CN102438641A - 弹性蛋白酶抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供包含树莓提取物和羟基脯氨酸作为有效成分，还任意地包含酵母提取物的弹性蛋白酶抑制剂。

Description

弹性蛋白酶抑制剂

技术领域

本发明涉及含有植物来源成分树莓提取物和羟基脯氨酸作为有效成分的弹性蛋白酶抑制剂。

背景技术

以往，虽然已经考虑了抗老化剂的必要性，但是由于与老化相关的机制和/或定义等还不明确，因此一般是，作为肌肤的湿润程度，进行保湿状态的测量和/或肌肤的弹力的测量、或在视觉上观察肤色来判断。然而近年来，与老化相关的研究有了进展，作为皮肤老化的原因，宏观上来看年龄增长是重要原因，此外干燥、氧化、太阳光(紫外线)产生的影响等也作为与皮肤老化相关的直接原因被列举出。作为皮肤老化的具体现象，已知皮肤真皮中的胶原和/或弹性蛋白的减少、以透明质酸为首的粘多糖类的减少、紫外线引起的细胞的损伤等。其中弹性蛋白互相形成交联而有助于组织的弹性，但是认为随着紫外线暴露和/或年龄增长，由于作为弹性蛋白破坏酶的弹性蛋白酶过度表达，因而使弹性蛋白改性·破坏，这会引起皮肤的弹性降低。因此，抑制弹性蛋白酶的作用、防止向皮肤赋予弹力和/或张力的弹性蛋白的改性·破坏对防止皮肤老化而言是重要的。

在直接涂布于皮肤的化妆品等的情况下，天然来源成分是优选的，作为这样的天然来源的弹性蛋白酶抑制剂，已知例如天竺菩提树(印度菩提树)提取物(专利文献1)、虎耳草的提取物(专利文献2)、茜草科植物的儿茶钩藤提取物(专利文献3)、杜鹃花科杜鹃(Rhododendron simsii)的提取物(专利文献4)等，包含这些提取物的皮肤外用剂在皱纹·小皱纹和肌肤的张力·松弛方面显示改善效果。

另一方面，还已知弹性蛋白酶抑制剂除了皮肤外用剂以外，作为疾病治疗剂是有用的，报导了对例如，慢性类风湿性关节炎、变形性关节病等关节系疾病，全身性炎症反应综合征、动脉硬化、急性肺功能障碍、急性呼吸窘迫综合征等是有效的。

具体而言，已知针对急性胰腺炎和/或急性循环衰竭(出血性休克)等的乌司他丁以及作为对改善全身性炎症反应综合征引起的急性肺功能障碍有效的选择性中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠等医药品。这样，虽然弹性蛋白酶抑制剂被作为炎症性疾病等的治疗剂使用，但是如果考虑安全性等，则在该情况下也优选不是以合成化学品而是以天然来源成分作为主成分的制品。

专利文献1：特开平11-335230号公报

专利文献2：特开平11-246386号公报

专利文献3：特开平10-182414号公报

专利文献4：特开2009-191043号公报

发明内容

本发明的目的在于，可以通过在外用剂中使用来抑制弹性蛋白酶而赋予皮肤弹力和/或张力，并提供作为疾病治疗剂有用的弹性蛋白酶抑制剂。

本发明者研究了各种植物提取物的弹性蛋白酶抑制活性，结果发现，树莓(Rubus idacus L.)的溶剂提取物具有弹性蛋白酶抑制活性，还发现该抑制活性通过添加羟基脯氨酸而协同地提高，从而完成了本发明。

因此，本申请提供以下发明。

(1)一种弹性蛋白酶抑制剂，包含树莓提取物和羟基脯氨酸作为有效成分。

(2)根据(1)所述的弹性蛋白酶抑制剂，所述羟基脯氨酸是L-羟基脯氨酸。

(3)根据(1)或(2)所述的弹性蛋白酶抑制剂，还包含酵母提取物。

(4)根据(3)所述的弹性蛋白酶抑制剂，所述酵母提取物是由在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且接受了紫外线照射、或过氧化氢处理或这两者的处理的酵母调制而成的。

