CN107519487A - 禽类第vii基因型新城病之疫苗及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法。所述的禽类第VII基因型新城病之活毒疫苗至少由包含抗原液、稀释液所组成；所述的活毒抗原液系对于利用由新城病鸡只之病毒株感染SPF鸡胚尿囊及/或BHK‑21细胞而得到之活毒抗原液；所述的病毒株寄寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、V201555、V201556，寄存日期为2015年12月23日。另外，一种禽类第VII基因型新城病之去活化疫苗，其至少由包含去活化抗原液、油质佐剂所组成；所述的去活化抗原液系对于利用由新城病鸡只之病毒株感染SPF鸡胚尿囊及/或BHK‑21细胞而得到之去活化抗原液。

Description

禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法
技术领域
本发明系关于一种适用于禽类之疫苗及其制备方法，特别是关于一种禽类第VII基因型新城病(Newcastle Disease,ND)之疫苗及其制备方法。
背景技术
根据台湾(Ke et al.,2008)和韩国(Jeon et al.,2008)的研究结果，指出导致亚洲ND的疫苗免疫失效及ND持续性爆发的主因系在于基因型VII的抗原变异(Jeon et al.,2008；Boven et.al.,2008)。在用来控制包含例如禽类新城病之大流行病的各种手段当中，疫苗通常扮演着不可或缺的重要角色。尤其，在所述的类流行病的特定病毒株引起大量感染而于短时间内爆发重大疫情的情况下，一般是无法以控制环境卫生等之物理手段、或者使用诸如抗生素或抗病毒剂等之化学药剂来加以对抗的，在此之际，通常只能倚赖接种疫苗抑制感染程度及范围来进行防疫。
其次，禽类新城病是由动物副粘科病毒的新城病病毒株(NDV)所引起的急性传染病。然而，截至目前为止尚无一种值得信赖之可靠有效的治疗药物。因而，在习用技术上，为了防止发生此类传染病所采用的预防手段通常是一种利用对不同日龄的鸡群实施计划免疫之方法，特别是施打一种新城病去活化疫苗。
再者，就生产禽类新城病活毒疫苗的方法而论，传统上被普遍采用的方法是先将新城病毒株低毒力HB1株、F株、LaSota株、LaSota-clone30株或N79株等之病毒株液，接种于10日龄无意外抗原、抗体的鸡胚尿囊腔内，于37℃下孵化繁殖；定时收取合格的鸡胚尿囊液来做为免疫原，接着与适量冷藏干燥添加剂充分混合均匀，再以定量分装于无菌投药瓶内，进一步冷藏真空加热干燥制成疫苗。
但是，利用上述传统方法所生产的疫苗来进行防疫时，仍然存在着如以下所述的数个重大问题；例如，即使已经接种疫苗的鸡群亦不能完全有效地防止感染，ND疫情还是时常会发生、以及在鸡群之间传播感染。从而，如何提高鸡只在疫苗接种后的平均抗体力价分布，藉以扼止新城病病毒(NDV)在饲养鸡群中传播而有效阻止ND疫情的蔓延已成为一重大的课题。
此外，由最近的研究报告亦指出在中国于疫苗免疫的鸡群中所分离到的一些NDV，继之以第VII基因型分离株制成ND去活化疫苗施打于鸡只而提供抵抗第VII基因型ND病毒株的保护力，以免导致疾病而造成饲养鸡只死亡或发病。然而，虽然施打此类的疫苗多少可以保护鸡只而部分免除NDV病毒株之攻击，但是于效果上仍然是无法令人满意的。因而，亟待开发出一种能够适用于禽类而有效抑制新城病之活毒疫苗或去活化疫苗。
发明内容
有鉴于此，本发明人等检讨习用之疫苗的制作方法，经由潜心研究的结果，进而发现利用一种禽类新城病去活化疫苗不但能够解决传统技术之问题点，而且能够适用于禽类而有效抑制第VII基因型新城病，因而完成本发明。
易言之，本发明提供一种能够有效预防及降低因受到禽类第VII基因型新城病病毒株之感染所引起的例如禽类呼吸道及神经系统损害症状之第VII基因型新城病去活化疫苗；以及提供一种制备所述的第VII基因型新城病去活化疫苗之方法。
具体而言，根据某些实施例之一观点，本发明提供一种禽类第VII基因型新城病之活毒疫苗，其至少由包含活毒抗原液、稀释液所组成；所述的活毒抗原液系对于利用由新城病鸡只之病毒株感染SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞而得到之活毒抗原液；所述的病毒株为保藏号是CCTCC NO:V201548、名称为鸡七型新城疫病毒(Genotype VII Newcastledisease virus)VII NDV/CB-ND02的病毒株，保藏号是CCTCC NO:V201555、名称为鸡七型新城疫病毒(Genotype VII Newcastle disease virus)VII NDV/CB-ND04的病毒株，或保藏号是CCTCC NO:V201556、名称为鸡七型新城疫病毒(Genotype VII Newcastle diseasevirus)VII NDV/CB-ND06的病毒株，这三株病毒株于2015年12月23日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心；所述的稀释液系磷酸盐缓冲液(PBS)、纯水、5％葡萄糖、及彼等之混合物中之至少一种。尤其，本发明之活毒疫苗特别适合施用于鸡只，特别是饲养鸡只。
