KR20030021072A

KR20030021072A - 간 질병의 예방 및 치료용 간장질환용제

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Publication number: KR20030021072A
Application number: KR1020010054568A
Authority: KR
Inventors: 정혜광; 이경진; 최철웅; 박성준; 김영섭; 정영철; 이영춘; 이성호; 서종권; 김지영
Original assignee: 주식회사 장생도라지
Priority date: 2001-09-05
Filing date: 2001-09-05
Publication date: 2003-03-12

Abstract

본 발명은 장생도라지를 주약으로 하는 한방제제들의 간 손상 보호효과에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 간 손상을 주는 대표적으로 알려진 물질, 아세트아미노펜이나 사염화 탄소에 의한 간세포 손상이 장길에 의해 회복됨을 혈청 내 효소들(ALT, AST)과 간세포내 지질과산화 수준 그리고, 간세포의 조직학적인 관찰을 통해 확인하였다. 또한 이러한 간손상 방어효과는 농도에 의존적으로 나타남을 조사하였다. 또한 장길의 간 회복 기작을 사이토크롬 P450의 효소들과 글루타치온 결손효과를 통해 조사한 결과로 먼저 마이크로좀내 P450 1A1/2 와 P450 2E1의 효소활성이 장길에 의해 농도 의존적으로 감소를 확인할 수 있었으며, 이는 아세트아미노펜이나 사염화 탄소에 의한 아세틸-파라-벤조퀴논 이민의 생성이 감소하여 간 독성을 저해하며, 이에 의하여 글루타치온의 농도도 감소함을 알 수 있었다. 이처럼 장길이 간세포내 지질과산화 현상을 억제하고, 외부의 물질들을 대사작용하는 P450의 효소들 (1A1/2, 2B, 2E1)을 억제하여 간 독성물질의 생성을 방지함으로서 간세포 독성, 간염, 간지질 과산화, 간경화 (섬유 증식) 등과 같은 질병의 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

간 질병의 예방 및 치료용 간장질환용제{Pharmaceutical composition for prevention and treatment of disease causing}

본 발명은 장생도라지(長桔) 추출물을 주약으로 하는 한방제제들의 간 손상 보호효과에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는, 장생도라지의 열수 또는 유기용매 추출물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하여 외부 물질이나 바이러스 감염에 의해 발생되는 간 질병을 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 생산하여 간 독성물질의 생성을 방지함으로서 간세포 독성, 간염, 간지질 과산화, 간경화 (섬유 증식) 등과 같은 질병의 예방 및 치료제에 관한 것이다.

일반적으로 도라지 (길경Platycodon grandiflorumA. DC)는 배농, 거담, 기관지염, 천식 등의 호흡기계질환에 사용되어온 생약재로서, 도라지가 배합되어 있는 한방 처방의 수가 동의보감에 273건, 방약합편에 49건에 이를 정도로 다양한 약리작용을 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 도라지의 주요 약리성분은 테르펜계 사포닌이며, 이 약리성분은 동물실험을 통하여 진해, 거담작용, 중추신경억제작용 (진정, 진통, 해열효과), 급·만성 염증에 대한 항염증작용, 항궤양 및 위액분비억제작용, 혈관을 확장하여 혈압을 낮추는 항콜린작용, 혈당강하작용, 콜레스테롤 대사 개선작용 등이 있는 것으로 밝혀져 있다 (Chem. Pharm. Bull.,20, 1952(1972),Chem. Pharm. Bull.,23, 2965(1975),J. Chem. Soc., Perkin trans I, 661(1984),Sogoigaku,3, 1(1951),J. Pharm. Soc. Kor., 19, 164(1975)). 이외에도 도라지의 열수 및 에탄올 추출물은 곰팡이의 아프라톡신을 억제하며, 이눌린 분획은 식균작용과 고형암 및 복수암에 대한 강력한 항종양효능이 있고, 40% 도라지엑기스는 알코올흡수 억제작용이 있는 것으로 알려져 있다 (Mycopathologia,66,16(1979),Shoyakugaku Zasshi,40, 367(1986),Shoyakugaku Zasshi, 40, 375(1986), JP60-89427(1985), JP平3-264534(1991)).

