CN102264378A - 包含桔梗根提取物或桔梗皂甙组分的用于预防或治疗丙型肝炎的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其包含用作抗病毒剂的桔梗(Plalycodon grandiflorum)根提取物和/或桔梗中的皂甙(saponin)组分。本发明的组合物对人无害，并且可以抑制丙型肝炎病毒增殖，因此它可以有效地用作丙型肝炎的预防或治疗剂。

Description

包含桔梗根提取物或桔梗皂甙组分的用于预防或治疗丙型肝炎的药物组合物
技术领域
本发明涉及用作抗病毒剂的桔梗(Platycodon grandiflrum)的皂甙组分(皂苷组分，saponin component)，或包含皂甙组分的桔梗根提取物，以及包含它们的用于预防或治疗丙型肝炎的药物组合物。
背景技术
丙型肝炎病毒(下文称为“HCV”)经由输血(transfusion)和社区获得性感染传播。感染HCV后，20％的感染患者进展成急性肝炎，约80％的感染患者患上慢性肝炎，慢性肝炎有可能进展成肝硬化或肝癌。根据最近报道，全世界有近2亿人感染了HCV，推测在美国有450万人感染了HCV(预测该数字可以增加到1500万)。在欧洲，推测至少有500万人是丙型肝炎患者。
还未开发出令人满意的丙型肝炎疫苗或治疗丙型肝炎有效的治疗剂。所以，世界各地许多制药公司和研究院所都试图开发有效的丙型肝炎治疗剂。与乙肝相比，HCV患者在世界各地非常普遍，并且进展成肝硬化和肝癌的可能性大得多。另外，丙型肝炎进展成慢性感染的可能性较大，此进展的机制还在研究。丙型肝炎不仅通过输血传播，而且通过静脉药物注射或纹身传播，但主要通过直接血液接触传播。感染HCV后，大多数感染患者进展成慢性肝炎，然后进一步进展成肝硬化和肝癌。所以，迫切需要开发治疗丙型肝炎的有效疫苗和治疗剂。HCV株之间有许多不同的基因型和突变体。所以，当HCV感染进展成慢性肝炎时，由于遗传变异，再感染或共感染的可能性大。这使得HCV疫苗开发很难。
丙型肝炎的现行治疗是干扰素-α和利巴韦林(Ribavirin)的联合疗法。但是，这种治疗的治愈率非常低，而且带来严重的副作用。约25％的丙型肝炎患者对干扰素-α没有反应，另外25％的患者在暂时性反应之后会复发。剩下50％患者的ALT水平保持正常，甚至在完成治疗后仍然为HCVRNA阴性。但是，这些受治疗患者中的50％在第一次治疗之后的3～6个月内复发。因而，仅25％的丙型肝炎患者表现出持续的病毒反应(SVR)，这意味着这些患者的治疗效果至少可以保持6个月。同时，丙型肝炎病毒具有6种基因型。在它们当中，基因型1b最常见，但是与基因型2或基因型3相比，对干扰素-α的反应并不是那样好。在干扰素-α和利巴韦林的联合疗法的情况下，治疗效果加倍。当单独使用利巴韦林治疗时，治疗效果没有这么好，而且带来副作用，如由红细胞破碎引起的贫血。因此，当患者对干扰素-α没有反应或丙型肝炎复发时，仅开处利巴韦林。到目前为止，还未开发出通过直接抑制复制而特异性地靶向丙型肝炎病毒的有效抗病毒剂。
1989年，通过分子克隆从HCV中首次分离出RNA基因组(Choo，Q-L，et ah，1989，Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A，non-B viral hepatitis genome.Science 244：359-362)。从那以后，制造出HCV的分子生物途径，但是其具有局限性，因为它缺少高效的细胞培养系统和动物模型。但是最近，已确立稳定地复制HCV RNA复制子的肝瘤细胞系从而解决了该局限性(Lohmann，V.，F.Korner，J-0Koch，U.Herian，L.Theilmann，R.Bartenschlager，1999，Replication of subgenomic hepatitis cvirus RNAs in a hepatoma cell line.Science 285：110-113)。HCV RNA复制子分为两类：包含完整HCV基因的全长复制子和其中不包括结构蛋白的亚基因组复制子。HCV RNA复制子是双顺反子复制子，其包含HCV 5端、HCV IRES、耐新霉素基因(新霉素转移酶基因)和EMCV(脑心肌炎病毒)IRES。HCV非结构蛋白由包含NS3-NS5B和HCV 3′端(非翻译区)的序列组成。已开发出对抗每个HCV基因型的HCV复制子，其有助于不同情况的研究。
本发明的发明人如此完成本发明：基于发明人证实从桔梗根提取物中分离出的桔梗皂甙组分以及包含它的桔梗根提取物具有优异的HCV复制子抑制作用，提出从桔梗根提取物中分离出的桔梗皂甙组分以及包含它的桔梗根提取物可以有效地用于预防和/或治疗丙型肝炎。
桔梗(Platycodi Radix)是属于桔梗科(Campanulaceae)的多年生植物桔梗A.DC(Platycodon grandiflorum A.DC)的根，其广泛分布或栽培在东亚，其盖仑制剂名称(galenical name)为Gilgyeong。
据报道，桔梗根含有许多碳水化合物(糖，至少90％)、蛋白质(2.4％)、脂质(0.1％)和灰分(1.5％)。另外，它包含各种三萜皂甙(24种，包括桔梗皂甙A、C、D、D2(platycodin A、C、D、D2)，远志皂甙D、D2(polygalacinD，D2)，等)(约2％)。这些皂甙已受到很多关注，因为它们具有多种药理作用，这使得它们为桔梗的活性成分。还报道了桔梗的其它次要(minor)成分如类固醇化合物，例如α-菠菜甾醇(α-spinasterol)、Δ7-豆甾醇(Δ7-stigmasterol)和α-菠菜甾醇-β-D-葡萄糖苷(α-spinasteryl-β-D-glucoside)，它们占0.03％。桔梗中的碳水化合物组分主要由单糖、二糖或三糖如葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖(kestose)等组成，还包括一些多糖如菊粉(inulin)和桔梗糖(platycodinin)。
已被现代医药研究证明的桔梗的许多药理作用如下：保护脑细胞[YooKi-Yeon等人，Neurosci.Lett.444(1)，97-101(2008)]、抗肥胖[Zhao，H.L.等人，J.Food.Sci.73(8)，H195-H200，(2008)]、保护肝功能[Lee，K.J.等人，Toxicol.Lett.147，271-282，(2004)]、调节免疫功能[Ahn，K.S.等人，Life Sci.76，2315-2328，(2005)]和引起细胞毒性[Lee，Kyung Jin等人，Food Chem.Toxicol.46(5)，1778-1785(2008)；Zhang，Lin等人，Molecules 12(4)，832-841，(2007)]。
[参考文献1]Yoo Ki-Yeon.等人，Neurosci.Lett.444(1)，97-101，(2008)
