CN102665718A - 可用作pdk1抑制剂的杂环化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供可用作PDK1抑制剂的化合物。本发明还提供所述化合物的组合物及治疗由PDK1介导的疾病的方法。

Description

可用作PDK1抑制剂的杂环化合物
背景技术
3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(3-phosphoinositide-dependent proteinkinase-1,PDK1)包括由556个氨基酸构成的蛋白质、N-末端催化域和通过激活环磷酸化来激活底物激酶的C-末端普列克底物蛋白同系(PH)结构域(Belham,C.等人,Curr.Biol.,9,pp.R93-R96,1999)。PDK1参与蛋白激酶AGC亚家族的活性调节(Alessi,D.等人,Biochem.Soc.Trans,29：1(2001))，所述蛋白激酶AGC亚家族为例如蛋白激酶B的同工型(PKB,也称为AKT)、p70核糖体S6激酶(S6K)(Avruch,J.等人,Prog.Mol.Subcell.Biol.,26：115,(2001))、p90核糖体S6激酶(Frodin,M.等人,EMBO J.,19：2924-2934,(2000))和蛋白激酶C(PKC)(一种大小为80kDa的通过甘油二酯且在多种情况下通过钙而募集至质膜的酶)(Le Good等人,Science 281:2042-2045(1998)。由PDK1介导的信号传导响应于胰岛素、生长因子和细胞外基质的细胞结合而增强(整联蛋白信号传导)，这导致不同的细胞事件，例如细胞存活、生长、增殖和葡萄糖调节[(Lawlor，M.A.等人,J.Cell Sci.,114,pp.2903-2910,2001),(Lawlor,M.A.等人,EMBO J.,21,pp.3728-3738,2002)]。已在几种由于不同的遗传事件例如PTEN的变异或一些关键调节蛋白的过表达而引起的癌症中检测到PDK1信号传导的增强[(Graff，J.R.,Expert Opin.Ther.Targets,6,pp.103-113,2002),(Brognard,J.等人,Cancer Res.,61,pp.3986-3997,2001)]。
具有张力蛋白同源性的肿瘤抑制性磷酸酶(PTEN)是由磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)启动的细胞存活信号传导途径中的重要负性调节剂。PDK1/Akt途径在多种癌症中由于受体酪氨酸激酶(RTKs)、Ras、PI-3激酶或PTEN的变异而激活(Cully等人,Nature Reviews Cancer 6：184-192(2006))。PDK1抑制剂作为抗癌化合物的潜力通过用靶向于PDK1的反义寡核苷酸对PTEN阴性人类癌症细胞系(U87MG)进行转染来证实。所得到的PDK1蛋白质水平的降低使细胞增殖和存活得以减少(Flynn,P.等人,Curr.Biol.,10：1439-1442(2000))。
另外，目前已知的PDK1抑制剂通常既影响由PDK1介导的Akt磷酸化，又影响由PDK1介导的PKC磷酸化，因此增加了对临床副作用的关注(Feldman等人,J.Biol.Chem.280：19867-19874(2005))。
因此，迫切需要有效的PDK1抑制剂。本发明满足了这些需要及其它需要。
发明内容
现已发现本发明化合物及其药用组合物可有效作为一种或多种蛋白激酶的抑制剂。上述化合物为式I化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200021
其中A1、环A2、环A3、环A4、L1、L2、L3、X和R1各自如本申请在大类和小类中所定义和描述。所提供的化合物可用作蛋白激酶(例如PDK1)抑制剂，因此可用于例如治疗由PDK1介导的疾病。
在一些其它实施方案中，本发明提供含有本发明化合物的药物组合物，其中所述化合物以有效抑制PDK1活性的量存在。在一些其它实施方案中，本发明提供含有本发明化合物且任选还含有其它治疗剂的药物组合物。在其它实施方案中，所述其它治疗剂是用于治疗癌症的药物。
在另一个方面，本发明提供在患者或生物样品中抑制激酶(例如PDK1)活性的方法，所述方法包括向所述患者给药有效抑制量的本发明化合物或使所述生物样品与有效抑制量的本发明化合物接触。在另一个方面，本发明提供治疗与PDK1活性相关的任何障碍的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药治疗有效量的本发明化合物。上述方法在本申请中详述。
具体实施方式
1.对本发明化合物的一般描述：
在一些实施方案中，本发明提供式I化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200031
其中
R1是氢或任选取代的C1-6脂族基团；或
R1和环A4上的取代基与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和或芳族的5-7元稠合环；
X是-C(O)-或-S(O)2-；
L1是共价键或任选取代的选自以下的二价基团：C1-4亚烷基、C2-4亚烯基或C2-4亚炔基，其中L1中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-Cy1-、-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替；
Cy1是任选取代的选自以下的二价环基团：亚苯基、饱和或部分不饱和的3-7元亚碳环基、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元亚杂环基或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基；
每个R2是氢或任选取代的C1-6脂族基团；
A1是共价键或任选取代的选自以下的二价环基团：饱和或部分不饱和的3-7元单环亚碳环基、饱和或部分不饱和的7-10元二环亚碳环基、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环亚杂环基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环亚杂环基、亚苯基、8-10元二环亚芳基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环亚杂芳基或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环亚杂芳基；
L2是共价键、亚烯基(alkylidenylene)或任选取代的亚烷基链，其中L2中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替；
环A2是饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环或具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的10-16元三环，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代；
每个Rx独立是-R、任选取代的亚烷基(alkylidenyl)、氧代、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2；
每个R独立是氢或任选取代的选自以下的基团：C1-6脂族基团、饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环；
每个R’独立是-R或同一氮上的两个R’基团与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的5-8元环；
L3是共价键或任选取代的C1-4亚烷基链，其中L3中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替；
环A3是任选取代的选自以下的环：饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环；
环A4是具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环；其中环A4上任何可取代的碳任选被R3、R4或R5取代且环A4上任何可取代的氮任选被R6取代；
R3、R4和R5各自独立是-R、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2；或
R3和R4与介于它们之间的原子或R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；
每个R6独立是-R、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2或-S(O)2N(R’)2；或
R3和R6与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
在一些实施方案中，当A1是二价单环且L1是共价键时，L2不是-O-。在一些实施方案中，当A1是二价单环或二环时，L1和L2不同时是共价键。
本领域技术人员应该理解的是，当两个相邻的变量是共价键时，这两个变量以一个共价键形式出现。例如，当L2和A1均是共价键时，L1和环A2通过一个共价键来连接。类似地，当L1和A1均是共价键时，环A2和环A4通过一个共价键来连接。在一些实施方案中，L1、A1和L2不同时是共价键。
2.化合物和定义：
以下更详细地描述了具体官能团和化学术语的定义。出于本发明目的，化学元素根据元素周期表(CAS版本,Handbook of Chemistry and Physics,第75版,内封)来确定且具体官能团通常如其中所述那样来定义。另外，有机化学及具体官能团和反应性的一般原理参见Organic Chemistry,ThomasSorrell,University Science Books,Sausalito,1999；Smith and March March’sAdvanced Organic Chemistry,5th Edition,John Wiley & Sons,Inc.,New York,2001；Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers,Inc.,New York,1989；Carruthers,Some Modern Methods of Organic Synthesis,3rdEdition,Cambridge University Press,Cambridge,1987；将其全部内容引入本申请作为参考。
除非另有说明，本申请描述的结构也意在包括所述结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象))形式；例如针对每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象)混合物在本发明范围内。除非另有说明，本发明化合物的所有互变异构形式在本发明范围内。另外，除非另有说明，本申请描述的结构也意在包括区别仅在于存在一个或多个同位素富集原子的化合物。例如，具有本发明结构且其中氢被氘或氚代替或碳被13C或14C富集碳代替的化合物在本发明范围内。上述化合物可用作例如分析工具、生物学测定中的探针或本发明治疗剂。
当具体对映异构体是优选的时，在一些实施方案中，其可被提供为基本不含有其它对映异构体且也可称为“是光学富集的”。本申请使用的“是光学富集的”是指所述化合物由显著较大比例的一种对映异构体构成。在一些实施方案中，所述化合物由至少约90%重量的优选对映异构体构成。在其它实施方案中，所述化合物由至少约95%、98%或99%重量的优选对映异构体构成。优选的对映异构体可由外消旋混合物通过本领域技术人员已知的任何方法(包括手性高压液相色谱(HPLC)和形成手性盐且对其进行结晶)来分离或通过不对称合成来制备。参见例如Jacques et al.,Enantiomers,Racemates andResolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Wilen,et al.,Tetrahedron33:2725(1977)；Eliel,E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY，1962)；Wilen,S.H.Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of Notre Dame Press,Notre Dame,IN 1972)。
术语“杂原子”是指氧、硫、氮、磷或硅中的一种或多种(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季胺化形式；或杂环中可取代的氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或N+R(如在N经取代的吡咯烷基中))。
本申请使用的“直接键”或“共价键”是指单键、双键或叁键。在一些实施方案中，“直接键”或“共价键”是指单键。
本申请使用的术语“卤代”和“卤素”是指选自氟(氟代,-F)、氯(氯代,-Cl)、溴(溴代,-Br)和碘(碘代,-I)的原子。
本申请使用的术语“脂族”或“脂族基团”是指可为直链(即非支化)、支链或环状(包括稠合、桥接和螺环的多环形式)且可为完全饱和或可含有一个或多个不饱和单元但不为芳族的烃基。除非另有具体说明，脂族基团含有1-6个碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1-4个碳原子且在其它实施方案中，脂族基团含有1-3个碳原子。合适的脂族基团包括但不限于直连或支链烷基、直连或支烯基和直连或支炔基及其混合形式，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
本申请使用的术语“不饱和”是指具有一个或多个不饱和单元的基团。
单独使用或作为较大基团中的一部分使用的术语“环状脂族基团”、“碳环”、“碳环基”、“碳环并”或“碳环性”是指具有3-10个成员的如本申请描述的饱和或部分不饱和的环状脂族单环或二环环系，其中所述脂族环系任选如以上所定义的那样被取代且在本申请中得以描述。环状脂族基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、环辛基、环辛烯基和环辛二烯基。在一些实施方案中，环烷基具有3-6个碳。术语“环状脂族基团”、“碳环”、“碳环基”、“碳环并”或“碳环性”还包括与一个或多个芳族或非芳族环稠合的脂族环，例如十氢萘基、四氢萘基、十氢化萘或二环[2.2.2]辛烷，其中自由价键或连接点在脂族环上。
本申请使用的术语“亚环烷基”是指二价环烷基。在一些实施方案中，亚环烷基是1,1-亚环烷基(即螺环)。示例性的1,1-亚环烷基包括
Figure BDA00001732070200071
在其它实施方案中，亚环烷基是1,2-亚环烷基或1,3-亚环烷基。示例性的1,2-亚环烷基包括
Figure BDA00001732070200072
类似地，术语“亚碳环基”是指二价碳环基团。
本申请使用的术语“烷基”是指通过由含有1-6个碳原子的脂族部分除去一个氢原子而得到的饱和直链或支链烃基。在一些实施方案中，本发明使用的烷基含有1-5个碳原子。在另一个实施方案中，所使用的烷基含有1-4个碳原子。在其它实施方案中，烷基含有1-3个碳原子。在另一个实施方案中，烷基含有1-2个碳。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、仲戊基、异戊基、叔丁基、正戊基、新戊基、正己基、仲己基、正庚基、正辛基、正癸基、正十一烷基、十二烷基等。
本申请使用的术语“烯基”是指通过由具有至少一个碳-碳双键的直链或支链脂族部分除去一个氢原子而得到的单价基团。在一些实施方案中，本发明使用的烯基含有2-6个碳原子。在一些实施方案中，本发明使用的烯基含有2-5个碳原子。在一些实施方案中，本发明使用的烯基含有2-4个碳原子。在另一个实施方案中，所使用的烯基含有2-3个碳原子。烯基包括例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基等。
本申请使用的术语“炔基”是指通过由具有至少一个碳-碳叁键的直链或支链脂族部分除去一个氢原子而得到的单价基团。在一些实施方案中，本发明使用的炔基含有2-6个碳原子。在一些实施方案中，本发明使用的炔基含有2-5个碳原子。在一些实施方案中，本发明使用的炔基含有2-4个碳原子。在另一个实施方案中，所使用的炔基含有2-3个碳原子。代表性的炔基包括但不限于乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丙炔基等。
单独使用或作为较大基团例如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳基氧基烷基”中的一部分使用的术语“芳基”是指具有总计5-10个环成员的单环和二环环系，其中所述环系中的至少一个环为芳族且所述环系中的每个环含有3-7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳基环”互换使用。在本发明一些实施方案中，“芳基”是指芳族环系，其包括但不限于苯基、联苯基、萘基、蒽基等，其可带有一个或多个取代基。本申请使用的术语“芳基”还包括其中芳族环与一个或多个非芳族环稠合的基团，例如茚满基、酞酰亚氨基、萘酰亚氨基、菲啶基或四氢萘基等。术语“亚芳基”是指二价芳基。
单独使用或作为较大基团例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”中的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳”是指以下基团，其具有5-10个环原子，优选为5、6或9个环原子；在环状排列中具有6、10或14个共用π电子；且除碳原子外还具有1-5个杂原子。术语“杂原子”是指氮、氧或硫且包括氮或硫的任何氧化形式和碱性氮的任何季胺化形式。杂芳基包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、二氮杂萘基和蝶啶基。本申请使用的术语“杂芳基”和“杂芳”还包括其中杂芳族环与一个或多个芳基、环状脂族基团或杂环基环稠合的基团。非限制性的实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可为单环或二环。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳族基团”互换使用，所述术语中的任何一个包括任选取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中烷基部分和杂芳基部分独立任选被取代。术语“亚杂芳基”是指二价杂芳基。
本申请使用的术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环”可互换使用且是指稳定的饱和或部分不饱和的除碳原子外还具有一个或多个优选为1-4个上述杂原子的4-7元单环或7-10元二环杂环基团。当用于描述杂环中的环原子时，术语“氮”包括取代的氮。例如，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和的环中，氮可为N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或N+R(如在N经取代的吡咯烷基中)。
杂环可在能够得到稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧基连接且任何环原子可任选被取代。上述饱和或部分不饱和的杂环基团的实力包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧杂环戊烷基、二氮杂
Figure BDA00001732070200091
基、氧杂氮杂基、硫杂氮杂基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基团”、“杂环部分”和“杂环基团”在本申请中可互换使用且还包括其中杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或环状脂族基团环稠合的基团，例如二氢吲哚基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基、2-氮二环杂环[2.2.1]庚烷基、八氢吲哚基或四氢喹啉基。杂环基可为单环或二环。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中烷基部分和杂环基部分独立任选被取代。术语“亚杂环基”是指二价杂环基团。
本申请使用的术语“部分不饱和”是指在环原子之间包含至少一个双键或叁键的环部分。术语“部分不饱和”意在包括具有多个不饱和位置的环，但不意在包括本申请定义的芳基或杂芳基。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是多亚甲基基团即-(CH2)n-，其中n是正整数，优选为1-6、1-4、1-3、1-2或2-3。取代的亚烷基链是其中一个或多个亚甲基氢原子被取代基代替的多亚甲基基团。合适的取代基包括以下就取代的脂族基团所描述的那些取代基。
本申请定义的亚烷基链还可任选被官能团代替。当内部亚甲基单元被官能团代替时，亚烷基链被所述官能团“代替”。“间断官能团”的合适实例在本申请说明书和权利要求书中描述。
通常，前缀“亚”用于描述二价基团。因此，以上任何术语可用前缀“亚”修饰以描述该基团的二价形式。例如，二价碳环为“亚碳环基”，二价芳基环为“亚芳基”，二价苯环为“亚苯基”，二价杂环为“亚杂环基”，二价杂芳基环为“亚杂芳基”，二价烷基链为“亚烷基”，二价烯基链为“亚烯基”，二价炔基链为“亚炔基”等。
本申请描述的本发明化合物可含有“任选取代”的基团。通常，术语“取代”，无论其是否在术语“任选”后，是指所述基团中的一个或多个氢被合适的取代基代替。除非另有说明，“任选取代”的基团可在所述基团中每个可取代的位置具有合适的取代基且当在任何给定的结构中不止一个位置可被不止一个选自所述组的取代基取代时，每个位置的取代基可相同或不同。适于本发明的取代基组合优选为使稳定的或化学上可行的化合物得以形成的那些取代基。本申请使用的术语“稳定”是指这样的化合物，所述化合物当接受条件以实现它们的制备、检测及它们在一些实施方案中的回收、纯化和在本申请所述一个或多个目的中的用途时基本不发生变化。
“任选取代”的基团中可取代的碳原子上合适的单价取代基独立是卤素；-(CH2)0-4R○；-(CH2)0-4OR○；-O-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4CH(OR○)2；-(CH2)0-4SR○；-(CH2)0-4Ph，其可被R○取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可被R○取代；-CH=CHPh，其可被R○取代；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(R○)2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)R○；-N(R○)C(S)R○；-(CH2)0-4N(R○)C(O)NR○ 2；-N(R○)C(S)NR○ 2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)OR○；-N(R○)N(R○)C(O)R○；-N(R○)N(R○)C(O)NR○ 2；-N(R○)N(R○)C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)R○；-C(S)R○；-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)SR○；-(CH2)0-4C(O)OSiR○ 3；-(CH2)0-4OC(O)R○；-OC(O)(CH2)0-4SR○；-SC(S)SR○；-(CH2)0-4SC(O)R○；-(CH2)0-4C(O)NR○ 2；-C(S)NR○ 2；-C(S)SR○；-SC(S)SR○,-(CH2)0-4OC(O)NR○ 2；-C(O)N(OR○)R○；-C(O)C(O)R○；-C(O)CH2C(O)R○；-C(NOR○)R○；-(CH2)0-4SSR○；-(CH2)0-4S(O)2R○；-(CH2)0-4S(O)2OR○；-(CH2)0-4OS(O)2R○；-S(O)2NR○ 2；-(CH2)0-4S(O)R○；-N(R○)S(O)2NR○ 2；-N(R○)S(O)2R○；-N(OR○)R○；-C(NH)NR○ 2；-P(O)2R○；-P(O)R○ 2；-OP(O)R○ 2；-OP(O)(OR○)2；-SiR○3；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(R○)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(R○)2，其中每个R○可如以下所定义的那样被取代且独立是氢、C1-6脂族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环或两个独立出现的R○与介于它们之间的原子一起形成具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或二环，其可如以下所定义的那样被取代。
R○(或由两个独立出现的R○与介于它们之间的原子一起形成的环)上合适的单价取代基独立是卤素、-(CH2)0-2R●、-(卤代R●)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR●、-(CH2)0-2CH(OR●)2、-O(卤代R●)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R●、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR●、-(CH2)0-2SR●、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR●、-(CH2)0-2NR● 2、-NO2、-SiR● 3、-OSiR● 3、-C(O)SR●、-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)OR●或-SSR●，其中每个R●是未取代的或当在“卤代”后时仅被一个或多个卤素取代且独立选自C1-4脂族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。R○中饱和碳原子上合适的二价取代基包括=O和=S。
“任选取代”的基团中饱和碳原子上合适的二价取代基包括=O、=S、=NNR*2、=NNHC(O)R*、=NNHC(O)OR*、=NNHS(O)2R*、＝NR*、=NOR*、-O(C(R*2))2-3O-或-S(C(R*2))2-3S-，其中R*在每次独立出现时选自氢、可如以下所定义的那样被取代的C1-6脂族基团或未取代的具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。与“任选取代”的基团中相邻的可取代的碳连接的合适二价取代基包括-O(CR*2)2-3O-，其中R*在每次独立出现时选自氢、可如以下所定义的那样被取代的C1-6脂族基团或未取代的具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
R*中脂族基团上合适的取代基包括卤素、-R●、-(卤代R●)、-OH、-OR●、-O(卤代R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中每个R●是未取代的或当在“卤代”后时仅被一个或多个卤素取代且独立是C1-4脂族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
“任选取代”的基团中可取代的氮上合适的取代基包括
Figure BDA00001732070200121
Figure BDA00001732070200123
或其中每个
Figure BDA00001732070200125
独立是氢、可如以下所定义的那样被取代的C1-6脂族基团、未取代的-OPh或未取代的具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环或两个独立出现的
Figure BDA00001732070200126
与介于它们之间的原子一起形成未取代的具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或二环。
Figure BDA00001732070200127
中脂族基团上合适的取代基独立是卤素、-R●、-(卤代R●)、-OH、-OR●、-O(卤代R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中每个R●是未取代的或当在“卤代”后时仅被一个或多个卤素取代且独立是C1-4脂族基团、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
3.对示例性化合物的描述：
如上所述，L1是共价键或任选取代的选自以下的二价基团：C1-4亚烷基、C2-4亚烯基或C2-4亚炔基，其中L1中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-Cy1-、-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替，其中R2如本申请所定义和描述。在一些实施方案中，L1是共价键。在一些实施方案中，L1是单键。在一些实施方案中，L1是任选取代的C1-4亚烷基，其中L1中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替。在其它实施方案中，L1是任选取代的C2-4亚烯基。在其它实施方案中，L1是任选取代的C2-4亚炔基。在一些实施方案中，L1是任选取代的C1-3亚烷基、任选取代的C2-3亚烷基或任选取代的C2-3亚炔基。在一些其它实施方案中，L1是任选取代的-O-C1-3亚烷基。在一些实施方案中，L1是任选取代的亚甲基。在一些实施方案中，L1是未取代的亚甲基。在一些实施方案中，L1是亚丙烯基或亚丙炔基。在一些实施方案中，L1是任选取代的-O-C2亚烷基、C3亚烷基或C3亚炔基。在一些实施方案中，L1被任选取代的选自烷基、环烷基、芳基或杂芳基的基团取代。在一些实施方案中，L1是-O-C2亚烷基、C3亚烯基或C3亚炔基，其中L1被任选取代的选自C1-4烷基、3-7元碳环、具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元杂环、苯基或具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环的基团取代。在一些实施方案中，L1是-O-C2亚烷基、C3亚烯基或C3亚炔基，其中L1被甲基、环丙基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、苯基或吡啶基取代。在一些实施方案中，L1被-(CH2)0-4CO2R○或-(CH2)0-4CON(R○)2取代。在一些实施方案中，L1上的取代基具有R立体化学。在一些实施方案中，L1上的取代基具有S立体化学。在一些实施方案中，L1是以下基团中的一种：
Figure BDA00001732070200131
Figure BDA00001732070200141
其中环B是具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环且环C是具有1-3个氮的6元杂芳基环。在一些实施方案中，L1是以下基团中的一种：
Figure BDA00001732070200142
Figure BDA00001732070200151
在一些实施方案中，L1包含-Cy1-。如上所述，-Cy1-是任选取代的选自以下的二价环基团：亚苯基、饱和或部分不饱和的3-7元亚碳环基、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元亚杂环基或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基。在一些实施方案中，L1包含亚苯基。在一些实施方案中，L1是亚苯基。在一些实施方案中，L1包含饱和或部分不饱和的3-7元亚碳环基。在一些实施方案中，L1是饱和或部分不饱和的3-7元亚碳环基。在一些实施方案中，L1包含具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元亚杂环基。在一些实施方案中，L1是具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元亚杂环基。在一些实施方案中，L1包含具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基。在一些实施方案中，L1是具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基。
如上所述，A1是共价键或任选取代的选自以下的二价环基团：饱和或部分不饱和的3-7元单环亚碳环基、饱和或部分不饱和的7-10元二环亚碳环基、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环亚杂环基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环亚杂环基、亚苯基、8-10元二环亚芳基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环亚杂芳基或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环亚杂芳基。在一些实施方案中，A1是共价键。在一些实施方案中，A1是单键。
在一些实施方案中，A1是任选取代的选自以下的二价环基团：饱和或部分不饱和的3-7元亚碳环基、饱和或部分不饱和的7-10元二环亚碳环基、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元亚杂环基或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环亚杂环基。
在一些实施方案中，A1是任选取代的5-10元亚碳环基。在一些实施方案中，A1是亚环戊基或亚环己基。在其它实施方案中，A1是任选取代的5-10元亚杂环基。在一些实施方案中，A1是亚氧杂环丙烷基、亚氧杂环丁烷基、亚四氢呋喃基、亚四氢吡喃基、亚氧杂环庚烷基、亚氮杂环丙烷基、亚氮杂环丁烷基、亚吡咯烷基、亚哌啶基、亚氮杂环庚烷基、亚硫杂环丙烷基、亚硫杂环丁烷基、亚四氢噻吩基、亚四氢噻喃基、亚硫杂环庚烷基、亚二氧杂环戊烷基、亚氧杂硫杂环戊烷基、亚噁唑烷基、亚咪唑烷基、亚噻唑烷基、亚二硫杂环戊烷基、亚二噁烷基、亚吗啉基、亚氧杂硫杂环己烷基、亚哌嗪基、亚硫吗啉基、亚二硫杂环己烷基、亚二氧杂环庚烷基、亚氧杂氮杂环庚烷基、亚氧杂硫杂环庚烷基、亚二硫杂环庚烷基、亚二氮杂环庚烷基、亚二氢呋喃酮基、亚四氢吡喃酮基、亚氧杂环庚烷酮基、亚吡咯烷酮基、亚哌啶烷酮基、亚氮杂环庚烷酮基、亚二氢噻吩酮基、亚四氢噻喃酮基、亚硫杂环庚烷酮基、亚噁唑烷酮基、亚噁嗪烷酮基、亚氧杂氮杂环庚烷酮基、亚二氧杂环戊烷酮基、亚二氧杂环己烷酮基、亚二氧杂环庚烷酮基、亚氧杂硫杂环戊烷酮基、亚氧杂硫杂环己烷酮基、亚氧杂硫杂环庚烷酮基、亚噻唑烷酮基、亚噻嗪烷酮基、亚硫杂氮杂环庚烷酮基、亚咪唑烷酮基、亚四氢嘧啶酮基、亚二氮杂环庚烷酮基、亚咪唑烷二酮基、亚噁唑烷二酮基、亚噻唑烷二酮基、亚二氧杂环戊烷二酮基、亚氧杂硫杂环戊烷二酮基、亚哌嗪二酮基、亚吗啉二酮基、亚硫吗啉二酮基、亚四氢吡喃基、亚四氢呋喃基、亚吗啉基、亚硫吗啉基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚吡咯烷基、亚四氢噻吩基或亚四氢噻喃基。
在一些实施方案中，A1是任选取代的选自以下的二价环基团：亚苯基、8-10元二环亚芳基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环亚杂芳基。在一些实施方案中，A1是亚苯基。在一些实施方案中，A1是8-10元亚芳基。在其它实施方案中，A1是5-10元亚杂芳基。在一些实施方案中，A1是5-6元亚杂芳基。在一些实施方案中，A1是亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡咯基、亚咪唑基、亚吡唑基、亚三唑基、亚四唑基、亚噁唑基、亚异噁唑基、亚噁二唑基、亚噻唑基、亚异噻唑基、亚噻二唑基、亚吡啶基、亚哒嗪基、亚嘧啶基、亚吡嗪基、亚吲嗪基、亚嘌呤基、亚二氮杂萘基、亚蝶啶基、亚吲哚基、亚异吲哚基、亚苯并噻吩基、亚苯并呋喃基、亚二苯并呋喃基、亚吲唑基、亚苯并咪唑基、亚苯并噻唑基、亚喹啉基、亚异喹啉基、亚噌啉基、亚酞嗪基、亚喹唑啉基、亚喹喔啉基、亚4H-喹嗪基、亚咔唑基、亚吖啶基、亚吩嗪基、亚吩噻嗪基、亚吩噁嗪基、亚四氢喹啉基、亚四氢异喹啉基、亚吡啶并[2,3-b]1,4-噁嗪-3(4H)-酮基或亚色满基。
在一些实施方案中，A1是任选取代的选自以下的二价环基团：
Figure BDA00001732070200171
在一些其它实施方案中，A1是任选取代的选自以下的二价环基团：
Figure BDA00001732070200172
Figure BDA00001732070200181
如上所述，L2是共价键、亚烯基或任选取代的亚烷基链，其中L2中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替，其中R2如本申请所定义和描述。在一些实施方案中，L2是共价键。在一些实施方案中，L2是单键、双键或叁键。在一些实施方案中，L2是亚烯基。在一些其它实施方案中，L2是-O-。在其它实施方案中，L2不是被二价氧代替的C1亚烷基。在一些实施方案中，L2是-N(R2)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-。在其它实施方案中，L2是任选取代的亚烷基链，其中L2中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-SO2-、-SO2N(R2)-、-N(R2)SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替。在一些实施方案中，L2是任选取代的C1-4亚烷基。在一些实施方案中，L2是亚甲基。
如上所述，环A2是饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环或具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的10-16元三环，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代，其中Rx如本申请所定义和描述。
在一些实施方案中，环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自苯基、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的C8-10二环芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的苯基环。在一些实施方案中，环A2是具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和单环杂环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和单环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元饱和二环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合或6,6-稠合的饱和二环。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元饱和单环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元饱和单环。在其它实施方案中，环A2是任选取代的具有2个独立选自氮或氧的杂原子的5元饱和单环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1个选自氮、氧或硫的杂原子的5元饱和单环。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6元饱和单环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6元饱和单环。在其它实施方案中，环A2是任选取代的具有2个独立选自氮或氧的杂原子的6元饱和单环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1个选自氮、氧或硫的杂原子的6元饱和单环。
示例性的环A2基团包括任选取代的以下基团：氮杂环辛烷基、硫杂环戊烷基(thiocyclopentanyl)、硫杂环己烷基(thiocyclohexanyl)、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢噻喃基、四氢噻吩基、二硫杂环戊烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二噁烷基、硫杂氧杂环己烷基、吗啉基、氧杂硫杂环戊烷基、咪唑烷基、氧杂硫杂环戊烷基、噁唑烷基或噻唑烷基。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在其它实施方案中，环A2是任选取代的具有2个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1个氮原子和选自硫或氧的额外杂原子的5元杂芳基环。示例性的环A2基团包括任选取代的以下基团：吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基或噁二唑基。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-3个氮的6元杂芳基环。在其它实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个氮的6元杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有2个氮的6元杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1个氮的6元杂芳基环。示例性的环A2基团包括任选取代的以下基团：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基或四嗪基。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元单环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的四氢吡啶基。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元部分不饱和的二环。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在其它实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的吲哚。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的氮杂吲哚。在一些实施方案中，环A2是吲唑。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。在其它实施方案中，环A2是任选取代的具有1个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是喹啉。根据一个方面，环A2是任选取代的具有2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A2是喹唑啉或喹喔啉。
在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有0-4个选自氮、氧或硫的杂原子的10-16元饱和三环。在一些实施方案中，环A2是任选取代的具有0-4个选自氮、氧或硫的杂原子的10-16元部分不饱和的三环。在其它实施方案中，环A2是任选取代的具有0-4个选自氮、氧或硫的杂原子的10-16元芳族三环。
在一些实施方案中，环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
Figure BDA00001732070200211
其中氮上的每个Rx独立是氢或C1-4烷基。在一些实施方案中，上述环之一中的碳被Rx取代。在一些其它实施方案中，A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
其中氮上的每个Rx独立是氢或C1-4烷基且每个R’独立是氢或C1-4烷基或同一氮上的两个R’与介于它们之间的氮一起形成具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元杂环。在一些实施方案中，上述环之一中的碳被Rx取代。
在一些实施方案中，A2是在一些实施方案中，A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
Figure BDA00001732070200223
Figure BDA00001732070200231
其中氮上的每个Rx独立是氢或C1-4烷基。
在一些实施方案中，A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
如上所述，每个Rx独立是-R、任选取代的亚烷基、氧代、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2。在一些实施方案中，Rx是-R。在一些实施方案中，Rx是氢。在一些实施方案中，Rx是任选取代的亚烷基。在一些实施方案中，Rx是被杂芳基取代的亚烷基。在一些实施方案中，Rx是C1-4烷基。在一些实施方案中，Rx是甲基。在一些实施方案中，Rx是-N(R’)2。在一些实施方案中，Rx是-NH2。在一些实施方案中，Rx是-NH(R’)。在一些实施方案中，Rx是-C(O)N(R’)2。在一些实施方案中，Rx是-C(O)NH(R’)。在一些实施方案中，Rx是-C(O)NH(C1-4烷基)。在一些实施方案中，Rx是-C(O)NH(环烷基)。在一些实施方案中，Rx是具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元杂环基团。在一些实施方案中，Rx是具有1个氮的4-7元杂环基团。在一些实施方案中，Rx是氮杂环丁烷基。在一些实施方案中，Rx是氧代。在一些实施方案中，Rx是-N(R’)OR。在一些实施方案中，Rx是-NHOCH3。
如上所述，L3是共价键或任选取代的C1-4亚烷基链，其中L3中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-SO2-、-SO2N(R2)-、-N(R2)SO2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替，其中R2如本申请所定义和描述。在一些实施方案中，L3是共价键。在一些实施方案中，L3是单键。在一些实施方案中，L3是任选取代的C1-4亚烷基。在一些实施方案中，L3是未取代的。在一些实施方案中，L3是任选取代的亚甲基。在一些实施方案中，L3是未取代的亚甲基。在一些其它实施方案中，L3是取代的亚甲基。在一些实施方案中，L3是被甲基或乙基取代的亚甲基。在一些实施方案中，L3上的取代基具有R立体化学。在一些实施方案中，L3上的取代基具有S立体化学。在一些实施方案中，L3是
Figure BDA00001732070200241
如上所述，环A3是任选取代的选自以下的环：饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的8-10元二环芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的苯基环。在一些实施方案中，环A3是环丙基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的环戊基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的环己基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的环庚基环。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和杂环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4元饱和杂环。在一些实施方案中，环A3是氧杂环丁烷。在一些实施方案中，环A3是氮杂环丁烷。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和单环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元饱和二环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合或6,6-稠合的饱和二环。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元饱和单环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元饱和单环。在其它实施方案中，环A3是任选取代的具有2个独立选自氮或氧的杂原子的5元饱和单环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1个选自氮、氧或硫的杂原子的5元饱和单环。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6元饱和单环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6元饱和单环。在其它实施方案中，环A3是任选取代的具有2个独立选自氮或氧的杂原子的6元饱和单环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1个选自氮、氧或硫的杂原子的6元饱和单环。
示例性的环A3基团包括任选取代的以下基团：氮杂环辛烷基、硫杂环戊烷基、硫杂环己烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢噻喃基、四氢噻吩基、二硫杂环戊烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二噁烷基、硫杂环己烷基、吗啉基、氧杂硫杂环戊烷基、咪唑烷基、氧杂硫杂环戊烷基、噁唑烷基或噻唑烷基。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在其它实施方案中，环A3是任选取代的具有2个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1个氮和选自硫或氧的额外杂原子的5元杂芳基环。示例性的环A3基团包括任选取代的以下基团：吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基或噁二唑基。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-3个氮的6元杂芳基环。在其它实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个氮的6元杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有2个氮的6元杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1个氮的6元杂芳基环。示例性的环A3基团包括任选取代的以下基团：吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基或四嗪基。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元单环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的四氢吡啶基。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元部分不饱和的二环。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环。在一些实施方案中，环A3是二氢吲哚环。在一些实施方案中，环A3是四氢异喹啉环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在其它实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是苯并噁唑或苯并咪唑。在一些实施方案中，环A3是喹啉环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A3是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。在其它实施方案中，环A3是任选取代的具有1个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。根据一个方面，环A3是任选取代的具有2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。
在一些实施方案中，环A3是苯基、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环，其中环A3任选被卤素或烷基中的一个或多个取代。
在一些实施方案中，环A3是任选取代的苯基。在一些实施方案中，环A3被至少一个卤素取代。在一些实施方案中，环A3被至少一个氟取代。在其它实施方案中，环A3被至少一个氯取代。在其它实施方案中，环A3被至少一个烷基取代。在一些实施方案中，环A3被至少一个三氟甲基取代。在其它实施方案中，环A3被至少一个甲氧基取代。在一些实施方案中，环A3在对位被取代。在一些实施方案中，环A3在间位被取代。在一些实施方案中，环A3是以下基团中的一种：
Figure BDA00001732070200271
如上所述，X是-C(O)-或-S(O)2-。在一些实施方案中，X是-C(O)-。在其它实施方案中，X是-S(O)2-。
如上所述，环A4是具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环；其中环A4上任何可取代的碳任选被R3、R4或R5取代且环A4上任何可取代的氮任选被R6取代，其中R3、R4、R5和R6如本申请所定义和描述。本领域技术人员应该理解的是，环A4中明确指出的氮位于次甲基即环A4与-L1-NH-的连接点的α位。
在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在其它实施方案中，环A4是任选取代的具有2个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。根据一个方面，环A4是任选取代的具有1个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1个氮和选自硫或氧的额外杂原子的5元杂芳基环。示例性的环A4基团包括任选取代的以下基团：吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基或噁二唑基。
在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-3个氮的6元杂芳基环。在其它实施方案中，环A4是任选取代的具有1-2个氮原子的6元杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有2个氮的6元杂芳基环。示例性的A4基团包括任选取代的以下基团：吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基或四嗪基。
在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元芳族二环杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在其它实施方案中，环A4是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1个氮的5,6-稠合的杂芳基环。
在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-2个氮的6,6-稠合的杂芳基环。在其它实施方案中，环A4是任选取代的具有1个氮的6,6-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是喹啉环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有2个氮的6,6-稠合的杂芳基环。
在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5,5-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的5,5-稠合的杂芳基环。在其它实施方案中，环A4是任选取代的具有1个氮的5,5-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有2个氮的5,5-稠合的杂芳基环。在一些实施方案中，环A4是任选取代的具有1个氮和1-2个选自氮、氧或硫的其它杂原子的5,5-稠合的杂芳基环。
在一些实施方案中，环A4选自：
Figure BDA00001732070200281
在一些实施方案中，环A4具有下式：
Figure BDA00001732070200291
其中R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：饱和或部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元二环杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
在一些实施方案中，环A4具有下式：
其中R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：饱和或部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元二环杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
在一些实施方案中，环A4具有下式：
Figure BDA00001732070200293
其中R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基稠合环。
在一些实施方案中，环A4具有下式：
Figure BDA00001732070200294
其中R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基稠合环。
在一些实施方案中，环A4具有下式：
Figure BDA00001732070200301
其中R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基稠合环。
在一些实施方案中，环A4选自：
其中
R3是氢、-Cl或-CF3；
R4是氢、-F、-Cl、-Br、-I、C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6炔基、-CN、-NO2、-NH2、-N(R’)2、-NHC(O)C1-6烷基、-CO2H、-CO2C1-4烷基、-C(O)N(R’)2、-NHS(O)C1-6烷基、-NHS(O)2C1-6烷基、-SC1-6烷基、-S(O)C1-6烷基、-S(O)2C1-6烷基、-S(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3、苄基氧基、苯基或任选取代的具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的3-5元杂环；
R5是氢、-OCH3、-OCH2CH3、-CF3或-NH2；
R6是氢或任选取代的选自以下的基团：C1-4烷基、苯基或具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；和
每个R’独立是氢或C1-4烷基或同一氮上的两个R’与介于它们之间的氮一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的5-6元环。
如上所述，R1是氢或任选取代的C1-6脂族基团或R1和环A4上的取代基与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的环杂原子的部分不饱和或芳族的5-7元稠合环。在一些实施方案中，R1是氢。在一些实施方案中，R1是C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R1是C1-4烷基。在一些实施方案中，R1是甲基。
在一些实施方案中，R1和环A4上的取代基与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的环杂原子的部分不饱和或芳族的5-7元稠合环。在一些实施方案中，R1和环A4上的取代基与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R1和环A4上的取代基与介于它们之间的原子一起形成稠合的以下基团：嘧啶酮、二氢嘧啶酮、二氢吡啶酮或吡咯酮。
如上所述，R2是氢或任选取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R2是氢。在一些实施方案中，R2是任选取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R2是C1-4烷基。在一些实施方案中，R2是甲基、乙基或丙基。
如上所述，R3是-R、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2，其中R和R’如本申请所定义和描述或R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或R3和R6与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R3是-R。在一些实施方案中，R3是氢。在一些实施方案中，R3是卤素。在一些实施方案中，R3是-OR、-SR或-N(R’)2。在一些实施方案中，R3是-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R或-C(O)CH2C(O)R。在一些实施方案中，R3是-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2。在一些实施方案中，R3是-Cl。在一些实施方案中，R3是-CF3。在一些实施方案中，R3是-CN。
如上所述，R4是-R、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2，其中R和R’如本申请所定义和描述或R3和R4与介于它们之间的原子或R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R4是-R。在一些实施方案中，R4是氢。在一些实施方案中，R4是卤素。在一些实施方案中，R4是氟。在一些实施方案中，R4是C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R4是C1-4烷基。在一些实施方案中，R4是甲基或乙基。在一些实施方案中，R4是任选取代的炔基。在一些实施方案中，R4是任选取代的烯基。在一些实施方案中，R4是-CN、-NO2、-NH2、-NHC(O)C1-6烷基、-CO2H、-CO2C1-4烷基、-C(O)N(R’)2、-NHS(O)C1-6烷基、-NHS(O)2C1-6烷基、-SC1-6烷基、-S(O)C1-6烷基、-S(O)2C1-6烷基、-S(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3或苄基氧基。在一些实施方案中，R4是卤素、-NH2、-CN、-NO2、-SC1-4烷基、-S(O)C1-4烷基、-S(O)2C1-4烷基、-S(O)N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3、苄基氧基、-C(O)N(R’)2或-NHC(O)C1-4烷基。在一些实施方案中，R4是-CN、-NO2、-SC1-4烷基、-S(O)C1-4烷基、-S(O)2C1-4烷基、-S(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3或苄基氧基。
如上所述，R5是-R、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2，其中R和R’如本申请所定义和描述或R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R5是-R。在一些实施方案中，R5是氢。在一些实施方案中，R5是卤素。在一些实施方案中，R5是-OR、-SR或-N(R’)2。在一些实施方案中，R5是-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R或-C(O)CH2C(O)R。在一些实施方案中，R5是-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2。在一些实施方案中，R5是-OCH3或-NH2。在一些实施方案中，R5是-CF3。
如上所述，每个R6独立是-R、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2或-S(O)2N(R’)2。在一些实施方案中，R6是-R。在一些实施方案中，R6是氢。在一些实施方案中，R6是C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R6是C1-4烷基。在一些实施方案中，R6是甲基。在一些实施方案中，R6是-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2或-S(O)2N(R’)2。在一些实施方案中，R6是苯基。在一些实施方案中，R6是具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R6是吡啶基。
在一些实施方案中，R1和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R1和R5与介于它们之间的原子一起形成稠合的以下基团：嘧啶酮、二氢嘧啶酮、二氢吡啶酮或吡咯酮。
在一些实施方案中，R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元二环杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R3和R4与介于它们之间的原子一起形成稠合的苯环。在其它实施方案中，R3和R4与介于它们之间的原子一起形成稠合的部分不饱和的4-7元碳环。在一些实施方案中，R3和R4与介于它们之间的原子一起形成稠合的环戊烯环。
在一些实施方案中，R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元二环杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
在一些实施方案中，R3和R6与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
如上所述，每个R独立是氢或任选取代的选自以下的基团：C1-6脂族基团、饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。在一些实施方案中，R是氢。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R是C1-6烷基。在一些实施方案中，R是C1-4烷基。在一些实施方案中，R是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R是任选取代的选自以下的基团：8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。
如上所述，每个R’独立是R或同一氮上的两个R’基团与介于它们之间的氮一起形成任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的4-8元环。在一些实施方案中，R’是氢。在一些实施方案中，R’是任选取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R’是C1-6烷基。在一些实施方案中，R’是C1-4烷基。在一些实施方案中，R’是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R’是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R’是任选取代的选自以下的基团：8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。在一些实施方案中，同一氮上的两个R’基团与介于它们之间的氮一起形成任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的4-8元环。
在一些实施方案中，-A1-L1-是以下基团中的一种：
Figure BDA00001732070200341
Figure BDA00001732070200351
在一些实施方案中，-L2-A1-L1-是-OCH2CH2-、-CH=CHCH2-或-C≡C-CH2-。在一些实施方案中，-L2-A1-L1-是任选取代的-O-C2亚烷基、C3亚烯基或C3亚炔基。在一些实施方案中，-L2-A1-L1-是：
其中环B是具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基环且环C是具有1-3个氮的6元杂芳基环。在一些实施方案中，-L2-A1-L1-是以下基团中的一种：
Figure BDA00001732070200361
在一些实施方案中，-L2-A1-L1-任选被1-4个Rx基团取代且选自：
Figure BDA00001732070200371
在一些实施方案中，A2-L2-A1-是
Figure BDA00001732070200372
在一些其它实施方案中，环A2是
Figure BDA00001732070200373
在一些实施方案中，-L3-环A3是任选取代的苄基。在一些实施方案中，-L3-环A3是以下基团中的一种：
Figure BDA00001732070200374
根据一个方面，本发明提供式I-a化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200381
其中L1、L2、L3、A1、环A2、环A4、X和Rx如以上就式I所定义且如本申请所描述。
根据一个方面，本发明提供式II或II-a化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200382
其中L1、L2、L3、A1、环A2、环A3、Rx、R1、R3、R4和R5如以上就式I所定义且如本申请所描述。在一些实施方案中，式II中的R3是氢、-Cl或-CF3。在一些实施方案中，R4是-CN、-NO2、-SC1-4烷基、-S(O)C1-4烷基、-S(O)2C1-4烷基、-S(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3或苄基氧基，其中每个R’独立是氢或C1-4烷基。在一些实施方案中，R5是氢、-OCH3或-NH2。在一些实施方案中，R1和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的环：饱和或部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元二环杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在其它实施方案中，R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的环：饱和或部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元二环杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
在一些实施方案中，式II中的L3是任选取代的亚甲基。在一些实施方案中，L3是未取代的亚甲基。在一些其它实施方案中，L3是被甲基取代的亚甲基。在一些实施方案中，环A3是任选取代的苯基。在一些实施方案中，环A3是在对位或间位被至少一个氟取代的苯基。在一些实施方案中，L1是任选取代的以下基团：亚甲基、亚丙基、亚丙炔基或-O-C1-3亚烷基。在一些实施方案中，L1是任选取代的-O-C2亚烷基。在一些实施方案中，L1是任选取代的亚甲基。在一些实施方案中，L1是-CH2-。
在一些实施方案中，式II中的A1是任选取代的选自以下的基团：
Figure BDA00001732070200391
在一些实施方案中，式II中的L2是共价键或亚甲基。在一些实施方案中，环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
Figure BDA00001732070200392
其中氮上的每个Rx独立是氢或C1-4烷基且每个R’独立是氢或C1-4烷基或同一氮上的两个R’与介于它们之间的氮一起形成具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元杂环。
在一些实施方案中，式II-a中的L3是共价键。在一些实施方案中，式II-a中的Rx是C1-4烷基、C1-4烯基或C1-4炔基。在一些实施方案中，式II-a中的Rx是甲基。在一些实施方案中，式II-a中的Rx是炔丙基。
本发明另一个方面提供式III化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200401
其中L1、L2、L3、A1、环A2、环A3、R1、R3和R4如以上就式I所定义且如本申请所描述。
根据另一个方面，本发明提供式IV化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200402
其中
Figure BDA00001732070200403
是单键或双键且L1、L2、L3、A1、环A2、环A3、R3和R4如以上就式I所定义且如本申请所描述。在一些实施方案中，式IV化合物具有式IV-a或IV-b：
根据另一个方面，本发明提供式V化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200411
其中L1、L2、L3、A1、环A2、环A3、R1和R6如以上就式I所定义且如本申请所描述。
在一些实施方案中，式V中的R6是C1-4烷基或具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，R6是甲基。在一些实施方案中，R6是吡啶基。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、A1、环A2、环A3、环A4、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R和R’各自选自方案和实施例中描述的那些基团(参见以下实施例章节)。
根据另一个方面，本发明提供式VI化合物或其药用盐：
其中L1、L2、A1、环A2、X、R1、R3、R4和R6如以上就式I所定义且如本申请所描述。
根据另一个方面，本发明提供式VII化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200413
其中L1、L2、L3、A1、环A2、环A3和环A4如以上就式I所定义且如本申请所描述。
在一些实施方案中，式VII中的L3是共价键。在一些实施方案中，式VII中的环A3是具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和杂环。在一些实施方案中，环A3是具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。示例性的环A3基团包括任选取代的以下基团：氮杂环丁烷基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、噻唑基或噁唑基。
根据另一个方面，本发明提供式VIII化合物或其药用盐：
其中n是0或1且其中L1、L2、L3、A1、环A2、环A3、R3和R4如以上就式I所定义且如本申请所描述。在式VIII的一些实施方案中，n是0。在式VIII的一些实施方案中，n是1。
根据另一个方面，本发明提供式IX化合物或其药用盐：
Figure BDA00001732070200422
其中
Figure BDA00001732070200423
是单键或双键，n是0或1且其中X、L1、L2、L3、A1、环A2、环A3和R1如以上就式I所定义且如本申请所描述。在式IX的一些实施方案中，n是0。在式IX的一些实施方案中，n是1。
在一些实施方案中，本发明提供以下化合物：
Figure BDA00001732070200431
Figure BDA00001732070200441
Figure BDA00001732070200451
Figure BDA00001732070200461
Figure BDA00001732070200471
Figure BDA00001732070200481
在一些实施方案中，本发明提供以下化合物：
Figure BDA00001732070200482
Figure BDA00001732070200491
4.方法
在另一个方面，本发明提供降低PDK1催化活性的方法。所述方法包括使PDK1激酶与有效量的本发明化合物接触。因此，本发明还提供如下抑制PDK1催化活性的方法：使PDK1激酶与所提供的化合物接触。
本申请使用的PDK1催化活性是指PDK1激酶的催化活性。因此，若PDK1催化活性在所提供的化合物存在下降低，则与当不存在所提供的化合物时的磷酸化速率相比，对PDK1底物(例如Akt)的磷酸化是降低的。在一些实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50小于1μM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50小于500nM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50小于100nM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50小于10nM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50小于1nM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50为0.1nM至10μM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50为0.1nM至1μM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50为0.1nM至100nM。在其它实施方案中，所提供的化合物对PDK1的IC50为0.1nM至10nM。
在另一个方面，所提供的化合物可用于治疗一种或多种可通过抑制(即降低)PDK1催化活性而得以缓解的疾病、障碍和/或病症。本申请使用的术语“治疗”是指逆转本申请描述的疾病或障碍或其一种或多种症状、缓解本申请描述的疾病或障碍或其一种或多种症状、延迟本申请描述的疾病或障碍或其一种或多种症状的发作或抑制本申请描述的疾病或障碍或其一种或多种症状的进展。在一些实施方案中，治疗可在一种或多种症状已形成后进行。在其它实施方案中，治疗可在不存在症状的情况下进行。例如，可在症状发作前对疾病易患个体进行治疗(例如根据病史和/或遗传因素或其它疾病易患因素)。治疗还可在症状已消退后继续进行以例如预防或延迟其复发。