其次，又根据某些实施例之一观点，本发明还提供一种活毒疫苗，其系经干燥处理过的；活毒抗原液之含量为在95容积％至65容积％之范围；所述的稀释液之含量为在5容积％至35容积％之范围。
再者，根据某些实施例之其他观点，本发明亦提供一种禽类第VII基因型新城病的活毒疫苗之制备方法，其包括：
自田间新城病鸡只筛选出病毒株；所述的病毒株寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日；
将于上述(a)所得到之所述的病毒株，在SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞中进行培养而获得含有禽类第VII基因型新城病病毒株之活毒抗原液；
将于上述(b)所得到之活毒抗原液、稀释液充分混合而形成一禽类第VII基因型新城病之活毒疫苗。
另外，根据某些实施例之又一观点，本发明也提供一种禽类第VII基因型新城病的活毒疫苗之制备方法，其系进一步包含将于上述(b)所得到之活毒疫苗于冷藏真空下进行干燥，藉以得到一禽类第VII基因型新城病的冷藏真空干燥活毒疫苗。
尤其，在本发明的上述之活毒抗原液之制备方法中，上述(b)之SPF鸡胚尿囊系37℃下，于9日龄无特定病原之鸡胚尿囊中培养。
另者，在本发明的上述之活毒抗原液之制备方法中，上述(b)之BHK-21细胞系37℃、4.5％～5.5％二氧化碳浓度下，于细胞培养箱中培养。
具体而言，根据某些实施例之一观点，本发明提供一种禽类第VII基因型新城病之去活化疫苗，其至少由包含去活化抗原液、油质佐剂所组成；所述的去活化抗原液系对于利用由新城病鸡只之病毒株感染SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞而得到之去活化抗原液；所述的病毒株寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日；所述的油质佐剂系矿物性白油、乳化剂、纯水、及彼等之混合物中之至少一种。尤其，本发明之去活化疫苗特别适合施用于鸡只，特别是饲养鸡只。
其次，又根据某些实施例之一观点，本发明还提供一种禽类第VII基因型新城病之去活化疫苗，其系经干燥处理过的；去活化抗原液之含量为在95容积％至65容积％之范围；所述的油质佐剂之含量为在5容积％至35容积％之范围。
又，根据某些实施例之其他观点，本发明亦提供一种禽类第VII基因型新城病的去活化疫苗之制备方法，其包括：
自田间新城病鸡只筛选出病毒株；所述的病毒株寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日；
将于上述(a)所得到之所述的病毒株，在SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞中进行培养而获得含有禽类第VII基因型新城病病毒株之去活化抗原液；
对于上述(b)所得到之所述的抗原液，于37℃、福尔马林(100ppm～300ppm)存在下进行去活性处理12～24小时以得到去活化抗原液；
将于上述(c)所得到之去活化抗原液、油质佐剂充分混合而形成一禽类第VII基因型新城病的去活化疫苗。
另外，根据某些实施例之又一观点，本发明也提供一种禽类第VII基因型新城病的去活化疫苗之制备方法，其系进一步包含将于上述(b)所得到之去活化疫苗于冷藏保存，藉以得到一禽类第VII基因型新城病的冷藏去活化疫苗。
尤其，在本发明的上述之去活化抗原液之制备方法中，上述(b)之SPF鸡胚尿囊系37℃下，于9日龄无特定病原之鸡胚尿囊中培养。
另者，在本发明的上述之去活化抗原液之制备方法中，上述(b)之BHK-21细胞系37℃、4.5％～5.5％二氧化碳浓度下，于细胞培养箱中培养。
《发明之详细说明》
首先，对于本说明书中所使用的特定用语或名词进行描述性的说明；然而，下列说明仅为例示性说明，非作为限制本发明说明书及申请专利范围。除非本说明书另有定义以外，在本文中所用的科学与技术词汇之含义与本发明所属技术领域中具有通常知识者所理解与惯用的意义相同。
本文术语中关于禽类第VII基因型新城病感染之〝预防〞系指抑制禽类第VII基因型新城病病毒株复制、抑制禽类第VII基因型新城病病毒株传输、或为预防禽类第VII基因型新城病病毒株在其宿主中生长、以及缓和禽类第VII基因型新城病病毒株感染引起的疾病或病症之症状。本发明方法，例如可有效的预防以及降低禽类呼吸道及神经系统之损害。