[参考文献2]Zhao，H.L.等人，J.Food Sci.73(8)，H195-H200，(2008)
[参考文献3]Lee，K.J.等人，Toxicol.Lett.147，271-282，(2004)
[参考文献4]Ahn，K.S.等人，LifeSci.76，2315-2328，(2005)
[参考文献5]Lee，K.J.等人，Food Chem.Toxicol.46(5)，1778-1785，(2008)
[参考文献6]Zhang，L.等人，Molecules 12(4)，832-841，(2007)
发明内容
技术问题
本发明的目的在于提供对预防和治疗丙型肝炎有效的药物组合物。
解决问题的方案
为了实现上述目的，本发明提供了预防和治疗丙型肝炎的药物组合物，其包含作为活性成分的从桔梗的根提取物中分离出的一些桔梗皂甙组分，和包含它的桔梗根提取物以及药学上可接受的载体。
包含从桔梗根提取物中分离出的桔梗皂甙组分和包含它作为活性成分的桔梗根提取物以及药学上可接受的载体的预防和治疗丙型肝炎的本发明药物组合物，可以单独地用作丙型肝炎预防或治疗剂，或者与干扰素和/或利巴韦林一起治疗，或者与选自各种各样的丙型肝炎病毒增殖抑制剂的一种或至少两种化合物的混合组合物联合治疗，其中该丙型肝炎病毒增殖抑制剂包括免疫调节剂、细胞信号调节剂、抗病毒剂、HCV聚合酶(NS5B)抑制剂、HCV蛋白酶(NS3/4A)抑制剂、HCV解旋酶(NS3解旋酶)抑制剂、HCV NS4B抑制剂、HCV NS5A抑制剂、HCV细胞进入抑制剂，和HCV组装抑制剂。
本文的干扰素包括任一种干扰素，例如，天然干扰素、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、聚乙二醇化干扰素、白蛋白连接的干扰素等，优选为选自上面的一种或多种干扰素，但不局限于此。
本文的抗病毒剂是选自由利巴韦林、拉米夫定(Lamivudine)、金刚烷胺(Amantadine)等组成的组的一种或多种药物，但不局限于此。
在本发明优选的实施例中，本发明提供了预防和治疗丙型肝炎的药物组合物，其包含选自由下面物质组成的组中的一种或多种物质作为活性成分：通过利用水、有机溶剂或其混合物提取的桔梗提取物，和从桔梗根提取物中分离的桔梗皂甙组分，以及包含它们的桔梗根提取物。
本文的有机溶剂优选为10％-100％浓度的C1～C4低级醇。
所述桔梗提取物包括从溶剂提取制得的桔梗提取物通过超滤膜纯化的桔梗提取物。
此时，使用截留分子量为100,000、5,000或1,000的超滤膜。所以，通过该超滤膜纯化获得的桔梗提取物是分子量为1,000～100,000的提取物或分子量为1,000～5,000的提取物。
所述桔梗提取物包括利用截留分子量达到500的纳米过滤膜分离的通过超滤膜纯化的桔梗提取物中分子量为500～5,000的提取物。
从桔梗提取物中分离的皂甙化合物包括由式1表示的皂甙化合物和由式2表示的(前)皂甙元((pro)sapogenin，(原)皂甙元)化合物。
[式1]
Figure BDA0000071107330000061
在式1中，
R1是吡喃葡糖基-(1→6)-吡喃葡糖基-(1→6)-吡喃葡糖基(
Figure BDA0000071107330000062
龙胆二糖基
葡糖基或昆布二糖基
Figure BDA0000071107330000065
R2是CH2OH、CH3、COOH或COOCH3，
R3是H或乙酰基，
R4是H或芹菜糖基
Figure BDA0000071107330000071
[式2]
在式2中，
R5是H、葡糖基或昆布二糖基，
R6是CH2OH或CH3，
R7是H
R6和R7彼此可以通过-CO-连接，
R8是H或CH3。
由式1表示的皂甙化合物的实例为去芹糖桔梗糖苷E(deapio-platycoside E)、桔梗糖苷E、桔梗皂甙D3、远志皂甙D2、远志皂甙D、桔梗甙酸(platyconic acid)A、去芹糖桔梗皂甙D2、桔梗皂甙D2、去芹糖桔梗皂甙D、桔梗皂甙D、2″-O-乙酰基-去芹糖远志皂甙D2、2″-O-乙酰基-远志皂甙D2或桔梗甙酸A甲酯。
由式2表示的(前)皂甙元化合物的实例为由下面物质组成的组：桔梗皂甙元(platycodigenin)、远志酸、桔梗酸A内酯、桔梗酸A内酯3-O-吡喃葡萄糖苷、桔梗皂甙元3-O-吡喃葡萄糖苷28-甲酯或桔梗皂甙元3-O-昆布二糖苷28-甲酯。
该皂甙组分包括如下制备的桔梗粗皂甙：首先，通过利用反相柱色谱纯化溶解在乙醇或甲醇中的桔梗根提取物，接着使其与乙酸乙酯形成沉淀，得到桔梗粗产物。由式2表示的(前)皂甙元化合物通过水解该桔梗粗皂甙制备。
如上文所说明的，用于预防或治疗丙型肝炎的本发明药物组合物可以另外地包括一种或多种HCV增殖抑制剂。
该HCV增殖抑制剂选自由以下物质组成的组：免疫调节剂、细胞信号调节剂、抗病毒剂、HCV聚合酶(NS5B)抑制剂、HCV蛋白酶(NS3/4A)抑制剂、HCV解旋酶(NS3解旋酶)抑制剂、HCV NS4B抑制剂、HCV NS5A抑制剂、HCV细胞进入抑制剂，和HCV组装抑制剂。
预防或治疗丙型肝炎的本发明药物组合物也可以包括属于免疫调节剂的干扰素，和利巴韦林。
本文的免疫调节剂选自由以下物质组成的组：天然干扰素、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、聚乙二醇化干扰素、白蛋白连接的干扰素和细胞因子。
本发明也提供了包含桔梗根提取物、用于预防或治疗丙型肝炎的药物组合物和所述HCV增殖抑制剂的联合疗法。
更优选将包含桔梗根提取物、用于预防或治疗丙型肝炎的药物组合物与免疫调节剂和利巴韦林一起联合施用。
本发明进一步提供了预防丙型肝炎或改善丙型肝炎治疗的保健功能食品，其包含选自由下面物质组成的组中的一种或多种物质：利用水、有机溶剂或其混合物提取的桔梗根提取物，和从桔梗中分离的皂甙组分。
本发明的有利效果
从桔梗根提取物中分离的桔梗皂甙组分和包含它的桔梗根提取物，以及包含它们作为活性成分的组合物对人体无害并可有效地抑制HCV增殖，使得它们可以有效地用作丙型肝炎的预防或治疗剂。
具体实施方式
实施本发明的最佳方式
下文详细地描述本发明。
本发明的桔梗根提取物可以通过用水、有机溶剂或其混合物提取桔梗制备。此时，该有机溶剂是C1～C4醇如甲醇或乙醇、乙酸乙酯、己烷和二氯甲烷。特别地，优选0～100％浓度的C1～C4醇水溶液，更优选0～100％浓度的乙醇(乙醇酒精(alcohol spirit))水溶液。
本发明桔梗根提取物可以通过对桔梗的原始根(raw root)用溶剂进行提取、干燥或研磨成粉来制备。
特别地，利用混合器(blender)使该干燥的桔梗根研磨成粉，并将其浸渍在2～200倍体积，更优选10～30倍体积的水或有机溶剂中，接着在10～100℃下提取。该提取可通过浸泡提取、超声波提取或回流提取进行。必要时，重复提取二次以上。过滤或离心所得提取物从而除去固体成分，接着浓缩和冻干。因此，制得完全干燥的桔梗溶剂提取物。