在一些实施方案中，本发明提供在有此需要的受试者中治疗癌症的方法。在一些实施方案中，所提供的方法包括向所述受试者给药治疗有效量的所提供的化合物。术语“癌症”包括涉及异常细胞生长和/或增殖的疾病或障碍，例如神经胶质瘤、甲状腺癌、乳腺癌、肺癌(例如小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、胃癌、胃肠道间质瘤、胰腺癌、胆管癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、肾细胞癌、间变性大细胞淋巴瘤、白血病(例如急性髓细胞性白血病、T细胞白血病或慢性淋巴细胞性白血病)、多发性骨髓瘤、恶性间皮瘤、恶性黑素瘤或结肠癌(例如小随体高不稳定性结肠直肠癌)。
在另一个方面，本发明提供降低由PDK1介导的Akt磷酸化的方法。所提供的方法包括在Akt存在下使PDK1与所提供的化合物接触。在一些实施方案中，与由PDK1介导的PKC(例如PKC亚型ζ、δ和/或θ)磷酸化相比，由PDK1介导的Akt磷酸化是降低的。在一些实施方案中，与由PDK1介导的PKC磷酸化相比，由PDK1介导的Akt磷酸化被抑制至少5、10、50、100或1000倍。在以下实施例中提供示例性测定以确定对由PDK1介导的Akt磷酸化的抑制。
在一些实施方案中，在细胞中使由PDK1介导的Akt磷酸化降低。在一些实施方案中，本发明提供在细胞中使由PDK1介导的Akt磷酸化降低的方法。在一些实施方案中，所提供的方法包括使所述细胞与本发明化合物接触。在一些实施方案中，与由PDK1介导的PKC(例如PKC亚型ζ、δ和/或θ)磷酸化相比，由PDK1介导的Akt磷酸化是降低的。在一些实施方案中，与由PDK1介导的PKC磷酸化相比，由PDK1介导的Akt磷酸化被抑制至少5、10、50、100或1000倍。在以下实施例中提供示例性测定以确定对由PDK1介导的Akt磷酸化的抑制。在一些实施方案中，其中由PDK1介导的Akt磷酸化被降低的细胞是哺乳动物细胞，例如家畜动物(例如猫、狗、马、牛等)或人类。
5.测定
为了开发有用的PDK1抑制剂，可在体外鉴定能够降低PDK1催化活性的候选抑制剂。所提供的化合物的活性可使用本领域已知的方法和/或本申请提供的那些方法来测定。
降低PDK1催化活性的化合物可使用具有生物学活性的PDK1(重组的或天然存在的)来鉴定和测试。PDK1可在天然细胞中发现或在体外分离或在细胞中共表达或表达。可使用本领域已知的多种方法例如实施例21中描述的测定对PDK1催化活性在抑制剂存在下与当不存在所述抑制剂时的活性相比的降低进行测量。测定PDK1活性的其它方法是本领域已知的。对合适测定方法的选择在本领域技术人员的能力范围内。
一旦化合物被鉴定能够降低PDK1催化活性，就可进一步测试所述化合物与其它酶相比对PDK1进行选择性抑制的能力。本发明化合物所引起的抑制作用使用标准体外或体内测定例如本领域公知或本申请描述的那些测定来测量。
可进一步在细胞模型或动物模型中对化合物在与PDK1活性相关的表型中引起可检测的变化的能力进行测试。除细胞培养外，还可使用动物模型来测试PDK1抑制剂在动物模型中治疗癌症的能力。
6.药物组合物
在另一个方面，本发明提供药物组合物，其包含所提供的化合物及任选的药用赋形剂(例如载体)。
所提供的药物组合物包含本申请所述化合物的光学异构体、非对映异构体或药用盐。例如，在一些实施方案中，药物组合物包含药用盐。包含在药物组合物中的化合物可与药用载体共价连接。可选择地，包含在药物组合物中的本发明化合物不与药用载体共价连接。
本申请使用的“药用载体”是指药物赋形剂，例如适于胃肠内或胃肠外使用的不会与浸出物发生有害反应的药学和生理学上可接受的有机或无机载体物质。合适的药用载体包括水、盐溶液(例如林格溶液)、醇类、油类、胶类和糖类，例如乳糖、直链淀粉或淀粉、脂肪酸酯、羟甲基纤维素和聚乙烯基吡咯烷酮。可对上述制剂进行灭菌且若需要，则可与不会与本发明化合物发生有害反应的辅助物质例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于调节渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/或香料等混合。
可将所提供的化合物单独或与一种或多种其它药物一起给药于患者。共给药意在包括以分开形式将多种化合物同时或先后给药或以组合(多于一种化合物)形式将多种化合物同时或先后给药。在一些实施方案中，所述制剂与其它活性物质联用(例如为了减少代谢性降解)。
A.制剂
本发明化合物可按很多种口服、胃肠外和局部用剂型形式来制备和给药。在一些实施方案中，所提供的化合物通过注射(例如静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内)来给药。在一些实施方案中，本申请所述化合物通过吸入(例如鼻内)来给药。在一些实施方案中，所提供的化合物经皮给药。还预期多种给药途径(例如肌内、口服或经皮)可用于给药本发明化合物。本发明还提供药物组合物，其包含一种或多种所提供的化合物和一种或多种药用载体或赋形剂。
为了由所提供的化合物制备药物组合物，药用载体可为固体或液体。呈固体形式的制剂包括粉末剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。在一些实施方案中，固体载体是一种或多种还可作为稀释剂、矫味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包囊材料的物质。
在一些实施方案中，当组合物是粉末剂时，载体是微细分散的固体，其与微细分散的活性组分混合在一起。在一些实施方案中，当组合物被配制成片剂时，将活性组分与具有必要粘性的载体以合适的比例混合。
在一些实施方案中，所提供的粉末剂和片剂含有5%-70%活性化合物。合适的载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。在一些实施方案中，组合物被配制成扁囊剂或锭剂。在一些实施方案中，片剂、粉末剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂和/或锭剂可用作适于口服给药的固体剂型。
在一些实施方案中，为了制备栓剂，首先使低熔点蜡例如脂肪酸甘油酯的混合物或可可脂熔化，然后将活性组分均匀分散在其中。然后将熔化的均匀混合物倒入常规尺寸的模具中，冷却且固化。
呈液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，例如在水或水/丙二醇中的溶液剂。在一些实施方案中，对于胃肠外注射剂，液体制剂可被配制成在聚乙二醇水溶液中的溶液剂。
当需要或期望胃肠外给药时，就本发明化合物而言特别合适的混合物是无菌注射溶液剂(优选为油性或水性溶液剂)及混悬剂、乳剂或植入剂(包括栓剂)。具体地，用于胃肠外给药的载体包括葡萄糖水溶液、盐水、纯净水、乙醇、甘油、丙二醇、花生油、芝麻油、聚氧乙烯嵌段聚合物等。安瓿是常见的单位剂型。还可将本发明化合物加到脂质体中或通过经皮泵或贴剂来给药。适用于本发明的药物混合物包括例如在Pharmaceutical Sciences(第17版,Mack Pub.Co.,Easton,PA)和WO96/05309中描述的那些混合物，将其各自引入本申请作为参考。
适于口服使用的水溶液剂可如下制备：将活性组分溶解在水中且按需加入合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂。适于口服使用的水混悬剂可如下制备：将微细分散的活性组分分散在含有粘性物质例如天然或合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠及其它公知的助悬剂的水中。
本申请还包括以下呈固体形式的制剂，其意在使用前即时转化为用于口服给药的呈液体形式的制剂。上述液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。这些制剂除活性组分外还可含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、助溶剂等。
在一些实施方案中，所提供的药物组合物呈单位剂量形式。在上述形式中，组合物被细分成含有适量活性组分的单位剂量。单位剂量形式可为包装制剂，所述包装含有离散的多个药物组合物，例如置于小瓶或安瓿中的片剂、胶囊剂和粉末剂。在一些实施方案中，单位剂量形式是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂本身或呈包装形式的合适数目的这些剂型中的任何一种。
根据具体应用和活性组分的效力，活性组分在单位剂量形式中的量可在以下范围内变化或调整：0.1mg-10000mg，更通常为1.0mg-1000mg，最通常为10mg-500mg。在一些实施方案中，所提供的组合物含有其它相容的治疗剂。
一些化合物在水中可能具有有限的溶解度且在组合物中可能需要表面活性剂或其它合适的共溶剂。上述共溶剂包括聚山梨醇酯20、60和80，Pluronic F-68、F-84和P-103、环糊精和聚氧乙烯(35)蓖麻油。上述共溶剂的使用水平按重量计通常为约0.01%至约2%。
在一些实施方案中，为了降低制剂给药时的可变性、减少混悬剂或乳剂中各个组分的物理分离和/或改善制剂，可能需要比单纯水溶液的粘度大的粘度。上述增粘剂包括例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、硫酸软骨素和其盐、透明质酸和其盐及上述物质的组合。上述物质的使用水平按重量计通常为约0.01%至约2%。
所提供的组合物还可包含用于实现持续释放和/或舒适性的组分。上述组分包括高分子量阴离子性粘性聚合物、胶凝多糖和微细分散的药物载体底物。这些组分更详细地参见美国专利4,911,920、5,403,841、5,212,162和4,861,760。出于所有目的，将这些专利的全部内容引入本申请作为参考。
B.有效剂量
所提供的药物组合物包括以下组合物，其中含有治疗有效量的活性成分，即所述量可有效实现活性成分的所需目的。针对具体应用的实际有效量将尤其取决于所治疗的病症。在一些实施方案中，当在方法中给药以治疗癌症时，所提供的组合物将含有可有效实现所需结果的活性成分量(例如在受试者中减少癌细胞的数目)。
向哺乳动物给药的剂量和频率(单剂或多剂)可随多种因素而变化，所述因素包括导致PDK1活性提高的疾病、哺乳动物是否患有其它疾病和其给药途径；接受者的大小、年龄、性别、健康情况、体重、体重指数和饮食；所治疗的疾病(例如癌症)的症状性质和程度、并行治疗的种类、所治疗的疾病的并发症或其它与健康相关的问题。其它治疗方案或治疗剂可与本发明方法和化合物联用。
对于本申请描述的任何化合物，治疗有效量最初可通过细胞培养测定来确定。目标浓度将为活性化合物的以下浓度，所述浓度当例如使用本申请描述的方法来测量时能够降低PDK1催化活性。
用于人类的治疗有效量可通过动物模型来确定。例如，可对用于人类的剂量进行配制以实现据信在动物中是有效的浓度。如上所述，用于人类的剂量可如下调整：对PDK1抑制进行监测且对剂量进行上调或下调。
剂量可随患者的需要和所使用的化合物而变化。在一些实施方案中，向患者给药的剂量足以在患者中随时间实现有益的治疗响应。剂量的大小还将取决于任何不良副作用的存在、性质和程度。在一些实施方案中，治疗以低于化合物最佳剂量的较小剂量为开始。然后小幅增加剂量直到实现具体情况下的最佳作用。在本发明一个实施方案中，剂量范围为0.001%-10%w/v。在另一个实施方案中，剂量范围为0.1%-5%w/v。
等价形式
以下代表性实施例意在帮助说明本发明，而非意在且不应该被理解为对本发明范围进行限制。实际上，基于本申请全部内容，包括以下实施例及本申请引用的科技文献和专利文献，除本申请显示和描述的那些内容外，本发明多种变化形式和本发明多种其它实施方案对于本领域技术人员将是显而易见的。还应该理解的是，为了有助于描述本领域状态，将所引用的参考文献的内容引入本申请作为参考。
应该理解的是，对于本申请描述的化合物制备，当反相HPLC用于纯化化合物时，化合物可按单(三氟乙酸盐)、二(三氟乙酸盐)或三(三氟乙酸盐)形式存在。
还应该理解的是，本发明包括本申请描述的单独化合物。当所示例的单独化合物以盐例如三氟乙酸盐形式来分离和/或表征时，本发明包括所述盐的游离碱及所述游离碱的其它药用盐。
以下实施例含有重要的附加信息、示例和指导，可对它们进行调整以将本发明实施为其各种实施方案及其等价形式
实施例
如以下实施例中所述，在一些示例性实施方案中，化合物按照以下一般方法来制备。应该理解的是，尽管合成方法和方案描述了本发明一些化合物的合成，但以下方法和本领域技术人员已知的其它方法可用于本申请描述的所有化合物及这些化合物的每个小类和种类。
实施例1
Figure BDA00001732070200561
步骤1：合成3-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲醛(实施例1.2)：装有3-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.1,通过WO2008005457中报道的方法来制备)(3.0g,8.9mmol)、联硼酸二频哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)(9.0g,35.6mmol)、KOAc(乙酸钾)(1.8g,17.8mmol)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2([1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯·CH2Cl2)(0.23g,0.28mmol)和DMSO(二甲基亚砜)(1ml)的烧瓶用氮气冲洗。加入1,4-二氧杂环己烷(30mL)，将反应混合物加热至90℃且保持2h，然后将其冷却至室温。加入化合物3-溴苯甲醛(5.5g,17.8mmol)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(0.23g,0.28mmol)和K3PO4(10ml,2M,0.02mmol)，在氮气下加热至90℃且再保持5小时。冷却至室温，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的酯层用Na2SO4干燥，真空浓缩。用硅胶纯化(14%乙酸乙酯/己烷)，得到2.43g化合物1.2(58%)。ESI-MS(M+H+):363.1。
合成2-氨基吡啶-3-甲酸甲酯：将2-氨基吡啶-3-甲酸(13.8g,0.1mol)和K2CO3(27.6g,0.2mol,2.0当量)在DMSO中的混悬液加热至回流，然后将溶液冷却至环境温度。然后向混合物中加入碘甲烷(14.2g,0.1mol,1.0当量)，将溶液搅拌18小时。过滤混合物，浓缩。残留物用硅胶垫过滤(用含有0.1%NH4OH的5/95(EtOH(乙醇)/CH2Cl2)洗脱)。将所得到的溶液浓缩，将残留物混悬在Et2O(乙醚)中，过滤，干燥，得到2-氨基吡啶-3-甲酸甲酯(10.8g,71%)。ESI-MS(M+H+):153.1。
步骤2：合成2-(3-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸甲酯(实施例1.3)：3-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲醛(1.2)(4.85g,13.4mmol)、2-氨基吡啶-3-甲酸甲酯(2.05g,13.4mmol)和对甲苯磺酸一水合物催化剂(217mg,1.34mmol)在回流甲苯中的溶液使用配备有无水Na2SO4和
Figure BDA00001732070200571
分子筛的迪安-斯托克(Dean-Stark)分水器来除去水。18小时后，将反应混合物冷却至环境温度，然后除去有机溶剂，得到粗产物(6.65g,13.4mmol)，将其溶解在无水甲醇中，在0℃缓慢加入NaBH3CN(12.6g,20mmol)。将所得到的混合物在室温搅拌5小时。TLC显示反应完成。然后除去有机溶剂，得到粗产物，其通过硅胶柱(用33%乙酸乙酯/石油醚洗脱)来纯化，得到2-(3-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸甲酯(3.35g,收率51%)。ESI-MS(M+H+):499.1。
步骤3：合成2-(3-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸(实施例1.4)：向2-(3-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸甲酯(3.347g,6.72mmol)在混合溶剂(THF(四氢呋喃):MeOH(甲醇):H2O=3:2:1)中的溶液中缓慢加入LiOH(323mg,13.44mmol)。将所得到的混合物在室温搅拌15小时。TLC显示反应完成。然后除去有机溶剂，得到粗产物，其通过硅胶柱(用33%乙酸乙酯/石油醚洗脱)来纯化，得到2-(3-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸(1.2g,收率52%)。ESI-MS(M+H+):345.1。
实施例1.5：合成2-(3-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：向2-(3-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸(344mg,1mmol)的无水DMF(二甲基甲酰胺)(20ml)溶液中滴加DIPEA(二异丙基乙基胺)(265mg,2mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后加入3,4-二氟苄基胺(286mg,2mmol)和HATU(760mg,2mmol)。将混合物在室温搅拌18小时。反应完成后，除去溶剂，残留物通过柱色谱来纯化，得到所需产物(100mg,收率22%)。ESI-MS(M+H+):470.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.15-9.30(m,2H),8.16-8.27(m,4H),7.85(d,1H),7.70(s,1H),7.59(d,1H),7.29-7.41(m,3H),7.08-7.22(m,3H),6.73-6.77(m,1H),4.71(s,2H),4.42(d,2H),2.16(s,1H)。
实施例1.6-1.15以与实施例1.5类似的方法来制备。
合成环戊基甲胺盐酸盐(用于实施例1.8和1.19的中间体)：历时2h将硼烷(浓度为1M的四氢呋喃溶液,52.7mL,52.7mmol,1.1当量)滴加到搅拌的环戊烷甲腈(4.56g,47.9mmol)的无水四氢呋喃(20mL)溶液中。将所得到的将溶液回流搅拌18h。将反应混合物冷却至环境温度，用甲醇(67mL)分小份小心稀释。溶液用冰浴冷却，将氯化氢气体鼓泡通过溶液0.5h。将反应混合物回流1.5h，挥发物通过真空旋转蒸发来除去。向残留物中加入甲醇(50mL)，将混合物真空旋转蒸发。将上述甲醇加入操作重复两次，得到白色固体，其通过从乙醇:乙酸乙酯中析出来进一步纯化，得到3.62g(56%)(环戊基甲基)胺盐酸盐。ESI-MS(M+H+):136.0。
实施例1.16-1.19以与实施例1.5-1.15相同的合成方案来制备，其中由5-溴噻吩-2-甲醛开始。
实施例1.20以与实施例1.5类似的方法来制备。
实施例2
步骤1.合成(S)-2-氨基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(实施例2.1)：向2-氨基吡啶-3-甲酸(3g,21.7mmol)的DCM(二氯甲烷)(100ml)溶液中加入HBTU(16.5g,43.4mmol,2.0当量)、(S)-1-(4-氟苯基)乙胺(3.02g,21.7mmol,1.0当量)和TEA(10.97g,0.11mol,5.0当量)。将反应混合物在室温搅拌18h。过滤溶剂，除去，残留物通过柱色谱(PE(石油醚)/EA(乙酸乙酯)=2:1)来纯化，得到所需产物(4.2g,收率74%)。ESI-MS(M+H+):260.1。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.03(q,1H),7.94(dd,1H),7.38-7.42(m,2H),7.02-7.08(m,2H),6.66(dd,1H),5.16-5.21(q,1H),1.53(d,3H)。
步骤2.合成(S)-2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：在室温向(S)-2-氨基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(2.6g,10mmol)的5mL甲醇溶液中加入5-溴噻吩-2-甲醛(2.29g,12mmol,1.2当量)。将反应混合物加热至回流，搅拌16h。然后在室温向反应混合物中加入10mL甲醇和NaBH4(380mg,10mmol,1.0当量)。将反应混合物在室温搅拌2h。溶剂通过旋转蒸发来除去，残留物通过硅胶色谱(PE/EA=2:1)来纯化，得到所需产物(2.48g,收率58%)。ESI-MS(M+H+):434.0。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.10(dd,1H),7.85(dd,1H),7.28-7.33(m,2H),6.94-7.00(m,2H),6.81(d,1H),6.70(d,1H),6.58(dd,1H),5.06-5.12(q,1H),4.64(s,2H),1.45(d,3H)。
步骤3.(S)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-2-(((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺：装有(S)-2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(0.58g,1.4mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(690mg,2.8mmol,2.0当量)、KOAc(248mg,2.8mmol,2.0当量)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](1.2g,1.5mmol,0.05当量)的烧瓶用氮气冲洗。加入1,4-二氧杂环己烷(20ml)和DMSO(3ml)，将反应混合物在90℃搅拌2h。将溶液冷却至室温。除去溶剂，残留物通过硅胶色谱(PE/EA=5:1)来纯化，得到所需产物(540mg,收率61%)。ESI-MS(M+H+):482.2。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.47(d,1H),8.23(dd,1H),7.57(dd,1H),7.47(d,1H),7.31-7.34(m,2H),7.02-7.06(m,3H),6.51-6.54(q,1H),6.22(s,1H),5.20(q,1H),4.89(t,2H),1.55(d,3H),1.30(s,12H)。
实施例2.4：合成N-[(1S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-({[5-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)吡啶-3-甲酰胺：装有化合物(S)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-2-(((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(58mg,1.2mmol)、6-碘-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(29mg,1.2mmol,按照WO2004/072033中报道的方法来制备)、2M K2CO3(1.20mL)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](9.8mg,0.012mmol)的烧瓶用氮气冲洗。加入1,4-二氧杂环己烷(5mL)，将反应混合物加热至90℃且保持2h。将溶液冷却至室温。除去溶剂，残留物通过制备性HPLC来纯化，得到(S)-2-(((5-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(实施例2.4,11mg,19.4%)。ESI-MS(M+H+):472.1。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.93(宽峰,1H),8.35(宽峰,1H),8.23(d,1H),8.01-8.03(dd,1H),7.84(d,1H),7.69(d,1H),7.28-7.31(m,3H),7.03(d,1H),6.91-6.96(m,2H),6.81-6.85(m,1H),5.06-5.11(q,1H),4.77(s,2H),1.44(d,3H)。
实施例2.5-2.14以与实施例2.4类似的方法来制备。
合成6-氯吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(用于实施例2.13.1的中间体)：
Figure BDA00001732070200601
步骤1：将5-氨基-2-氯吡啶-4-甲酸(1.3g,7.6mmol)和甲脒(0.66g,15.1mmol,2.0当量)的AcOH溶液加热至120℃且保持4h，然后除去溶剂，加入水，用NaHCO3将pH调节至8，过滤，得到6-氯吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(1.1g,收率81.5%)。ESI-MS(M+H+):182.0。1H NMR(400MHz,DMSO)δ:12.77(s,1H),8.92(s,1H),8.25(s,1H),7.98(s,1H)。
步骤2：将SOCl2(20ml)、6-氯吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(1.81g,10mmol)和DMF(催化量)的溶液加热至回流且保持2h。将溶剂蒸发掉，粗产物不经进一步纯化即用于下一步。ESI-MS(M+H+):200.0。
步骤3：将上述产物(2g,10mmol)溶解在氨水(20ml)中，将反应混合物在室温搅拌1h，过滤，得到6-氯吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.56g,87%)。ESI-MS(M+H+):181.0。1H NMR(400MHz,DMSO)δ:8.93(s,1H),8.53(s,1H),8.33(s,1H),8.28(s,2H)。
合成2-(6-碘喹唑啉-4-基氨基)乙醇(用于实施例2.14的中间体)：
Figure BDA00001732070200602
向4-氯-6-碘喹唑啉(500mg,1.72mmol)的异丙醇(15mL)溶液中加入2-氨基乙醇(213mg,3.4mmol)。将反应混合物加热至100℃且保持3h。冷却至室温，由反应混合物收集析出物，用石油醚洗涤，得到所需产物(326mg,60%)。ESI-MS(M+H+):316.0。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:9.35(宽峰,1H),8.89(s,1H),8.68(s,1H),8.15(d,1H),7.54(d,1H),3.66(s,4H)。
按照用于实施例2.4的方法来合成(S)-2-(((5-(4-氯喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(用于实施例2.15的中间体)。ESI-MS(M+H+):517.0。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.27(s,1H),8.97(s,1H),8.64(s,1H),8.29-8.31(m,2H),8.15(dd,1H),8.04(d,1H),7.65(d,1H),7.32-7.36(m,3H),7.02-7.06(m,3H),6.61(dd,1H),5.24(q,1H),4.9(dd,2H),1.58(d,3H)。
实施例2.15：(S)-2-(((5-(4-(2-氨基乙基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070200611
向装有10ml乙烷-1,2-二胺的烧瓶中加入(S)-2-(((5-(4-氯喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺。将反应混合物加热至80℃且保持2h。冷却至室温，将过量的乙烷-1,2-二胺蒸发掉，通过制备性HPLC来纯化，得到所需产物(20mg,48%)。ESI-MS(M+H+):542.0。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ:8.48(s,1H),8.29(d,1H),8.19(dd,1H),8.05(dd,1H),7.96(dd,1H),7.72(d,1H),7.41-7.37(m,3H),7.06-7.02(m,3H),6.66(dd,1H),5.18(q,1H),4.83(s,2H),3.93(t,1H),3.29(t,1H),1.53(d,3H)。
实施例2.16-2.39以与实施例2.4类似的方法来制备。
合成用于实施例2.16-2.19的中间体：
Figure BDA00001732070200612
合成6-溴-N-甲基-3-硝基喹啉-4-胺：在室温向6-溴-4-氯-3-硝基喹啉(4.5g,15.65mmol,按照Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,18(3),1027-1030;2008中报道的方法来制备)的Et2O(20ml)溶液中缓慢加入甲胺(0.58g,18.8mmol,1.2当量)。将所得到的混合物在室温搅拌0.5h直到TLC显示原料消失。将溶液真空浓缩，通过硅胶柱来纯化，得到所需产物(4.1g,93%)。ESI-MS(M+H+):282.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.35(s,1H),8.54(d,1H),7.82-7.89(m,2H),9.85(宽峰,1H),3.64(d,3H)。
合成6-溴-N4-甲基喹啉-3,4-二胺：将6-溴-N-甲基-3-硝基喹啉-4-胺(2g,7.1mmol)和兰尼镍(0.2g)在MeOH-THF(1∶1,50mL)中的混合物在室温和压力为1.1巴的H2下搅拌1h。然后滤出催化剂，将滤液蒸发至干。残留物通过硅胶柱色谱(PE-EA 3:1)来纯化，得到所需产物，其为绿色固体(1.78g,100%)。ESI-MS:252.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.47(s,1H),7.98(d,1H),7.82(d,1H),7.52(dd,1H),3.82(宽峰,1H),3.66(宽峰,1H),2.98(d,3H)。
合成8-溴-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2(3H)-酮：在0℃向6-溴-N4-甲基喹啉-3,4-二胺(1.78g,7.06mmol)的THF溶液中加入CDI(2.28g,14.12mmol)。将反应混合物在室温搅拌24h后，将溶剂蒸发掉，残留物通过硅胶柱来纯化，得到所需产物(0.78g,39%)。ESI-MS(M+H+):278.0。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:3.77(d,3H),7.73(dd,1H),7.93(d,1H),8.43(s,1H),8.68(s,1H),11.65(s,1H)。
合成8-溴-1,3-二甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2(3H)-酮：向8-溴-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2(3H)-酮(400mg,1.4mmol)的溶液中加入Cs2CO3(420mg,2.2mmol)和CH3I(410mg,2.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌12h，过滤。浓缩滤液，通过硅胶柱来纯化，得到产物(330mg,78%)。ESI-MS(M+H+):292.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.73(s,1H),8.38(d,1H),8.06(d,1H),7.71(dd,1H),3.94(s,3H),3.63(s,3H)。
合成8-溴-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉：向6-溴-N4-甲基喹啉-3,4-二胺(1.35g,5.35mmol)的MeOH(30ml)溶液中加入三乙氧基甲烷(1.6g,10.7mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后浓缩，通过硅胶柱来纯化，得到所需产物，其为棕色固体(510mg,36%)。ESI-MS(M+H+):262,264。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.33(s,1H),8.42(d,1H),8.17(d,1H),7.97(s,1H),7.78(dd,1H),4.30(s,3H)。
8-溴-1,2-二甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉由三乙氧基乙烷来类似地制备。ESI-MS(M+H+):276.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.23(s,1H),8.37(d,1H),8.12(d,1H),7.73(dd,1H),4.15(s,3H),2.72(s,3H)。
合成用于实施例2.20的中间体：
步骤1：合成4-氯-5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶：向4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(参见Young等人,JMC(2008),51(13),3934-3945)(2.5g,0.0089mol)、N,N-二异丙基乙胺(3mL,0.02mol)和4-二甲基氨基吡啶(0.01g，0.00009mol)的二氯甲烷(50mL,0.8mol)混悬液中加入苯磺酰氯(1.4mL,0.011mol)，在室温搅拌1h，其变为澄清溶液。LC-MS显示反应完成。用DCM和水进行后处理。用MgSO4干燥，浓缩。然后残留物通过短硅胶柱(DCM)来纯化，得到所需产物，其为白色固体(3.0g,80%)。ES+/420.00。
步骤2：合成5-碘-N-(4-甲氧基苄基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺：将4-氯-5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(420mg,1mmol)、K2CO3(280mg,2mmol,2当量)和对甲氧基苄胺(280mg,2mmol)在二氧杂环己烷(200ml)中的混合物加热至90℃且保持1h。除去溶剂，残留物通过硅胶柱来纯化，得到所需产物(440mg,50%)。ESI-MS(M+H+):521。
步骤3：合成5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺：将5-碘-N-(4-甲氧基苄基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(520mg,1mmol)的三氟乙酸(10ml)溶液加热至回流且保持1h。将溶剂蒸发掉，残留物用NaHCO3中和，通过柱色谱来纯化，得到所需产物(344mg,86%)。ESI-MS(M+H+):401。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.22(s,1H),8.15-8.13(d,2H),7.87(s,1H),7.78(t,1H),7.69-7.65(t,2H),7.0(s,2H)。
步骤4：合成(S)-2-(((5-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：将(S)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-2-(((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(400mg,0.83mmol)、5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(332mg,0.83mmol)、2M K2CO3(230mg,1.66mmol)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](34mg,0.02mmol)在1,4-二氧杂环己烷(200mL)中的混合物在90℃和氮气下加热3h。将反应混合物冷却至室温。除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE/EA=1/2)来纯化，得到所需产物(84mg,16%)。ESI-MS(M+H+):628.1。
实施例2.20：(S)-2-(((5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：将(S)-2-(((5-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(144mg,0.23mmol)和K2CO3(127mg,0.92mmol)在MeOH(20ml)中的混合物加热至回流且保持2h。冷却至室温，浓缩。通过制备性HPLC来纯化，得到所需产物，其为浅黄色固体(40mg,35.6%)。ESI-MS(M+H+):488.2。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.19-8.17(dd,2H),8.13(宽峰,1H),7.89-7.75(m,2H),7.34-7.31(m,2H),7.09(s,1H),6.99-6.97(m,3H),6.89(d,1H),6.62-6.58(m,1H),5.20-5.15(m,1H),4.79(q,2H),1.52(d,3H)。
合成用于实施例2.23的中间体：
Figure BDA00001732070200641
步骤1：将2,4-二溴-5-硝基吡啶(700mg,2.5mmol)、MeNH2(甲胺)(155mg,5mmol)和K2CO3(690mg,5mmol)在DCM/H2O中的混合物在室温搅拌6h。将溶剂蒸发掉，得到产物2-溴-N-甲基-5-硝基吡啶-4-胺，其不经进一步纯化即用于下一步。ESI-MS(M+H+):232.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.97(s,1H),6.93(s,1H),3.06(s,3H)。
步骤2：将2-溴-N-甲基-5-硝基吡啶-4-胺(519mg,2.2mmol)、铁(440mg,7.9mmol)和NH4Cl(1.2g,22mmol)在THF/H2O中的混合物加热至回流且保持2h。过滤反应混合物，真空除去THF，得到产物6-溴-N4-甲基吡啶-3,4-二胺，其不经进一步纯化即用于下一步。ESI-MS(M+H+):202.1。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.18(s,1H),6.50(s,1H),2.66(s,3H)。
步骤3：将6-溴-N4-甲基吡啶-3,4-二胺(390mg,1.94mmol)、H2O和CNBr(1g,9.7mmol)在THF中的混合物回流搅拌16h。除去溶剂，残留物通过硅胶柱(DCM:MeOH=20:1)来纯化，得到所需产物6-溴-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-胺。ESI-MS(M+H+):227.0。
实施例3
Figure BDA00001732070200651
合成2-氨基吡啶-3-甲酸乙酯：将2-氨基吡啶-3-甲酸(5.01g,0.0363mol)、乙醇(50mL,0.8mol)和硫酸(6.0mL,0.11mol)的混合物回流过夜。加入水以稀释反应溶液，然后用碳酸钠水溶液中和。然后溶液用3×100mL乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，蒸发。收集到5.05g白色固体(84%)。1H NMR(300MHz,CDCl3):8.21(dd,J=4.8;1.8Hz,1H),8.14(dd,J=8.1;1.8Hz,1H),6.62(dd,J=7.9;4.9Hz,1H),6.47(宽单峰,2H),4.34(q,J=7.0Hz,2H),1.38(t,J=7.2Hz,3H)。
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸乙酯：将2-氨基吡啶-3-甲酸乙酯(5.00g,30.1mmol)和5-溴-噻吩-2-甲醛(5.37mL,45.1mmol)溶解在1,2-二氯乙烷(120mL)中，在室温搅拌5小时。分批加入呈微细研磨粉末形式的三乙酰氧基硼氢化钠(12.8g,60.2mmol)。将反应混合物在室温搅拌72小时。反应完成后，反应混合物通过加入盐酸来淬灭，剧烈搅拌1小时。混合物用饱和碳酸钠水溶液中和，用乙酸乙酯(300mL)萃取。有机相先后用碳酸氢钠、水和盐水洗涤。用硫酸镁干燥，蒸发。油状物通过快速色谱(使用10-30%乙酸乙酯:己烷梯度)来纯化。收集到6.68g黄色油状物(65%)。ES(+)MSm/e=341.0(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3):8.32(dd,J=4.9;1.9Hz,2H),8.14(dd,J=7.7;1.9Hz,1H),6.86(d,J=3.9Hz,1H),6.76(d,J=3.6Hz,1H),6.59(dd,J=7.8;4.8Hz,1H),4.81(dd,J=5.7;0.9Hz,2H),4.32(q,J=7.1Hz,2H),1.37(t,J=7.0Hz,3H)。
合成2-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸乙酯：将2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸乙酯即3.2a(4.078g,0.01195mol)、(2,4-二甲氧基苄基)-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基]-胺(6.057g,0.01438mol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](400mg,0.0005mol)在1,4-二氧杂环己烷(70mL,0.9mol)和25.6mL饱和碳酸钠水溶液中搅拌。将反应混合物在90℃加热1小时，HPLC-MS显示反应完成，冷却至室温。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤，蒸发。粗品通过快速色谱(70-100%EtOAc(乙酸乙酯):己烷梯度,220g硅胶)来纯化。ES(+)MS m/e=556.3(M+1)。
合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸：将乙腈(30mL,500mmol)加到含有2-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸乙酯即3.3a(5.614g,10.10mmol)的烧瓶中。加入三氟乙酸(44.4mL,576mmol)，将反应混合物在60℃搅拌6小时。反应混合物用饱和碳酸钠水溶液淬灭，在200mL EtOAc和200mL水之间分配。分离有机相，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。用硫酸镁干燥，蒸发。收集到3.93g(96%)2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸乙酯，其为粗固体。ES(+)MS m/e=406.2(M+1)。
将2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸乙酯(1.516g,3.739mmol)在乙醇(24.5mL,4.20E2mmol)中搅拌。加入1.0M氢氧化钠的水溶液(11.2mL,11.2mmol)，在40℃搅拌3小时。反应混合物用1NHCl(~11.2mL)中和，通过真空旋转蒸发来浓缩。过滤所得到的混悬液，分离到褐色固体(1.33g,94%)，干燥过夜。ES(+)MS m/e=378.2(M+1)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.55(t,J=5.67Hz,1H),8.46(d,J=1.89Hz,1H),8.44(s,1H),8.33(dd,J=2.27,4.91Hz,1H),8.11(dd,J=2.08,7.74Hz,1H),8.05(dd,J=2.08,8.88Hz,1H),7.67(d,J=8.69Hz,1H),7.49(d,J=3.78Hz,1H),7.10(d,J=3.78Hz,1H),6.68(dd,J=4.91,7.55Hz,1H),4.91(d,J=6.04Hz,2H)。
合成3-氨基吡嗪-2-甲酸甲酯：将3-氨基吡嗪-2-甲酸甲酯(3.690g,24.10mmol)和5-溴-噻吩-2-甲醛(13.302g,69.627mmol)在1,2-二氯乙烷(87.2mL)中搅拌。加入乙酸(2.60mL,45.7mmol)，预搅拌15分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(14.53g,68.56mmol)，在室温搅拌过夜。HPLC-MS显示仍存在一些醛，加入1当量三乙酰氧基硼氢化钠，将反应混合物搅拌24小时。反应混合物用30mL 1M HCl淬灭，剧烈搅拌30分钟，用碳酸氢钠中和。反应混合物用乙酸乙酯萃取，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。用硫酸镁干燥，蒸发。混合物通过快速色谱(0-25%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到1.612g 3-氨基吡嗪-2-甲酸甲酯，其为白色固体。ES(+)MS m/e=328.0(M+1)。
合成3-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯即3.3b：将3-氨基吡嗪-2-甲酸甲酯即3.2b(1.612g,4.912mmol)、(2,4-二甲氧基苄基)-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基]-胺(2.681g,6.363mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](320mg,0.39mmol)在1,4-二氧杂环己烷(48.9mL,626mmol)中搅拌。加入饱和碳酸钠水溶液(7.84mL,14.7mmol)，在100℃加热。反应混合物通过HPLC-MS来监测，1.5小时后，反应完成。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤，蒸发。反应混合物通过快速色谱(0-5%MeOH:DCM)来纯化。收集到2.002g棕色无定形固体。ES(+)MS m/e=543.3(M+1)。
合成3-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯即3.4b：将三氟乙酸(10.00mL,129.8mmol)加到含有3.3b(1.89g,3.49mmol)的烧瓶中，在60℃搅拌40分钟。LCMS显示反应完成，用饱和碳酸钠水溶液淬灭。将混合物在100mL EtOAc和100mL水之间分配，分离有机相，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。固体从溶液中析出，通过过滤对两相进行分离。剩余的有机相用硫酸镁干燥，蒸发。产物通过LCMS来鉴定，合并，得到1.28g固体(94%)。ES(+)MS m/e=393.2(M+1)。
合成3-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸即3.5b：将1.0M氢氧化钠的水溶液(7.25mL,7.25mmol)加到3.4b(949mg,2.42mmol)的甲醇(16.8mL,415mmol)溶液中。将反应混合物在40℃加热2小时，然后在60℃加热1小时。用1N HCl(~7.25mL)中和。甲醇通过旋转蒸发来除去，过滤所得到的混悬液。分离到棕色固体，将其置于高真空下过夜。收集到801mg粗品。ES(+)MS m/e=379.2(M+1)。
用于合成化合物库的一般方法：将2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酸即3.5a(80.0mg,0.175mmol)和HATU(88.6mg,0.236mmol)溶解在DMF(2.0mL)中。将混合物在室温短暂搅拌，然后加入N,N-二异丙基乙胺(92.3μl,0.530mmol)和胺(0.318mmol)。将反应混合物在室温搅拌，通过HPLC-MS来监测。反应完成后，加入4mL DCM、2mL水和2mL盐水，充分振摇。收集有机相，而水相用1mL DCM再萃取两次。合并有机萃取物，蒸发。先后通过制备性HPLC和冻干来纯化，得到产物，其为TFA(三氟乙酸)盐。若可能，则TFA的化学计量通过19F NMR来确定。在一些情况下，化合物通过硅胶色谱来纯化，分离为母体形式。
实施例3.6：2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(2,5-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(TFA盐)：实施例3.6使用以上用于合成化合物库的方法由3.5a来合成。ES(+)MS m/e=503.2(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.83(宽单峰,1H),9.75(宽单峰,1H),9.11(t,J=6.0Hz,1H),8.65-8.75(m,2H),8.59(s,1H),8.26(d,J=12.0Hz,1H),8.25(s,1H),8.06(d,J=6.0Hz,1H),7.76(d,J=9.0Hz,1H),7.54(s,1H),7.27-7.11(m,5H),6.69(dd,J=3.0;3.0Hz,1H),4.85(d,J=6.0Hz,2H),4.46(d,J=6.0Hz,2H)。
实施例3.7-3.87以与实施例3.6类似的方法来合成。
实施例4
Figure BDA00001732070200681
合成2-(3-异丙氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯：将2-氨基吡啶-3-甲酸乙酯(0.498g,3.00mmol)、3-甲酰基-5-异丙氧基苯基硼酸(0.625g,3.00mmol)和对甲苯磺酸一水合物(44mg,0.23mmol)溶解在乙醇(10.0mL)中，在100℃加热过夜。蒸发反应混合物，再次溶解在1,2-二氯乙烷(12.0mL)中。分批加入微细研磨的三乙酰氧基硼氢化钠(2.03g,9.58mmol)，将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物通过与碳酸氢钠水溶液(20mL)一起剧烈搅拌来淬灭。加入乙酸乙酯(125mL)，用碳酸氢钠水溶液洗涤两次，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，蒸发。分离到粗硼酸，其为棕色油状物(1.18g)。将粗硼酸(1.18g,3.29mmol)溶解在四氢呋喃(8.0mL)中，与频哪醇(0.578g,4.89mmol)一起在室温搅拌过夜。反应混合物通过TLC来监测，蒸发，通过快速色谱(0-25%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到油状物(537.7mg,41%(两步))。
合成2-(3-(5-(环丙基氨甲酰基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯：将N-环丙基-3-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺(制备参见WO2008005457)(351.9mg,0.7531mmol)、2-(3-异丙氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯(365.1mg,0.8291mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](53.8mg,0.0659mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL,64.6mmol)中搅拌。加入1.04M碳酸氢钠水溶液(2.17mL,2.25mmol)，在100℃用微波处理7.5分钟。将反应混合物冷却至室温，倒入200mL乙酸乙酯中，用150mL碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用150mL盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(15-50%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化，高真空干燥。收集到327.0mg浅橙色泡沫(66%)。
合成2-(3-(5-(环丙基氨甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酰氯：将2-(3-(5-(环丙基氨甲酰基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯(327.0mg,0.5002mmol)溶解在乙醇(9.4mL)中，加入1.00M氢氧化钠水溶液(2.35mL,2.35mmol)。将反应混合物在100℃加热，通过LCMS来监测。1.5小时后，反应完成，但总计加热2.5小时。将反应混合物冷却至室温，浓缩，用水(10mL)稀释。反应混合物用2.35mL 1N盐酸酸化，析出白色析出物。将混合物搅拌过夜，过滤，用水洗涤，高真空干燥。收集到222mg羧酸，其为黄色固体(91%)。固体如下用于下一步：在DCM(9.1mL)中搅拌，加入亚硫酰氯(334μl)，然后加入三乙胺(500μl)，在室温搅拌。反应立即发生，将反应混合物蒸发至干，酰氯以粗品形式来使用。
实施例4.1.1：合成N-环丙基-3-(3-((3-(3,4-二氟苯基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-5-异丙氧苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺：将2-(3-(5-(环丙基氨甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酰氯(23.0mg,0.0456mmol)的二氯甲烷(2.00mL)溶液加到含有3,4-二氟苯胺(34.4mg,0.266mmol)的小瓶中，搅拌过夜。将反应混合物蒸发至干，再次溶解在1mL DMSO中，用滤器过滤。DMSO溶液通过Gilson制备性HPLC来纯化，将馏分冻干。收集到黄色粉末(8.1mg,30%)。ES(+)MS m/e=593.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.13(d,J=2.27Hz,1H),10.45(s,1H),8.71(d,J=1.89Hz,1H),8.60(d,J=1.89Hz,1H),8.55(d,J=3.78Hz,1H),8.44(宽单峰,1H),8.26(dd,J=1.89,4.91Hz,1H),8.11(dd,J=1.51,7.55Hz,1H),7.90(d,J=2.64Hz,1H),7.84(ddd,J=1.70,7.65,13.31Hz,1H),7.37-7.47(m,2H),7.28(s,1H),7.06-7.11(m,1H),6.80-6.87(m,1H),6.72(dd,J=4.91,7.55Hz,1H),4.61-4.75(m,3H),2.80-2.93(m,1H),1.28(d,J=6.04Hz,6H),0.66-0.76(m,2H),0.53-0.62(m,2H)。
实施例4.1.2-4.1.18以与实施例4.1.1类似的方法来合成。
Figure BDA00001732070200701
合成6-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)喹唑啉-4-胺：将6-溴喹唑啉-4-酮(0.800g,3.56mmol)、亚硫酰氯(10.0mL,137mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.100mL,1.29mmol)混合，回流2小时，然后蒸发至干。加入异丙醇(10.0mL,131mmol)和2,4-二甲氧基-苄基胺(0.655g,3.92mmol)，回流2.5小时。加入150mL乙酸乙酯，用2×75mL碳酸氢钠水溶液和1×75mL盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-5%甲醇:二氯甲烷)来纯化。收集到1.02g黄色粉末(77%)。ES(+)MS m/e=374.1(M+1)。
合成N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺：将6-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)喹唑啉-4-胺(452.0mg,1.208mmol)、联硼酸二频哪醇酯(338mg,1.33mmol)、乙酸钾(440mg,4.48mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](49.9mg,0.0611mmol)在高真空下保持15分钟，用氮气冲洗，加入二甲基亚砜(5.5mL,78mmol)。将反应混合物在90℃加热2小时，用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤。有机相用水洗涤三次，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。粗品通过快速色谱(30-100%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到438mg黄色油状物(86%)。1H NMR(300MHz,CDCl3):8.70(s,1H),8.11(s,1H),8.09(dd,J=8.2;1.6Hz,1H),7.78(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=8.4Hz,1H),6.52(d,J=2.1Hz,1H),6.47(dd,J=8.3;2.2Hz,1H),6.24(宽三重峰,J=5.3Hz,1H),4.79(d,J=5.4Hz,2H),3.88(s,3H),3.82(s,3H),1.37(s,12H)。
Figure BDA00001732070200711
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(4.2)：将2-氨基-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(5.00g,19.0mmol)溶解在1,2-二氯乙烷(80.0mL)中。加入5-溴-噻吩-2-甲醛(5.489g,28.73mmol)，预搅拌60分钟，然后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(8.04g,37.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用1M盐酸水溶液淬灭，剧烈搅拌，然后用碳酸钠水溶液中和。加入100mL乙酸乙酯，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(20-50%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。色谱纯化后，混合物通过从二氯甲烷和己烷中析出来进一步纯化，得到3.09g白色固体。第二批为0.30g浅黄色粉末(3.39g,41%)。ES(+)MSm/e=438.1(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3):8.46(宽三重峰,J=5.2Hz,1H),8.27(dd,J=4.7;1.7Hz,1H),7.61(dd,J=7.5;1.8Hz,1H),6.87-6.65(m,5H),6.55(dd,J=7.5;4.8Hz,1H),4.76(d,J=5.7Hz,2H),4.52(d,J=6.3Hz,2H)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(4.3)：向微波小瓶中加入2-[(5-溴-噻吩-2-基甲基)氨基]-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(2.19g,5.00mmol)、联硼酸二频哪醇酯(5.085g,20.02mmol)、乙酸钾(2.72g,27.7mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](438.0mg,0.5363mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(21.9mL,283mmol)。在氮气气氛下对反应混合物进行脱气。反应混合物在70℃用微波以300瓦处理5分钟。粗反应混合物用H2O(DI)洗涤，用EtOAc萃取，用MgSO4干燥，真空除去溶剂。梯度洗脱(0→50%)EtOAc(B)/己烷(A)用于纯化粗产物。收集到2.42g相对纯的化合物13.1(75%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.5分钟;ES(+)MS m/e486.3(M+1)。
实施例4.4：合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：将2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(4.2)(93.7mg,0.214mmol)和10.3(111.5mg,0.2646mmol)溶解在1,4-二氧杂环己烷(2.00mL,25.6mmol)中。先后加入饱和碳酸钠水溶液(0.458mL,1.28mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](15.8mg,0.0193mmol)。将反应混合物在100℃加热2.5小时，冷却至室温。将反应混合物在30mL乙酸乙酯和30mL水之间分配，搅拌，过滤。分离有机相，用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(50-100%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。物质通过与10mL乙酸乙酯一起研磨来进一步纯化。收集到米色粉末(60.4mg,43%)。1H NMR(300MHz,CD3OD/DMSO-d6):8.45(d,J=1.5Hz,1H),8.39(s,1H),8.24(dd,J=3.4;1.4Hz,1H),8.02(dd,J=6.6;1.5Hz,1H),7.96(dd,J=5.8;1.0Hz,1H),7.68(d,J=6.6Hz,1H),7.43(d,J=2.7Hz,1H),7.18(d,J=6.3Hz,1H),7.06(d,J=2.7Hz,1H),6.96(dd,J=6.6;1.5Hz,2H),6.87(t,J=6.9Hz,1H),6.67(dd,J=5.7;3.6Hz,1H),6.57(d,J=1.8Hz,1H),6.46(dd,J=6.2;1.6Hz,1H),4.87(s,2H),4.74(s,2H),4.50(s,2H),3.85(s,3H),3.77(s,3H)。
将上述产物(293.3mg,0.4494mmol)溶解在二氯甲烷(5.00mL)和三氟乙酸(2.50mL,32.4mmol)中。将反应混合物在室温搅拌48小时，浓缩，用乙酸乙酯稀释。有机相先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，蒸发，通过制备性反相HPLC来纯化。收集到128.95mg浅黄色粉末(57%)。ES(+)MS m/e=503.2(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):9.88(宽单峰,1H),9.78(宽单峰,1H),9.18(t,J=6.0Hz,1H),8.83(t,J=6.2Hz,1H),8.81(s,1H),8.61(d,J=1.8Hz,1H),8.27(dd,J=12.7;1.7Hz,1H),8.26(s,1H),8.08(dd,J=7.6;1.6Hz,1H),7.77(d,J=8.7Hz,1H),7.54(d,J=3.9Hz,1H),7.17-6.99(m,4H),6.70(dd,J=7.8;4.8Hz,1H),4.86(d,J=5.4Hz,2H),4.46(d,J=5.4Hz,2H)。
实施例4.5：合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(喹啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺：将N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(4.3)(100mg,0.206mmol)、6-溴喹啉(49.5mg,0.238mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](20.2mg,0.0247mmol)、1,4-二氧杂环己烷(2.00mL,25.6mmol)和1.88M碳酸钠水溶液(0.329mL,0.618mmol)混合，在微波反应器中在100℃加热5分钟。加入乙酸乙酯，反应混合物用硅藻土过滤，用额外的乙酸乙酯淋洗，蒸发。混合物通过制备性反相HPLC来纯化。收集到13.75mg浅黄色粉末(14%)。ES(+)MS m/e=487.2(M+1)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):9.27(t,J=5.8Hz,1H),9.05(dd,J=4.5;1.5Hz,1H),9.00(宽单峰,1H),8.77(d,J=8.1Hz,1H),8.33(d,J=1.8Hz,1H),8.26(t,J=1.2Hz,1H),8.24(dd,J=5.2;1.7Hz,1H),8.17(s,1H),8.15-8.13(m,1H),7.81(dd,J=8.3;5.0Hz,1H),7.60(d,J=3.6Hz,1H),7.17-7.00(m,4H),6.76(dd,J=7.7;4.9Hz,1H),4.89(s,2H),4.47(d,J=5.4Hz,2H)。
实施例4.6以与实施例4.5类似的方法使用6-碘喹唑啉来制备。
实施例4.7：2-(((5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：
将5-溴-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(98.7mg,0.292mmol)、联硼酸二频哪醇酯(73.2mg,0.288mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](23.5mg,0.0288mmol)和乙酸钾(86.2mg,0.878mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(2.00mL,19.2mmol)中搅拌，在微波反应器中在150℃加热10分钟。加入[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](18mg,0.023mmol)和1.88M碳酸钠水溶液(0.362mL,0.680mmol)，在微波反应器中在130℃加热10分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤，用硫酸镁干燥，蒸发。粗品通过快速色谱(0-100%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到80.0mg棕色油状物(55%)，其用于下一步。
将上述产物(80.0mg,0.130mmol)、碳酸钾(93.3mg,0.675mmol)和甲醇(2.00mL,49.4mmol)在100℃加热1小时。加入75mL乙酸乙酯，用75mL碳酸氢钠水溶液洗涤两次，然后用75mL盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过制备性反相HPLC来纯化。收集到10.3mg黄色粉末(17%)。ES(+)MSm/e=477.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):13.19(宽单峰,1H),9.47(s,1H),9.21(t,J=6.0Hz,1H),9.06(s,1H),8.88(宽单峰,1H),8.26(dd,J=4.8;1.8Hz,1H),8.14-8.08(m,2H),7.40(d,J=3.9Hz,1H),7.14-6.99(m,4H),6.72(dd,J=7.5;5.1Hz,1H),4.84(s,2H),4.45(d,J=5.7Hz,2H)。
实施例4.8：2-(((5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00001732070200741
步骤1：合成4-氯-5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶：向4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(参见Young等人,JMC(2008),51(13),3934-3945)(2.5g,0.0089mol)、N,N-二异丙基乙胺(3mL,0.02mol)和4-二甲基氨基吡啶(0.01g,0.00009mol)的二氯甲烷(50mL,0.8mol)混悬液中加入苯磺酰氯(1.4mL,0.011mol)，在室温搅拌1h，其变为澄清溶液。LC-MS显示反应完成。用DCM和水进行后处理。用MgSO4干燥，浓缩。然后残留物用短硅胶柱(DCM)纯化，得到所需产物，其为白色固体(3.0g,80%)。LCMS:RT=1.72min,ES+/420.00。
步骤2：合成5-碘-7-(苯基磺酰基)-N-(2,4,6-三甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺：将4-氯-5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.5g,0.001mol)、2,4,6-三甲氧基苄基胺盐酸盐(0.31g,0.0013mol)和碳酸铯(0.78g,0.0024mol)在三氟甲基苯(100mL,1mol)中的混悬液加热至回流过夜。LC-MS显示反应完成，其中仅形成所需产物(1.81min,ES+/581.1)。将溶剂蒸发掉，收集析出物，用MeOH和水洗涤，然后干燥，得到所需产物，其为灰白色固体(0.5g,70%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),8.17(d,J=7.59Hz,2H),7.39-7.68(m,5H),6.60-6.72(m,1H),6.15(s,2H),4.79(d,J=5.27Hz,2H),3.85(s,6H),3.82(s,3H)。
步骤3：合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(7-(苯基磺酰基)-4-(2,4,6-三甲氧基苄基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺：在氮气气氛下对2-[(5-溴-噻吩-2-基甲基)氨基]-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(200mg,0.4mmol)、联硼酸二频哪醇酯(100mg,0.4mmol)、乙酸钾(170mg,1.8mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](37mg,0.046mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.34mL,30.2mmol)中的混合物进行脱气。反应混合物在90℃用微波以150瓦处理10分钟，LC-MS显示原料不再存在。然后向上述反应混合物中加入5-碘-7-(苯基磺酰基)-N-(2,4,6-三甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(300mg,0.4mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.7mL,0.8mmol)，在90℃用微波以150瓦处理10分钟，LC-MS显示形成所需产物(1.66min,ES+/812.3)。用水和DCM进行后处理，用MgSO4干燥。通过硅胶柱(0-60%EtOAc/己烷)来纯化，得到所需产物(100mg,30%)。
合成2-(((5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(实施例4.8)：将N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(7-(苯基磺酰基)-4-(2,4,6-三甲氧基苄基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(0.1g,0.0001mol)和碳酸钾(0.08g,0.0006mol)的甲醇(10mL,0.2mol)溶液加热至回流且保持1h，LC-MS显示仅形成所需产物(1.23min,ES+/672.4)。将溶剂蒸发掉。用EtOAc和水进行后处理。用MgSO4干燥，浓缩。将上述将残留物溶解在二氯甲烷(4mL,0.06mol)中，加入三氟乙酸(1mL,0.01mol)，在室温搅拌过夜。LC-MS显示反应完成(0.955min,ES+/492.20)。将溶剂蒸发掉。通过Gilson HPLC(10-60%B)来纯化，得到所需产物，其为二TFA盐(10mg,20%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.30(s,1H),8.26-8.30(m,1H),8.16(dd,J=1.66,5.74Hz,1H),7.47(s,1H),7.19(dt,J=0.91,3.51Hz,1H),7.08(d,J=3.58Hz,1H),6.88-6.99(m,3H),6.79-6.86(m,1H),4.92(s,2H),4.55(s,2H)。MH+:492.20。
实施例4.9：合成2-(((5-(4-(氮杂环丁烷-1-基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070200751
将4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-碘喹唑啉(按照与2-(6-碘喹唑啉-4-基氨基)乙醇(合成实施例2.14)相同的方法由4-氯-6-碘喹唑啉和氮杂环丁烷来制备)(299.7mg,0.9633mmol)、联硼酸二频哪醇酯(270.2mg,1.064mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](39.3mg,0.0481mmol)和乙酸钾(285.9mg,2.913mol)在小瓶中混合，抽空15分钟，用氮气冲洗。加入二甲基亚砜(4.38mL,0.0616mol)，在90℃加热2小时。反应进程如下监测：通过HPLC-MS和TLC来观察4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-碘喹唑啉是否消失。反应完成后，加入2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(107.1mg,0.2444mmol)和饱和碳酸氢钠水溶液(0.708mL,0.733mmol)。将反应混合物在110℃加热1小时，冷却至室温。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤。然后有机相先后用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤两次。最后有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-10%甲醇:二氯甲烷,硅胶)来纯化。收集到121.3mg棕色粉末(91%)。ES(+)MSm/e=543.3(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3):8.55(s,2H),8.31(dd,J=4.9;1.6Hz,1H),7.94(d,J=1.8Hz,1H),7.89(dd,J=8.9;1.9Hz,1H),7.76(d,J=8.7Hz,1H),7.65(dd,J=7.8;1.8Hz,1H),7.16(d,J=3.9Hz,1H),7.02(d,J=3.9Hz,1H),6.88-6.80(m,2H),6.72(tt,J=8.9;2.2Hz,1H),6.57(dd,J=7.5;4.8Hz,1H),6.54(宽单峰,1H),4.89(d,J=5.7Hz,2H),4.61(t,J=7.6Hz,4H),4.57(d,J=6.0Hz,2H),2.55(五重峰,J=7.7Hz,2H)。
实施例4.10：合成2-(((5-(4-(环丙基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：将N-环丙基-6-碘喹唑啉-4-胺(按照与2-(6-碘喹唑啉-4-基氨基)乙醇(合成实施例2.14)相同的方法由4-氯-6-碘喹唑啉和环丙基胺来制备)(252.1mg,0.8103mmol)、联硼酸二频哪醇酯(258.0mg,1.016mmol)、乙酸钾(316.3mg,3.223mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](36.0mg,0.0441mmol)在高真空下保持15分钟，用氮气冲洗。加入二甲基亚砜(4.0mL,56mmol)，在90℃加热1小时。反应混合物用60mL乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤，用60mL乙酸乙酯洗涤。合并的有机萃取物先后用水和盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥，蒸发。收集到0.38g不纯的粗品。