本文术语之〝禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法〞意指用于预防因若感染禽类第VII基型新城病病毒株引起的病症或疾病之疫苗。禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法可包括任何有效治疗或预防禽类经禽类第VII基因型新城病感染之疫苗。本发明方法使用之较佳禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法为病毒株疫苗。
本文术语之〝动物〞意指所有非人类动物，包括哺乳动物。
本文术语之〝禽类〞意指小鸡、鸡、火鸡、鸭、母鸡、雌鸡、阉鸡、土鸡、公鸡、山鸡及禽类属之成员。
较佳者，本发明方法系施用于非人类之哺乳动物；最佳者为禽类。
本文术语之〝病毒株疫苗〞意指适用于作为疫苗之去活化的全部或部分的禽类第VII基因型新城病病毒株，可以系为鸡胚尿囊及/或细胞制剂。
本文术语之〝有效量〞意指于投用后可充分引起禽类免疫反应的禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法量。免疫反应包含(而未限制)先天诱发的、细胞的及/或体液免疫反应。
在本文中，对于用以界定本发明范围的数值与参数，本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差，因而大多是以约略的数量值来表示，然而于具体实施例中则尽可能精确呈现的相关数值。在本文中，「约」通常视本发明所属技术领域中具有通常知识者的考虑而定，一般系指代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，例如，所述的实际数值为在一特定数值或范围的±10％、±5％、±1％、或±0.5％以内。
本发明之目的即在于提供一种禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法，所述的疫苗系以藉由田间饲养所采集到的禽类新城病病毒株，此病毒株自罹患禽类新城病鸡只中分离出来的NDV，系寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日。
本发明之目的即在于提供一种禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法，所述的疫苗系以藉由感染鸡胚胎培养、动物接种、或组织培养生产所得，其生产出稳定且免疫效果好的疫苗抗原，所述的感染病毒株培养表达系统简便、产量大，生产速度快，安全性高，具有经济效益。
依据本发明之一观点，可使用于本发明之禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法中之所述的感染病毒株培养表达系统并未特别加以限定，举例来说，例如可以是鸡胚胎培养、动物接种、或组织培养。根据本发明之某些具体实施例，所述的疫苗抗原来源例如可以是自鸡胚胎培养、动物接种、或组织培养中之至少一种；适用于本发明之疫苗抗原较佳使用来源为鸡胚胎培养、动物接种、或组织培养；更佳使用来源为鸡胚胎培养、或组织培养；特佳使用来源为组织培养。
本发明之目的即在于提供一种禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法，所述的疫苗系以藉由感染细胞培养生产所得，以获得含有病毒株的细胞上清液，细胞株包括所有对NDV具有良好感受性的哺乳动物肾脏细胞株，例如非洲绿猴肾(African Greenmonkey kidney,Vero细胞)，马丁达比犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK细胞)和其他细胞株等。其所述的感染细胞培养方式可迅速扩大生产规模及质量稳定稳定，具有经济效益即可。
依据本发明之一观点，可使用于本发明之禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法中所述的感染细胞培养之细胞株并未特别加以限定，举例来说，例如可以是Vero细胞、BHK-21细胞、或MDCK细胞。根据本发明之某些具体实施例，所述的感染细胞培养之细胞株来源例如可以是自Vero细胞、BHK-21细胞、或MDCK细胞中之至少一种；适用于本发明之感染细胞培养之细胞株较佳使用来源为Vero细胞、BHK-21细胞、或MDCK细胞；更佳使用来源为Vero细胞、或BHK-21细胞；特佳使用来源为BHK-21细胞。
本发明之目的即在于提供一种禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法，所述的疫苗系以藉由活毒疫苗、减毒疫苗、或去活化疫苗之接种疫苗种类，其接种疫苗种类简单且抗原性稳定，保存简单。
