KR20200061508A - 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 및 이를 포함하는 백신 조성물 - Google Patents

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권도현
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Abstract

약독화된 조류메타뉴모바이러스 주, 및 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병에 대한 백신 조성물을 제공한다.

Description

약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 및 이를 포함하는 백신 조성물{An attenuated avian metapneumovirus and a vaccine composition including the same}
본 발명은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 및 이를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다.
조류메타뉴모바이러스 (avian metapneumovirus, aMPV)는 칠면조와 닭에서 각각 비기관염 (Turkey rhinotrachitis, TRT)과 두부종창증 (Swollen Head Syndrome, SHS)을 일으키는 주요 원인체로 알려져 왔다. 상기 바이러스는 1986년 최초 분리되어 보고된 이후, 미국, 유럽, 아시아, 중동 및 북아프리카에 이르기까지 전 세계적으로 분포하고 있다. 국내에서는 1992년에 닭에서 두부종창증 소견을 보이는 임상사례와 혈청학적으로 감염된 사례가 확인되어 보고된 바 있으며, 최근 심한 콧물과 탈색란을 동반하는 산란저하 소견을 보이는 육계와 육용종계에서 원인 바이러스가 분리되어 국내 양계 산업의 경제적 피해를 유발하는 주요 질병 중 하나로 재인식되고 있다.
닭의 경우 aMPV 감염 시 폐사율은 그다지 높지 않으나 이환율은 높으며, 특히 심한 콧물을 동반하는 호흡기 증상을 유발하여 산란계의 생산성을 저하시키고, 대장균증으로 이환되어 육계의 증체율 감소와 대장균성 복막염으로 인한 폐사의 주요 원인이 되고 있다.
이 질병을 일으키는 원인체는 Family Paramyxoviridae의 Genus Metapneumovirus에 속하는 aMPV로, 단일 혈청형으로 존재하고 있으며, G 단백질 유전자 염기서열을 기초로 4개의 유전형(A, B, C, 및 D)이 존재하고 있는 것으로 보고되었다. 모든 유전형이 발병하는 칠면조와 달리, 닭의 경우 A와 B 유전형 만이 피해를 유발할 수 있는 것으로 알려져 있다.
닭에서 aMPV는 약 4 내지 6주령의 육계에 주로 감염되는데 많은 폐사가 유발되지는 않지만 어린 칠면조와 마찬가지로 심한 호흡기 증상을 나타내어 식욕 감퇴에 따른 증체율 저하를 유발하여 농가의 경제적 손실을 야기하는 주요 원인으로 작용한다. 이 경우 흔히 코감기라고 표현되는 콧물, 재채기, 눈물 등의 증상이 50% 이상의 감염계에서 관찰되며, aMPV의 대표 증상이라고 알려진 부비동염에 의한 두부종창은 10% 미만의 감염계에서 드물게 관찰되는 증상이다.
반면 육용종계나 산란계의 경우 연령과 무관하게 감염 가능하나 산란 개시 또는 산란 피크기 (약 24 내지 52주령)에 감염되는 사례가 많다. 이는 산란과 연관된 신체적인 스트레스가 원인으로 알려져 있다.
국내 닭에서의 감염 사례는 지속적으로 보고되고 있으며 육계, 산란계, 육용종계에 이르기까지 매우 다양하다. 국내 육계 농장에서 흉선이 심하게 위축되어 면역억제소견을 보이는 농장에서 aMPV가 검출된 바 있으며, 또한 심한 콧물로 사료효율을 저하시키고 복막염 등 만성 호흡기로 지속적인 폐사를 유발한 육용종계군에서도 바이러스가 검출되었다. 실제 국내 육계 농장의 경우 심한 증체 저하로 인하여 출하일이 39일로 지연되었고 2차 세균감염에 의한 폐사 등으로 출하율이 90%, 생산지수가 190으로 나타나는 등 심각한 피해를 경험한 사례가 있었다. 그 밖에, aMPV에 감염된 육용종계군에서는 호흡기 증상 외에도 최대 10%까지 백색란이 발생하였고, 산란율에도 영향을 미쳐 10% 정도의 산란저하를 유발하기도 하였다. 더불어 산란피크 직전에 aMPV에 감염 시 산란피크에 도달하지 못하고 산란피크를 전후하여 폐사가 증가하는 양상을 보이기도 하였으며 케이지사보다 평사에서 보다 심한 피해를 일으키는 특징을 나타내었다.
