CN102628039A - 一种通用植物总rna提取法 - Google Patents
一种通用植物总rna提取法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102628039A CN102628039A CN2012101038149A CN201210103814A CN102628039A CN 102628039 A CN102628039 A CN 102628039A CN 2012101038149 A CN2012101038149 A CN 2012101038149A CN 201210103814 A CN201210103814 A CN 201210103814A CN 102628039 A CN102628039 A CN 102628039A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- add
- centrifuge tube
- centrifugal
- total rna
- rna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种通用的植物总RNA提取的方法。RNA样品中不含有破坏RNA和抑制逆转录和PCR反应的因子。该方法广泛的适用于各类植物总RNA的提取、纯化及制备之用。而且可以对不同来源、不同生长期、不同处理、不同组织样本的RNA进行分离、纯化。尤其是普通方法难以提取的富含多糖、多酚的植物的总RNA的理想提取方法。
Description
技术领域
本发明属于植物分子生物学,具体涉及植物总RNA的提取,纯化方法。
背景技术
植物不仅是整个地球生态系统的重要组成部分,而且还是人类食物和工业原材料的重要来源。随着生活水平的提高,居住环境日益恶化,有限非再生资源的逐渐耗竭,不同领域的研究人员在分子水平上对植物进行着深入研究,以解决当前人类所面临的粮食、环境和能源问题。由此,各种形式的植物分子生物学研究在世界范围内展开。RNA是植物体内重要生物大分子之一,参与植物结构组成、蛋白合成、基因表达调控等,因此众多植物分子实验需对不同来源、不同生长期、不同处理、不同组织样本的RNA进行分离、纯化,如EST和全长cDNA文库构建,RT-和实时定量PCR,基因芯片分析,SAGE,RACE,Northern杂交等等。而分离、纯化RNA的质量则是这些实验成败的关键。目前市场上出售的植物RNA提取试剂及试剂盒种类很多,但这些试剂盒和试剂往往都存在提取效率低,广谱性差,提取的总RNA有多糖、蛋白和多酚的污染,降解,价格昂贵等缺点。因此,提取植物完整的总RNA往往成为各大高校、研究院等研究人员最头疼的问题。
解决的技术问题
从各种植物材料(尤其是含多糖、多酚)的任何组织中提取完整的总RNA。
发明内容
该方法提取液主要由两种特殊的变性剂组成,两种变性剂相互作用,能有效地抑制提取体系中的RNA酶活性,一种变性剂在氯仿和酚混合液存在条件下不稳定容易沉淀,并且可以与多糖多酚形成复合物,另一种变性剂在氯仿和酚混合液存在条件下相当稳定,但不与多糖和多酚形成复合物,优化后的提取液使蛋白的可溶性大大降低。因此,通过样品、提取液、氯仿和酚相互混合剧烈振荡条件下能彻底破坏植物细胞组织,有效地去除多糖、多酚和蛋白。再在优化后的沉淀剂的作用下特异地沉淀体系中的总RNA。提取的具体过程如下:
1.在1.5ml离心管中按先后顺序加入:350ul Tris-饱和酚,350ul氯仿,700ul提取液.
2.向离心管中加入液氮中粉碎后的植物材料<0.1g,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡15-25min.(PVPP粉末可加可不加,加后有利于改善提取后总RNA的质量)
3.13000rpm,4℃离心6-8min。
4.向另一1.5ml离心管加:350ul Tris-饱和酚和350ul氯仿。将步骤3离心后的上清液完全转移至该离心管内,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡5min.
5.13000rpm,4℃离心5min。
6.取上清至另一含700ul氯仿的1.5ml离心管中,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈充分震荡5min.
7.13000rpm,4℃离心6-8min。
8.取一无RNA酶污染的1.5ml离心管,加450ul沉淀剂。将步骤7离心后的上清液(700ul)转移至该离心管,上下颠倒5-10次,冰浴4-8min.
