CN102482354B - 抗ceacam1抗体以及使用该抗体的方法 - Google Patents

抗ceacam1抗体以及使用该抗体的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了以ATCC登录号PTA-9974保藏的杂交瘤细胞。本发明还提供了抗体以及使用该抗体的方法。

Description

抗CEACAM1抗体以及使用该抗体的方法
技术领域
本发明在其一些实施方式中涉及抗CEACAM1抗体、生产该抗体的杂交瘤细胞，和使用该抗体的方法。
背景技术
跨膜蛋白CEACAM1[也称为胆汁糖蛋白（BGP）、CD66a和C-CAM1]是癌胚抗原家族（CEA）的成员，也属于免疫球蛋白超家族。CEACAM1与包括CD66a、CD66c和CD66e蛋白在内的其它已知CD66蛋白相互作用。它表达于从上皮细胞到造血来源的那些细胞（例如，免疫细胞）的各种各样的细胞上。
许多不同功能归因于CEACAM1蛋白。已证明，CEACAM1蛋白对结肠癌、前列腺癌以及其它类型的癌症表现出抗增殖特性。另外的数据证实CEACAM1主要参与血管生成和转移。CEACAM1也在先天性和适应性免疫应答的调节中发挥作用。例如，CEACAM1被证明是包含在人肠上皮内的活化T细胞的抑制性受体[参见，WO99/52552和Morales等人,J.Immunol.163(1999),1363-1370]。另外的报道已表明，CEACAM1通过与mAb交联的TCR或通过淋病奈瑟氏菌Opa蛋白抑制T细胞活化和增殖。
黑素瘤是色素产生细胞（黑素细胞）的恶性肿瘤，全球皮肤癌相关的发病率的75%由黑素瘤引起，其主要是由广泛转移引起。转移性黑素瘤（ＭＭ）对大多数抗癌方案的反应都很微弱，MM患者的平均总存活时间为8.5个月。正常黑素细胞很少表达CEACAM1，而在黑素瘤细胞上经常发现CEACAM1。原发性皮肤黑色素瘤病变中的CEACAM1表达强烈地预示着不良预后的转移性疾病的发展。而且观察到，来源于一些转移性黑素瘤患者的NK细胞上的CEACAM1表达相比健康供体有所增大。
WO2007/063424和美国专利申请20070110668公开了调节免疫系统的方法，特别是调节特异性免疫应答，包括调节淋巴细胞活性的方法。这些方法包括CEACAM1蛋白功能的正向调节和负向调节两者。
美国专利申请20070071758公开了治疗和诊断癌症的方法和组合物。具体地，美国专利申请20070071758教导了用于通过例如使用对CEACAM1具有特异性的免疫球蛋白负向调节CEACAM1蛋白的活性，增强肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法对治疗癌症的功效的方法和组合物。
美国专利申请20080108140公开了在治疗自身免疫性疾病和需要组织移植的疾病的过程中调节特异性免疫应答从而创建保护性免疫的方法。特别地，美国专利申请20080108140涉及通过增加靶组织中CEACAM1蛋白的功能浓度而以靶向方式（靶定方式，targeted fashion）抑制免疫应答的方法。
美国专利申请20040047858公开了能够经由CEACAM1调节T细胞活性的特异性抗体（即，34B1、26H7和5F4），及其在诸如治疗免疫应答相关性疾病（例如，移植物抗宿主病、自身免疫性疾病、癌症等）中的用途。
美国专利申请20020028203、20050169922和20080102071公开了结合T细胞抑制性受体分子和调节（即，增强或抑制）T细胞活性（例如，细胞毒性和增殖）的组合物，如胆汁糖蛋白结合剂，以及使用此种组合物例如治疗疾病（例如，自身免疫性疾病、免疫缺陷、癌症等）的方法。
其它相关技术：
5F4mAb:Regulation of human intestinal intraepithelial lymphocytecytolytic function by biliary glycoprotein(CD66a)[Morales VM等人,JImmunol.(1999)163(3):1363-70].。
GM8G5和29H2–都可从Abcam Inc.abcam.com门户网站购得。
发明内容
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了以ATCC登录号PTA-9974保藏的杂交瘤细胞。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了分离的抗体或抗体片段，其包含具有从杂交瘤细胞生产的抗体的CDR序列和方向（orientation）的抗原识别结构域。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了免疫调节的方法，该方法包括使表达CEACAM1的淋巴细胞与该抗体或抗体片段接触。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了抑制表达CEACAM1的肿瘤细胞迁移或增殖的方法，该方法包括使表达CEACAM1的肿瘤细胞与该抗体或抗体片段接触，从而抑制表达CEACAM1的肿瘤细胞迁移或增殖。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了诊断需要其的受验者中的癌症的方法，该方法包括使源自受验者的生物样品与该抗体或抗体片段接触，其中，超出预定阈值的复合物形成指示该受验者患有癌症。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的受验者给予治疗有效量的该抗体或抗体片段，从而治疗受验者的癌症。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了抑制CEACAM1同型或异型的蛋白质-蛋白质相互作用的方法，该方法包括使表达CEACAM1的淋巴细胞与该抗体或抗体片段接触，从而抑制CEACAM1同型或异型的蛋白质-蛋白质相互作用。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了包含该抗体或抗体片段作为活性成分的药物组合物。
根据本发明的一些实施方式，该分离的抗体或抗体片段附接（attachto）在细胞毒性部分（moiety）上。
根据本发明的一些实施方式，该细胞毒性部分包含细胞毒素、趋化因子、化疗药（化疗，chemotherapy）、促凋亡剂（促凋亡药，pro-apoptotic）、干扰素、放射性部分、或它们的组合。
根据本发明的一些实施方式，该分离的抗体或抗体片段附接在可鉴定部分上。
根据本发明的一些实施方式，该癌症细胞的特征是与未感染细胞相比CEACAM1过表达。
根据本发明的一些实施方式，治疗癌症的方法进一步包括向受验者给予淋巴细胞。
根据本发明的一些实施方式，该淋巴细胞包含T细胞或NK细胞。
根据本发明的一些实施方式，该表达CEACAM1的淋巴细胞是肿瘤浸润淋巴细胞或NK细胞。
根据本发明的一些实施方式，该表达CEACAM1的淋巴细胞是细胞毒性T细胞。
根据本发明的一些实施方式，该肿瘤细胞包含黑素瘤肿瘤细胞。
根据本发明的一些实施方式，该癌症是黑素瘤。