(5)一种皮肤外用剂，含有(1)～(4)的任一项所述的弹性蛋白酶抑制剂。

(6)根据(5)所述的皮肤外用剂，其是化妆品。

附图说明

图1显示树莓提取物和羟基脯氨酸的弹性蛋白酶抑制活性。

图2显示各种药剂及其混合物的弹性蛋白酶抑制活性。

具体实施方式

以下对本发明的实施方式进行说明。

树莓(raspberry，欧洲树莓)(Rubus idacus L.)是蔷薇科，树莓属的植物，是分布在从欧洲至西亚和美国东海岸的原野的落叶灌木，花期为6月左右，开白色的花。果实在8～10月左右成熟，先为红色不久就变成略带紫色的黑色。其果实以树莓的别名为人所知，因优雅的香气和色泽、美味而著称，且在果实少的时代是代表性水果，即使在现在也加上砂糖食用果实、或被加工成果酱和/或果汁等。由于包含苹果酸、柠檬酸等糖强收饮物质，具有女性激素样活性的类黄酮、维生素C(抗坏血酸)、维生素P(橙皮苷，卢丁)为主的各种维生素类和/或糖类等作为药效成分，因此已知除了对皮肤炎(湿疹，痤疮)有效果以外，还可用于咽喉的消炎剂、止泻药等。

作为本发明的弹性蛋白酶抑制剂中使用的树莓提取物，可列举例如，溶剂提取液、该溶剂提取液的稀释液、将该溶剂提取液干燥而得的干燥物、将该干燥物溶解在溶剂中得到的溶液等。此外，也包括它们的粗纯化物和纯化物等。

本发明中使用的提取溶剂只要是通常提取中使用的溶剂即可，可以单独使用水、或者甲醇、乙醇或1，3-丁二醇等醇类，含水醇类，丙酮，乙酸乙酯等有机溶剂，或将它们组合使用，其中，优选醇类、含水醇类，特别优选乙醇、1，3-丁二醇、含水乙醇或含水1，3-丁二醇。此外，上述溶剂优选在室温至溶剂的沸点以下的温度下使用。

作为上述植物体的部位，优选果实，但是也可以使用其它部位的提取物。

由于本发明中使用的树莓提取物对人的肌肤发挥优异的弹性蛋白酶抑制活性，因此配合了该植物提取物的皮肤外用剂能够防止肌肤的老化、维持年轻健康的肌肤的状态。

在将本发明的弹性蛋白酶抑制剂配合在外用剂中的情况下，树莓提取物的配合量在外用剂总量中作为干燥物为0.000001～1质量％，优选为0.00001～0.1质量％，更优选为0.0001～0.01质量％，最优选为约0.01质量％。如果小于0.000001质量％，则不能充分发挥本发明中说明的效果，如果大于1质量％，则难以制剂化，因此不优选。

本发明的弹性蛋白酶抑制剂可以仅包含树莓提取物，但是优选含有羟基脯氨酸，更优选含有酵母提取物。特别是通过配合羟基脯氨酸可以协同地提高弹性蛋白酶抑制活性。

羟基脯氨酸，特别是L-羟基脯氨酸上胶原特有的氨基酸。胶原的氨基酸序列是-Gly-X-Y-，X、Y是任意的氨基酸且至少1个是由L-脯氨酸或L-羟基脯氨酸构成。具有促进成纤维细胞中的胶原产生和/或表皮细胞的增殖、保湿效果等各种防止皮肤老化效果。

在将本发明的弹性蛋白酶抑制剂配合在外用剂中的情况下，羟基脯氨酸的配合量在外用剂总量中作为干燥物为0.00001～10质量％，优选为0.0001～1质量％，更优选为0.001～0.1质量％，最优选为约0.025质量％。如果小于0.00001质量％，则不能充分发挥本发明中说明的效果，如果大于10质量％，则由于难以制剂化，因此不优选。

采用在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且接受了紫外线照射、或过氧化氢处理或这两者的处理的酵母调制而得的酵母提取物在本发明中是优选的。已知通过将酵母在紫外线和/或过氧化氢等应激存在下进行培养，由应激产生保护细胞的细胞保护成分，此外此时通过将营养蛋白胨类和/或糖胺聚糖等添加在培养基中来提高对应激的反应。其制法等记载在例如美国专利第6461857号说明书中。例如，将作为面包酵母的一种的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)在添加了非动物来源的糖胺聚糖的营养培养基中培养，在培养物中加入亚致死量，例如培养物的总质量的约0.1～2质量％的过氧化氢，再任意地照射亚致死照射量的紫外线(例如，31.5mJ/cm²强度的UVA/UVB照射)来负载应激，所得的培养物通过自消化或酸水解等使其溶解，然后进行干燥、水提取、过滤等，由此可以调制酵母提取物。此外，由在含有非动物来源的糖胺聚糖的培养基中培养且接受了紫外线照射和过氧化氢处理的酵母调制而得的酵母提取物以来自Arch PersonalCare Products L.P.社的“バイオダインEMPP(商标)”的商品名被销售。