9.10000rpm(约9000-10000×g),4℃离心10min。
10.弃上清,加1ml 75%乙醇,涮洗管壁后14000rpm,4℃离心5min。
弃乙醇,气干后加100ulRNase-free水,充分溶解沉淀,取2ul电泳检测。(如果需要,可加1倍体积的氯仿处理一次,去除残余蛋白,用1/10体积乙酸钠和3倍体积乙醇沉淀回收总RNA,260/280比值一般都能大于2.0)。
与以往技术相比有益效果
该方法提取的植物总RNA无蛋白污染、多糖、多酚污染,并且不存在降解问题,OD260/OD280一般在2.0-2.2之间,电泳图谱中28S和18S rRNA条带的亮度比值大于2。
实例1提取杨树花芽总RNA
以杨树花芽为材料提取总RNA,杨树花芽富含多糖、多酚和黄酮类物质,用好多商业化的试剂盒很难提取无多糖、多酚和蛋白污染的总RNA.
11.在1.5ml离心管中按先后顺序加入:350ul Tris-饱和酚,350ul氯仿,700ul溶液I和100ul2-巯基乙醇.
12.向离心管中加入液氮中粉碎后的杨树花芽粉末0.1-0.25g,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡15-25min.(如果材料多酚含量高,可在液氮研磨过程中可加1/5质量的PVPP粉末)
13.13000rpm,4℃离心6-8min。
14.向另一1.5ml离心管加:350ul Tris-饱和酚和350ul氯仿。将步骤3离心后的上清液完全转移至该离心管内,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡5min.
15.13000rpm,4℃离心5min。
1.取上清至另一含700ul氯仿的1.5ml离心管中,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈充分震荡5min.
2.13000rpm,4℃离心6-8min。
3.取一无RNA酶污染的1.5ml离心管,加450ul溶液II。将步骤7离心后的上清液(700ul)转移至该离心管,上下颠倒5-10次,冰浴4-8min.
4.10000rpm(约9000-10000×g),4℃离心10min。
5.弃上清,加1ml 75%乙醇,涮洗管壁后14000rpm,4℃离心5min。
6.弃乙醇,气干后加100ulRNase-free水,充分溶解沉淀,取1ul电泳检测。
实例2提取月季叶片总RNA
以为月季叶片材料提取总RNA,杨树花芽富含多糖、多酚和黄酮类物质,用商业化的试剂盒很根本提取不出总RNA。
7.在1.5ml离心管中按先后顺序加入:350ul Tris-饱和酚,350ul氯仿,700ul溶液I和100ul2-巯基乙醇.
8.向离心管中加入液氮中粉碎后的月季叶片粉末0.1-0.25g,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡15-25min.(如果材料多酚含量高,可在液氮研磨过程中可加1/5质量的PVPP粉末)
9.13000rpm,4℃离心6-8min。
10.向另一1.5ml离心管加:350ul Tris-饱和酚和350ul氯仿。将步骤3离心后的上清液完全转移至该离心管内,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡5min.
11.13000rpm,4℃离心5min。
12.取上清至另一含700ul氯仿的1.5ml离心管中,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈充分震荡5min.
13.13000rpm,4℃离心6-8min。
14.取一无RNA酶污染的1.5ml离心管,加450ul溶液II。将步骤7离心后的上清液(700ul)转移至该离心管,上下颠倒5-10次,冰浴4-8min.
