼洒药物对草鱼水霉治疗效果
表4浸泡药物对草鱼水霉治疗效果
实施例9草鱼水霉病预防实验对比
具体实验方法参照实施例8，受试用鱼共分为3组：实验组一、实验组二、实验组三。每组实验草鱼数量为20尾，实验组一使用实施例1制备的药物，实验组二使用对比例1所制备的药物，实验组三使用对比例2所制备的药物，结果如下：
表5三组不同泼洒方式用药效果对比
表6三组不同浸泡方式用药效果对比
实施例10安全性试验
根据农业部《渔药临床试验技术规范》的要求和方法，以实施例1所制备的干粉制剂及孔雀石绿为实验药物进行一般毒性安全试验，采用半静水法生物测试，每组放实验草鱼20尾，在换水曝露的过程中观察它们的行为、中毒症状、死亡效应。中毒后5分钟内多次刺激无反应即可判断死亡，即行捞出，记录死亡时间，统计各组实验鱼在1d、2d、3d、4d后的存活情况。
表7孔雀石绿对草鱼急性毒性实验结果
草鱼孔雀石中毒症状：前期表现兴奋，阵发狂游，后期时游时停，呼吸迟缓，昏厥，刺激后腹部朝上，呈螺旋式游动，之后进入麻木状态，游动缓慢乏力，然后沉入水底死亡。表7的结果表明：孔雀石绿在较低浓度下，草鱼死亡率很低，随着时间的延长，死亡率会略有增加；当孔雀石绿浓度升高至0.6mg/L时，草鱼在第5h开始死亡，24h后死亡率达到100％。
表8实施例1的药物对草鱼急性毒性试验结果
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种用于防治水产动物水霉病的干粉制剂，其特征在于，由下列重量百分比含量的原料组成：双乙酸钠8份、醋酸洗必泰2份、汉防已甲素1份、膨润土70份。
2.如权利要求1所述的干粉制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
1)按比例备好原料，先将膨润土、汉防己甲素投入混匀机中预混10分钟，转速为40-70r/min；
2)再将双乙酸钠投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min；
3)最后将醋酸洗必泰投入混匀机中与上述混合物一起混合20分钟，转速为60-70r/min。
3.权利要求1所述的干粉制剂在制备水产动物水霉病的防治药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的水产动物为草鱼。
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