KR101560337B1

KR101560337B1 - 신규한 조류메타뉴모바이러스 및 그 백신

Info

Publication number: KR101560337B1
Application number: KR1020130087426A
Authority: KR
Inventors: 송창선; 이중복; 최인수; 박승용
Original assignee: 주식회사 카브
Priority date: 2013-06-27
Filing date: 2013-07-24
Publication date: 2015-10-19
Also published as: KR20150001558A

Abstract

본 발명은 신규한 조류메타뉴모바이러스 및 그 백신 용도에 관한 것이다.

Description

신규한 조류메타뉴모바이러스 및 그 백신{A novel Avian metapneumovirus and vaccine thereof}

조류메타뉴모바이러스(Avian metapneumovirus; aMPV)는 칠면조와 닭에서 각각 비기관염(Turkey rhinotrachitis: TRT)과 두부종창증 (Swollen Head Syndrome: SHS)을 일으키는 주요 원인체로 알려져 왔다. 이 바이러스는 1986년 최초 분리 보고된 이후 미국, 유럽, 아시아, 중동 및 북아프리카에 이르기까지 전 세계적으로 분포하고 있다. 국내에서는 1992년에 닭에서 두부종창증 소견을 보이는 임상사례와 혈청학적으로 감염사례가 확인되어 보고된 바 있으며, 최근 육계와 육용종계에서 심한 콧물과 탈색란을 동반하는 산란저하 소견을 보이는 원인 바이러스가 분리되어 국내 양계 산업의 경제적 피해를 유발하는 주요 질병 중 하나로 재인식되고 있다.

닭의 경우 aMPV 감염 시 폐사율은 그다지 높지 않으나 이환율은 높으며, 특히 심한 콧물을 동반하는 호흡기 증상을 유발하여 산란계의 생산성을 저하시키고, 대장균증으로 이환되어 육계의 증체율 감소와 대장균성 복막염으로 인한 폐사의 주요 원인이 되고 있다.

이 질병을 일으키는 원인체는 Family Paramyxoviridae의 Genus Metapneumovirus에 속하는 aMPV로, 단일 혈청형으로 존재하고 있으며, G 단백질 유전자 염기서열을 기초로 4개의 유전형(A, B, C 그리고 D)이 존재하고 있는 것으로 보고되었다. 모든 유전형이 발병하는 칠면조와 달리, 닭의 경우 A와 B 유전형 만이 피해를 유발할 수 있는 것으로 알려져 있다.

닭에서 aMPV는 4-6주령의 육계에 주로 감염되는데 많은 폐사가 유발되지는 않지만 어린 칠면조와 마찬가지로 심한 호흡기 증상을 나타내어 식욕 감퇴에 따른 증체율 저하를 유발하여 농가의 경제적 손실을 야기하는 주요 원인으로 작용한다. 이 경우 흔히 코감기라고 표현되는 콧물, 재채기, 눈물 등의 증상이 50% 이상의 감염계에서 관찰되며, aMPV의 대표증상이라고 알려진 부비동염에 의한 두부종창은 10% 미만의 감염계에서 드물게 관찰되는 증상이다. 반면 육용종계나 산란계의 경우 연령과 무관하게 감염가능하나 산란 개시 혹은 산란 피크기 (24-52주령)에 감염되는 사례가 많다. 이는 산란과 연관된 신체적인 스트레스가 원인으로 알려져 있다.

국내 닭에서의 감염 사례는 지속적으로 보고되고 있으며 육계, 산란계, 육용종계에 이르기까지 매우 다양하다. 국내 육계농장에서 흉선이 심하게 위축되어 면역억제소견을 보이는 농장에서 aMPV가 검출 된 바 있으며, 또한 심한 콧물로 사료효율을 저하시키고 복막염 등 만성 호흡기로 지속적인 폐사를 유발한 육용종계군에서도 바이러스가 검출되었다. 실제 국내 육계 농장의 경우 심한 증체 저하로 인하여 출하일이 39일로 지연되었고 2차 세균감염에 의한 폐사 등으로 출하율이 90%, 생산지수가 190으로 나타나는 등 심각한 피해를 경험한 사례가 있었다. 그 밖에, aMPV에 감염된 육용종계군에서는 호흡기 증상 외에도 최대 10%까지 백색란이 발생하였고, 산란율에도 영향을 미쳐 10% 정도의 산란저하를 유발하기도 하였다. 더불어 산란피크 직전에 aMPV에 감염 시 산란피크에 도달하지 못하고 산란피크를 전후하여 폐사가 증가하는 양상을 보이기도 하였으며 케이지사보다 평사에서 보다 심한 피해를 일으키는 특징을 나타내었다.

