CN102600465A - 鸡新城疫活疫苗的生产方法及其产品 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鸡新城疫活疫苗的生产方法，包括：(1)鸡胚培养的鸡新城疫弱毒接种传代细胞系，加入病毒生长液进行培养，得到细胞适应疫苗种毒；(2)将细胞适应疫苗种毒接种传代细胞系，加入病毒培养维持液进行培养，收获增殖病毒悬液；(3)测定增殖病毒悬液的毒价，将毒价检测合格的增殖病毒悬液进行配苗、分装及冻干，即得。本发明鸡新城疫活疫苗的生产方法具有生产工艺简单稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，能够快速、准确的测定疫苗效价等优点，本发明生产方法可显著提高疫苗产量和质量，所生产的鸡新城疫弱毒活疫苗安全性好、免疫效力高，对鸡新城疫强毒攻击具有完全的免疫保护作用。

Description

鸡新城疫活疫苗的生产方法及其产品

技术领域

本发明涉及一种动物疫苗的生产方法，尤其涉及鸡新城疫活疫苗的生产方法以及由该生产方法得到的鸡新城疫活疫苗，属于鸡新城疫活疫苗的生产领域。

背景技术

中国目前生产鸡新城疫低毒力活疫苗所用的是SPF鸡胚。目前国内SPF鸡胚的生产能力和质量状况制约畜禽生物制品的生产。用SPF鸡胚生产鸡新城疫活疫苗成本高，劳动利用率低，且易造成外源病毒污染，批间差异大，给疫苗产量、效力的提高带来困难。

此外，疫苗效价的高低是疫苗合格与否的关键指标，现有技术中对鸡新城疫疫苗效价的测定一直沿用SPF鸡胚法(EID₅₀)，用效价测定方法存在测毒不能准确定量，测毒结果易受鸡胚个体差异和培养条件影响，试验周期长、费时费力等缺陷，急需改进。

发明内容

本发明主要目的是克服现有的鸡新城疫活疫苗生产方法所存在的不足，提供一种利用细胞系生产鸡新城疫活疫苗的方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种鸡新城疫活疫苗的生产方法，包括以下步骤：

(1)鸡胚培养的鸡新城疫弱毒接种传代细胞系，加入病毒生长液进行培养，得到细胞适应疫苗种毒；(2)将细胞适应疫苗种毒接种传代细胞系，加入病毒培养维持液进行培养，收获增殖病毒悬液；(3)测定增殖病毒悬液的毒价，将毒价检测合格的增殖病毒悬液进行配苗、分装及冻干，即得。

本发明首先将鸡新城疫弱毒La sota株接种不同传代细胞系，至37℃培养30～40小时，收获病毒液；将收获的病毒液继续传代，直至3～5代内出现细胞病变，筛选病毒可在哪些细胞系中增殖。实验结果显示新城疫弱毒疫苗株可在MDCK细胞系、vero细胞系，marc-145细胞系、ST细胞系、BHK细胞系或MDBK细胞系上进行增殖。

此外，本发明将不同鸡新城疫弱毒分别接种不同的传代细胞系，实验结果发现，能在MDCK细胞系、vero细胞系，marc-145细胞系、ST细胞系、BHK细胞系或MDBK细胞系上进行增殖的新城疫弱毒有La sota株，ZM10株、HB92株、CS2株、HB1株和B1株等新城疫弱毒株。

步骤(1)中，优选的，将鸡胚培养的鸡新城疫弱毒按感染复数0.01-0.5MOI接种单层传代细胞系，加入病毒生长液进行培养；其中，所述的培养包括：培养接种至70-100％(优选80-90％)的细胞发生病变时收获病毒液；收获的病毒液以同样的方法接种细胞，如此进行2-4代获得细胞适应疫苗种毒。

步骤(1)中所述病毒生长液的组成包括：94％-95％MEM液或DMEM液、5％-6％犊牛血清、加适量的抗菌素，pH值调整为7.0-7.2。

优选的，步骤(2)中将细胞适应疫苗种毒按感染复数0.01-0.5MOI接种单层传代细胞系(更优选的，将细胞适应疫苗毒按感染复数0.1-0.5MOI接种单层传代细胞系)，加入病毒生长液，培养32～40小时，收获病毒液。其中，所述病毒培养维持液中的胰酶浓度优选为1.5-2.5ug/ml，更优选为2.0ug/ml。