이러한 도라지의 다양한 약리작용에도 불구하고 장기간 재배에 어려움이 있어 개발이 쉽지 않았으나 최근에는 20년 이상의 도라지를 재배할 수 있는 기술이 개발되어 다량 생산이 가능해졌기에 (이성호, "다년생도라지재배법", 대한민국 특허 제 045731호) 이를 이용한 연구가 활발히 진행되고 있다. 현재까지 장생도라지에 관한 연구는 항당뇨효과에 관한 실험(J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 25, 986(1996)), 고지혈증에 관한 실험 (J. Nur. Sci. Vitaminol, 41, 485(1995)), 항암 및 면역질환에 관한 실험 (J. Pharmaceutical Society of Japan 93 (1973) 1188-1194.) 등이 있으며, 간예방 및 손상억제에 대한 연구 등이 계속되고 있다.

아세트아미노펜 (Acetaminophen, APAP)는 진통제로서 널리 알려져 있는 물질로서, 고농도로 처리시 간의 손상을 가져오며 (Drug Metab. Rev. 24 (1992) 367-407.), 사염화 탄소 (CCl4)도 역시 간의 마이크로좀내 사이토크롬 P450에 의해서 트리클로로메틸 프리 레디칼을 생성함으로서 세포독성을 일으킨다고 보고되었다 (Toxicology 112, 131-140.). 아세트아미노펜이나 사염화탄소는 대부분은 체내에서 글루코나이드(gluconide)나 설페이트 (sulfate)와 결합하여 배출된다. 그리고 일부는 사이토크롬 P450 효소들에 의해 아세틸벤조퀴논 이민 (N-acetyl-p-benzoquinone imine)이 생성된다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 1327-1331.). 정상 상태하에서는 간내의 글루타치온 (Glutathion)과 결합하여 효과적으로 독성을 억제한다(Drug Metab. Rev. 13 (1982) 539-553. Ther. 187 (1973) 185-194. Pharmacol. Exp. Ther. 187 (1973) 211-217. ). 그러나 고농도로 투여시 글루코나이드나 설페이트가 포화되고, 사이토크롬 P450 효소들에 의해 아세틸벤조퀴논 이민 생성이 증가하게 되며, 이는 간내 글루타치온과 결합함으로서 빠르게 글루타치온의 양이 줄어된다. 더불어 글루타치온과 결합하지 못한 아세틸벤조퀴논 이민은 세포 내 거대분자와 결합하게 되고, 세포막의 지질과산화를 일으키며, 또한 세포내 칼슘의 조절을 방해하여 세포를 죽게하는 결과를 초래한다(Pharmacol. Exp. Ther. 187 (1973) 211-217. Metab. Rev. 24 (1992) 367-407 Drug Metab. Rev. 29 (1997) 59-77.).

본 발명은 상기한 문제점을 해결하기 위해 안출한 것으로서, 안전하고 독성이 없는 장생도라지 천연물로부터 간경화나 간질병을 치료하기 위한 제제를 찾던 중 장생도라지의 열수 및 유기용매 추출물이 간내 사이토크롬 P50 효소들의 발현을 억제함으로서 간내 독성물질인 아세틸벤조퀴논 이민 생성을 감소시킴으로써 간독성을 억제하는 간 질병의 예방 및 치료용 간장질환용제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

도 1은 본 발명인 간 질병의 예방 및 치료용 간장질환용제에 대한 장생도라지 추출물들이 간 손상 유발물질 (아세트아미노펜, 사염화탄소)에 의해 손상된 간의 보호효과를 처리 농도에 따라 나타낸 그래프다.

상기 목적은 본 발명에 따라, 장생도라지에서 추출한 추출물과 담체를 혼합하여 제조된 조성물에 있어서, 외부물질이나 바이러스 감염에 의해 발생되는 간질병의 예방 및 치료작용을 약효성분으로 갖는 상기 조성물로 이루어진 간 질병의 예방 및 치료용 간장질환 용제에 의해 달성된다.

본 발명인 간 질병의 예방 및 치료용 간장질환용제는 약제학적 장생도라지 추출물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 사용되는 장생도라지 추출물은 이 분야에서 통상적으로 사용되는 방법에 따라 제조된다.