将粗品(252.2mg,0.8103mmol)与2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(107.1mg,0.2444mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](10.2mg,0.0125mmol)在闪烁瓶中混合，在高真空下干燥。加入1,4-二氧杂环己烷(2.00mL)和饱和碳酸钠水溶液(0.52mL,1.5mmol)，然后在110℃加热1小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤。有机萃取物用碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用盐水洗涤1次。然后其用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，通过快速色谱(0-10%甲醇:二氯甲烷,硅胶)来纯化。产物是不纯的，通过快速色谱(50-100%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来再次纯化。收集到40.3mg无定形黄色固体(30%)。ES(+)MS m/e=543.3(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3):8.69(s,1H),8.43(t,J=5.4Hz,1H),8.29(dd,J=5.1;1.5Hz,1H),7.85(dd,J=8.7;1.5Hz,1H),7.77-7.72(m,2H),7.67(dd,J=7.6;1.7Hz,1H),7.08(d,J=3.9Hz,1H),6.97-6.90(m,2H),6.85-6.78(m,2H),6.69(tt,J=9.0;2.3Hz,1H),6.62(宽单峰,1H),6.53(dd,J=7.9;5.0Hz,1H),4.81(d,J=5.7Hz,2H),4.54(d,J=6.0Hz,2H),3.06(宽单峰,1H),1.01-0.93(m,2H),0.78-0.71(m,2H)。
实施例4.11：N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(4-吗啉代喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺：实施例4.11以与实施例4.9和4.10类似的方法由N-环丙基-6-碘喹唑啉-4-胺(按照与2-(6-碘喹唑啉-4-基氨基)乙醇(合成实施例2.14)相同的方法由4-氯-6-碘喹唑啉和吗啉来制备)来制备。ES(+)MS m/e573.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.20(t,J=5.67Hz,1H),8.82(s,2H),8.14-8.32(m,3H),8.09(d,J=6.80Hz,1H),7.83(d,J=8.31Hz,1H),7.55(d,J=3.40Hz,1H),6.94-7.19(m,4H),6.71(dd,J=4.91,7.55Hz,1H),4.84(宽单峰,2H),4.45(d,J=5.67Hz,2H),4.23(宽单峰,4H),3.78(宽单峰,4H)。
实施例4.12：N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(4-(异丙基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00001732070200771
合成2-(((5-(4-氯喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：向小瓶中加入N-(3,4-二氟苄基)-2-{[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基甲基]氨基}吡啶-3-甲酰胺(50.0mg,0.000103mol)、4-氯-6-碘-喹唑啉(36mg,0.00012mol)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](10.1mg,0.0000124mol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL,0.007mol)。在氮气气氛下将反应混合物溶解。然后加入碳酸钾(43mg,0.00031mol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(300.0μl,0.0003600mol)。反应混合物在60℃用微波以300瓦处理5分钟。粗反应混合物用盐水洗涤，用DCM萃取，用硫酸钠干燥，真空除去溶剂。梯度洗脱(0→50%)EtOAc(B)/己烷(A)用于纯化粗产物。收集到27.3mg所需产物(50%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.5分钟;ES(+)MS m/e 522.2(M+1)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(((5-(4-(异丙基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡啶-3-甲酰胺：向小瓶中加入2-{[5-(4-氯喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(36.00mg,0.06897mmol)、丙-2-胺(41μl,0.48mmol)、二氯甲烷(0.159mL,2.47mmol)和三乙胺(0.0192mL,0.138mmol)。反应混合物在110℃用微波以300瓦处理10分钟。过滤反应混合物，用H2O(DI)洗涤，用EtOAc萃取，用硫酸钠干燥，真空除去溶剂。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到17.8mg固体黄色粉末(47%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.2分钟;ES(+)MS m/e545.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.86(d,J=7.55Hz,1H),9.19(t,J=5.85Hz,1H),8.78-8.92(m,2H),8.66(d,J=1.51Hz,1H),8.25(dt,J=1.94,6.70Hz,2H),8.08(dd,J=1.70,7.74Hz,1H),7.77(d,J=8.69Hz,1H),7.56(d,J=3.78Hz,1H),7.13(d,J=3.40Hz,1H),6.99-7.11(m,3H),6.70(dd,J=4.91,7.55Hz,1H),4.87(d,J=5.29Hz,2H),4.73(dq,J=6.72,13.83Hz,1H),4.46(d,J=5.67Hz,2H),1.35(d,J=6.80Hz,6H)。
实施例4.13以与实施例4.12相同的方法由丙-1-胺来制备。
实施例4.14以与实施例4.12相同的方法由甲氧基胺盐酸盐来制备。
实施例4.15以与实施例4.12相同的方法由二甲胺来制备。
实施例4.16以与实施例4.12相同的方法由乙胺来制备。
实施例4.17以与实施例4.12相同的方法由二乙胺来制备。
实施例4.18以与实施例4.12相同的方法由正戊基胺来制备。
实施例4.19以与实施例4.12相同的方法由吡咯烷来制备。
实施例4.20以与实施例4.12相同的方法由1-吡咯烷乙胺来制备。
实施例4.21以与实施例4.12相同的方法由N-甲基-环己胺来制备。
实施例4.22以与实施例4.12相同的方法由2,2,2-三氟-乙胺来制备。
实施例4.23以与实施例4.12相同的方法由叔丁基胺来制备。
实施例4.24以与实施例4.12相同的方法由甲胺来制备。
实施例4.25-32以与实施例4.12相同的方法来制备。
实施例5
Figure BDA00001732070200791
合成3-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-5-异丙氧基苯基硼酸(5.1)：化合物5.1以与化合物3.3相同的方法来合成。反应混合物用1NHCl(水溶液)淬灭，剧烈搅拌。用Na2CO3(水溶液)中和，用H2O稀释。有机层用EtOAc萃取，用NaHCO3(水溶液)/盐水溶液洗涤，用MgSO4干燥，真空除去溶剂，得到相对纯的产物。粗品不经进一步纯化即使用。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.2分钟;ES(+)MS m/e 456.2(M+1)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-异丙氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酰胺(5.2)：将3-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-5-异丙氧基苯基硼酸(5.1,1.73g,3.80mmol)和2,3-二甲基-2,3-丁二醇(1140mg,9.65mmol)溶解在四氢呋喃(6.6mL,82mmol)中，在室温搅拌过夜。梯度洗脱(0-60%)EtOAc(B)/己烷(A)用于纯化粗产物。最后产物通过从乙醚中析出来纯化。收集到1.35g白色固体(66%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.6分钟;ES(+)MS m/e 538.4(M+1)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.13(t,J=5.85Hz,1H),8.68(t,J=5.85Hz,1H),8.17(dd,J=1.89,4.91Hz,1H),8.03(dd,J=1.70,7.74Hz,1H),7.19(s,1H),6.94-7.15(m,5H),6.63(dd,J=4.72,7.74Hz,1H),4.49-4.63(m,3H),4.45(d,J=6.04Hz,2H),1.27(s,11H),1.21(d,6H)。
实施例5.3以与实施例4.5相同的方法来合成。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到38.7mg固体黄色粉末(77%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.2分钟。
实施例5.4以与实施例4.5和实施例5.4相同的方法来合成。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到21.4mg固体灰白色粉末(42%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.2分钟。
实施例5.5以与实施例4.5相同的方法来合成。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到35.3mg固体灰白色粉末(64%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.2分钟。
实施例5.6：N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)-5-异丙氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酰胺以与实施例4.5相同的方法来合成。ES(+)MS m/e 705.2(M+1)。粗品以与实施例4.4相同的方法用TFA来脱保护。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到30.1mg固体灰白色粉末(58%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.2分钟。
实施例5.7以与实施例4.5相同的方法由3-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶来合成，然后用钾的甲醇溶液进行苯基磺酰基脱保护，得到所需产物，其为TFA盐。收集到30.6mg固体黄色粉末(62%收率)。LC-MS(Agilent460,酸法):RT=1.2min。
实施例5.8以与实施例4.5相同的方法由5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶来合成，然后用钾的甲醇溶液进行苯基磺酰基脱保护，得到所需产物，其为TFA盐。收集到24.5mg固体黄色粉末(49%收率)。LC-MS(Agilent460,酸法):RT=1.1分钟。
实施例6
实施例6.1：合成2-(3-(4-氨基喹唑啉-6-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺
步骤1：合成2-(3-溴苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：将2-氨基-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(1.00g,3.80mmol)溶解在1,2-二氯乙烷(19.00mL,241.2mmol)中。向其中加入乙酸(催化量)和3-溴苯甲醛(664μl,5.70mmol)，预搅拌60分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.61g，7.60mmol)。2小时后，观察到反应不再进行，因此加入乙酸(216μl,3.80mmol)，在室温搅拌过夜。反应混合物用1M HCl(水溶液)淬灭，剧烈搅拌。用Na2CO3(水溶液)中和，用H2O稀释。有机层用EtOAc萃取，用NaHCO3(水溶液)/盐水溶液洗涤，用MgSO4干燥，真空除去溶剂。梯度洗脱(0→50%)EtOAc(B)/己烷(A)用于纯化粗产物。最后使产物从DCM/己烷溶液中析出，得到所需中间体。收集到1.34g(80%收率)白色粉末。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.3分钟;ES(+)MS m/e 432.1(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.14(t,J=5.85Hz,1H),8.71(t,J=6.04Hz,1H),8.16(dd,J=1.89,4.91Hz,1H),8.03(dd,J=1.89,7.55Hz,1H),7.46-7.55(m,1H),7.41(dt,J=1.75,7.46Hz,1H),7.22-7.35(m,2H),6.99-7.16(m,3H),6.64(dd,J=4.72,7.74Hz,1H),4.63(d,J=6.04Hz,2H),4.47(d,J=6.04Hz,2H)。
步骤2：合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酰胺：向小瓶中加入2-(3-溴苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(95.00mg,0.2198mmol)、(2,4-二甲氧基苄基)-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基]-胺(111mg,0.264mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](22mg,0.026mmol)。在氮气气氛下对反应混合物进行脱气，然后在氮气气氛下加入N,N-二甲基甲酰胺(1.02mL,13.2mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.549mL,0.659mmol)。反应混合物在85℃用微波以300瓦处理10分钟。加入EtOAc，用硅藻土过滤。用NaHCO3和盐水洗涤，用MgSO4干燥，真空除去溶剂，得到所需产物，其不经进一步纯化。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.26分钟;ES(+)MS m/e 647.4(M+1)。
将上述粗反应混合物溶解在三氟乙酸(4mL,50mmol)中，加热至40℃且保持1小时。将粗反应混合物溶解在EtOAc中，用NaHCO3(水溶液)洗涤，用EtOAc萃取。真空除去溶剂。通过HPLC来纯化，得到所需产物2-(3-(4-氨基喹唑啉-6-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(实施例6.1)，其为TFA盐。收集到86mg固体白色粉末(78%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.0分钟;ES(+)MS m/e 497.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.87(d,J=17.00Hz,2H),9.18(t,J=5.85Hz,1H),8.80-8.92(m,2H),8.78(d,J=1.89Hz,1H),8.37(dd,J=1.51,8.69Hz,1H),8.20(dd,J=1.51,4.91Hz,1H),8.08(dd,J=1.70,7.74Hz,1H),7.86(d,J=8.69Hz,1H),7.82(s,1H),7.72(d,J=7.93Hz,1H),7.48-7.57(m,1H),7.39-7.47(m,1H),6.97-7.15(m,3H),6.67(dd,J=4.91,7.93Hz,1H),4.75(d,J=4.91Hz,2H),4.45(d,J=5.67Hz,2H)。
实施例6.2：合成2-(3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：向圆底烧瓶中加入2-(3-溴苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(50mg,0.1mmol)、联硼酸二频哪醇酯(32mg,0.13mmol)、乙酸钾(34mg,0.35mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](14mg,0.017mmol)和二甲基亚砜(0.8mL,10mmol)。在氮气气氛下对反应混合物进行脱气(×3)，在90℃搅拌1.5小时，得到相对纯净的粗产物，其不经进一步纯化。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.5分钟;ES(+)MS m/e 480.3(M+1)。
向N-(3,4-二氟苄基)-2-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺的上述粗反应混合物(60.0mg,0.125mmol)的溶液中加入5-溴-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(63mg,0.19mmol)和2M碳酸钠水溶液(0.31mL,0.62mmol)，在氮气气氛下脱气。将反应混合物在90℃和氮气气氛下搅拌过夜。过滤粗反应混合物，使溶剂体积减小。对粗反应混合物进行洗涤(盐水)，用EtOAc萃取，用硫酸钠干燥，真空除去溶剂。通过HPLC来纯化，得到所需产物(实施例6.2)，其为TFA盐。收集到10.2mg固体黄色粉末(17%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.0分钟;ES(+)MS m/e471.2(M+1)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ9.48(s,1H),9.03(s,1H),8.25(dd,J=1.51,7.55Hz,1H),8.08-8.15(m,2H),7.80(s,1H),7.71(d,J=7.93Hz,1H),7.53(t,J=7.74Hz,1H),7.39-7.46(m,1H),6.74-7.00(m,4H),4.78(s,2H),4.55(s,2H)。
实施例6.3按照用于实施例6.1的方法由(6-溴-喹唑啉-4-基)-环丙基-胺来制备。
实施例6.4按照用于实施例6.2的方法由2-溴苯甲醛和1-(苯基磺酰基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶来制备。
实施例6.5按照用于实施例6.1的方法由2-溴苯甲醛和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。
实施例6.6按照用于实施例6.1的方法由2-溴噻唑-5-甲醛和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。
实施例6.7按照用于实施例6.1的方法由4-溴噻唑-2-甲醛和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。
实施例6.8按照用于实施例6.1的方法由2-溴噻唑-4-甲醛和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。
实施例6.9按照用于实施例6.1的方法由2-溴噻唑-4-甲醛和N-环丙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。
实施例6.10按照用于实施例6.2的方法由2-溴噻唑-5-甲醛和1-苯磺酰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶来制备。
实施例6.11按照用于实施例6.2的方法由4-溴噻唑-2-甲醛和1-苯磺酰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶来制备。
实施例6.12按照用于实施例6.2的方法由2-溴噻唑-4-甲醛和1-苯磺酰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶来制备。
实施例6.13按照用于实施例6.2的方法由5-溴-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶和2-[(2-溴-噻唑-4-基甲基)氨基]-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺来制备。
实施例6.14按照用于实施例6.1的方法由4-溴-噻吩-2-甲醛和(2,4-二甲氧基苄基)-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基]-胺来制备。
实施例6.15按照用于实施例6.2的方法由4-溴噻吩-2-甲醛和1-苯磺酰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶来制备。
实施例7
Figure BDA00001732070200841
步骤1.合成噻唑-2-基甲基氨基甲酸叔丁酯：向噻唑-2-基甲胺(1.14g,10mmol)的THF(10mL)溶液中缓慢加入NaHCO3(920mg,11mmol,1.1当量)和(Boc)2O(一缩二碳酸二叔丁酯)(2.18g,10mmol,1.05当量)。将所得到的混合物在室温搅拌2h。反应混合物用短硅胶柱过滤，浓缩，得到噻唑-2-基甲基氨基甲酸叔丁酯(2.05g,96%)。ESI-MS(M+H+):215.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.47(s,9H),4.64(d,2H),5.39(s,1H),7.28(d,1H),7.71(d,1H)。
步骤2.合成(5-溴噻唑-2-基)甲基氨基甲酸叔丁酯：将噻唑-2-基甲基氨基甲酸叔丁酯(2g,9.5mmol)和NBS(N-溴琥珀酰亚胺)(1.78g,10mmol,1.1当量)在DMF(20mL)中的混合物在室温搅拌2h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤三次。有机层用MgSO4干燥，真空浓缩。残留物通过硅胶色谱来纯化，得到所需产物(2.24g,80%)。ESI-MS(M+H+):293。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.57(s,1H),5.39(s,1H),4.55(d,2H),1.47(s,9H)。
步骤3.合成(5-(4-(二(叔丁氧羰基)-氨基)喹唑啉-6-基)噻唑-2-基)甲基氨基甲酸叔丁酯：装有化合物N,N-二(叔丁氧羰基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺(2.35g,5mmol)、(5-溴噻唑-2-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(1.46g,5mmol,1.0当量)、2M K2CO3(5.0mL,2.0当量)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](210mg,0.25mmol,0.05当量)的烧瓶用氮气冲洗。加入1,4-二氧杂环己烷(30mL)，将反应混合物在90℃搅拌2h。将溶液冷却至室温。除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE/EA=4:1)来纯化，得到产物(1.5g,55%)。ESI-MS(M+H+):558.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.25(s,1H),8.15(s,2H),8.01(d,2H),5.39(s,1H),4.68(d,2H),1.50(s,9H),1.36(s,18H)。
步骤4.合成6-(2-(氨基甲基)噻唑-5-基)喹唑啉-4-胺(7.1a)：将(5-(4-(二(叔丁氧羰基)-氨基)喹唑啉-6-基)噻唑-2-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(1.5g,2.7mmol)的DCM/TFA(30mL,1:1)溶液在室温搅拌30min，然后除去溶剂，将残留物溶解在水中。加入饱和NaHCO3水溶液，形成白色固体，过滤，得到所需产物(690mg,100%)。ESI-MS(M+H+):258。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.89(s,2H),8.85(s,1H),8.75(d,1H),8.68(s,2H),8.45(s,1H),8.37-8.40(m,1H),7.88(d,1H),4.56(s,2H)。
实施例7.1.合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻唑-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：将6-(2-(氨基甲基)噻唑-5-基)喹唑啉-4-胺(258mg,1mmol)、2-氯-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(210mg,0.75mmol,0.75当量)和NaHCO3(160mg,2mmol,2.0当量)在戊-1-醇(2mL)中的混合物在130℃搅拌18h，然后除去溶剂，残留物通过制备性HPLC来纯化，得到产物(35mg,8%)。ESI-MS(M+H+):504.1。1H NMR(400MHz,CD3OD/CDCl3)δ:8.39(s,2H),8.22(dd,1H),8.06(s,1H),7.95-7.98(m,2H),7.73(d,1H),7.14-7.25(m,3H),6.69-6.71(m,1H),5.02(s,2H),4.52(s,2H)。
实施例7.2按照用于实施例7.1的方法由1-(噻吩-2-基)乙胺来制备。
Figure BDA00001732070200851
6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)以与实施例7.1中6-(2-(氨基甲基)噻唑-5-基)喹唑啉-4-胺(7.1a)相同的方法来制备。
实施例7.3.1按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-5-氟吡啶-3-甲酰胺来制备。
实施例7.3.2以与实施例7.3.1类似的方法来制备。
制备用于合成实施例7.4的2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-甲氧基吡啶-3-甲酰胺。
将2-氯-4-碘吡啶-3-甲酸乙酯(1.1g,3.5mmol)和LiOH(255mg,10.5mmol,3.0当量)在MeOH/水(33ml,10:1)中的混合物在70℃搅拌6h。冷却至室温后，将溶液调节至pH=6，然后浓缩，溶解在MeOH/DCM(1:5)中，过滤，浓缩滤液，得到粗酸产物，其不经进一步纯化。ESI-MS(M+H+):284。
向上述产物(890mg,3.2mmol)的无水DMF(50ml)溶液中一次性加入DIPEA(830mg,6.4mmol,2.0当量)。将反应混合物在室温搅拌10min，然后加入dFBnNH2(456mg,3.2mmol,1.0当量)和HATU(2.4g,6.4mmol,2.0当量)。将混合物在室温搅拌18h。反应完成后，除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE/EA=4:1)来纯化，得到2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-碘吡啶-3-甲酰胺(1g,78%)。ESI-MS(M+H+):409.0。
将2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-碘吡啶-3-甲酰胺(500mg,1.2mmol)和MeONa(甲醇钠)(65mg,1.2mmol,1.0当量)在MeOH(15ml)中的混合物在70℃搅拌18h。然后除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE/EA=2:1)来纯化，得到所需产物2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-甲氧基吡啶-3-甲酰胺(188mg,50%)。ESI-MS(M+H+):313.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.32(t,1H),8.10(d,1H),7.98(d,1H),7.13-7.17(m,3H),4.51(d,2H)。
2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-乙氧基吡啶-3-甲酰胺被类似地制备。ESI-MS(M+H+):327.1。
实施例7.4按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-甲氧基吡啶-3-甲酰胺来制备。
实施例7.5按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-乙氧基吡啶-3-甲酰胺来制备。
实施例7.6按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和(S)-2-氯-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-4-甲氧基吡啶-3-甲酰胺来制备。
实施例7.7按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和(S)-2-氯-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-4-乙氧基吡啶-3-甲酰胺来制备。
制备用于合成实施例7.8的5-氯-3-(3,4-二氟苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮。
Figure BDA00001732070200871
将2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-碘吡啶-3-甲酰胺(1g,2.46mmol)、对甲氧基苄胺(0.62g,3.7mmol)和Cs2CO3(1.6g,4.9mmol)在二氧杂环己烷中的混合物在90℃搅拌4h，然后除去溶剂，残留物通过柱色谱来纯化，得到产物2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-(4-甲氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酰胺(690mg,67.5%)。MS(M+H+):418.1。
将上述产物(690mg,1.65mmol)的TFA(50mL)溶液在室温搅拌2h，然后除去溶剂，将残留物溶解在水中，加入饱和NaHCO3水溶液，形成白色固体，过滤，得到4-氨基-2-氯-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(290mg,59.2%)。MS(M+H+):298.1。
将4-氨基-2-氯-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(290mg,0.974mmol)溶解在DMF/DMA/Ac2O(乙酸酐)(50ml,1:4)中，在120℃搅拌过夜，然后除去溶剂，残留物通过硅胶来纯化，得到产物5-氯-3-(3,4-二氟苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(150mg,收率:50%)。MS(M+H+):308.0。
实施例7.8按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和5-氯-3-(3,4-二氟苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮来制备。
实施例7.9按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和(S)-5-氯-3-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮来制备。
实施例7.10-7.16以与实施例7.1类似的方法来制备。
实施例7.17按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和5,7-二氯-3-(3,4-二氟苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮来制备。
5,7-二氯-3-(3,4-二氟苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮按照用于5-氯-3-(3,4-二氟苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的方法由4-氨基-2,6-二氯吡啶-3-甲酸(参见Jang,M.等人,Tetrahedron Letters(2006),47(50),8917)来制备。
Figure BDA00001732070200872
合成8-氯-2-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-2,7-二氮杂萘-1(2H)-酮：
Figure BDA00001732070200881
向2-氯-4-碘吡啶-3-甲酸甲酯(4g,12.87mmol)在50ml DMF中的溶液中加入2-氰基乙酸叔丁酯(3.6g,25.75mmol,1当量)、K2CO3(7.1g,51.5mmol,4当量)和CuI(13mg,0.1mmol,0.01当量)。将所得到的溶液在50℃搅拌过夜。然后除去溶剂，残留物通过硅胶柱来纯化，得到产物4-(2-叔丁氧基-1-氰基-2-氧代乙基)-2-氯吡啶-3-甲酸甲酯(2.8g,66%)。ESI-MS(M+H+):311.1。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.56(d,1H),7.54(d,1H),5.13(s,1H),3.99(s,3H),1.48(s,9H)。
向装有4-(2-叔丁氧基-1-氰基-2-氧代乙基)-2-氯吡啶-3-甲酸甲酯(0.8g,2.6mmol)的烧瓶中加入5mL DCM和2mL TFA。将溶液在室温搅拌6h。除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE/EA=3/1)来纯化，得到产物2-氯-4-(氰基甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(370mg,64%)。ESI-MS(M+H+):211.0。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.51(d,1H),7.46(d,2H),4.03(s,3H),3.86(s,2H)。
向2-氯-4-(氰基甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(0.35g,1.66mmol)的EtOH(20mL)溶液中加入5%Pt/C(0.07g,2当量)和浓HCl(0.2ml)。在室温引入氢气(1atm)且保持5h。当TLC显示原料消失时，催化剂用硅藻土过滤，除去溶剂。将残留物溶解在饱和NaHCO3溶液(30ml)中，在室温搅拌1h。反应混合物通过LC-MS来监测，反应完成后，溶液用150ml DCM萃取三次。浓缩有机层，通过硅胶来纯化，得到所需产物8-氯-3,4-二氢-2,7-二氮杂萘-1(2H)-酮(0.2g,67%)。ESI-MS(M+H+):183.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)8.46(d,1H),7.15(d,1H),6.79(s,1H),3.55(m,2H),δ:3.01(t,2H)。
向8-氯-3,4-二氢-2,7-二氮杂萘-1(2H)-酮(0.2g,1.1mmol)的10ml DMF溶液中加入50%NaH(100mg,2.2mmol,2.0当量)，在室温搅拌15min，然后加入4-(溴甲基)-1,2-二氟苯(0.27g,1.3mmol,1.2当量)。当TLC检测反应完成时，将混合物倒入100mL冰水中，用200mL DCM萃取。浓缩有机层，通过硅胶来纯化，得到纯产物8-氯-2-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-2,7-二氮杂萘-1(2H)-酮(0.12g,35.5%)。ESI-MS(M+H+):309。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:2.93(t,2H),3.52(t,2H),4.71(s,2H),7.08-7.19(m,4H),6.79(s,1H),8.37(d,1H)。
实施例7.18按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和8-氯-2-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-2,7-二氮杂萘-1(2H)-酮来制备。
合成4-氯-2-(3,4-二氟苄基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮：
Figure BDA00001732070200891
将2-氯-4-碘吡啶-3-甲酸甲酯(2.0g,6.7mmol)、氰化亚铜(0.60g,6.7mmol)和NMP(1.0mL)的混合物在130℃加热5h，冷却，用EtOAc(50mL)稀释。过滤混合物，减压浓缩。将残留物溶解在EtOAc(25mL)中，用2×10mL氢氧化铵洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化(流动相:EtOAc:石油醚=3%~5%)，得到所需产物2-氯-4-氰基吡啶-3-甲酸甲酯，其为白色固体(1.0g,5.1mmmol,56%)。ESI-MS(M+H)+:197.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.65(d,1H),7.57(d,1H),4.075(s,3H)。
将2-氯-4-氰基吡啶-3-甲酸甲酯(392mg,2mmol)在10%Pt/C(150mg)催化剂存在下在大气压下在无水甲醇(25mL)中氢化36h。滤出催化剂，将溶剂蒸发掉，得到4-(氨基甲基)-2-氯吡啶-3-甲酸甲酯，其为浅黄色固体(0.472g,100%)。ESI-MS(M-35)+:201.0。
向4-(氨基甲基)-2-氯吡啶-3-甲酸甲酯(420mg,1.78mmol)和3,4-二氟苯甲醛(379mg,2.67mmol,1.5当量)的DCE溶液中缓慢加入NaBH(OAc)3(三乙酰氧基硼氢化钠)(751mg,3.56mmol,2.0当量)。然后加入HOAc(325mg,5.34mmol,3.0当量)，回流搅拌15h。TLC显示反应完成。然后除去有机溶剂，得到粗产物，其通过硅胶柱来纯化，得到4-氯-2-(3,4-二氟苄基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(240mg,45.9%)。ESI-MS(M+H)+:294.9。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.53(d,1H),7.34(m,1H),7.13-7.26(m,2H)7.09(m,1H),4.75(s,2H),4.29(s,2H)。
实施例7.19按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和4-氯-2-(3,4-二氟苄基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮来制备。
实施例7.20：合成4-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-2-(3,4-二氟苄基)-1-亚甲基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮
Figure BDA00001732070200901
在室温和氮气下将乙炔基三甲基甲硅烷(426mg,4.4mmol)加到2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-碘吡啶-3-甲酰胺(1.2g,2.9mmol)、PdCl2(PPh3)2(51mg,0.073mmol)和CuI(55mg,0.29mmol)在DIPEA和DMF(50mL)中的溶液中，搅拌3h。收集析出物，用EtOAc洗涤。将滤液减压浓缩。将残留物溶解在EtOAc(200mL)中，用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤。有机层用MgSO4干燥，减压浓缩。将残留物真空蒸馏，得到2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-甲酰胺(650mg,60%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.07(t,1H)8.26(d,1H),7.36(d,1H),7.20-7.27(m,2H),7.06-7.07(宽峰,1H),4.28-4.29(d,2H),0.00(s,9H)。
将2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-甲酰胺(650mg,1.7mmol)、6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)(660mg,2.6mmol,1.5当量)和Cs2CO3(1.1g,3.4mmol,2当量)在戊-1-醇(1ml)中的混合物在130℃搅拌16h，然后除去溶剂，残留物通过制备性HPLC(CH3CN/H2O+0.05%CF3COOH)来纯化，得到4-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-2-(3,4-二氟苄基)-1-亚甲基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(实施例7.20)(70mg,6%)。ESI-MS(M+H+):527.14。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.86(宽单峰,1H),9.76(宽单峰,1H),8.80(s,1H),8.61(s,1H),8.36(d,1H),8.29(d,1H),7.79(d,1H),7.57-7.52(m,2H),7.41-7.36(m,2H),7.17-7.12(m,3H),5.57(s,1H),5.52(s,1H),4.91(宽峰,4H)。
Figure BDA00001732070200911
实施例7.21.1按照用于实施例7.1的方法由6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(7.1b)和(S)-2-氯-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺来制备。LCMS:RT=1.60min。
实施例7.21.2以与实施例7.21.1类似的方法来制备。
实施例7.22.1：合成2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-[(1S)-1-(4-氟苯基)乙基]-5-(甲基磺酰基)吡啶-3-甲酰胺：将2-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-5-碘吡啶-3-甲酰胺(实施例7.21.1,150.0mg,0.23mmol)的二甲基亚砜(2mL)溶液在干燥的烧瓶中脱气10分钟。然后加入甲磺酸钠(159mg,1.56mmol)、L-脯氨酸钠(21.34mg,0.16mmol,参见W.Zhu;J.Org.Chem.,2005,70(7),pp 2696-2700)和碘化亚铜(I)(11.86mg,0.006mmol)的混合物。将反应混合物再脱气5分钟。然后在95℃加热过夜。反应溶液用30ml EtOAc稀释，用水洗涤(5次)。分离有机层，用MaSO4干燥，用炭脱色，过滤。浓缩滤液。粗品通过HPLC来纯化，得到产物2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-[(1S)-1-(4-氟苯基)乙基]-5-(甲基磺酰基)吡啶-3-甲酰胺(实施例7.22.1)，其为浅黄色粉末(36.7mg,TFA盐,26%)。LCMS:RT=1.45分钟;MH+:595.30。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.83(宽单峰,2H),9.41(t,J=6.15Hz,1H),9.21(d,J=7.53Hz,1H),8.72-8.89(m,1H),8.66(d,J=2.26Hz,1H),8.60(d,J=1.51Hz,1H),8.52(d,J=2.26Hz,1H),8.26(dd,J=1.63,8.66Hz,1H),7.77(d,J=8.78Hz,1H),7.54(d,J=3.76Hz,1H),7.28-7.50(m,2H),7.23(ddd,J=2.26,4.27,6.27Hz,1H),7.13(d,J=3.76Hz,1H),5.11(五重峰,J=7.03Hz,1H),4.91(d,2H),3.24(s,3H),1.49(d,J=7.03Hz,3H)。
实施例7.22.2以与实施例7.22.1类似的方法来制备。
实施例7.23.1：合成6-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-3-甲酸：2-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺(实施例8.3)(1.00g,1.59mmol)、三乙胺(1.11mL,8.0mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(60mg,0.08mmol)在甲醇(50mL)和二甲基亚砜(20mL,0.2mol)中的混悬液用氮气脱气10min，用一氧化碳(CO)冲洗。将混合物在70℃在压力为100psi(磅/平方英寸)的CO气体下搅拌加热过夜。冷却，用EtOAc(200ml)稀释，用水洗涤(5次)。干燥有机层，浓缩。粗品通过从己烷/二氯甲烷中析出来纯化，得到产物6-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-3-甲酸甲酯(0.66g,~10%杂质(其为Ph3P=O)(基于NMR),在LCMS中杂质峰在右侧与产物峰重叠)，其不经进一步纯化即直接使用。LCMS:RT=1.49分钟;MH+:561.30。
向搅拌的6-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-5-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-3-甲酸甲酯(1.0g,1.8mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中加入1.0M氢氧化锂水溶液(40mL,0.04mol)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物冷却至0℃，用2N HCl酸化，浓缩至干。将粗品再次溶解在CH2Cl2/甲醇中，过滤。浓缩滤液，得到0.69g(71%)标题化合物实施例7.23.1，其不经进一步纯化即用于下一步。小部分固体产物通过HPLC来纯化，得到纯物质(浅黄色粉末)以供测试。LCMS:RT=1.35分钟,MH+:547.20。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(宽单峰,1H),9.79(宽单峰,2H),9.24-9.55(m,2H),8.69-8.91(m,2H),8.57(dd,J=1.88,16.44Hz,2H),8.27(dd,J=2.01,8.78Hz,1H),7.75(d,J=8.78Hz,1H),7.54(d,J=3.51Hz,1H),7.27-7.48(m,2H),7.04-7.27(m,2H),4.93(d,J=5.77Hz,2H),4.41(d,J=5.77Hz,2H)。
实施例7.23.2以与实施例7.23.1类似的方法来制备。
实施例7.24.1：合成2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N3-(3,4-二氟苄基)吡啶-3,5-二甲酰胺：将搅拌的6-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-5-(3,4-二氟-苄氨甲酰基)吡啶-3-甲酸(实施例7.23.1,100mg,0.18mmol)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(118mg,0.31mol)和N,N-二异丙基乙胺(0.0956mL,0.549mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液在室温搅拌1h。然后加入0.5M氨的二氧杂环己烷溶液(3.66mL,1.8mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，用EtOAc稀释，用水洗涤(5次)。干燥有机层，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐(37mg,37%)。LCMS:RT=1.25分钟;MH+:546.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.68(宽单峰,2H),9.27(t,J=5.77Hz,1H),9.13(t,J=5.90Hz,1H),8.69-8.87(m,2H),8.59(s,1H),8.50(d,J=2.26Hz,1H),8.26(dd,J=1.76,8.78Hz,1H),7.76(d,J=8.78Hz,2H),7.54(d,J=3.76Hz,1H),7.23-7.47(m,3H),7.09-7.23(m,2H),4.91(d,J=5.77Hz,2H),4.43(d,J=5.52Hz,2H)。
实施例7.24.2-7.24.6以与实施例7.24.1类似的方法来制备。
实施例7.25：(S)-5-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-3-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-4-氧代-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-8-甲腈：
Figure BDA00001732070200931
向(S)-4-氨基-2-氯-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(3.1g,10mmol)的AcOH溶液中加入溴(3.2g,20mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min，然后冷却至0℃，用氨将pH调节至10，用EtOAc(200mL)萃取，用水(200mL×3)洗涤。将溶剂蒸发掉，得到(S)-4-氨基-5-溴-2-氯-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺，其为棕色固体(2.88g,74%)。ESI-MS(M+H+):392.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.16(s,1H),7.26-7.13(m,3H),6.64(d,1H),6.07(宽峰,2H),5.27-5.22(m,1H),1.59(d,3H)。
向(S)-4-氨基-5-溴-2-氯-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(1.3g,3.3mmol)和噻吩-2-基甲胺(0.75g,6.6mmol)的戊醇(10ml)溶液中加入碳酸氢钠(1.4g,16.45mmol)，将反应混合物加热至130℃且保持16h。除去溶剂，残留物通过硅胶(PE:EA=3:1)来纯化，得到(S)-4-氨基-5-溴-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-(噻吩-2-基甲基氨基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(1.1g,71%)。ESI-MS(M+H+):467.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.00(s,1H),7.22(d,1H),7.10-7.07(m,2H),7.00-6.96(m,3H),6.75(d,1H),5.81(s,2H),5.34-5.29(m,1H),5.19-5.16(m,1H),4.69(AB,2H),1.48(d,3H)。
将(S)-4-氨基-5-溴-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-(噻吩-2-基甲基氨基)吡啶-3-甲酰胺(1.1g,2.3mmol)的DMF/DMA(20mL)溶液加热至120℃且保持30min，然后除去溶剂，残留物通过硅胶(PE:EA=3:1)来纯化，得到(S)-8-溴-3-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-5-(噻吩-2-基甲基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮，其为白色固体(180mg,46%)。ESI-MS(M+H+):479。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.10(m,1H),8.47(s,1H),8.08(s,1H),7.21-7.14(m,3H),7.06-7.05(m,2H),6.98-6.95(m,1H),6.12(q,1H),4.93-4.90(m,2H),1.79(d,3H)。
将(S)-8-溴-3-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-5-(噻吩-2-基甲基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(480mg,1mmol)、CuCN(450mg,5mmol)、TEA(200mg,2mmol)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](4mg,0.05mmol)在DMF(10ml)中的混合物在氮气下加热至120℃且保持2h。然后除去溶剂，残留物通过硅胶柱色谱(PE:EA=3:1)来纯化，得到(S)-3-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-4-氧代-5-(噻吩-2-基甲基氨基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-8-甲腈，其为白色固体(200mg,48%)。ESI-MS(M+H+):423.9。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.55(m,1H),8.61(s,1H),8.16(s,1H),7.33-7.21(m,3H),7.12-7.11(m,2H),6.97(t,1H),6.11(q,1H),5.01(d,2H),1.81(d,3H)。
将NBS(110mg,0.6mmol)加到(S)-3-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-4-氧代-5-(噻吩-2-基甲基氨基)-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-8-甲腈(170mg,0.4mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌16h。然后浓缩反应混合物，其不经进一步纯化即直接用于下一步反应。ESI-MS(M+H+):503.9。
上述粗品(120mg,0.24mmol)、6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺(130mg,0.48mmol)、2M Na2CO3(0.2mL)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](10mg,0.012mmol)在DMF(5mL)中的混合物用氮气冲洗，在80℃搅拌1h。将溶液冷却至室温。除去溶剂，残留物通过制备性HPLC(0.05%TFA/H2O:CH3OH=3:1)来纯化，得到(S)-5-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-3-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-4-氧代-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-8-甲腈即实施例7.25，其为白色固体(12mg,5%)。ESI-MS(M+H+):567.0。1H NMR(400MHz,CDCl3/DMSO-d6)δ:9.78(m,1H),8.79(s,1H),8.75(s,1H),8.64(s,1H),8.55(d,1H),8.16(dd,1H),7.73(d,1H),7.53-7.52(m,2H),7.44-7.41(m,1H),7.26-7.25(m,1H),7.16-7.12(m,2H),7.00(s,1H),5.91(q,1H),4.99(d,2H),1.83(d,3H)。
实施例8
Figure BDA00001732070200951
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺：向小瓶中先后加入2-氯-5-碘吡啶-3-甲酸(100.0mg,0.3528mmol)的二氯甲烷(2mL,30mmol)溶液和草酰氯(89.6μl,1.06mmol)。向该溶液中加入N,N-二甲基甲酰胺(40μl,0.5mmol)，将反应混合物在室温搅拌1小时。真空除去溶剂。向粗酰氯混合物中加入吡啶(3.79mL,46.9mmol)和3,4-二氟苄基胺(83.5μl,0.706mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂。粗反应混合物用NaHCO3(水溶液)洗涤，用EtOAc萃取，用MgSO4干燥，真空除去溶剂。粗品不经进一步纯化即使用。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.5分钟;ES(+)MS m/e 409(M+1)。
将上述粗2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺(140mg,0.00034mol)、(5-溴-噻吩-2-基)甲胺(132mg,0.000685mol)、碳酸铯(450mg,0.0014mol)和1,4-二氧杂环己烷(2.00mL,0.0256mol)的反应混合物在130℃加热，搅拌过夜。粗反应混合物用NaHCO3(水溶液)洗涤，用EtOAc萃取，用MgSO4干燥，真空除去溶剂。梯度洗脱(0→100%)EtOAc(B)/己烷(A)用于纯化粗产物。收集到82mg纯2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺(42%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=2.2分钟;ES(+)MS m/e 564(M+1)。
实施例8.1.1按照用于实施例6.1的方法由2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。LC-MS(Agilent460,酸法):RT=1.4分钟。
实施例8.1.2-8.1.3以与实施例8.1.1类似的方法来制备。
实施例8.2按照用于实施例6.1的方法由2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-硝基吡啶-3-甲酰胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.3min。
实施例8.3按照用于实施例6.1的方法由2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。LC-MS(Agilent460,酸法):RT=1.4分钟。
实施例8.4：合成2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-氨基吡啶-3-甲酰胺：向圆底烧瓶中加入2-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-N-(3,4-二氟苄基)-5-硝基吡啶-3-甲酰胺(100mg,0.0002mol)。向其中先后加入10%钯/碳(1:9,钯:碳黑,40mg,0.00004mol)、甲醇(2.0mL,0.049mol)和乙酸乙酯(2.0mL,0.020mol)(由于溶解性差)。对粗反应混合物进行脱气，然后用氢气冲洗。将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌1小时。过滤粗反应混合物，真空除去溶剂。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到17.3mg固体黄色粉末(18%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.0分钟;MS m/e 518.3(M+1)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.74(宽单峰,2H),9.22(t,J=5.85Hz,1H),8.77-8.83(m,1H),8.61(d,J=1.89Hz,1H),8.48(宽单峰,1H),8.26(dd,J=1.89,8.69Hz,1H),8.05(d,J=2.27Hz,1H),7.77(dd,J=3.40,5.67Hz,2H),7.51-7.57(m,1H),7.26-7.47(m,2H),7.09-7.20(m,2H),4.81(s,2H),4.42(d,J=5.67Hz,2H)。
Figure BDA00001732070200961
实施例8.5.1：合成5-(乙酰基氨基)-2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：在0℃向5-氨基-2-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(50.000mg,9.6608E-5mol)的四氢呋喃(3.0mL,0.037mol)溶液中加入乙酰氯(8.2429μl,1.1593E-4mol)，然后在搅拌下滴加三乙胺(13.465μl,9.6608E-5mol)。将反应混合物缓慢温热至RT，搅拌1小时。真空除去溶剂，将粗反应混合物溶解在DMSO中。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到20.7mg固体黄色粉末(38%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.10分钟;MS m/e 560.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.81(s,3H),9.14(t,J=6.04Hz,1H),8.80(s,1H),8.60(d,J=1.89Hz,1H),8.48(宽单峰,1H),8.24-8.31(m,2H),8.15(d,J=2.27Hz,1H),7.76(d,J=9.06Hz,1H),7.54(d,J=3.78Hz,1H),7.28-7.45(m,2H),7.07-7.20(m,2H),4.83(d,J=4.15Hz,2H),4.40(d,J=5.67Hz,2H),2.03(s,3H)。
实施例8.5.2-8.5.8以与实施例8.5.1类似的方法来制备。
实施例8.6.1：合成2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-[(甲基磺酰基)氨基]吡啶-3-甲酰胺：在0℃向5-氨基-2-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(60.0mg,0.000116mol)的二氯甲烷(7.4310mL，0.11593mol)溶液中加入甲磺酰氯(50.0μl,0.000646mol)，然后在搅拌下滴加N,N-二异丙基乙胺(120μl,0.00069mol)。将反应混合物缓慢温热至RT，搅拌过夜。真空除去溶剂。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到13.8mg固体黄色粉末(20%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.2分钟;MS m/e 596.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.87(宽单峰,1H),9.72-9.83(m,1H),9.30(s,1H),9.24(t,J=5.85Hz,1H),8.80(s,1H),8.76(t,J=6.04Hz,1H),8.61(d,J=1.51Hz,1H),8.27(dd,J=1.89,8.69Hz,1H),8.13(d,J=2.64Hz,1H),7.92(d,J=2.27Hz,1H),7.77(d,J=8.69Hz,1H),7.52-7.59(m,1H),7.30-7.47(m,2H),7.08-7.22(m,2H),4.85(d,J=4.15Hz,2H),4.43(d,J=5.67Hz,2H),2.98(s,3H)。
实施例8.6.2-8.6.19以与实施例8.6.1类似的方法来制备。
Figure BDA00001732070200971
合成2-氯-5-(氯磺酰基)吡啶-3-甲酸乙酯：在装有2-氧代-5-磺基-1,2-二氢吡啶-3-甲酸乙酯(3.18g,12.9mmol)的烧瓶中将亚硫酰氯(18.77mL,257.3mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL)浆化。将反应混合物加热回流(90℃)2h。真空除去SOCl2。残留的SOCl2通过与甲苯共蒸发(3次)来除去，得到粗产物，其为浅黄色油状物，所述油状物不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.60min;MH+:284.00。
合成2-氯-5-(N-甲基氨磺酰基)吡啶-3-甲酸乙酯：在0℃向2-氯-5-氯磺酰基吡啶-3-甲酸乙酯(0.50g,1.76mmol)的乙酸乙酯(10mL)溶液中缓慢加入2.0M甲胺的四氢呋喃溶液(0.79mL,1.58mmol)和三乙胺(0.66mL,4.75mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟。真空除去溶剂。将残留物在EtOAc中吸收，用盐水和水洗涤。然后分离有机层，干燥，浓缩。然后粗品通过ISCO来纯化，得到产物标题化合物，其为白色固体(0.29g,66%)。LCMS:RT=1.19分钟;MH+:279.10。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.07(d,J=2.51Hz,1H);7.73(d,J=2.51Hz,1H);3,64(q,J=7.03Hz,2H);1.80(s,3H);0.61(t,3H)。
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-(N-甲基氨磺酰基)吡啶-3-甲酸乙酯：向2-氯-5-甲基氨磺酰基吡啶-3-甲酸乙酯(0.28g,1.0mmol)的1,4-二氧杂环己烷(8mL)溶液中加入(5-溴-噻吩-2-基)甲胺氢溴酸盐(0.41g,1.51mmol)和三乙胺(0.28mL,2.0mmol)。将反应混合物在80℃搅拌1h。冷却，加入EtOAc，溶液用盐水和水洗涤。然后分离有机层，干燥，浓缩。粗品(0.22g,50%,~90%纯度(基于HPLC和LCMS))不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.76分钟;MH+:434.10。
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-(N-甲基氨磺酰基)吡啶-3-甲酸：向2-[(5-溴-噻吩-2-基甲基)氨基]-5-甲基氨磺酰基吡啶-3-甲酸乙酯(0.22g,0.51mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入1.0M氢氧化锂水溶液(1.52mL,1.52mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。真空除去有机溶剂。将残留物冷却至0℃，然后用HCl酸化至pH=1。过滤所得到的析出物，用冰水洗涤。将粗品溶解在CH2Cl2中，用酸化的盐水溶液洗涤。分离有机层，干燥，浓缩，得到所需产物，其为白色固体(153mg,74%)，所述固体不经进一步纯化即用于下一步。HPLC(ACN/水10/90至90/10):1.417min。
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(N-甲基-氨磺酰基)吡啶-3-甲酰胺：将2-[(5-溴-噻吩-2-基甲基)氨基]-5-甲基氨磺酰基吡啶-3-甲酸(0.12g,0.30mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.22mL,1.26mmol)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(206.8mg,0.54mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液在室温搅拌15分钟。然后加入3,4-二氟苄基胺(0.06mL,0.50mmol)，将反应混合物在室温搅拌1h。用EtOAc稀释，用盐水洗涤2次，用水洗涤3次，然后分离有机层，干燥，浓缩。粗品通过从CH2Cl2/己烷中析出来纯化，得到54mg(34%)所需产物，其为浅黄色粉末。LCMS:RT=1.86分钟;MH+:531.10。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55-8.65(m,1H),8.23(d,J=2.26Hz,1H),7.09-7.32(m,3H),6.88-6.96(m,1H),6.84(d,J=3.76Hz,1H),4.49(s,2H),2.56(s,3H)。
实施例8.7.1：合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(N-甲基氨磺酰基)吡啶-3-甲酰胺：向6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基胺(38mg,0.14mmol)和2-[(5-溴-噻吩-2-基甲基)氨基]-N-(3,4-二氟苄基)-5-甲基氨磺酰基吡啶-3-甲酰胺(50mg,0.09mmol)的二甲基亚砜(1.0mL)溶液中加入[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](9mg,0.01mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.24mL,0.28mmol)。用氮气脱气5分钟，将管密封，在微波中在90℃加热10min。反应混合物用EtOAc和NaHCO3水溶液进行后处理。合并有机层，用MgSO4干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐(15.5mg,30%)。LCMS:RT=1.25分钟;MH+:596.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(宽单峰,2H),9.48(t,J=5.77Hz,1H),9.35(t,J=6.02Hz,1H),8.79(s,1H),8.60(d,J=1.76Hz,1H),8.56(d,J=2.26Hz,1H),8.33(d,J=2.26Hz,1H),8.27(dd,J=2.01,8.78Hz,1H),7.76(d,J=8.78Hz,1H),7.55(d,J=3.76Hz,1H),7.32-7.45(m,2H),7.29(q,J=4.94Hz,1H),7.10-7.22(m,2H),4.92(d,J=6.02Hz,2H),4.43(d,J=5.77Hz,2H)。
实施例8.7.2-8.7.13以与实施例8.7.1类似的方法来制备。
Figure BDA00001732070200991
实施例8.8.1：合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：向小瓶中加入2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺(90.0mg,0.143mmol)、氰化锌(28mg,0.24mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](24.4mg,0.0299mmol)和N-甲基吡咯烷酮(5mL,50mmol)。将粗反应混合物在氮气气氛下冲洗。反应混合物在140℃用微波以300瓦处理30分钟。粗反应混合物用EtOAc稀释，过滤。洗涤滤液(盐水)，用EtOAc萃取，用硫酸钠干燥，真空除去溶剂。通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐。收集到43.0mg固体黄色粉末(56%收率)。LC-MS(Agilent 460,酸法):RT=1.3分钟;MS m/e 528.3(M+1)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.67(s,2H),9.40-9.48(m,1H),9.24-9.34(m,J=5.29Hz,1H),8.77(s,1H),8.66(d,J=1.89Hz,1H),8.59(s,1H),8.44(d,J=1.89Hz,1H),8.25(d,J=8.69Hz,1H),7.76(d,J=8.69Hz,1H),7.54(d,J=3.78Hz,1H),7.31-7.49(m,2H),7.09-7.24(m,2H),4.92(d,J=5.29Hz,2H),4.43(d,J=5.29Hz,2H)。
实施例8.8.2和8.8.3以与实施例8.8.1类似的方法来制备。
实施例8.8.4：合成2-((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(氧杂环丁烷-3-基)吡啶-3-甲酰胺
将2-((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-碘吡啶-3-甲酰胺(400mg,0.6mmol)和联硼酸二频哪醇酯(180mg,0.70mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中的混合物脱气10min，然后加入[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](52mg,0.064mmol)和乙酸钾(187mg,1.91mmol)。再脱气5min。将反应混合物在微波中在90℃加热20分钟。LCMS显示原料不再存在。粗品用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3洗涤。分离有机层，用MaSO4干燥，过滤。浓缩滤液。粗品通过ISCO(EtOAC/己烷,梯度)来纯化，得到125mg中间体。LCMS:RT=0.98分钟;MH+:未观察到,仅547.20(硼酸)。将60mg(0.1mmol)该中间体溶解在1,4-二氧杂环己烷(2mL)中，脱气10分钟。在氮气下加入二(三环己基膦)钯(0)(8mg,0.01mmol)，然后加入3-碘-氧杂环丁烷(176mg,0.955mmol)。然后将混合物在微波中在120℃加热20分钟。用EtOAc稀释，先后用盐水和水洗涤。干燥有机相，过滤，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到2-((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(氧杂环丁烷-3-基)吡啶-3-甲酰胺，其为浅黄色粉末(5.5mg,~90%纯度)。LCMS:RT=1.06分钟;MH+:559.20。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.27(t,J=5.77Hz,1H)8.80(s,2H)8.59(s,1H)8.21-8.32(m,2H)8.18(d,J=2.26Hz,1H)7.76(d,J=8.78Hz,1H)7.53(d,J=3.51Hz,1H)7.30-7.46(m,2H)7.06-7.23(m,2H)4.79-4.94(m,4H)4.68(t,J=6.53Hz,2H)4.36-4.50(m,2H)4.22(d,J=8.03Hz,1H)。
实施例8.9按照用于实施例6.1的方法由2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-溴吡啶-3-甲酰胺和N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。
Figure BDA00001732070201011
实施例8.10：合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-乙炔基吡啶-3-甲酰胺：将2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-溴吡啶-3-甲酰胺(101.3mg,0.1742mmol)、四(三苯基膦)化钯(0)(39.3mg,0.0340mmol)和碘化亚铜(I)(16.4mg,0.0861mmol)加到小瓶中，用氮气冲洗。加入乙腈(3.8mL)、(三甲基甲硅烷基)乙炔(98.5μl,0.697mmol)和三乙胺(72.8μl,0.523mmol)，将反应混合物在微波反应器中在130℃加热20分钟。加入[二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(24mg)和更多的(三甲基甲硅烷基)乙炔(24μl)，将反应混合物再加热30分钟。反应完成后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。最后有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-10%甲醇:二氯甲烷)来纯化，得到68.2mg 2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-甲酰胺，其为棕色固体(65%)。ES(+)MS m/e=599.3(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3):8.72(t,J=5.4Hz,1H),8.54(s,1H),8.39(d,J=2.1Hz,1H),7.90(s,2H),7.82-7.75(m,2H),7.19(d,J=3.6Hz,1H),7.03(t,J=5.4Hz,1H),6.95(d,J=3.6Hz,1H),6.88-6.78(m,2H),6.69(tt,J=9.0;2.2Hz,1H),6.26(宽单峰,2H),4.85(d,J=5.7Hz,2H),4.53(d,J=5.4Hz,2H),0.23(s,9H)。