최근 국내에서 real-time RT-PCR 등과 같은 새로운 진단기술의 개발로 aMPV와 유사한 호흡기 질병과의 신속 감별진단이 보편화되면서 국내 육계, 산란계, 종계농장에서의 aMPV 감염피해 확인사례가 최근 많이 증가되고 있다. aMPV 감염으로 인한 경제적 피해를 최소화하기 위해서는 생독백신 및 사독백신을 이용한 백신법이 가장 효과적이다. 현재 국내 출시된 뉴모바이러스 백신은 모두 사독 오일백신으로 이중 A 타입 바이러스에 대한 백신은 국내산이 없어, 국내에서 분리된 유행주를 이용한 백신이 필요한 실정이다.

현재 우리 나라의 경우 뉴모바이러스의 생독 백신은 허가가 나 있지 않은 상황이고 따라서 시판되지 않고 있는 상황이라 사독 백신만으로 방어를 하고 있는 실정이다.그리고 생독백신 없이 사독 백신만을 사용할 경우 다른 혈청형에 대한 방어능이 상대적으로 떨어지게 되고, 따라서 국내에 유행하는 두 가지 혈청형을 방어하기 위해서는 A형을 이용한 사독 백신의 사용도 필요한 상황이다.

[관련 선행특허]

대한민국특허공개번호 제 1020100060196

대한민국특허공개번호제 1020050005412

본 발명은 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서 본 발명의 목적은 국내에서 분리한 신규한 조류메타뉴모바이러스를 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 기탁번호 기탁번호 KCTC 12424BP로 기탁된 Ck/A/Kr/655/07 조류메타뉴모바이러스를 제공한다.

본 발명의 균주는 한국생명공학연구원 생물자원센터(대한민국 대전광역시, 유성구 과학로 125, 소재 한국생명공학연구원, 305-806)에 2013년 6월12일에 기탁하였다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 바이러스는 국내 닭으로부터 분리한 것이 바람직하고, 상기 바이러스는 A 형인 것이 바람직하며, 상기 바이러스의 G 단백질은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 조류메타뉴모바이러스 및 약학적 허용 담체 또는 희석제를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발된 질병에 대한 가금 보호용 백신을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 백신은 호흡기 증상 및 대장균성 복막염 예방 또는 치료에 효과가 있는 것이 바람직하고, 상기 백신은 불활성화된 형태인 것이 바람직하며, 상기 백신은 보조제를 추가로 포함하는 것이 바람직하고, 상기 백신은 가금에 감염성이 있는 다른 병원균의 백신성분을 하나 이상 추가로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

또한 본 발명은 a) 감염되기 쉬운 기질에 상기 본 발명에 정의된 조류메타뉴모바이러스를 접종하는 단계;b) 상기 조류메타뉴모바이러스를 증식시키는 단계; 및 c) 상기 조류메타뉴모바이러스 함유 물질을 수거하는 단계를 포함하는 조류메타뉴모바이러스의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기의 기질은 닭 간의 배세포(CEL), 닭의 배 섬유아세포(CEF), 닭의 신장세포(CK), 및 베로(Vero) 세포주로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 세포인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 방법에 의해 얻어진 수거된 조류메타뉴모바이러스를 약학적 허용 담체 또는 희석제와 결합시키는 단계를 포함하며, 필요한 경우 상기 단계를 상기 조류메타뉴모바이러스의 불활성화 이후에 수행함을 특징으로 하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발된 질병에 대한 가금 보호용 백신의 제조 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 백신을 조류에 투여하는 것을 포함하는 가금에서 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발된 질병을 제어하는 방법을 제공한다.