除非另有限定，否则本文使用的所有技术和/或科学术语的含义都与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同。虽然下面描述了示例性方法和/或材料，但本发明实施方式的实施或试验中可使用与本文所描述的那些相似或者等效的方法和材料。如有冲突，以专利说明书为准，包括定义。另外，材料、方法和实施例仅为了说明，而未必是限制。
附图说明
本文仅参考附图通过实施例说明本发明的一些实施方式。关于下面详细讨论的附图，要强调的是，所示细节仅为了举例和示意性地讨论本发明的实施方式的目的。就此而言，参考附图所作的描述将使本领域普通技术人员明了本发明的实施方式如何实施。
在附图中：
图1A-1B描绘了MRG1mAb的特异性。使用不同的抗人CEACAM抗体：MRG1mAb（图1A）和Kat4c mAb（图1B），对用CEACAM1（绿色）、CEACAM5（红色）、CEACAM6（紫色）、CEACAM8（蓝色）或空白对照（mock）（黑色）稳定转染的721.221亲代B细胞进行FACS分析。
图2描绘了抗CEACAM1mAb MRG1对CEACAM1嗜同性相互作用（homophilic interaction）的剂量依赖性抑制。将各种浓度的抗CEACAM1mAb添加到BW/CEACAM1（效应细胞）或221/CEACAM1（靶细胞）中。在冰上温育1小时后，加入易位细胞（倒易细胞，reciprocal cell）（221/CEACAM1或BW/CEACAM1）并通过ELISA法测量小鼠IL-2的分泌。100%被定义为在不存在任何抗体的情况下的活性。示出了四个实验中的一个代表实验的结果，每个实验重复三次。
图3描绘了CEACAM1抑制功能的消除。将MRG1mAb与靶细胞（灰色表示）或与效应细胞（白色表示）预温育。在未添加mAb的情况下温育的细胞用黑色表示。所指示的黑素瘤株（526mel、624mel或09mel）用作靶细胞。TIL014细胞用作效应细胞，E:T之比为10:1。在冰上温育1小时后，加入易位细胞并在37℃下共温育5小时。将靶细胞用绿色荧光染料（CFSE）预先标记，并通过流式细胞术中的碘化丙啶（PI）共染色测定特异性溶解（specific lysis）。扣除自然死亡（自主死亡、自发死亡，spontaneousdeath）。该分析重复三次。
图4描绘了MRG1mAb对黑素瘤侵袭的阻断。将黑素瘤细胞（08mel或09mel）在不存在或存在1μg/ml MRG1mAb的情况下预温育，然后通过基质胶侵袭试验测试。使侵袭进行24小时，利用标准化XTT量化侵袭细胞的量。
图5描述了MRG1mAb对黑素瘤细胞净增殖的阻断。将526mel黑素瘤细胞与指示剂量（0.5μg、1μg或3μg）的MRG1mAb一起温育，并在处理后2天或5天监测增殖。
图6A-6B描绘了全身注射MRG1相比于PBS对SCID小鼠体内人肿瘤生长的抑制。实验按两种方案如下进行：图6A：抗体注射（0.5mg/小鼠，腹膜内注射）和癌症细胞接种（皮下接种5,000,000个细胞）同时进行；图6B：通过注射MRG1抗体（如上指示的）治疗在SCID小鼠中产生的肿瘤（肿瘤体积为75mm3）。
图7描绘了相比于单独静脉给予TIL，MRG1与静脉给予人反应性TIL联合对肿瘤生长的抑制功效增强。
图8描绘了MRG1mAb的作用优于前面描述的抗CEACAM1单克隆抗体以及市售的靶向人CEACAM1的家兔多克隆抗体（DAKO,GlostrupDenmark），如通过功能阻断试验测定的。测试了各种抗CEACAM1抗体对CEACAM1活性的阻断，如由mIL-2分泌所报道的。100%被定义为在不存在任何抗体的情况下的活性。示出了三个实验中的一个代表实验的结果，每个实验重复三次。
生物保藏说明
本发明提供了以ATCC登录号PTA-9974于2009年4月29日保藏于美国典型培养物保藏中心（ATCC）（10801University Blvd.,马纳萨斯,弗吉尼亚20110-2209,美国）的杂交瘤细胞。
具体实施方式
本发明在其一些实施方式中涉及抗CEACAM1单克隆抗体、和生产该抗体的杂交瘤细胞，以及使用该抗体进行免疫调节和癌症治疗的方法。
在详细解释本发明的至少一个实施方式之前，应理解本发明的应用不必局限于以下描述中所陈述或通过实施例所列举的细节。本发明能够有其他实施方式，或能够以多种方式实施或实现。
本发明人经过艰苦的实验和筛选生产出对CEACAM1具有选择性的单克隆抗体。这种抗体已被证明优于其它抗CEACAM1单克隆抗体，如通过功能阻断试验所表明的。
如本文下面说明的，根据本教导生产的MRG1抗体对CEACAM1具有选择性，而且不与CEACAM家族其它成员（即，CEACAM5、6和8，参见实施例2）交叉反应。该抗体抑制CEACAM1嗜同性相互作用，如通过将免疫效应细胞和靶黑素瘤细胞共同温育，分析IL-2分泌和细胞溶解所确定的（参见实施例3）。另外，该抗体被证明对抑制黑素瘤细胞侵袭和增殖有效。最后，该抗体单独，或联合反应性淋巴细胞的体内给予被证明对抑制黑素瘤肿瘤生长有效。总而言之，本教导内容揭示了，MRG1抗体、片段和衍生物可以用作免疫调节和癌症治疗的有效工具。
因而，根据本发明的一个方面，提供了以ATCC登录号PTA-9974于2009年4月29日保藏于美国典型培养物保藏中心（ATCC）（10801University Blvd.,马纳萨斯,弗吉尼亚20110-2209,美国）的杂交瘤细胞。
根据本发明的又一方面，提供了分离的抗体或抗体片段，其包含具有由上述杂交瘤细胞生产的抗体的CDR节段（segments）和方向（orientation）的抗原识别结构域。
本教导内容的抗体能够以10-6、10-7、10-8、10-9M的最低亲和力结合CEACAM1。
如本文使用的术语“CEACAM1”是指CEACAM1基因的蛋白产物，例如，NP_001020083.1、NP_001703.2。
如本发明中使用的术语“抗体”包括完整分子以及其功能片段，如能够结合到巨噬细胞上的Fab、F(ab')2、和Fv。根据示例性实施方式，该抗体是单克隆抗体，如本文称作为MRG1的抗体。功能性抗体片段定义如下：（1）Fab，该片段含有抗体分子的单价抗原结合片段，可通过用木瓜蛋白酶消化完整抗体（whole antibody）从而产生完整的轻链和一条重链的一部分而制得；（2）Fab'，该抗体分子片段可通过用胃蛋白酶处理完整抗体，接着进行还原从而产生完整的轻链和一条重链的一部分而获得；每个抗体分子均获得两个Fab'片段；（3）F(ab')2，该抗体片段可通过用胃蛋白酶处理完整抗体，随后不进行还原而获得；F(ab')2为通过两个二硫键保持在一起的两个Fab'片段的二聚体；（4）Fv，定义为含有表示为两条链的轻链可变区和重链可变区的基因工程片段；和（5）单链抗体（“SCA”），该单链抗体为基因工程分子，其含有由合适多肽接头连接成基因融合单链分子的轻链可变区和重链可变区。
如上所指出的，本发明抗体的互补决定区（CDR）方向与通过具有上述保藏细节的杂交瘤细胞生产的抗体的相同。就是说，CDR1、CDR2、CDR3以相同的方向布置在VH和VL链上。