将2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡啶-3-甲酰胺(68.2mg,0.114mmol)溶解在甲醇(1.00mL)中。加入碳酸钾(46.8mg,0.339mmol)，将反应混合物在室温搅拌3小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-10%甲醇:二氯甲烷)来纯化，得到所需产物。收集到40.3mg米色粉末。ES(+)MS m/e=527.3(M+1)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:8.35-8.31(m,3H),8.04(s,1H),8.03(dd,J=9.6;2.1Hz,1H),7.68(d,J=8.7Hz,1H),7.38(d,J=3.9Hz,1H),7.04(d,J=3.9Hz,1H),6.98-6.89(m,2H),6.80(tt,J=9.1;2.3Hz,1H),4.89(s,2H),4.50(s,2H),3.49(s,1H)。
实施例8.11：合成2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-乙基吡啶-3-甲酰胺：将2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-乙炔基吡啶-3-甲酰胺(40.3mg,0.0765mmol)和10%湿的钯/碳(16mg,0.0076mmol)混合，抽空，用氢气冲洗。加入甲醇(1.50mL)，将反应混合物在室温搅拌过夜。再加入湿的钯/碳(25mg)，将反应混合物在40℃加热2小时。反应混合物用甲醇稀释，用硅藻土过滤，蒸发，通过制备性反相HPLC来纯化。收集到13.1mg黄色粉末(32%)。ES(+)MS m/e=529.3(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:9.86(宽单峰,1H),9.77(宽单峰,1H),9.16(t,J=5.6Hz,1H),8.80(s,1H),8.68(t,J=6.0Hz,1H),8.60(d,J=1.5Hz,1H),8.27(dd,J=8.7;1.5Hz,1H),8.12(d,J=1.8Hz,1H),7.97(d,J=1.8Hz,1H),7.76(d,J=8.7Hz,1H),7.54(d,J=3.6Hz,1H),7.16-7.06(m,2H),7.06-6.97(m,2H),4.84(d,J=3.9Hz,2H),4.46(d,J=5.7Hz,2H),1.19(t,J=7.5Hz,3H)。(未观察到的2个H被DMSO峰遮蔽)。
实施例8.12.1：合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：将2-氨基-5-三氟甲基吡啶-3-甲酸(300.0mg,1.46mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.5mL,2.92mmol)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(608.7mg,1.60mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)溶液在室温搅拌15分钟。然后加入3,4-二氟苄基胺(0.1722mL，1.46mol)，将反应混合物在室温搅拌1h。然后反应混合物用EtOAc稀释，先后用盐水和水(5次)洗涤。然后分离有机层，干燥，浓缩。粗品通过从CH2Cl2/己烷中析出来纯化，得到365mg(75%)白色粉末。LCMS:RT=1.36分钟;MH+:332.10。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.23(t,J=5.52Hz,1H),8.41(d,J=1.51Hz,1H),8.30(d,J=2.26Hz,1H),7.79(宽单峰,2H),7.28-7.45(m,2H),7.18(ddd,J=2.26,3.83,5.96Hz,1H),4.43(d,J=5.77Hz,2H)。
向2-氨基-N-(3,4-二氟苄基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(200.00mg,0.60mmol)在三氟甲基苯(7ml)中的混悬液中加入2-溴-5-溴甲基-噻吩(232mg,0.91mmol)。然后将反应混合物在微波中在135℃加热1h。反应混合物用EtOAc稀释，先后用Na2CO3水溶液和水洗涤。分离有机层，干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，然后用NaHCO3水溶液中和，得到所需产物，其为浅黄色固体(113mg,37%)。LCMS:RT=2.15分钟;MH+:506.10。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(t,J=5.77Hz,7H),9.23(t,J=5.90Hz,1H),8.50-8.61(m,1H),8.34(s,1H),7.30-7.45(m,2H),7.11-7.23(m,1H),7.03(d,J=3.77Hz,1H),6.88(d,J=3.76Hz,1H),4.77(d,J=6.02Hz,2H),4.43(d,J=5.77Hz,2H)。
向6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基胺(64mg,0.24mmol)和2-[(5-溴-噻吩-2-基甲基)氨基]-N-(3,4-二氟苄基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(100.00mg,0.20mmol)的二甲基亚砜(2mL,0.03mol)溶液中加入[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](20mg,0.02mmol)和1.2M饱和NaHCO3水溶液(0.3mL,0.0004mol)。用氮气脱气5分钟，将管密封，在微波中在90℃加热10min。反应混合物用EtOAc和NaHCO3水溶液进行后处理。合并有机层，用MgSO4干燥。粗品通过HPLC来纯化，得到产物，其为TFA盐(48.6mg,43%)。LCMS:RT=1.44分钟;MH+:571.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.70(宽单峰,2H),9.23-9.46(m,2H),8.79(s,1H),8.59(dd,J=1.51,7.03Hz,2H),8.38(d,J=2.01Hz,1H),8.27(dd,J=2.01,8.78Hz,1H),7.76(d,J=8.78Hz,1H),7.54(d,J=3.76Hz,1H),7.29-7.47(m,2H),7.07-7.24(m,2H),4.92(d,J=5.77Hz,2H),4.44(d,J=5.52Hz,2H)。
实施例8.12.2-8.12.8以与实施例8.12.1类似的方法来制备。
实施例8.13：合成2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-甲酰胺：将2-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-溴吡啶-3-甲酰胺(48.3mg,0.0831mmol)、异丙烯基硼酸频哪醇酯(93.7μl,0.498mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](10.1mg,0.0124mmol)在三乙胺(34.7μl,0.249mmol)和乙腈(0.65mL)中搅拌。将反应混合物在微波反应器中在130℃加热5分钟，然后在150℃加热10分钟。混合物用硅藻土过滤，用乙酸乙酯和二氯甲烷洗涤。蒸发滤液，通过制备性HPLC来纯化，冻干。收集到2.3mg黄色粉末(5.1%)。ES(+)MS m/e=543.2(M+1)。
合成2-氯-N-(3,4-二氟苄基)喹啉-3-甲酰胺(用于实施例8.14.1的中间体)：向2-氯喹啉-3-甲酸(1.0g,0.0048mol)和N,N-二异丙基乙胺(1.7mL,0.0096mol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL,0.2mol)溶液中加入N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(2.7g,0.0072mol)，搅拌15min，然后加入3,4-二氟苄基胺(630μl,0.0053mol)，搅拌1h。LC-MS显示反应完成。用EtOAc和饱和碳酸氢钠进行后处理，用MgSO4干燥。通过硅胶柱(0-100%EtOAc/DCM)来纯化，得到所需产物(0.4g,20%)。
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)喹啉-3-甲酰胺(用于实施例8.14.1的中间体)：2-氯-N-(3,4-二氟苄基)喹啉-3-甲酰胺(0.25g,0.00075mol)、(5-溴-噻吩-2-基)甲胺(0.29g,0.0015mol)和碳酸铯(500mg,0.002mol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL,0.2mol)中的混合物在120℃用微波以250瓦处理1小时，LC-MS显示主要形成的是所需产物(1.53min,ES+/488.09n490.09)。用EtOAc和水进行后处理。用MgSO4干燥，浓缩。通过硅胶柱(0-75%EtOAc/己烷)来纯化，得到所需产物，其为黄绿色固体(0.18g,49%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07-8.14(m,1H),7.97(d,J=5.02Hz,1H),7.67(dd,J=6.90,8.34Hz,1H),7.47-7.60(m,2H),6.98-7.17(m,4H),6.80(d,J=3.70Hz,1H),6.74(d,J=3.64Hz,1H),6.42-6.56(m,1H),4.80(d,J=5.40Hz,2H),4.50(d,J=5.84Hz,2H)。
实施例8.14.1按照用于实施例6.1的方法由2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)喹啉-3-甲酰胺和6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基胺来制备。
实施例8.14.2-8.14.4以与实施例8.14.1类似的方法来制备。
合成2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-甲酰胺(用于实施例8.15.1的中间体)：将
Figure BDA00001732070201042
分子筛(Aldrich)加热3min，用氮气冲洗，冷却至室温。向其中加入无水二氯甲烷(20mL,0.4mol)和1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(0.844mL,0.00636mol)，在室温搅拌1h直到LC-MS显示反应完成(LC-MS:0.32min,ES+/252.18)。然后浓缩反应混合物，用短硅胶柱(DCM)纯化，得到所需产物，其为白色固体，然后将所述固体溶解在二氯甲烷(20mL)中，加入3,4-二氟苄基胺(1200μl,0.010mol)，然后加入四氯化锆(0.5g,0.002mol)的乙腈(5mL,0.1mol)溶液，搅拌1h。LC-MS显示完全转化为所需产物(1.58min,ES+/323.25)。然后混合物用EtOAc稀释，用硅胶塞过滤，用EtOAc洗涤。浓缩，得到所需产物，其为白色固体(0.9g,50%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(s,1H),7.26(s,0H),7.13-7.20(m,1H),7.01-7.09(m,1H),6.84-7.01(m,2H),4.69(d,J=5.90Hz,2H),3.04(t,J=7.78Hz,2H),2.96(t,J=7.59Hz,2H)(参见A.Myers,J.A m.Chem.Soc.,2006,128,16406)。
合成2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-甲酰胺(用于实施例8.15.1的中间体)：通过与2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)喹啉-3-甲酰胺相同的方法来制备。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(s,1H),7.06-7.15(m,2H),6.96(d,J=3.76Hz,1H),6.94-7.05(m,1H),6.88(dt,J=1.00,3.72Hz,1H),4.88(s,4H),4.72-4.84(m,2H),4.55(s,2H),3.32-3.36(m,1H),3.26-3.32(m,1H),3.05(t,J=7.72Hz,2H),2.85-2.92(m,2H),2.15-2.28(m,2H),0.00(s,1H)。MH+:478.1/480.1。
实施例8.15.1按照用于实施例6.1的方法由2-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-甲酰胺和6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基胺来制备。
实施例8.15.2以与实施例8.15.1类似的方法来制备。
实施例9
Figure BDA00001732070201051
合成N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-硝基喹唑啉-4-胺：将(E)-N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N,N-二甲基亚氨代甲酰胺(4.745g,0.02174mol)和2,4-二甲氧基-苄基胺(4.00g,0.0239mol)与乙酸(21.8mL,0.383mol)一起搅拌，加热回流1小时。反应混合物变得均匀，然后缓慢形成析出物。将反应混合物冷却至室温，过滤，滤液用乙酸和乙醚洗涤，然后在高真空下干燥。收集到3.745g黄色粉末(20%)。ES(+)MS m/e=341.1(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.47(d,J=2.64Hz,1H),9.26(t,J=5.29Hz,1H),8.58(s,1H),8.48(dd,J=2.45,9.25Hz,1H),7.83(d,J=9.06Hz,1H),7.15(d,J=8.31Hz,1H),6.59(d,J=2.27Hz,1H),6.46(dd,J=2.27,8.31Hz,1H),4.67(d,J=5.29Hz,2H),3.82(s,3H),3.74(s,3H)。
合成N4-(2,4-二甲氧基苄基)喹唑啉-4,6-二胺：将N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-硝基喹唑啉-4-胺(102.3mg,0.3006mmol)、二氯化锡(285mg,1.49mmol)和乙醇(3.00mL,51.4mmol)在密封的管中混合，在80℃加热1.5小时。将反应混合物冷却至室温，用5mL 1N KOH淬灭。加入3mL二氯甲烷和2mL水，剧烈搅拌过夜。混合物用30mL水稀释，用二氯甲烷萃取3次。有机相用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，通过快速色谱(0-10%甲醇:二氯甲烷,硅胶)来纯化。收集到57.1mg橙色残留物(61%)。ES(+)MS m/e=311.2(M+1)。1HNMR(300MHz,CDCl3):8.47(s,1H),7.45(d,J=95.4Hz,1H),7.17(d,J=61.5Hz,1H),7.05(dd,J=8.9;2.6Hz,1H),6.65(d,J=99.6Hz,1H),6.47(d,J=7.2Hz,1H),6.44(dd,J=8.3;2.2Hz,1H),6.32(宽单峰,1H),4.45(d,J=177.6Hz,2H),3.86(s,3H),3.79(s,3H),2.86(宽单峰,2H)。
合成6-叠氮基-N-(2,4-二甲氧基苄基)喹唑啉-4-胺：将N4-(2,4-二甲氧基苄基)喹唑啉-4,6-二胺(144.9mg,0.4669mmol)先后与甲醇(567μl,14.0mmol)和1.0M盐酸水溶液(7.4mL，7.4mmol)一起搅拌。将反应混合物在0℃搅拌15分钟，然后滴加1.8M亚硝酸钠水溶液(1.3mL,2.3mmol)，搅拌30分钟。最后分两批加入1.3M叠氮化钠水溶液(3.59mL,4.67mmol)。反应混合物变粘，加入0.3mL乙腈，将反应混合物在0℃搅拌1小时。然后将反应混合物温热至室温，再搅拌2小时，然后用碳酸氢钠水溶液淬灭。反应混合物用3×75mL乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-100%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到126.7mg黄色粉末(81%)。ES(+)MS m/e=337.2(M+1)。1HNMR(300MHz,CDCl3):8.61(s,1H),7.82(d,J=8.7Hz,1H),7.37(dd,J=8.8;2.5Hz,1H),7.31(d,J=2.4Hz,1H),7.27(d,J=8.4Hz,1H),6.55(宽三重峰,J=6Hz,1H),6.48-6.40(m,2H),4.78(d,J=5.1Hz,2H),3.85(s,3H),3.78(s,3H)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(丙-2-炔基氨基)吡啶-3-甲酰胺：将2-氯-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(199.8mg,0.7068mmol)和碳酸铯(0.46g,1.4mmol)在1,4-二氧杂环己烷(2.8mL,36mmol)中搅拌。加入炔丙胺(193.9μl,2.827mmol)，在80℃搅拌过夜。然后加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。有机萃取物用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-100%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到92.3mg黄色固体(43%)。ES(+)MS m/e=302.2(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3):10.79(宽单峰,1H),8.20(dd,J=7.2;0.9Hz,1H),8.02(dd,J=6.9;1.2Hz,1H),7.39(d,J=0.9Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),7.15-7.07(m,2H),7.01(t,J=7.0Hz,1H),4.72(d,J=6.0Hz,2H),2.51(d,J=0.9Hz,3H)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-((1-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基氨基)吡啶-3-甲酰胺：将N-(3,4-二氟苄基)-2-(丙-2-炔基氨基)吡啶-3-甲酰胺(45.9mg,0.152mmol)和6-叠氮基-N-(2,4-二甲氧基苄基)喹唑啉-4-胺(52.2mg,0.155mmol)在水(1.00mL,55.5mmol)和叔丁醇(1.00mL,10.4mmol)中搅拌。先后加入抗坏血酸钠(13.8mg,0.0696mmol)和0.2M硫酸铜(II)水溶液(38.1μl,0.00762mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后用4mL 1:1水:叔丁醇稀释，在60℃加热1小时。将反应混合物冷却至室温，用175mL乙酸乙酯稀释，用75mL1∶1氯化铵(饱和水溶液)/NaOH(1N水溶液)、75mL碳酸氢钠水溶液和75mL盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，得到粉末。粉末先后用二氯甲烷和乙酸乙酯研磨，得到灰白色粉末(67.2mg)。ES(+)MS m/e=638.4(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):9.11(t,J=5.5Hz,1H),8.86(d,J=2.4Hz,1H),8.79(t,J=5.3Hz,1H),8.69(t,J=5.3Hz,1H),8.63(s,1H),8.49(s,1H),8.29(dd,J=9.0;2.1Hz,1H),8.23(dd,J=5.1;1.5Hz,1H),8.04(dd,J=7.9;1.9Hz,1H),7.86(d,J=9.0Hz,1H),7.43-7.31(m,2H),7.16(宽单峰,1H),7.16(d,J=8.4Hz,1H),6.66(dd,J=7.8;4.8Hz,1H),6.59(d,J=2.4Hz,1H),6.46(dd,J=8.2;2.3Hz,1H),4.77(d,J=5.7Hz,2H),4.67(d,J=4.8Hz,2H),4.41(d,J=5.7Hz,2H),3.82(s,3H),3.73(s,3H)。
实施例9.1：合成2-((1-(4-氨基喹唑啉-6-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：将N-(3,4-二氟苄基)-2-((1-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基氨基)吡啶-3-甲酰胺(67.3mg,0.106mmol)溶解在三氟乙酸(3.00mL)中，在60℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温，用二氯甲烷稀释，通过在剧烈搅拌下缓慢加入饱和碳酸钠水溶液来中和。向混合物中加入乙酸乙酯(75mL)，用碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用盐水洗涤1次。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过制备性反相HPLC来纯化。收集到36.9mg白色粉末。ES(+)MS m/e=488.3(M+1)。1HNMR(300MHz,DMSO):9.90(宽单峰,1H),9.83(宽单峰,1H),9.17(s,1H),8.97(s,1H),8.88(s,2H),8.66(s,1H),8.56(d,J=8.7Hz,1H),8.23(d,J=3.0Hz,1H),8.08(d,J=7.5Hz,1H),7.96(d,J=8.7Hz,1H),7.46-7.29(m,2H),7.17(宽单峰,1H),6.69(t,J=5.8Hz,1H),4.81(s,2H),4.42(d,J=4.5Hz,2H)。
实施例9.2以与实施例9.1类似的方法来合成。
实施例10
Figure BDA00001732070201081
合成3-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯：将3-氨基吡嗪-2-甲酸甲酯(3.690g,24.10mmol)和5-溴-噻吩-2-甲醛(13.302g,69.627mmol)在1,2-二氯乙烷(87.2mL)中搅拌。加入乙酸(2.60mL,45.7mmol)，预搅拌15分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(14.53g,68.56mmol)，在室温搅拌过夜。HPLC-MS显示仍存在一些醛，加入1当量三乙酰氧基硼氢化钠，将反应混合物搅拌24小时。反应混合物用30mL 1M HCl淬灭，剧烈搅拌30分钟，用碳酸氢钠中和。反应混合物用乙酸乙酯萃取，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。用硫酸镁干燥，蒸发。混合物通过快速色谱(0-25%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到1.612g白色固体。ES(+)MS m/e=328.0(M+1)。
合成3-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯：将3-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(1.612g,4.912mmol)、(2,4-二甲氧基苄基)-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基]-胺(2.681g,6.363mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](320mg,0.39mmol)在1,4-二氧杂环己烷(48.9mL,626mmol)中搅拌。加入饱和碳酸钠水溶液(7.84mL,14.7mmol)，在100℃加热。反应通过HPLC-MS来监测，1.5小时后，反应完成。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤，蒸发。反应混合物通过快速色谱(0-5%MeOH:DCM)来纯化。收集到2.002g棕色无定形固体。ES(+)MS m/e=543.3(M+1)。
合成3-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸：将3-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸甲酯(270mg,0.498mmol)在甲醇(3.00mL)中搅拌，加入1.0M氢氧化钠水溶液(1.49mL,1.49mmol)。化合物未溶解，但仍在40℃搅拌2小时。反应混合物随时间固化。加入甲醇(3mL)以有助于溶解，将反应混合物在60℃加热1小时。加入盐酸以酸化，用过量的碳酸氢钠碱化。水相用乙酸乙酯萃取三次。中和，加入EtOAc(仍有一些固体没有溶解)。尝试用HCl酸化，大部分物质进到水相中。用过量的碳酸氢钠水溶液中和，加入300mL水和300mL乙酸乙酯。将两相剧烈振摇，过滤，收集到138.5mg浅黄色固体(53%)。ES(+)MS m/e=529.3(M+1)。
实施例10.1：合成3-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺：将3-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酸(88.6mg,0.168mmol)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(83.8mg,0.220mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(1.7mL)中。先后加入3,4-二氟苄基胺(39.6μl,0.335mmol)和N,N-二异丙基乙胺(58.4μl,0.335mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。加入75mL乙酸乙酯，用2×50mL碳酸氢钠水溶液和50mL盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-8%甲醇:二氯甲烷)来纯化。收集到120.9mg N-(3,4-二氟苄基)-3-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酰胺，其为黄色粉末(110%,粗产物)。ES(+)MS m/e=654.3(M+1)。
在40℃将N-(3,4-二氟苄基)-3-(((5-(4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-甲酰胺(120.9mg,0.1849mmol)在三氟乙酸(2.0mL)中搅拌1.5小时。反应混合物用2mL二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液缓慢淬灭。加入75mL乙酸乙酯，先后用50mL碳酸氢钠水溶液和50mL盐水洗涤两次。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-8%甲醇:二氯甲烷)来纯化。收集到41.2mg黄色粉末(44%)。ES(+)MS m/e=504.2(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO):9.49(t,J=6.1Hz,1H),9.12(t,J=5.8Hz,1H),8.40(d,J=1.8Hz,1H),8.36(d,J=2.1Hz,1H),8.34(s,1H),7.98(dd,J=8.7;1.8Hz,1H),7.89(d,J=2.1Hz,1H),7.84(宽单峰,2H),7.64(d,J=8.7Hz,1H),7.47(d,J=3.6Hz,1H),7.42-7.31(m,2H),7.20-7.13(m,1H),7.10(d,J=3.6Hz,1H),4.86(d,J=6.0Hz,2H),4.42(d,J=6.0Hz,2H)。
合成3-氨基-6-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺：将3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸(1.51g,6.93mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(30mL)、3,4-二氟苄基胺(1.23mL,10.4mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.40mL,13.8mmol)混合，搅拌，然后分批加入N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(2.89g,7.60mmol)，搅拌2小时。加入乙酸乙酯(250mL)和水(150mL)，过滤，有机相再用150mL碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-50%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到0.899g黄色固体(38%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)d=8.25(s,1H),8.04(宽单峰,1H),7.24-7.00(m,3H),4.56(d,J=6.4Hz,2H)。
合成6-溴-N-(3,4-二氟苄基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺：将3-氨基-6-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺(505mg,1.47mmol)称重到聚丙烯反应小瓶中，溶解在氟化氢/吡啶(65-70%,4.5mL,160mmol)中。在冰浴中冷却，加入亚硝酸钠(113.7mg,1.648mmol)。反应混合物开始逸出气体，将反应混合物在0℃搅拌15min，然后温热至室温。再搅拌1小时后，HPLC-MS显示反应完成，用冰淬灭。加入乙酸乙酯(75mL)，先后用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤两次。用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-30%乙酸乙酯:己烷)来纯化。ES(+)MSm/e=346.0(M+1)。1H NMR(CDCl3)δ:8.48(d,J=1.4Hz,1H),7.94(t,J=6.0Hz,1H),7.03-7.24(m,3H),4.60(d,J=6.3Hz,2H)。
实施例10.2：合成3-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-6-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺：将6-溴-N-(3,4-二氟苄基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺(99.7mg,0.288mmol)和6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(90.5mg,0.353mmol)在1,4-二氧杂环己烷(3.00mL)和三乙胺(80.3μl,0.576mmol)中搅拌。在50℃加热1小时，通过HPLC-MS来监测。加入75mL乙酸乙酯，用2×50mL水和1×50mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-10%甲醇:二氯甲烷)来纯化。收集到黄色粉末(139.3mg,83%)。ES(+)MSm/e=582.2(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ=9.35(t,J=6.3Hz,1H),9.16(t,J=6.0Hz,1H),8.51(s,1H),8.41(d,J=2.1Hz,1H),8.34(s,1H),7.98(dd,J=2.0,8.7Hz,1H),7.83(宽单峰,1H),7.64(d,J=8.7Hz,1H),7.47(d,J=3.6Hz,1H),7.44-7.30(m,2H),7.22-7.13(m,1H),7.09(d,J=3.6Hz,1H),4.84(d,J=5.9Hz,2H),4.42(d,J=6.3Hz,2H)。
实施例10.3使用与实施例10.2类似的顺序由3-氨基-N-(3,4-二氟苄基)-6-苯基吡嗪-2-甲酰胺来合成。
合成3-氨基-N-(3,4-二氟苄基)-6-苯基吡嗪-2-甲酰胺：将3-氨基-6-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺(98.8mg,0.288mmol)、苯基硼酸(72.5mg,0.595mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](23.5mg,0.0288mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.96mL)中搅拌。加入1.04M碳酸氢钠水溶液(0.834mL,0.864mmol)，在微波反应器中在130℃加热5分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤。有机相先后用水和盐水洗涤两次。用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-30%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到92.7mg白色粉末(95%)。ES(+)MS m/e=341.2(M+1)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ:8.68(s,1H),8.41(t,J=6.4Hz,1H),8.19(d,J=6.4Hz,1H),7.90-7.79(m,2H),7.61-7.34(m,4H),7.26-7.03(m,3H),4.62(d,J=6.4Hz,2H)。
实施例10.4使用与实施例10.2类似的顺序由3-氨基-6-异丙基-吡嗪-2-甲酸3,4-二氟苄基酰胺来合成。
合成3-氨基-6-异丙基-吡嗪-2-甲酸3,4-二氟苄基酰胺：将3-氨基-6-异丙烯基-吡嗪-2-甲酸3,4-二氟苄基酰胺(106.4mg,0.3497mmol)和湿的10%钯/碳(57.7mg,0.0271mmol)称重到小瓶中，抽空，用氢气冲洗，如此进行三次。加入甲醇(3.00mL)，在50℃加热1小时。反应混合物用硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。蒸发。LCMS(Agilent460,254nm):M+1=307.21.59min。粗品是洁净的。其直接用于下一步反应。收集到110.8mg黄色固体。ES(+)MSm/e=307.2(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ=8.32(宽单峰,1H),8.10(s,1H),7.23-7.03(m,3H),4.59(d,J=6.4Hz,2H),2.98(spt,J=6.9Hz,1H),1.27(d,J=6.9Hz,6H)。
实施例10.5使用与实施例10.2类似的顺序由3-氨基-N-(3,4-二氟苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-甲酰胺来合成。
合成3-氨基-N-(3,4-二氟苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-甲酰胺：将3-氨基-6-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺(299.5mg,0.8728mmol)、异丙烯基硼酸频哪醇酯(329μl,1.75mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](36.2mg,0.0443mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4.5mL,58mmol)中搅拌。加入1.04M碳酸氢钠水溶液(2.528mL,2.618mmol)，在100℃加热2.5小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤。有机相先后用水和盐水洗涤两次。用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-30%乙酸乙酯:己烷)来纯化。收集到246mg黄色粉末(93%)。
实施例10.6使用与实施例10.2类似的顺序由3-氟-6-((E)-丙烯基)吡嗪-2-甲酸3,4-二氟苄基酰胺来合成。
合成3-氟-6-((E)-丙烯基)吡嗪-2-甲酸3,4-二氟苄基酰胺：将3-氨基-6-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺(107.0mg,0.3092mmol)、反式-丙-1-烯-1-基硼酸(48.4mg,0.563mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](13.3mg,0.0163mmol)、1,4-二氧杂环己烷(3.00mL,38.4mmol)和三乙胺(129.3μl,0.9275mmol)混合，在65℃加热1.5小时。加入75mL乙酸乙酯，用75mL水、75mL碳酸氢钠水溶液和75mL盐水洗涤。用MgSO4干燥，蒸发，通过快速色谱(10-30%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到90.3mg灰白色固体(95%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ=8.30(d,J=1.6Hz,1H),8.18-7.92(m,1H),7.26-7.05(m,3H),6.81(dq,J=6.8,15.7Hz,1H),6.52(dq,J=1.7,15.7Hz,1H),4.62(d,J=6.3Hz,2H),1.98(dd,J=1.7,6.8Hz,3H)。
合成实施例10.7：3-({[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基]甲基}氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-6-丙基吡嗪-2-甲酰胺：将实施例10.6(102.3mg,0.1882mmol)和10%钯/碳(湿的,24.4mg,0.0115mmol)在小瓶中混合，抽空，用氢气冲洗。加入甲醇(2.00mL)和二氯甲烷(1.00mL)，在60℃和氢气气氛下加热4小时。再加入10%钯/碳(湿的,40mg)，加热过夜。反应混合物用硅藻土过滤，蒸发，通过快速色谱(0-6%甲醇:二氯甲烷)来纯化。收集到49.2mg白色固体(48%)。ES(+)MS m/e=546.3(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ=8.83(t,J=5.9Hz,1H),8.60(s,1H),8.40(t,J=6.4Hz,1H),8.16(s,1H),7.96(dd,J=1.9,8.7Hz,1H),7.88-7.79(m,2H),7.24-6.97(m,5H),5.98(宽单峰,2H),4.87(d,J=6.0Hz,2H),4.56(d,J=6.4Hz,2H),2.69-2.58(m,2H),1.70(六重峰,J=7.5Hz,2H),0.97(t,J=7.4Hz,3H)。
实施例10.8使用与实施例10.2类似的顺序由3-氟-6-(3-甲氧基-丙-1-炔基)吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺来合成。
合成3-氟-6-(3-甲氧基-丙-1-炔基)吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺：将(S)-6-溴-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺(59.6mg,0.165mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](13.6mg,0.0166mmol)和碘化亚铜(I)(4.8mg,0.025mmol)在乙腈(3.30mL,63.2mmol)中搅拌，加入三乙胺(69.2μl,0.496mmol)和甲基炔丙基醚(55.9μl,0.662mmol)。将反应混合物在微波反应器中在130℃加热10分钟。冷却至室温后，反应混合物用硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，蒸发，通过快速色谱(0-50%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到38.3mg红色油状物(66%)。ES(+)MS m/e=350.2(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)=8.46(d,J=1.5Hz,1H),7.83(d,J=7.9Hz,1H),7.25-7.10(m,3H),5.25(五重峰,J=7.2Hz,1H),4.38(s,2H),3.49(s,3H),1.61(d,J=7.2Hz,3H)。
实施例10.9使用与实施例10.2类似的顺序由3-氨基-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺来合成。
合成3-氨基-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺：将(S)-3-氨基-6-溴-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺(200.5mg,0.5614mmol)、氰化锌(136.6mg,1.163mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](47.9mg,0.0586mmol)和N-甲基吡咯烷酮(4.0mL,42mmol)混合，在微波反应器中在125℃加热15分钟。将反应混合物溶解在乙酸乙酯中，用硅藻土过滤。有机洗涤液先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-25%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。蒸发馏分，得到106.3mg白色粉末(62%)。ES(+)MSm/e=304.1(M+1)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.78(宽单峰,1H),8.45(s,1H),7.94(d,J=7.18Hz,1H),7.04-7.25(m,3H),5.80(宽单峰,1H),5.15(五重峰,J=7.18Hz,1H),1.61(d,J=6.80Hz,3H)。
实施例10.10以与实施例10.2类似的方法来制备。
实施例11
Figure BDA00001732070201131
合成(Z)-2-氰基-3-乙氧基丙烯酸叔丁酯：在0℃向2-氰基乙酸(5g,0.059mol)和叔丁醇(5.2g,0.07mmol,1.2当量)的MeCN/MeOH(1:1)溶液中分批加入DCC(12g,0.059mmol,1当量)，搅拌20min。过滤反应混合物，有机层用真空蒸发器浓缩。所得到的黄色油状物通过硅胶快速色谱(PE/EA=10/1)来纯化，得到5.4g(收率为65%)2-氰基乙酸叔丁酯。将三乙氧基甲烷(17g,0.115mol,1.2当量)加到2-氰基乙酸叔丁酯(13.5g,0.0957mol)在200ml Ac2O中的溶液中。将反应混合物加热至回流且保持15h，然后真空除去溶剂，得到(Z)-2-氰基-3-乙氧基丙烯酸叔丁酯，其为红色油状物(16g,85%)。
合成3-氨基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸叔丁酯：将化合物(Z)-2-氰基-3-乙氧基丙烯酸叔丁酯(15g,76.14mmol)和(E)-1-亚苄基-2-甲基肼(参见Y.Xia,JMC,1997,40,4372)(12.3g,91.8mmol,1.2当量)溶解在200mL甲醇中，在室温搅拌3h。然后将反应混合物回流15h，然后加入5ml浓盐酸。最后混合物通过硅胶来纯化，得到5g(收率为33%)产物。MS(M+H+):198.1。
合成3-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸叔丁酯：在室温向3-氨基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸叔丁酯(1.4g,7.0mmol)的5mL甲醇溶液中加入5-溴噻吩-2-甲醛(1.6g,8.4mmol)。将反应混合物加热至回流，搅拌16h。然后在室温向反应混合物中加入10mL甲醇和NaBH4(266mg,7.0mmol,1.0当量)。将反应混合物在室温搅拌2h。溶剂通过旋转蒸发来除去，残留物通过硅胶来纯化，得到产物(1.3g,49.4%)。MS(M+H+):372.0。
合成3-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺：在搅拌下向3-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸叔丁酯(1.3g粗品)在甲醇和四氢呋喃(40ml,1/1)中的溶液中加入氢氧化钠(4.0g,0.1mol)和0.5ml水。将反应混合物加热至回流，搅拌16h。溶剂通过旋转蒸发来除去，在搅拌下加入30mL水。副产物(5-溴噻吩-2-基)用CH2Cl2萃取(20mL×3)。将水溶液的pH调节至5，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，浓缩，得到3-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸，其不经进一步纯化(0.3g,27%)。ESI-MS(M+H+):316.0。
在搅拌下向上述粗品(110mg,0.35mmol)的1.0mL DMF溶液中加入HATU(265mg,0.70mmol,2.0当量)和DIPEA(250mg,1.75mmol,5.0当量)。然后加入(3,4-二氟苯基)甲胺(50mg,0.35mmol,1.0当量)。将反应混合物在室温搅拌16h，浓缩，残留物通过硅胶来纯化，得到产物(80mg,52.6%)。ESI-MS(M+H+):441.0。
实施例11.1：合成3-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺：装有6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺(45mg,0.16mmol)、3-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(73mg,0.16mmol,1.0当量)、2M K2CO3(45.6mg,0.32mmol,2.0当量)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](13.4mg,1.6mmol,0.10当量)的烧瓶用氮气冲洗。加入1,4-二氧杂环己烷(10mL)，将反应混合物在90℃搅拌2h。将溶液冷却至室温。除去溶剂，残留物通过制备性HPLC来纯化，得到产物(38mg,45.4%)。ESI-MS(M+H+):506.1。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.65(s,1H)8.58(d,1H),8.33(dd,1H),7.85(s,1H),7.77(d,1H),7.52(d,1H),7.18-7.25(m,2H),7.11-7.14(m,2H),4.68(s,2H),4.45(s,2H),3.77(s,3H)。
实施例11.2以与实施例11.1类似的方法由苯基肼来制备。
实施例11.3以与实施例11.1类似的方法由2-肼基吡啶来制备。
实施例11.4-11.5以与实施例11.1类似的方法来制备。
实施例12
Figure BDA00001732070201151
合成4-氨基噻唑-5-甲酸甲酯：将4-氨基-2-甲基硫基噻唑-5-甲酸甲酯(2.00g,9.79mmol)溶解在甲醇(40mL)中(可能需要温热)。然后向溶液中加入锌粉(3.84g,58.8mmol)。然后历时10分钟向反应混合物中滴加3M氯化氢的MeOH(20mL)溶液。在上述加入期间，快速逸出的气体由反应烧瓶进到漂洗瓶中以捕获逸出的甲硫醇。将反应混合物在室温搅拌1h。再加入锌(1g)。然后将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物倒入硅藻土在200ml饱和Na2CO3水溶液中的搅拌混合物中。过滤所得到的混合物，固体用少量MeOH淋洗。向滤液中加入水(100ml)，其用CH2Cl2萃取3次。合并的萃取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，真空蒸发。粗品通过从乙醚中析出来纯化，得到所需化合物，其为白色固体(0.80g,52%)。LCMS:RT=0.60分钟。MH+:159.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(s,1H),6.99(宽单峰,2H),3.73(s,3H)。
合成4-(((5-溴噻吩-2-基)甲基)氨基)噻唑-5-甲酸甲酯：向4-氨基噻唑-5-甲酸甲酯(500mg,3.0mmol)的1,2-二氯乙烷(10mL)溶液中加入5-溴-噻吩-2-甲醛(906mg,4.74mmol)和乙酸(0.180mL,3.16mol)。将混合物在室温搅拌1h。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.34g,6.32mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用水淬灭，在室温搅拌30分钟，然后用EtOAc稀释，用NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4干燥，通过HPLC来纯化，得到产物，其为白色粉末(0.346g)。LCMS:RT=1.76分钟;MH+:333.00。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.07(s,1H),7.55(t,J=6.27Hz,1H),7.03(d,J=3.77Hz,1H),6.83(d,J=3.51Hz,1H),4.66-4.84(m,2H),3.74(s,3H)。
合成4-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}噻唑-5-甲酸甲酯：向6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基胺(163mg,0.000600mol)和4-[(5-溴-噻吩-2-基甲基)氨基]噻唑-5-甲酸甲酯(200mg,0.0006mol)的DMSO(3mL)溶液中加入[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](49.0mg,0.0600mmol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(2mL,2.0mmol)。脱气5min后，将反应混合物在微波中在90℃加热10min。反应混合物用EtOAc稀释，用水洗涤(5次)。然后干燥有机层，浓缩。粗品通过制备性TLC来纯化，得到产物9.3(91mg,40%)。LCMS:RT=1.05分钟;MH+:398.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(s,1H),8.75(s,1H),8.57(d,J=2.01Hz,1H),8.25(dd,J=1.88,8.66Hz,1H),7.75(d,J=8.78Hz,1H),7.64(t,1H),7.54(d,J=3.76Hz,1H),7.10(d,J=3.51Hz,1H),4.85-4.96(m,2H),3.76(s,3H)。
合成4-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)噻唑-5-甲酸：向4-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}噻唑-5-甲酸甲酯(90mg,0.23mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中加入1.0M氢氧化锂水溶液(0.7mL,0.7mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。真空除去有机溶剂，将残留物冷却至0℃，然后用HCl酸化至pH=1。将粗品在EtOAc中吸收，用酸化的盐水溶液洗涤。然后分离有机层，用MgSO4干燥，浓缩，得到产物(84mg,97%)，其不经进一步纯化即用于下一步。
实施例12.1：合成4-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)噻唑-5-甲酰胺：将4-{[5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基甲基]氨基}噻唑-5-甲酸(80mg,0.17mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.07mL,0.4mmol)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(87.26mg,0.23mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)溶液在室温搅拌15分钟，然后加入3,4-二氟苄基胺(0.02468mL,0.21mmol)，将反应混合物在室温搅拌1h。反应混合物用EtOAc稀释，先后用盐水和水洗涤。分离有机层，干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到产物，其为浅黄色粉末(18mg,21%)。LCMS:RT=1.21分钟;MH+:509.10。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.71(宽单峰,2H),8.90-9.01(m,1H),8.79(s,1H),8.59(d,J=1.76Hz,1H),8.44(t,J=6.02Hz,1H),8.27(dd,J=2.01,8.78Hz,1H),7.91(t,J=6.40Hz,1H),7.76(d,J=8.78Hz,1H),7.47-7.61(m,1H),7.22-7.44(m,2H),6.98-7.19(m,2H),4.73-4.95(m,2H),4.34(d,J=5.27Hz,2H)。
实施例13：合成2-(4-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻唑-2-基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00001732070201171
向2-氨基-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(0.500g,1.90mmol)和2,4-二溴-噻唑(0.508g,2.09mmol)在1,4-二氧杂环己烷(15mL,190mmol)中的混合物中加入磷酸钾(605mg,2.85mmol)及三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(90mg,0.09mmol)和Xantphos(130mg,0.23mmol)的混合物。混合物用氮气脱气10min。然后将反应混合物在微波反应器中在150℃加热30min。反应混合物用EtOAc稀释，先后用NaHCO3水溶液和水洗涤。分离有机相，干燥，浓缩。粗品通过柱(EtOAc/DCM梯度)来纯化，得到所需产物2-(4-溴噻唑-2-基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为浅黄色粉末(380mg,47%)。LCMS:1.88分钟;MH+:425.10。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.29(s,1H),9.57(t,J=5.77Hz,1H),8.52(dd,J=1.63,4.89Hz,1H),8.39(dd,J=1.76,7.78Hz,1H),6.98-7.28(m,5H),4.55(d,J=6.02Hz,2H)。
向2-(4-溴噻唑-2-基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(3.1,100mg,0.0002mol)和(2,4-二甲氧基苄基)-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-基]-胺(198mg,0.000470mol)在1,4-二氧杂环己烷(4.00mL,0.0512mol)中的混悬液中加入碳酸钾(97.5mg,0.000705mol)的水(1.00mL,0.0555mol)溶液。混合物用氮气脱气15分钟。加入四(三苯基膦)钯(0)(41mg,0.000035mol)。再脱气5min。将反应混合物在微波(大功率)中在130℃加热1h。冷却后，反应混合物用EtOAc稀释，先后用NaHCO3水溶液和水洗涤。然后干燥有机相，浓缩。粗品通过制备性TLC来纯化，得到35mg所需产物3.2(纯度为约80%(基于LCMS))，其不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.55分钟;MH+:640.30。
将N-(3,4-二氟苄基)-2-{4-[4-(2,4-二甲氧基苄基氨基)喹唑啉-6-基]-噻唑-2-基氨基}吡啶-3-甲酰胺(3.2,25mg,0.039mmol)在三氟乙酸(1.5mL,19mmol)和二氯甲烷(0.5mL)中的混悬液在50℃加热4h。冷却后，反应混合物用EtOAc稀释，用水洗涤。然后干燥有机相，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到2-(4-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻唑-2-基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(实施例13)，其为浅黄色粉末(2.9mg,15%)。LCMS:RT=1.25分钟;MH+:490.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.33(s,1H),9.63(t,1H),8.94(s,1H),8.80(s,1H),8.57(dd,J=4.89,1.63Hz,2H),8.43(dd,J=8.03,1.76Hz,1H),7.64-7.91(m,2H),7.01-7.26(m,4H),4.57(d,2H)。
实施例14
Figure BDA00001732070201181
合成5-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-胺：将2-氟-5-碘-苯甲腈(2.00g,8.097mmol)和N-甲基肼(4.308mL,80.97mmol)在丁-1-醇(50.0mL)中的混合物在100℃-110℃搅拌2h。然后将反应混合物冷却，浓缩。残留物用EtOAc稀释，先后用水、NaHCO3水溶液和水洗涤。分离有机层，用MgSO4干燥，浓缩。粗品通过从乙醚/己烷中析出来纯化，得到产物，其为灰白色粉末(1.66g,75%)。LCMS:RT=1.05分钟;MH+:274.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(d,J=1.00Hz,1H),7.47(dd,J=1.51,8.78Hz,1H),7.20(d,J=8.78Hz,1H),5.50(s,2H),3.70(s,3H)。(参见JMC,2007,50,1584-97)。
合成1-甲基-5-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-胺：1-苯磺酰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(600.0mg,1.56mmol)和5-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基胺(26.4mg,1.561mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10.00mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。加入饱和碳酸氢钠水溶液(1.00mL)。再脱气5分钟。加入[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](128mg,0.156mmol)。然后将反应小瓶密封，在微波反应器中在90℃加热10min。反应混合物用EtOAc稀释，用水洗涤(5次)。分离有机相，用MgSO4干燥，浓缩。粗品通过ISCO(DCM+1%-5%[2M NH3/MeOH])来纯化，得到产物，其为浅黄色粉末(350mg,56%)。LCMS:RT=1.31分钟;MH+:404.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39-8.52(m,2H),8.02-8.26(m,4H),7.68-7.80(m,2H),7.56-7.68(m,2H),7.34-7.50(m,2H),5.34-5.72(m,2H),3.76(s,3H)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(1-甲基-5-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基氨基)吡啶-3-甲酰胺：向2-氯-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(100.0mg,0.35mmol)的1,4-二氧杂环己烷(5.0mL)混合物中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(32.4mg,0.035mmol)和Xantphos(49.1mg,0.085mmol)。混合物用氮气脱气15分钟，然后在微波中在150℃加热1h。反应混合物用EtOAc稀释，用水洗涤。分离有机相，用MgSO4干燥，通过制备性TLC(DCM+5%[2M NH3/MeOH])来纯化，得到117mg(51%)产物。LC-MS:RT=1.55分钟;MH+:650.30。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),9.37(t,J=5.90Hz,1H),8.43(dd,J=1.51,4.77Hz,1H),8.13-8.30(m,6H),8.03(s,1H),7.75-7.84(m,1H),7.66-7.75(m,2H),7.58-7.66(m,2H),7.34-7.48(m,3H),7.22(ddd,J=2.38,4.27,6.40Hz,1H),6.90(dd,J=4.89,7.65Hz,1H),4.50(d,J=5.77Hz,2H),3.99(s,3H)。
实施例14.1使用与就实施例5.7所述相同的方法来制备，其中使用碳酸钾/甲醇(40%)。
实施例14.2使用与就实施例14.1所述相同的方法由N-(2,4-二甲氧基苄基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺来制备。
实施例15
Figure BDA00001732070201191
合成(E)-N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-(2-氧代二氢吲哚-6-基)烯丙基氨基)吡啶-3-甲酰胺：将(E)-6-(3-氨基丙-1-烯基)二氢吲哚-2-酮(参见Lind,K.E.,WO2008005457)(1.0g,0.0053mol)、N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺(1.4g,0.0053mol)和碳酸铯(2.6g,0.0080mol)在二甲基亚砜(50mL,0.7mol)中的混合物在130℃加热。LC-MS显示形成所需产物(1.09min,ES+/435.20)。冷却至室温后，用EtOAc和水进行后处理。用MgSO4干燥。通过硅胶柱(先后为0-100%EtOAc/DCM和0-20%甲醇/DCM)来纯化，得到所需产物(1.1g,48%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.08(t,J=5.67Hz,1H),8.46(t,J=5.29Hz,1H),8.20(dd,J=1.89,4.91Hz,1H),8.01(dd,J=1.89,7.93Hz,1H),7.30-7.45(m,2H),7.09-7.22(m,2H),6.94(dd,J=1.51,7.93Hz,1H),6.83(s,1H),6.62(dd,J=4.91,7.55Hz,1H),6.51(d,J=15.86Hz,1H),6.26-6.39(m,1H),4.42(d,J=6.04Hz,2H),4.19(t,J=5.67Hz,2H),3.44(s,2H)。
实施例15.1：合成2-((E)-3-((Z)-3-((1H-咪唑-5-基)亚甲基)-2-氧代二氢吲哚-6-基)烯丙基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：将(E)-N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-(2-氧代二氢吲哚-6-基)烯丙基氨基)吡啶-3-甲酰胺(1.1g,0.0025mol)、哌啶(0.50mL,0.0051mol)和乙醇(10mL,0.2mol)的混合物加热至溶解，然后加入1H-咪唑-5-甲醛(290mg,0.0030mol)，在密封的管中在80℃加热过夜。冷却至室温，收集固体，通过硅胶柱(0-20%MeOH/EtOAc)来纯化，得到所需产物，其为橙色固体(0.51mg,39%)。MH+:513.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.69(s,1H),9.10(t,J=5.83Hz,1H),8.21(dd,J=1.76,4.83Hz,1H),8.01(dd,J=1.82,7.78Hz,2H),7.80(宽单峰,1H),7.61(d,J=7.91Hz,1H),7.29-7.46(m,2H),7.13-7.23(m,1H),7.01-7.11(m,1H),6.89(宽单峰,1H),6.63(dd,J=4.77,7.65Hz,1H),6.55(d,J=15.94Hz,1H),6.33-6.47(m,1H),4.43(d,J=6.09Hz,2H),4.22(t,J=5.21Hz,1H)。
合成(S)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-氟-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：在PTFE小瓶中将2-氨基-N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(330mg,0.96mmol)在30M氢氟酸的吡啶溶液(3mL,90mmol)中搅拌。在冰浴中冷却，加入亚硝酸钠(76mg,1.1mmol)。在冰浴中搅拌15分钟。LC-MS显示转化完全(1.65min,ES+/349.2)。在冷却下用水淬灭，用50mL EtOAc萃取。用MgSO4干燥，蒸发。用短硅胶柱(EtOAc)纯化，得到所需产物，其为浅黄色固体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.69(dd,J=2.64,8.69Hz,1H),8.51(s,1H),6.89-7.17(m,4H),5.18(dt,1H),1.52(d,J=6.80Hz,3H)。
合成(S,E)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-(3-(2-氧代二氢吲哚-6-基)烯丙基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：通过与(E)-N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-(2-氧代二氢吲哚-6-基)烯丙基氨基)吡啶-3-甲酰胺相同的方法来制备。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),9.07(d,J=7.47Hz,1H),8.94(t,J=5.65Hz,1H),8.52(dd,J=0.88,2.26Hz,1H),8.40(d,J=2.07Hz,1H),7.33-7.50(m,2H),7.19-7.26(m,1H),7.13(d,J=7.65Hz,1H),6.93(dd,J=1.38,7.65Hz,1H),6.82(d,J=1.00Hz,1H),6.48(d,J=15.94Hz,1H),6.32(dt,J=5.77,15.94Hz,1H),5.06-5.16(m,1H),4.20-4.27(m,2H),3.43(s,2H)。MH+:517.3。
实施例15.2-15.22以与实施例15.1类似的方法来制备。
实施例16.1：(R)-N-(3,4-二氟苄基)-2-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基氧基)-1-苯基乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201211
将2-苯基甘氨醇(2-phenylglycinol)(1.0克,7.29mmol)、N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺(1.94克,7.29mmol)、丁-2-醇(20mL)和DIEA(3.81mL,21.87mmol)的混合物在搅拌下在110℃加热24小时。然后将反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。水层再用乙酸乙酯萃取一次，合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。粗产物通过硅胶色谱(DCM/MeOH 98:2)来纯化，得到(R)-N-(3,4-二氟苄基)-2-(2-羟基-1-苯基乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺，其为1.5克(69.89%)橙色油状物。E/S MSm/e=384.14(M+1)。
向250mL圆底烧瓶中加入(R)-N-(3,4-二氟苄基)-2-(2-羟基-1-苯基乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺(2.79克,7.29mmol)和DMF(25mL)。然后向搅拌的溶液中加入氢化钠(321mg,8.02mmol)和5-氟-2-硝基苯胺(1.78克,11.49mmol)。将反应烧瓶密封，置于氮气气氛下，然后在环境温度搅拌24小时。反应完成后，用乙酸乙酯将反应混合物转移到分液漏斗中，先后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂。粗产物通过硅胶色谱(DCM,100%)来纯化，得到(R)-2-(2-(3-氨基-4-硝基苯氧基)-1-苯基乙基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为1.13克(29.8%)黄色油状物。E/S MSm/e=520.17(M+1)。
向250mL圆底烧瓶中加入(R)-2-(2-(3-氨基-4-硝基苯氧基)-1-苯基乙基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(1.13克,21.7mmol)、异丙醇(40mL)、甲醇(20mL)和1N盐酸(21.7mL,21.7mmol)。然后向搅拌的溶液中分批加入锌粉(2.83克,43.53mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌2小时。反应完成后，反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(160mL)稀释，将混合物剧烈搅拌。所得到的析出物用硅藻土垫过滤，其中用大量乙酸乙酯洗涤。然后合并的有机层先后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸镁干燥。过滤有机层，减压除去溶剂，得到(R)-2-(2-(3,4-二氨基苯氧基)-1-苯基乙基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为840毫克(79%)黄色油状物。E/S MSm/e=490.20(M+1)。
向50mL圆底烧瓶中加入(R)-2-(2-(3,4-二氨基苯氧基)-1-苯基乙基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(840mg,1.72mmol)、1,1’-羰基二咪唑(309mg,1.91mmol)和DMF(6mL)。将反应混合物在60℃加热12小时。反应完成后，反应混合物通过硅胶色谱(DCM/MeOH 98:2)来纯化，得到(R)-N-(3,4-二氟苄基)-2-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基氧基)-1-苯基乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺(实施例16.1,32mg,3.6%)，其为灰白色固体。E/S MSm/e=516.18(M+1)。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ(d,2H),4.43(d,2H),5.48(s,1H),6.61(m,3H),6.79(d,1H),7.07(s,1H),7.15(d,2H),7.23(t,3H),7.36(d,2H),7.81(d,1H),7.99(d,1H)。
实施例16.2按照与实施例16.1相同的方法由氨基乙醇来制备。
实施例16.3-16.12使用与实施例16.1类似的方法来制备。
实施例16.13：N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-((R)-2-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基氧基)-1-苯基乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201221
5-((R)-2-{3-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-2-苯基-乙氧基)-2-硝基-苯甲酸：将N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺(205mg,0.515mmol)和5-氟-2-硝基-苯甲酸(166mg,0.894mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5.1mL)中。加入60%氢化钠在矿物油中的分散液(108mg,2.70mmol)，在室温搅拌。反应混合物冒泡，变为浑浊，然后变为红色和澄清。反应混合物通过LCMS来监测。1小时后，反应需要加入第二批氢化钠在矿物油中的分散液。然后反应混合物用水淬灭，用浓盐酸酸化，用75mL乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤1次，用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-100%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到258mg黄色固体(89%)。ES(+)MS m/e=563.2(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.94(d,J=7.55Hz,1H),8.85(d,J=7.55Hz,1H),8.16(dd,J=1.51,4.91Hz,1H),8.12(dd,J=1.70,7.74Hz,1H),8.02(d,J=9.06Hz,1H),7.16-7.51(m,10H),6.67(dd,J=4.91,7.55Hz,1H),5.56-5.68(m,1H),5.14(五重峰,J=7.18Hz,1H),4.39-4.60(m,2H),1.44(d,J=7.18Hz,3H)。
N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-[(R)-2-(2,4-二氧代-1,4-二氢-2H-3,1-苯并噁嗪-6-基氧基)-1-苯基-乙基氨基]吡啶-3-甲酰胺：将5-((R)-2-{3-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-2-苯基-乙氧基)-2-硝基-苯甲酸(258mg,0.459mmol)、锌粉(307mg,4.69mmol)和乙酸(4.5mL)在室温搅拌15分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯充分淋洗，将合并的有机洗涤液蒸发至干。收集到0.246g黄色固体。粗品2-氨基-5-((R)-2-{3-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-2-苯基-乙氧基)-苯甲酸不经进一步纯化即使用。ES(+)MS m/e=533.2(M+1)。