최근 국내에서 real-time RT-PCR 등과 같은 새로운 진단기술의 개발로 aMPV와 유사한 호흡기 질병과의 신속 감별진단이 보편화되면서 국내 육계, 산란계, 종계농장에서의 aMPV 감염피해 확인사례가 최근 많이 증가되고 있다. 그러나 현재 국내 상용화된 뉴모바이러스 백신은 모두 사독 백신이다. 이러한 사독백신은 보강면역의 용도로서는 적합하나 초기면역을 부여하는데에는 적합하지 못하다. 대다수의 종계나 산란계를 사육하는 농가에서 사독백신을 접종하고 있음에도 aMPV에 대한 실제 피해는 예방하는데 제한적인 것이 현실이다.
백신을 접종하는 방법은 백신의 효용성을 평가하는데 중요한 요소이다. 현재 국내 양계 전업농가의 경우, 일반적인 사육수가 5만 마리 내외로, 사육중인 닭에 대해 백신을 개별접종하는 것은 매우 수고스러운 일이다. aMPV 생독백신을 고안한 사례가 있으나 닭의 비강에 백신액을 개별 접종하여 면역을 유도하였다. 실제 사육현장에서 닭에게 개별접종하는 것은 불편할 뿐 아니라 현재 비강투여로 백신을 접종하는 방법은 사용치 않는 방법이므로, 효옹성을 높이는 다른 백신의 필요성이 발생하고 있다.
일 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주를 제공한다.
일 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병에 대한 백신 조성물을 제공한다.
일 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병에 대한 백신 조성물을 닭에 투여하여 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발되는 질병을 예방하거나 경감시키는 방법을 제공한다.
일 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스를 제조하는 방법을 제공한다.
일 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병에 대한 백신 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
일 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주를 제공한다. 상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스는 Ck/A/Kr655/07 조류메타뉴모바이러스 주를 약독화한, 수탁번호 KCTC 18707P로 기탁된 조류메타뉴모바이러스 주일 수 있다. 상기 Ck/A/Kr655/07 조류메타뉴모바이러스 주는 수탁번호 KCTC 12424BP로 기탁된 것일 수 있다.
상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주는 Ck/A/Kr655/07 조류메타뉴모바이러스 주를 하이 패시지(high passage)로 약독화한 것일 수 있다. 상기 하이 패시지는 약 10 계대 내지 90 계대, 10 계대 내지 80계대, 10 계대 내지 70 계대, 20 계대 내지 90계대, 20 계대 내지 80 계대, 20 계대 내지 70계대, 30 계대 내지 90 계대, 30 계대 내지 80계대, 30 계대 내지 70 계대, 40 계대 내지 90계대, 40 계대 내지 80계대, 40 계대 내지 70계대, 50 계대 내지 90계대, 50 계대 내지 80계대, 50 계대 내지 70계대, 60 계대 내지 90계대, 또는 60 계대 내지 80계대일 수 있다.
상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스는 A형 (subtype A), B형, C형, 또는 D형일 수 있다. 상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스 (avian metapneumovirus, aMPV)는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 G 단백질을 코딩하는 유전자를 발현하는 것일 수 있다.
상기 조류메타뉴모바이러스는 chicken/A/Korea/655/07일 수 있고, Ck/A/Kr/655/07로 지칭될 수 있다. 상기 조류메타뉴모바이러스는 국내 유래의 조류메타뉴모바이러스와 상동성을 갖는 것일 수 있다. 상기 국내 유래의 조류메타뉴모바이러스는 chicken/A/Korea/1336/2004, chicken/A/Korea/166/2004, chicken/A/Korea/167/2004, 또는 chicken/A/Korea/301/2008일 수 있다. 상기 조류메타뉴모바이러스는 외래 유래의 조류메타뉴모바이러스와 덜 상동성을 갖는 것일 수 있다. 상기 외래 유래의 조류메타뉴모바이러스는 예를 들면 BUT1#8544일 수 있다. 상기 바이러스는 닭으로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 바이러스는 국내 닭으로부터 분리된 것일 수 있다.
다른 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병에 대한 백신 조성물을 제공한다. 상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스는 상술한 바와 동일할 수 있다.