본 발명의 백신은 예를 들면 시판용 살아있는 불활성화된 조류메타뉴모바이러스 백신에 흔히 사용되는 통상적인 방법에 따라 준비될 수 있다. 수의학적 백신 조성물의 제조는 특히 "Handbunch der Schutzimpfungen in der Tiermedizin"(편집: Mays,A.등, Verlag Paul Parey, Berlin und Hamburg, Germany, 1984) 및 "Vaccines or Veterinary Applications"(편집: Peters,A.R.등, Butterworth-Heinemann Ltd,1993)에 설명되어 있다.

증식 단계후 수거된 바이러스를 불활성화하는 목적은 바이러스의 재생성을 방지하는 것이다. 일반적으로, 이것은 화학적 또는 물리적 수단으로 수행될 수 있다. 화학적 불활성화는 예를 들어 효소, 포름알데하이드, β-프로피오락톤, 에틸렌-이민 또는 그것의 유도체로 바이러스를 처리함으로써 수행될 수 있다. 필요한 경우, 불활성화된 화합물은 나중에 중화된다. 포름알데히드로 불활성화된 물질은 예를 들어 티오설페이트로 중화될 수 있다.물리적 불활성화는 에너지가 충분한 방사능, 예를 들면 UV 광을 바이러스에 조사함으로써 바람직하게 수행될 수 있다. 필요한 경우, 처치후 pH 가 약 7의 값으로 조정될 수 있다.

불활성화된 조류메타뉴모바이러스를 함유하는 백신은 예를 들면 이 목적에 적당한 전술한 약학적 허용 담체 또는 희석제를 하나 이상 포함할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 불활성화된 백신은 보조적 활성을 갖는 하나 이상의 화합물을 포함한다. 이 목적에 적당한 화합물이나 조성물은 알루미늄 히드록시드, -포스페이트, -옥시드,광유, 비타민 E 아세테이트와 같은 식물유 및 사포닌을 주성분으로 하는 수중유형 또는 유중수형 유제를 포함한다.

불활성화된 백신은 대개 비경구적으로, 즉 근육내 또는 피하내로 투여된다.

본 발명의 백신은 활성 성분으로서 조류메타뉴모바이러스를 유효량, 즉 독성 바이러스에 의한 공격(항원 투여)에 대항하여 백신 접종된 조류 또는 그들의 자손에서 면역을 유도할 조류메타뉴모바이러스 물질을 면역화시키는 양으로 포함한다. 본원에서 면역은 백신접종되지 않은 군에 비해 백신접종 후 조류 집단에서 상당히 높은 레벨의 보호를 유도하는 것으로 정의된다.

통상적으로,불활성화된 백신은 조류 1 마리당 10⁴-10¹⁰TCID50 과 등가의 항원을 포함한다.

본 발명의 조류메타뉴모바이러스 백신은 닭에 효과적으로 사용될 수 있으나, 칠면조, 기니아 파울(guinea fowl) 및 메추라기와 같은 기타의 가금도 효과적으로 백신으로 접종될 수 있다. 닭은 식용 닭, 복제 가축, 및 알을 낳는 가축을 포함한다.

본 발명에서는 새로운 조류메타뉴모바이러스, 이를 포함하는 백신 및 이들의 제조 방법을 제공함으로써 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유효하게 가금을 보호할 수 있다.

도 1은 aMPV Ck/A/Kr/655/07 주 G 단백질 유전자 염기 서열
도 2는 Ck/A/Kr/655/07 바이러스와 국내외 aMPV 분리주의 계통학적 분석

이하 비한정적인 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다

국내 야외농장에서의 avian metapneumovirus aMPV Ck /A/ Kr /655/07주 분리, 동정

2007년 충남 소재의 한 육용종계 농장에서 의뢰된 육용종계의 구강인두를 면봉으로 문질러 채취한 샘플 및 코선반을 겐타마이신이 첨가된 MEM 배지에 재부유 시켰다. 이를 1,000g에서 10분간 원심분리하여 세포와 조직액을 침전시키고. 이후 상층액에서 RNA 추출 및 실시간 역전사 중합효소연쇄반응 (Real-time RT PCR)을 통해 aMPV임을 진단하고 Vero 세포(원숭이 신장 세포)에 접종하여 aMPV Ck/A/Kr/655/07주를 최종 동정하였다.