根据本发明的抗体片段可通过该抗体的蛋白水解，或通过大肠杆菌（E.coli）或哺乳动物细胞（如中国仓鼠卵巢细胞培养物或其它蛋白表达系统）中编码该片段的DNA表达来制备。抗体片段可以通过用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶经常规方法消化完整抗体获得。例如，抗体片段可通过用胃蛋白酶酶切抗体从而提供表示F(ab')2的5S片段而制得。这个片段可利用硫醇还原剂和可选地利用二硫连键断裂所形成的巯基的封闭基团进行进一步的切割，从而产生3.5S Fab'单价片段。可替换地，利用胃蛋白酶酶切直接产生两个单价Fab'片段和Fc片段。这些方法描述在例如Goldenberg的美国专利4,036,945和4,331,647以及其中包含的引用文献中，该专利通过引用完整地合并在此。还可参见Porter，R.R.[Biochem.J.73:119-126(1959)]。也可利用切割抗体的其它方法，如将重链分离从而形成单价轻-重链片段，并进一步对片段进行切割，或其它酶、化学或基因技术，只要该片段能结合到可被完整抗体识别的抗原上。
Fv片段包含VH和VL链的缔合体（结合体，association）。这种缔合可以是非共价的，如Inbar等人所描述的[Proc.Nat'l Acad.Sci.USA69:2659-62(19720)]。可替换地，该可变链可通过分子间二硫键连接或通过化学物如戊二醛交联。优选地，该Fv片段包含通过肽接头连接的VH和VL链。这些单链抗原结合蛋白（sFv）是通过构建包含通过寡核苷酸连接的编码VH和VL结构域的DNA序列的结构基因而制备的。将结构基因插入到表达载体中，随后将该载体引入到宿主细胞如大肠杆菌中。该重组宿主细胞合成以接头肽桥连该两个V结构域的单一多肽链。制造sFv的方法描述在如[Whitlow and Filpula,Methods2:97-105(1991)；Bird等人,Science242:423-426(1988);Pack等人,Bio/Technology11:1271-77(1993)；和美国专利No.4,946,778中，该文献通过引用完整地合并在此。
另一形式的抗体片段是对单一互补决定区（CDR）编码的肽。CDR肽（“最小识别单位”）可通过构建编码感兴趣抗体的CDR的基因获得。此类基因例如通过利用聚合酶链反应制备，从而从产生抗体的细胞的RNA合成该可变区。参见，如Larrick和Fry[Methods,2:106-10(1991)]。根据本发明的一些实施方式，该CDR可以任何形式的抗体实现，例如通过使用重组DNA技术实现。
非人（如鼠类）抗体的人源化形式（人化形式，humanized form）为免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段（如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或其它抗体的抗原结合序列）的嵌合分子，其包含极小的源于非人免疫球蛋白的序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白（受体抗体），其中形成受体互补决定区（CDR）的残基被来自非人物种（供体抗体）如小鼠、大鼠或家兔的CDR、具有期望特异性、亲和性和接受力（能力、容量，capacity）的残基所替代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基被相应的非人残基替代。人源化抗体还可包含既不能在受体抗体中找到又不能在所输入的CDR或框架序列中找到的残基。一般而言，该人源化抗体包含基本所有的至少一个，典型地为两个可变结构域，其中对应于非人免疫球蛋白CDR区的所有或基本所有的CDR区，以及所有或基本所有的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。该人源化抗体还最佳地包含免疫球蛋白恒定区（Fc），典型地为人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分[Jones等人,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature,332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596(1992)]。
用于人源化非人抗体的方法是本领域熟知的。一般地，人源化抗体具有一个或多个从非人来源引入其中的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为输入残基（import residues），其典型地取自输入可变结构域。基本可按Winter和同事[Jones等人,Nature,321:522-525(1986);Riechmann等人,Nature332:323-327(1988);Verhoeyen等人,Science,239:1534-1536(1988)]的方法，通过将啮齿动物CDR或CDR序列替换为人抗体的相应序列进行人源化。因此，此种人源化抗体为嵌合抗体（美国专利4,816,567），其中不足一个完整的人可变结构域基本上已被来自于非人物种的相应序列所替代。实际上，人源化抗体典型地为这样的人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被来自于啮齿动物抗体相似位点的残基所替代。
人抗体还可利用多种本领域已知的技术生产，包括噬菌体展示文库（phage display libraries）[Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991)]。Cole等人和Boerner等人的技术也可用于制备人单克隆抗体[(Cole等人,Monoclonal Antibodiesand Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)和Boerner等人,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)]。类似地，人抗体可通过将人免疫球蛋白基因座引入到转基因动物中，如内源免疫球蛋白基因被部分或全部灭活的小鼠来生产。激发（挑战，challenge）后，观察到人抗体的产生在各个方面都非常类似于在人中看到的抗体，包括基因重排、组装、和抗体组库（antibodyrepertoire）。该方法描述在如美国专利5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016，和下列科学出版物中：Marks等人,Bio/Technology10,:779-783(1992)；Lonberg等人,Nature368:856-859(1994)；Morrison,Nature368:812-13(1994)；Fishwild等人,NatureBiotechnology14,845-51(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology14:826(1996)；和Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.13,65-93(1995)。
根据本发明的一些实施方式，该抗体附接在细胞毒性部分上。