상기 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병은 호흡기 증상 및/또는 대장균성 복막염일 수 있다.
상기 약독화된 백신 조성물은 면역학적 유효량으로 투여할 수 있다. 용어 "면역학적 유효량"이란 백신효과를 나타낼 수 있을 정도의 충분한 양과 부작용이나 심각한 또는 과도한 면역반응을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 구체적으로, 본 발명의 백신 조성물의 면역학적 유효량이 약 103 내지 105 TCID50/수이다. 그러나 정확한 투여 농도는 투여될 항원에 따라 달라지며, 닭의 나이, 성별, 체중, 투여 경로, 또는 투여 방법 등 수의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있으며, 1회 내지 수회 투여가능 하다.
상기 약독화된 백신 조성물은 1마리 이상의 개체에 대하여 동시 투여할 수 있다. 상기 동시 접종용 백신 조성물은 음수 투여법, 분무 접종법, 또는 점안 접종법에 의해 투여될 수 있다. 동시 접종용 백신 조성물은 개별 접종용 백신 조성물에 비하여 일회 투여에 의한 백신 투여 개체의 수가 현저히 증가될 수 있다. 상기 백신은 약 10 마리 이상의 개체에 대하여 동시 투여할 수 있다. 상기 백신은 약 100 마리 이상의 개체에 대하여 동시 투여할 수 있다. 상기 백신은 약 1,000 마리 이상의 개체에 대하여 동시투여할 수 있다. 상기 백신은 약 10,000 마리 이상의 개체에 대하여 동시투여할 수 있다. 상기 백신은 약 50,000 마리 이상의 개체에 대하여 동시투여할 수 있다. 상기 백신은 약 100,000 마리 이상의 개체에 대하여 동시투여할 수 있다. 상술한 접종 방법은 상기 백신 조성물의 효용성 평가에 중요한 요소일 수 있다. 상기 약독화된 백신 조성물은 비경구적 또는 경구적으로 투여될 수 있다.
상기 약독화된 백신은 생백신 (live vaccine)또는 생독백신일 수 있다.
상기 약독화된 백신 조성물은 병원성의 복귀가 없는 것일 수 있다. 상기 약독화된 백신 조성물은 안전하고 병원성의 복귀가 없는 것일 수 있다. 상기 약독화된 백신 조성물은 병원성의 재복귀가 없는 것일 수 있다.
상기 약독화된 백신은 초기면역을 부여용 일 수 있다. 상기 약독화된 백신으로 초기면역을 확보하여 aMPV와 같이 호흡기에 감염하는 질병을 예방할 수 있다. 사독백신을 접종함에도 현재 국내에 지속적인 피해를 유발하는 현실을 고려해 볼때, 상기 약독화된 백신에 대한 산업적이 필요성이 존재한다.
다른 양상은 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 제조방법일 수 있다. 상기 제조방법은 a) 감염되기 쉬운 기질에 조류메타뉴모바이러스를 접종하는 단계; b) 상기 조류메타뉴모바이러스를 증식시키는 단계; c) 상기 조류메타뉴모바이러스 함유 물질을 수거하는 단계; 및 d) 상기 수거된 바이러스를 열처리하여 바이러스 본연의 병원성이 약화되었는지를 확인하는 단계를 포함하고, 약화되지 않은 경우에 상기 a)에서 d)단계를 약화될 때까지 반복하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 반복하는 단계를 10 내지 90 회, 10 내지 80 회, 10 내지 70 회, 20 내지 90 회, 20 내지 80 회, 20 내지 70 회, 30 내지 90 회, 30 내지 80 회, 30 내지 70 회, 40 내지 90 회, 40 내지 80 회, 40 내지 70 회, 50 내지 90 회, 50 내지 80 회, 50 내지 70 회, 60 내지 90 회, 또는 60 내지 80 회 수행하는 것일 수 있다. 상기 반복하는 단계는 계대 배양일 수 있다. 상기 계대 배양은 연속 계대 배양일 수 있다. 상기 계대 배양은 생체 배양일 수 있다.
상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주의 제조방법은 병원성의 복귀 여부를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 병원성의 복귀 여부를 확인하는 단계는 상술한 반복 단계 이후에 수행될 수 있다.