在将本发明的弹性蛋白酶抑制剂配合在外用剂中的情况下，酵母提取物的配合量在外用剂总量中作为干燥物为0.000001～1质量％，优选为0.00001～0.1质量％，更优选为0.0001～0.01质量％，最优选为0.0005～0.005质量％。如果小于0.000001质量％，则不能充分发挥本发明中说明的效果，如果大于1质量％，则难以制剂化，因此不优选。

在将本发明的弹性蛋白酶抑制剂作为外用剂应用的情况下，可以与通常化妆品和/或医药品等皮肤外用剂中使用的成分，例如，美白剂、保湿剂、抗氧化剂、油性成分、紫外线吸收剂、表面活性剂、增稠剂、醇类、粉末成分、着色剂、水性成分、水、各种皮肤营养剂等适当组合来配合。

除此以外，还可以适当配合乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多聚磷酸钠、偏磷酸钠、葡糖酸等金属螯合剂，咖啡因、丹宁、维拉帕米、凝血酸及其衍生物、甘草提取物、光甘草定、火棘果实的热水提取物、各种生药、乙酸生育酚酯、甘草酸及其衍生物或其盐等药剂，维生素C、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸葡糖苷、熊果苷、曲酸等其它美白剂，葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖等糖类等。

包含本发明的弹性蛋白酶抑制剂的外用剂能够广泛用于适用于外皮的化妆品、医药部外品等，特别优选化妆品，其剂型也能够采用水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、油液系、凝胶系、软膏系、气雾剂系、水-油2层系、水-油-粉末3层系等多种剂型。即，如果是基础化妆品，则能够在上述多样剂型中以洗面奶、化妆水、乳液、面霜、凝胶、精华(美容液、面膜(パツク)、面膜(マスク)等形态广泛应用。此外，如果是彩妆化妆品，则能够以粉底等使用，作为日化制品，可以以沐浴露、肥皂等形态广泛应用。此外如果是医药部外品，则能够以各种软膏剂等形态广泛应用。而且，包含本发明的弹性蛋白酶抑制剂的外用剂能够采用的形态不限于这些剂型和形态。

此外，本发明的弹性蛋白酶抑制剂可以作为呼吸器官用药剂和/或急性肺功能障碍、急性呼吸窘迫综合征等的药剂、其它脏器损伤用药剂等的疾病治疗剂而应用。

在上述用途中，为了使本发明的弹性蛋白酶抑制剂制剂化，采用通常的方法制成例如散剂、颗粒、安瓿剂、注射液、等渗液等。即，在调制口服用固体制剂的情况下，加入赋形剂，进而根据需要加入粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、分散剂、矫味剂、矫臭剂等，然后通过常规方法制成片剂、被覆片剂、颗粒、胶囊剂等。

作为使用的赋形剂，可列举例如乳糖、葡萄糖、山梨糖醇、玉米淀粉、甘露糖醇等，作为粘合剂，可列举例如聚乙烯醇、聚乙烯基醚、乙基纤维素、阿拉伯树胶、明胶、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等，作为崩解剂，可列举碳酸钙、柠檬酸钙、糊精、淀粉、明胶粉末等，作为润滑剂，可列举碳酸钙、柠檬酸钙、滑石、聚乙二醇等，作为着色剂，可列举可可粉末、薄荷芳香酸、薄荷油等。这些片剂、颗粒剂还可以包糖衣、明胶衣，也可以根据需要适当涂层。在制剂为注射剂的情况下，根据需要添加pH调节剂、缓冲剂、表面活性剂、助溶剂、溶剂、稳定剂、保存剂等，通过常规方法制成皮下、肌肉内、静脉内用注射剂。

在本申请的另一观点中，提供本申请发明涉及的弹性蛋白酶抑制剂作为皮肤外用剂、优选化妆品的使用。作为皮肤外用剂，为了抑制/预防由于例如紫外线暴露和/或年龄增长的弹性蛋白酶的过度表达而导致的伴随弹性蛋白的改性·破坏的皮肤的弹性降低，可以通过对需要抑制/预防这样的皮肤弹力降低的对象，例如在其皮肤局部应用来使用。此外，本申请提供本申请发明涉及的弹性蛋白酶抑制剂的用于治疗和/或预防弹性蛋白酶相关疾病，例如慢性类风湿性关节炎、变形性关节病等关节系疾病、全身性炎症反应综合征、动脉硬化、急性肺功能障碍、急性呼吸窘迫综合征等的使用。本发明的弹性蛋白酶抑制剂可以通过向需要抑制/预防这样的皮肤弹力降低的对象口服、非口服应用来使用。