依据本发明之一观点，可使用于本发明之禽类第VII基因型新城病之疫苗及其制备方法中之所述的接种疫苗种类并未特别加以限定，举例来说，例如可以是活毒疫苗、减毒疫苗、或去活化疫苗。根据本发明之某些具体实施例，所述的接种疫苗种类来源例如可以是自活毒疫苗、减毒疫苗、或去活化疫苗中之至少一种；适用于本发明之接种疫苗种类较佳使用种类为活毒疫苗、减毒疫苗、或去活化疫苗；更佳使用种类为减毒疫苗、或去活化疫苗；特佳使用种类为去活化疫苗。
本发明之目的即在于提供一种禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法，所述的病毒株系以先经去活性反应处理方式，藉由以变性或化学方法修饰抗原，去除病毒株的活性。常用的去活性反应处理方式有化学或物理的方法，而方法的选择则取决于其分子的结构及各病原体感染的程度。藉由去活性反应处理方式后，得到失去活性的疫苗抗原，且残余毒性的极低，达到安全稳定的效果。
依据本发明之一观点，可使用于本发明之禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法中之所述的去活性反应处理方式并未特别加以限定，举例来说，例如可以是烷化剂、乙烯氧化物、β-propiolactone、酒精、或福尔马林。根据本发明之某些具体实施例，所述的去活性反应处理方式例如可以是自烷化剂、乙烯氧化物、β-propiolactone、酒精、或福尔马林中之至少一种于，于37℃下进行反应1-16小时；适用于本发明之去活性反应处理方式较佳使用为烷化剂、乙烯氧化物、β-propiolactone、酒精、或福尔马林，于30-40℃下进行反应1-20小时；更佳使用为烷化剂、酒精、或福尔马林，于33-39℃下进行反应8-20小时；特佳使用为酒精、或福尔马林，于36-37℃下进行反应10-12小时。
本发明之目的即在于提供一种禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法，可包括额外的成份，例如佐剂。因为抗原经过去活性反应处理方式后，虽然具有极高的安全性，但所能引起免疫反应较差，常需配合佐剂使用。佐剂能让在注射部位的抗原慢慢释放出来刺激免疫反应使细胞活化。而所述的佐剂，可使用各种包括技艺上已知的佐剂当作辅佐疫苗效果。
依据本发明之一观点，可使用于本发明之禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法中之所述的佐剂并未特别加以限定，举例来说，例如可以是无机佐剂、有机佐剂、合成佐剂、油剂；无机佐剂，如氢氧化铝，明矾等；有机佐剂，微生物及其产物如分枝杆菌(结核杆菌、卡介苗)、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物(胞壁酰二肽)等；合成佐剂，如人工合成的双链多聚核苷酸(双链多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、异丙肌苷等；油剂，如弗氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等。
根据本发明之某些具体实施例，所述的佐剂例如可以是自水性氢氧化铝胶、免疫刺激剂、明矾、Freund氏不完全佐剂、油状佐剂、水溶性佐剂、或水包油包水双相佐剂(water-in-oil-in-water,W/O/W)中之至少一种；适用于本发明之佐剂较佳使用为水性氢氧化铝胶、免疫刺激剂、明矾、Freund氏不完全佐剂、油状佐剂、水溶性佐剂、或水包油包水双相佐剂(water-in-oil-in-water,W/O/W)；更佳使用为水性氢氧化铝胶、免疫刺激剂、油状佐剂、水溶性佐剂、或水包油包水双相佐剂(water-in-oil-in-water,W/O/W)；特佳使用为油质佐剂。
本发明之目的即在于提供一种禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法及活毒疫苗，所述的疫苗保存方式系以藉由冷藏的方式，要把疫苗冷藏保存，首先把要冷藏的物质，冷藏到2～8℃。此种保存方式可以维持药物本身的药效、安全性，并增加药物的保存期限。
本发明之冷藏干燥禽类第VII基因型新城病活毒疫苗系于动物免疫接种前与稀释液混合。用于此目的之稀释液可为一般熟谙此艺者所知者。较佳地，本发明使用之稀释液为磷酸盐缓冲液(PBS)、矿物油剂(OE)、纯水或5％葡萄糖。更佳地，稀释液为磷酸盐缓冲液、矿物油剂或纯水。最佳地，本发明使用之稀释剂为磷酸盐缓冲液。在本发明中，含有约2毫升禽类第VII基因型新城病的活病毒液之冷藏干燥禽类第VII基因型新城病组织培养活毒疫苗(约20剂量/瓶)中可加入约40毫升之稀释液，以用于动物疫苗接种。
依据本发明之一观点，可使用于本发明之禽类第VII基因型新城病活毒疫苗中之所述的保存方式并未特别加以限定，举例来说，例如可以是冷藏真空干燥、升华干燥、脱附、或加热干燥等之保存方式。根据本发明之某些具体实施例，所述的保存方式来源例如可以是自冷藏真空干燥、升华干燥、脱附、或加热干燥等之至少一种；适用于本发明之保存方式较佳使用方式为冷藏真空干燥、升华干燥、脱附、或加热干燥；更佳使用方式为冷藏真空干燥、脱附、或加热干燥；特佳使用方式为冷藏真空干燥。