步骤(2)中所述病毒培养维持液的组成包括：含0.05～3ug/ml胰酶的无血清MEM液或DMEM液、加适量的抗菌素，pH值调整为7.0～7.2。

步骤(3)中优选采用半数组织感染量(TCID₅₀)方法测定增殖病毒悬液的毒价；毒价合格的增殖病毒悬液每1ml含病毒≥10^7.0TCID₅₀；其中，所述半数组织感染量(TCID₅₀)测定方法包括：

a.准备细胞培养板：选取生长良好的上述细胞系，经胰酶-EDTA消化后，加入细胞生长液制备细胞悬液，调整细胞密度为1.5～3.5×10⁵个/ml，以100ul/孔接入96孔细胞培养板；

b.疫苗毒样品的稀释和接种：将要滴定的鸡新城疫疫苗病毒悬液用病毒生长液作10倍倍比稀释；将生长3天的96孔细胞培养板甩掉培养液，每孔加入200μl PBS，洗2次。每个细胞培养孔接入100μl样本，每个稀释度6～8个重复；

c.加入100μl培养基作为阴性对照，每块板至少设2列阴性对照；在37℃±1℃，4～6％CO₂培养箱中培养3～5天；

d.将96孔细胞培养板中液体每孔吸取25μl转移96孔v型血凝板，孔孔对应。在96孔v型血凝板每孔加25μl 0.5％鸡红细胞，室温作用20-25分钟；

e.读板，观察每孔的凝集。在记录纸上记录每个稀释度的阳性孔数，并应用Spearman Karber方法并计算病毒滴度。

步骤(3)中所述的配苗、分装及冻干包括：将检验合格的病毒培养液，混合于同一容器内，加入稳定剂，同时加入抗生素，充分摇匀，定量分装；每羽份含细胞毒液不少于0.001ml，分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。每羽份疫苗含病毒≥10⁶TCID₅₀。

与现有技术相比，本发明鸡新城疫活疫苗的生产方法主要具有以下有益效果：

(1)本发明鸡新城疫活疫苗的生产方法用细胞系代替SPF鸡胚制造鸡新城疫低毒力活疫苗，可解决禽源外源病原污染的问题，通过原材料和培养条件的严格控制，保证生产出来的疫苗纯粹，确保疫苗的安全性。

(2)本发明生产方法用细胞系代替SPF鸡胚制造鸡新城疫低毒力活疫苗，可摆脱使用SPF鸡胚产量低的限制，有效的提高疫苗的产量，大大降低生产成本。采用细胞系生产的鸡新城疫低毒力活疫苗，经免疫攻毒试验结果显示，对鸡新城疫强毒攻击可100％保护。

(3)本发明用细胞系生产的鸡新城疫低毒力活疫苗各批间质量差异小，具有生产工艺简单稳定、易操作、产量大、成本低等特点，具备工业化大生产的可行性和可放大性，具有很好的经济效益和应用前景。

本发明鸡新城疫活疫苗的生产方法具有生产工艺简单稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，能够快速、准确的测定疫苗效价等优点，本发明生产方法可显著提高疫苗产量和质量，所生产的鸡新城疫弱毒活疫苗安全性好、免疫效力高，对鸡新城疫强毒攻击具有完全的免疫保护作用。

附图说明

图1鸡新城疫弱毒疫苗细胞病变结果：a：鸡新城疫弱毒疫苗样品；b：阴性对照。

图2试验动物免疫后NDV HI抗体变化曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

病毒生长液的组成：94％-95％MEM液或DMEM液、5％-6％犊牛血清、加适量的抗菌素(青霉素100单位/ml，链霉素为100μg/ml)，pH值调整为7.0-7.2。

病毒培养维持液的组成：含2.0ug/ml胰酶的无血清MEM液或DMEM液、加适量的抗菌素(青霉素100单位/ml，链霉素为100μg/ml)，pH值调整为7.0～7.2。