[实施例]

以下，列举实施例来具体地说明本发明，但是本发明不限于下述实施例。

作为反应用缓冲液，使用0.1M HEPES，0.5M NaCl(pH7.5)。作为弹性蛋白酶基质，将氧代琥珀酰-(Ala)₂-Pro-Val-MCA(ペプチド研究所CatNo.3153-v)溶解在DMSO中，使变成80mM，用反应用缓冲液稀释成0.16mM。将人白血球来源的弹性蛋白酶(ELASTIN PRODUCT CO.，INC.Cat No.CK828)用反应用缓冲液稀释成5μg/mL。

在96孔板中各分注25μL的0.16mM-弹性蛋白酶基质，再添加50μL的各种药剂。然后，在冰上加入25μL的5μg/ml  弹性蛋白酶，在37℃下孵育60分钟，然后用激发波长为369nm测定460nm的荧光。作为树莓提取物，使用(株)丸善制药的树莓提取液BG，作为羟基脯氨酸，使用协和发酵工业(株)的L-羟基脯氨酸，此外作为酵母提取物，使用Arch PersonalCare Products L.P.社的バイオダインEMPP(商标)。树莓提取液BG是树莓果实的1，3-丁二醇(50％水溶液)提取物。

结果示于图1。可以确认树莓提取物单独具有有意的浓度依存式弹性蛋白酶抑制效果。另一方面，羟基脯氨酸单独不显示弹性蛋白酶抑制效果。

有趣的是，可知，虽然羟基脯氨酸不显示弹性蛋白酶抑制效果，但是在与树莓提取物合并使用的情况下会有意的增强树莓提取物的弹性蛋白酶抑制效果。因此，可知通过合并使用羟基脯氨酸可以协同地提高树莓提取物的弹性蛋白酶抑制效果。

图2是显示在分别单独使用树莓提取物(作为干燥物为0.001质量％)、羟基脯氨酸(0.025质量％)和酵母提取物(作为干燥物为0.001质量％)的情况下，在这些一起使用的情况下(分别作为干燥物为0.001质量％、0.025质量％，作为干燥物为0.001质量％)的弹性蛋白酶抑制效果。作为对照，使用树莓提取物的提取溶剂1，3-丁二醇。与在单独使用各个药剂的情况下相比，将它们合并使用会显著提高弹性蛋白酶抑制效果。

处方例1面霜

(处方)

(1)硬脂酸                   3.0质量％

(2)硬脂醇                   5.0

(3)肉豆蔻酸异丙酯           18.0

(4)甘油单硬脂酸酯           3.0

(5)丙二醇                   10.0

(6)L-羟基脯氨酸             0.01

(7)树莓提取液(作为干燥物)   0.001

(8)氢氧化钾                 0.2

(9)亚硫酸氢钠               0.01

(10)防腐剂                  适量

(11)香料                    适量

(12)离子交换水              残余

(制法)

在离子交换水加入丙二醇、L-羟基脯氨酸、树莓提取液和氢氧化钾并溶解，加热并保持70℃(水相)。混合其它成分并加热熔化，保持70℃(油相)。在水相中缓慢加入油相，在全部添加结束后立即保持该温度使其反应。然后，用均质混合机均匀地乳化，一边充分混合一边冷却至30℃。

处方例2面霜

(处方)

(1)硬脂酸                 2.0质量％

(2)硬脂醇                 7.0

(3)氢化羊毛脂             3.0

(4)角鲨烷                      4.0

(5)2-辛基十二烷醇              6.0

(6)聚氧乙烯(25摩尔)鲸蜡基醇醚  3.0

(7)甘油单硬脂酸酯              2.0

(8)丙二醇                      6.0

(9)L-羟基脯氨酸                0.02

(10)本弹性蛋白酶抑制剂

树莓提取物(作为干燥物)         0.005

酵母提取液(作为干燥物)         0.001

(11)亚硫酸氢钠                 0.03

(12)对羟基苯甲酸乙酯           0.3

(13)香料                       适量

(14)离子交换水                 残余

(制法)

在离子交换水中加入丙二醇，加热并保持70℃(水相)。混合其它成分并加热熔化，保持70℃(油相)。在水相中加入油相并进行预乳化，用均质混合机均匀地乳化，然后一边充分地搅拌一边冷却至30℃。