15.10000rpm(约9000-10000×g),4℃离心10min。
16.弃上清,加1ml 75%乙醇,涮洗管壁后14000rpm,4℃离心5min。
17.弃乙醇,气干后加100ulRNase-free水,充分溶解沉淀,取1ul电泳检测。
Claims (5)
1.一种提取植物总RNA的方法,其特征在于包括如下步骤:
1)在1.5ml离心管中按先后顺序加入:350ul Tris-饱和酚,350ul氯仿,700ul提取液。
2)向离心管中加入液氮中粉碎后的植物材料<0.1g,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡15-25min.(PVPP粉末可加可不加,加后有利于改善提取后总RNA的质量。
3)13000rpm,4℃离心6-8min。
4)向另一1.5ml离心管加:350ul Tris-饱和酚和350ul氯仿。将步骤3离心后的上清液完全转移至该离心管内,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈震荡5min.。
5)13000rpm,4℃离心5min。
6)取上清至另一含700ul氯仿的1.5ml离心管中,盖紧盖后迅速在震荡器上剧烈充分震荡5min。
7)13000rpm,4℃离心6-8min。
8)取一无RNA酶污染的1.5ml离心管,加450ul沉淀剂。将步骤7离心后的上清液(700ul)转移至该离心管,上下颠倒5-10次,冰浴4-8min。9)10000rpm(约9000-10000×g),4℃离心10min。10)弃上清,加1ml 75%乙醇,涮洗管壁后14000rpm,4℃离心5min。弃乙醇,气干后加100ulRNase-free水,充分溶解沉淀,取2ul电泳检测。(如果需要,可加1倍体积的氯仿处理一次,去除残余蛋白,用1/10体积乙酸钠和3倍体积乙醇沉淀回收总RNA,260/280比值一般都能大于2.0。
2.按照权利要求1的方法,提取液提取液包含的物质及浓度范围:
SDS 2.5%-10%CHAPS:0.1-2%NaCl:0.25M-1.5M KAc:0.25-1.5M
K2HPO4:0.25M KH2PO4:0.25M PEG4000:0.01-10%(NH4)2SO4:0.1-1M
Glycerol:0.5%-5%
其中:K2HPO4、KH2PO4为缓冲剂pH 7.5。
3.按照权利要求1的方法,提取液中沉淀剂包含的物质及浓度范围:
LiCl:4-10M
乙醇:5-50%
PEG8000:1%-20% 。
4.按照权利要求1的方法,提取RNA的材料来源于植物。
5.按照权利要求1的方法,提取0.1克植物组织中的RNA需要提取液数量0.5-1ml。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210103814.9A CN102628039B (zh) | 2012-04-11 | 2012-04-11 | 一种通用植物总rna提取法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210103814.9A CN102628039B (zh) | 2012-04-11 | 2012-04-11 | 一种通用植物总rna提取法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102628039A true CN102628039A (zh) | 2012-08-08 |
CN102628039B CN102628039B (zh) | 2015-09-23 |
Family
ID=46586433
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201210103814.9A Expired - Fee Related CN102628039B (zh) | 2012-04-11 | 2012-04-11 | 一种通用植物总rna提取法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102628039B (zh) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103993003A (zh) * | 2013-02-20 | 2014-08-20 | 中国科学院武汉植物园 | 一种快速提取荷花花瓣总rna的方法 |
CN104031908A (zh) * | 2014-06-17 | 2014-09-10 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 一种植物组织总rna提取方法 |
CN104313015A (zh) * | 2014-10-16 | 2015-01-28 | 上海派森诺生物科技有限公司 | 一种多糖多酚植物组织总rna提取方法 |
CN105039315A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-11-11 | 江苏农林职业技术学院 | 一种植物伤流液rna提取方法 |
CN108504652A (zh) * | 2017-04-18 | 2018-09-07 | 北京林业大学 | 提取林木组织或器官RNA的方法和鉴定林木组织特异性miRNA的方法 |
CN113278610A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-08-20 | 浙江省亚热带作物研究所 | 一种秋茄rna的提取方法 |
CN114292840A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-04-08 | 广东石油化工学院 | 一种番石榴果实rna的高效提取方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101486747A (zh) * | 2009-02-20 | 2009-07-22 | 浙江省农业科学院 | 一种同时提取植物dna和rna的方法 |
-
2012
- 2012-04-11 CN CN201210103814.9A patent/CN102628039B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101486747A (zh) * | 2009-02-20 | 2009-07-22 | 浙江省农业科学院 | 一种同时提取植物dna和rna的方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