依据某些特定的实施例，本发明之禽类第VII基因型新城病活毒疫苗系能够藉由饮水、口服、喷雾、点眼、点鼻，及去活化疫苗系能够藉由皮下注射、或肌肉注射等之接种方式来施打，因而本发明之疫苗具有容易且快速接种、安全性高、经济效益良好的优异功效。
依据本发明之一观点，可使用于本发明之禽类第VII基因型新城病活毒疫苗或去活化疫苗中之所述的接种方式并未特别加以限定，举例来说，例如可以是活毒疫苗可以由饮水口服、喷雾、点眼、点鼻等之接种方式；去活化疫苗可以是皮下注射、或肌肉注射等之接种方式。根据本发明之某些具体实施例，所述的接种方式来源例如可以是自饮水口服、喷雾、点眼、点鼻、皮下注射、或肌肉注射等之至少一种；适用于本发明之接种方式较佳使用方式为饮水口服、喷雾、点眼、点鼻、皮下注射、或肌肉注射；更佳使用方式为皮下注射、或肌肉注射；特佳使用方式之活毒疫苗为口服，而去活化疫苗为肌肉注射。
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
具体实施方式
以下，针对本发明的实施态样列举不同的具体实施例而更加详尽地叙述与说明，以便使本发明的精神与内容更为完备而易于了解；然而，本项技艺中具有通常知识者应当明了本发明当然不受限于此等实例而已，亦可利用其他相同或均等的功能与步骤顺序来达成本发明。
此外，藉由下述具体实施例，可进一步证明本发明可实际应用之范围，但不意欲以任何形式限制本发明之范围。
《活毒疫苗之制备》
《制备例1～制备例3》
首先，将自田间新城病鸡只筛选所得到之一第VII基因型新城病病毒株(寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日)当作感染源，接着分别按照表1所示接种于9日龄无特定病原(specific-pathogen-free,SPF)鸡胚胎尿囊腔、或BHK-21细胞(C-13)(ATCC CCL-10)的宿主，接着分别于37℃孵蛋器(Alex亚历克斯电器加工厂，AI-528)或培养箱中(Thermo Scientific Forma，Cat.No.311)中进行培养，然后在培养24～32小时后，从上述的鸡胚胎尿囊腔、BHK-21细胞中抽取培养液并离心过滤而得到第VII基因型新城病抗原液M1～M3。接着，利用第VII基因型新城病抗原液M1～M3与稀释液混合后，得到活毒疫苗命名为VL1、VL2和VL3，配比及用量纪录于表1中。
《表1》
《去活化疫苗之制备》
《制备例4～制备例6》
首先，将自田间新城病鸡只筛选所得到之一第VII基因型新城病病毒株(寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日)当作感染源，接着分别按照表1所示接种于9日龄无特定病原(specific-pathogen-free,SPF)鸡胚胎尿囊腔、或BHK-21细胞(C-13)(ATCC CCL-10)的宿主，接着分别于37℃孵蛋器(Alex亚历克斯电器加工厂，AI-528)或培养箱中(Thermo Scientific Forma，Cat.No.311)中进行培养，然后在培养48小时后，从上述的鸡胚胎尿囊腔、BHK-21细胞中抽取培养液并离心过滤而得到第VII基因型新城病抗原液M4～M6。
然后，将上述所得到第VII基因型新城病抗原液M4～M6与福尔马林(HT501128-4L，Sigma公司制)20％溶液以抗原液对福尔马林之体积比为4000：1的比例充分混合；接着静置于22℃及37℃下进行去活性处理12小时而得到去活化抗原液X1～X3。
将分别依照如表2所示含量之上述所得到的去活化抗原液X1～X3、及油质佐剂充分混合而形成一禽类第VII基因型新城病的去活化疫苗命名为VD4、VD5和VD6，其配置方式记录于表2中。
《表2》
《活毒疫苗之力价验证》
《实施例1～实施例3》
将上述所得到的活毒疫苗VL1～VL3分别以点鼻及皮下注射方式施打于免疫2～3周龄鸡只，每一实施例施打6只，每只鸡施打的疫苗剂量为0.2ml，于3周后采血分离血清S1～S24。
其次，进行血球凝集(hemagglutination；HA)试验，即在96孔U型盘上，从第1排至第10排加入50μl的HI缓冲剂(3.25g KH2P04、10.8g Na2HP04、170g NaCl、经过三次去离子反应的纯水加至2,000mL)，再来于第一列加入50μl的第VII基因型新城病抗原液。
接下来利用微量吸管充分混合后，取第1排的第VII基因型新城病抗原液50μl加入第2排，以再取50μl加入第3排，如此序列稀释至第10排，抗原呈现2倍至1024倍稀释。于第11排为对照组别，则以100μL HI缓冲剂取代第VII基因型新城病抗原液，每排并以3孔相同样本重复进行测试。