从桔梗根提取物中分离和纯化桔梗粗皂甙的操作如下：将该桔梗根提取物悬浮在为提取物重量5～50倍的蒸馏水中，并将其倒入装有为提取物重量5～100倍的反相凝胶(RP-18，Diaion HP-20，MCI-凝胶等)，或离子交换凝胶的柱子中。进一步用为提取物重量50～1000倍的另外的蒸馏水洗涤该柱子从而除去未被吸收的糖和氨基酸等。在用水洗涤之后，用10～100倍重量的含水醇洗脱，汇集洗脱物并浓缩至干燥，将其溶解在10～50倍重量的醇中并进行过滤。浓缩滤液至干燥从而得到桔梗粗皂甙。
从桔梗根提取物或桔梗粗皂甙中分离和纯化桔梗皂甙组分的操作如下：将该粗皂甙溶解在5～20倍重量的水中，接着利用装配有填充反相凝胶(RP-18，MCI-凝胶等)柱子的MPLC或HPLC分离和纯化。
本发明药物组合物可以包含桔梗皂甙组分，或浓度为0.1-90重量％，更优选10-70重量％的桔梗根提取物。
包含桔梗皂甙组分或含有它的桔梗根提取物的药物组合物明显地抑制了HCV增殖，表明对丙型肝炎具有优异的预防或治疗效果。
包含桔梗皂甙组分或含有它的桔梗根提取物的本发明药物组合物可以另外地包括药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。包含桔梗皂甙组分或含有它的桔梗根提取物的本发明药物组合物可以配制成用于口服给药，例如粉末、颗粒、片剂、丸剂、胶囊、溶液、悬浮液、乳化液和糖浆。该载体、赋形剂和稀释剂的实例为，乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇(erythritol)、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯橡胶(acacia gum)、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。用于口服给药的固体剂型为片剂、丸剂、粉末、颗粒和胶囊。这些固体剂型通过与一种或多种合适的赋形剂如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明胶等混合来制备。除了简单的赋形剂之外，可以使用润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉等。用于口服给药的液体剂型是悬浮液、溶液、乳液和糖浆，并且除了一般使用的简单稀释剂如水和液体石蜡之外，上述剂型还可以包含各种赋形剂如润湿剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂。
本发明组合物不仅包含桔梗皂甙组分或含有它的桔梗根提取物，而且包含任何种类的HCV增殖抑制剂或其混合物，例如免疫调节剂如用于预防或治疗丙型肝炎的干扰素、细胞信号调节剂、抗病毒剂如利巴韦林、HCV聚合酶(NS5B)抑制剂、HCV蛋白酶(NS3/4A)抑制剂、HCV解旋酶(NS3解旋酶)抑制剂、HCV NS4B抑制剂、HCV NS5A抑制剂、HCV细胞进入抑制剂，和HCV组装抑制剂。
本发明药物组合物可以通过各种途径给药，包括口服、经皮、皮下、肌内或静脉内给药。本发明药物组合物的有效剂量可以由本领域技术人员根据患者年龄、性别、体重和健康状况以及疾病严重性确定。在人的情况下，该药物组合物可以每日给予0.02-1000mg/kg，更优选每日给予1-200mg/kg。给药频率是每天一次或每天几次。剂量并不以任何方式限制本发明的范围。
实施本发明的方式
本发明的实用实施例和当前优选的实施例是说明性的，如下面实施例所示。
然而，本领域技术人员应当理解，根据本申请公开内容，可以在本发明的精神和范围内作出修饰和改进。
实施例1：制备桔梗提取物
将5,000ml蒸馏水加入到1,000g磨成粉的桔梗根中，接着在90℃下回流提取6小时两次。冷却之后，在室温下将该提取物离心(10,000xg)30分钟从而除去固体物质。离心完成后，冻干该溶液从而得到368g桔梗提取物粉末(DrJ-1)。
将5,000ml乙醇(乙醇酒精)加入到1,000g磨成粉的桔梗根中，接着在水浴中回流提取6小时两次。冷却之后，在室温下将该提取物离心(10,000xg)30分钟从而除去固体物质。离心完成后，减压干燥该溶液从而得到136g桔梗提取物粉末(DrJ-2)。
将5,000ml甲醇加入到1,000g磨成粉的桔梗根中，接着在水浴中回流提取6小时两次。冷却之后，在室温下将该提取物离心(10,000xg)30分钟从而除去固体物质。离心完成后，减压干燥该溶液从而得到205g桔梗提取物粉末(DrJ-3)。
将下表1所示比率的乙醇(乙醇酒精)和水混合物加入到1,000g磨成粉的桔梗根中，并使每种溶液的体积为5,000ml，接着在水浴中回流提取6小时两次。冷却之后，在室温下将该提取物离心(10,000xg)30分钟从而除去固体物质。离心完成后，减压干燥该溶液从而得到如下所示的桔梗提取物粉末。
表1
  样品   水   乙醇酒精   桔梗根提取物量
  DrJ-4   10％   90％   156g
  DrJ-5   25％   75％   175g
  DrJ-6   50％   50％   230g
  DrJ-7   75％   25％   305g
  DrJ-8   90％   10％   356g
实施例2：桔梗根提取物中粗皂甙的分离
制备实施例1：桔梗水提取物中粗皂甙的分离
通过下面描述的方法从实施例1制备的桔梗水提取物(DrJ-1)中分离出粗皂甙。
将100g桔梗水提取物(DrJ-1)溶解在1,000ml水中，将其装在填充有500ml反相凝胶(HP-20，RP-18，或MCI凝胶)的柱子(50250mm)中从而使粗皂甙被吸收。为了除去未被吸收的糖(葡萄糖、山梨糖、果糖、蔗糖和菊粉如果寡糖(fructooligosaccharide))，使1,000ml水和500ml 3～5％的乙腈水溶液流过(running)，并再次使500ml水流过从而除去乙腈。当糖完全除去时，溢出(spilled)足以移去被吸收组分的30～90％乙醇水溶液(500ml)。减压蒸馏该乙醇水溶液。因此，获得7g固体包含物。将50ml乙醇加入到所得固体包含物中，并滤出未溶解在乙醇中的那些。将100ml乙酸乙酯加入到滤液中，然后过滤所产生的固体，并将其干燥从而得到6.5g粗皂甙(DrJ-9)。
制备实施例2：桔梗乙醇提取物中粗皂甙的分离
通过与实施例2中的制备实施例1所述方式相同的方式，从100g实施例1制备的桔梗乙醇(乙醇酒精)提取物(DrJ-2)中分离和纯化出粗皂甙。因此，获得8g粗皂甙(DrJ-10)。
制备实施例3：桔梗甲醇提取物中粗皂甙的分离
通过与实施例2中制备实施例1所述方式相同的方式，从100g实施例1制备的桔梗甲醇提取物(DrJ-3)中分离和纯化出粗皂甙。因此，获得9.8g粗皂甙(DrJ-11)。
实施例3：通过超滤制备桔梗组合物
制备实施例1：制备包含利用超滤膜过滤的来自水提取物的桔梗皂甙 的组合物