根据本发明的一些实施方式，该抗体附接在可鉴定部分上。
该可鉴定部分可以是结合对成员，其可经由其与该结合对另一成员的相互作用和直接可视化的标记而鉴定。在一个实施例中，该结合对成员为抗原，其可通过相应标记的抗体鉴定。在一个实施例中，该标记为荧光蛋白或产生比色反应（色度反应，colorimetric reaction）的酶。
下表1给出可鉴定部分的序列实例。
表1
该细胞毒性或治疗部分可以为，例如细胞毒性部分、有毒部分、细胞因子部分、双特性（bi-specific）抗体部分、细胞毒素、趋化因子、化疗、促凋亡、干扰素、放射性部分、或它们的组合，其实例提供在下文中。
下表2给出治疗部分序列的实例。
表2
应理解，此种融合可以利用化学结合或通过重组DNA技术实现。
本发明抗体可以降低抑制性CEACAM1嗜同性（或同型）相互作用或异型相互作用，从而增强淋巴细胞的活性。CEACAM1嗜同性相互作用通过N-结构域发生。数种氨基酸对这种相互作用起着关键作用，包括R43、Q44、D64和R82。该相互作用导致招募SHP-1磷酸酶的胞浆（细胞质）酪氨酸残基磷酸化。这在淋巴细胞内启动了抑制级联，其靶向邻近的介体（介质，mediator），如ZAP70。
因而，本发明抗体可以用于阻断免疫效应细胞（表达CEACAM1的淋巴细胞，例如肿瘤浸润细胞、T细胞或NK细胞）和靶细胞（例如，表达CEACAM1的病理细胞（pathological cell），如癌症细胞）任一或二者上的CEACAM1。作为这种治疗候选者的癌症细胞的实例包括，但不局限于，黑素瘤、肺、甲状腺、乳腺、结肠、前列腺、肝、膀胱、肾、宫颈、胰腺、白血病、淋巴瘤、骨髓、卵巢、子宫、肉瘤、胆管、或子宫内膜细胞。
本发明也考虑了与由上述杂交瘤细胞产生的抗体竞争结合CEACAM1的分离抗体或抗体片段。这些抗体可以是适合于例如治疗应用的人源化抗体、异种抗体（xenogeneic antibody）、或嵌合抗体（如上面详细描述的）。该抗体的抗体片段可以是，例如单链Fv片段、F(ab')片段、F(ab)片段，和F(ab')2片段。
因而，根据本发明进一步的方面，提供了使表达CEACAM1的肿瘤细胞易感于免疫调节的方法。该方法包括使表达CEACAM1的肿瘤细胞（例如，黑素瘤、肺、甲状腺、乳腺、结肠、前列腺、肝、膀胱、肾、宫颈、胰腺、白血病、淋巴瘤、骨髓、卵巢、子宫、肉瘤、胆管，或子宫内膜细胞）与上述抗体或抗体片段接触，从而使表达CEACAM1的肿瘤细胞易感于免疫调节。
如本文使用的“免疫调节”是指淋巴细胞依赖性免疫调节（例如，通过NK细胞或肿瘤浸润淋巴细胞进行免疫调节）。
另外地或替换地，本发明也设想了通过使表达CEACAM1的淋巴细胞与本文所述的抗体或抗体片段接触进行免疫调节（例如，抑制CEACAM1同型或异型蛋白质-蛋白质相互作用）的方法。
本教导的方法可以体外（in-vitro）、离体（ex-vivo）（例如，用于基于T细胞的过继性免疫疗法（adoptive immunotherapy）中）或体内（in-vivo）执行。
如所提到的，本发明一些实施方式的抗体可以具有抗癌活性，该抗癌活性与上面描述的它的免疫调节活性无关。
因而，本教导进一步提供了抑制表达CEACAM1的肿瘤细胞的迁移或增殖的方法，该方法包括使表达CEACAM1的肿瘤细胞与本文所述的抗体或抗体片段接触，从而抑制表达CEACAM1的肿瘤细胞的迁移或增殖。
如本文使用的“抑制”是指增殖或迁移的至少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或100%抑制，其可以通过本领域熟知的方法测定（参见下面实施例部分）。
本发明抗体可以有效地用于治疗癌症。
因而，根据进一步方面，提供了治疗癌症的方法，该方法包括向需要其的受验者给予治疗有效量的本文所述抗体或抗体片段，从而治疗该受验者的癌症。可以根据本教导诊断或治疗的癌症的实例包括，但不局限于，黑素瘤、肉瘤、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓细胞相关癌症、卵巢癌、子宫癌、胆管癌，或子宫内膜癌。
根据本发明的特定实施方式，该癌症是黑素瘤。
术语“治疗”是指抑制、预防或遏制病状（疾病、紊乱、病况）的发展和/或使病状减轻、缓和或消退。本领域的技术人员应理解，多种方法和分析可用于评估病状的发展，同样，多种方法和分析可用于评估病状的减轻、缓和或消退。
如本文使用的术语“预防”是指阻止疾病、紊乱或病况在具有罹患该疾病风险，但尚未诊断为患有该疾病的受验者中发生。
如本文使用的，术语“受验者”包括哺乳动物，优选患有该病状的任何年龄的人。优选地，这个术语包括具有发展该病状的风险的个体。
为了强化治疗（例如，癌症治疗），可在向受验者给予本发明抗体或抗体片段之前，同时或之后给予淋巴细胞如T细胞（例如，肿瘤浸润淋巴细胞）或NK细胞。因此，可从受验者（例如，从受验者的外周血或肿瘤）或从供体（同种异体或同基因淋巴细胞供体）获取淋巴细胞，通过离体扩增方法进行处理以便获得有活力的淋巴细胞[例如，通过在补充有IL-2的受辐照饲养层中培育，如先前描述在Besser MJ等人,Clin Cancer Res(Epubahead of print)2010May1和Besser MJ等人,Journal of Immunotherapy(Epub ahead of print)2009Apr1中，该文献通过引用完全合并在此]并将其给予受验者。
应理解，在给予该抗体或抗体片段之前或在给予该淋巴细胞之前，可以用任何其它抗癌疗法（例如，化疗、放射治疗等）对该受验者进行治疗。
本发明抗体可以单独，或者以与合适载体或赋形剂混合的药物组合物（形式）给予有机体（生物体）。
如本文使用的“药物组合物”是指（含有）本文所述的一种或多种活性成分及其它化学组分如生理上适合的载体和赋形剂的制剂。药物组合物的目的是为了使化合物容易给予有机体。
本文的术语“活性成分”是指可产生生物效果的抗体。
下文中，可互换使用的术语“生理上可接受的载体”和“药学上可接受的载体”是指不会给有机体造成显著刺激而且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。佐剂（adjuvant）包含在这些术语中。
本文的术语“赋形剂”是指加入到药物组合物中从而进一步使活性成分容易给予的惰性物质。赋形剂的实施例包括，但不局限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖类和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、和聚乙二醇。
药物的调配和给予技术可在“Remington’s Pharmaceutical Sciences,”Mack Publishing公司,Easton,PA,最新版中找到，该出版物通过引用合并在此。
合适的给予途径可包括，例如口服、直肠、经粘膜尤其是经鼻、肠道、或肠道外递送包括肌内、皮下和髓内注射及鞘内、直接心室内、心脏内注射，如注射到右或左心室腔中、注射到常见冠状动脉中，以及静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。