NANODROP COMPANY: "260/280 and 260/230 Ratios", 《NANODROP TECHNICAL SUPPORT BULLETIN T009》, 31 December 1975 (1975-12-31) * |
宋红苗等: "一种从富含多糖果实中提取RNA的方法", 《浙江农业科学》, 11 January 2012 (2012-01-11), pages 87 - 89 * |
樊洪泓等: "石斛总RNA提取方法的研究", 《激光生物学报》, 28 February 2007 (2007-02-28) * |
王壮伟等: "苹果属RNA高效快速提取新方法", 《果树学报》, 31 December 2004 (2004-12-31), pages 385 - 387 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103993003A (zh) * | 2013-02-20 | 2014-08-20 | 中国科学院武汉植物园 | 一种快速提取荷花花瓣总rna的方法 |
CN104031908A (zh) * | 2014-06-17 | 2014-09-10 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 一种植物组织总rna提取方法 |
CN104313015A (zh) * | 2014-10-16 | 2015-01-28 | 上海派森诺生物科技有限公司 | 一种多糖多酚植物组织总rna提取方法 |
CN105039315A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-11-11 | 江苏农林职业技术学院 | 一种植物伤流液rna提取方法 |
CN108504652A (zh) * | 2017-04-18 | 2018-09-07 | 北京林业大学 | 提取林木组织或器官RNA的方法和鉴定林木组织特异性miRNA的方法 |
CN113278610A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-08-20 | 浙江省亚热带作物研究所 | 一种秋茄rna的提取方法 |
CN113278610B (zh) * | 2021-06-17 | 2022-05-20 | 浙江省亚热带作物研究所 | 一种秋茄rna的提取方法 |
CN114292840A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-04-08 | 广东石油化工学院 | 一种番石榴果实rna的高效提取方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102628039B (zh) | 2015-09-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102628039A (zh) | 一种通用植物总rna提取法 | |
Ouyang et al. | A simple method for RNA isolation from various tissues of the tree Neolamarckia cadamba | |
CN108060159B (zh) | 一种富含多糖多酚植物的dna提取方法 | |
CN102433015B (zh) | 蓝藻色素的制备方法 | |
CN102250876B (zh) | 从生物材料中分离纯化rna的方法 | |
CN107475251A (zh) | 一种裂解液及其在保存组织或细胞、提取rna中的应用 | |
CN108410863B (zh) | 一种番石榴叶片基因组dna的高效提取方法 | |
CN101914522A (zh) | 红树植物dna的提取方法 | |
CN113151397B (zh) | 一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒 | |
Portillo et al. | Evaluation of different RNA extraction methods for small quantities of plant tissue: combined effects of reagent type and homogenization procedure on RNA quality‐integrity and yield | |
CN102876665A (zh) | 一种八宝景天基因组dna的提取方法 | |
CN105602941A (zh) | 一种真菌菌丝总dna提取液及提取真菌菌丝总dna的方法 | |
CN101845436B (zh) | 一种同时提取堆肥中总dna和rna的方法 | |
CN105713902B (zh) | 一种荒漠植物总dna的提取方法 | |
CN104263720B (zh) | 植物叶片总rna提取方法 | |
JP6708658B2 (ja) | マストおよび飲料を清澄化するための酵母エキスの使用 | |
CN103789197B (zh) | 一种提取微小rna的试剂盒及其提取方法 | |
CN106497728A (zh) | 一种石榴枇杷酒 | |
CN113278610B (zh) | 一种秋茄rna的提取方法 | |
CN104178482A (zh) | 从浓香型大曲中提取微生物总dna的方法 | |
Ishihara et al. | An improved method for RNA extraction from woody legume species Acacia koa A. Gray and Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit | |
CN106282158A (zh) | 一种从沙冬青提取高质量基因组dna的方法 | |
CN102676502B (zh) | 一种南美蟛蜞菊总rna的提取方法 | |
CN103952399A (zh) | 一种使用含有指示剂的酚胍盐裂解液提取核糖核酸的方法 | |
CN107287188A (zh) | 一种改良ctab抽提红景天rna的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150923 Termination date: 20170411 |