Pellicon 2TFF系统(Millipore USA，PART#xi42pm001)用作超滤膜。将100g实施例1中制备的桔梗水提取物(DrJ-1)溶解在18,000ml蒸馏水中，并通过超滤膜(Pellicon 2，100KDa)过滤直至残留体积达到100ml。将另外1,000水加入到该残留中，并通过超滤膜(Pellicon 2，100KDa)过滤直至残留体积到达100ml或更小。减压下浓缩滤液从而得到80g分子量小于100,000的桔梗组合物(DrJ-12)。将70g DrJ-12(分子量小于100,000的桔梗组合物)溶解在16,000ml水中，并按照与上述方式相同的方式通过超滤膜(Pellicon 2，5KDa)过滤。结果，获得24g分子量小于5,000的桔梗组合物(DrJ-13)。将14g DrJ-13(分子量小于5,000的桔梗组合物)溶解在6,000ml水中，并通过超滤膜(Pellicon 2，1KDa)过滤直至残留体积达到100ml。将另外1,000ml水加入到残留物中，并再次通过超滤膜(Pellicon 2，1KDa)过滤直至残留体积达到100ml或更小。将未通过超滤膜(Pellicon 2，1KDa)的最终残留在减压下浓缩从而得到10.4g分子量为1,000～5,000的桔梗组合物(DrJ-14)。
按照与上述方式相同的方式，将100g实施例1中制备的桔梗水提取物(DrJ-1)通过超滤膜(Pellicon 2，100KDa)过滤。将滤液通过超滤膜(Pellicon 2，1KDa)过滤从而得到15.6g分子量为1,000～100,000的桔梗组合物(DrJ-15)。
制备实施例2：制备包含利用超滤膜过滤的来自乙醇提取物的桔梗皂 甙的组合物
按照与实施例3中的制备实施例1所述方式相同的方式，处理实施例1中制备的桔梗乙醇(乙醇酒精)提取物(DrJ-2)。结果，获得30g分子量小于100,000的桔梗组合物(DrJ-16)、19.5g分子量小于5,000的桔梗组合物(DrJ-17)、11.8g分子量为1,000-5,000的桔梗组合物(DrJ-18)，以及10.7g分子量为1,000-100,000的桔梗组合物(DrJ-19)。
制备实施例3：制备利用超滤膜过滤的来自甲醇提取物的桔梗组合物
按照与实施例3中的制备实施例1所述方式相同的方式，处理实施例1中制备的桔梗甲醇提取物(DrJ-3)。结果，获得90g分子量小于100,000的桔梗组合物(DrJ-20)、70g分子量小于5,000的桔梗组合物(DrJ-21)、12.8g分子量为1,000-5,000的桔梗组合物(DrJ-22)，和11.5g分子量为1,000-100,000的桔梗组合物(DrJ-23)。
实施例4：制备包含利用纳米过滤膜过滤的来自水提取物的桔梗皂甙 的组合物
将8g从桔梗水提取物(DrJ-1)获得的DrJ-13溶解在10,000ml蒸馏水中，并使其通过纳米膜(截留分子量为：500，nano Filtration ProcessScale，Low)直至残留体积达到100ml或更小。将另外1,000水加入到该残留中，并使其重复地通过纳米过滤膜(截留分子量为：500，nano FiltrationProcess Scale，Low)直至残留体积达到100ml。在减压下浓缩残留从而得到5g分子量为500～5,000的桔梗组合物(DrJ-24)。
通过与上述方式相同的方式，对分子量小于5,000的DrJ-17(乙醇提取物)和DrJ-24(甲醇提取物)进行纳米过滤，结果获得分子量为500～5,000的桔梗组合物DrJ-25和DrJ-26。
实施例5：桔梗皂甙的分离和纯化
根据先前出版的文献所描述的方法，分离和纯化桔梗皂甙如去芹糖桔梗糖苷E(deapio-platycoside E)、桔梗糖苷E、桔梗皂甙D3、远志皂甙D2、远志皂甙D、桔梗甙酸A、去芹糖桔梗皂甙D2、桔梗皂甙D2、去芹糖桔梗皂甙D、桔梗皂甙D、2″-O-乙酰基-去芹糖远志皂甙D2和2″-O-乙酰基-远志皂甙D2等[Kim，Y.S.等人，Planta Med.71，566-568，(2005)；Choi，Y.H.et al.，Molecules 13(11)，2871-2879，(2008)]。
特别地，将220g实施例1中获得的甲醇提取物悬浮在2.2L蒸馏水中，该提取物吸附在Diaion HP-20柱子(Φ＝5.0*100cm)中，接着用10L蒸馏水洗涤。洗涤之后，用等量的20％甲醇、85％甲醇和甲醇逐步洗脱该柱子，结果获得三种组分(组分#1～组分#3)。将组分#2(用85％甲醇洗脱的)装在装配有RP-18柱的Futecs NS-3000i系统HPLC上从而分离出12种皂甙化合物。此时，使用20mM KH2PO4和26％乙腈作为洗脱缓冲液。该皂甙化合物通过如下的光谱数据识别：化合物#1，去芹糖桔梗糖苷E(Rt 25.18min)；化合物#2，桔梗糖苷E(Rt 26.38min)；化合物#3，桔梗皂甙D3(Rt 35.41min)；化合物#4，远志皂甙D2(Rt 41.28min)；化合物#5，远志皂甙D(Rt 44.06min)；化合物#6，桔梗甙酸A(Rt 49.29min)；化合物#7，去芹糖桔梗皂甙D2(Rt 57.49min)；化合物#8，桔梗皂甙D2(Rt 62.86min)；化合物#9，去芹糖桔梗皂甙D(Rt 62.08min)；化合物#10，桔梗皂甙D(Rt 25.18min)；化合物#11，2″-O-乙酰基-去芹糖远志皂甙D2(Rt 81.13min)；和化合物#12，2″-O-乙酰基-远志皂甙D2(Rt 83.13min)。与此同时，根据参考文献#8中描述的方法，利用重氮甲烷对桔梗甙酸A进行甲基化。结果，获得化合物#13(桔梗甙酸A甲酯)。
[参考文献7]Kim，Y.S.等人，Planta Med.71，566-568，(2005)
[参考文献8]Choi，Y.H.等人，Molecules 13(11)，2871-2879，(2008)
从桔梗根提取物中分离和纯化的皂甙化合物(化合物1～13)的结构在式I和表2中给出。
[式1]
Figure BDA0000071107330000171
在式1中，从桔梗根提取物中分离和纯化的皂甙化合物(化合物1～13)中的R1～R4在表2中示出。
表2
[表2]
Figure BDA0000071107330000181
从桔梗根提取物中分离和纯化的皂甙化合物(化合物1～13)的13C-NMR化学位移(δ)在表3和表4(溶剂：DMSO-d6)中示出。
表3
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13
  碳序号    1   45.3   45.3   45.4   44.3   44.2   46.7   45.4   45.6   45.2   45.2   44.2   44.3   45.8