最后每孔加入50μL 1％鸡红血球液(cRBC)，以手轻微摇晃孔盘后，之后以胶膜封住孔盘，置于室温或4℃下静置作用30分钟后判读；以与第VII基因型新城病抗原液最高稀释倍数仍有血球凝集作用者为其HA之力价，此即为1单位(1HAU)之抗原最高稀释倍数仍有血球凝集作用者为HA之力价，于进行HI试验时通常取8HAU，以求取NDV病毒株液免役后鸡只之HI力价。
进行血球凝集抑制试验(HI)前，须先以HI缓冲剂稀释第VII基因型新城病抗原液至每25μl稀释液中含有8HAU的第VII基因型新城病抗原液。
接着，在96孔U型盘上加入25μL HI缓冲剂，再加入25μL之上述所采得的待测血清S25～S48依序加入盘中，接下来利用微量吸管充分混合后，第1排混合均匀的血清取25μl加入第2排，以再混合均匀后取25μl加入第3排，如此序列稀释至第10排，第11排为不加抗血清之对照组，此排只加入25μL 8HAU抗原量，于室温作用30分钟，使抗原和待测血清相互作用结合后，再于每孔加25μL 1％cRBC，经室温作用30分钟后判读血球是否有凝集作用，而最高稀释倍数仍有血球凝集作用者为病毒力价，将各实施例每组6只鸡只试验结果的病毒力价之平均值分别记录于表3。
然后，于施打疫苗6周后，观察各实施例中每组6只经接种之鸡只的存活率，并将各实施例之存活率之试验结果的平均值分别记录于表3。
另外，以不对鸡只施打禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法当做对照组，重复进行上述同样的试验，分别测定各对照组的鸡只血液中之病毒力价并观察各对照组中鸡只的存活率。
《表3》
控制例 实施例1 实施例2 实施例3
施打组别 PBS VL1 VL2 VL3
施打方式 皮下注射 点鼻 皮下注射 肌肉注射
施打剂量(μl) 25 20 25 30
施打时间(week) 2 2 2 2
施打个数(只) 6 6 6 6
存活率(％) 15±9.3 99±1.3 100±0.3 95±6.3
抗体力价 16× 512× 1024× 1024×
如上述表3所示，在对照组中，所述的未施打本发明之禽类第VII基因型新城病活毒疫苗的鸡只仅显示小于16×之低弱的抗体力价；相对地，在实施例1～实施例3中，经施打本发明之禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法的鸡只则显示至少在512×以上之高强度抗体力价。
另外，存活率试验的结果亦显示：在对照组的鸡只感染6周之存活率仅为20％以下，而感染8周后鸡只的存活率则降为0；另一方面，在实施例1～3中，经施打本发明之禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法的鸡只，即使是在感染8周以上亦全数存活，显示出高达95％的存活率。
《去活化疫苗之力价验证》
《实施例4～实施例6》
将上述所得到的活毒疫苗VD4～VD6分别以点鼻及皮下注射方式施打于免疫2～3周龄鸡只，每一实施例施打6只，每只鸡施打的疫苗剂量为0.2ml，于3周后采血分离血清S25～S48。
其次，进行血球凝集(hemagglutination；HA)试验，即在96孔U型盘上，从第1排至第10排加入50μl的HI缓冲剂(3.25g KH2P04、10.8g Na2HP04、170g NaCl、经过三次去离子反应的纯水加至2,000mL)，再来于第一列加入50μl的第II基因型新城病抗原液。
接下来利用微量吸管充分混合后，取第1排的第VII基因型新城病抗原液50μl加入第2排，以再取50μl加入第3排，如此序列稀释至第10排，抗原呈现2倍至1024倍稀释。于第11排为对照组别，则以100μL HI缓冲剂取代第VII基因型新城病抗原液，每排并以3孔相同样本重复进行测试。
最后每孔加入50μL 1％鸡红血球液(cRBC)，以手轻微摇晃孔盘后，之后以胶膜封住孔盘，置于室温或4℃下静置作用30分钟后判读；以与第VII基因型新城病抗原液最高稀释倍数仍有血球凝集作用者为其HA之力价，此即为1单位(1HAU)之抗原最高稀释倍数仍有血球凝集作用者为HA之力价，于进行HI试验时通常取8HAU，以求取NDV病毒株液免役后鸡只之HI力价。
进行血球凝集抑制试验(HI)前，须先以HI缓冲剂稀释第VII基因型新城病抗原液至每25μl稀释液中含有8HAU的第VII基因型新城病抗原液。
接着，在96孔U型盘上加入25μL HI缓冲剂，再加入25μL之上述所采得的待测血清S25～S48依序加入盘中，接下来利用微量吸管充分混合后，第1排混合均匀的血清取25μl加入第2排，以再混合均匀后取25μl加入第3排，如此序列稀释至第10排，第11排为不加抗血清之对照组，此排只加入25μL 8HAU抗原量，于室温作用30分钟，使抗原和待测血清相互作用结合后，再于每孔加25μL 1％cRBC，经室温作用30分钟后判读血球是否有凝集作用，而最高稀释倍数仍有血球凝集作用者为病毒力价，将各实施例每组6只鸡只试验结果的病毒力价之平均值分别记录于表4。