将2-氨基-5-((R)-2-{3-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-2-苯基-乙氧基)-苯甲酸(246mg,0.463mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，在冰浴中冷却。加入N,N-羰基二咪唑(90.0mg,0.555mmol)，温热至室温，搅拌30分钟。反应通过LCMS来监测，显示反应不完全。因此，再加入N,N-羰基二咪唑(38mg)，反应完成。加入75mL乙酸乙酯，用75mL饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，通过快速色谱(0-70%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到155mg黄色粉末(60%)。ES(+)MS m/e=559.2(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.77(d,J=7.18Hz,1H),8.32(d,J=4.53Hz,1H),7.73(宽单峰,1H),7.63(dd,J=1.32,7.74Hz,1H),7.45(d,J=7.18Hz,2H),7.35(t,J=7.36Hz,2H),7.23-7.31(m,2H),7.04-7.22(m,3H),6.97(d,J=9.06Hz,1H),6.52-6.63(m,1H),6.27(宽单峰,1H),5.70(q,J=6.04Hz,1H),5.23(五重峰,J=6.99Hz,1H),4.40-4.51(m,1H),4.25-4.40(m,1H),3.00(s,1H),1.57(d,J=6.80Hz,3H)。
N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-((R)-2-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基氧基)-1-苯基乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺：将N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-[(R)-2-(2,4-二氧代-1,4-二氢-2H-3,1-苯并噁嗪-6-基氧基)-1-苯基-乙基氨基]吡啶-3-甲酰胺(155mg,0.278mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(7.0mL)中。先后加入N,N-二异丙基乙胺(193μl,1.11mmol)和甲基碘(69.1μl,1.11mmol)。将反应混合物在室温搅拌3天。然后再加入甲基碘(10μl)和N,N-二异丙基乙胺(28μl)，搅拌24小时。反应混合物用乙酸乙酯(75mL)稀释，用75mL水和75mL盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发。收集到170mg黄色泡沫，其被鉴定为N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-[(R)-2-(1-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢-2H-3,1-苯并噁嗪-6-基氧基)-1-苯基-乙基氨基]吡啶-3-甲酰胺，其以粗品形式用于下一步。
将N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-[(R)-2-(1-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢-2H-3,1-苯并噁嗪-6-基氧基)-1-苯基-乙基氨基]吡啶-3-甲酰胺(170mg,0.297mmol)和叠氮化钠(116mg,1.78mmol)在水(4.0mL)中搅拌，在微波中在130℃加热15分钟。加入乙酸乙酯，用碳酸氢钠和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过Gilson HPLC来纯化。收集到3.0mg N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-((R)-2-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基氧基)-1-苯基乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺，其为呈白色粉末形式的二TFA盐。ES(+)MSm/e=544.2(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H),8.91(d,J=7.55Hz,1H),8.78(d,J=7.55Hz,1H),8.03(dd,J=1.89,7.55Hz,1H),8.07(dd,J=1.89,4.91Hz,1H),7.39(ddd,J=2.64,7.55,11.71Hz,1H),7.29-7.35(m,3H),7.11-7.29(m,4H),6.86(d,J=9.06Hz,1H),6.57(dd,J=4.91,7.55Hz,1H),6.53(s,1H),6.52(dd,J=2.40,7.30Hz,1H),5.42-5.54(m,1H),5.09(五重峰,J=7.27Hz,1H),4.17(tt,J=5.15,9.96Hz,2H),2.47(s,3H),1.38(d,J=7.18Hz,3H)。
实施例17.1：N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-(1-氧代异二氢吲哚-4-基)苯基氨基)吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00001732070201241
向3-碘-2-甲基苯甲酸(10克,38.16mmol)在二氯甲烷(20mL)和甲醇(5mL)中的溶液中滴加2.0M TMS-重氮甲烷的己烷溶液(38.16mL,76.32mmol)。当保留有显著的黄色时，反应进行，除去所有溶剂，得到3-碘-2-甲基苯甲酸甲酯，其为黄色油状物(10.53g,100%)，所述油状物不经进一步纯化。E/S MSm/e=277(M+1)。
将3-碘-2-甲基苯甲酸甲酯(10.53克,38.16mmol)在四氯化碳(100mL)中的溶液在环境温度搅拌直到均匀。然后向该混合物中加入过氧化苯甲酰(184.8mg,0.763mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(6.79克,38.16mmol)。将反应溶液加热至回流且保持16小时。反应完成后，用中号垂熔滤器从溶液中过滤N-溴琥珀酰亚胺。减压除去所有溶剂，得到2-(溴甲基)-3-碘苯甲酸甲酯(9.45g,70%)，其为褐色固体。E/S MS m/e=354.88(M+1)。
向所得到的2-(溴甲基)-3-碘苯甲酸甲酯(9.45克,26.71mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中加入7N氨的甲醇(100mL)溶液。将反应混合物在环境温度搅拌直到观察到析出物形成。收集析出物，用二氯甲烷洗涤，得到4-碘异二氢吲哚-1-酮(2.99g,43.2%)，其为白色固体。E/S MS m/e=260(M+1)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.74(s,2H),7.29(t,1H),7.68(d,1H),7.96(d,1H),8.77(s,1H)。
将4-碘异二氢吲哚-1-酮(500mg,1.93mmol)、联硼酸二频哪醇酯(538mg,2.12mmol)、二(三苯基膦)二氯化钯(II)(157.6mg,0.193mmol)、乙酸钾(663mg,6.76mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)的混合物在氮气气氛下加热至90℃且保持4小时。反应混合物不经进一步后处理即用于以下苏楚基(Suzuki)反应。E/S MS m/e=260(M+1)。
将上述产物(181.3mg,0.700mmol)、N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-碘苯基氨基)吡啶-3-甲酰胺(295mg,0.634mmol)、二(三苯基膦)二氯化钯(II)(52mg,0.0634mmol)、1.2M碳酸氢钠(1.58mL,1.90mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(15mL)的混合物在氮气气氛下加热至80℃且保持1.5小时。反应混合物用硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸镁干燥。减压除去溶剂。所得到的残留物通过HPLC来纯化，得到N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-(1-氧代异二氢吲哚-4-基)苯基氨基)吡啶-3-甲酰胺(实施例17.1)(20mg,6%)，其为灰白色固体。E/S MS m/e=471.47(M+1)。1HNMR(400MHz,DMSO-d-6)δ4.48(d,1H),4.53(s,2H),6.90(t,1H),7.21(d,2H),7.41(t,3H),7.59(d,3H),7.68(d,2H),8.04(s,1H),8.19(d,1H),8.33(d,1H),8.65(s,1H),9.37(t,1H),10.95(s,1H)。
实施例17.2按照用于实施例17.1的方法由N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-碘-4-甲基苯基氨基)吡啶-3-甲酰胺和4-碘异二氢吲哚-1-酮来制备。
实施例17.3按照用于实施例17.1的方法由N-(3,4-二氟苄基)-2-(3-碘苯基氨基)吡啶-3-甲酰胺和8-碘-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3(2H)-酮(按照Sun,Q.等人,WO2006138695中报道的方法来制备)来制备。
实施例18.1：2-((4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00001732070201261
将4-溴吡啶-2-甲腈(4.0克,21.85mmol)、联硼酸二频哪醇酯(6.11克,24.04mmol)、二(二苯基膦)二氯化钯(II)(1.78克,2.185mmol)、乙酸钾(7.51克,76.47mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(60mL)的混合物在80℃和氮气气氛下加热4小时。反应完成后，混合物用硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。然后将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，收集有机层，用盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥。过滤有机相，蒸发，得到4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲腈(4.5g,89%)，其为棕色固体。E/S MSm/e=231.07(M+1)。
将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲腈(2.51克,5.91mmol)、碘代氮杂吲哚(3.49克,9.09mmol)、二(二苯基膦)二氯化钯(II)(742mg,0.909mmol)、1.2M碳酸氢钠(22.72mL,27.27mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(45.5mL)的混合物在90℃和氮气下加热3小时。反应完成后，反应混合物用硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。将反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。分离有机相，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。粗产物通过硅胶色谱(己烷/乙酸乙酯97:3)来纯化，得到1.77克(55.3%)粉红色固体。E/S MS m/e=361(M+1)。
向帕尔(parr)振荡瓶中加入4-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-甲腈(1.10克,2.805mmol)、甲醇(30mL)、浓HCl(3mL)和10%钯/碳(勺)。置于帕尔装置上，在压力为35psi的条件下反应30分钟。反应混合物用硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤。将有机相减压蒸发，不经进一步纯化即用于下一步反应。得到(4-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)甲胺(820mg,73.2%)，其为白色固体。E/S MS m/e=365(M+1)。
实施例18.1按照用于实施例7.1的方法由(4-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)甲胺和N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺来制备。
实施例19
实施例19.1：(S)-2-(2-(1H-吲哚-6-基氧基)乙基氨基)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：向6-羟基吲哚(1.0g,0.0075mol)和(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2,1.453g,0.009012mol)在THF(20mL,0.2mol)中的混合物中加入三苯基膦(2.955g,0.01126mol)和偶氮二羧酸二异丙酯(2.218mL,0.01126mol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。粗品用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3洗涤。分离有机层，用MgSO4干燥，过滤。浓缩滤液。粗品通过ISCO柱色谱(EtOAC/己烷,梯度)来纯化，得到0.55g所需产物[2-(1H-吲哚-6-基氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯。LCMS:RT=1.51分钟;MH+:277.10。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.84(宽单峰,1H),7.39(d,J=8.53Hz,1H),7.13-7.21(m,1H),6.99(t,J=5.40Hz,1H),6.88(d,J=2.26Hz,1H),6.64(dd,J=2.26,8.53Hz,1H),6.31(t,J=2.01Hz,1H),3.94(t,J=6.02Hz,2H),3.27-3.32(m,2H),1.39(s,9H)。
向[2-(1H-吲哚-6-基氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(500mg,0.002mol)在1,4-二氧杂环己烷(9mL)中的混合物中加入4M氯化氢的1,4-二氧杂环己烷溶液(4mL,0.004mol)，在40℃加热1h。真空除去溶剂。粗品(370mg)不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=0.71分钟;MH+:177.20。
向粗2-(1H-吲哚-6-基氧基)乙胺盐酸盐(4,100.0mg,0.4702mmol)在丁-1-醇(5mL,0.05mol)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.2457mL,1.410mmol)。搅拌5min，然后加入N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-氟吡啶-3-甲酰胺(5,131.8mg,0.4702mmol)。将反应混合物在125℃回流过夜。真空除去溶剂。粗品先后通过HPLC和制备性TLC(DCM+2%[2M NH3/MeOH])来纯化，得到所需产物(S)-2-(2-(1H-吲哚-6-基氧基)乙基氨基)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色粉末(110mg,54%)。LCMS:RT=1.49分钟;MH+:437.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.84(宽单峰,1H),8.79(d,J=7.53Hz,1H),8.46(t,J=5.52Hz,1H),8.21(dd,J=1.76,4.77Hz,1H),8.06(dd,J=1.88,7.66Hz,1H),7.29-7.49(m,3H),7.22(ddd,J=2.38,4.33,6.34Hz,1H),7.14-7.19(m,1H),6.93(d,J=2.26Hz,1H),6.57-6.67(m,2H),6.31(t,J=2.13Hz,1H),5.12(五重峰,J=7.15Hz,1H),4.10(t,J=5.77Hz,2H),3.63-3.85(m,2H),1.44(d,J=7.03Hz,3H)。
实施例19.2：(S,Z)-2-(2-(3-((1H-咪唑-5-基)亚甲基)-2-氧代二氢吲哚-6-基氧基)乙基氨基)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：向N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-[2-(1H-吲哚-6-基氧基)乙基氨基]吡啶-3-甲酰胺(100mg,0.20mol)的乙腈(3.0mL)溶液中加入乙酸(0.3mL)和Bu4N-过硫酸氢钾制剂(Bu4N-Oxone)(0.18g,2.2当量,FW 355.53)。将反应混合物在室温搅拌3天。真空除去溶剂。粗品通过HPLC来纯化，得到24mg(20%)所需产物N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-[2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基氧基)乙基氨基]吡啶-3-甲酰胺。LCMS:RT=1.11分钟;MH+:453.20。
将N-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]-2-[2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基氧基)乙基氨基]吡啶-3-甲酰胺(7,20mg,0.00004mol)、1H-咪唑-5-甲醛(5.1mg,0.053mmol)和哌啶(0.0087mL,0.088mmol)的乙醇(1mL,0.02mol)溶液在80℃回流1h。真空除去溶剂。粗品通过HPLC来纯化，得到所需产物(S,Z)-2-(2-(3-((1H-咪唑-5-基)亚甲基)-2-氧代二氢吲哚-6-基氧基)乙基氨基)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(3.7mg,15%)。LCMS:RT=0.98分钟;MH+:531.20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),8.81(s,2H),8.47(宽单峰,1H),8.22(dd,J=1.76,4.77Hz,1H),8.09(dd,J=1.76,7.78Hz,2H),7.64(s,1H),7.58(d,J=8.28Hz,1H),7.27-7.51(m,2H),7.21(宽单峰,1H),6.66(td,J=3.14,4.58Hz,2H),6.52(d,J=2.26Hz,1H),5.11(s,1H),4.08-4.20(m,2H),3.76(宽单峰,2H),1.44(d,J=7.28Hz,3H)。
实施例20
Figure BDA00001732070201281
实施例20.1：2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-磺酰胺：在0℃和剧烈搅拌下向冷却的氯磺酸溶液(58mL)中分批加入5-溴吡啶-2-胺(4.3g,25mmol)。然后将反应混合物加热至回流且保持16h。冷却至室温后，在剧烈搅拌下将反应混合物倒入冰(100g)中。所得到的黄色析出物通过抽吸过滤来收集，用冷水和石油醚洗涤，得到2-氨基-5-溴吡啶-3-磺酰氯，其为浅黄色固体(5.0g,收率:74%)。ESI-MS(M+H+):272.8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.12(宽峰,2H),8.32(d,1H),8.11(d,1H)。
向2-氨基-5-溴吡啶-3-磺酰氯(4.08g,15.0mmol)的无水CH2Cl2(100mL)溶液中缓慢加入(3,4-二氟苯基)甲胺(2.15g,15.0mmol)和三乙胺(5.8mL,45.0mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。除去溶剂，粗混合物通过硅胶色谱(PE/EA=10/1)来纯化，得到2-氨基-5-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-磺酰胺，其为粉红色固体(2.32g,收率:40%)。ESI-MS(M+H+):377.8。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.21(d,1H),7.93(d,1H),7.07-7.01(m,2H),6.93-6.90(m,1H),5.71(宽峰,2H),5.38(t,1H),4.09(d,2H)。
在聚乙烯反应容器(在0℃冷却)中将亚硝酸钠(464mg,6.7mmol)分小份加到2-氨基-5-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-磺酰胺(2.10g,5.6mmol)在HF/吡啶混合物(40mL)中的溶液中。将所得到的溶液在0℃搅拌1h，然后加热至40-50℃，在该温度搅拌1h。将反应混合物倒入碎冰(20g)中，用碳酸氢钠中和(pH=5)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并的有机相用水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到产物5-溴-N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-磺酰胺，其为棕色固体(1.2g,收率:60%)。ESI-MS(M+H+):382.8。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.42(d,1H),8.30(dd,1H),7.12-7.05(m,2H),6.99-6.96(m,1H),5.42(t,1H),4.26(d,2H)。
将5-溴-N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-磺酰胺(1.20g,3.16mmol)、6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(1.61g,6.32mmol,2.0当量)和NaHCO3(531mg,6.32mmol,2当量)在正戊醇(5mL)中的混合物在130℃搅拌3h，然后除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE/EA=2:1)来纯化，得到产物2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-磺酰胺，其为浅黄色固体(680mg,收率:36%)。ESI-MS(M+H+):618.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.64(t,1H),8.42(d,1H),8.34(d,2H)7.98(dd,1H),7.83(d,1H),7.83(宽峰,2H),7.65(dd,1H),7.48(d,1H),7.25-7.18(m,2H),7.12-7.09(m,2H),7.03-7.00(宽峰,1H),4.80(d,2H),4.12(d,2H)。
实施例20.2：2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-磺酰胺：将2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-溴-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-磺酰胺(50mg,0.16mmol)在Pd/C(25mg)催化剂存在下在压力为1大气压的氢气下在甲醇(100mL)中氢化24h。滤出催化剂，蒸发溶剂，从甲醇中析出，得到2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-磺酰胺，其为浅黄色固体(20mg,收率:47.0%)。ESI-MS(M+H+):538.8.。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.38(宽峰,2H),8.70(s,1H),8.57(d,1H),8.48(t,1H),8.2(dd,1H),8.18(dd,1H),7.85(dd,1H),7.74(d,1H),7.53(d,1H),7.27-7.13(m,2H),7.14(d,1H),7.05-7.03(m,2H),6.73-6.69(m,1H),4.83(d,2H),4.07(d,2H)。
合成2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-7-基氧基)乙胺(用于实施例21的中间体)：
Figure BDA00001732070201301
将2,3-二溴吡啶(1.01g,4.27mmol)、3-(苄基氧基)苯胺(0.93g,4.69mmol,1.1当量)、Pd(OAc)2(二乙酸钯)(0.05g,0.22mmol,0.05当量)、PPh3(三苯基膦)(0.17g,0.43mmol,0.1当量)和tBuONa(叔丁醇钠)(0.49g,5.12mmol,1.2当量)在邻二甲苯(10mL)中的混合物在氮气气氛下搅拌约5分钟。然后将混合物加热至120℃且保持3h。将反应混合物冷却至室温，然后向反应容器中加入Pd(OAc)2(0.05g,0.22mmol,0.05当量)、PCy3·HBF4(0.16g,0.43mmol,0.1当量)、DBU(1.30g,8.53mmol,2.0当量)和DMA(10mL)。再次对反应混合物进行脱气，加热至145℃且保持30h。将反应混合物减压浓缩，然后溶解在乙酸乙酯(60mL×4)中同时在40℃-50℃加热。混合物用水(10mL×3)和盐水(5mL×1)洗涤，浓缩。残留物通过硅胶柱色谱[使用PE/EA(1/1)]来纯化，得到7-(苄基氧基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚，其为黄色固体(440mg,收率:38%)。LCMS(M+1+):275.1。1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ:11.68(s,1H),8.37-8.30(m,2H),8.04(d,1H),7.63-7.34(m,5H),7.15(t,1H),7.13(s,1H),7.05-6.91(m,1H),5.22(s,2H)。
将7-(苄基氧基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(1.12g,4.09mmol,1.0当量)溶解在THF(30mL)和MeOH(30mL)中，然后加入Pd/C(10%,含有70%H2O)(1.73g)。将反应混合物在室温和H2气氛下搅拌20h。然后过滤混合物，浓缩，得到9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-7-醇，其为浅黄色固体(0.47g,收率:63%)。ESI-MS(M+1+):185.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.46(s,1H),9.62(s,1H),8.28-8.24(m,2H),7.90(d,1H),7.10(dd,1H),6.85(d,1H),6.68(dd,1H)。
向9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-7-醇(211mg,1.15mmol,1.0当量)的丁-2-酮(6mL)溶液中加入BrCH2CN(206mg,1.72mmol,1.5当量)、K2CO3(318mg,2.30mmol,2.0当量)和KI(20mg,0.12mmol,0.1当量)。将混合物在60℃搅拌3h。然后加入H2O(5mL)。除去溶剂，将残留物溶解在EtOAc(30mL)中，用H2O(5mL×2)洗涤，浓缩，通过柱色谱[使用石油醚/乙酸乙酯(2/1)]来纯化，得到2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-7-基氧基)乙腈，其为白色固体(110mg,收率:45%)。LCMS(M+H+):2240。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.84(s,1H),8.41-8.34(m,2H),8.10(d,1H),7.18-7.14(m,2H),6.94(dd,1H),5.28(s,2H)。
向2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-7-基氧基)乙腈(70mg,0.32mmol)在MeOH(20mL)和THF(20mL)中的溶液中加入Pd/C(10%,含有70%H2O)(200mg)。然后将混合物在H2气氛下搅拌25h。过滤混合物，浓缩，得到2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-7-基氧基)乙胺，其为白色固体。LCMS(M+1+):228.1。
实施例21-24以与实施例19.2最后一步相同的方法来合成。
吡啶-3-甲酰胺中间体的合成：
Figure BDA00001732070201311
5-氰基-2-氟-N-(4-氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201312
将2-氨基-5-溴吡啶-3-甲酸(25g,0.12mol)、DIPEA(38mL,0.24mol,2.0当量)和HBTU(48g,0.13mol,1.1当量)的DMF(400mL)溶液在室温搅拌15分钟。然后加入(4-氟苯基)甲胺[140-75-0](13mL,0.12mol,1.0当量)，将反应混合物在室温搅拌3h。然后用EtOAc稀释，用水洗涤，干燥。浓缩有机层，得到2-氨基-5-溴-N-(4-氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为灰白色固体(32.5g,收率:87%)。ESI-MS:325.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.16(d,1H),7.98(s,1H),7.73(d,1H),7.33-7.29(m,2H),7.06-7.02(m,2H),4.55(d,2H)。
将2-氨基-5-溴-N-(4-氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(25g,77.4mmol)、CuCN(10.3g,120mmol,1.5当量)、TEA(32.5mL,230mmol,3.0当量)和PdCl2(dppf)(6.3g,7.7mmol,0.1当量)在DMF(400mL)中的混合物在130℃加热15h。然后将混合物冷却至室温，用EtOAc和水萃取。浓缩有机层，通过硅胶柱(PE/EA=2/1)来纯化，得到2-氨基-5-氰基-N-(4-氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为黄色固体(12.3g,收率:53%)。ESI-MS:271.0(M+H)+。
在PTFE小瓶(在冰浴中冷却)中将2-氨基-5-氰基-N-(4-氟苄基)吡啶-3-甲酰胺(12g,44.4mmol)在70%HF的吡啶溶液(140mL,4mmol,90当量)中搅拌，加入NaNO2(7.66g,111.2mmol,2.5当量)，在冰浴中搅拌4h。然后混合物用冰和水淬灭，收集析出物，用水洗涤，干燥，通过硅胶柱(PE/EA=5/1)来纯化，得到5-氰基-2-氟-N-(4-氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为灰白色固体(5.1g,收率:42%)。ESI-MS:273.9(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.90-8.87(m,1H),8.64-8.63(m,1H),7.35-7.31(m,2H),7.09-7.04(m,3H),4.65(d,2H)。
以下中间体由相应的原料来类似地制备：
(S)-5-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺由(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙胺来制备。ESI-MS:306.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.84-8.81(m,1H),8.63(s,1H),7.20-7.08(m,3H),6.94(宽峰,1H),5.28-5.24(m,1H),1.59(d,3H)。
(S)-5-氰基-2-氟-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺由(S)-1-(4-氟苯基)乙胺来制备。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.85-8.82(m,1H),8.63-8.62(m,1H),7.37-7.33(m,2H),7.06-7.04(m,3H),5.32-5.29(m,1H),1.61(d,3H)。ESI-MS(M+H+):288.0。
5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺由(3,4-二氟苯基)甲胺来制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.23(t,1H),8.92(d,1H),8.78(dd,1H),7.45-7.34(m,2H),7.22-7.19(m,1H),4.48(d,2H)。ESI-MS(M+H+):292.0。
合成2-氯-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
向2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸(9g,40mmol,1.0当量)在CH2Cl2(30mL)和DMF(15mL)中的溶液中滴加草酰氯(4.7g,48mmol,1.2当量)。将反应混合物在室温搅拌1h。然后加入TEA(16.9mL,120mmol,3当量)和4-氟苯胺(4.89g,44mmol,1.1当量)。将反应混合物搅拌1h，然后浓缩，通过硅胶柱(PE:EA=10:1)来纯化，得到2-氯-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(10g,收率:79%)。ESI-MS(M+H+):318.7。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.78(d,1H),8.46(d,1H),8.11(宽峰,1H),7.63-7.60(m,2H),7.14-7.11(m,2H)。
合成吡嗪中间体：
Figure BDA00001732070201331
(S)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺：将3-氨基吡嗪-2-甲酸(10.1g,72.54mmol)、Et3N(三乙胺)(41mL,290.1mmol,4.0当量)和HBTU(33.1g,87.05mmol,1.2当量)的DCM(200mL)溶液在室温搅拌15分钟。然后加入(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙胺盐酸盐(14g,72.54mmol,1.0当量)，将反应混合物在室温搅拌3h。加入EtOAc(300mL)，混合物用水(300mL×3)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，浓缩，通过硅胶柱(PE:EA=5:1)来纯化，得到(S)-3-氨基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺，其为红色油状物(26g,收率:93%)。ESI-MS(M+H)+:279.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.14-8.11(m,2H),7.78(s,1H),7.26-7.09(m,3H),5.17-5.13(m,1H),1.57-1.56(d,3H)。
向(S)-3-氨基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺(26g,93.5mmol)的DMF(250mL)溶液中加入NBS(N-溴琥珀酰亚胺就)(25g,140.3mmol,1.5当量)。将混合物在室温搅拌1h。然后混合物用EtOAc(300mL)稀释，用水(300mL×3)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，浓缩，通过硅胶柱(PE:EA=5:1)来纯化，得到(S)-3-氨基-6-溴-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺，其为黄色固体(28g,收率:84%)。ESI-MS(M+H)+:357.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.87(d,1H),8.32(s,1H),7.48(宽峰,2H),7.35-7.30(m,2H),7.23(宽峰,1H),5.10-5.06(m,1H),1.48(d,3H)。
将(S)-3-氨基-6-溴-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺(10g,28.1mmol)、CuCN(3g,33.7mmol,1.2当量)、TEA(11.7mL,84.3mmol,3.0当量)和PdCl2(dppf)·DCM(2.3g,2.8mmol,0.1当量)在无水DMA(30mL)中的混合物在N2下加热至130℃且保持2h。然后将混合物冷却至室温，用EtOAc(250mL)稀释，用硅藻土过滤。滤液用NH3·H2O(250mL×3)洗涤，干燥。浓缩有机层，通过硅胶柱(PE:EA=4:1)来纯化，得到(S)-3-氨基-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺，其为黄色固体(3.83g,收率:45%)。
ESI-MS(M+H)+:304.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.18(d,1H),8.63(s,1H),8.48(s,1H),8.27(s,1H),7.50-7.21(m,3H),5.11-5.07(m,1H),1.48(d,3H)。
在PTFE小瓶中将(S)-3-氨基-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺(10g,33mmol)溶解在70%HF的吡啶溶液(40mL,45当量)中，在冰浴中冷却，然后缓慢加入NaNO2(9.1g,132mmol,4.0当量)。将反应混合物在冰浴中搅拌30min。然后混合物用冰和水淬灭，收集析出物，用水(50mL)洗涤，残留物通过硅胶柱(PE:EA=4:1)来纯化，得到(S)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺，其为白色固体(5.86g,收率:58%)。
ESI-MS(M+H)+:307.1。HPLC:214nm:98.69%;254nm:91.23%。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.46-9.44(m,1H),9.17(s,1H),7.52-7.27(m,3H),5.18-5.14(m,1H),1.50(d,3H)。
以下中间体由相应的原料来类似地制备：
(S)-6-氰基-3-氟-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺由(S)-1-(4-氟苯基)乙胺来制备。ESI-MS:289.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.74(s,1H),7.68-7.66(m,1H),7.39-7.36(m,2H),7.08-7.03(m,2H),5.30-5.27(m,1H),1.64(d,3H)。
6-氰基-3-氟-N-(4-氟苄基)吡嗪-2-甲酰胺由(4-氟苯基)甲胺来制备。ESI-MS:275.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.74(s,1H),7.85(s,1H),7.35-7.31(m,2H),7.06-7.01(m,2H),4.64(d,2H)。
6-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺由(3,4-二氟苯基)甲胺来制备。ESI-MS:293.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.60(s,1H),9.18(s,1H),7.44-7.37(m,2H),7.22-7.18(宽峰,1),4.85(d,2H)。
6-氰基-3-氟-N-(4-氟苯基)吡嗪-2-甲酰胺由4-氟苯胺来制备。ESI-MS:260.9(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:9.25(s,1H),8.82(s,1H),7.74-7.70(m,2H),7.14-7.10(m,2H)。
5-氰基-2-氟-N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)吡啶-3-甲酰胺由(5-氟吡啶-3-基)甲胺来制备。ESI-MS(M+1)+:275.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.88(dd,1H),8.66(s,1H),8.47(s,2H),7.45(d,1H),7.26(s,1H),4.73(d,2H)。
合成3-氟-N-(4-氟苯基)-6-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺：
合成3-氨基-6-溴-N-(4-氟苯基)吡嗪-2-甲酰胺：将3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸(2.53g,11.6mmol)和对氟苯胺(1270μl,13.3mmol)在二甲基甲酰胺(57.5mL)和N,N-二异丙基乙胺(6060μl,34.8mmol)中搅拌。加入N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(4.85g,12.8mmol)，搅拌过夜。反应混合物如下进行后处理：用乙酸乙酯(250mL)稀释，用碳酸氢钠水溶液(150mL)和150mL盐水洗涤两次。有机相用硫酸镁干燥，真空蒸发。将粗固体在二氯甲烷:己烷(1:2,40mL)中吸收，通过过滤来收集，用二氯甲烷:己烷(1:2,20mL)洗涤。收集到2.49g黄色粉末(69%)。ES(+)MS m/e=310.8(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.44(宽单峰,1H),8.29(s,1H),7.59-7.72(m,2H),7.00-7.17(m,2H)。
合成6-溴-3-氟-N-(4-氟苯基)吡嗪-2-甲酰胺：将3-氨基-6-溴-N-(4-氟苯基)吡嗪-2-甲酰胺(0.35g,1.1mmol)溶解在30M氢氟酸的吡啶溶液(2.2mL,66mmol)中。在冰浴中冷却，加入亚硝酸钠(85.4mg,1.24mmol)。反应混合物冒泡，析出固体。反应混合物用吡啶(2ml)稀释以有助于搅拌。反应混合物通过先后加入水(15mL)和乙酸乙酯(75mL)来淬灭。有机相用水(75mL)洗涤两次，用盐水(75mL)洗涤一次。有机相用硫酸镁干燥，过滤，真空蒸发，得到0.234g橙色固体(66%)。ES(+)MS m/e=313.8(M+1)。
合成3-氟-N-(4-氟苯基)-6-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺：将6-溴-3-氟-N-(4-氟苯基)吡嗪-2-甲酰胺(234mg,0.745mmol)和碘化亚铜(I)(284mg,1.49mmol)先后与N,N-二甲基甲酰胺(3.9mL,51mmol)、六甲基磷酰胺(648μl,3.72mmol)和氟磺酰基二氟乙酸甲酯(474μl,3.72mmol)混合。将小瓶在80℃加热3小时，反应混合物通过LCMS来监测。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(57mL)稀释，然后用硅藻土过滤。有机相用碳酸氢钠水溶液(75mL)洗涤两次，然后用水(75mL)和盐水(75mL)洗涤一次。有机相用硫酸镁干燥，过滤，真空蒸发。所得到的油状物通过快速色谱(5-25%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到55.9mg浅黄色粉末，LCMS显示所述粉末主要由产物组成。ES(+)MSm/e=303.9(M+1)。
制备(S)-5-氰基-2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺和(S)-5-氰基-2-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
将4-溴-2-氟苯甲腈(2g,10.05mmol,1.0当量)溶解在BH3(浓度为2M的THF溶液,8mL)中，然后将混合物在85℃回流2h。TLC显示原料消失。加入MeOH以淬灭反应，然后浓缩反应混合物，得到(4-溴-2-氟苯基)甲胺，其为黄色固体(粗品:1.83g,收率:90%)。ESI-MS(M+3+):205.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.42(宽峰,2H),7.67(d,1H),7.51(d,2H),4.06(s,2H)。
将(4-溴-2-氟苯基)甲胺(1.77g,8.71mmol,1.0当量)溶解在THF(15mL)中，然后加入Et3N(6.49g,36.50mmol,4.0当量)，搅拌10min，然后加入(S)-5-氰基-2-氟-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(2.5g,8.71mmol,1.0当量)。将全部混合物在85℃回流2h，然后蒸发THF，混合物通过硅胶柱(PE/EA=5:1)来纯化，得到(S)-2-(4-溴-2-氟苄基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(1.64g,收率:40%)。ESI-MS(M+3+):472.9。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:9.18(t,1H),8.44(s,1H),7.90(s,1H),7.35-7.32(m,2H),7.26-7.21(m,3H),7.06(t,2H),6.64(d,1H),5.22-5.15(m,1H),4.79-4.67(m,2H),1.58(d,3H)。
向(S)-2-(4-溴-2-氟苄基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(1.64g,3.49mmol,1.0当量)的二氧杂环己烷(13mL)溶液中逐步加入KOAc(乙酸钾)(0.684g,6.98mmol,2当量)、DMSO(1mL)和4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(2.66g,10.47mmol,3当量)，然后加入PdCl2(dppf)(0.142g,0.175mmol,0.05当量)，将反应混合物在90℃和N2气氛下搅拌4h，然后过滤混合物，浓缩滤液，通过硅胶柱(PE/EA=5:1)来纯化，得到(S)-5-氰基-2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(1.40g,收率:77%)。ESI-MS(M+H+):5190。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.19(t,1H),8.43(d,1H),7.91(d,1H),7.51-7.45(m,2H),7.35-7.30(m,3H),7.04(t,2H),6.59(d,1H),5.22-5.17(m,1H),4.86-4.74(m 2H),1.57(d,3H),1.32(s,12H)。
(S)-5-氰基-2-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺使用4-溴-3-氟苯甲腈作为原料来类似地制备。ESI-MS(M+H+):5190。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.26(t,1H),8.42(d,1H),7.94(d,1H),7.70-7.68(m,1H),7.36-7.32(m,2H),7.09-7.03(m,3H),6.97(d,1H),6.46-6.42(m,1H),5.19-5.14(m,1H),4.76-4.70(m,2H),1.58(d,3H),1.35(s,12H)。
实施例25：(S)-3-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201371
4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基甲酸叔丁酯：将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(11.5g,54mmol,1.0当量)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(21.6g,65mmol,1.25当量)溶解在二氧杂环己烷(240mL)中。加入碳酸氢钠(11.3g,135mmol,2.5当量)的水(120mL)溶液，混合物用氮气气流脱气10分钟。加入Pd(三环己基膦)2(1.8g,2.7mmol,0.05当量)，混合物用氮气气流再脱气10分钟。将溶液回流48小时直到原料溴化物耗尽。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(600mL)和饱和盐水(250mL)稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯(200mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。残留物用MTBE(甲基叔丁基醚)(100mL)研磨，收集到4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(15.9g,87%收率)，其为黄色固体。
5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺：将4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(5.0g,14.8mmol,1.0当量)溶解在二氧杂环己烷(100mL)中。历时2分钟加入4M HCl的二氧杂环己烷溶液(18.4mL,73.7mmol,5.0当量)。反应混合物变为稠厚橙色混悬液，将其搅拌4小时，然后LC/MS显示反应完成。将反应混合物减压浓缩，残留物用MTBE(250mL)研磨，过滤。将橙色固体在真空烘箱中在40℃干燥4小时，得到5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(4.6g,95%收率)，其为HCl盐。
将5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(102mg,0.176mmol)和6-氰基-3-氟-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺(45.0mg,0.147mmol)混合，溶解在二甲基亚砜(2.00mL)中。加入三乙胺(81.8μl,0.587mmol)，在室温搅拌3小时。用乙酸乙酯(75mL)稀释，先后用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。物质通过快速色谱(50-90%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到43.0mg黄色粉末。ES(+)MS m/e=525.9(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.55(宽单峰,1H),9.62(t,J=5.67Hz,1H),8.64(d,J=1.89Hz,1H),8.42(s,1H),7.97(d,J=1.89Hz,1H),7.94(d,J=7.55Hz,1H),7.41-7.53(m,2H),7.31-7.40(m,2H),6.94-7.16(m,3H),5.04(五重峰,J=7.18Hz,1H),4.55-4.82(m,2H),4.23(宽单峰,2H),1.52(d,J=7.18Hz,3H)。
实施例26-35以与实施例25相同的方法来制备。
实施例36：(S)-5-(4-((5-氰基-3-(1-(3,4-二氟苯基)乙基氨甲酰基)吡嗪-2-基氨基)甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基氨基甲酸乙酯：将(S)-3-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺(100mg,0.190mmol)溶解在吡啶(1.00mL)中，然后用氯甲酸乙酯(21.8μl,0.228mmol)处理，搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯(75mL)稀释，先后用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，通过快速色谱(0-100%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到62.8mg粉末(55%)。ES(+)MS m/e=597.9(M+1)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.20(宽单峰,1H),10.12(宽单峰,1H),9.76(t,J=5.85Hz,1H),9.31(d,J=8.31Hz,1H),8.76(d,J=2.27Hz,1H),8.73(s,1H),8.46(d,J=1.89Hz,1H),7.64(d,J=7.93Hz,2H),7.47-7.56(m,1H),7.45(d,J=8.31Hz,2H),7.37(td,J=8.50,10.58Hz,1H),7.21-7.30(m,1H),5.12(五重峰,J=7.27Hz,1H),4.65-4.82(m,2H),4.16(q,J=7.18Hz,2H),1.52(d,J=7.18Hz,3H),1.24(t,J=6.99Hz,3H)。
实施例37以与实施例36类似的方法使用苯甲酰氯来制备。
实施例38：2-[4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基]-N-(4-氟苯基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。将2-氯-N-(4-氟苯基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(70.0mg,0.220mmol)、5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺盐酸盐(57.7mg,0.209mmol)、三乙胺(0.088mL,0.63mmol)和二甲基亚砜(1.0mL,14mmol)混合，在45℃加热48小时。加入EtOAc(75mL)，然后用NaHCO3、H2O和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，真空除去溶剂。将粗化合物溶解(DCM)，通过梯度洗脱(24G柱,0→10%B(MeOH)/A(DCM)来纯化。收集到41.1mg白色固体粉末(38%收率)。ESI-MS(M+H+):522.2。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),10.51(s,1H),8.93(t,J=5.67Hz,1H),8.65(d,J=2.27Hz,1H),8.56(d,J=1.51Hz,1H),8.39(dd,J=2.27,4.91Hz,2H),7.67-7.76(m,2H),7.42-7.66(m,4H),7.17-7.28(m,2H),5.61(s,2H),4.77(d,J=5.67Hz,2H)。
实施例39：3-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-N-(4-氟苯基)-6-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺。将粗3-氟-N-(4-氟苯基)-6-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺(55.9mg,0.184mmol)和5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺二TFA盐(85.4mg,0.183mmol)溶解在二甲基亚砜(1.00mL)中。加入三乙胺(77.1μl,0.553mmol)，搅拌30min。反应混合物用乙酸乙酯(75mL)稀释，用碳酸氢钠水溶液(75mL)、水(75mL)和盐水(75mL)洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-10%甲醇:二氯甲烷)来纯化。LCMS显示出两种化合物的混合物，因此物质用甲醇研磨，然后真空干燥。收集到65.9mg黄色粉末。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.00(s,1H),10.49(s,1H),9.44(t,J=6.04Hz,1H),8.75(s,1H),8.65(d,J=1.89Hz,1H),8.38(d,J=1.89Hz,1H),7.75-7.86(m,2H),7.60-7.69(m,J=8.31Hz,2H),7.44-7.53(m,2H),7.18-7.28(m,2H),5.61(宽单峰,2H),4.80(d,J=5.67Hz,2H)。ES(+)MS m/e=522.9(M+1)。
实施例40：5-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-3-(3,4-二氟苄基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮。将5-氯-3-(3,4-二氟苄基)-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-酮(200.0mg,0.6500mmol)、5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺二盐酸盐(155mg,0.496mmol)、二甲基亚砜(2.5mL,35mmol)和三乙胺(345.4μl,2.478mmol)混合。将反应混合物在110℃加热过夜。除去溶剂，残留物通过HPLC来纯化，得到所需产物。收集到106.2mg纯化合物(42%收率)。ESI-MS(M+H+):510.9。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.42(宽单峰,1H),8.71(s,1H),8.65(d,J=1.89Hz,1H),8.40(d,J=1.89Hz,1H),8.14(d,J=6.04Hz,1H),7.59(d,J=7.93Hz,2H),7.26-7.53(m,4H),7.20(宽单峰,1H),6.70(d,J=5.67Hz,1H),5.09(s,2H),4.72(d,J=5.29Hz,2H),2.00(s,2H)。
合成N-(4-氟苯基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
向(4-溴苯基)甲胺(6.4g,35mmol,1.1当量)的THF(25mL)溶液中加入Et3N(12.9g,140mmol,4.0当量)，搅拌10min后，加入2-氯-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(10g,32mmol,1.0当量)。将混合物加热至80℃且保持2h，然后浓缩，得到粗产物，其通过硅胶柱(PE:EA=10:1)来纯化，得到2-(4-溴苄基氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(9.5g,收率:64%)。ESI-MS(M+2)+:469.7。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.74(宽峰,1H),8.50(s,1H),7.89(s,1H),7.67(宽峰,1H),7.51-7.43(m,5H),7.26-7.21(m,1H),7.08(t,2H),4.71(d,2H)。
向2-(4-溴苄基氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(4.5g,9.61mmol,1.0当量)在二氧杂环己烷(35mL)和DMSO(2.5mL)中的溶液中加入KOAc(乙酸钾)(1.87g,19mmol,2当量)和4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(7.32g,28.83mmol,3当量)，然后加入PdCl2(dppf)·DCM(784mg,0.96mmol,0.1当量)，将反应混合物在90℃和N2气氛下搅拌2h，然后过滤混合物，浓缩滤液，通过硅胶柱(PE:EA=20:1)来纯化，得到N-(4-氟苯基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(3.66g,收率:74%)。ESI-MS(M+H+):5157。HPLC:4.45%(硼酸)+95.54%(硼酸酯)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.75(宽峰,1H),8.49(s,1H),7.88(s,1H),7.76(d,2H),7.69(宽峰,1H),7.50-7.48(m,2H),7.35(d,2H),7.08(t,2H),4.77(d,2H),1.32(s,12H)。
实施例41：2-[4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00001732070201411
将5-氰基-2-氟-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(4.46g,15.5mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基胺盐酸盐(3.99g,14.8mmol)、二甲基亚砜(40mL,600mmol)和N,N-二异丙基乙胺(7.73mL,44.4mmol)混合，在室温搅拌3小时。LCMS显示反应完成。加入100mL乙酸乙酯，先后用碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。粗产物不经纯化即使用。m/z=501.28[M+1]。
向小瓶中加入5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(60.3mg,0.000120mol)、7-苯磺酰基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(72.34mg,0.0001808mol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](11.81mg,1.446E-5mol)、N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL,0.008mol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.3mL,0.0004mol)。反应混合物在65℃用微波以300瓦处理20分钟。除去溶剂，残留物通过柱色谱来纯化，得到所需产物。ESI-MS(M+H+):646.9。
将所分离的中间体(S)-2-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺溶解在甲醇(14.645mL,0.36153mol)中，然后加入碳酸钾(83.28mg,0.0006026mol)，加热至回流(80℃)且保持1小时。除去溶剂，残留物通过柱色谱来纯化，得到所需产物。收集到26.9mg纯化合物(44%收率)。ESI-MS(M+H+):507.0。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.78(宽单峰,1H),9.36(t,J=5.48Hz,1H),8.99(d,J=7.18Hz,1H),8.42-8.67(m,2H),8.10(s,1H),7.31-7.59(m,6H),7.00-7.30(m,3H),5.77-6.18(m,1H),5.10(t,J=7.18Hz,1H),4.72(d,J=5.29Hz,2H),1.46(d,J=7.18Hz,3H)。
实施例42：3-((R)-1-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苯基)乙基氨基)-6-氰基-N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺
Figure BDA00001732070201412
将(S)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺(500mg,1.63mmol,1.0当量)和(R)-1-(4-溴苯基)乙胺(358mg,1.80mmol,1.1当量)溶解在THF(10mL)中，然后加入Et3N(330mg,3.26mmol,2.0当量)，将反应混合物回流2h。TLC显示AAG-4消失，然后浓缩反应混合物，通过硅胶(PE:EA=4:1)来纯化，得到3-((R)-1-(4-溴苯基)乙基氨基)-6-氰基-N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺，其为黄色固体(610mg,收率:77%)。ESI-MS(M+H+):486.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.68(d,1H),9.34(d,1H),8.63(s,1H),7.48-7.44(m,3H),7.34-7.21(m,4H),5.16-5.08(m,2H),1.46-1.42(m,6H)。
向3-((R)-1-(4-溴苯基)乙基氨基)-6-氰基-N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺(600mg,1.24mmol,1.0当量)在二氧杂环己烷(10mL)和DMSO(1mL)中的溶液中加入4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(472mg,1.86mmol,1.5当量)和KOAc(244mg,2.48mmol,2当量)，然后加入PdCl2(dppf)·DCM(101mg,0.124mmol,0.1当量)，将反应混合物在90℃和N2气氛下搅拌2h，然后过滤混合物，浓缩滤液，通过硅胶柱(PE/EA=6:1)来纯化，得到所需硼酸酯产物，其为黄色固体(550mg,收率:82%)。ESI-MS(M+H+):534.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.67(d,1H),8.38(s,1H),7.99(d,1H),7.77(d,2H),7.34(d,2H),7.19-7.10(m,3H),5.31-5.26(m,1H),5.15-5.10(m,1H),1.61-1.56(m,6H),1.33(s,12H)。
将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(60mg,0.28mmol)、6-氰基-N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-((R)-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)乙基氨基)吡嗪-2-甲酰胺(176mg,0.312mmol)、Pd(PPh3)4(32mg,0.028mmol,0.1当量)和K3PO4(120mg,0.56mmol,2.0当量)溶解在H2O(10mL)和二氧杂环己烷(15mL)中。将混合物在100℃搅拌16h。LCMS显示原料消失。将混合物冷却至室温，浓缩。残留物通过硅胶柱(CH2Cl2/CH3OH=20/1)来纯化，得到3-((R)-1-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苯基)乙基氨基)-6-氰基-N-((S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺，其为黄色固体(80mg,收率:53%)。ESI-MS(M+H+):540.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.03(s,1H),9.81(d,1H),9.41(d,1H),8.73(s,1H),8.65(d,1H),8.37(s,1H),7.64(d,2H),7.57-7.49(m,3H),7.42-7.37(m,1H),7.27(宽峰,1H),5.65(s,2H),5.33-5.25(m,1H),5.18-5.13(m,1H),1.57-1.51(m,6H)。
合成2-(2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5-氟-1H-苯并[d]咪唑
将2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸(450mg,2mmol)、4-氟苯-1,2-二胺(408mg,4mmol,2当量)、DCC(824mg,4mmol,2当量)和DMAP(24mg,0.2mmol,0.1当量)溶解在DCM(20mL)中。将反应混合物在室温搅拌4h(LCMS显示原料消失)。然后浓缩反应混合物，通过硅胶柱(PE:EA=4:1)来纯化，得到N-(2-氨基-5-氟苯基)-2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺，其为黄色固体(350mg,收率:53%)。ESI-MS(M+H)+:334.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.84(宽峰,2H),8.80(s,1H),8.52(d,1H),7.70(dd,1H),6.95-6.85(m,2H),6.45(s,1H)。
将N-(2-氨基-5-氟苯基)-2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(350mg,1.05mmol)溶解在HOAc(乙酸)(5mL)中，然后将反应混合物在90℃搅拌2h(LCMS显示原料消失)。然后浓缩反应混合物，通过硅胶柱(PE:EA=4:1)来纯化，得到2-(2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5-氟-1H-苯并[d]咪唑，其为黄色固体(200mg,收率:60%)。ESI-MS(M+H+):316.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.10(d,1H),8.72(d,1H),7.71(s,1H),7.44(d,1H),7.18(dt,1H)。
合成5-氟-2-(2-氟-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)苯并[d]噁唑
在室温向5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(9g,55.6mmol)的AcOH(乙酸)(75mL)溶液中加入Br2(5.8mL,113.2mmol,2当量)。将混合物在室温搅拌2h，然后在冰浴中加入NaOH(10N)以将pH调节至8。过滤混合物，将残留物溶解在Et2O(乙醚)(60mL)中，溶液用饱和Na2CO3(10mL)、饱和Na2SO3(10mL)和盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，将残留物分散在己烷(60mL)中，过滤，得到3-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(5.5g,收率:42%)，其为白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.27(s,1H),7.86(s,1H)。
将4-氟-2-硝基苯酚(785mg,5mmol)、HC(OMe)3(2.12g,20mmol,4当量)、AcOH(3.0g,50mmol,10当量)和In(2.29g,20mmol,4当量)在苯(20mL)中的混合物加热至90℃且保持12h。然后过滤混合物，用饱和NH4Cl(10mL)洗涤，用DCM(10mL×2)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，浓缩，得到残留物，其通过柱色谱(PE:EA=10:1)来纯化，得到5-氟苯并[d]噁唑(400mg,收率:58%)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),7.73(dd,1H),7.32(dd,1H),7.14(dt,1H)。
在氮气气氛下向3-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(300mg,2.2mmol)和5-氟苯并[d]噁唑(528mg,2.2mmol,1当量)的DMA(3mL)溶液中加入Pd(PPh3)4(254mg,0.22mmol,0.1当量)和KOAc(431mg,4.4mmol,2当量)。将混合物加热至170℃且保持4h，然后浓缩，残留物通过柱色谱(PE:EA=10:1)来纯化，得到3-(5-氟苯并[d]噁唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(550mg,收率:83%)，其为白色固体。LCMS(M+H)+:298.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),8.45(s,1H),7.70(dd,1H),7.35(dd,1H),7.16(dt,1H),2.45(宽峰,2H)。
在冰浴中将3-(5-氟苯并[d]噁唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(90mg,0.3mmol)溶解在HF/吡啶(385mg,13.5mmol,45当量)中。搅拌10min后，加入NaNO2(52mg,0.75mmol,2.5当量)，继续搅拌3h。加入冰以淬灭反应，然后混合物用EtOAc(10mL×2)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，浓缩，通过柱色谱(PE:EA=10:1)来纯化，得到5-氟-2-(2-氟-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)苯并[d]噁唑(40mg,收率:45%)，其为白色固体。LCMS(M+H)+:301。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.90(dd,1H),8.68(s,1H),7.81(dd,1H),7.40(dd,1H),7.24-7.18(m,1H)。
合成6-氟-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈
Figure BDA00001732070201441
在-60℃向噁唑(331mg,4.8mmol)的THF(2mL)溶液中加入n-BuLi(正丁基锂)(浓度为2.5M的己烷溶液,2.2mL,5.6mmol)。搅拌10min后，分批加入固体ZnCl2(1.6g,12mmol)，然后将混合物温热至室温。达到环境温度后，加入Pd(PPh3)4(462mg,0.4mmol)和6-氨基-5-溴吡啶-3-甲腈(800mg,4mmol)，将混合物加热至60℃且保持4h。加入NH4Cl(4mL)以淬灭反应，混合物用EA(10mL×3)萃取。浓缩合并的有机层，通过柱色谱(PE:EA=6:1)来纯化，得到6-氨基-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈，其为白色固体(400mg,收率:50%)。LCMS:(M+H)+187.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.41(d,1H),8.31(d,1H),7.76(s,1H),7.29(s,1H)。
在冰浴中向6-氨基-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈(450mg,2.4mmol)在HF/吡啶(3.1g,108mmol)中的混合物中加入NaNO2(500mg,7.2mmol)。将所得到的混合物搅拌3h。加入冰以淬灭反应，混合物用EA(10mL×3)萃取。浓缩合并的有机层，通过硅胶柱(PE:EA=10:1)来纯化，得到6-氟-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈，其为黄色固体(50mg,收率:10%)。ESI-MS(M+H+):190.1。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.77(d,1H),8.61(d,1H),7.88(s,1H),7.40(s,1H)。
实施例43：合成6-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈
Figure BDA00001732070201451