实施例1MDCK细胞系作为制苗用细胞生产新城疫弱毒活疫苗

(1)选择MDCK细胞系(购自美国ATCC公司)作为制苗用细胞；

(2)制苗用细胞的传代与培养：上述MDCK细胞系经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，37℃，以细胞生长液继续培养，形成良好单层时，用于继续传代或接种病毒；

(3)细胞毒种的繁殖：生长良好的上述MDCK细胞系单层用细胞维持液或PBS洗2次，将细胞种毒(新城疫弱毒La sota株；购自中国兽医药品监察所)接种上述细胞系单层，37℃感作1小时；加入病毒培养维持液37℃继续培养，32-40小时细胞80％脱落时收获病毒培养维持液作为细胞适应疫苗种毒；

细胞适应疫苗种毒鉴定结果：毒种鉴定完全符合新城疫低毒力活疫苗制造及检验规程毒种标准，对鸡安全无副作用，细胞毒种每1ml含病毒≥10^8.2TCID₅₀；

(4)制苗毒液的繁殖：取已形成良好单层的MDCK细胞系培养瓶，弃去细胞生长液，用细胞维持液或PBS洗2次，将上述细胞适应疫苗种毒接种MDCK细胞系单层，37℃感作1小时；加入细胞维持液继续培养，30～40小时细胞80％脱落时收细胞培养毒液；收获的毒液置-15℃以下保存；

制苗毒液的检验：按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)附录15、19页进行检验：无细菌、霉菌、支原体生长。细胞毒液对鸡安全无副作用，每1ml含病毒≥10^8.2TCID₅₀；

(5)配苗、分装及冻干：半数组织感染量(TCID₅₀)方法测定增殖病毒悬液的毒价：a.准备细胞培养板：选取生长良好的上述细胞系，经胰酶-EDTA消化后，加入细胞生长液制备细胞悬液，调整细胞密度为1.5～3.5×10⁵个/ml，以100ul/孔接入96孔细胞培养板。b.疫苗毒样品的稀释和接种：将要滴定的鸡新城疫疫苗病毒悬液用病毒生长液作10倍倍比稀释；将生长3天的96孔细胞培养板甩掉培养液，每孔加入200μl PBS，洗2次。每个细胞培养孔接入100μl样本，每个稀释度6～8个重复。加入100μl培养基作为阴性对照，每块板至少设2列阴性对照；在37℃±1℃，4～6％CO₂培养箱中培养3～5天；d.将96孔细胞培养板中液体每孔吸取25μl转移96孔v型血凝板，孔孔对应。在96孔v型血凝板每孔加25μl 0.5％鸡红细胞，室温作用20-25分钟。读板，观察每孔的凝集。在记录纸上记录每个稀释度的阳性孔数，并应用Spearman Karber方法并计算病毒滴度。

增殖病毒悬液的毒价测定结果：本实施例所制备的增殖病毒悬液每1ml含病毒≥10^8.2TCID₅₀；

将毒价检验合格的病毒培养液，混合于同一容器内，加入稳定剂，同时加入抗生素，充分摇匀，定量分装；每羽份含细胞毒液不少于0.001ml，分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。

成品检验：按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)进行检验，均符合“鸡新城疫活疫苗”规定，对鸡安全无副作用。每羽份疫苗含病毒≥10^8.2TCID₅₀。

本实施例共制备出3批鸡传染性支气管炎和鸡新城疫二联灭活疫苗，批号分别定为200901、200902、200903，制备的疫苗物理性状检验、安全检验、效力检验等均合格。

实施例2vero细胞系作为制苗用细胞生产新城疫弱毒活疫苗

(1)选择vero细胞系(购自美国ATCC公司)作为制苗用细胞；

(2)制苗用细胞的传代与培养：上述vero细胞系经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，37℃，以细胞生长液继续培养，形成良好单层时，用于继续传代或接种病毒；