Real - time RT - PCR 을 통한 확진 및 subtype 구분

구강인두를 면봉으로 채취한 샘플 및 코선반의 원심 후 상층액을 RNeasy kit (Qiagen, USA)를 사용하여 RNA 추출하였다. QuantiTect Probe RT-PCR kit (Qiagen, USA)를 활용하여 RNA 추출액 10㎕, 마스터 믹스 (Quantitect master mix) 12.5㎕, RT 믹스 (Quantitect RT mix) 0.25㎕, aMPV G 단백질 유전자에 대한 A 타입용 프라이머 2종 및 B 타입용 프라이머 2종 각 0.375㎕(55uM), A타입용 프로브 1종 및 B타입용 프로브 1종 각 0.375㎕(14uM)를 혼합하여 총 25㎕를 만들었다. (표1) 상기 혼합액을 SmartCycler (Cepheid, USA)를 사용하여 50℃ 30분, 95℃ 15분으로 1회 반응시킨 후, 94℃ 15초, 55℃ 60초로 45회 반응시켜 실시간 역전사 중합효소연쇄반응 (Real-time RT-PCR)을 진행하였다

표 1은Real-time RT-PCR에 사용된 프라이머 및 프로브 서열

게놈 염기서열 분석

Real-time RT-PCR을 통해 양성이 확인된 샘플은 RT-PCR을 진행하였다. aMPV G 단백질 유전자에 대해 각각의 subtype을 증폭시킬 수 있는 프라이머를 사용하여 A 타입의 경우 268개 염기서열, B 타입의 경우 361개의 염기서열을 증폭시켜 분석하였다. aMPV Ck/A/Kr/655/07 바이러스의 경우 분석 결과 subtype A에 속하는 것으로 나타났다. (도 1) (Cavanagh et al., Subtype B avian metapneumovirus resembles subtype A more closely than subtype C or human metapneumovirus with respect to the phosphoprotein, and second matrix and small hydrophobic proteins, Virus Research 92:171-178, 2003)

aMPV Ck /A/ Kr /655/07 바이러스의 분자생물학적 특성

aMPV Ck/A/Kr/655/07 G 단백질 유전자 염기 서열을 Genbank 상에 등록된 국내외 aMPV 바이러스들과 BLAST검색(www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) 및 Bioedit 프로그램을 사용하여 비교 분석하였다. 그 결과 Ck/A/Kr/655/07는 수입산 aMPV subtype A 사독 백신 제품 strain인 BUT1# 8544보다 국내 유래의 aMPV와 상동성이 더 높게 나타났다. (도 2)

aMPV 바이러스 배양 방법 및 바이러스 함량 시험

바이러스를 배양하기 위하여 Vero 세포를 세포배양용 플라스크에 2 * 105/ml로 분주하여 37℃ CO2 incubator에서 배양하여 24시간 후 세포가 단층을 형성하면 세포성장배양액을 제거하였다. 플라스크에 부착된 세포를 세포배양액 및 멸균된 PBS를 이용하여 2~3회 세척한 후 aMPV를 접종하였다. (원액기준 106TCID50/ml, T75 플라스크: 0.5~1ml, T175 플라스크: 3ml) 접종 후 37℃에서 40분 간 배양한 후 세포유지배양액을 첨가하여 37℃ CO2 incubator에서 배양하였다. 약 5일 배양 후 aMPV 특유의 세포변성효과(CPE) 80~90% 형성 시 플라스크를 -70℃ 냉동고에서 3회 동결융해하였다. 마지막 융해 후 플라스크 내의 배양액을 4℃에서 2000 RPM으로 3분간 원심분리하였다. 분리된 상층액을 바이러스 원액으로 사용하여 계대하였다. 5대의 계대가 진행될 때마다 배양 24시간 내에 단층이 형성된 Vero 세포에 백신을 조직배양액으로 10진 희석하여 접종한 후 흡착시킨 다음 세포유지배양액을 첨가하여 37℃에서 배양하였다. 접종 5일 후에 aMPV 특유의 세포변성효과가 나타난 것을 양성으로 하여 TCID50을 산출하였다. (표 2)