  2   68.8   68.7   67.2   70.1   70.2   69.6   67.9   70.0   69.2   70.5   70.1   70.3   69.8
  3   88.8   88.8   89.4   83.7   83.9   83.3   89.2   85.4   86.5   86.4   83.9   84.0   84.4
  4   48.2   48.2   48.2   42.9   42.8   56.3   48.1   48.3   48.0   48.1   42.7   42.8   56.1
  5   47.6   47.6   45.9   48.3   48.4   49.6   45.8   48.6   48.0   48.1   48.5   48.5   50.1
  6   19.5   19.4   20.1   18.1   18.1   20.3   19.9   19.9   19.6   19.4   18.0   18.1   20.5
  7   33.5   33.6   34.0   33.5   33.4   33.7   34.0   34.2   33.8   33.6   33.3   33.5   33.7
  8   40.6   40.5   41.2   40.6   40.6   40.0   41.0   41.0   40.7   40.4   40.5   40.6   40.3
  9   45.0   45.0   48.8   48.0   48.0   47.2   48.6   47.7   48.0   47.7   47.9   48.0   47.6
  10   38.0   38.0   38.6   37.2   37.2   37.2   38.5   38.0   37.6   37.6   37.1   37.2   37.4
  11   24.1   24.1   24.7   24.2   24.2   24.4   24.6   24.8   24.2   24.2   24.1   24.2   24.4
  12   123.3   123.1   123.9   123.4   123.4   122.9   123.7   123.7   123.4   123.2   123.4   123.4   123.0
  13   144.7   144.4   145.0   144.4   144.4   144.2   144.8   144.9   144.4   144.3   144.4   144.4   144.4
  14   42.5   42.5   43.1   42.5   42.4   42.2   42.9   43.0   42.5   42.4   42.5   42.5   42.4
  15   36.2   36.1   36.7   36.2   36.2   36.2   36.5   36.7   36.2   36.1   36.1   36.2   36.1
  16   73.9   74.0   73.3   74.2   74.1   73.8   73.2   74.7   74.1   73.9   74.1   74.1   74.1
  17   49.7   49.7   50.4   50.1   50.0   49.5   50.2   50.3   50.1   49.7   50.1   50.1   50.1
  18   41.7   41.6   42.3   41.6   41.6   41.3   42.1   42.1   41.8   41.5   41.5   41.6   41.6
  19   47.2   47.2   47.8   47.2   47.2   47.1   47.7   47.0   47.2   47.1   47.1   47.2   47.2
  20   31.0   31.0   31.0   30.8   30.8   30.6   31.5   31.5   30.8   30.0   30.7   30.8   30.8
  21   36.1   36.1   36.7   36.2   36.2   35.9   36.6   36.6   36.1   36.2   36.1   36.2   36.1
  22   32.2   32.2   32.8   31.3   31.3   31.7   32.6   32.7   31.4   32.2   31.2   31.3   31.4
  23   63.7   63.5   64.3   66.8   66.8   63.5   63.8   64.1   63.9   63.9   66.7   66.8   64.5
  24   67.3   67.3   67.5   14.8   14.8   181.4   67.8   65.9   66.3   66.9   14.7   14.8   175.5
  25   19.2   19.2   19.8   17.8   17.8   16.1   19.6   18.8   18.2   18.4   17.7   17.8   15.8
  26   17.7   17.7   18.3   17.5   17.5   17.4   18.2   18.2   17.7   17.6   17.5   17.5   17.6
  27   27.1   27.1   27.7   27.3   27.3   27.0   27.6   27.7   27.3   27.1   27.3   27.4   27.2
  28   176.1   176.0   176.7   175.8   175.8   175.8   176.5   176.6   175.8   176.2   175.8   175.9   175.8
  29   33.3   33.4   14.0   33.1   33.1   33.3   33.8   33.9   33.1   33.3   33.1   33.1   33.1
  30   24.8   24.8   25.4   25.3   25.2   24.8   25.3   25.3   25.2   24.7   25.3   25.3   25.2
  24-OCH2   51.3
  Glu(内部)
  1   106.1   106.1   106.6   104.9   105.2   106.0   106.6   106.2   106.0   106.3   105.1   105.2   106.3
  2   74.9   74.9   74.5   74.2   75.5   74.8   75.3   74.5   75.3   75.3   75.3   75.4   75.3