(3)细胞毒种的繁殖：生长良好的上述vero细胞系单层用细胞维持液或PBS洗2次，将接细胞种毒(ZM10株；购自中国兽医药品监察所)接种上述细胞系单层，37℃感作1小时；加入病毒培养维持液37℃继续培养，30-40小时细胞80％脱落时收病毒培养维持液作为细胞适应疫苗种毒生产用毒种；

细胞适应疫苗种毒鉴定：细胞毒种鉴定完全符合新城疫低毒力活疫苗制造及检验规程毒种标准，对鸡安全无副作用，细胞毒种每1ml含病毒≥10^7.8TCID₅₀；

(4)制苗毒液的繁殖：取已形成良好单层的上述vero细胞系培养瓶，弃去细胞生长液，用细胞维持液或PBS洗2次，将上述细胞适应疫苗种毒接种上述细胞系单层，37℃感作1小时；加入细胞维持液继续培养，30～40小时细胞80％脱落时收细胞培养毒液；收获的毒液置-15℃以下保存；

制苗毒液的检验：按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)附录15、19页进行检验：无细菌、霉菌、支原体生长。细胞毒液对鸡安全无副作用，每1ml含病毒≥10^7.8TCID₅₀；

(5)配苗、分装及冻干：半数组织感染量(TCID₅₀)方法测定增殖病毒悬液的毒价：a.准备细胞培养板：选取生长良好的上述细胞系，经胰酶-EDTA消化后，加入细胞生长液制备细胞悬液，调整细胞密度为1.5～3.5×10⁵个/ml，以100ul/孔接入96孔细胞培养板。b.疫苗毒样品的稀释和接种：将要滴定的鸡新城疫疫苗病毒悬液用病毒生长液作10倍倍比稀释；将生长3天的96孔细胞培养板甩掉培养液，每孔加入200μl PBS，洗2次。每个细胞培养孔接入100μl样本，每个稀释度6～8个重复。加入100μl培养基作为阴性对照，每块板至少设2列阴性对照；在37℃±1℃，4～6％CO₂培养箱中培养3～5天；d.将96孔细胞培养板中液体每孔吸取25μl转移96孔v型血凝板，孔孔对应。在96孔v型血凝板每孔加25μl 0.5％鸡红细胞，室温作用20-25分钟。读板，观察每孔的凝集。在记录纸上记录每个稀释度的阳性孔数，并应用Spearman Karber方法并计算病毒滴度。

增殖病毒悬液的毒价测定结果：本实施例所制备的增殖病毒悬液每1ml含病毒≥10^7.8TCID₅₀；

将毒价检验合格的病毒培养液，混合于同一容器内，加入稳定剂，同时加入抗生素，充分摇匀，定量分装；每羽份含细胞毒液不少于0.001ml，分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。

成品检验：按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)进行检验：均符合“鸡新城疫活疫苗”规定，对鸡安全无副作用。每羽份疫苗含病毒≥10^7.8TCID₅₀。

试验例1新城疫传代细胞系的筛选与鉴定

一、试验材料：

1、细胞系：MDCK细胞系、vero细胞系，marc-145细胞系、ST细胞系、BHK细胞系和MDBK细胞系(购自美国ATCC公司)。

2、鸡新城疫弱毒株：La sota株，ZM10株、HB92株、CS2株、HB1株和B1株(购自中国兽医药品监察所)。

将鸡新城疫弱毒La sota株接种不同传代细胞系，至37℃培养30～48小时，收获，将收获病毒继续传代，直至3～5代内出现细胞病变，判定病毒可在所用细胞中增殖，实验结果显示新城疫弱毒可在MDCK细胞系、vero细胞系，marc-145细胞系、ST细胞系、BHK细胞系、MDBK细胞系上增殖。

将不同鸡新城疫弱毒分别接种MDCK细胞系、vero细胞系，至37℃培养30～40小时，收获，将收获病毒继续传代，直至3～5代内出现细胞病变，判定该病毒可在所用细胞中增殖，实验结果显示能在MDCK细胞系、vero细胞系增殖的毒株为La sota株，ZM10株、HB92株、CS2株、HB1株和B1株。