用于将药物递送到中枢神经系统（CNS）的常规方法包括：神经外科策略（例如，大脑内注射或脑室内输注）；试图利用BBB的其中一个内源性转运通路的药剂分子操作（例如，生产嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包含对内皮细胞表面分子具有亲和力的转运肽（transport peptide），以及与其结合的自身不能穿过BBB的药剂）；设计用于增加药剂脂溶性的药物学策略（例如，将水溶性药剂结合到脂质或胆固醇载体上）；和通过高渗性破坏（通过将甘露醇溶液输注到颈动脉中或使用生物活性剂如血管紧缩素肽引起）暂时破坏BBB完整性。然而，这些策略中的每一种均存在限制性，如侵袭性手术操作伴随的固有风险、内源性转运系统中固有的限制引起的尺寸限制、由在CNS外有活性的载体基序组成的嵌合分子的全身给予伴随的潜在不期望的生物副作用，以及当BBB破坏时存在脑区内脑损伤风险的可能，这使得它不是最理想的递送方法。
可替换地，可以局部方式而不是全身方式给予该药物组合物，例如，通过将该药物组合物直接注射到患者的组织区域内进行。
术语“组织”是指由具有类似结构和/或共同功能的细胞聚集体组成的机体。实例包括，但不局限于，脑组织、视网膜、皮肤组织、肝组织、胰腺组织、骨、软骨、结缔组织、血液组织、肌肉组织、心脏组织、脑组织、血管组织、肾组织、肺组织、性腺组织（gonadal tissue）、造血组织。
本发明的药物组合物可通过本领域熟知的工艺制造，如通过常规的混合、溶解、造粒、包糖衣、研粉、乳化、制成胶囊、包埋（entrapping）或冻干工艺制造。
因此，根据本发明使用的药物组合物可用常规方法，使用一种或多种使活性成分容易加工成可以药用的制剂的生理可接受载体（包括赋形剂和助剂）而制造。合适的剂型取决于所选的给予途径。
对于注射，该药物组合物的活性成分可调配在水溶液中，优选调配在生理上相容的缓冲液如汉克溶液（Hank’s solution）、林格溶液（Ringer’ssolution）或生理盐缓冲液中。对于经粘膜给予，可以在配方中使用适合于透过屏障的穿透剂（penetrant）。此种穿透剂在本领域一般是已知的。
对于口服给予，该药物组合物可容易地通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受载体结合而调配。此种载体能够使该药物组合物调配成供患者口服的片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆剂、浆液、混悬剂等。口服使用的药物制剂可利用固体赋形剂制造，可选地研磨所得混合物，需要时可加入合适的辅助物并在此后对颗粒混合物进行加工，从而获得片剂或糖衣核。合适的赋形剂为，特别是填充剂如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制品，如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍树胶、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；和/或生理上可接受的聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。如果需要，可加入崩解剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂，或海藻酸或其盐如海藻酸钠。
糖衣核（dragee core）具有合适的包衣。为此目的，可使用浓的糖溶液，该溶液可选地包含阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶（carbopol gel）、聚乙二醇、二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可将染料或色素加入到片剂或糖衣丸包衣（dragee coating）中，以便鉴定不同的活性化合物剂量的组合或赋予其特征。
可口服使用的药物组合物，包括明胶制成的推入配合胶囊（push-fitcapsule），以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨醇制成的密封软胶囊。推入配合胶囊可包含与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉、润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁，和可选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性成分可以溶解于或悬浮于合适的液体中，如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。另外，可加入稳定剂。所有口服给予的制剂的剂量应适合于所选的给予途径。
对于颊部给予，该组合物可采用通过常规方法调配的片剂或锭剂的形式。
对于通过鼻吸入给予，根据本发明使用的活性成分可以喷雾剂（aerosol spray）形式，从利用适合的推进剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷，或二氧化碳的加压包装或喷雾器中方便地递送。在加压喷雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门确定从而递送计量的量。可将用在分配器中的如明胶的胶囊和药筒，调配成包含该化合物与合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
本文描述的药物组合物可调配用于肠胃外给予，如通过推注和连续输注给予。注射用制剂可以单位剂量的形式呈现，如，在安瓿（ampoules）或多剂量容器中，在其中可选地加入防腐剂。该组合物可以是油性或水性媒剂（媒介物，vehicles）中的悬浮液、溶液，或乳液，并可含有调配剂如悬浮剂、稳定剂，和/或分散剂。
肠胃外给予的药物组合物包括水溶性形式活性制剂的水溶液。另外，可将该活性成分的悬浮液配制成适当的油性或水基的注射悬浮液。合适的亲脂溶剂或媒剂包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯、甘油三酯或脂质体。水性注射悬浮液可包含增大悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇，或葡聚糖。可选地，该悬浮液还可包含合适的稳定剂或增大活性成分的溶解度从而允许制备高度浓缩的溶液的试剂。
可替换地，该活性成分可以是粉末形式，在使用前用合适的媒剂如无菌的基于无热源的水基溶液进行复溶（重构，constitution）。
本发明的药物组合物还可利用如常规栓剂基质如可可油或其它甘油酯，调配成直肠组合物如栓剂或保留灌肠剂（retention enemas）。
适用于本发明上下文的药物组合物包括其中活性成分的含量对达到预期目的有效的组合物。更具体地，治疗有效量是指对预防、缓和或改善紊乱（如，癌症）的症状或延长受治疗受验者的存活时间有效的活性成分量。
治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是在阅读本文详细公开的内容之后。