  3   78.5   78.4   77.1   88.7   78.5   78.2   77.0   87.6   78.6   78.8   78.4   78.5   78.5
  4   72.3   72.4   72.5   70.1   72.0   71.8   71.6   70.3   72.1   72.8   72.0   72.0   72.0
  5   76.6   76.5   77.1   77.7   77.9   78.2   76.5   78.7   78.2   77.8   77.8   77.9   78.1
  6   70.7   70.4   70.1   62.9   63.0   61.8   69.2   62.8   63.0   63.6   63.0   63.0   63.0
  Glu(中心)
  1   105.0   105.0
  2   75.4   75.4
  78.4   78.5
  4   71.3   71.1
  5   77.2   77.2
  6   70.2   70.2
  Glu(末端)
  1   105.6   105.7   105.5   105.5   105.5   106.1
  2   75.2   75.2   75.5   75.3   74.5   76.0
  3   78.7   78.7   79.2   78.2   79.2   81.1
  4   70.9   71.0   71.9   72.0   71.8   72.2
  5   77.7   77.7   78.5   78.2   78.4   79.2
  6   62.7   62.7   63.2   62.9   63.1   63.1
表4
[表4]
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13
  阿拉伯糖
  1   93.7   93.7   94.3   93.7   93.7   93.4   94.1   94.2   93.7   93.6   93.5   93.5   93.7
  2   75.3   75.3   76.0   75.7   75.7   75.5   75.7   78.4   75.7   75.4   76.2   76.3   75.7
  3   71.6   71.3   71.2   70.2   70.2   70.3   70.8   71.0   70.2   71.9   70.2   70.3   70.1
  4   66.6   66.4   65.9   65.8   65.8   66.2   64.9   65.9   65.9   65.4   65.7   65.8   65.8
  5   63.1   63.1   63.7   62.9   63.0   61.8   63.6   64.0   63.0   62.6   63.0   63.0   63.0
  鼠李糖
  1   101.2   101.2   101.8   101.1   101.1   101.2   101.7   101.8   101.1   101.3   98.3   98.4   101.1
  2   71.9   72.0   72.6   72.0   72.0   71.8   72.6   72.5   72.1   71.6   73.5   73.6   72.0
  3   72.8   72.8   72.6   72.5   72.4   72.3   72.5   73.3   72.5   72.4   70.2   70.3   72.4
  4   84.0   83.6   84.5   83.7   83.7   83.3   84.0   85.4   83.7   83.9   83.4   83.4   83.6
  5   68.6   68.7   69.2   68.7   68.6   68.4   69.1   69.2   68.7   68.6   68.6   68.7   68.7
  6   18.4   18.5   19.1   18.1   18.1   18.4   18.9   19.0   18.2   18.4   18.2   18.3   18.1
  20.7   20.7
  170.3   170.4
  木糖
  1   106.8   106.9   107.3   106.6   106.6   106.2   107.3   107.2   106.7   106.8   106.4   106.5   106.5
  2   76.1   76.1   75.9   75.0   75.0   74.7   76.0   75.8   75.7   75.2   75.0   75.0   75.0
  3   84.8   78.6   85.4   85.6   85.5   85.2   79.1   84.3   78.4   84.8   78.5   85.6   85.5
  4   69.5   71.6   69.4   89.5   69.5   68.9   71.1   70.2   71.0   69.5   69.4   69.5   69.5
  5   67.0   67.5   67.5   66.8   66.8   66.5   66.8   67.0   67.3   66.5   67.2   66.8   66.8
  芹菜糖
  1   111.2   111.8   111.3   111.2   110.8   111.7   111.3   111.3   111.2
  2   77.9   79.1   77.9   77.9   77.8   78.8   77.9   77.9   77.9
  3   80.5   81.2   80.0   80.0   80.1   84.3   80.5   80.0   80.0
  4   75.3   75.8   75.0   75.0   74.3   75.3   75.4   75.0   75.0
  5   65.4   65.9   65.8   65.8   65.1   64.1   64.5   65.8   64.8
实施例6：从桔梗根提取物中获得的粗皂甙的水解
制备实施例1：粗皂甙的酸性水解
将20ml 5％的硫酸水溶液加入到5g实施例2中获得的粗皂甙中，接着回流2小时。然后，室温下冷却该混合物并用1N NaHCO3水溶液中和，接着利用50mL乙酸乙酯提取三次。在减压下浓缩所提取的乙酸乙酯溶液，接着通过RP-18柱色谱(洗脱剂：60～80％甲醇水溶液)分离和纯化，从而得到化合物#14(250mg)、#15(120mg)、#16(375mg)和#17(164mg)。它们的化学结构通过光谱数据鉴定。