在氮气下向4-((叔丁氧基羰基氨基)甲基)苯基硼酸(750mg,3mmol)和5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.2g,3mmol)在二氧杂环己烷(10mL)和H2O(1mL)中的溶液中加入PdCl2(dppf)(240mg,0.3mmol)和K2CO3(828mg,6mmol)。将混合物加热至100℃且保持2h，然后浓缩，得到残留物，其通过柱色谱(PE:EA=2:1)来纯化，得到4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(979mg,Y：68%)，其为棕色固体。ESI-MS(M+H+):519.0。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.32(s,1H),8.25(s,1H),8.23(s,1H),7.70(t,1H),7.62-7.56(m,4H),7.45-7.37(m,5H),4.98(宽峰,1H),4.39(d,2H),1.48(s,9H)。向4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(380mg,0.79mmol)的DCM(1mL)溶液中加入TFA(384mg,3.94mmol,5当量)。将所得到的混合物在室温搅拌12h，然后浓缩，得到5-(4-(氨基甲基)苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(280mg,收率:93%)，其为棕色固体。ESI-MS(M+H+):380.0。
向5-(4-(氨基甲基)苯基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(200mg,0.52mmol,2当量)和6-氟-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈(50mg,0.26mmol)的DMSO(2mL)溶液中加入Et3N(132mg,1.3mmol,5当量)。将混合物加热至110℃且保持2h。加入水(10mL)，混合物用EA(10mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，浓缩，得到残留物，其通过柱色谱(PE:EA=1:1)来纯化，得到6-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈(130mg,收率:91%)，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):548.9。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.56(t,1H),8.48(d,1H),8.42(s,1H),8.31(d,1H),8.26-8.22(m,2H),7.77(d,1H),7.67-7.41(m,8H),7.28(d,1H),5.36(宽峰,2H),4.95(d,2H)。
向6-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈(130mg,0.24mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入K2CO3(131mg,0.96mmol,4当量)。将混合物加热至75℃且保持3h，然，过滤。浓缩滤液，通过柱色谱(DCM:MeOH=20:1)来纯化，得到6-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-5-(噁唑-2-基)吡啶-3-甲腈(15mg,收率:15%)，其为白色固体。LCMS(M+H+):409.0。1H NMR(400MHz,CD3OD/CDCl3)δ:9.67(t,1H),8.49(d,1H),8.38(d,1H),8.16(s,1H),7.93(s,1H),7.53-7.44(m,4H),7.34(s,1H),7.12(s,1H),4.96(d,2H)。
实施例44：(R)-3-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸甲酯
向化合物(R)-3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸(3g,12mmol)的MeOH(100mL)溶液中缓慢加入SOCl2(1mL)。然后将反应溶液加热回流16h。真空除去溶剂，得到(R)-3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸甲酯(3.4g,收率:100%)，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):258.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.73(宽峰,2H),7.63(d,2H),7.50(d,2H),4.60(宽峰,1H),3.55(s,3H)3.18(d,1H),3.00(d,1H)。
将(R)-3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸甲酯(3.4g,13mmol)、Boc2O(一缩二碳酸二叔丁酯)(3.5g,16mmol,1.2当量)和NaHCO3(6.0g,18.6mmol,2.0当量)在THF(100mL)中的混合物在室温搅拌1h。然后过滤反应混合物，浓缩，得到(R)-3-(4-溴苯基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸甲酯(4.0g,收率:94%)，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):358.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.46(d,2H),7.18(d,2H),5.59(d,1H),5.05(宽峰,1H),3.62(s,3H),2.83-2.81(m,2H),1.42(s,9H)。
装有(R)-3-(4-溴苯基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸甲酯(7g,19.6mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(10g,40mmol,2.0当量)、KOAc(4g,40mmol,2.0当量)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](0.8g,1mmol,0.05当量)的烧瓶用氮气冲洗。然后加入二氧杂环己烷(200mL)，将反应混合物在90℃搅拌1h。将溶液冷却至室温。残留物通过硅胶柱(EA:PE=1∶10)来纯化，得到产物(R)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酸甲酯(7g,收率:89%)，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):406.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.77(d,2H),7.30(d,2H),5.50(宽峰,1H),5.11(宽峰,1H),3.60(s,3H),2.84-2.82(m,2H),1.33(s,12H),1.24(s,9H)。
(R)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酸甲酯(1.8g,4.4mmol)、5-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.8g,4.4mmol,1.0当量)、K2CO3(1.2g,8.8mmol,2.0当量)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](180mg,0.22mmol,0.05当量)的混合物用氮气冲洗，将反应混合物在100℃搅拌2h。将溶液冷却至室温。除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE:EA=1:4)来纯化，得到化合物(R)-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸甲酯(870mg,收率:35.6%)。
ESI-MS(M+H+):552.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.25(s,1H),8.18-8.16(m,2H),7.77-7.75(m,2H),7.67-7.65(m,4H),7.58-7.56(m,1H),7.48(d,2H),7.45(d,2H),5.00(宽峰,1H),3.58(s,3H),2.79-2.75(m,2H),1.37(s,9H)。
将化合物(R)-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸甲酯(1.5g,2.7mmol)和浓HCl(0.25mL,2.7mmol,5当量)的MeOH(20mL)溶液在室温搅拌1h。反应完成后，除去溶剂，得到产物(R)-3-氨基-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)丙酸甲酯(1.1g,收率:89.4%)，其为黄色固体。ESI-MS(M+H+):452.1。
将(R)-3-氨基-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)丙酸甲酯(1.5g,3.3mmol)、(S)-5-氰基-2-氟-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(0.95g,3.3mmol,1当量)和TEA(671mg,6.6mmol,2当量)的DMF(20mL)溶液在100℃搅拌1h(LCMS显示原料消失，主要产物为所需产物和相应的酸)。然后加入EA(60mL)。有机相用H2O(20mL×3)洗涤，干燥。浓缩有机相，通过硅胶柱(EA:PE=2:1)来纯化，得到(R)-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸甲酯(520mg,收率:21.8%)，其为黄色固体(ESI-MS(M+H+):719.2)；和(R)-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸(1g,收率:42%)，其为黄色固体(ESI-MS(M+H+):705.2)。
将(R)-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸甲酯(520mg,0.72mmol)和K2CO3(200mg,1.45mmol,2.0当量)在MeOH(15mL)中的混合物在50℃搅拌30分钟。然后浓缩反应混合物，通过硅胶柱(DCM/MeOH=20:1)来纯化，得到所需产物(R)-3-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸甲酯，其为白色固体(300mg,收率:71.6%)。ESI-MS(M+H+):579.0。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.82(s,1H),9.66(d,1H),9.01(d,1H),8.56(dd,2H),8.11(s,1H),7.45-7.44(m,6H),7.25-7.17(m,3H),5.99(宽峰,2H),5.78-5.72(m,1H),5.15-5.11(m,1H),3.48(s,3H),3.06-2.96(m,2H),1.46(d,3H)。
实施例45：(R)-3-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸。将(R)-3-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸甲酯(200mg,0.35mmol)和K2CO3(2M,190mg,1.40mmol,4.0当量)在MeOH(15mL)中的混合物在50℃搅拌30分钟。然后浓缩反应混合物，通过硅胶柱(DCM/MeOH=10:1)来纯化，得到所需产物(R)-3-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸，其为白色固体(300mg,收率:35.9%)。ESI-MS(M+H+):565.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.78(s,1H),12.32(宽峰,1H),9.67(d,1H),9.00(d,1H),8.56(dd,2H),8.36(s,1H),7.49-7.44(m,9H),7.17(t,2H),5.77-5.75(m,1H),5.14-5.12(m,1H),2.92-2.90(m,2H),1.47(d,3H)。
实施例46：2-((R)-3-氨基-1-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-氧代丙基氨基)-5-氰基-N-((S)-1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺。向(R)-3-(4-(4-氨基-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-(5-氰基-3-((S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)丙酸(500mg,0.71mmol)的DCM(50mL)溶液中加入HBTU(538mg,1.42mmol,2.0当量)、NH4Cl(120mg,2.13mmol,3.0当量)和TEA(360mg,3.6mmol,5.0当量)。将反应混合物在室温搅拌1h。除去溶剂，残留物通过硅胶柱(PE/EA=1:5)来纯化，得到相应的酰胺，其为白色固体(300mg,收率:60%)。ESI-MS(M+H+):704.2。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.69-9.67(m,1H),9.04-9.02(m,1H),8.54-8.53(m,2H),8.24(s,1H),8.15-8.14(m,1H),7.90-7.88(m,2H),7.76-7.74(m,1H),7.67-7.62(m,4H),7.49-7.40(m,6H),7.34-7.31(m,2H),7.19-7.15(m,2H),5.76-5.71(m,1H),5.16-5.11(m,1H),3.06-3.00(m,2H),1.46(d,3H)。在标准条件下除去苯基磺酰基，得到2-((R)-3-氨基-1-(4-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-3-氧代丙基氨基)-5-氰基-N-((S)-1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(收率:29.2%)。ESI-MS(M+H+):564.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.87(d,1H),8.43(d,1H),8.32-8.23(m,2H),7.58-7.40(m,4H),7.44-7.41(m,3H),7.11-7.07(m,2H),5.83(t,1H),5.23-5.19(m,1H),2.97-2.91(m,1H),2.84-2.78(m,1H),1.56(d,3H)。
实施例47和48以与实施例46相同的方法来制备。
合成4-(4-(氨基甲基)苯氧基)吡啶-2-胺：
Figure BDA00001732070201491
将2-氨基-4-溴吡啶(200.0mg,1.156mmol)、4-羟基苯甲腈(275mg,2.31mmol)、碳酸钾(319mg,2.31mmol)和氧化亚铜(I)(33.0mg,0.231mmol)在吡啶(1.90mL,23.5mmol)中的混合物在120℃加热18小时。除去溶剂，残留物通过柱色谱来纯化，得到4-(2-氨基吡啶-4-基氧基)苯甲腈(59.0mg,22%收率)。ESI-MS(M+H+):212.1。
向4-(2-氨基吡啶-4-基氧基)苯甲腈(59.0mg,0.279mmol)的四氢呋喃(2.9mL,36mmol)溶液中加入1.00M硼烷的四氢呋喃溶液(0.8380mL,0.8380mmol)。将反应混合物加热至回流过夜。再加入1.00M硼烷的四氢呋喃溶液(0.8380mL,0.8380mmol)，然后再回流4小时。向该反应混合物中加入1.25M氯化氢的甲醇溶液(2.682mL,3.352mmol)，再回流2小时。真空除去溶剂。粗4-(4-(氨基甲基)苯氧基)吡啶-2-胺不经进一步纯化即用于下一步。ESI-MS(M+H+):216.1。
合成6-(4-(氨基甲基)苯氧基)嘧啶-4-胺：
将6-氯嘧啶-4-胺(1.29g,10mmol)、4-羟基苯甲腈(1.5g,15mmol,1.2当量)、Cu2O(0.5g,2mmol,0.2当量)、K2CO3(2.76g,20mmol,2当量)和吡啶(40mL)的混合物在125℃回流18h。真空除去吡啶，加入H2O(20mL)，然后用EtOAc(50mL)萃取。有机层分别用2N NaOH(20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后干燥，浓缩，得到粗4-(6-氨基嘧啶-4-基氧基)苯甲腈，其为褐色固体(1.2g,收率:55%)。ESI-MS(M+H+):213.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.16(s,1H),7.90(d,2H),7.35(d,2H),7.01(s,1H),5.95(s,2H)。
在圆底烧瓶中将4-(6-氨基嘧啶-4-基氧基)苯甲腈(50mg,0.23mmol)、兰尼镍(15mg,0.23mmol,1当量)、MeOH(20mL)和2滴浓HCl的混合物在室温和H2下搅拌16h。然后过滤除去兰尼镍，浓缩滤液，得到粗6-(4-(氨基甲基)苯氧基)嘧啶-4-胺，其为黄色固体(35mg,收率:70%)。ESI-MS(M+H+):217.1。
合成(5-(7-环丁基-4-(4-甲氧基苄基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基氨基甲酸叔丁酯：
Figure BDA00001732070201502
向化合物4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5.8g,20.8mmol,1.0当量)和Cs2CO3(33.9g,103.9mmol,5.0当量)在无水DMA中的混合物中加入溴环丁烷(3.4g,25.0mmol,1.2当量)。将混合物在90℃搅拌16h。反应完成后，混合物用水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。有机层用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗产物，其通过硅胶色谱(PE:EA=0~50%)来纯化，得到产物4-氯-7-环丁基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶，其为白色固体(2.0g,收率:29%)。ESI-MS(M+H+):331.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.61(s,1H),7.58(s,1H),5.30-5.26(m,1H),2.60-2.54(m,2H),2.50-2.45(m,2H),1.99-1.92(m,2H)。
向4-氯-7-环丁基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(400mg,1.20mmol,1.0当量)和DIPEA(465mg,3.60mmol,3.0当量)的DMSO溶液中加入PMBNH2(对甲氧基苄胺)(165mg,1.20mmol,1.0当量)。将混合物在100℃搅拌16h。然后混合物用水(150mL)稀释，用EA(3×100mL)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，浓缩。混合物通过硅胶色谱(PE:EA=0~10%)来纯化，得到7-环丁基-5-碘-N-(4-甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，其为白色固体(286mg,收率:55%)。ESI-MS(M+H+):435.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.35(s,1H),7.34(d,2H),7.20(s,1H),6.91-6.88(m,2H),6.33(s,1H),5.24-5.20(m,1H),4.78(s,2H),3.81(s,3H),2.56-2.49(m,2H),2.44-2.37(m,2H),1.92-1.86(m,2H)。
在氮气下向7-环丁基-5-碘-N-(4-甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(200mg,0.46mmol,1.0当量)、K2CO3(127mg,0.92mmol,2.0当量)和PdCl2(dppf)·DCM(19mg,0.023mmol,0.05当量)在二氧杂环己烷(10mL)和H2O(1mL)中的混合物中加入(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(156mg,0.46mmol,1.0当量)。将混合物加热至90℃且保持2h，然后用水(30mL)稀释，用EA(3×20mL)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩。残留物通过硅胶色谱(PE:EA=0~60%)来纯化，得到(5-(7-环丁基-4-(4-甲氧基苄基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)噻吩-2-基)甲基氨基甲酸叔丁酯，其为浅灰色固体(86mg,收率:36%)。ESI-MS(M+H+):520.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.39(s,1H),7.23(d,2H),7.16(s,1H),6.87-6.82(m,3H),6.81(s,1H),5.67(s,1H),5.29-5.25(m,1H),4.98(s,1H),4.72(s,2H),4.44(s,2H),3.79(s,3H),2.56-2.52(m,2H),2.46-2.41(m,2H),1.92-1.84(m,2H),1.41(s,9H)。
合成9-碘-3-甲基-咪唑并[1,2-c]喹唑啉：
Figure BDA00001732070201511
(6-碘-喹唑啉-4-基)丙-2-炔基-胺：将4-氯-6-碘-喹唑啉(434mg,1.49mmol)在叔丁醇(7.5mL)中搅拌。先后加入炔丙胺(150μl,2.19mmol)和三乙胺(312μl,2.24mmol)，在40℃加热3天。向反应混合物中加入乙酸乙酯(75mL)，用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发。收集到黄色粉末。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.73(s,1H),8.10(d,J=1.51Hz,1H),8.01(dd,J=1.89,8.69Hz,1H),7.62(d,J=8.69Hz,1H),5.78(t,J=4.91Hz,1H),4.48(dd,J=2.64,5.29Hz,2H),2.35(t,J=2.64Hz,1H)。ES(+)MS m/e=310.0(M+1)。
9-碘-3-甲基-咪唑并[1,2-c]喹唑啉：将(6-碘-喹唑啉-4-基)丙-2-炔基-胺(207mg,0.670mmol)和碘化亚铜(I)(19mg,0.099mmol)与乙腈(6.7mL,130mmol)和三乙胺(187μl,1.34mmol)混合，在90℃加热16小时。将反应混合物在乙酸乙酯(75ml)中吸收，用1M氢氧化铵、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，蒸发，通过快速色谱(0-100%乙酸乙酯:己烷,硅胶)来纯化。收集到126.1mg浅黄色粉末(61%)，NMR检测到其含有少量不期望的区域异构体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.90(d,J=1.89Hz,1H),8.75(s,1H),7.96(dd,J=2.08,8.50Hz,1H),7.68(d,J=8.69Hz,1H),7.35-7.40(m,1H),2.62(d,J=1.13Hz,3H)。
实施例49以与实施例2.4类似的方法由9-碘-3-甲基-咪唑并[1,2-c]喹唑啉来制备。
实施例50：2-(3氨甲酰基-4-(1H-咪唑-1-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00001732070201521
5-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸甲酯。在室温向5-氰基-2-氟苯甲酸(2.61g,16mmol)的MeOH(40mL)溶液中加入SOCl2(0.92g,8mmol,0.5当量)，然后在85℃搅拌2h。浓缩反应混合物，得到粗产物5-氰基-2-氟苯甲酸甲酯，其为白色固体(2.87g,收率:100%)。ESI-MS(M+H)+:180.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.24(dd,1H),7.80-7.74(m,1H),7.28-7.20(m,1H),3.92(s,3H)。
在室温向5-氰基-2-氟苯甲酸甲酯(3.77g,21mmol)的DMF(30mL)溶液中加入咪唑(2g,29mmol,1.4当量)，然后在110℃搅拌3h直到反应完成。混合物用饱和NH4Cl(40mL)稀释，用DCM(3×50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤(50mL)，用Na2SO4干燥，浓缩，得到残留物，其通过硅胶柱色谱[使用石油醚/乙酸乙酯(2/1)作为洗脱剂]来纯化，得到5-氰基-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸甲酯，其为浅黄色固体(3.95g,收率:83%)。ESI-MS(M+H)+:228.1。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.25(d,1H),7.79(dd,1H),7.63(s,1H),7.75(d,1H),7.21(s,1H),7.10(t,1H),3.78(s,3H)。
在室温向5-氰基-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸甲酯(3.82g,16mmol)的MeOH(100mL)溶液中加入NH3水溶液(30%,8mL)，然后在N2下向混合物中加入兰尼镍(1g)。然后将混合物在室温和H2下搅拌18h。过滤反应混合物，浓缩，得到粗产物5-(氨基甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸甲酯，其为浅黄色油状物(3.47g,收率:63%)。ESI-MS(M+H)+:232.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.91-7.58(m,3H),7.46-7.25(m,2H),7.02(s,1H),3.80(s,2H),3.64(s,3H)。
在室温向5-(氨基甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸甲酯(3.27g,14mmol)的DMF(40mL)溶液中加入N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺(3.76g,14mmol,1当量)和Et3N(3.56g,35mmol,2.5当量)，然后在110℃搅拌3h。反应混合物用H2O(40mL)稀释，用DCM(2×50mL)萃取。有机层用盐水(60mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱色谱[使用DCM/MeOH(20/1)作为洗脱剂]来纯化，得到5-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸甲酯，其为黄色油状物(3.47g,收率:51%)。ESI-MS(M+H)+:478.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.14(t,1H),8.83(t,1H),8.18-8.14(m,1H),8.05-7.99(m,1H),7.85-7.82(m,1H),7.78-7.74(m,1H),7.66-7.61(m,1H),7.46-7.34(m,4H),7.20-7.14(m,1H),7.05-7.00(m,1H),6.67-6.62(m,1H),4.73(d,2H),4.44(d,2H),3.63(s,3H)。
5-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸。在室温向5-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸甲酯(1.00g,2mmol)的EtOH(40mL)溶液中加入NaOH(419mg,10mmol,5当量)和H2O(4mL)。将混合物回流1h直到反应完成。混合物用5%HCl调节至pH=6，然后浓缩。将残留物分散在DCM/EtOH(4:1,400mL)中，过滤，浓缩，得到粗5-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸。
2-(3氨甲酰基-4-(1H-咪唑-1-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺。用NH4Cl和HATU将5-((3-(3,4-二氟苄基氨甲酰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-2-(1H-咪唑-1-基)苯甲酸转化为2-(3氨甲酰基-4-(1H-咪唑-1-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为浅黄色固体(58mg,收率:29%)。(流动相:MeOH/H2O=0-65%)。ESI-MS(M+H+):463.2。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.13-8.09(m,1H),7.94-7.89(m,1H),7.79(s,1H),7.62-7.56(m,2H),7.41-7.36(m,1H),7.31-7.04(m,5H),6.66-6.58(m,1H),4.76(s,2H),4.49(s,2H)。
实施例51：(S)-2-(5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基氨基)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201541
将2-溴-5-硝基噻吩(500mg,2.42mmol)、N,N-二(叔丁氧羰基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉-4-胺(1.37g,2.90mmol,1.2当量)和K2CO3(668mg,4.84mmol,2.0当量)溶解在二氧杂环己烷(10mL)中。加入PdCl2(dppf)·CH2Cl2(99mg,0.12mmol,0.05当量)。将反应混合物在氮气气氛下加热至90℃且保持3h。然后将反应混合物冷却，减压蒸发。残留物通过硅胶柱(PE/EA=5/1)来纯化，得到6-(5-硝基噻吩-2-基)-N,N-二(叔丁氧羰基)喹唑啉-4-胺，其为黄色固体(650mg,收率:57%)。ESI-MS(M+H+):473.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.33(s,1H),8.54(dd,1H),8.43(d,1H),8.27-8.22(m,2H),8.02(d,1H),1.31(s,18H)。
将6-(5-硝基噻吩-2-基)-N,N-二(叔丁氧羰基)喹唑啉-4-胺(350mg,0.74mmol)溶解在甲醇(10mL)中，然后加入Pd/C(35mg)。将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌16h。过滤除去催化剂，将滤液减压浓缩，得到6-(5-氨基噻吩-2-基)-N,N-二(叔丁氧羰基)喹唑啉-4-胺，其为棕色固体(300mg,收率:91%)，所述固体不经进一步纯化即用于下一步。ESI-MS(M+H+):443.1。
将6-(5-氨基噻吩-2-基)-N,N-二(叔丁氧羰基)喹唑啉-4-胺(300mg,0.68mmol)、(S)-2-溴-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(277mg,0.81mmol,1.2当量)、Cs2CO3(443mg,1.36mmol,2当量)和二氧杂环己烷(1mL)加到密封的管中。然后在氮气保护下向混合物中加入Pd2(dba)3[三(二亚苄基丙酮)二钯](62mg,0.07mmol,0.1当量)和Xantphos(40mg,0.07mmol,0.1当量)。将反应混合物在微波中加热至160℃且保持70分钟。然后将反应混合物冷却，减压蒸发。残留物通过制备性
HPLC(0.05%TFA/100%-50%H2O/0-50%MeOH)来纯化，得到(S)-2-(5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基氨基)-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺，其为红色固体(13mg,收率:3.8%)。ESI-MS:(M+H+):503.0。HPLC:95.87%。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ:8.49(s,1H),8.40-8.37(m,2H),8.21(dd,1H),8.14(dd,1H),7.63(d,1H),7.35(d,1H),7.29(t,1H),7.19-7.16(m,2H),6.87-6.84(m,1H),6.60(d,1H),5.19(q,1H),1.52(d,3H)。
实施例52：合成(S)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-(4-(3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)吡嗪-2-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201551
合成5-溴-N-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。向5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(0.2g,0.9mmol)和甲醛(0.07mL,0.9mmol)在乙酸(5mL,90mmol)中的混合物中加入氰基硼氢化钠(185mg,2.95mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液。然后将混合物在室温搅拌过夜。用水淬灭，用EtOAc萃取，先后用水、盐水和饱和NaHCO3洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，浓缩。然后粗品通过制备性TLC来纯化，得到所需产物(38mg)，其不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=0.82分钟,MH+:227.6。
合成(S)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-(4-(3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)吡嗪-2-甲酰胺。将6-氰基-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺(103mg,0.2mmol)和(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-甲基-胺(30mg,0.10mmol)的1,4-二氧杂环己烷(2.0mL)溶液脱气10min，加入二(三环己基膦)钯(0)(8.8mg,0.01mmol)和饱和NaHCO3水溶液(0.3mL,0.4mmol)。将反应混合物在微波中在120℃加热20分钟。反应混合物用EtOAc稀释，用水(5×)洗涤。分离有机相，用MgSO4干燥，浓缩。然后粗品通过HPLC来纯化，得到38mg所需产物。LCMS:RT=1.66min.;MH+:540.6。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.05(宽单峰,1H)9.76(t,J=5.77Hz,1H)9.34(d,J=8.28Hz,1H)8.75(s,1H)8.64(d,J=2.01Hz,1H)8.33(d,J=2.26Hz,1H)7.61(d,J=8.03Hz,2H)7.48-7.56(m,1H)7.33-7.46(m,3H)7.27(宽单峰,1H)6.23(d,J=5.02Hz,1H)4.99-5.22(m,1H)4.73(t,J=5.65Hz,2H)2.87(d,J=5.02Hz,3H)1.52(d,J=7.03Hz,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-139.01至-138.68(m,1F),-141.62至-141.28(m,1F)。
实施例53：2-(3-(5-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201561
将3-甲酰基-5-异丙氧基苯基硼酸(2.5g,12mmol)和2-氨基吡啶-3-甲酸乙酯(3.0g,18mmol)的甲苯(100mL)溶液加热至120℃且保持16h。然后除去溶剂，缓慢加入NaBH4(2.05g,54mmol,3当量)的MeOH(20mL)溶液，将残留物在室温搅拌2h。混合物用水(100mL)稀释，用HCl调节至pH=3-4。然后用EtOAc(100mL×3)萃取，用饱和NaHCO3(100mL×3)洗涤，干燥。浓缩有机相，得到3-((3-(乙氧基羰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-5-异丙氧基苯基硼酸(3.3g,收率:76%)，其为黄色固体。该粗化合物不经进一步纯化即用于下一步。
ESI-MS(M+H+):359.2。
将3-((3-(乙氧基羰基)吡啶-2-基氨基)甲基)-5-异丙氧基苯基硼酸(3.3g,9.2mmol)、5-溴-3-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(5.1g,11.1mmol,1.2当量)、Pd(dppf)Cl2·DCM(380mg,0.46mmol,0.05当量)、K2CO3(2.6g,18.5mmol,2当量)和H2O(2mL)在二氧杂环己烷(100mL)中的混合物在90℃和N2气氛下搅拌3h。反应完成后，除去溶剂，残留物通过硅胶(PE/EA=4:1)来纯化，得到2-(3-(5-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯(3.2g,收率:53%)，其为黄色固体。ESI-MS(M+H+):651.0。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.19-8.13(m,5H),7.89-7.86(m,3H),6.92-6.90(m,2H),6.80(d,1H),6.62-6.59(m,3H),6.42(s,1H),4.58-4.54(m,1H),4.36-4.31(m,4H),1.39-1.35(m,9H)。
将化合物2-(3-(5-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯(1g,1.54mmol)、1H-吡唑-5-基硼酸(0.26g,2.3mmol,1.5当量)、Pd(dppf)Cl2·DCM(60mg,0.12mmol,0.05当量)、Na2CO3(330mg,3.1mmol,2当量)和H2O(1mL)在DMF(20mL)中的混合物在80℃搅拌1h。反应完成后，除去溶剂，残留物通过硅胶(PE/EA=1:5)来纯化，得到2-(3-异丙氧基-5-(1-(苯基磺酰基)-5-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯(200mg,收率:21%)，其为黄色固体。
ESI-MS(M+H+):637.2。
向2-(3-异丙氧基-5-(1-(苯基磺酰基)-5-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酸乙酯(200mg,0.314mmol)在MeOH-H2O(1∶1,20mL)中的溶液中加入NaOH(50mg,1.26mmol,4当量)，然后将反应溶液加热至回流且保持30min，反应完成后，将混合物冷却至室温，酸化至pH=3-4，过滤混合物，得到相应的酸(其中苯基磺酰基也被除去)，将其转化为2-(3-(5-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-异丙氧基苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):594.0。1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD)δ:8.62(宽峰,1H),8.56(s,1H),8.21-8.19(m,1H),7.82-7.79(m,1H),7.63(s,1H),7.55(s,1H),7.32(s,1H),7.06-7.02(m,4H),6.88(s,1H),6.62(宽峰,1H),6.59-6.56(m,1H),4.75(s,2H),4.67-4.64(m,1H),4.48(s,2H),1.38(d,6H)。
实施例54：合成2-((4-(5-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201571
向4-溴吡啶-2-甲酸(5g,24.8mmol)和NH4Cl(6.7g,124mmol,5当量)的DMF(200mL)溶液中一次性加入K2CO3(34g,240mmol,10当量)。然后加入HBTU(18.8g,240mmol,2当量)。将混合物在室温搅拌2h。除去溶剂，残留物通过硅胶柱色谱(EA)来纯化，得到4-溴吡啶-2-甲酰胺(2.5g,收率:50%)，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):201.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.21(s,1H),8.19(s,1H),8.03(s,1H),6.12(宽峰,2H)。
将4-溴吡啶-2-甲酰胺(1.85g,9.2mmol)的BH3(浓度为2M的THF溶液,100mL)溶液加热至回流且保持16h，然后将反应混合物冷却至室温，用浓HCl(20mL)酸化至pH=6。真空除去溶剂，溶解在EtOAc(200mL)中，用饱和NaHCO3(100mL×3)洗涤，用无水Na2SO4干燥。浓缩有机层，得到(4-溴吡啶-2-基)甲胺(540mg,31%)，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):201.1。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.53-8.51(m,1H),8.33(宽峰,2H),7.86-7.85(m,1H),7.72-7.70(m,1H),4.23-4.20(m,2H)。
由N-(3,4-二氟苄基)-2-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)甲基氨基)吡啶-3-甲酰胺[以与上述类似的方法由(4-溴吡啶-2-基)甲胺和N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺分两步来制备](ESI-MS(M+H+):481.1)和5-溴-3-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶得到2-((4-(5-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺。ESI-MS(M+H+):691.1。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.62(d,1H),8.60(d,1H),8.53(s,1H),8.36(s,1H),8.24(d,1H),7.91(d,1H),7.82(s,1H),7.75-7.62(m,4H),7.61-7.55(m,3H),7.54-7.46(m,3H),7.15(s,1H),6.74(s,1H),4.83(d,2H),4.58(d,2H)。
2-((4-(5-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺在标准苏楚基条件下由2-((4-(5-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)甲基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)吡啶-3-甲酰胺和1H-吡唑-5-基硼酸来制备，然后用碳酸钾的甲醇溶液进行脱保护。ESI-MS(M+H+):537.2。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:8.75(s,1H),8.71(s,1H),8.39(s,1H),8.37(s,1H),8.27(d,1H),8.13(d,1H),8.04(d,1H),7.90(d,1H),7.65(s,1H),7.17-7.07(m,3H),6.74(s,1H),6.66-6.62(m,1H),4.93(s,2H),4.44(s,2H)。
合成3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA00001732070201581
向4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶(500.0mg,3.700mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(17.0mL,2.20E2mmol)溶液中加入N-碘琥珀酰亚胺(915.7mg,4.070mmol)，在80℃搅拌过夜。除去溶剂，残留物通过柱色谱来纯化，得到3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(865mg,89%收率)。ESI-MS(M+H+):261.8。
向3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(671.0mg,2.571mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(17mL,220mmol)溶液中加入碳酸钾(1660mg,12.0mmol)。溶液用N2脱气，将小瓶密封，然后加入甲基碘(1.2mL,2.0E1mmol)。将反应混合物在室温搅拌4小时。除去溶剂，残留物通过HPLC来纯化，得到所需要的3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120mg,17%收率)。
ESI-MS(M+H+):275.8。
合成6-溴-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮：
Figure BDA00001732070201591
将5-溴吡啶-2,3-二胺(10g,44mmol)和吡啶(8.8g,88mmol,2.0当量)在THF(80mL)中的混合物在0℃搅拌30分钟。然后向混合物中加入EtOCOCl(碳酸乙基酯·酰氯)(5.8g,44mmol,1.0当量)。将混合物在室温搅拌16h。然后浓缩混合物，粗固体用CH3OH/EtOAc(1:9,100mL)洗涤，得到2-氨基-5-溴吡啶-3-基氨基甲酸乙酯，其为黄色固体(7.2g,收率:53%)。ESI-MS(M+H+):261.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.84(s,1H),7.84(s,1H),7.76(d,1H),6.07(s,1H),4.11(q,2H),1.22(t,3H)。
在圆底烧瓶中在0℃将NaH(1.92g,80mmol,60%,4当量)缓慢加到2-氨基-5-溴吡啶-3-基氨基甲酸乙酯(5.2g,20mmol)的THF(100mL)溶液中。将反应混合物在0℃和氮气气氛下搅拌30min。向上述溶液中缓慢加入MeI(碘甲烷)(2.84g,20mmol)的THF(5mL)溶液，然后将反应混合物在室温搅拌12h。过滤析出物，收集固体，然后将固体溶解在H2O(50mL)中，过滤，滤液用稀HCl(1N)调节至pH=6，形成析出物，过滤，得到6-溴-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮，其为黄色固体(2.3g,收率:50%)。ESI-MS(M+2):228.9。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.71(s,1H),7.95(d,1H),7.70(d,1H),3.25(s,3H)。
合成(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)甲醇：
Figure BDA00001732070201592
向3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸(500mg,2.3mmol)在DME(15mL)中的混合物中加入NMM(221mg,2.19mmol,0.95当量)和碳酸异丁基酯·酰氯(isobutylcarbonochloridate)(298mg,2.19mmol,0.95当量)。将混合物在-20℃搅拌1h。然后过滤固体，向溶液中加入MeOH(10mL)。将混合物在室温搅拌1h。然后除去溶剂，残留物通过硅胶柱(PE/EA=5/1)来纯化，得到3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸甲酯，其为白色固体(377mg,收率:71%)。ESI-MS(M+3):233.9。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.43(s,1H),7.56(宽峰,2H),3.85(s,3H)。
在0℃和N2气氛下将1.0M氢化锂铝的THF溶液(1.43mL,1.43mmol)加到3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸甲酯(300mg,1.29mmol)的THF(10mL)溶液中。将反应混合物在0℃搅拌2h。先后加入水(2mL)、2M氢氧化钠(0.05mL)和水(4mL)，将所得到的混合物在20℃搅拌30min，然后用硅藻土过滤。溶液用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，干燥。浓缩有机相，得到(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)甲醇，其为棕色固体(180mg,收率:59%)，所述固体不经进一步纯化即用于下一步。ESI-MS(M+3):205.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.00(s,1H),6.44(宽峰,2H),5.39(t,1H),4.43(d,2H)。
实施例55：合成2-(4-(4-氨基-7-(3-(二甲基氨基)丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201601
向4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(40.0mg,0.000143mol)、3-(二甲基氨基)丙-1-醇(29.53μl,0.0002863mol)和与树脂结合的三苯基膦(载量为1.00mmol/g;214.7mg,0.0002147mol)在四氢呋喃(10.45mL,0.1288mol)中的混合物中加入偶氮二羧酸二异丙酯(42.27μl,0.0002147mol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。洗涤反应混合物，收集有机层，真空除去溶剂。产物不经进一步纯化即使用。ESI-MS(M+H+):364.7。
向小瓶中加入[3-(4-氯-5-碘-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丙基]-二甲基-胺(52.20mg,0.1432mmol)和0.5M氨的1,4-二氧杂环己烷溶液(2.00mL,1.00mmol)。向其中加入氢氧化铵(1.00g,28.5mmol)，在105℃搅拌过夜。产物用MeOH稀释，真空除去溶剂。产物不经进一步纯化即使用。ESI-MS(M+H+):345.9。
向小瓶中加入N-(3,4-二氟苄基)-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(86.20mg,0.1575mmol)、7-(3-二甲基氨基-丙基)-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(49.42mg,0.1432mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](14.03mg,0.01718mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(1.330mL,17.18mmol)和1.2M碳酸氢钠(水溶液)(596.5μl,0.7158mmol)。反应混合物在110℃用微波以300瓦处理30min。除去溶剂，残留物通过HPLC来纯化，得到所需产物。收集到21.3mg纯化合物(23%收率)。ESI-MS(M+H+):638.9。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(td,J=5.52,22.09Hz,2H),8.53(s,1H),8.37(s,1H),8.14(s,1H),7.29-7.46(m,7H),7.20(宽单峰,1H),4.75(d,J=5.77Hz,2H),4.45(d,J=5.52Hz,2H),4.18(t,J=7.03Hz,2H),2.35(宽单峰,2H),2.23(宽单峰,6H),1.95(五重峰,J=6.96Hz,2H)。
实施例56：合成2-(((6-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-3-基)甲基)氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201611
合成2-氯-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。将草酰氯(2.4g,19mmol)滴加到2-氯-5-三氟甲基吡啶-3-甲酸(1.7g,7.5mmol)在DMF(0.1mL)和二氯甲烷(100mL)中的混悬液中，在室温搅拌1h。将溶剂蒸发掉，再次溶解在二氯甲烷中，加入N,N-二异丙基乙胺(13mL,75mmol)和对氟苯胺(0.72mL,7.5mmol)，在室温搅拌1h。LC-MS显示反应完成(1.53min,ES+/318.8)。将溶剂蒸发掉，用EtOAc和水进行后处理，用MgSO4干燥。得到2.4g 2-氯-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。
合成2-(((6-氯吡啶-3-基)甲基)氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。向(6-氯-吡啶-3-基)甲胺(1.00g,7.01mmol)和2-氯-N-(4-氟苯基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(2.23g,7.01mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL,0.2mol)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(3.66mL,21.0mmol)。将反应混合物在80℃加热过夜。反应混合物用EtOAc稀释，先后用盐水和水洗涤。分离有机相，干燥，浓缩。粗品用CH2Cl2/己烷重结晶，得到所需产物，其为灰白色粉末(2.84g)，所述固体不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.70分钟,MH+:424.80。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.50(s,1H)8.89(t,J=6.02Hz,1H)8.52(d,J=1.00Hz,1H)8.38(dd,J=16.94,2.13Hz,2H)7.81(dd,J=8.28,2.51Hz,1H)7.62-7.75(m,2H)7.45(d,J=8.03Hz,1H)7.15-7.28(m,2H)4.71(d,J=6.02Hz,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-59.05(s,3F),-118.20(s,1F)。
合成2-(((6-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-3-基)甲基)氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。将5-碘-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(50mg,0.18mmol)、联硼酸二频哪醇酯(56mg,0.22mmol)、乙酸钾(72mg,0.72mmol)和1,4-二氧杂环己烷(2mL)的混合物脱气10分钟。然后加入二(三环己基膦)钯(0)(12.2mg,0.02mmol)。将反应混合物在60℃加热过周末。LCMS显示出所需中间体(硼酸酯RT=1.05分钟,MH+:275.00)。然后加入2-((6-氯吡啶-3-基)甲基氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(116.2mg,0.27mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.45mL,0.55mmol)。将反应混合物在微波中在120℃加热20分钟。反应混合物用EtOAc稀释，用水(3×)洗涤。分离有机相，干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到所需产物，其为TFA盐(23mg)。LCMS:RT=1.41分钟;MH+:536.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.70(宽单峰,1H)10.52(s,1H)8.96(t,J=5.90Hz,1H)8.56(d,J=11.29Hz,3H)8.39(d,J=10.04Hz,3H)7.96-8.05(m,1H)7.87-7.95(m,1H)7.71(dd,J=8.78,5.02Hz,2H)7.23(t,J=8.91Hz,2H)4.77(d,J=5.77Hz,2H)3.84(s,3H)。
实施例57：2-(((6-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶-3-基)甲基)氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺
合成(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯。将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(0.500g,2.35mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(0.598g,2.74mmol)在吡啶(10.0mL,124mmol)中搅拌。向搅拌的混合物中加入4-二甲基氨基吡啶(26mg,0.21mmol)。将反应混合物在室温搅拌。3h后，将反应混合物蒸发至干。将残留物在DCM和DMF中吸收。加入硅胶，蒸发除去溶剂。残留物通过硅胶色谱(使用0-100%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化，得到产物(1.27)。LCMS m/z 312.80,314.80(M+1)。
合成[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向小瓶中加入(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.126g,0.402mmol)、联硼酸二频哪醇酯(0.128g,0.505mmol)、乙酸钾(0.164g,1.68mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(1.54mL,14.8mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.768mL,9.92mmol)。将反应混合物抽空，然后用氩气冲洗(×5)。将反应混合物在氩气下密封，在110℃用微波处理10分钟。LCMS显示良好转化为与硼酸酯一致的新峰(79%,RT=0.72min,m/z=179.00)。应该注意的是，所观察到的质量为硼酸-叔丁氧羰基的质量。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。LCMS显示产物仍为主要物质，尽管第二峰现为较大的。残留物直接用于下一步反应。LCMS m/z 179.00。
合成2-(((6-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶-3-基)甲基)氨基)-N-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。将2-((6-氯吡啶-3-基)甲基氨基)-5-氰基-N-(4-氟苯基)吡啶-3-甲酰胺(0.146g,0.383mmol)和[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(0.145g,0.402mmol)[来自上述反应的粗品]溶解在1,4-二氧杂环己烷(1.9mL,25mmol)中。然后先后加入二(三环己基膦)钯(0)(32mg,0.048mmol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(1.06mL,1.27mmol)。将容器在氩气下密封。将反应混合物搅拌，在微波中在120℃加热20分钟。应该注意的是，硼酸酯原料为来自先前反应的粗品，可能是不带有叔丁氧羰基的硼酸。LCMS显示出RT=1.36min的主要峰(48%,m/z=522.80)。反应混合物通过GILSON制备性HPLC来纯化(×4)，得到产物。应该注意的是，产物不带有叔丁氧羰基，可见该保护基已在该反应中(或更有可能在先前反应中)被除去。LCMS m/z522.80(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),9.06(d,J=2.01Hz,1H),8.94(s,1H),8.89(宽单峰,1H),8.69(s,1H),8.55(s,1H),8.38(d,J=2.01Hz,1H),7.85-8.00(m,2H),7.64-7.76(m,2H),7.22(t,J=8.91Hz,2H),4.78(d,J=5.27Hz,2H)。
实施例58以与实施例57相同的方法来合成。
合成3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)丙基氨基甲酸叔丁酯
5-溴-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶。将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(10.0g,50.5mmol)和N-碘琥珀酰亚胺(11.9g,53.0mmol)的无水1,2-二氯乙烷(300mL)溶液加热回流6h。冷却至RT，用THF(300ml)稀释。所得到的溶液先后用饱和Na2S2SO4水溶液和盐水洗涤。然后干燥有机相(MgSO4)，浓缩。残留物先后用DCM/乙醚的1:1混合物和乙醚研磨，得到所需产物，其为黄色固体(12.4g)，所述固体不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.35分钟;MH+:323.60。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 14.30(宽单峰,1H)8.64(d,J=2.26Hz,1H)8.20(d,J=2.26Hz,1H)。
3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-胺。向5-溴-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(1.0g,3.1mmol)和碘化亚铜(I)(29mg,0.154mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(3.76mL,21.6mmol)，脱气10分钟。然后先后加入炔丙基二甲基胺(0.57mL,5.3mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](0.126g,0.154mmol)，继续脱气5min。然后将反应混合物在40℃搅拌2h。反应混合物用DCM稀释，先后用饱和NaHCO3和盐水洗涤。然后干燥有机相(MgSO4)，浓缩。粗品用少量MeOH稀释，先后用甲醇和己烷洗涤，得到3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-胺(355mg)。LCMS:RT=0.69分钟;MH+:278.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm14.18(宽单峰,1H)8.66(d,J=2.26Hz,1H)8.41(d,J=2.01Hz,1H)3.58(s,2H)2.29(s,6H)。
3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-N,N-二甲基丙-1-胺。向5%Pd/C(7.6mg,0.072mmol)在甲醇(10mL)中的混合物中加入几滴三乙胺和[3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)丙-2-炔基]-二甲基-胺(100mg,0.36mmol)在MeOH(5ml)中的混悬液。混合物用氮气(3×)脱气，然后用氢气(3×)脱气。然后将反应混合物在室温和氢气气囊下搅拌。30min后，反应混合物用硅藻土过滤。浓缩滤液，通过制备性TLC(5%(NH3/MeOH)/DCM)来纯化，得到3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-N,N-二甲基丙-1-胺(22mg)。MH+:282.90。
5-溴-3-丁基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶。向铂(20mg,0.09mmol)在甲醇(5.0mL)和乙酸乙酯(5.0mL)中的混合物中加入[3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)丙-2-炔基]-二甲基-胺(50mg,0.0002mol)。混合物用氢气(3×)脱气。然后将反应混合物在室温和氢气气囊下搅拌过夜。反应混合物用硅藻土过滤。浓缩滤液，通过制备性TLC来纯化，得到5-溴-3-丁基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(30mg)。MH+:239.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.18-13.58(m,1H)8.35-8.71(m,2H)2.87(t,J=7.53Hz,2H)1.63-1.80(m,2H)0.93(t,J=7.28Hz,3H)。
3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯。向5-溴-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.50g,1.5mmol)和碘化亚铜(I)(29.4mg,0.154mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.50mL,6.4mmol)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.88mL,10.8mmol)，脱气10分钟。然后先后加入丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯(0.41g,2.6mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](63mg,0.08mmol)。然后将反应混合物在50℃加热20min。反应混合物用EtOAc稀释，先后用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。然后干燥有机相(MgSO4)，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯(261mg)。
LCMS:RT=1.50分钟;MH+:350.80。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 14.19(s,1H)8.66(d,J=2.01Hz,1H)8.44(d,J=1.51Hz,1H)7.36-7.55(m,1H)4.08(d,J=5.52Hz,2H)1.42(s,9H)。
3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)丙基氨基甲酸叔丁酯。向烧瓶中加入5%Pd/C(7.6mg,0.071mmol)。加入甲醇(10mL)。对混合物进行脱气，用氮气回充(3×)。脱气，用氢气回充(3×)。然后将反应混合物在室温和氢气气囊下搅拌。1h后，反应混合物用硅藻土过滤。浓缩滤液，通过制备性TLC(CH2Cl2+5%[2M NH3/MeOH])来纯化，得到3-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)丙基氨基甲酸叔丁酯(125mg)。LCMS:RT=1.39分钟;MH+:354.80。
合成2-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)乙腈
Figure BDA00001732070201661
(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)甲胺。向5-溴-3-溴甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(100mg,0.26mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL,0.04mol)溶液中加入叠氮化钠(18mg,0.28mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。LCMS显示原料消失。然后在氮气下加入三苯基膦(141mg,0.54mmol)、四氢呋喃(3mL)和水(1mL)。然后将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用EtOAc稀释，用硅藻土过滤。将滤液真空浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到51mg(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)甲胺。LCMS:RT=0.96min,MH+:226.90。
1-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-N,N-二甲基甲胺。向5-溴-3-溴甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(100mg,0.26mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入二甲胺盐酸盐(25mg,0.31mmol)。将反应混合物在80℃加热1h。反应混合物用EtOAc稀释，用硅藻土过滤。浓缩滤液，得到粗1-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-N,N-二甲基甲胺，其不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=0.28分钟;MH+:354.90。
2-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)乙腈。向5-溴-3-溴甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(100mg,0.26mmol)的乙醇(5mL)溶液中加入氰化钾(18mg,0.28mmol)的水(0.50mL)溶液。将反应混合物在50℃搅拌8h。反应混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤。分离有机相，干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到26mg 2-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)乙腈。LCMS:RT=0.92分钟;MH+:236.80。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.94(宽单峰,1H)8.63(dd,J=11.67,2.13Hz,2H)4.40(s,2H)。
2-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)乙腈。将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(1.0g,4.7mmol)、(2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.12g,7.0mmol)和乙酸(0.27mL,4.69mmol)在1,2-二氯乙烷(20mL)中的混合物在室温搅拌1h。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.0g,9.4mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用水(1mL)淬灭，在室温搅拌30分钟，用DCM稀释，用饱和NaHCO3洗涤。分离有机层，干燥(MgSO4)，浓缩。粗品通过ISCO(EtOAc/己烷梯度)来纯化，得到2-(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)乙腈(0.74g)。LCMS:RT=1.28分钟;MH+:355.80。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.15-12.34(m,1H)8.40(d,J=2.26Hz,1H)8.36(d,J=2.26Hz,1H)6.85(宽单峰,2H)3.23-3.33(m,2H)3.18(d,J=5.77Hz,2H)1.37(s,9H)。
实施例59：合成2-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-N-(5-氟吡啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
合成2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸。向2-氯-5-三氟甲基吡啶-3-甲酸(0.5g,2.0mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基胺盐酸盐(0.60g,2.2mmol)在二甲基亚砜(5.0mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.2mL,6.6mmol)。将反应混合物在80℃搅拌2h。反应混合物用EtOAc稀释，用5%枸橼酸水溶液洗涤。然后分离有机层，干燥，浓缩。过滤所形成的析出物，用己烷洗涤，得到2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸(0.46g)。MH+:422.90。少量通过HPLC来纯化。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.71(宽单峰,1H)8.97(t,J=5.90Hz,1H)8.56(d,J=1.76Hz,1H)8.26(d,J=2.26Hz,1H)7.62(d,J=8.03Hz,2H)7.33(d,J=8.03Hz,2H)4.78(d,J=6.02Hz,2H)1.28(s,12H)。
合成N-(5-氟吡啶-2-基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。将2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酸(100mg,0.24mmol)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(0.14g,0.38mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.12mL,0.71mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液在室温搅拌15分钟。然后加入5-氟-吡啶-2-基胺(53mg,0.47mmol)，将反应混合物在45℃搅拌过夜。用EtOAc稀释，先后用盐水和水(3×)洗涤。然后分离有机层，干燥，浓缩。粗品不经进一步纯化即用于下一步(119mg)。LCMS:RT=2.00分钟;MH+:516.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.25(s,1H)8.87(t,J=5.77Hz,1H)8.37-8.57(m,3H)8.11(dd,J=9.16,4.14Hz,1H)7.80(td,J=8.66,3.01Hz,1H)7.62(d,J=7.78Hz,2H)7.34(d,J=8.03Hz,2H)4.74(d,J=5.77Hz,2H)1.28(s,12H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-59.16(s,3F)-132.49(s,1F)。