다른 양상은 닭을 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병에 대한 백신 조성물의 제조 방법일 수 있다. 상기 백신 조성물의 제조 방법은 상술한 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주에 약학적으로 허용되는 부형제를 첨가하는 단계를 포함할 수 있다.
도 1은 aMPV Ck/A/Kr/655/07 주의 6번 계대로 약독화한 조류메타뉴모바이러스 주의 G 단백질 유전자 염기 서열을 나타낸 것이다.
도 2는 aMPV Ck/A/Kr/655/07 주의 36번 계대로 약독화한 조류메타뉴모바이러스 주의 G 단백질 유전자 염기 서열을 나타낸 것이다.
도 3은 Ck/A/Kr/655/07 바이러스와 국내외 aMPV 분리주의 계통학적 분석을 나타낸 것이다.
이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 국내 야외농장에서의 조류 메타뉴모바이러스 Ck/A/Kr/655/07주 분리 및 동정
1.1 국내 야외농장에서의 조류 메타뉴모바이러스 Ck/A/Kr/655/07주 분리 및 동정
2007년 충남 소재의 한 육용종계 농장에서 의뢰된 육용종계의 구강인두를 면봉으로 문질러 채취한 샘플 및 코선반을 겐타마이신이 첨가된 MEM 배지에 재부유 시켰다. 이를 1,000g에서 10분간 원심분리하여 세포와 조직액을 침전시키고. 이후 상층액에서 RNA 추출 및 실시간 역전사 중합효소연쇄반응 (Real-time RT PCR)을 통해 aMPV임을 진단하고 Vero 세포(원숭이 신장 세포)에 접종하여 aMPV Ck/A/Kr/655/07주를 최종 동정하였다.
1.2 Real-time RT-PCR을 통한 확진 및 subtype 구분
구강인두를 면봉으로 채취한 샘플 및 코선반의 원심 후 상층액을 RNeasy kit (Qiagen, USA)를 사용하여 RNA 추출하였다. QuantiTect Probe RT-PCR kit (Qiagen, USA)를 활용하여 RNA 추출액 10 ㎕, 마스터 믹스 (Quantitect master mix) 12.5 ㎕, RT 믹스 (Quantitect RT mix) 0.25 ㎕, aMPV G 단백질 유전자에 대한 A 타입용 프라이머 2종 및 B 타입용 프라이머 2종 각 0.375 ㎕(55 uM), A타입용 프로브 1종 및 B타입용 프로브 1종 각 0.375 ㎕(14 uM)를 혼합하여 총 25 ㎕를 만들었다. 표 1은 Real-time RT-PCR에 사용된 프라이머 및 프로브 서열을 나타낸다. 상기 혼합액을 SmartCycler (Cepheid, USA)를 사용하여 50℃ 30분, 95℃ 15분으로 1회 반응시킨 후, 94℃ 15초, 55℃ 60초로 45회 반응시켜 실시간 역전사 중합효소연쇄반응 (Real-time RT-PCR)을 진행하였다.
Figure pat00001
1.3 분리된 avian metapneumovirus aMPV Ck/A/Kr/655/07주의 분자생물학적 특성 규명
Real-time RT-PCR을 통해 양성이 확인된 샘플은 RT-PCR을 진행하였다. aMPV G 단백질 유전자에 대해 각각의 subtype을 증폭시킬 수 있는 프라이머를 사용하여 A 타입의 경우 268개 염기서열, B 타입의 경우 361개의 염기서열을 증폭시켜 분석하였다. aMPV Ck/A/Kr/655/07 바이러스의 경우 분석 결과 A형 (subtype A)에 속하는 것으로 나타났다. (도 2) (Cavanagh et al., Subtype B avian metapneumovirus resembles subtype A more closely than subtype C or human metapneumovirus with respect to the phosphoprotein, and second matrix and small hydrophobic proteins, Virus Research 92:171-178, 2003)
실시예 2: vero 세포계대 과정을 통한 바이러스의 약독화
분리된 aMPV Ck/A/Kr/655/07주를 생독백신주로 사용하기 위하여 vero 세포에 연속계대 배양함으로서 바이러스 본연의 병원성을 약독화 하였다.