制备实施例2：粗皂甙的碱性水解
将5g实施例2中获得的粗皂甙溶解在10ml 2N NaOH水溶液和10ml 50％甲醇水溶液中，接着回流5小时。然后，在室温下冷却该混合物并用1N HCl水溶液中和，接着利用50ml乙酸乙酯提取三次。在减压下浓缩所提取的乙酸乙酯溶液，接着通过RP-18柱色谱(洗脱剂：60～80％甲醇水溶液)分离和纯化，从而得到化合物#18(120mg)和#19(164mg)。它们的化学结构通过光谱数据鉴定。
上面获得的化合物(化合物14～19)的结构在式2和表5中给出。
[式2]
Figure BDA0000071107330000211
在式2中，化学式14～19中的R5～R8在表5中给出。
表5
[表5]
Figure BDA0000071107330000212
化合物14～19的13C-NMR化学位移(δ)在表6中给出(溶剂：DMSO-d6)。
表6
[表6]
Figure BDA0000071107330000221
实验实施例1：在HCV复制子(亚基因组RNA复制子)细胞系中的 HCV RNA复制抑制活性
下面实验研究了，桔梗皂甙组分、桔梗根提取物以及本发明包含它们的组合物和皂甙元及前皂甙元在HCV复制子细胞系中的HCV RNA复制抑制活性。
HCV RNA复制子细胞系的培养
为了筛选能够抑制HCV复制子的化合物，将每种化合物加入到含HCV RNA复制子的Huh-7人肝瘤细胞系中，接着进行培养。然后，对HCVRNA的表达水平进行量化并测量它的抑制活性。本发明使用的HCV复制子来源于HCV-1b丙型肝炎病毒基因，其是由HCV IRES、耐新霉素基因、EMCV(脑心肌炎病毒)IRES组成的双顺反子复制子。HCV非结构蛋白由包含NS3-NS5B和HCV 3’端的序列组成。使含HCV复制子的表达载体接着进行体外转录，并通过电穿孔将所获得的HCV复制子转染到Huh-7细胞中。为了仅选择具有HCV复制子的那些细胞，用含有抗生素G418(500μg/ml)的培养基培养Huh-7细胞。所选的细胞用包含10％FBS、非必需氨基酸和500μg/ml G418的DMEM(Dulbecco改进的Eagle培养基)培养。
化合物在HCV复制子细胞中的HCV RNA复制抑制活性
在37℃、5％CO2下，用含有10％FBS、非必需氨基酸和500μg/mlG418的DMEM将含HCV亚基因组RNA复制子的Huh-7细胞在6孔板(3×105细胞/孔)中培养过夜。用含有2％FBS、非必需氨基酸和500μg/mlG418的DMEM替换每个孔中的培养基。将测试化合物溶解在DMSO中，将其加入到不同浓度的每个孔中，接着在37℃、5％CO2的孵化器中培养72小时。加入等量的DMSO(阴性对照)和干扰素-α(阳性对照)作为对照。在培养完成后，除去每个孔中的培养基，接着用1ml PBS洗涤。向其中加入250μl/孔的胰蛋白酶/EDTA，从该板中分离出细胞，并再次用PBS洗涤从而除去培养基。利用SV总RNA分离系统(Promega公司)从该细胞中分离出总RNA，接着通过利用GeneQuant pro(Amersham bioscience)进行量化。通过RT-PCR研究每种化合物对抗HCV复制子的EC50，并将该结果与对照物的那些进行比较。利用靶向HCV lb NS5B区的引物，通过AccessQuickTM RT-PCR系统(Promega公司)进行RT-PCR。为了获得更准确的EC50值，除RT-PCR之外，还进行实时定量PCR。通过利用逆转录系统(Promega公司)从分离的RNA中获得cDNA，接着通过利用iQ SYBR Green Supermix(Bio-rad)进行实时定量PCR。同时，利用Taqman探头实行一步实时RT-PCR从而研究每种化合物的抑制活性。此时，使用靶向HCV 5′-UTR的引物，并将GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)基因用作校正的参考基因。通过利用iCycler iQ5系统(Bio-rad)进行实时RT-PCR。通过iCycler iQ5光学系统软件(Bio-rad)程序计算EC50值从而确定抑制活性。桔梗皂甙组分、桔梗根提取物和本发明包含它们的组合物以及皂甙元和前皂甙元的HCV复制子抑制活性在表7和表8中给出。
表7
[表7]
桔梗根提取物的HCV RNA复制抑制活性
Figure BDA0000071107330000241
表8
[表8]
桔梗皂甙组分的HCV RNA复制抑制活性
Figure BDA0000071107330000251
实验实施例2：干扰素与桔梗根提取物和桔梗皂甙组分联合疗法的 HCV RNA复制抑制作用
进行下面实验，以便研究与桔梗皂甙组分、桔梗根提取物和包含桔梗皂甙的组合物与干扰素-α的联合疗法的HCV复制抑制作用相关的药物相互作用。
使用与实验实施例1所用相同的HCV亚基因组复制子细胞。使用人干扰素α-A(PBL Biomedical Laboratories)。为了计算桔梗根提取物和干扰素-α的EC50值，将它们加入到不同浓度的HCV复制细胞中，接着按照与实验实施例1所述相同的方式测量EC50。为了研究联合疗法的药物相关作用，将需要浓度的桔梗根提取物和干扰素-α独立或共同治疗HCV复制子细胞，接着在37℃、5％CO2的孵化器中孵化3天～3周。然后，测量HCV复制抑制作用。为了确定联合疗法的药物相互作用，将从联合疗法中观测到的抑制活性与从需要浓度的单独治疗中观测到的结果相比，并通过Chou(Chou，T.C，2006，Theoretical basis，experimental design，and simulation ofsynergism and antagonism in drug combination studies.PharmacologicalReviews.58：621-681)的方法进行计算。药物相互作用表现为协同、相加效应和拮抗效应。桔梗皂甙组分、桔梗根提取物和包含桔梗皂甙组分和干扰素的组合物对HCV复制抑制作用的药物相互作用在表9、10和11中给出。利用CalcuSyn程序(Biosoft)计算药物相互作用的CI(联合指数)值。小于1的CI表示协同效应，约等于1的CI表示相加效应，而大于1的CI表示拮抗效应。用于治疗的桔梗提取物DrJ-14和DrJ-24，以及桔梗粗皂甙DrJ-9浓度为0.94μg/ml、1.88μg/ml、3.75μg/ml、7.50μg/ml、15μg/ml和30μg/ml，并且联合治疗用的干扰素浓度为0.47U/ml、0.94U/ml、1.88U/ml、3.75U/ml、7.5U/ml和15U/ml。在桔梗提取物DrJ-14和DrJ-24，以及桔梗粗皂甙DrJ-19与干扰素的联合治疗实验中，联合治疗被评价为具有协同效应，因为所有的联合指数都表现出低于1的值。