然后，于施打疫苗6周后，观察各实施例中每组6只经接种之鸡只的存活率，并将各实施例之存活率之试验结果的平均值分别记录于表4。
另外，以不对鸡只施打禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法当做对照组，重复进行上述同样的试验，分别测定各对照组的鸡只血液中之病毒力价并观察各对照组中鸡只的存活率。
《表4》
控制例 实施例4 实施例5 实施例6
施打组别 PBS VD4 VD5 VD6
施打方式 皮下注射 点鼻 皮下注射 肌肉注射
施打剂量(μl) 25 20 25 30
施打时间(week) 2 2 2 2
施打个数(只) 6 6 6 6
存活率(％) 15±9.3 99±1.3 100±0.3 95±6.3
抗体力价 16× 512× 1024× 1024×
如上述表4所示，在对照组中，所述的未施打本发明之禽类第VII基因型新城病活毒疫苗的鸡只仅显示小于16×之低弱的抗体力价；相对地，在实施例4～实施例6中，经施打本发明之禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法的鸡只则显示至少在512×以上之高强度抗体力价。
另外，存活率试验的结果亦显示：在对照组的鸡只感染6周之存活率仅为20％以下，而感染8周后鸡只的存活率则降为0；另一方面，在实施例4～6中，经施打本发明之禽类第VII基因型新城病疫苗及其制备方法的鸡只，即使是在感染8周以上亦全数存活，显示出高达95％的存活率。
从而，可以确认经施打所述的去活化疫苗的鸡只能够增加免疫保护能力，进而具有对抗第VII基因型新城病感染之优异的效果。所以，本发明之禽类第VII基因型新城病活毒疫苗及去活化疫苗能够明显地提高鸡只的病毒力价，增强鸡只等禽类的免疫力及存活率。
综上所述，本发明的内容已经以如上的实施例举例说明了，然而本发明并非仅限定于此等实施方式而已。本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可再进行各种的更动与修饰；例如，将前述实施例中所例示的各技术内容加以组合或变更而成为新的实施方式，此等实施方式也当然视为本发明所属内容。因此，本案所欲保护的范围也包括后述的申请专利范围及其所界定的范围。
【生物材料保藏】
将本发明该病毒株保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center For TypeCulture Collection，CCTCC)，保藏日为2015年12月23日；CB-ND02病毒株的保藏号为CCTCCNO:V201548，CB-ND04病毒株的保藏号为V201555、CB-ND06病毒株的保藏号为CCTCCNo:V201556。

Claims (10)

1.一种禽类第VII基因型新城病之活毒疫苗，其特征在于，其至少由包含活毒抗原液、稀释液所组成；
所述的活毒抗原液系对于利用由新城病鸡只之病毒株感染SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞而得到之活毒抗原液；
所述的病毒株为保藏号是CCTCC NO:V201548、名称为鸡七型新城疫病毒(GenotypeVII Newcastle disease virus)VII NDV/CB-ND02的病毒株，保藏号是CCTCC NO:V201555、名称为鸡七型新城疫病毒(Genotype VII Newcastle disease virus)VII NDV/CB-ND04的病毒株，或保藏号是CCTCC NO:V201556、名称为鸡七型新城疫病毒(Genotype VIINewcastle disease virus)VII NDV/CB-ND06的病毒株，这三株病毒株于2015年12月23日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心；
所述的稀释液系选自纯水、磷酸盐缓冲液、5％葡萄糖、及彼等之混合物中之至少一种。
2.根据权利要求1所述禽类第VII基因型新城病的活毒疫苗，其特征在于，所述的活毒抗原液之含量为在95容积％至65容积％之范围；所述的稀释液之含量为在5容积％至35容积％之范围。
3.一种禽类第VII基因型新城病的活毒疫苗之制备方法，其特征在于，所述的活毒疫苗為权利要求1或2所述禽类第VII基因型新城病的活毒疫苗，其包括：
(a)自田间新城病鸡只筛选出病毒株；所述的病毒株寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日；
(b)将于上述(a)所得到之所述的病毒株，在SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞中进行培养而获得含有禽类第VII基因型新城病病毒株之活毒抗原液；