试验例2新城疫病毒培养条件的优化试验

1方法

1.1接毒方式研究

1.1.1同步接种

选用生长良好的MDCK细胞(购自美国ATCC公司)2转瓶消化，按1∶3进行传代，其中1瓶作为阴性对照，2瓶传代后以MOI值0.1接种鸡新城疫病毒(鸡新城疫弱毒La sota株；购自中国兽医药品监察所)，置37℃转瓶机内进行培养，接种30～40小时后收获病毒液，冻融2次，测定病毒含量(TCID₅₀)。

1.1.2单层接种

1.1.1消化传代的细胞中，2瓶待细胞长满单层后以MOI 0.1接种病毒，加入维持液，置37℃转瓶机内进行培养，接种30～40小时后收获病毒液，冻融2次，测定病毒含量(TCID₅₀)。

1.2MOI研究

选用生长良好的MDCK细胞，按MOI值0.01，0.05，0.1、0.3和0.5接入病毒液，每个MOI值接种2个转瓶，同时设一个转瓶为阴性对照。接种30～40小时后收获病毒液，冻融2次，测定病毒含量(TCID₅₀)。

1.3病毒收获时间的研究

选生长良好的MDCK细胞，按MOI值0.1加入新城疫病毒液，分别在接毒后第12小时，16小时，20小时，24小时，28小时，32小时，36小时，40小时，44小时，48小时，52小时，56小时取上清样品，测定病毒含量(TCID₅₀)。

1.4病毒培养维持液中胰酶浓度的优化

选择生长良好的MDCK细胞，按按MOI值0.1加入新城疫病毒液，感作一小时后，加入维持液，其中胰酶浓度分别为0.5ug/ml，1.0ug/ml，1.5ug/ml，2.0ug/ml，2.5ug/ml，3ug/ml，接种30～40小时后收获病毒液，冻融2次，测定病毒含量(TCID₅₀)。

2试验结果

2.1接毒方式研究结果表明，单层接毒方式新城疫病毒滴度高于同步接毒方式，详见表1。

表1同步与单层接种比较结果

2.2MOI研究试验结果表明MOI为0.1～0.5时病毒滴度最高，详见表2。

表2MOI研究结果

2.3病毒收获时间及收获次数研究试验结果表明，病毒接种后32～40小时病毒滴度较高，详见表3。

表3病毒收获时间研究结果

收毒时间	20	24	28	32	36	40	44	48	52	56
											培养瓶编号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
TCID50/ml	102.5	102.7	103.8	107.2	107.6	107.4	107.0	107.3	106.3	106.5

2.4病毒培养维持液中胰酶浓度的优化实验结果表明，病毒培养的维持液中胰酶浓度2ug/ml时，病毒的滴度最高。详见表4。

表4病毒培养维持液中胰酶浓度的优化实验结果

3小结

根据以上实验结果，本发明确定新城疫弱毒在MDCK细胞上繁殖的最佳培养条件为：细胞单层时接毒，MOI值为0.1～0.5，维持液中胰酶浓度为1.5～2.5ug/ml，接种32～40小时收获病毒。

试验例3疫苗效力比较试验

1、效力试验中检验用毒

效力比较试验中新城疫病毒采用鸡新城疫北京株(CVCC AV1611株购自中国兽药监察所)，。ELD50为10⁷/0.1ml，攻毒时采用肌肉注射。

2、效力试验中两种疫苗

实施例1制备出3批鸡新城疫低毒力活疫苗，批号分别为200901、200902、200903；按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》(2000年版)中“鸡新城疫低毒力活疫苗制造及检验规程”制备方法、原料与标准制备出的1批鸡新城疫低毒力活疫苗(La sota株)，批号定为200910；对这两种疫苗进行效力比较试验。

3、效力比较试验

每批疫苗选用1月龄SPF鸡10只，滴鼻免疫疫苗，每只0.05ml；10只不免疫作为对照。免疫后分别于第0，7，10，12，14天采血分离血清，采用血凝抑制实验检测抗体消长规律。第14天，所有鸡腿部肌肉注射含10⁴ELD₅₀的鸡新城疫北京株强毒1ml。观察14天，记录免疫鸡和对照鸡存活和死亡情况。