표 2는 바이러스 계대수에 따른 TCID 증가 확인

미입 바이러스 부정 시험

Vero 세포에서 5대의 계대가 진행될 때마다 세포배양액의 상층액을 aMPV의 고도 면역혈청을 사용하여 바이러스를 완전히 중화하고 중화된 상층액을 발육계란에 접종한 결과, 계태아는 정상 발육하였으며, 적혈구응집성 및 포크형성은 확인되지 않았다. (표 3)

표 3은 미입 바이러스 부정시험 결과

aMPV 불활화 오일백신 안전성 시험

본 시험백신의 안전성을 평가하기 위하여, 시험백신 2수분을 접종한 후 14일간 관찰하였을 때 대조군에 비하여 증체율에 차이가 없었으며, aMPV 감염 시 특이적인 임상증상인 재채기, 두부 종창, 사경도 확인되지 않았다. (표 4)

표 4는 6주령 SPF 닭에서 시험백신 2수분 접종 후의 증체율과 임상증상

aMPV 불활화 오일백신 면역원성 시험

본 시험백신의 최소면역원성을 평가하기 위하여, 바이러스 함량 별로(10^3~6TCID₅₀/1수분) 4개의 시험군과 1개의 무접종 대조군으로 나누어 시험백신을 접종한 후 주별로 항체가를 관찰하였다. 10⁶TCID₅₀/1수분을 접종한 시험군에서만 100%의 항체양성을 보여 1수분당 최소 10⁶TCID₅₀의 항원이 포함되는 것이 효과적인 aMPV의 방어에 적합할 것으로 확인하였다. (표 5)

표 5는 6주령 SPF 닭에서 시험백신 접종후 접종농도별 aMPV에 대한 항체가 비교시험

aMPV 불활화 오일백신의 평균항체역가와 중화지수

시험백신의 면역원성을 측정하기 위하여, 각각 백신의 106TCID50/1수분을 접종하고 3주 후에 각 시험군의 평균항체역가와 중화지수를 확인하였다. 평균항체역가는 7050, 중화지수는 22로 확인되었다. (표 6)

표 6은 6주령 SPF 닭에서 시험백신 3주 후의 평균항체역가와 중화지수

aMPV 불활화 오일백신의 방어효능 시험

시험백신의 효력을 확인하기 위하여 시험군에 시험백신 1수분을 근육접종하고 3주 후에 시험군과 대조군에 공격접종용 바이러스를 1수 당 비강으로 104 TCID50/0.1ml를 점안-점비접종하고 5일 후 공격접종 바이러스의 재분리를 실시하였다. 공격접종 후 5일간 시험군과 대조군은 어떠한 임상증상을 보이지 않았으며, 시험군에서 공격접종 바이러스의 재분리율은 0%로 확인되었다. (대조군: 26.7%) (표 7)