(c)将于上述(b)所得到之活毒抗原液、稀释液充分混合而形成一禽类第VII基因型新城病之活毒疫苗。
4.根据权利要求3所述活毒疫苗之制备方法，其特征在于，上述步骤(b)中所述SPF鸡胚尿囊系37℃下，于9日龄无特定病原之鸡胚尿囊中培养。
5.根据权利要求3所述活毒疫苗之制备方法，其特征在于，上述步骤(b)中所述BHK-21细胞系37℃、4.5％～5.5％二氧化碳浓度下，于细胞培养箱中培养。
6.一种禽类第VII基因型新城病之去活化疫苗，其特征在于，其至少由包含去活化抗原液、油质佐剂所组成；
所述的去活化抗原液系对于利用由新城病鸡只之病毒株感染SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞而得到之去活化抗原液；
所述的病毒株寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCCNO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日；
所述的油质佐剂系矿物性白油、乳化剂、纯水、及彼等之混合物中之至少一种。
7.根据权利要求6所述去活化疫苗，其特征在于，去活化抗原液之含量为在95容积％至65容积％之范围；所述的油质佐剂之含量为在5容积％至35容积％之范围。
8.一种禽类第VII基因型新城病的去活化疫苗之制备方法，其特征在于，所述的去活化疫苗為权利要求6或7所述禽类第VII基因型新城病的去活化疫苗，其包括：
(a)自田间新城病鸡只筛选出病毒株；所述的病毒株寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存号码为CCTCC NO:V201548、CCTCC NO:V201555、CCTCC NO:V201556，寄存日期为2015年12月23日；
(b)将于上述(a)所得到之所述的病毒株，在SPF鸡胚尿囊及/或BHK-21细胞中进行培养而获得含有禽类第VII基因型新城病病毒株之活毒抗原液；
(c)对于上述(b)所得到之所述的抗原液，于37℃、浓度为100ppm～300ppm的福尔马林存在下进行去活性处理12～24小时以得到去活化抗原液；
(d)将于上述(c)所得到之去活化抗原液、油质佐剂充分混合而形成一禽类第VII基因型新城病的去活化疫苗。
9.根据权利要求9所述去活化疫苗之制备方法，其特征在于，上述步骤(b)中所述SPF鸡胚尿囊系37℃下，于9日龄无特定病原之鸡胚尿囊中培养。
10.根据权利要求9所述去活化疫苗之制备方法，其特征在于，上述步骤(b)中所述BHK-21细胞系37℃、4.5％～5.5％二氧化碳浓度下，于细胞培养箱中培养。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102600465A (zh) * 2010-12-28 2012-07-25 华威特（北京）生物科技有限公司 鸡新城疫活疫苗的生产方法及其产品
CN103937817A (zh) * 2014-02-17 2014-07-23 北京华都诗华生物制品有限公司 鸡新城疫病毒yt毒株、其全基因组序列及其应用
CN105543180A (zh) * 2016-01-04 2016-05-04 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 一株基因vii型鸡新城疫病毒毒株的分离鉴定和纯化方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102600465A (zh) * 2010-12-28 2012-07-25 华威特（北京）生物科技有限公司 鸡新城疫活疫苗的生产方法及其产品
CN103937817A (zh) * 2014-02-17 2014-07-23 北京华都诗华生物制品有限公司 鸡新城疫病毒yt毒株、其全基因组序列及其应用
CN105543180A (zh) * 2016-01-04 2016-05-04 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 一株基因vii型鸡新城疫病毒毒株的分离鉴定和纯化方法及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘万华: "基因VII型NDV的分离鉴定及其与La Sota株的交叉免疫保护试验", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *
王永芬 等主编: "《动物生物制品技术》", 31 August 2011 *

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