4、效力比较试验结果

试验动物免疫后，由采集血清的血凝抑制价变化情况可知，对照组试验动物HI抗体水平没有变化(HI≤1∶4)，免疫200901批疫苗组的鸡HI抗体呈逐渐上升趋势，第12天均达最高为1∶16；免疫200902批疫苗鸡HI抗体呈逐渐上升趋势，145号鸡最高达1∶64；免疫200902批疫苗鸡HI抗体呈逐渐上升后下降趋势；免疫200910批(鸡胚La sota株)的鸡HI抗体先上升后下降，在第10天均达最高为1∶32(图2)。攻毒后由临床观察记录和死亡情况可知，对照组发病率和死亡率均为10/10。所有免疫组动物发病率和死亡率都为0。详细结果见表5和表6。

表5两种鸡新城疫低毒力活疫苗对鸡新城疫强毒攻击的保护效力比较

表6免疫后试验动物血清NDV抗体检测结果记录表

参照《中华人民共和国兽药典》(2005年版)鸡新城疫活疫苗(La sota株)成品检验方法检验，结果显示：本发明实施例1用MDCK细胞生产的3批鸡新城疫低毒力活疫苗免疫鸡能100％产生免疫保护；均符合规程的要求，全部合格。从疫苗的病毒含量、效力和安全检验结果可以看出，该疫苗的病毒滴度和免疫保护效力达到现有活疫苗规程标准。综上所述，本发明用MDCK细胞系生产的鸡新城疫低毒力活疫苗具有很好的保护作用。

Claims (10)

1.一种鸡新城疫活疫苗的生产方法，包括以下步骤：

(1)鸡胚培养的鸡新城疫弱毒接种传代细胞系，加入病毒生长液进行培养，得到细胞适应疫苗种毒；(2)将细胞适应疫苗种毒接种传代细胞系，加入病毒培养维持液进行培养，收获增殖病毒悬液；(3)测定增殖病毒悬液的毒价，将毒价检测合格的增殖病毒悬液进行配苗、分装及冻干，即得。

2.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(1)中所述的鸡新城疫弱毒包括鸡新城疫弱毒La sota株、鸡新城疫弱毒ZM10株、鸡新城疫弱毒HB92株、鸡新城疫弱毒CS2株、鸡新城疫弱毒HB1株或鸡新城疫弱毒B1株。

3.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(1)中所述的细胞系包括MDCK细胞系、vero细胞系、marc-145细胞系、ST细胞系、BHK细胞系或MDBK细胞系。

4.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(1)中将鸡胚培养的新城疫弱毒按感染复数0.01-0.5MOI接种单层传代细胞系，加入病毒生长液进行培养。

5.按照权利要求4所述的生产方法，其特征在于，步骤(1)中所述的培养包括：鸡胚培养的鸡新城疫弱毒接种传代细胞系，加入病毒生长液进行培养至70-100％的细胞发生病变时收获病毒液；收获的病毒液以同样的方法接种细胞，如此进行2-4代获得细胞适应疫苗种毒。

6.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(2)中将细胞适应疫苗种毒按感染复数0.1-0.5MOI接种单层传代细胞系，加入病毒生长液，培养32～40小时，收获病毒液。

7.按照权利要求1或6所述的生产方法，其特征在于：所述病毒培养维持液中的胰酶浓度为1.5-2.5ug/ml，优选为2.0ug/ml。

8.按照权利要求1或6所述的生产方法，其特征在于：步骤(3)中采用半数组织感染量方法测定增殖病毒悬液的毒价；步骤(3)中所述的配苗、分装及冻干包括：将检验合格的病毒培养液，混合于同一容器内，加入稳定剂，同时加入抗生素，充分摇匀，定量分装；每羽份含细胞毒液不少于0.001ml，分装后进行冷冻真空干燥后即得成品。

9.权利要求1-8任何一项所述生产方法得到的鸡新城疫活疫苗。

10.权利要求9所述的鸡新城疫活疫苗在制备预防或治疗鸡新城疫生物制剂中的用途。

Images