표 7은 6주령 SPF 닭에서 시험백신 3주 후의 aMPV 공격접종 후 방어능 시험 결과

한국생명공학연구원

KCTC12424BP

20130612

<110> Konkuk University Industrial Cooperation Corp. <120> A novel Avian metapneumovirus and vaccine thereof <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1193 <212> DNA <213> Avian metapneumovirus <400> 1 gggacaagta tctctatggg gtccaaacta tatatggttc agggcactag tgcatatcaa 60 actgcagtgg ggttctggct ggacattggg aggaggtaca tattgactat agtcctatca 120 gctttcgggc tgacctgcac agtcactatt gcactcactg ttagcatcat agttgaacag 180 tcagtgttag aggagtgcag aaactacaat gggggagata gagattggtg gtcaaccacc 240 caggagcagc caactactgc accaagtgcg actccagcag gaaattatgg aggattacaa 300 acggctcgaa caagaaagtc tgaaagatgt ttgcatgtgc aaatttctta tggtgatatg 360 catagccgca gtgatactgt actgggtggt tttgattgta tgggcttatt ggttctttgc 420 aaatcaggac caatttgtca gcgagataat caagttgact caacagccct ttgccactgc 480 agggtagatc tttcaagtgt ggactgctgc aaagtgaaca agattagcac taacagtagc 540 accacctctg agccccagaa gaccaacccg gcacagccta gccaagacaa cacagactcc 600 gatccaagct ccaaaggcat aaccaccagc acagccactc tgccctcaat aagcctgggc 660 ctcatgctta catcgaagat tgggacacac aaatcagagc ctccacaagc cttgccaggg 720 agcaacacca acgggaaaac aaccacagac cgagaactag ggtccacaaa ccaaccaaat 780 tcaaccacca atgggcaaca caataaacac acccaacgaa caacaccccc gccaagccac 840 gacaacacaa gaaccatcct ccagcacaca acacccccgg aaaagacacc cagtacacac 900 aagcccacac actctctgac caacgaatca gatcaatccc tccccacaac tcaaaacagc 960 atcaactgtg aacattttga cccccaaggc aaggaaaaaa tctgctacag agtaggttcc 1020 tacaactcca atattacaaa gcaatgcaga attgatgtgc ctttgtgttc cacttataac 1080 acagtgtgca tgaaaacata ctataccgaa ccattcaact gttggaggcg tatctggcgt 1140 tgcttgtgcg acgacggagt tggtctggtt gagtggtgtt gcactagtta act 1193

Claims

기탁번호 KCTC 12424BP로 기탁된 Ck/A/Kr/655/07 조류메타뉴모바이러스.
제 1항에 있어서, 상기 바이러스는 국내 닭으로부터 분리한 조류메타뉴모바이러스.
제 1항에 있어서, 상기 바이러스는 A 형인 것을 특징으로 하는 조류메타뉴모바이러스.
제 1항에 있어서, 상기 바이러스의 G 단백질은 서열번호 1의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 조류메타뉴모바이러스.
제1항 또는 제2항의 조류메타뉴모바이러스 및 약학적 허용 담체 또는 희석제를 포함하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발된 질병에 대한 가금 보호용 백신.
제5항에 있어서, 상기 백신은 호흡기 증상 및 대장균성 복막염 예방 또는 치료에 효과가 있는 것을 특징으로 하는 가금 보호용 백신.
제5항에 있어서, 상기 백신은 불활성화된 형태인 것을 특징으로 하는 가금 보호용 백신.
제5항에 있어서, 상기 백신은 보조제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 가금 보호용 백신.
제5항에 있어서, 상기 백신은 가금에 감염성이 있는 다른 병원균의 백신성분을 하나 이상 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 가금 보호용 백신.
a) 감염되기 쉬운 기질에 제1항에 정의된 조류메타뉴모바이러스를 접종하는 단계;
b) 상기 조류메타뉴모바이러스를 증식시키는 단계; 및
c) 상기 조류메타뉴모바이러스 함유 물질을 수거하는 단계를 포함하는 조류메타뉴모바이러스의 제조 방법.
제10항에 있어서, 상기의 기질은 닭 간의 배세포(CEL), 닭의 배 섬유아세포(CEF), 닭의 신장세포(CK), 및 베로(Vero) 세포주로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 세포인 것을 특징으로 하는 조류메타뉴모바이러스의 제조 방법.
제10항의 방법에 의해 얻어진 수거된 조류메타뉴모바이러스를 약학적 허용 담체 또는 희석제와 결합시키는 단계를 포함하며, 필요한 경우 상기 단계를 상기 조류메타뉴모바이러스의 불활성화 이후에 수행함을 특징으로 하는 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발된 질병에 대한 가금 보호용 백신의 제조 방법.
제5항의 백신을 조류에 투여하는 것을 포함하는 가금에서 조류메타뉴모바이러스 감염으로부터 유발된 질병을 제어하는 방법.