处方例3乳液

(处方)

(1)硬脂酸                      2.5质量％

(2)鲸蜡醇                      1.5

(3)凡士林                      5.0

(4)液体石蜡                    10.0

(5)聚氧乙烯(10摩尔)单油酸酯    2.0

(6)聚乙二醇1500                3.0

(7)三乙醇胺                    1.0

(8)羧基乙烯基聚合物            0.05

(9)本弹性蛋白酶抑制剂

L-羟基脯氨酸                 0.003

树莓提取液(作为干燥物)       0.005

(10)亚硫酸氢钠               0.01

(11)对羟基苯甲酸乙酯         0.3

(12)香料                     适量

(13)离子交换水               残余

(制法)

在少量的离子交换水中溶解羧基乙烯基聚合物(A相)。在残留的离子交换水中加入聚乙二醇1500和三乙醇胺，加热溶解并保持70℃(水相)。混合其它成分并加热熔化，保持70℃(油相)。在水相中加入油相并进行预乳化，加入A相并用均质混合机均匀乳化，乳化后一边充分搅拌一边冷却至30℃。

处方例4乳液

(处方)

(1)微晶蜡                                1.0质量％

(2)蜂蜡                                  2.0

(3)羊毛脂                                20.0

(4)液体石蜡                              10.0

(5)角鲨烷                                5.0

(6)失水山梨醇倍半油酸酯                  4.0

(7)聚氧乙烯(20摩尔)失水山梨醇单油酸酯    1.0

(8)丙二醇                                7.0

(9)本弹性蛋白酶抑制剂

L-羟基脯氨酸                             0.01

树莓提取液(作为干燥物)                   0.001

酵母提取液(作为干燥物)                   0.005

(10)ロ一ズアツプリ一フ提取液          0.05

(11)亚硫酸氢钠                        0.01

(12)对羟基苯甲酸乙酯                  0.3

(13)香料                              适量

(14)离子交换水                        残余

(制法)

在离子交换水中加入丙二醇，加热并保持70℃(水相)。混合其它成分并加热熔化，保持70℃(油相)。一边充分搅拌油相一边向其中缓慢加入水相，用均质混合机均匀地乳化。乳化后一边充分搅拌一边冷却至30℃。

处方例5美容液

(处方)

(A相)

(1)乙醇(95％)                        10.0质量％

(2)聚氧乙烯(20摩尔)辛基十二烷醇      1.0

(3)泛酸醇乙基醚                      0.1

(4)本弹性蛋白酶抑制剂

L-羟基脯氨酸                         0.001

树莓提取液(作为干燥物)               0.001

(5)对羟基苯甲酸甲酯                  0.15

(B相)

(6)氢氧化钾                          0.1

(C相)

(7)甘油                              5.0

(8)双丙甘醇                          10.0

(9)亚硫酸氢钠                        0.03

(10)羧基乙烯基聚合物                 0.2

(11)纯化水                           残余

(制法)

将A相、C相分别均匀地溶解，在C相中加入A相使其溶解。然后加入B相，然后进行填充。

处方例6化妆水

(处方)

(1)乙醇                     5.0质量％

(2)甘油                     0.5

(3)双丙甘醇                 2.0

(4)1，3-丁二醇              5.5

(5)柠檬酸                   0.02

(6)柠檬酸钠                 0.08

(7)六偏磷酸钠               0.03

(8)羟丙基-β-环糊精         0.1

(9)本弹性蛋白酶抑制剂

L-羟基脯氨酸                0.003

树莓提取液(作为干燥物)      0.003

(10)薰衣草油                0.1

(11)藻酸钠                  0.001

(12)纯化水                  残余

(制法)

将(1)～(12)根据常规方法进行混合溶解，从而获得了化妆水。

Claims (6)

1.一种弹性蛋白酶抑制剂，包含树莓提取物和羟基脯氨酸作为有效成分。

2.根据权利要求1所述的弹性蛋白酶抑制剂，所述羟基脯氨酸是L-羟基脯氨酸。

3.根据权利要求1或2所述的弹性蛋白酶抑制剂，还包含酵母提取物。

4.根据权利要求3所述的弹性蛋白酶抑制剂，所述酵母提取物是由在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且接受了紫外线照射、或过氧化氢处理或这两者的处理的酵母而制备出的。

5.一种皮肤外用剂，含有权利要求1～4的任一项所述的弹性蛋白酶抑制剂。

6.根据权利要求5所述的皮肤外用剂，其是化妆品。

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