合成2-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-N-(5-氟吡啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。将N-(5-氟-吡啶-2-基)-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(100mg,0.2mmol)和5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(49mg,0.23mmol)的1,4-二氧杂环己烷(3.0mL)溶液脱气10min，加入二(三环己基膦)钯(0)(13mg,0.019mmol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.5mL,0.58mmol)。将反应混合物在微波中在120℃加热20分钟。反应混合物用EtOAc稀释，用水(5×)洗涤。分离有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到2-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-N-(5-氟吡啶-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(42mg)。MH+:522.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.26(s,1H)8.90(t,J=5.90Hz,1H)8.68(d,J=2.01Hz,1H)8.34-8.58(m,4H)8.12(dd,J=9.16,4.14Hz,1H)7.81(td,J=8.72,3.14Hz,1H)7.63(d,J=8.03Hz,2H)7.47(d,J=8.03Hz,2H)4.77(d,J=5.77Hz,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-62.99(s,3F)-78.50(TFA,s,4F)-136.34(s,1F)。
实施例60：合成(S)-3-((4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己基)甲基氨基)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201681
合成(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯基)甲基氨基甲酸叔丁酯。将1.0M二(三甲基甲硅烷基)氨基锂(lithiumhexamethyldisilazide)在四氢呋喃中的溶液(9.2mL,9.24mmol)和5ml无水THF冷却至-78℃。滴加(4-氧代-环己基甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g,4.4mmol)的无水THF(10ml)溶液。将反应混合物在-78℃和氩气下搅拌1.5h。在-78℃缓慢加入N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)(1.57g,4.4mmol)的无水THF(10ml)溶液，将反应混合物在-78℃至5℃搅拌3h。反应混合物用2M NH4Cl水溶液淬灭，用乙醚洗涤，用NaHCO3水溶液和盐水洗涤。分离有机相，干燥(MgSO4)，浓缩，得到三氟甲磺酸酯中间体，其为浅黄色油状物，然后将所述油状物溶解在二甲基亚砜(10mL)中。向其中加入联硼酸二频哪醇酯(1.12g,4.4mmol)。然后反应溶液用氩气脱气。然后加入[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](0.36g,0.44mmol)、1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁(0.24g,0.44mmol)和乙酸钾(1.73g,17.6mmol)。然后将反应混合物在80℃加热过夜。冷却，反应混合物用硅胶垫过滤，用过量的EtOAc淋洗。滤液先后用盐水和水洗涤，干燥，浓缩。然后将粗品加载到小硅胶柱上，用25/75EtOAc/己烷洗脱，浓缩。然后粗品通过HPLC来纯化，得到(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯基)甲基氨基甲酸叔丁酯，其为浅黄色油状物(0.66g)。LCMS:RT=1.94min;MH+:238.00(产物-叔丁氧羰基)和360.00(P+Na)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.76-6.88(m,1H)6.40(宽单峰,1H)2.82(t,J=6.02Hz,2H)2.02-2.18(m,2H)1.85-1.99(m,1H)1.63(d,J=4.77Hz,3H)1.37(s,9H)1.18(s,13H)。
合成(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己-3-烯基)甲基氨基甲酸叔丁酯。将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(140mg,0.68mmol)、[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯基甲基]氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.59mmol)和1,4-二氧杂环己烷(4.0mL)的混合物脱气10分钟。然后加入四(三苯基膦)钯(0)(69mg,0.06mmol)和磷酸钾(504mg,2.4mmol)的水(1.0mL)溶液。将反应混合物在微波中在120℃加热30分钟。反应混合物用EtOAc稀释，用水(2×)洗涤。分离有机相，干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己-3-烯基)甲基氨基甲酸叔丁酯(76mg)。LCMS:RT=1.15分钟;MH+:344.00。
合成(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯。[4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己-3-烯基甲基]氨基甲酸叔丁酯(70mg,0.2mmol)和二氧化铂(5mg,0.02mmol)在甲醇(5mL)中的混合物用氩气脱气，然后用氢气回充(3×)。将反应混合物在室温和氢气气囊下搅拌过夜。然后滤出固体。浓缩滤液。粗(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯(45mg)不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.07分钟(10_90_2m方法);MH+:246.00(P-叔丁氧羰基)。
合成5-(4-(氨基甲基)环己基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。将[4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己基甲基]氨基甲酸叔丁酯(45mg,0.13mmol)、二氯甲烷(2.0mL,0.031mol)和三氟乙酸(0.2mL,2.0mmol)的混合物在室温搅拌1h。反应混合物用2M NH3的甲醇溶液中和，然后除去溶剂。粗品(30mg)不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.45min;MH+:246.00。
合成(S)-3-((4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己基)甲基氨基)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺。向5-(4-氨基甲基-环己基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(30mg,0.1mmol)和6-氰基-3-氟-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺(87mg,0.28mmol)的二甲基亚砜(1.0mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.055g,0.43mmol)。在室温搅拌1h，反应混合物用EtOAc稀释，先后用盐水和水洗涤。分离有机相，干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到(S)-3-((4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)环己基)甲基氨基)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)吡嗪-2-甲酰胺(15mg)。LCMS:RT=1.29分钟;MH+:532.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.59-12.25(m,1H)9.39-9.57(m,1H)9.31(dd,J=8.28,3.51Hz,1H)8.73(s,1H)8.29(dd,J=14.81,1.51Hz,1H)7.90-8.08(m,1H)7.45-7.57(m,1H)7.32-7.44(m,1H)7.27(宽单峰,1H)5.03-5.21(m,1H)3.61(dd,J=16.56,7.53Hz,2H)2.64-2.79(m,1H)2.05(宽单峰,1H)1.57-1.93(m,8H)1.36-1.55(m,5H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-139.01至-138.71(m,1F),-141.60至-141.30(m,1F)。
实施例61：(S)-2-(((1-(5-氨基吡嗪-2-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201701
对5-溴-吡嗪-2-基胺(0.25g,1.4mmol)、哌啶-4-基甲基氨基甲酸叔丁酯(0.46g,2.2mmol)、碘化亚铜(I)(0.0055g,0.029mmol)和碳酸铯(0.94g,2.9mmol)的固体混合物进行脱气，在磁力搅拌下用氮气冲洗。经由注射器向其中加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL,20mmol)，然后加入2-异丁酰基-环己酮(0.048g,0.29mmol)。加热至90℃过夜，LC-MS显示原料不再存在，主要形成的是所需产物(0.81min,ES+/308.20)。冷却至室温，用EtOAc和水进行后处理。用MgSO4干燥。通过硅胶柱(0-100%EtOAc/DCM)来纯化，得到所需产物，其为浅棕色浆状物(注意：硅胶柱中出现的原料可能是因为其在反应混合物中的有限溶解度，对上清液进行的LC-MS没有检测出残留的固体原料)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.25-1.35(m,2H)1.43(s,9H)1.61(d,J=18.32Hz,1H)1.77(d,J=14.05Hz,2H)2.70(td,J=12.30,2.51Hz,2H)3.03(t,J=6.27Hz,2H)3.99(d,J=12.55Hz,2H)4.05-4.15(m,2H)4.73(宽单峰,1H)7.65(dd,J=8.03,1.51Hz,2H)7.80-8.08(m,1H)。
将[1-(5-氨基-吡嗪-2-基)哌啶-4-基甲基]氨基甲酸叔丁酯(0.10g,0.00032mol)在三氟乙酸(1mL,0.02mol)和二氯甲烷(0.9mL,0.01mol)中的溶液在室温搅拌30min，LC-MS显示反应完成(0.12min,ES+/20.8.0)。浓缩，得到粗产物，其为TFA盐，所述盐不经进一步纯化。
先后向5-(4-氨基甲基-哌啶-1-基)吡嗪-2-基胺(50.0mg,0.000241mol)的TFA盐在二甲基亚砜(0.6mL,0.009mol)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.126mL,0.000724mol)和5-氰基-2-氟-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(69.3mg,0.000241mol)。将反应混合物在90℃加热30min。LC-MS显示反应完成(1.24min,ES+/475.2)。冷却至室温，用EtOAc和水进行后处理，用MgSO4干燥。用硅胶柱(0-100%EtOAc/DCM)纯化，得到所需产物，其为黄色固体(4mg,3%)。MS:ES+/475.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.31-1.49(m,2H)1.60(d,J=6.78Hz,3H)1.86(d,J=12.30Hz,3H)2.73(t,J=12.05Hz,2H)3.33-3.56(m,2H)3.98-4.07(m,4H)5.12-5.27(m,1H)6.61(d,J=7.53Hz,1H)7.04(t,J=8.78Hz,1H)7.35(dd,J=7.91,5.65Hz,2H)7.67(d,J=7.53Hz,2H)7.62-7.73(m,1H)7.89(d,J=1.51Hz,1H)8.43(s,1H)8.88-9.09(m,1H)9.00(t,J=1.00Hz,1H)9.25-9.26(m,1H)。
实施例62：合成(S)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-(4-(3-(二甲基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)吡嗪-2-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201711
合成5-溴-N,N-二甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。向5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(200mg,0.9mmol)和甲醛(2.0mL,27mmol)在乙酸(10mL,180mmol)中的混合物中加入氰基硼氢化钠(195mg,3.10mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液。然后将混合物在0℃搅拌过夜。用水淬灭，用EtOAc萃取，先后用水(2×)、盐水和饱和NaHCO3洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，浓缩。粗品(153mg,纯度~60%)不经进一步纯化即用于下一步。LCMS:RT=1.09分钟,MH+:241.5。
将6-氰基-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺(181mg,0.348mmol)和(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-二甲基-胺(140mg,0.29mmol)的1,4-二氧杂环己烷(2mL)溶液脱气10min，加入二(三环己基膦)钯(0)(19.4mg,0.029mmol)和饱和NaHCO3水溶液(0.73mL,0.87mmol)。将反应混合物在微波中在120℃加热20min。反应混合物用EtOAc稀释，用水(5×)洗涤。分离有机相，干燥(MgSO4)，浓缩。然后粗品通过HPLC来纯化，得到37mg所需产物。LCMS:RT=1.82分钟;MH+:554.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.45(s,1H)9.75(t,J=5.90Hz,1H)9.33(d,J=8.28Hz,1H)8.75(s,1H)8.66(d,J=2.01Hz,1H)8.40(d,J=1.76Hz,1H)7.69(d,J=8.03Hz,2H)7.52(ddd,J=11.92,7.91,2.01Hz,1H)7.43(d,J=8.03Hz,2H)7.33-7.40(m,1H)7.26(宽单峰,1H)5.12(五重峰,J=7.22Hz,1H)4.62-4.84(m,2H)3.05(s,6H)1.52(d,J=7.03Hz,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-138.99至-138.73(m,1F),-141.59至-141.31(m,1F)。
实施例63：5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{[5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡嗪-2-基甲基]氨基}吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201721
5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡嗪-2-甲腈：5-溴-吡嗪-2-甲腈(0.078g,0.00042mol)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(102mg,0.000416mol)的1,4-二氧杂环己烷(1.70mL)溶液用氩气脱气5分钟。然后先后加入二(三环己基膦)钯(0)(22mg,0.000033mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.90mL,0.0011mol)。将反应混合物在微波中在120℃加热20分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。残留物通过硅胶色谱(使用0-10%甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂)来纯化。分离到23mg(25%)产物(Rf＝0.46[10%甲醇/二氯甲烷])。ESI-MS(M+H+):222.92。
5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{[5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡嗪-2-基甲基]氨基}吡啶-3-甲酰胺。兰尼镍催化剂(约50mg)用甲醇洗涤5次。加入5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡嗪-2-甲腈(0.0144g,0.0648mmol)在2.0M氨/甲醇(2.0mL,4.0mmol)中的溶液。将反应混合物迅速抽空，然后在氢气(气囊)下搅拌90min。混合物用甲醇稀释，然后用PTFE滤器过滤。然后滤器先后用ACN(乙腈)和ACN-MeOH洗涤，将滤液真空浓缩。样品用甲醇稀释，蒸发(重复)。将残留物在二甲基亚砜(1.0mL)和N,N-二异丙基乙胺(57μl,0.33mmol)中吸收，加入5-氰基-2-氟-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(22mg,0.076mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物稀释在乙酸乙酯中，用水和饱和氯化钠洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。残留物通过制备性HPLC来纯化，得到1.4mg产物，其为TFA盐(3.6%)。
ESI-MS(M+H+):493.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.84(宽单峰,1H),9.61(t,J=5.40Hz,1H),9.28(s,1H),9.24(d,J=1.76Hz,1H),9.01(d,J=7.28Hz,1H),8.92(d,J=1.76Hz,1H),8.68(s,1H),8.57(d,J=1.76Hz,1H),8.51(d,J=1.76Hz,1H),8.26(s,1H),7.44(dd,J=5.65,8.41Hz,2H),7.16(t,J=8.91Hz,2H),5.13(五重峰,J=6.96Hz,1H),4.88(d,J=5.27Hz,2H),1.47(d,J=7.03Hz,3H)。0.2个TFA/分子。
实施例64以与实施例63相同的方法来合成。
实施例65：5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{[6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶-3-基甲基]氨基}吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201731
2-[(6-氯-吡啶-3-基甲基)氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。向搅拌的5-氰基-2-氟-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(0.400g,0.00139mol)的二甲基亚砜(8.5mL)溶液中先后加入(6-氯-吡啶-3-基)甲胺(401mg,0.00281mol)和N,N-二异丙基乙胺(1.3mL,0.0075mol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和饱和氯化钠洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。残留物通过硅胶色谱(使用0-50%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化。分离到492mg(86%)产物(Rf＝0.79[1:1己烷/乙酸乙酯])。ESI-MS(M+H+):409.90。
5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{[6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶-3-基甲基]氨基}吡啶-3-甲酰胺。2-[(6-氯-吡啶-3-基甲基)氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(43mg,0.00018mol)的1,4-二氧杂环己烷(1.00mL)溶液用氩气脱气5分钟。然后先后加入二(三环己基膦)钯(0)(7mg,0.00001mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.305mL)。将容器抽空，在氩气下搅拌。将反应混合物密封，搅拌，在微波中在120℃加热30分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用饱和NaHCO3(加有饱和NaCl以减少乳化)和饱和氯化钠洗涤。每份水洗涤液用二氯甲烷萃取，合并有机相。蒸发有机相。将残留物在DMSO中吸收，过滤，通过制备性HPLC来纯化。分离到45mg(60%)产物，其为TFA盐。ESI-MS(M+H+):492.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(t,J=5.90Hz,1H),9.20(d,J=2.01Hz,1H),9.00(d,J=7.53Hz,1H),8.82(d,J=1.76Hz,1H),8.65(d,J=1.26Hz,1H),8.58(d,J=1.76Hz,1H),8.47(d,J=2.01Hz,1H),8.23(s,1H),8.02(d,J=8.03Hz,1H),7.85(dd,J=1.76,8.28Hz,1H),7.42(dd,J=5.65,8.41Hz,2H),7.14(t,J=8.78Hz,2H),5.10(五重峰,J=6.96Hz,1H),4.66-4.81(m,2H),1.46(d，J=7.03Hz,3H)。0.9个TFA/分子。
实施例66：2-{[6-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶-3-基甲基]氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(0.500g,2.35mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(0.598g,2.74mmol)在吡啶(10.0mL)中搅拌。向搅拌的混合物中加入4-二甲基氨基吡啶(26mg,0.21mmol)。将反应混合物在室温搅拌。3h后，将反应混合物蒸发至干。残留物通过硅胶色谱(使用0-100%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化，得到产物(Rf＝0.27[1:1己烷/乙酸乙酯])(328mg,收率:45%)。ESI-MS(M-叔丁氧羰基+H):212.90/214.80。
3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基硼酸。向小瓶中加入(5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.212g,0.677mmol)、联硼酸二频哪醇酯(0.216g,0.850mmol)、乙酸钾(0.277g,2.82mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(与二氯甲烷的复合物)(53mg,0.065mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(2.58mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1.29mL)。将反应混合物抽空，用氩气冲洗(×5)。在氩气下将反应混合物密封，在110℃用微波处理约2h(间隔为30min)。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。残留物直接用于下一步反应。ESI-MS(M+H+):179.00。
实施例67-68以与实施例66相同的方法来合成。
实施例69：合成5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{[2-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-5-基甲基]氨基}吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201751
(2-氯-嘧啶-5-基甲基)氨基甲酸叔丁酯。将(2-氯嘧啶-5-基)甲胺盐酸盐(0.501g,2.78mmol)、一缩二碳酸二叔丁酯(0.675g,3.09mmol)和4-二甲基氨基吡啶(38mg,0.31mmol)在二氯甲烷(12.0mL)中搅拌。向其中加入三乙胺(1940μl,13.9mmol)，将反应混合物在室温搅拌3天。反应混合物用DMF稀释以有助于溶解，加入硅胶。除去溶剂，残留物通过硅胶色谱(使用0-50%甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂)来纯化。分离到212mg(31%)。ESI-MS(M+H+):243.9。
[2-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-5-基甲基]氨基甲酸叔丁酯。(2-氯-嘧啶-5-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.212g,0.000870mol)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(236mg,0.000961mol)的1,4-二氧杂环己烷(3.5mL,0.045mol)溶液用氩气脱气5分钟。然后先后加入二(三环己基膦)钯(0)(60.0mg,0.0000899mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(2.00mL,0.00240mol)。再次对容器进行脱气，在氩气下密封。将反应混合物搅拌，在微波中在120℃加热20分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。残留物通过硅胶色谱(使用0-100%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化。分离到177mg(62%)产物(Rf＝0.45[乙酸乙酯])。ESI-MS(M+H+):327.00。
5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{[2-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-5-基甲基]氨基}吡啶-3-甲酰胺。向[2-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-5-基甲基]氨基甲酸叔丁酯(0.078g,0.24mmol)在二氯甲烷(1.0mL)中的混悬液中加入三氟乙酸(1.0mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟。将混合物减压蒸发。将残留物在DCM中吸收，蒸发。重复2次。将残留物在二甲基亚砜(2.0mL)中吸收，加入N,N-二异丙基乙胺(176μl,1.01mmol)和5-氰基-2-氟-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(53mg,0.18mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。向反应混合物中加入三氟乙酸(150μl,1.9mmol)，反应混合物通过制备性HPLC来纯化。合并馏分，蒸发溶剂。残留物通过硅胶色谱(使用0-100%乙酸乙酯/己烷)来进一步纯化，得到产物(46.7mg,收率:51%)。ESI-MS(M+H+):493.90。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.84(宽单峰,1H),9.46(d,J=1.51Hz,1H),9.38(t,J=5.77Hz,1H),9.10(d,J=1.51Hz,1H),8.99(d,J=7.28Hz,1H),8.86(s,2H),8.59(d,J=1.51Hz,1H),8.46(d,J=1.76Hz,1H),8.27(s,1H),7.42(dd,J=5.65,8.41Hz,2H),7.14(t,J=8.78Hz,2H),5.10(五重峰,J=6.90Hz,1H),4.64-4.79(m,2H),1.46(d,J=7.03Hz,3H)。0.3个TFA/分子。
实施例70：合成2-{4-[5-氨基-6-(3-氨基-丙基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201761
[3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)丙-2-炔基]氨基甲酸叔丁酯。将3,5-二溴吡嗪-2-胺(1.002g,3.962mmol)、丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯(0.743g,4.79mmol)和碘化亚铜(I)(0.099g,0.52mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(14mL)和三乙胺(5.6mL,40mmol)中。将反应混合物抽空，用氩气回充。重复5次。加入四(三苯基膦)钯(0)(0.250g,0.216mmol)，将反应混合物密封，在氩气下搅拌，在120℃加热15分钟(微波)。反应混合物用DMF稀释，过滤。将溶剂蒸发至干。残留物通过硅胶色谱(使用0-10%甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂)来纯化(Rf＝0.19[5%甲醇/二氯甲烷])。分离到717mg(55%)产物。
ESI-MS(M+H+):326.90.3。
[3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)丙基]氨基甲酸叔丁酯。将[3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)丙-2-炔基]氨基甲酸叔丁酯(0.107g,0.327mmol)溶解在乙醇(2.0mL)中，将反应容器抽空，用氮气置换。加入二氧化铂(5mg,估计量)，将反应容器抽空，然后用氢气置换。将反应混合物在室温和氢气气囊下搅拌过夜。反应混合物用PTFE注射型滤器过滤，蒸发，得到产物(118mg,收率>100%,粗品)。ESI-MS(M+H+):332.90。
3-{3-氨基-6-[4-({5-氰基-3-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-甲基)-苯基]吡嗪-2-基}-丙基氨基甲酸叔丁酯。将5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(163.2mg,0.0003261mol)和[3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.108g,0.000326mol)的1,4-二氧杂环己烷(2.0mL)溶液脱气10min，加入二(三环己基膦)钯(0)(22mg,0.000033mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.80mL,0.00096mol)。将反应混合物在微波中在120℃加热10分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和饱和氯化钠洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品通过硅胶色谱(使用0-10%甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂)来纯化，得到56mg(27%收率)所需产物。ESI-MS(M+H+):625.00。
2-{4-[5-氨基-6-(3-氨基-丙基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将(3-{3-氨基-6-[4-({5-氰基-3-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-甲基)-苯基]吡嗪-2-基}-丙基氨基甲酸叔丁酯(0.056g,0.090mmol)溶解在二氯甲烷(1.0mL)和三氟乙酸(1.0mL)中，在室温搅拌1小时。蒸发溶剂，然后残留物通过制备性HPLC来纯化，得到28mg产物，其为TFA盐。ESI-MS(M+H+):525.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.32(t,J=5.52Hz,1H),9.00(d,J=7.28Hz,1H),8.57(s,1H),8.48(s,1H),8.38(s,1H),7.87(d,J=7.78Hz,2H),7.68(宽单峰,2H),7.37-7.45(m,2H),7.34(d,J=7.78Hz,2H),7.15(t,J=8.53Hz,2H),5.08(五重峰,J=6.78Hz,1H),4.68(d,J=5.52Hz,2H),2.86-2.99(m,2H),2.72(t,J=7.03Hz,2H),2.01(五重峰,J=7.22Hz,2H),1.46(d,J=6.78Hz,3H)。1.6个TFA/分子。
实施例71-95以与实施例70相同的方法使用合适的炔烃和硼酸酯来合成。当苏楚基偶联产物不是氨基甲酸叔丁酯时，不进行脱保护步骤(最后)。
实施例96-157以与实施例41相同的方法来合成。
实施例158：合成(S)-2-(4-(5-氨基-6-(3-(二甲基氨基)丙基)吡嗪-2-基)苄基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
将[3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)-丙基]氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.302mmol)溶解在二氯甲烷(1.0mL)和三氟乙酸(1.0mL)中，在室温搅拌1小时。将反应混合物蒸发至干(与二氯甲烷共沸3次)，溶解在甲醇(2.00mL)和乙酸(0.200mL)中，先后加入多聚甲醛(27mg,0.90mmol)和氰基硼氢化钠(101mg,1.61mmol)，将反应混合物在室温搅拌。4天后，蒸发溶剂，将残留物在乙酸乙酯中吸收，然后先后用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。将残留物与5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(141mg,0.000282mol)一起溶解在1,4-二氧杂环己烷(1.5mL)中。反应混合物通过抽空来脱气，然后用氩气置换(×5)。加入二(三环己基膦)钯(0)(28mg,0.000042mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.60mL,0.00073mol)。将反应混合物在微波中在120℃加热10分钟。蒸发反应混合物，然后在DMSO中吸收，过滤，通过制备性HPLC来纯化，得到49mg所需产物，其为二TFA盐(25%)。ESI-MS(M+H+):553.00。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.43(宽单峰,1H),9.33(t,J=5.77Hz,1H),9.01(d,J=7.28Hz,1H),8.58(d,J=2.01Hz,1H),8.49(d,J=2.01Hz,1H),8.39(s,1H),7.88(d,J=8.03Hz,2H),7.42(dd,J=5.65,8.41Hz,2H),7.34(d,J=8.03Hz,2H),7.15(t,J=8.78Hz,2H),5.09(五重峰,J=7.03Hz,1H),4.69(d,J=5.52Hz,2H),3.10-3.21(m,2H),2.81(d,J=4.77Hz,6H),2.70(t,J=7.03Hz,2H),2.03-2.19(m,2H),1.46(d,J=7.03Hz,3H)。2.2个TFA/分子。
实施例159：合成2-{4-[5-氨基-6-((R)-吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-N-(4-氟苯基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺：
(R)-3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。氢化钠/矿物油(60:40,氢化钠:矿物油,0.105g,2.62mmol)用己烷洗涤2次，然后在四氢呋喃(2.0mL)中吸收。向其中加入(R)-3-羟基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.350g,1.87mmol)。将反应混合物在室温搅拌5分钟，此时反应混合物已变为胶状物。加入3,5-二溴吡嗪-2-胺(0.235g,0.929mmol)的四氢呋喃(2.0mL)溶液，将反应混合物在50℃加热2.5小时。将反应混合物冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠。然后全部物质用乙酸乙酯萃取，用饱和氯化钠洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗产物通过快速柱色谱(使用0-70%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化。分离到160mg(48%)产物(Rf＝0.48,1:1己烷/乙酸乙酯)。ESI-MS(M+H+):358.80。
(R)-3-[3-氨基-6-(4-{[3-(4-氟苯基氨甲酰基)-5-三氟甲基-吡啶-2-基氨基]-甲基}苯基)吡嗪-2-基氧基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。N-(4-氟苯基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(87mg,0.00017mol)和(R)-3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.053g,0.00015mol)的1,4-二氧杂环己烷(1.00mL)溶液通过抽空来脱气，用氩气置换(重复5次)。加入二(三环己基膦)钯(0)(16mg,0.000024mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.35mL,0.00042mol)。将反应混合物在微波中在120℃加热25min。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和饱和氯化钠洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品通过硅胶色谱(使用0-100%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化，得到55mg(56%)所需产物(Rf＝0.28,1:1己烷/乙酸乙酯)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.77(宽单峰,1H),8.53(s,1H),8.02(d,J=10.54Hz,1H),7.92(d,J=1.76Hz,1H),7.74-7.86(m,3H),7.49-7.57(m,2H),7.38-7.46(m,2H),7.09(t,J=8.53Hz,2H),5.62-5.81(m,1H),4.90-5.05(m,2H),4.80(d,J=5.02Hz,2H),3.43-3.80(m,4H),2.26(宽单峰,2H),1.49(宽单峰,9H)。
2-{4-[5-氨基-6-((R)-吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-N-(4-氟苯基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。将(R)-3-[3-氨基-6-(4-{[3-(4-氟苯基氨甲酰基)-5-三氟甲基-吡啶-2-基氨基]-甲基}苯基)吡嗪-2-基氧基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.055g,0.082mmol)溶解在二氯甲烷(1.5mL)和三氟乙酸(0.50mL)中，在室温搅拌15min。将反应混合物蒸发至干。残留物通过制备性HPLC来纯化，得到27.5mg(42%)产物，其为二TFA盐。ESI-MS(M+H+):568.52。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,1H),9.00(宽单峰,2H),8.90(t,J=5.77Hz,1H),8.54(s,1H),8.40(d,J=1.76Hz,1H),8.12(s,1H),7.86(d,J=8.28Hz,2H),7.63-7.74(m,2H),7.39(d,J=8.03Hz,2H),7.22(t,J=8.91Hz,2H),5.71(宽单峰,1H),4.73(d,J=5.52Hz,2H),3.46-3.58(m,2H),3.31-3.45(m,2H),2.16-2.35(m,2H)。1.6个TFA/分子。
实施例160-173以与实施例159相同的方法来合成。
实施例174：合成2-[4-(4-氨基-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苄基氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201801
5-溴-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基胺的合成参见WO2007056170A2。7-溴-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基胺的合成参见WO2007056170A2。
2-[4-(4-氨基-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苄基氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将5-溴-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基胺(0.0562g,0.264mmol)和5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(0.145g,0.290mmol)的1,4-二氧杂环己烷(4.00mL)溶液在氩气下脱气(5×)。加入二(三环己基膦)钯(0)(0.0194g,0.0290mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.660mL,0.791mmol)。将混合物在氩气下脱气，然后在微波中在120℃加热20分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。粗产物通过制备性HPLC来纯化，得到所需产物，其为二TFA盐。ESI-MS(M+H+):507.2。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.81-8.87(m,1H),8.47-8.49(m,1H),8.28(d,J=2.26Hz,1H),7.98(s,1H),7.90(d,J=2.76Hz,1H),7.50(s,4H),7.38-7.44(m,2H),7.04-7.10(m,2H),6.87(d,J=2.76Hz,1H),5.14-5.23(m,1H),4.82(s,2H),1.56(d,J=7.03Hz,3H)。2个TFA/分子。
实施例175-181以与实施例174相同的方法来合成。
实施例182：合成3-[4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)苄基氨基]-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺：
Figure BDA00001732070201811
3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲腈。在120℃历时20分钟通过加料漏斗向氰化钠(7.7g,156mmol,1.0当量)和氰化亚铜(I)(14.0g,156mmol,1.0当量)在DMF(400mL)中的混合物中加入3,5-二溴吡嗪-2-胺(39.5g,156mmol,1.0当量)的DMF(100mL)溶液。将反应混合物在120℃加热过夜。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，减压浓缩。所得到的残留物用乙酸乙酯(2L)和水(1L)洗涤。分离有机层，用饱和盐水(500mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得到的粗产物通过柱色谱(600g硅胶,用10%乙酸乙酯/庚烷(4L)和20%乙酸乙酯/庚烷(8L)洗脱)来纯化，得到标题化合物(16g,52%收率)。EI-MS(M+):197.9。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.39(宽单峰,2H)。
6-溴-3-氯吡嗪-2-甲腈。向3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲腈(13.0g,65.3mmol,1.0当量)在二氯甲烷(520mL)中的混悬液中加入1.0M四氯化钛的二氯甲烷溶液(65.3mL,65.3mmol,1.0当量)。将混合物冷却至0℃，在0℃加入亚硝酸叔丁酯(20.2g,196mmol,3.1当量)。加完后，将反应混合物温热至室温，在室温搅拌2h。反应完成后，反应混合物用水(200mL)淬灭。分离有机层，用饱和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得到的粗产物用AnaLogix(SF40-115g)柱纯化。用于纯化的梯度为历时5分钟的等度庚烷，然后历时20分钟变为15%乙酸乙酯/庚烷。合并纯馏分，减压浓缩，得到标题化合物(12.0g,85%收率)。ESI-MS(M+H+):217.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.68(s,1H)。
5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺。向6-溴-3-氯吡嗪-2-甲腈(9.6g,43.9mmol,1.0当量)的乙醇(200mL)溶液中加入一水合肼(8.8g,176mmol,4.0当量)，将反应混合物加热至80℃过夜。反应完成后，过滤反应混合物，将滤液减压浓缩。所得到的残留物用乙酸乙酯(500mL)稀释，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得到的固体用MTBE(30mL)研磨，得到标题化合物(6.5g,69%收率)。ESI-MS(M+H+):213.9。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(宽单峰,1H),8.54(s,1H),5.84(宽单峰,2H)。
3-[4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-5-基)苄基氨基]-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺。将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基胺(0.0699g,0.327mmol)和6-氰基-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺(0.200g,0.385mmol)在1,4-二氧杂环己烷(1.7mL)中吸收。将反应混合物抽空，用氩气置换(5×)。加入磷酸钾一水合物(0.165g,0.718mmol)的水(0.42mL,23mmol)溶液，将反应混合物再次抽空，用氩气置换(2×)。然后加入二(三环己基膦)钯(0)(0.0160g,0.0239mmol)，将反应混合物密封。将反应混合物在微波中在120℃加热90分钟。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水(2×)洗涤。有机相用硫酸钠干燥，然后蒸发至干。残留物通过制备性HPLC来纯化，得到所需产物，其为黄色固体(66.2mg,38.5%收率)。ESI-MS(M+H+):526.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),9.77(t,J=5.90Hz,1H),9.31-9.36(m,1H),8.99(s,1H),8.74(s,1H),8.08(d,J=8.28Hz,2H),7.52(ddd,J=2.13,7.91,12.05Hz,1H),7.46(d,J=8.53Hz,2H),7.33-7.42(m,1H),7.24-7.29(m,1H),5.09-5.17(m,1H),4.73-4.78(m,2H),1.49-1.54(m,3H)。0个TFA/分子(母体)。
实施例183-184以与实施例182相同的方法来合成。
实施例185：合成2-[4-(5-氨基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-吡嗪-2-基)苄基氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将3-{3-氨基-6-[4-({5-氰基-3-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-甲基)-苯基]吡嗪-2-基甲基}-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.065g,0.10mmol)溶解在二氯甲烷(3.0mL)和三氟乙酸(0.50mL)中，在室温搅拌15min。将反应混合物蒸发至干。残留物通过制备性HPLC来纯化，得到产物(33.3mg,收率:37%)，其为三TFA盐。ESI-MS(M+H+):551.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(t,J=5.77Hz,1H),9.01(d,J=7.28Hz,1H),8.60-8.77(m,2H),8.58(d,J=2.01Hz,1H),8.49(d,J=2.01Hz,1H),8.39(s,1H),7.87(d,J=8.28Hz,2H),7.42(dd,J=5.65,8.66Hz,2H),7.34(d,J=8.28Hz,2H),7.15(t,J=8.78Hz,2H),5.09(五重峰,J=7.03Hz,1H),4.69(d,J=5.77Hz,2H),3.44-3.57(m,1H),3.22-3.34(m,1H),3.08-3.21(m,1H),2.68-2.92(m,4H),2.16(dd,J=5.65,10.42Hz,1H),1.59-1.72(m,1H),1.46(d,J=7.03Hz,3H)。2.6个TFA/分子。
实施例186-187以与实施例185相同的方法来制备。
实施例188：合成2-{4-[5-氨基-6-((R)-3-氨基-哌啶-1-基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201831
[(R)-1-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(0.098g,0.49mmol)的1,4-二氧杂环己烷(0.50mL)溶液中加入3,5-二溴吡嗪-2-胺(0.121g,0.478mmol)和N,N-二异丙基乙胺(100μl,0.574mmol)。混合物在150℃用微波处理3h。溶液用DCM稀释，加入硅胶。除去溶剂，残留物通过快速色谱(0-50%EtOAc/己烷)来纯化，得到标题化合物，其为固体。分离到138mg(78%)(Rf＝0.08[3:1己烷/乙酸乙酯])。
ESI-MS(M+H+):371.90/373.90。
((R)-1-{3-氨基-6-[4-({5-氰基-3-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-甲基)-苯基]吡嗪-2-基}-哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯。5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(76mg,0.00015mol)和[(R)-1-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(0.046g,0.00012mol)的1,4-二氧杂环己烷(1.00mL)溶液通过抽空来脱气，用氩气置换(重复5次)。加入二(三环己基膦)钯(0)(9.4mg,0.000014mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.35mL,0.00042mol)。将反应混合物在微波中在120℃加热25分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和饱和氯化钠洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品通过硅胶色谱(使用0-75%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化，得到69mg(84%)所需产物。ESI-MS(M+H+):666.00。
2-{4-[5-氨基-6-((R)-3-氨基-哌啶-1-基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将((R)-1-{3-氨基-6-[4-({5-氰基-3-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-甲基)-苯基]吡嗪-2-基}-哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.069g,0.10mmol)溶解在二氯甲烷(3.0mL)和三氟乙酸(0.50mL)中，在室温搅拌15min。将反应混合物蒸发至干。残留物通过制备性HPLC来纯化，得到55.0mg(66%)产物，其为二TFA盐。
ESI-MS(M+H+):566.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(t,J=5.65Hz,1H),9.00(d,J=7.53Hz,1H),8.57(d,J=2.01Hz,1H),8.47(d,J=2.01Hz,1H),8.22(s,1H),7.92(宽单峰,3H),7.84(d,J=8.28Hz,2H),7.41(dd,J=5.77,8.53Hz,2H),7.33(d,J=8.28Hz,2H),7.14(t,J=8.78Hz,2H),5.08(五重峰,J=7.03Hz,1H),4.67(d,J=5.52Hz,2H),3.50-3.60(m,1H),3.47(d,J=12.55Hz,1H),3.00-3.12(m,2H),2.94(宽单峰,1H),1.84-1.97(m,2H),1.68(宽单峰,2H),1.45(d,J=7.03Hz,3H)。2.2个TFA/分子。
实施例189-199以与实施例188相同的方法由合适的N-叔丁氧羰基-二胺和硼酸酯来合成。
实施例200：合成2-{4-[5-氨基-6-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-N-(4-氟苯基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201851
[2-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯。将喹啉-8-醇(0.0290g,0.200mmol)、3,5-二溴吡嗪-2-胺(0.253g,1.00mmol)和磷酸钾一水合物(0.460g,2.00mmol)加到带有螺纹帽的小瓶中，加入甲苯(2mL)。对反应混合物进行脱气，用氩气置换(3×)。向反应混合物中加入碘化亚铜(I)(0.0190g,0.100mmol)。再次对混合物进行脱气，用氩气置换(2×)。向反应混合物中加入(2-羟基-1,1-二甲基乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.189g,1.00mmol)的甲苯(1mL)溶液。将反应混合物在110℃和氩气下搅拌16小时。反应混合物用DCM稀释，蒸发至干。残留物通过快速色谱(0-100%乙酸乙酯/己烷)来纯化，得到标题化合物(10.8mg,3%收率)。ESI-MS(M+H+):361.07。
{2-[3-氨基-6-(4-{[3-(4-氟苯基氨甲酰基)-5-三氟甲基-吡啶-2-基氨基]-甲基}苯基)吡嗪-2-基氧基]-1,1-二甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯。N-(4-氟苯基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(0.0252g,0.0000488mol)和[2-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.00980g,0.0000271mol)的1,4-二氧杂环己烷(0.529mL)溶液通过抽空来脱气，用氩气置换(重复5次)。加入二(三环己基膦)钯(0)(0.00181g,0.00271mmol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(154μl,0.000184mol)。将反应混合物在微波中在120℃加热25分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和饱和氯化钠洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残留物通过硅胶色谱(使用0-50%EtOAc/己烷作为洗脱剂)来纯化，得到15.7mg(86.4%)产物。ESI-MS(M+H+):670.47。
2-{4-[5-氨基-6-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-N-(4-氟苯基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。将{2-[3-氨基-6-(4-{[3-(4-氟苯基氨甲酰基)-5-三氟甲基-吡啶-2-基氨基]-甲基}苯基)吡嗪-2-基氧基]-1,1-二甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯(0.0157g,0.0234mmol)溶解在二氯甲烷(3.0mL)和三氟乙酸(0.50mL)中，在室温搅拌15min。将反应混合物蒸发至干。将残留物在DMSO中吸收，通过制备性HPLC来纯化，得到2.9mg(18%)产物，其为单TFA盐。ESI-MS(M+H+):570.16。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ10.24(s,1H),8.45(dd,J=1.00,2.26Hz,1H),8.31-8.33(m,1H),8.04(s,1H),7.86-7.89(m,2H),7.65(ddd,J=3.01,4.89,9.16Hz,2H),7.42(d,J=8.53Hz,2H),7.06-7.11(m,2H),4.78(s,1H),4.50(s,2H),1.52(s,6H)。1.4个TFA/分子。
实施例201：合成(S)-2-(4-(6-氨基-5氨甲酰基吡啶-3-基)苄基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201861
向2-氨基-5-溴吡啶-3-甲酸(216mg,1.0mmol)的THF(4mL)溶液中加入NH4Cl(265mg,5.0mmol,5.0当量)、TEA(505mg,5.0mmol,5.0当量)和HATU(760mg,2.0mmol,2.0当量)。将反应混合物在45℃搅拌30min。将混合物冷却至室温，浓缩。加入H2O(20mL)，残留物用EA(30mL×3)萃取。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。粗产物通过硅胶柱(PE/EA=1/1)来纯化，得到化合物2-氨基-5-溴吡啶-3-甲酰胺，其为黄色固体(54mg,收率:25%)。ESI-MS(M+H+):215.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.14(宽峰,2H),8.05(s,1H),7.47(s,1H),7.38(宽峰,2H)。
向(S)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酰胺(165mg,0.33mmol,1.1当量)的二氧杂环己烷(2mL)溶液中加入2-氨基-5-溴吡啶-3-甲酰胺(65mg,0.3mmol,1.0当量)、Pd(dppf)Cl2·DCM(25mg,0.03mmol,0.1当量)和K2CO3(82mg,0.6mmol,2.0当量)的H2O(0.4mL)溶液。将反应混合物在90℃搅拌2h。将混合物冷却至室温，浓缩。加入H2O(30mL)，残留物用EA(50mL×3)萃取。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。粗产物通过硅胶柱(DCM/MeOH=20/1)来纯化，得到(S)-2-(4-(6-氨基-5氨甲酰基吡啶-3-基)苄基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体(80mg,收率:53%)。ESI-MS(M+H+):510.2。HPLC:90.57%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.33(s,1H),9.01-9.00(m,1H),8.58(s,1H),8.48(s,1H),8.40(s,1H),8.22(s,1H),8.11(宽峰,1H),7.62-7.60(m,2H),7.43-7.41(m,7H),7.17-7.13(m,2H),5.11-5.07(m,1H),4.68(s,2H),1.46-1.45(m,3H)。
实施例202-221以与实施例201相同的方法由合适的胺和硼酸酯来合成。在最后一步需要用酸进行脱保护。对于这些反应，应该注意的是，在酰胺偶联步骤中使用N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(HATU)代替O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，这与环丙烷-1,1-二羧酸[(R)-1-(4-溴苯基)乙基]酰胺·[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺的合成是类似的。对于这些化合物，应该注意的是，苏楚基偶联步骤用二(三环己基膦)钯(0)作为催化剂进行，这与5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡嗪-2-甲腈的合成是类似的。
实施例222：合成5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{4-[6-(2-羟基乙基氨基)吡啶-3-基]苄基氨基}吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201871
2-(5-溴-吡啶-2-基氨基)-乙醇。将5-溴-2-氯-吡啶(0.612g,3.18mmol)在乙醇胺(1.92mL,31.8mmol)中的混合物在微波炉中在170℃加热2h。冷却至室温后，反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。粗产物通过快速色谱(二氯甲烷)来纯化，得到标题化合物，其为白色固体(71%收率)。ESI-MS(M+H+):216.9/218.9。
5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-{4-[6-(2-羟基乙基氨基)吡啶-3-基]苄基氨基}吡啶-3-甲酰胺。将5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(0.1076g,0.2150mmol)和2-(5-溴-吡啶-2-基氨基)-乙醇(0.05601g,0.2580mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL,25.8mmol)溶液在氩气下脱气。然后加入[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(与二氯甲烷的复合物)(0.0157g,0.0192mmol)和1.2M碳酸钠水溶液(0.538mL,0.645mmol)，将混合物在70℃加热。3小时后，将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，通过HPLC来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):510.9。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.80-8.87(m,1H),8.43-8.49(m,1H),8.25-8.28(m,1H),8.21-8.25(m,1H),8.03-8.06(m,1H),7.55-7.60(m,1H),7.46(d,J=8.53Hz,2H),7.38-7.44(m,2H),7.18-7.21(m,J=0.50Hz,1H),7.04-7.10(m,2H),5.14-5.22(m,1H),4.78(s,2H),3.84(d,J=10.29Hz,2H),3.57(d,J=10.29Hz,2H),2.67(s,1H),1.55(d,J=7.03Hz,3H)。2个TFA/分子。
实施例223-224以与实施例222相同的方法来制备。
实施例225：合成5-氰基-2-{4-[5-(3-二甲基氨基丙基氨基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201881
N’-(5-溴-吡嗪-2-基)-N,N-二甲基-丙烷-1,3-二胺。将N,N-二异丙基乙胺(0.1740mL,0.9988mmol)加到2,5-二溴-吡嗪(0.2376g,0.9988mmol)和N,N-二甲基-丙烷-1,3-二胺(0.1020g,0.9988mmol)的丁-1-醇(3.00mL,32.8mmol)溶液中，将混合物在微波中在160℃加热30分钟。然后将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，浓缩。粗产物通过快速色谱(0-10%MeOH/二氯甲烷)来纯化，得到N’-(5-溴-吡嗪-2-基)-N,N-二甲基-丙烷-1,3-二胺(34%收率)。ESI-MS(M+H+):260.2。
5-氰基-2-{4-[5-(3-二甲基氨基丙基氨基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(0.130g,0.260mmol)和N’-(5-溴-吡嗪-2-基)-N,N-二甲基-丙烷-1,3-二胺(0.0808g,0.312mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL,64.6mmol)溶液在氩气下脱气。然后加入[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(与二氯甲烷的复合物)(0.0380g,0.0465mmol)和1.2M碳酸钠水溶液(0.650mL,0.779mmol)，将混合物在70℃加热。3小时后，将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。粗产物通过HPLC来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):553.32。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.81-8.85(m,1H),8.54(d,J=1.51Hz,1H),8.48(d,J=2.01Hz,1H),8.26(d,J=2.26Hz,1H),8.19(d,J=1.51Hz,1H),7.82-7.87(m,2H),7.38-7.44(m,4H),7.04-7.10(m,2H),5.16-5.22(m,1H),4.77(宽单峰,2H),3.77(t,J=6.53Hz,2H),3.19(s,3H),3.04(t,J=7.15Hz,2H),2.74(s,3H),2.01-2.11(m,2H),1.55(d,J=7.03Hz,3H)。2个TFA/分子。
实施例226-228以与实施例225相同的方法来制备。
实施例229：合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(4-(5-(2-羟基乙基氨基)吡嗪-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201891
N-(3,4-二氟苄基)-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。将N,N-二异丙基乙胺(5.0178mL,28.808mmol)加到2-氯-N-(3,4-二氟苄基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(2.0204g,5.7615mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基胺盐酸盐(1.5532g,5.7615mmol)的二甲基亚砜(16.355mL,230.46mmol)溶液中，将混合物在80℃加热。3小时后，将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，先后用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到标题化合物(84%收率)。ESI-MS(M+H+):548.2。
2-[4-(5-氯-吡嗪-2-基)苄基氨基]-N-(3,4-二氟苄基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。将N-(3,4-二氟苄基)-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(2.64g,0.00482mol)和2-溴-5-氯-吡嗪(0.933g,0.00482mol)的N,N-二甲基甲酰胺(37.3mL,0.482mol)溶液在氩气下脱气10分钟。加入[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(与二氯甲烷的复合物)(0.353g,0.000432mol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(12.0mL,0.0145mol)，将反应混合物在油浴中在70℃加热。3小时后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，然后用水和饱和氯化铵溶液洗涤。然后有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。粗产物通过硅胶色谱(用0-40%EtOAc/己烷洗脱)来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):534.2。1H NMR(400MHz,DMF-d7)δ9.30-9.40(m,2H),9.08(d,J=1.51Hz,1H),8.83(d,J=1.51Hz,1H),8.49(d,J=1.25Hz,1H),8.35(d,J=2.01Hz,1H),8.07(d,J=8.53Hz,2H),7.47(d,J=8.28Hz,2H),7.35-7.44(m,2H),7.15-7.22(m,1H),4.77(d,J=5.77Hz,2H),4.45(d,J=5.77Hz,2H)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-(4-(5-(2-羟基乙基氨基)吡嗪-2-基)苄基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：将N,N-二异丙基乙胺(0.0110mL,0.0634mmol)加到2-[4-(5-氯-吡嗪-2-基)苄基氨基]-N-(3,4-二氟苄基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(0.028g,0.053mmol)和乙醇胺(0.00383mL,0.0634mmol)的丁-1-醇(2.00mL,21.9mmol)溶液中。将混合物在微波中在170℃加热30分钟。HPLC和LCMS分析显示反应不完全。因此，将混合物在微波中在180℃再加热45分钟。反应仍不完全。因此，加入0.1mL N,N-二异丙基乙胺，将反应混合物在微波中在180℃以1小时间隔加热，通过HPLC来监测反应是否完成。然后将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用水(3×)洗涤。将有机相减压浓缩至干，通过制备性HPLC来纯化，得到标题化合物，其为TFA盐。ESI-MS(M+H+):559.4。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.81-8.87(m,1H),8.47-8.51(m,1H),8.35-8.39(m,1H),8.23-8.28(m,1H),8.13-8.17(m,1H),7.80-7.86(m,2H),7.38-7.46(m,4H),7.04-7.12(m,2H),5.15-5.24(m,1H),4.75-4.80(m,2H),3.79(t,2H),3.56(t,J=5.52Hz,2H),2.69(s,1H),1.56(d,J=7.28Hz,3H)。1个TFA/分子。
实施例230-231以与实施例225相同的方法来制备。
实施例232：合成2-[4-(5-氨基-6-二甲基氨基甲基-吡嗪-2-基)苄基氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201901
3-氨基-6-溴-吡嗪-2-甲酸二甲基酰胺。将N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(2.36g,6.19mmol)加到N,N-二异丙基乙胺(3.269mL,18.77mmol)、3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸(0.900g,4.13mmol)和二甲胺盐酸盐(0.3061g,3.754mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20.9mL,2.70E2mmol)溶液中。将混合物在室温搅拌72小时，然后其用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。然后有机相用饱和氯化铵水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干，得到标题化合物，其为红棕色固体。ESI-MS(M+H+):244.89。
6-溴-3-二甲基氨基甲基-吡嗪-2-基胺。将1M氢化锂铝的四氢呋喃溶液(0.6984mL,0.6984mmol)加到3-氨基-5-溴-吡嗪-2-甲酸二甲基酰胺(0.1556g,0.6349mmol)的四氢呋喃(4.00mL,49.3mmol)溶液中。将混合物在室温搅拌2小时。然后反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干，得到标题化合物(38%收率)。ESI-MS(M+H+):230.8。
2-[4-(5-氨基-6-二甲基氨基甲基-吡嗪-2-基)苄基氨基]-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将5-溴-3-二甲基氨基甲基-吡嗪-2-基胺(0.0554g,0.240mmol)和5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(0.144g,0.288mmol)的1,4-二氧杂环己烷(4.50mL,57.7mmol)溶液在氩气下脱气。加入二(三环己基膦)钯(0)(0.0176g,0.0264mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.599mL,0.719mmol)。将混合物在氩气下脱气，然后在微波中在120℃加热20分钟。然后反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。将粗产物溶解在DMSO中，通过制备性HPLC来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):525.49。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.81-8.86(m,1H),8.55(宽单峰,1H),8.46-8.48(m,1H),8.25-8.27(m,1H),7.94-7.99(m,2H),7.37-7.46(m,4H),7.03-7.11(m,2H),5.14-5.22(m,1H),4.77(宽单峰,2H),4.44(宽单峰,2H),3.11(s,6H),1.55(d,J=7.28Hz,3H)。3个TFA/分子。
实施例233：合成2-{4-[5-氨基-6-(1,2,3,6-四氢-吡啶-4-基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201911
4-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯。将3,5-二溴吡嗪-2-胺(0.4164g,1.646mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(0.5346g,1.729mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.09513g,0.08233mmol)在10mL微波管中混合。将混合物在氩气下脱气，然后加入二甲氧基甲烷(6.00mL,67.8mmol)和1.2M碳酸钠水溶液(3.00mL,3.60mmol)。将反应混合物在氩气下脱气，密封，在微波中在130℃加热45分钟。混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。将粗产物吸附到硅胶上，通过快速色谱(0-50%EtOAc/己烷)来纯化，得到标题化合物(69%收率)。