약독화 하기 위해 vero 세포를 세포배양용 플라스크에 2*105/ml로 분주하여 37℃ CO2 인큐베이터에 24시간 배양 후 세포단층 형성 90~100% 확인 후 세포배양액 제거하였다. 멸균된 PBS를 이용하여 2~3회 세척한 후 aMPV Ck/A/Kr/655/07주를 접종한 후 37℃ 인큐베이터에서 40분 인큐베이터에서 흡착시켰다. 약 5일 배양 후 플라스크를 -70℃ 냉동고에서 3회 동결융해한 후 마지막 융해 후 플라스크 내 배양액을 4℃에서 2000rpm으로 3분간 원심분리 하였다. 분리된 상층액을 바이러스 원액으로 사용하여 다시 새로운 vero세포에 계대 하였다. 이와 같은 방법으로 약독화를 위한 vero 세포 연속계대를 통하여 바이러스 본연의 병원성이 약화될 때까지 반복하여 (Vero P70) aMPV Ck/A/Kr/655/07주 하이 패시지 주를 확보하였다. 약독화된 바이러스의 평가는 1일령 SPF병아리에 수당 aMPV 104.5TCID50씩 30ul로 점안접종 및 70ul로 비강접종 하였다. 바이러스 약독화의 평가는 증류수를 분무한 음성대조군, 계대배양이 되지 않은 aMPV 로우 패시지 주, vero 세포 계대 배양된 aMPV 하이 패시지 주를 각각 점안 및 비강으로 접종한 후 조직학적 소견을 평가하여 aMPV 하이 패시지 주의 안전성을 확인하였다. 표 2,3은 1일령 SPF 병아리에 접종 4일, 7일 뒤 조직학적 검사 결과 및 섬모소실 검사 평가 결과이다.
Figure pat00002
Figure pat00003
실시예 3: 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주의 게놈 염기 서열 분석
실시예 2에서 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주의 게놈 염기 서열을 실시예 1.3의 기재된 게놈 염기 서열 분석 방법과 동일한 방법으로 분석하였다. 도 1은 aMPV Ck/A/Kr/655/07 주의 6번 계대로 약독화한 조류메타뉴모바이러스 주의 G 단백질 유전자 염기 서열을 나타낸 것이다. 도 2는 aMPV Ck/A/Kr/655/07 주의 36번 계대로 약독화한 조류메타뉴모바이러스 주의 G 단백질 유전자 염기 서열을 나타낸 것이다.
Figure pat00004
Figure pat00005
실시예 4: 기타병원체 부정 시험
Vero 세포에서 계대가 진행될 때마다 세포배양액의 상층액을 aMPV의 고도 면역혈청을 사용하여 바이러스를 완전히 중화하고 중화된 상층액을 발육계란에 접종한 결과, 계태아는 정상 발육하였으며, 적혈구응집성 및 포크형성은 확인되지 않았다. 표 4는 미입 바이러스 부정시험 결과를 나타낸다.
Figure pat00006
실시예 5: Ck/A/Kr/655/07 하이패시지 생독백신 안전성 시험
본 시험백신의 안전성을 평가하기 위하여, 3주령 SPF 닭에 Ck/A/Kr/655/07 하이패시지 10수분을 접종한 후 14일간 관찰하였을 때 대조군에 비하여 증체율에 차이가 없었으며, aMPV 감염 시 특이적인 임상증상인 재채기, 두부 종창, 사경도 확인되지 않았다. 표 5는 3주령 SPF 닭에서 시험백신 10수분 접종 후의 증체율과 임상증상을 나타낸다.
Figure pat00007
실시예 6: 백신의 최소면역원성 시험
Ck/A/Kr/655/07주 하이패시지주의 최소면역형성능 산정을 위해 바이러스함량을 103.5TCID50/dose, 104.0TCID50/dose, 104.5TCID50/dose로 제조하고, 3주령 SPF 병아리 40수를 선정하여 바이러스 함량 별 시험백신을 각각 10수씩 접종하여 10수의 대조계와 같이 각각 격리 사육상에서 사육하고 접종 4주 후에 채혈하여 시험구별로 aMPV 항체가를 측정하여 효능차이를 관찰하였다. 103.5TCID50을 점안접종 하였을 때에도 약 80% 이상의 항체 양성율과 높은 항체가로 백신 후보주의 뛰어난 면역원성을 갖고 있어 효과적인 aMPV의 방어에 적합할 것으로 확인하였다. 표 6는 Ck/A/Kr/655/07주 하이패시지주 점안백신 접종량별 aMPV 항체가를 나타낸다.