表9
[表9]
桔梗提取物DrJ-14和干扰素的HCV RNA复制抑制作用的协同效应
Figure BDA0000071107330000271
表10
[表10]
桔梗提取物DrJ-24和干扰素的HCV RNA复制抑制作用的协同效应
Figure BDA0000071107330000272
表11
[表11]
桔梗粗皂甙DrJ-9和干扰素的HCV RNA复制抑制作用的协同效应
Figure BDA0000071107330000273
实验实施例3：细胞毒性试验
为了证实桔梗皂甙组分、桔梗根提取物和本发明包含它们的组合物以及皂甙类似物的细胞毒性，用HepG2细胞进行体外MTT测定。结果，桔梗皂甙组分、桔梗根提取物和本发明包含它们的组合物以及皂甙类似物被评价为安全物质，因为它们的评估CC50值远远大于100μg/ml。
本领域技术人员应当理解，前述说明书中公开的概念和具体实施方式容易作为修饰或设计实现本发明相同目的的其它实施例的基础。本领域技术人员还应当理解，此种等效实施例没有脱离所附权利要求中限定的本发明精神和范围。

Claims (16)

1.一种预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，包含选自以下组中的一种或多种活性成分，所述组由利用水、有机溶剂或其混合物提取的桔梗(platycodon grandiflorum)根提取物，和从所述桔梗根提取物中分离的皂甙组分组成。
2.根据权利要求1所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述有机溶剂为10-100％浓度的C1～C4低级醇。
3.根据权利要求1所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述桔梗提取物包括通过用超滤膜过滤溶剂提取的桔梗提取物制得的桔梗提取物。
4.根据权利要求3所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，所述超滤膜截留分子量为100,000、5,000或1,000。
5.根据权利要求3所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，通过用超滤膜过滤制得的所述桔梗提取物的分子量为1,000～100,000或1,000～5,000。
6.根据权利要求3所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述桔梗提取物包括从用超滤膜制得的所述桔梗提取物，通过用截留分子量达到500的纳米过滤膜制备的分子量为500～5000的桔梗提取物。
7.根据权利要求1所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，从所述桔梗根提取物中分离的所述皂甙组分包括由式1表示的皂甙化合物和由式2表示的(前)皂甙元化合物：
[式1]
Figure FDA0000071107320000021
在式1中，
R1是吡喃葡糖基-(1→6)-吡喃葡糖基-(1→6)-吡喃葡糖基
Figure FDA0000071107320000022
龙胆二糖基
Figure FDA0000071107320000023
葡糖基
Figure FDA0000071107320000024
或昆布二糖基
Figure FDA0000071107320000025
R2是CH2OH、CH3、COOH或COOCH3，
R3是H或乙酰基，
R4是H或芹菜糖基
Figure FDA0000071107320000026
[式2]
Figure FDA0000071107320000031
在式2中，
R5是H、葡糖基或昆布二糖基，
R6是CH2OH或CH3，
R7是H，
R6和R7彼此能够通过-CO-连接，
R8是H或CH3。
8.根据权利要求1所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，从所述桔梗根提取物中分离的所述皂甙组分包括通过如下过程获得的桔梗粗皂甙：利用反相凝胶分离桔梗溶剂提取物；将所获得的提取物溶解在乙醇或甲醇中；和用乙酸乙酯使所得物结晶。
9.根据权利要求7所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述由式1表示的皂甙化合物选自由以下物质组成的组：去芹糖桔梗糖苷E、桔梗糖苷E、桔梗皂甙D3、远志皂甙D2、远志皂甙D、桔梗甙酸A、去芹糖桔梗皂甙D2、桔梗皂甙D2、去芹糖桔梗皂甙D、桔梗皂甙D、2″-O-乙酰基-去芹糖远志皂甙D2、2″-O-乙酰基-远志皂甙D2和桔梗甙酸A甲酯。
10.根据权利要求7所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述由式(2)表示的(前)皂甙元化合物选自由以下物质组成的组：桔梗皂甙元、远志酸、桔梗酸A内酯、桔梗酸A内酯3-O-吡喃葡萄糖苷、桔梗皂甙元3-O-吡喃葡萄糖苷28-甲酯和桔梗皂甙元3-O-昆布二糖苷28-甲酯。
11.根据权利要求8或10所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述(前)皂甙元化合物通过水解桔梗粗皂甙制备。
12.根据权利要求1～10中任一项所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述组合物进一步包括一种或多种HCV增殖抑制剂。
13.根据权利要求12所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述HCV增殖抑制剂选自由以下物质组成的组：免疫调节剂、细胞信号调节剂、抗病毒剂、HCV聚合酶(NS5B)抑制剂、HCV蛋白酶(NS3/4A)抑制剂、HCV解旋酶(NS3解旋酶)抑制剂、HCV NS4B抑制剂、HCV NS5A抑制剂、HCV细胞进入抑制剂和HCV组装抑制剂。
14.根据权利要求1～10中任一项所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述组合物进一步包括属于免疫调节剂的干扰素，和利巴韦林。
15.根据权利要求13所述的预防或治疗丙型肝炎的药物组合物，其中，所述免疫调节剂选自由以下物质组成的组：天然干扰素、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、聚乙二醇化干扰素、白蛋白连接的干扰素和细胞因子。
16.一种预防或改善丙型肝炎的保健功能食品，包含选自由以下物质组成的组中的一种或多种活性成分，所述组由利用水、有机溶剂或其混合物提取的桔梗根提取物，和从所述桔梗根提取物中分离的皂甙组分组成。
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