ESI-MS(M+H+):357.21。
4-{3-氨基-6-[4-({5-氰基-3-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-甲基)-苯基]吡嗪-2-基}-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯。将4-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0.0679g,0.191mmol)和5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(0.105g,0.210mmol)的1,4-二氧杂环己烷(4.50mL,57.7mmol)溶液在氩气下脱气。加入二(三环己基膦)钯(0)(0.0128g,0.0191mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.478mL,0.573mmol)。将混合物在氩气下脱气，然后在微波中在120℃加热20分钟。将反应混合物冷却至室温，然后用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。将粗产物吸附到硅胶上，通过快速色谱(0-100%EtOAC/己烷)来纯化，得到标题化合物(53%收率)。ESI-MS(M+H+):649.0。
2-{4-[5-氨基-6-(1,2,3,6-四氢-吡啶-4-基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将三氟乙酸(0.50mL,6.5mmol)加到4-{3-氨基-6-[4-({5-氰基-3-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基氨甲酰基]-吡啶-2-基氨基}-甲基)-苯基]吡嗪-2-基}-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0.0662g,0.102mmol)的二氯甲烷(2.00mL,31.2mmol)溶液中，将混合物搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗产物溶解在DMSO中，通过制备性HPLC来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):549.4。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.81-8.85(m,1H),8.77-8.89(m,1H),8.47(d,J=2.01Hz,1H),8.38(s,1H),8.25(d,J=2.01Hz,1H),7.85-7.90(m,2H),7.37-7.44(m,4H),7.03-7.10(m,2H),6.38-6.42(m,1H),5.13-5.23(m,1H),4.76(宽单峰,2H),3.89-3.94(m,2H),3.54(t,J=6.15Hz,2H),2.92-2.98(m,2H),1.55(d,J=7.03Hz,3H)。1个TFA/分子。
实施例234：合成2-{4-[5-氨基-6-(3-羟基苯基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201921
3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)-苯酚。将3,5-二溴吡嗪-2-胺(0.3041g,1.202mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(0.2779g,1.262mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.06948g,0.06012mmol)在10mL微波管中混合。将混合物在氩气下脱气，然后加入二甲氧基甲烷(4.00mL,45.2mmol)和1.2M碳酸钠水溶液(2.004mL,2.405mmol)。将混合物在氩气下脱气，密封，在微波中在130℃加热45分钟。混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。将粗产物吸附到硅胶上，通过快速色谱(0-50%EtOAc/己烷)来纯化，得到标题化合物(60%收率)。ESI-MS(M+H+):268.0。
2-{4-[5-氨基-6-(3-羟基苯基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将3-(3-氨基-6-溴-吡嗪-2-基)-苯酚(0.0542g,0.204mmol)和5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(0.112g,0.224mmol)的1,4-二氧杂环己烷(4.00mL,51.2mmol)溶液在氩气下脱气。加入二(三环己基膦)钯(0)(0.01359g,0.02037mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.5092mL,0.6111mmol)。将混合物在氩气下脱气，然后在微波中在120℃加热20分钟。然后反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。将粗产物溶解在DMSO中，通过制备性HPLC来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):560.5。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.46-8.48(m,1H),8.34(s,1H),8.25(d,J=2.26Hz,1H),7.90-7.94(m,2H),7.36-7.45(m,5H),7.21-7.28(m,2H),7.03-7.10(m,2H),6.94-6.98(m,1H),5.14-5.21(m,1H),4.75-4.78(m,2H),1.55(d,J=7.03Hz,3H)。2个TFA/分子。
实施例235-239以与实施例234相同的方法来制备。
实施例240以与实施例225相同的方法来制备。
实施例241-242以与实施例240相同的方法来制备。
实施例243：合成2-{4-[5-氨基-6-(2,3-二羟基丙基氨基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201931
5-溴-N(3)-(2,2-二甲基-[1,3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)-吡嗪-2,3-二胺。将3,5-二溴吡嗪-2-胺(0.2819g,1.115mmol)、(2,2-二甲基-[1,3]二氧杂环戊烷-4-基)甲胺(0.1608g,1.226mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.2330mL,1.338mmol)和1,4-二氧杂环己烷(3.00mL,38.4mmol)的混合物在微波中在150℃加热8小时。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干，得到标题化合物(93%收率)。
ESI-MS(M+H+):305.2。
2-(4-{5-氨基-6-[(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基]吡嗪-2-基}苄基氨基)-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将5-溴-N(3)-(2,2-二甲基-[1,3]二氧杂环戊烷-4-基甲基)-吡嗪-2,3-二胺(0.0984g,0.324mmol)(13538-094)和5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基氨基]吡啶-3-甲酰胺(0.148g,0.295mmol)的1,4-二氧杂环己烷(4.0mL,51mmol)溶液在氩气下脱气。加入二(三环己基膦)钯(0)(0.0197g,0.0295mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.738mL,0.885mmol)。将混合物在氩气下脱气，然后在微波中在120℃加热20分钟。然后反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。将粗产物吸附到硅胶上，通过快速色谱(0-100%EtOAc/己烷)来纯化，得到标题化合物(37%收率)。
ESI-MS(M+H+):597.38。
2-{4-[5-氨基-6-(2,3-二羟基丙基氨基)吡嗪-2-基]苄基氨基}-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺。将1M氯化氢的水溶液(2.0mL,2.0mmol)加到2-(4-{5-氨基-6-[(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基甲基)氨基]吡嗪-2-基}苄基氨基)-5-氰基-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(0.065g,0.11mmol)的四氢呋喃(0.5mL,6mmol)溶液中，将混合物在室温搅拌1小时。减压除去溶剂。将粗产物溶解在DMSO中，通过制备性HPLC来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):557.3。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.80-8.85(m,1H),8.47(d,J=2.01Hz,1H),8.25(d,J=2.01Hz,1H),7.86-7.90(m,2H),7.55(s,1H),7.38-7.44(m,4H),7.03-7.10(m,2H),5.14-5.23(m,1H),4.76(s,2H),3.97-4.04(m,1H),3.89(dd,J=4.27,13.80Hz,1H),3.57-3.65(m,3H),1.55(d,J=7.03Hz,3H)。1个TFA/分子。
实施例244-245以与实施例243相同的方法来制备。
实施例246：合成N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201941
2-氯-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。在0℃将N,N-二异丙基乙胺(0.280mL,1.61mmol)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(0.336g,0.885mmol)加到2-氯-5-三氟甲基吡啶-3-甲酸(0.133g,0.590mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL,39mmol)溶液中。将混合物搅拌15分钟，然后加入(S)-1-(4-氟苯基)乙基胺(0.0746g,0.536mmol)。将混合物在0℃搅拌3小时，然后将其在减压下吸附到硅胶上，通过快速色谱(0-30%EtOAc/己烷)来纯化，得到标题化合物(45%收率)。
ESI-MS(M+H+):347.1。
N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-2-[4-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。将2-氯-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(0.0410g,0.107mmol)和4-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基胺(53.2mg,0.118mmol)溶解在二甲基亚砜(0.494mL,6.96mmol)中。加入三乙胺(0.0596mL,0.428mmol)，将混合物在80℃加热。4小时后，将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释。混合物先后用NaHCO3、水和盐水洗涤。有机层用MgSO4干燥，过滤，吸附到硅胶上，通过快速色谱(0-100%EtOAc/二氯甲烷)来纯化，得到标题化合物。ESI-MS(M+H+):535.3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.69(s,1H),9.26(t,J=5.77Hz,1H),9.11(d,J=7.53Hz,1H),8.81(d,J=2.26Hz,1H),8.48-8.53(m,1H),8.42-8.46(m,J=0.75Hz,1H),8.39-8.42(m,1H),8.18(d,J=1.25Hz,1H),7.69-7.71(m,1H),7.67-7.69(m,1H),7.37-7.46(m,4H),7.11-7.20(m,2H),5.14(五重峰,J=7.03Hz,1H),4.66-4.79(m,2H),1.48(d,3H)。
实施例247：合成2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)苯甲酰胺：
Figure BDA00001732070201951
向5-氰基-2-氟苯甲酸(1.01g,0.00612mol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.00474mL,0.0000612mol)和二氯甲烷(20mL,0.3mol)中的混悬液中加入草酰氯(0.776mL,0.00918mol)，在室温搅拌1h直到不再冒泡，其变为澄清溶液。将溶剂蒸发掉。然后将残留物溶解在吡啶(4mL,0.05mol)中，然后加入3,4-二氟苄基胺(0.760mL,0.00642mol)，在室温搅拌1h。LC-MS显示完全形成所需产物(1.39min,ES+/291.1)。将溶剂蒸发掉，残留物用DCM和水进行后处理。用MgSO4干燥，通过硅胶柱(0-100%EtOAc/DCM)来纯化，得到所需产物5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-2-氟-苯甲酰胺，其为白色固体(1.5g,84%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.64(d,J=5.77Hz,2H)7.01(宽单峰,1H)7.04-7.23(m,3H)7.29(dd,J=11.17,8.66Hz,1H)7.78-7.84(m,1H)8.49(dd,J=7.03,2.26Hz,1H)。
将5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-2-氟-苯甲酰胺(0.1240g,0.4273mmol)和6-(5-(氨基甲基)噻吩-2-基)喹唑啉-4-胺(0.10g,0.39mmol)溶解在二甲基亚砜(3.8mL,54mmol)和三乙胺(108.8μl,0.7802mmol)中。反应混合物在120℃用微波以200瓦处理25小时(用PowerMAX进行)。LCMS显示反应完成(1.34min,ES+/527.2)。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。有机层用硫酸镁干燥，蒸发。通过快速色谱(0-20%甲醇/乙酸乙酯)来纯化，得到2-(((5-(4-氨基喹唑啉-6-基)噻吩-2-基)甲基)氨基)-5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)苯甲酰胺，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 4.36(d,J=5.52Hz,2H)4.67(d,J=5.52Hz,2H)6.86(d,J=8.78Hz,1H)7.07(d,J=3.76Hz,1H)7.10-7.17(m,1H)7.28-7.38(m,2H)7.43(d,J=3.76Hz,1H)7.54-7.63(m,2H)7.92(dd,J=8.66,2.13Hz,1H)8.05(d,J=2.01Hz,1H)8.28(s,1H)8.35(d,J=2.01Hz,1H)8.98(t,J=5.90Hz,1H)9.10(t,J=5.90Hz,1H)。MS:ES+/527.2。
实施例248：合成(S)-2-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-5-(2,5-二氢呋喃-3-基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
将2-[4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基]-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]-5-碘吡啶-3-甲酰胺(100mg,0.16mmol)、2-(2,5-二氢-呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(158mg,0.8mmol)和1,4-二氧杂环己烷(3.0mL)的混合物脱气10分钟。然后加入二(三环己基膦)钯(0)(11mg,0.016mmol)和1.2M碳酸氢钠饱和水溶液(0.40mL,0.48mmol)。将反应混合物在微波中在120℃加热30分钟。反应混合物用EtOAc稀释，用水(2×)洗涤。分离有机相，干燥，浓缩。粗品通过HPLC来纯化，得到化合物(S)-2-(4-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苄基氨基)-5-(2,5-二氢呋喃-3-基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺(32mg)。LCMS:RT=1.24分钟;MH+:564.00。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.94(d,J=7.53Hz,1H)8.84(t,J=5.65Hz,1H)8.42(s,1H)8.19(d,J=3.51Hz,2H)7.58(s,1H)7.32-7.48(m,6H)7.16(t,J=8.78Hz,2H)6.36(s,1H)5.10-5.18(m,1H)4.90(宽单峰,2H)4.62-4.78(m,4H)3.83(s,3H)1.49(d,J=7.03Hz,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-78.50(TFA,s,6F),-120.75(s,1F)。
实施例249：合成(S)-2-(3-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)丙-2-炔基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：
步骤1：合成3-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯：将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(200.00mg,1.0100mmol)、丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯(0.392g,2.52mmol)、碘化亚铜(I)(9.62mg,0.0505mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](0.0825g,0.101mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1210μl,6.97mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL,25.8mmol)的混合物溶解，向其上加载氩气气氛。将反应混合物在80℃加热4h。稀释反应混合物(DCM)，洗涤(NaHCO3和盐水)，干燥(MgSO4)，蒸发。SiO2纯化DCM→MeOH，回收到0.193g米色固体。LCMS m/z 273(M+1)。
步骤2：合成3-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)丙-2-炔-1-胺：将3-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯(0.104g,0.382mmol)溶解在二氯甲烷(3mL,50mmol)和三氟乙酸(1mL,10mmol)中，在室温搅拌1小时。LC-MS显示产物形成(在HPLC洗脱时间具有相应的质量)。将粗品浓缩至干，加入二氯甲烷，再次浓缩以除去过量的TFA。粗品在干燥后直接用于下一步。
步骤3：合成(S)-2-(3-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)丙-2-炔基氨基)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)吡啶-3-甲酰胺：向3-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)丙-2-炔-1-胺的二甲基亚砜(1.5mL,0.021mol)溶液中先后加入N,N-二异丙基乙胺(0.329mL,0.00189mol)和5-氰基-2-氟-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(0.108g,0.000377mol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。LCMS显示完全转化为与产物一致的新峰(100%,RT=1.61min,m/z=440.00)。用几滴TFA酸化后，将反应混合物直接注射到HPLC中。收集产物，浓缩。LCMS m/z440.00(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(t,J=5.65Hz,1H),9.02(d,J=7.53Hz,1H),8.68(d,J=2.01Hz,1H),8.51(dd,J=2.13,3.14Hz,2H),8.32(d,J=2.01Hz,1H),8.14(s,1H),7.43(dd,J=5.52,8.53Hz,2H),7.15(t,J=8.91Hz,2H),5.11(t,J=7.15Hz,1H),4.55(d,J=5.52Hz,2H),1.47(d,J=7.03Hz,3H)。
实施例250：合成(S)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-2-(2-(2-(甲基氨基)喹唑啉-6-基氧基)乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070201981
步骤1：合成2-(2-溴喹唑啉-6-基氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯：将(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(165μl,0.00107mol)、2-溴-喹唑啉-6-醇(200mg,0.0009mol)和三苯基膦(2.80E2mg,0.00107mol)的混合物溶解在四氢呋喃(9mL,0.1mol)中，滴加偶氮二羧酸二异丙酯(0.210mL,0.00107mol)，在室温搅拌。产物出现在1.44(278.9,M+1,100%)。混合物用DCM稀释，用5%枸橼酸(1×)、碳酸氢钠(1×)和盐水(1×)洗涤，然后干燥有机层，浓缩。粗品通过硅胶色谱[己烷/EA(0-100)]来纯化，得到产物。LCMS m/z 278.9(M+1)。
步骤2：合成2-(2-(甲基氨基)喹唑啉-6-基氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯：将2-(2-溴喹唑啉-6-基氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(0.100g,0.272mmol)和2.0M甲胺的四氢呋喃溶液(0.163mL,0.326mmol)溶解在3-甲基-丁-1-醇(3mL,30mmol)中，将反应混合物加热至145℃且保持12小时。LC-MS显示产物形成(0.95,319M+1)。反应混合物用二氯甲烷稀释，用枸橼酸(1×)、碳酸氢钠(1×)和盐水(1×)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，浓缩。然后粗品通过硅胶色谱(0-50%二氯甲烷/甲醇)来纯化，得到60mg产物。LCMS m/z 319.00(M+1)。
步骤3：合成6-(2-氨基乙氧基)-N-甲基喹唑啉-2-胺：将2-(2-(甲基氨基)喹唑啉-6-基氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(0.060g,0.19mmol)溶解在二氯甲烷(3mL,50mmol)和三氟乙酸(0.2mL,2mmol)中，在室温搅拌1小时。LC-MS显示产物形成(在HPLC洗脱时间具有相应的质量)。将粗品浓缩至干，加入二氯甲烷，再次浓缩以除去过量的TFA。粗品在干燥后直接用于下一步。LCMS m/z 219.00(M+1)。
步骤4：合成(S)-5-氰基-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-2-(2-(2-(甲基氨基)喹唑啉-6-基氧基)乙基氨基)吡啶-3-甲酰胺：向6-(2-氨基乙氧基)-N-甲基喹唑啉-2-胺(0.041g,0.00019mol)的二甲基亚砜(0.75mL,0.010mol)溶液中先后加入N,N-二异丙基乙胺(0.164mL,0.000939mol)和5-氰基-2-氟-N-[(S)-1-(4-氟苯基)乙基]吡啶-3-甲酰胺(0.0540g,0.000188mol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。LCMS显示完全转化为与产物一致的新峰(100%,RT=1.26min,m/z=485.9)。用几滴TFA酸化后，将反应混合物直接注射到HPLC中。收集产物，浓缩。LCMS m/z 485.9(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(d,J=5.27Hz,2H),8.98(d,J=7.53Hz,1H),8.63(d,J=2.01Hz,1H),8.48(d,J=2.01Hz,1H),7.58(宽单峰,1H),7.49(宽单峰,2H),7.41(dd,J=5.77,8.53Hz,2H),7.14(t,J=8.91Hz,2H),5.09(t,J=7.15Hz,1H),4.22(t,J=5.65Hz,2H),3.88(dd,J=2.76,5.52Hz,2H),2.97(s,3H),1.45(d,J=7.03Hz,3H)。
实施例251-254以与实施例250相同的方法来制备。
Figure BDA00001732070201991
合成6-溴-N-甲基喹唑啉-2-胺：将6-溴-2-氯-喹唑啉(0.215g,0.883mmol)和2.0M甲胺的四氢呋喃溶液(0.530mL,1.06mmol)溶解在3-甲基-丁-1-醇(9mL,80mmol)中，将反应混合物加热至145℃且保持12小时。LC-MS显示产物形成(0.95)。反应混合物用二氯甲烷稀释，用枸橼酸(1×)、碳酸氢钠(1×)和盐水(1×)萃取。有机层用硫酸镁干燥，浓缩。然后粗品通过柱(0-50%二氯甲烷/甲醇)来纯化，得到92mg产物。LCMS m/z 237.9(M+1)。
合成6-溴喹唑啉-2-胺：将6-溴-2-氯-喹唑啉(0.500g,2.05mmol)和7M氨的甲醇溶液(0.352mL,2.46mmol)溶解在3-甲基-丁-1-醇(20mL,200mmol)中，将反应混合物加热至145℃且保持12小时。LC-MS显示产物形成(0.55,241.9M+NH4 +)。明显的是，产物在反应后析出，因此过滤反应混合物，用水洗涤以除去所有盐。固体的NMR与产物一致，因此其直接用于下一步。LCMS m/z241.9M+NH4 +。
实施例255-258以与实施例249类似的方法由丙-2-炔基氨基甲酸叔丁酯及合适的6-溴喹唑啉和卤化吡啶-3-甲酰胺来制备。
实施例259：合成1-(4-(5-氨基吡嗪-2-基)苄基)-3-(3,4-二氟苄基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲腈：
Figure BDA00001732070201992
将5-溴-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(3.0g,9.3mmol)、4-甲氧基苄基溴(2.2g,11.1mmol,1.2当量)和NaOtBu(叔丁醇钠)(6.0g,18.6mmol,2.0当量)在DMF(100mL)中的混合物在20℃搅拌2h。然后加入水，混合物用EtOAc(200mL)萃取。有机相用水(100mL×2)洗涤，浓缩，得到5-溴-3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(2.3g,收率:43%)，其为黄色固体。ESI-MS(M+H+):443.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.73(d,1H),8.24(d,1H),7.23(d,2H),6.87(d,2H),5.59(s,2H),3.70(s,3H)。
将5-溴-3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(1.8g,4.1mmol)、CuI(234mg,1.2mmol,0.3当量)、吡咯烷-2-甲酸(138mg,1.2mmol,0.3当量)和K2CO3(2.7g,20mmol,5.0当量)在DMSO(50mL)中的混合物在100℃搅拌4h。将混合物冷却至室温，残留物用EtOAc(200mL)稀释，用水(100mL×3)洗涤，干燥。浓缩有机相，通过硅胶(EA:PE=1:1)来纯化，得到5-溴-N-(3,4-二氟苄基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(700mg,收率:37.6%)，其为白色固体。ESI-MS(M+H+):459.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.49-8.43(m,2H),7.44-7.33(m,2H),7.23(s,1H),7.09-7.02(m,3H),6.79(d,2H),5.28(s,2H),4.43(d,2H),3.69(s,3H)。
将5-溴-N-(3,4-二氟苄基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(300mg,0.65mmol)、CuCN(116mg,1.3mmol,2.0当量)、Pd(PPh3)4(75mg,0.06mmol,0.1当量)和TEA(130mg,1.3mmol,2.0当量)在二氧杂环己烷(100mL)中的混合物在130℃和氮气气氛下搅拌16h。反应完成后，除去溶剂，残留物通过硅胶(EA:PE=2:1)来纯化，得到5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(150mg,收率:56.6%)，其为黄色固体。ESI-MS(M+H+):406.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.64(d,1H),8.12(d,1H),7.28-7.26(m,3H),7.12-7.10(m,2H),6.83-6.81(m,3H),5.43(s,2H),4.55(d,2H),3.77(s,3H)。
将5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(400mg,1.0mmol)、BBr3(375mg,1.5mmol,1.5当量)和TEA(1.0g,10mmol,10当量)的DCM(20mL)溶液在-10℃搅拌1h，然后温热至室温且保持16h，反应完成后，除去溶剂，残留物通过硅胶(EA:PE=4:1)来纯化，得到3-(3,4-二氟苄基氨基)-1-(4-羟基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲腈(230mg,收率:46%)，其为黄色固体。ESI-MS(M+H+):392.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.27(宽峰,1H),8.83(s,1H),8.78(s,1H),7.51-7.41(m,2H),7.31(宽峰,1H),7.07(d,2H),6.70(d,2H),5.34(s,2H),4.51(d,2H)。
向3-(3,4-二氟苄基氨基)-1-(4-羟基苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲腈(230mg,0.59mmol)的DCM(20mL)溶液中加入Tf2O(三氟甲磺酸酐)(332mg,1.2mmol,2.0当量)和TEA(300mg,3.0mmol,5.0当量)，然后将反应溶液在-78℃搅拌30min，温热至室温且保持1.5h，反应完成后，浓缩混合物，通过硅胶(EA:PE=1:2)来纯化，得到相应的三氟甲磺酸酯(100mg,收率:32.5%)，其为黄色固体。ESI-MS(M+H+):524.4。
装有上述三氟甲磺酸酯(170mg,0.32mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(163mg,0.64mmol,2.0当量)、KOAc(63mg,0.64mmol,2.0当量)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1∶1)](26mg,0.032mmol,0.10当量)的烧瓶用氮气冲洗。然后加入二氧杂环己烷(50mL)，将反应混合物在90℃搅拌1h。将溶液冷却至室温，残留物直接用于下一步。ESI-MS(M+H+):502.3。
向上述反应混合物中加入5-溴吡嗪-2-胺(111mg,0.64mmol,2.0当量)、K2CO3(88mg,0.64mmol,2.0当量)和[1,1-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](26mg,0.032mmol,0.10当量)。向混合物中加入氮气，加热至100℃且保持1h。将溶液冷却至室温。除去溶剂，残留物通过柱色谱(PE:EA=1:4)来纯化，得到1-(4-(5-氨基吡嗪-2-基)苄基)-3-(3,4-二氟苄基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲腈，其为黄色固体(4mg,收率:2.6%)。ESI-MS(M+H+):469.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.80(d,1H),8.70(d,1H),8.44(d,1H),7.93(d,1H),7.81-7.79(m,2H),7.45-7.32(m,3H),7.22-7.19(m,3H),6.57(宽峰,2H),5.44(s,2H),4.46(d,2H)。
实施例260：合成2-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-N-环丙基-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070202011
2-氯-N-环丙基-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺由2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸经由酰氯(使用草酰氯)来制备。ESI-MS(M+H+):265.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.92-8.91(m,1H),8.76(d,1H),8.41(d,1H),2.84-2.78(m,1H),0.74-0.71(m,2H),0.56-0.55(m,2H)。
将2-氯-N-环丙基-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺(200mg,0.76mmol)、5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(200mg,0.84mmol,1.1当量)和TEA(230mg,2.28mmol,3.0当量)在DMSO(5mL)中的混合物在110℃搅拌2h。然后将混合物倒入水(20mL)中，过滤，得到粗化合物。粗化合物通过硅胶柱(CH2Cl2/CH3OH=15/1)来纯化，得到2-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-N-环丙基-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺，其为黄色固体(100mg,收率:28%)。ESI-MS(M+H+):468.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.00(s,1H),9.34(t,1H),8.76(d,1H),8.64(d,1H),8.49(s,1H),8.38(d,1H),8.22(d,1H),7.63(d,2H),7.44(d,2H),5.62(s,2H),4.73(d,2H),2.84-2.80(m,1H),0.71-0.70(m,2H),0.60-0.59(m,2H)。
实施例261-309以与实施例260相同的方法来制备。
实施例310-320以与实施例25相同的方法来制备。
实施例321-324以与实施例38相同的方法来制备。
实施例325-328以与实施例56相同的方法来制备。
实施例329-334以与实施例55相同的方法来制备。
实施例335以与实施例53相同的方法来制备。
实施例337以与实施例54相同的方法来制备。
实施例338以与实施例59相同的方法来制备。
实施例339-340以与实施例60相同的方法来制备。
实施例341-344以与实施例8.7.1相同的方法来制备。
实施例345-346以与实施例61相同的方法来制备。
实施例347以与实施例2.20相同的方法来制备。
实施例348-352以与实施例43相同的方法来制备。
实施例353以与实施例42相同的方法来制备。
实施例354以与实施例3.6相同的方法来制备。
实施例355：合成2-(4-(6-氨基-5-甲基吡啶-3-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺：
Figure BDA00001732070202031
合成5-(4-氨基甲基苯基)-3-甲基-吡啶-2-基胺。将5-溴-3-甲基-吡啶-2-基胺(109.5mg,0.5854mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基胺盐酸盐(144.7mg,0.5368mmol)在1,4-二氧杂环己烷(3.00mL,38.4mmol)和1.04M碳酸氢钠水溶液(1.555mL,1.610mmol)中搅拌。将混合物脱气10分钟。加入二(三环己基膦)钯(0)(28.0mg,0.0420mmol)，在120℃用微波处理10分钟。加入饱和碳酸氢钠溶液(~60mL)，用乙酸乙酯(3×60mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，蒸发，得到50.0mg浅黄色粉末(44%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.10(d,J=2.27Hz,1H),7.55(d,J=1.51Hz,1H),7.45-7.53(m,2H),7.30-7.38(m,J=8.31Hz,2H),5.77(s,2H),3.71(s,2H),2.11(s,3H)。ES(+)MS m/e=214.1(M+1)。
合成N-(3,4-二氟苄基)-2-氟-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺。在PTFE小瓶中将2-氨基-N-(3,4-二氟苄基)-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(9.5g,29mmol)在30M氢氟酸的吡啶溶液(90mL,3000mmol)中搅拌。在冰浴中冷却，加入亚硝酸钠(2.3g,33mmol)。在冰浴中搅拌30分钟。LC-MS显示转化完全(1.73min,ES+/335.1)。在冷却下用水淬灭，用EtOAc萃取。用MgSO4干燥，蒸发。用短硅胶柱(EtOAc)纯化，得到所需产物，其为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(dd,J=2.32,8.72Hz,1H),8.56(s,1H),6.96-7.17(m,5H),4.58(d,J=5.84Hz,3H)。
合成2-(4-(6-氨基-5-甲基吡啶-3-基)苄基氨基)-N-(3,4-二氟苄基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺。将5-(4-氨基甲基苯基)-3-甲基-吡啶-2-基胺(48.6mg,0.228mmol)、N-(3,4-二氟苄基)-2-氟-5-三氟甲基吡啶-3-甲酰胺(95.6mg,0.286mmol)、二甲基亚砜(1.00mL,14.1mmol)和三乙胺(98.0μl,0.703mmol)混合，在100℃加热2小时。进行LCMS。加入10mL乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液(3×6mL)洗涤。将有机相冲洗通过硫酸钠塞，用2mL乙酸乙酯淋洗，蒸发至干。将所得到的固体加载到4g硅胶柱上，通过快速色谱(20-100%乙酸乙酯:己烷)来纯化。蒸发。收集到95.5mg黄色粉末。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.35(t,J=5.67Hz,1H),9.26(t,J=5.67Hz,1H),8.51(d,J=1.13Hz,1H),8.34(d,J=2.27Hz,1H),8.09(d,J=2.27Hz,1H),7.54(d,J=2.27Hz,1H),7.51(d,J=8.31Hz,2H),7.30-7.45(m,4H),7.14-7.24(m,1H),5.80(s,2H),4.70(d,J=5.67Hz,2H),4.44(d,J=5.67Hz,2H),2.10(s,3H)。ES(+)MS m/e=528.2(M+1)。
实施例356：合成5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-2-(4-(2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酰胺：
合成6-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮。将6-溴-1,3-二氢-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-酮(2.65g,12.4mmol)和4-(N-叔丁氧羰基-氨基甲基)苯基硼酸(3.00g,11.9mmol)在1,4-二氧杂环己烷(60.0mL,769mmol)和1.04M碳酸氢钠水溶液(26.0mL，26.9mmol)中搅拌。将混合物脱气10分钟。加入二(三环己基膦)钯(0)(558.1mg,0.8364mmol)，在100℃加热过夜。反应混合物用200mL乙酸乙酯、100mL水和100mL饱和碳酸氢钠溶液处理。过滤所得到的乳液/析出物，用水洗涤两次，用乙酸乙酯洗涤两次，在高真空下过夜。收集到1.967g灰白色粉末(48%)。LCMS(Agilent460,254nm):ES(+)MSm/e=341.2(M+1)1.15分钟。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.15(宽单峰,1H),8.14(d,J=1.89Hz,1H),7.54-7.65(m,J=7.93Hz,2H),7.42(d,J=5.67Hz,1H),7.40(d,J=1.89Hz,1H),7.26-7.36(m,1H),4.16(d,J=6.04Hz,2H),1.40(s,9H)。
合成5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-2-(4-(2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)苄基氨基)吡啶-3-甲酰胺。将6-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮二TFA盐(100.0mg,0.2135mmol)、5-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-2-氟吡啶-3-甲酰胺(77.73mg,0.2669mmol)、二甲基亚砜(1.00mL,14.1mmol)和三乙胺(89.29μl,0.6406mmol)在100℃加热1小时。将反应混合物冷却至室温，用5mL碳酸氢钠和5mL乙酸乙酯处理。析出固体，通过过滤来收集。固体用10mL水和20mL乙酸乙酯洗涤。将化合物在10%DMSO/乙酸乙酯中加热，冷却至室温，离心，倾出溶剂。在DCM中搅拌，离心，倾出以除去残留的DMSO。蒸发至干。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.37(宽单峰,1H),10.92(宽单峰,1H),9.38(t,J=5.77Hz,1H),9.26(t,J=5.52Hz,1H),8.58(d,J=1.76Hz,1H),8.40(d,J=2.01Hz,1H),8.13(d,J=1.76Hz,1H),7.58(d,J=8.03Hz,2H),7.38(d,J=9.29Hz,2H),7.30-7.47(m,3H),7.08-7.24(m,1H),4.72(d,J=5.77Hz,2H),4.42(d,J=5.52Hz,2H)。ES(+)MS m/e=512.2(M+1)。
实施例357-366以与实施例356相同的方法来制备。
实施例367-385以与实施例355相同的方法来制备。
实施例386-387以与实施例4.9相同的方法来制备。
实施例388以与实施例25相同的方法来制备。
实施例389-399以与实施例246相同的方法来制备。
实施例400-401以与实施例182相同的方法来制备。
实施例402以与实施例42相同的方法来制备。
实施例403-405以与实施例38相同的方法来制备。
实施例406-408以与实施例25相同的方法来制备。
实施例409-410以与实施例182相同的方法来制备。
实施例411-412以与实施例42相同的方法来制备。
实施例413：合成3-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-6-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺
Figure BDA00001732070202051
将3,4-二氟苄基胺(1.213g,8.474mmol)溶解在二氯甲烷(40mL,600mmol)中。先后加入三乙胺(1.18mL,8.47mmol)和氯甲酸甲酯(0.66mL,8.5mmol)。在室温搅拌过夜。将溶剂蒸发掉，用Combiflash(0-30%EtOAc:己烷)纯化，得到1.35g所需产物(3,4-二氟苄基)氨基甲酸甲酯，其为白色结晶固体。
将(3,4-二氟苄基)氨基甲酸甲酯(1.346g,6.691mmol)与1.0M氢化锂铝的四氢呋喃溶液(23.4mL,23.4mmol)一起在60℃加热。50分钟后，LCMS显示转化完全。倒入冰中，加入乙醚和1N NaOH。将混合物充分搅拌10分钟，过滤。浓缩滤液，得到0.792g所需产物，其为油状物。1H NMR(300MHz,CDCl3):7.21-6.98(m,3H),3.71(s,2H),2.45(s,3H)。
将6-氰基-3-氟-吡嗪-2-甲酸(3,4-二氟苄基)-甲基-酰胺(与(S)-6-氰基-N-(1-(3,4-二氟苯基)乙基)-3-氟吡嗪-2-甲酰胺类似由1-(3,4-二氟苯基)-N-甲基甲胺来制备)(210.4mg,0.6870mmol)和5-(4-(氨基甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺二盐酸盐(191.1mg,0.6121mmol)溶解在二甲基亚砜(3.00mL,42.3mmol)中。加入三乙胺(259.3μl,1.860mmol)，在室温搅拌。用EtOAc和水进行后处理。收集到209.2mg 3-(4-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)苄基氨基)-6-氰基-N-(3,4-二氟苄基)-N-甲基吡嗪-2-甲酰胺，其为黄色粉末。1HNMR(300MHz,DMSO-d6,观察到两种构象异构体)δ12.01(宽单峰,1H),8.62-8.69(m,1H),8.61(s,0.48H),8.56(s,0.52H),8.47-8.55(m,1H),8.37(t,J=2.27Hz,1H),7.56-7.67(m,2H),7.31-7.52(m,4H),7.19-7.27(m,0.47H),7.09-7.19(m,0.53H),5.61(宽单峰,2H),4.71(d,0.95H),4.70(s,0.96H),4.66(d,1.05H),4.54(s,1.04H),2.97(s,1.54H),2.93(s,1.46H)。ES(+)MSm/e=525.9(M+1)。
实施例414以与实施例182相同的方法来制备。
实施例415：合成3-{(R)-1-[6-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶-3-基]-乙基氨基}-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺
3-[(R)-1-(6-溴-吡啶-3-基)乙基氨基]-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺。将N,N-二异丙基乙胺(0.9746mL,5.595mmol)加到(R)-1-(6-溴-吡啶-3-基)-乙胺(0.2250g,1.119mmol)和6-氰基-3-氟-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺(0.3770g,1.231mmol)的二甲基亚砜(8mL,100mmol)溶液中，将混合物在微波中在80℃加热1小时。将混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释。混合物用饱和碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干，通过快速色谱(0-10%MeOH/二氯甲烷)来纯化，得到标题化合物。
5-溴-3-叔丁氧基羰基氨基-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯。将5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基胺(2.52g,11.8mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(5.42g,24.8mmol;供应商=Aldrich)在吡啶(47.8mL,591mmol;供应商=Acros)中搅拌。向搅拌的混合物中加入4-二甲基氨基吡啶(0.2312g,1.893mmol)。混合物变得均匀，颜色变为深黄色。将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩至干。将残留物吸附到硅胶上，通过快速色谱(使用0-10%MeOH/二氯甲烷作为洗脱剂)来纯化。
1-(叔丁氧基羰基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基硼酸。在搅拌下将5-溴-3-叔丁氧基羰基氨基-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(0.3124g,0.7559mmol)、联硼酸二频哪醇酯(0.4031g,1.587mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)[与二氯甲烷的复合物(1:1)](0.09260g,0.1134mmol;供应商=Strem)和乙酸钾(0.1558g,1.587mmol;供应商=Aldrich)的混合物溶解在1,4-二氧杂环己烷(10mL,100mmol;供应商=Acros)中。反应混合物通过抽空来脱气，用氩气置换(5×)。将反应混合物密封，在微波中在90℃加热1.5小时。将反应混合物冷却至室温，然后用饱和碳酸氢钠稀释，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和氯化钠洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发至干，得到标题化合物，其不经纯化即用于下一步。
{5-[5-((R)-1-{5-氰基-3-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基氨甲酰基]吡嗪-2-基氨基}-乙基)吡啶-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基}氨基甲酸叔丁酯。将1-(叔丁氧基羰基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基硼酸(0.06983g,0.1846mmol)和3-[(R)-1-(6-溴-吡啶-3-基)乙基氨基]-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺(0.0818g,0.168mmol)的1,4-二氧杂环己烷(4.0mL,51mmol)溶液在氩气下脱气(5×)。加入二(三环己基膦)钯(0)(0.02240g,0.03357mmol)和1.2M碳酸氢钠水溶液(0.6994mL,0.8393mmol)。将混合物在氩气下脱气，然后在微波中在120℃加热20分钟。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，先后用水和盐水洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。粗产物通过制备性HPLC来纯化，得到标题化合物。
3-{(R)-1-[6-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶-3-基]-乙基氨基}-6-氰基-吡嗪-2-甲酸[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基]酰胺。将三氟乙酸(0.5mL,6mmol)加到{5-[5-((R)-1-{5-氰基-3-[(S)-1-(3,4-二氟苯基)乙基氨甲酰基]吡嗪-2-基氨基}-乙基)吡啶-2-基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基}氨基甲酸叔丁酯(0.0095g,0.015mmol)的二氯甲烷(2mL,30mmol)溶液中，将混合物搅拌1小时。将混合物减压浓缩至干，溶解在1mL DMSO中，通过制备性HPLC来纯化，得到标题化合物，其为二TFA盐(11mg)。ESI-MS(M+H+):541.9。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.10-9.13(m,1H),9.07(d,J=2.01Hz,1H),8.85-8.87(m,1H),8.74-8.76(m,1H),8.52(s,1H),8.11-8.15(m,1H),7.98-8.02(m,1H),7.34-7.41(m,1H),7.22-7.27(m,2H),5.40-5.48(m,1H),5.17-5.26(m,1H),1.71(d,J=6.78Hz,3H),1.60(d,J=7.03Hz,3H)。
实施例416以与实施例415相同的方法来制备。
实施例417以与实施例25相同的方法来制备。
实施例418-419以与实施例38相同的方法来制备。
实施例420以与实施例36相同的方法来制备。
实施例421以与实施例39相同的方法来制备。
实施例422-424以与实施例42相同的方法来制备。
实施例425-426以与实施例25相同的方法来制备。
实施例427-428以与实施例39相同的方法来制备。
实施例429-431以与实施例174相同的方法来制备。
实施例432以与实施例44相同的方法来制备。
实施例433以与实施例38相同的方法来制备。
实施例434以与实施例44相同的方法来制备。
实施例435以与实施例42相同的方法来制备。
实施例436以与实施例41相同的方法来制备。
实施例437-440以与实施例38相同的方法来制备。
实施例441-443以与实施例174相同的方法来制备。
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Figure BDA00001732070203241
Figure BDA00001732070203251
Figure BDA00001732070203261
Figure BDA00001732070203271
Figure BDA00001732070203281
Figure BDA00001732070203291
Figure BDA00001732070203301
Figure BDA00001732070203311
Figure BDA00001732070203321
Figure BDA00001732070203341
实施例444
PDK1激酶测定如下进行。在昆虫细胞中将PDK1(氨基酸51-359)和AKT2(与PIFtide即氨基酸EEQEMFRDFDYIADW融合的氨基酸140-467)表达成N-末端经标记的GST融合蛋白，纯化至均匀。在偶联PDK1/AKT/FAM-crosstide测定中确定酶活性，对FAM-crosstide的磷酸化通过标准IMAP方案(Molecular Devices)来确定。对于抑制研究，将化合物4倍滴定到DMSO中，40倍稀释到测定缓冲液(10mM Tris HCl(pH 7.2)、10mMMgCl2、0.01%Triton X-100和1mM DTT)中，所述测定缓冲液含有PDK1、AKT2和FAM-crosstide(最终浓度为0.75nM PDK1、10nM非磷酸化的AKT2和100nM crosstide底物)。激酶反应如下开始：加入ATP至PDK1的最终浓度为40μM，在25℃培养30分钟。为了检测测定产物，将激酶反应混合物与进行性结合溶液(Progressive Binding Solution)(1:600进行性结合试剂(Progressive Binding Reagent),50%缓冲液A,50%缓冲液B,Molecular Devices)以1:3的比例混合。将混合物在25℃培养2小时，板用Analyst AD扫描，其中激发波长为485nm，发射波长为530nm。荧光偏振值“P”通过以下方程式来定义。值“mP”通过将每个反应孔的P值乘以因子即1000来得到。每个孔的值“ΔmP”为该孔的mP值减去平均阴性对照的mP值。
方程式：P=(F平行-F垂直)/(F平行+F垂直)
其中“F平行”为平行于激发平面的荧光强度；“F垂直”为垂直于激发平面的荧光强度。将ΔmP值标绘成化合物浓度的函数，数据以四参数拟合使用GraphPad Prism软件来分析。
体外测试的结果示于表2中。
实施例445
就对磷酸-akt(Thr308)的抑制而言的EC50如下确定：PC-3细胞在没有血清的情况下用测试抑制剂处理2小时，然后使用Meso Scale Discovery(MSD)磷酸-akt 308ELISA试剂盒来检测磷酸-akt(Thr308)的水平。
PC-3细胞通过用胰蛋白酶进行处理来收集，计数。将细胞铺在经涂覆的96孔平底板中[15,000个细胞/孔,在100μl生长培养基(10%FBS,1×pen-strep)中]，置于培养箱中过夜。
测试抑制剂以50mM贮存，然后在100%DMSO中稀释至30mM(4.8μl化合物+1.6μl DMSO)。由30mM贮存液进行3倍稀释(将4μl加到8μl100%DMSO中)。将等分液即1.0μl抑制剂溶液转移到SF培养基中(使用深孔区)。
对照孔如下制备。对于DMSO高对照，将1.0μl 100%DMSO加到1.0mlSF中。对于PC-3细胞低对照，使用5μM渥曼青霉素(Wortmannin)(将10μl1mM渥曼青霉素贮存液加到2ml SF培养基中)。除去上清液培养基，将板吸干。向细胞中加入100μl对照物/培养基或化合物/培养基，置于培养箱中2小时。除去上清液培养基，将板吸干。加入55μl MSD完全溶胞缓冲液(10mlTris溶胞缓冲液、200μl蛋白酶抑制剂、100μl磷酸酶抑制剂I和100μl磷酸酶抑制剂II)。将板在4℃置于板振摇器上60分钟。
MSD板如下阻断1小时：向每个孔中加入150μl阻断溶液(3%BSA)。MSD板用TBST洗涤4次，将50μl溶胞物转移到MSD板中，在4℃置于板振摇器上(O/N)，轻轻振摇(速度为3.5)。板用TBST洗涤4次。
为了检测，使用以下检测抗体溶液：1ml阻断溶液(3%BSA贮存液,最终浓度为1%BSA)、2ml TBST和91μl(0.33μM)检测抗体贮存液(最终浓度为10nM)。向每个孔中加入25μl抗体检测溶液。将板密封，在室温培养1小时，轻轻振摇(速度为3.5)。板用TBST洗涤4次。加入150μl读数缓冲液(5ml4×MSD读数缓冲液+15ml水)。最后板立即用MSD板读数器进行读数。
材料：PC-3(在F12K培养基[Invitrogen目录号21127-030+10%FBS和1×pen-strep]中培养)；Meso Scale Discovery磷酸-akt(Thr308)试剂盒-目录号K151DYD-1(包括MSD板、Tris洗涤缓冲液、阻断溶液A、读数缓冲液、Tris溶胞缓冲液、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂I、磷酸酶抑制剂II和检测溶液)；渥曼青霉素-Calbiochem目录号681675(1mM贮存液,在-20℃等分和贮存)；和经聚L-赖氨酸涂覆的96孔板-Becton Dickinson目录号35-4516(在室温贮存)。
结果示于表2中。
Figure BDA00001732070203401
Figure BDA00001732070203411
Figure BDA00001732070203421
Figure BDA00001732070203431
Figure BDA00001732070203441
Figure BDA00001732070203451
Figure BDA00001732070203461
Figure BDA00001732070203471
在表2中，IC50值基于在体外对磷酸-PDK1的抑制来确定，EC50值基于使用MSD在细胞中对P308Akt的抑制来确定。“A”表示IC50≤0.1μM；“B”表示IC50为0.1μM至1μM；“C”表示IC50为1μM至5μM；且“D”表示IC50≥5μM。“a”表示EC50≤1μM；“b”表示EC50为1μM至10μM；且“c”表示EC50≥10μM。
尽管本申请已对本发明多个实施方案进行了描述，但明显的是，可对本申请描述的基本实施例进行修改以得到使用本发明化合物和方法的其它实施方案。因此，应该理解的是，本发明范围是通过所附权利要求书而非所示例的具体实施方案来定义的。

Claims (50)

1.式I化合物或其药用盐：
Figure FDA00001732070100011
其中
R1是氢或任选取代的C1-6脂族基团；或
R1和环A4上的取代基与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和或芳族的5-7元稠合环；
X是-C(O)-或-S(O)2-；
L1是共价键或任选取代的选自以下的二价基团：C1-4亚烷基、C2-4亚烯基或C2-4亚炔基，其中L1中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-Cy1-、-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替；
Cy1是任选取代的选自以下的二价环基团：亚苯基、饱和或部分不饱和的3-7元亚碳环基、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元亚杂环基或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基；
每个R2是氢或任选取代的C1-6脂族基团；
A1是共价键或任选取代的选自以下的二价环基团：饱和或部分不饱和的3-7元单环亚碳环基、饱和或部分不饱和的7-10元二环亚碳环基、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环亚杂环基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环亚杂环基、亚苯基、8-10元二环亚芳基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环亚杂芳基或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环亚杂芳基；
L2是共价键、亚烯基或任选取代的亚烷基链，其中L2中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替；
环A2是饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环或具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的10-16元三环，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代；
每个Rx独立是-R、任选取代的亚烷基、氧代、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2；
每个R独立是氢或任选取代的选自以下的基团：C1-6脂族基团、饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环；
每个R’独立是-R或同一氮上的两个R’基团与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的5-8元环；
L3是共价键或任选取代的C1-4亚烷基链，其中L3中的一个或多个亚甲基单元任选独立被-O-、-S-、-N(R2)-、-C(O)-、-C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)N(R2)-、-N(R2)C(O)-、-N(R2)C(O)O-、-OC(O)N(R2)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R2)-、-N(R2)S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-代替；
环A3是任选取代的选自以下的环：饱和或部分不饱和的3-7元单环碳环、饱和或部分不饱和的7-10元二环碳环、具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的4-7元单环杂环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的7-10元二环杂环、苯基环、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环；
环A4是具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环；其中环A4上任何可取代的碳任选被R3、R4或R5取代且环A4上任何可取代的氮任选被R6取代；
R3、R4和R5各自独立是-R、-卤素、-NO2、-CN、-OR、-SR、-N(R’)2、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-OC(O)R、-N(R’)C(O)R、-N(R’)N(R’)2、-N(R’)OR、-N(R’)C(＝NR’)N(R’)2、-C(＝NR’)N(R’)2、-C=NOR、-N(R’)C(O)N(R’)2、-N(R’)S(O)2N(R’)2、-N(R’)S(O)2R或-OC(O)N(R’)2；或
R3和R4与介于它们之间的原子或R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；
每个R6独立是-R、-C(O)R、-CO2R、-C(O)C(O)R、-C(O)CH2C(O)R、-S(O)R、-S(O)2R、-C(O)N(R’)2或-S(O)2N(R’)2；或
R3和R6与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；
条件是：
当A1是二价单环且L1是共价键时，L2不是-O-；
当A1是二价单环或二环时，L1和L2不同时是共价键；和
L1、A1和L2不同时是共价键。
2.权利要求1的化合物，其中环A4选自：
Figure FDA00001732070100041
3.权利要求2的化合物，其中环A4具有下式：
Figure FDA00001732070100042
其中R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：饱和或部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和或部分不饱和的5-6元二环杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
4.权利要求1的化合物，其中环A4具有下式：
Figure FDA00001732070100043
其中R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基稠合环。
5.权利要求1的化合物，其中环A4具有下式：
Figure FDA00001732070100044
其中R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5元杂芳基稠合环。
6.权利要求2的化合物，其中R1和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
7.权利要求2的化合物，其中R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分不饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
8.权利要求2的化合物，其中R6是氢、甲基、苯基或吡啶基。
9.权利要求2的化合物，其中R3是氢、-Cl或-CF3。
10.权利要求2的化合物，其中R4是卤素、-NH2、-CN、-NO2、-SC1-4烷基、-S(O)C1-4烷基、-S(O)2C1-4烷基、-S(O)N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3、苄基氧基、-C(O)N(R’)2或-NHC(O)C1-4烷基。
11.权利要求2的化合物，其中R5是氢、-OCH3或-NH2。
12.权利要求1的化合物，其中环A4选自：
Figure FDA00001732070100051
其中
R3是氢、-Cl或-CF3；
R4是-CN、-NO2、-NH2、-NHC(O)C1-6烷基、-CO2H、-CO2C1-4烷基、-C(O)N(R’)2、-NHS(O)C1-6烷基、-NHS(O)2C1-6烷基、-SC1-6烷基、-S(O)C1-6烷基、-S(O)2C1-6烷基、-S(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3或苄基氧基；
R5是氢、-OCH3或-NH2；
R6是氢或任选取代的选自以下的基团：C1-4烷基、苯基或具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；和
每个R’独立是氢或C1-4烷基或同一氮上的两个R’基团与介于它们之间的氮一起形成任选取代的具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的饱和、部分不饱和或芳族的5-6元环。
13.权利要求1的化合物，其中L3是未取代的亚甲基或被甲基或乙基取代的亚甲基。
14.权利要求13的化合物，其中L3未取代。
15.权利要求1的化合物，其中L3是共价键。
16.权利要求1的化合物，其中环A3是苯基、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环，其中环A3任选被卤素或烷基中的一个或多个取代。
17.权利要求16的化合物，其中环A3在对位或间位被取代。
18.权利要求1的化合物，其中L1是任选取代的选自以下的二价基团：-O-C1-3亚烷基、C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或C2-3亚炔基。
19.权利要求18的化合物，其中L1是任选取代的以下基团：-O-C2亚烷基、C3亚烷基或C3亚炔基。
20.权利要求19的化合物，其中L1被任选取代的选自以下的基团取代：C1-4烷基、3-7元碳环、具有1-2个选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元杂环、苯基或具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
21.权利要求20的化合物，其中所述C1-4烷基被-CO2H、-C(O)OR°或-C(O)NR°2取代。
22.权利要求20的化合物，其中L1被甲基、环丙基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、苯基或吡啶基取代。
23.权利要求1的化合物，其中A1是共价键或任选取代的选自以下的二价环基团：亚苯基、8-10元二环亚芳基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环亚杂芳基。
24.权利要求23的化合物，其中A1是任选取代的选自以下的基团：
Figure FDA00001732070100061
Figure FDA00001732070100071
25.权利要求1的化合物，其中L2是共价键或任选取代的亚甲基。
26.权利要求1的化合物，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自苯基、8-10元二环芳基环、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。
27.权利要求26的化合物，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元二环杂芳基环。
28.权利要求27的化合物，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
其中氮上的每个Rx独立是氢或C1-4烷基。
29.权利要求28的化合物，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
Figure FDA00001732070100081
其中
氮上的每个Rx独立是氢或C1-4烷基；和
每个R’独立是氢或C1-4烷基或同一氮上的两个R’与介于它们之间的氮一起形成具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元杂环。
30.权利要求27的化合物，其中环A2是
Figure FDA00001732070100082
31.权利要求27的化合物，其中环A2是
Figure FDA00001732070100083
32.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式II或式III或其药用盐：
Figure FDA00001732070100084
33.权利要求32的化合物，其中R1是氢或C1-4烷基。
34.权利要求32的化合物，其中
R3是氢、-Cl或-CF3；
R4是-CN、-NO2、-SC1-4烷基、-S(O)C1-4烷基、-S(O)2C1-4烷基、-S(O)N(R’)2、-S(O)2N(R’)2、-CF3、-OCH3、-OCH2CH3或苄基氧基；或
R3和R4与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；
每个R’独立是氢或C1-4烷基；和
R5是氢、-OCH3或-NH2；或
R1和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；或
R4和R5与介于它们之间的原子一起形成任选取代的选自以下的稠合环：部分饱和的4-7元碳环、苯基、具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的部分不饱和的5-6元杂环或具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
35.权利要求34的化合物，其中L3是共价键或任选取代的亚甲基。
36.权利要求34的化合物，其中环A3是被至少一个氟在对位或间位取代的苯基。
37.权利要求34的化合物，其中L1是任选取代的以下基团：亚甲基、亚丙基、亚丙炔基或-O-亚C1-3烷基。
38.权利要求37的化合物，其中L1是任选取代的亚甲基。
39.权利要求37的化合物，其中L1是-CH2-。
40.权利要求34的化合物，其中A1是任选取代的选自以下的基团：
41.权利要求34的化合物，其中L2是共价键或任选取代的亚甲基。
42.权利要求34的化合物，其中环A2任选被1-4个Rx基团取代且选自：
Figure FDA00001732070100101
其中
氮上的每个Rx独立是氢或C1-4烷基；和
每个R’独立是氢或C1-4烷基或同一氮上的两个R’与介于它们之间的氮一起形成具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元杂环。
43.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式IV或其药用盐：
Figure FDA00001732070100102
其中
Figure FDA00001732070100103
是单键或双键。
44.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式V或其药用盐：
Figure FDA00001732070100104
45.权利要求44的化合物，其中R6是C1-4烷基或具有1-3个选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环。
46.权利要求1的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA00001732070100111
Figure FDA00001732070100121
Figure FDA00001732070100131
Figure FDA00001732070100141
Figure FDA00001732070100151
Figure FDA00001732070100161
47.一种药物组合物，其含有权利要求1的化合物和药用赋形剂。
48.一种药物组合物，其含有权利要求46的化合物和药用赋形剂。
49.在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的权利要求1的化合物或权利要求47的组合物。
50.在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的权利要求46的化合物或权利要求48的组合物。
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