Figure pat00008
실시예 7: 백신의 방어능 시험
7.1 점안백신에 대한 방어능 시험
Ck/A/Kr/655/07주 하이패시지주의 aMPV에 대한 방어능을 확인하기 위하여, 4주령의 SPF 닭에 수당 103.5 TCID50로 점안 접종하고, 4주 후 각각의 공격 접종 바이러스를 105.0TCID50씩 점안 및 비강 접종을 통하여 공격 접종하였다. Ck/A/Kr/655/07주 하이패시지 백신접종군 및 대조군 공격접종 후 상부호흡기관 임상증상(비강분비물) 및 폐사를 관찰하였으며, 공격접종 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9일 후 그룹별로 Oropharyngeal swab, Nasal discharge를 채취하여 real-time RT-PCR을 이용하여 바이러스의 배출량을 측정하였다. 특히, 공격접종 4일 후 Ck/A/Kr/655/07주 하이패시지주 백신접종군 및 대조군에서 각각 Nasal Turbinate, Trachea를 채취하여 공격접종 바이러스를 재분리하여 방어율을 산출하였다. 공격 접종 4일 후 시험계를 안락사한 후 Nasal Turbinate, Trachea에서 공격접종 바이러스를 재분리하여 바이러스가 재분리되지 않을 경우 방어효과가 있는 것으로 평가하였다.
Ck/A/Kr/655/07주 하이패시지 백신접종 후 4주 후 aMPV 혈청역가를 확인한 결과 백신접종이 잘 이루어졌음을 확인하였고, 대조군의 결과로 닭의 SPF 상태임을 확인하였다(표 7). 표 7은 SPF 닭에 대한 백신 4주 후 aMPV 혈청역가를 나타낸다.
Figure pat00009
aMPV 공격접종 바이러스 접종 후 Ck/A/Kr/655/07주 하이패시지 백신접종군은 aMPV 감염으로 나타날 수 있는 호흡기관 임상증상도 관찰되지 않았다. 단, 대조군의 경우 공격접종 후 호흡기 증상을 나타내었으나 폐사율은 없었다(표 8). 표 8은 SPF 닭에 공격접종 4일 뒤 방어능 시험 결과를 나타낸다. 야외바이러스에 방어 효능이 나타내고 있음을 확인 하였다.
Figure pat00010
한국생명공학연구원 KCTC18707P 20180904

Claims (7)

  1. 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주로서, 수탁번호 KCTC 18707P이고, Ck/A/Kr655/07 조류메타뉴모바이러스 주를 약독화한 것인 조류메타뉴모바이러스 주.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주는 Ck/A/Kr655/07 조류메타뉴모바이러스 주를 하이 패시지(high passage)로 약독화한 것이고, 상기 하이 패시지는 10 계대 내지 90 계대로 약독화한 것인, 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주는 Ck/A/Kr655/07 조류메타뉴모바이러스 주를 하이 패시지(high passage)로 약독화한 것이고, 상기 하이 패시지는 10 계대 내지 70 계대로 약독화한 것인, 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진, G 단백질을 코딩하는 유전자를 발현하는 조류메타뉴모바이러스 주.
  5. 제 1항의 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로 유발되는 질병에 대한 닭 백신용 조성물.
  6. 제 5항의 백신 조성물을 닭에 투여하여 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발되는 질병을 예방하거나 경감시키는 방법.
  7. a) 감염되기 쉬운 기질에 조류메타뉴모바이러스를 접종하는 단계;
    b) 상기 조류메타뉴모바이러스를 증식시키는 단계;
    c) 상기 조류메타뉴모바이러스 함유 물질을 수거하는 단계; 및
    d) 상기 수거된 바이러스를 열처리하여 바이러스 본연의 병원성이 약화되었는지를 확인하는 단계를 포함하고, 약화되지 않은 경우에 상기 a)에서 d)단계를 약화될 때까지 반복하고, 상기 반복은 10회 내지 90회 수행하는 것인 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 제조방법.
KR1020180146869A 2018-11-25 2018-11-25 약독화된 조류메타뉴모바이러스 주 및 이를 포함하는 백신 조성물 KR20200061508A (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115287270A (zh) * 2022-10-09 2022-11-04 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） B亚型禽偏肺病毒传代致弱株及其应用

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