对于用于本发明方法中的任何制剂，治疗有效量或剂量最初可根据体外和细胞培养物分析进行估计。例如，可以在动物模型中调配剂量，以获得期望的浓度或滴定度。此类信息可用来更准确地确定对于人有用的剂量。
本文描述的活性成分的毒性和治疗功效可通过体外、细胞培养物或实验动物中的标准制药程序来确定。可利用从这些体外和细胞培养物分析及动物研究中获得的数据，调配用于人的剂量范围。该剂量可随着采用的剂型和所利用的给予途径而改变。个人医生可根据病人的情况，选择确切的制剂、给予途径和剂量（参见如Fingl等人,1975,"The Pharmacological Basisof Therapeutics",Ch.1p.1）。
可以单独地调整剂量和时间间隔，从而提供活性成分足以诱导或抑制生物学效应的抗体水平（最低有效浓度，MEC）。对于每种制剂，MEC有所不同，但可根据体外数据进行估计。达到MEC所需的剂量取决于个体特征和给予途径。可利用检测试验测定血浆浓度。
可以在本领域熟知的相关动物模型中进一步证实治疗功效。免疫缺陷小鼠中人异种移植。根据受治疗病况的严重性和反应性，可进行单次或多次剂量给予，疗程持续几天至几周，或直到治愈或病情减轻。
当然，该组合物的给予量将取决于治疗的受验者、疼痛严重性、给予方式，处方医生的判断等。
本发明组合物在需要时可放置在包装或分配装置，如FDA批准的试剂盒中，该包装或分配装置可包含含有活性成分的一个或多个单位剂型。该包装可包含，例如，金属或塑料箔，如泡罩包装（blister pack）。该包装或分配装置还可附有给予说明。该包装或分配器还可提供与包含物相关的由管理药物制造、使用或销售的政府部门所规定的形式的公告，该公告反映该部门批准了该组合物或人用或兽用的形式。此公告，例如，可以是美国食品和药品管理局对于处方药批准的标志或者是已批准的产品说明书（插页，insert）。如上面进一步详细说明的，还可以制备包含本发明制备品、调配在相容性药物载体中的组合物，将其放置在合适的容器中，并标记用于治疗指示的病况。
除了治疗应用之外，本发明抗体还可以用于诊断应用。
因而，根据进一步方面，提供了诊断需要其的受验者中癌症的方法，该方法包括使源自受验者的生物样品与本文所述的抗体或抗体片段接触（体外或离体），其中超出预定阈值的复合物形成表示该受验者患有癌症。根据一些实施方式，癌症细胞的特征是相比未感染细胞CEACAM1过表达。
如所述的，本发明方法在足以形成免疫复合物的条件下执行；此种条件（例如，适当的浓度、缓冲液、温度、反应时间）以及优化此种条件的方法是本领域技术人员所熟知的，并且本文披露了实例。如本文使用的术语“免疫复合物”是指包含本发明抗体和CEACAM1的复合物。
本发明免疫复合物的存在或水平可以直接测定，或者通过检测可附接在抗体上的可鉴定（可检测）部分确定。
将测试细胞（例如，需要其的受验者细胞）中免疫复合物的水平与预定阈值进行比较。应理解，本发明抗体也可以用于测量血清可溶性CEACAM1的量。无论如何，都可以基于已知参考水平和/或对照细胞或血清中的水平，确定该阈值。该对照细胞可以从对照健康受验者（例如，未罹患癌症的受验者）中获取，或者在疾病发生之前或治疗之后从同一受验者中获取。根据本发明的一些实施方式，对照受验者与需要其的受验者为同一物种如人类，优选年龄、体重、性别等匹配。
如本文使用的术语“诊断”是指确定病状存在与否，对病状或症状进行归类，确定病状的严重性，监测病状的进展，预测病状的结果和/或恢复的前景。
为了便于诊断，可以将上述教导与本领域熟知的诊断癌症的其它方法相结合，该方法包括但不局限于，成像、分子测试和手术活组织检查。
一旦诊断确定后，立即向受验者告知该诊断，并可以启动合适的治疗。
术语“包含”、“包括”、“具有”，和它们的结合词组（conjugate）是指“包括但不局限于”。这种术语包括术语“由……组成”和“基本由……组成”。
术语“基本由……组成”是指组合物或方法可包括另外的成分和/或步骤，但仅当该另外的成分和/或步骤不实质性地改变要求保护的组合物或方法的基本和新特征时是这样。
如在此使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。例如，术语“一种化合物”或“至少一种化合物”可包括多种化合物，包括其混合物。
在整篇专利申请中，本发明的各种实施方式可以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅是为了方便和简洁，而不应该理解为对本发明范围的硬性限制。因此，范围的描述应视为已具体地公开了所有可能的子范围以及在此范围内的各个数值。例如，如从1至6的范围描述应视为已具体地公开了诸如从1至3、从1至4、从1至5、从2至4、从2至6、从3至6等的子范围，以及在此范围内的各个数值，例如，1、2、3、4、5，和6。不论范围宽度如何，这都能适用。
当本文中指出了数值范围时，其意在包括在所指范围内的任何提及数字（小数或整数）。本文中的表达在第一个指定数和第二个指定数“之间”的“范围”与从第一个指定数“至”第二个指定数的“范围”可互换使用，意在包括第一和第二个指定数以及其间的所有小数和整数。
如本文使用的术语“方法”是指用于完成给定任务的方式、方法、技术和程序，包括但不限于，化学、药学、生物学、生物化学和医学领域技术人员已知，或易于从已知方式、方法、技术和程序开发出的那些方式、方法、技术和程序。
本文使用的术语“示例性”是指“用作实施例、例证，或解释”。被描述为“示例性”的任何实施方式不必解读为优选的或比其他实施方式有利，和/或排除其它实施方式中特征的并入。
术语“可选地”在本文用于指“提供在一些实施方式中，而没有提供在其它实施方式中”。本发明任何特定的实施方式均可包括多个“可选的”特征，除非此类特征相冲突。
应理解，为清楚起见而在单独实施方式的上下文中描述的本发明某些特征，也可结合提供在单个实施方式中。相反，为简洁起见而在单个实施方式的上下文中描述的本发明的多种特征，也可单独地或以任何合适的子组合形式提供，或作为适合于本发明的任何其他被描述的实施方式提供。在各个实施方式的上下文中描述的某些特征不应被认为是这些实施方式的实质特征，除非这些实施方式没有这些元素时是无效的。
如上文所描绘的和如下面权利要求部分所要求保护的本发明的各种实施方式和方面将在下面的实施例中找到实验支持。
实施例
现在参考下面的实施例，结合上面的描述以非限制方式说明本发明的一些实施方式。
一般而言，本文使用的术语和本发明利用的实验程序包括分子、生物化学、微生物学和重组DNA技术。此类技术在文献中有详尽的解释。参见，例如，"Molecular Cloning:A laboratory Manual"Sambrook等人,(1989);"Current Protocols in Molecular Biology"Volumes I-III Ausubel,R.M.,ed.(1994);Ausubel等人,"Current Protocols in Molecular Biology",John Wileyand Sons,Baltimore,Maryland(1989);Perbal,"A Practical Guide toMolecular Cloning",John Wiley&Sons,New York(1988);Watson等人,"Recombinant DNA",Scientific American Books,New York;Birren等人(eds)"Genome Analysis:A Laboratory Manual Series",Vols.1-4,Cold SpringHarbor Laboratory Press,New York(1998);方法在美国专利4,666,828;4,683,202;4,801,531;5,192,659和5,272,057;"Cell Biology:A LaboratoryHandbook",Volumes I-III Cellis,J.E.,ed.(1994);"Current Protocols inImmunology"Volumes I-III Coligan J.E.,ed.(1994);Stites等人(eds),"Basicand Clinical Immunology"(第8版),Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994);Mishell and Shiigi(eds),"Selected Methods in Cellular Immunology",W.H.Freeman and Co.,New York(1980)中列出；可用的免疫分析法详述在这些专利和科学文献中，参见，例如，美国专利3,791,932;3,839,153;3,850,752;3,850,578;3,853,987;3,867,517;3,879,262;3,901,654;3,935,074;3,984,533;3,996,345;4,034,074;4,098,876;4,879,219;5,011,771and5,281,521;"Oligonucleotide Synthesis"Gait,M.J.,ed.(1984);“Nucleic AcidHybridization"Hames,B.D.,and Higgins S.J.,eds.(1985);"Transcriptionand Translation"Hames,B.D.,and Higgins S.J.,Eds.(1984);"Animal CellCulture"Freshney,R.I.,ed.(1986);"Immobilized Cells and Enzymes"IRLPress,(1986);"A Practical Guide to Molecular Cloning"Perbal,B.,(1984)and"Methods in Enzymology"Vol.1-317,Academic Press;"PCR Protocols:AGuide To Methods And Applications",Academic Press,San Diego,CA(1990);Marshak等人,"Strategies for Protein Purification and Characterization-ALaboratory Course Manual"CSHL Press(1996)；所有这些文献都通过引用合并在此如同全部列出在此。其它一般性参考文献提供在本文各处。其中的程序被认为是本领域熟知的，仅为了便于读者阅读而提供。包含在其中的所有信息都通过引用合并在此。
实施例1
生成单克隆抗体
生成MRG1单克隆抗体
生成以纳摩尔浓度（nanomolar concentration）在体外有效地阻断CEACAM1嗜同性相互作用的单克隆抗体。简言之，使用5微克重组人CEACAM1（完整蛋白，购自R&D System）免疫小鼠，每隔2周免疫一次，共免疫3次。收获脾细胞，并使其与SP2/0细胞融合，从而生成杂交瘤文库。
将产生阻断CEACAM1的抗体（MRG1 mAb）的杂交瘤再克隆数次从而得到稳定的克隆。
其它单克隆抗体
Kat4c mAb和家兔多克隆抗CEACAM（抗体）购自DAKO（Glostrup,Denmark）。
实施例2
抗CEACAM1mAb的特异性
材料和实验程序
生成表达CEACAM的细胞
通过电穿孔用CEACAM1、CEACAM5、CEACAM6或CEACAM8稳定转染CEACAM-阴性721.221人细胞（亲代B细胞），并用G418进行筛选。
用包含融合到鼠类ζ链（murine zeta chain）的跨膜和胞质尾区上的人CEACAM1胞外部分的嵌合分子转染鼠类胸腺瘤BW亲代细胞（缺少TCRα和β链，但完全保留IL-2的分泌机制的细胞）。转染通过电穿孔执行，用G418筛选。
FACS法抗体筛选
通过流式细胞术如下筛选出具有CEACAM1结合活性的杂交瘤：
（a）将50,000个转染的CEACAM细胞置于96-U形孔中。
（b）用冷FACS缓冲液（PBS，BSA0.5%，叠氮化物（Azide）0.05%）洗涤该细胞。
（c）将该细胞与染色mAb（MRG1或Kat4c）：0.1微克mAb/100微升一起在冰上温育30分钟。
（d）离心该细胞，除去上清液，将该细胞以1:200的稀释度重悬在100微升FITC-结合的山羊抗小鼠抗体（Jackson Immunoresearch）中。
（e）温育30分钟（在冰上于黑暗条件下温育）后，离心该细胞，洗涤并将其重悬在FACS缓冲液中。
（f）利用FACScalibur和CellQuest软件分析细胞。
结果
因为721.221亲代细胞不表达CEACAM蛋白中的任何一种，所以用CEACAM1、CEACAM5、CEACAM6或CEACAM8稳定转染这些细胞以便测试CEACAM1单克隆抗体（mAb）的特异性。然后通过流式细胞术筛选具有CEACAM1结合活性的杂交瘤。如图1A所示，根据本教导生成的MRG1mAb对人CEACAM1具有特异性。它与CEACAM5的交叉反应性不显著，而且不与CEACAM6或CEACAM8结合。图1B示出，所有转染子都表达了CEACAM分子，其中CEACAM1最低，这强调了MRG1的特异性模式。
实施例3
该mAb能够抑制CEACAM1嗜同性结合
材料和实验程序
ELISA法抗体筛选
利用BW功能系统测试CEACAM1阻断活性。该BW功能系统包括用包含融合到鼠类ζ链（BW/CEACAM1-ζ，参见上面的实施例2）上的人CEACAM1胞外结构域的嵌合分子稳定转染的小鼠细胞系（BW）。BW/CEACAM1-ζ细胞与其它CEACAM1阳性细胞的共温育导致可测量浓度的小鼠IL-2的分泌。
因而，将BW/CEACAM1-ζ（效应细胞）或221/CEACAM1（靶细胞）各自单独地与10-40ng/ml MRG1mAb预温育。在冰上温育1小时后，加入易位细胞（221/CEACAM1或BW/CEACAM1），并通过夹心ELISA（R&Dsystems）测量小鼠IL-2的分泌。
细胞毒性分析
在存在或不存在1μg/ml MRG1mAb的情况下，执行测试肿瘤浸润淋巴细胞对各种黑素瘤细胞系的杀伤的细胞毒性分析。CEACAM1High526mel、624mel和CEACAM1dim09mel黑素瘤细胞用作靶细胞。TIL014细胞用作效应细胞，E:T比例为10:1。在与MRG1mAb在冰上温育1小时后，加入易位细胞，并在37℃下共温育5小时。靶细胞用绿色荧光染料（CFSE）预先标记，并通过流式细胞术碘化丙啶（PI）共染色法测定特异性溶解。扣除自然死亡。
结果
证实了纯化的MRG1mAb抑制CEACAM1嗜同性结合的能力。如图2所示，纯化的mAb MRG1对CEACAM1嗜同性结合表现出剂量依赖性抑制。该mAb在浓度为10ng/ml时高效地降低了CEACAM1相互作用，在浓度为20ng/ml时有效地达到平稳状态（plateau）。重要地，该两个实验状况，即，将MRG1mAb加入到效应细胞BW/CEACAM1-ζ中，或者将MRG1mAb加入到靶细胞221/CEACAM1中，表现出类似的结果（有效地阻断小鼠IL-2的分泌）。
MRG1mAb的阻断作用进一步在细胞毒性分析中得到证明。如图3所示，对CEACAM1High526mel和624mel细胞的杀伤可通过将该抗体与效应细胞一起温育而增强（但不适用于靶细胞）。MRG1mAb的存在并不影响对CEACAM1dim09mel细胞的杀伤（图3）。
实施例4
抗CEACAM1mAb抑制癌症细胞迁移和增殖
材料和实验程序
侵袭分析
在侵袭分析中测试抗体的阻断作用。简言之，在存在或不存在1μg/mlMRG1mAb的情况下预温育黑素瘤细胞（08mel或09mel），然后通过基质胶侵袭试验测试。使侵袭进行24小时，利用标准化XTT量化侵袭细胞量。
净增殖分析
在第0天将CEACAM1High526mel细胞接种在48孔板（2,500个细胞/孔）中。在接种后，加入三种不同浓度（0.5、1或3μg/ml）的MRG1，或根本不加入MRG1。在接种2或5天后对总活细胞进行计数。利用标准化的XTT，通过直接细胞计数确定增殖。
结果
如图4所示，MRG1阻断了CEACAM1阳性08mel细胞的侵袭（CEACAM1表达水平为中等，即，CEACAM1表达的中位荧光强度（median fluorescence intensity）为50），而对CEACAM1dim09mel细胞的影响很小或没有影响（CEACAM1表达水平低，即，CEACAM1表达的中位荧光强度为15）。
也在净增殖分析中测试了MRG1。观察到它以剂量依赖方式抑制526mel细胞的净增殖（图5）。处理5天后，增殖降低超过60%（用3μg MRG1mAb处理）。
实施例5
MRG1抑制动物实验模型中的癌症细胞增殖
材料和实验程序
黑素瘤异种移植模型
将5x106个CEACAM1+人黑素瘤细胞皮下注射到7周龄的SCID-NOD小鼠侧腹中。肿瘤块（肿瘤组织tumor masses）在14～17天内形成在100%的小鼠中，并继续生长。用测径器非侵袭地监测肿瘤尺寸，每周监测3次，并按（d1xd2xd3/2）计算近似体积。
通过腹膜内注射用0.5ml无菌PBS稀释的0.5mg抗体，给予MRG1。注射PBS作为对照。
通过将用200μl无菌PBS稀释的20x106个细胞静脉注射到尾静脉中，给予反应性人抗黑素瘤淋巴细胞。
结果
与上面证明的阻断功能一致，给予MRG1抗体抑制了肿瘤生长。当在肿瘤细胞接种时给予该抗体（图6A，“预防方案”）或在可测量肿瘤块已经形成时给予该抗体（图6B，“治疗方案”），这种作用是明显的。在8天内注射4次并接着非侵袭性监测之后，这些作用是明显的（见图6中的箭头）。应当注意，这种作用与任何免疫调节作用无关，因为SCID-NOD小鼠是免疫缺陷的。
通过单独静脉注射反应性人抗黑素瘤淋巴细胞（其抑制肿瘤生长）对抗黑素瘤免疫应答进行刺激（图7）。通过每周腹膜内注射一次MRG1可显著增强这种作用。
实施例6
MRG1优于前面描述的抗CEACAM1抗体
材料和实验程序
ELISA法抗体筛选
利用上文实施例3详细描述的BW功能系统测试CEACAM1阻断活性。
将100,000个BW/CEACAM1-ζ细胞与15ng/ml MRG1mAb、2600ng/ml Kat4c mAb或600ng/ml家兔多克隆抗CEACAM抗体一起预温育。在冰上温育1小时后，加入50,000个721.221/CEACAM1细胞，并通过夹心ELISA（R&D Systems）测量小鼠IL-2的分泌。
结果
如上文实施例3所描述的，本发明人证明了使用15ng/ml MRG1mAb几乎可以完全阻断CEACAM1活性。相比之下，所测试的抗CEACAM1单克隆抗体Kat4c仅在浓度高200倍时才能够产生较小的阻断作用，浓度高40倍的多克隆家兔抗CEACAM抗体产生类似的抑制作用（分别为2600ng/ml和600ng/ml，图8）。
虽然本发明已结合其特定的实施方式进行描述，但显然，对于本领域技术人员而言，许多替换、修改和变更都是很明显的。因此，本发明旨在包括落在所附权利要求的精神和宽范围内的所有此类替换、修改和变更。
本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请都通过引用完整地合并在本说明书中，如同每篇单独的出版物、专利或专利申请单独地明确被指出通过引用合并在此。另外，本申请中任何参考文献的引用或列出不应该被解释为承认此类参考文献是本发明的现有技术。对于使用的章节标题，它们不应该被解释为必要的限制性的。

Claims (17)

1.一种以ATCC登录号PTA-9974保藏的杂交瘤细胞。
2.一种由根据权利要求1所述的杂交瘤细胞生产的分离的抗体。
3.根据权利要求2所述的分离的抗体，其附接在细胞毒性部分上。
4.根据权利要求3所述的分离的抗体，其中，所述细胞毒性部分包括细胞毒素、趋化因子、化疗药、促凋亡剂、干扰素、放射性部分、或它们的组合。
5.根据权利要求2所述的分离的抗体，其附接在可鉴定部分上。
6.根据权利要求2所述的抗体在制备用于免疫调节表达CEACAM1的淋巴细胞的药物中的应用。
7.根据权利要求2所述的抗体在制备用于抑制表达CEACAM1的肿瘤细胞的迁移或增殖的药物中的应用。
8.根据权利要求2或5所述的抗体在制备用于诊断需要其的受验者中的癌症的药物中的应用，所述诊断包括使源自所述受验者的生物样品与根据权利要求2或5所述的抗体接触，其中，超出预定阈值的复合物形成表示所述受验者患有癌症。
9.治疗有效量的根据权利要求2所述的抗体在制备用于治疗需要其的受验者中表达CEACAM1的癌症的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，进一步包括向所述受验者给予淋巴细胞。
11.根据权利要求10所述的应用，其中，所述淋巴细胞包括T细胞或NK细胞。
12.根据权利要求2所述的抗体在制备用于抑制CEACAM1同型或异型的蛋白质-蛋白质相互作用的药物中的应用，其中，根据权利要求2所述的抗体用于与表达CEACAM1的淋巴细胞接触。
13.根据权利要求6或12所述的应用，其中，所述表达CEACAM1的淋巴细胞是肿瘤浸润淋巴细胞或NK细胞。
14.根据权利要求6或12所述的应用，其中，所述表达CEACAM1的淋巴细胞是细胞毒性T细胞。
15.根据权利要求7所述的应用，其中，所述肿瘤细胞包括黑素瘤肿瘤细胞。
16.根据权利要求9所述的应用，其中，所述癌症是黑素瘤。
17.一种药物组合物，包含作为活性成分的根据权利要求2或3所述的抗体。
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