상기 장생도라지 추출물은 통상 열수 추출물 또는 유기용매 추출물을 들 수 있으며, 이러한 추출물들은 단독으로 또는 허용가능한 생약재를 첨가하여 제조될 수 있다. 일반적으로 장생도라지 분말은 수분의 함량이 5% 이하가 되도록 장생도라지를 건조하고 이를 분쇄한 다음, 입자 크기가 0.6㎜ 이하인 것을 선별하여 사용된다. 열수추출물은 장생도라지 분말에 약 5∼10 배의 물을 첨가하고 90∼100℃의 온도에서 4∼6시간동안 2회 추출하여 얻은 여과액을 그대로 사용하거나 허용 가능한생약재 또는 생약재 추출물을 선택적으로 첨가하여 사용한다. 유기용매 추출물은 장생도라지 분말에 약3배의 유기용매를 첨가하고 실온에서 2회 추출하여 얻어진 여과액을 감압 농축하여 사용한다. 유기 용매로는 에탄올이 바람직하게 사용될 수 있다. 본 발명의 장생도라지 추출물은 통상적인 방법에 따라 약학 제형을 제조할 수 있다. 제형의 제조에 있어, 활성 성분인 장생도라지 추출물을 담체와 함께 혼합 또는 희석하거나, 용기 형태의 담체내에 봉입시키는 것이 바람직하다. 담체가 희석제로 사용되는 경우에는 활성 성분에 대한 비히클 (Vehicle), 부형제 또는 메디움 (Medium)으로 작용하는 고형, 반고형 또는 액상의 물질일 수 있다. 따라서, 제형은 정제, 환제, 분제, 새세이, 엘릭시르, 현탁제, 유제, 용액제, 시럽제, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀제, 멸균 주사제, 멸균 분제 등의 형태일 수 있다. 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제형은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 사람의 경우, 통상적인 1일 투여량은 10 내지 1,000 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 10 내지 100 ㎎/㎏ 체중의 범위일 수 있고, 1회 또는 수회로나누어 투여할 수 있다.

그러나, 실제 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 건강상태 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 한다. 이하에서 본 발명을 실시 예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시 예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이로써 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 : 장생도라지 열수 추출물의 제조

장생도라지 분말 0.2kg에 증류수 2ℓ를 가하고 90-95℃에서 5시간동안 2회 추출한후 여과하고 이를 동결건조해서 장생도라지 추출물 100g을 얻었다.

실시예 2 : 실험 동물 및 처리

1. 시약

시약은 다음의 것을 구입하여 사용하였다.

아세트아미노펜 (Acetaminophen, APAP), 사염화 탄소 (CCl₄), 올리브유, 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 (ALT)와 아스파레이트 아미노 트렌스퍼라제 (AST) 키트, 치오바비토릭산(Thiobarbituric acid, TBA), 엘-에스코빅 산 (L-ascorbic acid), 크산틴 (Xanthin), 크산틴 옥시데이스 (Xanthin oxidase), 피러스 설페이트 (Ferrous sulfate), 하이드로젠 퍼옥사이드 (Hydrogen peroxide), 페닐메톡실설포닐 플로라이드와 글루타치온 (GSH)은 시그마사 (Sigma chemical co)에서 구입하였다.

2. 동물

시험동물은 생후 8주된 25∼30g의 실험용 마우스 (ICR mouse)를 사용하였고, 사료 (purina korea)와 물은 자유롭게 섭취하도록 하였으며, 사육장의 온도는 21∼24℃, 상대습도는 40∼80%로 유지하였다. 또한 12 시간마다 낮과 밤이 반복되도록 사육장내 빛을 조절하였다.

실시예 3 : 간 독성을 일으키는 물질에 대한 장길의 간보호 효과

1. 장길 투여 및 화학물질들에 의한 간손상 유발

실험 동물 (ICR Mouse)에 장길을 100, 50, 10 mg/kg으로 녹여 3일 동안 경구 투여하였다. 대조군은 생리 식염수만을 경구 투여하였다. 장길을 전처리 한 후 아세트아미노펜 (APAP, 400 mg/kg)과 사염화 탄소 (CCl_4,18 mg/kg)를 복강투여하여 인위적인 간 손상을 유발시킨 다음, 18시간 지난 후에 생쥐를 에탄올로 마취 후 혈액과 간을 채취하였다.

2. 혈액 내 알라닌 아미노 트랜스퍼라제와 아스파레이트 아미노 트렌스퍼라제 활성도 측정

간 손상시 혈액으로 유리되어 나오는 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 와 아스파레이트 아미노 트렌스퍼라제 활성도 양을 라이만 플랭클린 (Reitman - Frankel) 방법에 준하여 측정하였다. 간략히 설명하면, 처리 후 18시간 후에 심장으로부터 채취한 혈청을 기질액과 37℃에서 30분 동안 반응시켜 피루빅산 (pyruvate)을 생성시킨 후, 발색액을 넣고, 20분 후 0.4 N-수산화 나트륨 (NaOH)을 섞어서 동정색의 발색이 되면 505 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 표 1과 같다.

[표 1]

구 분	대조군	아세트 아미노펜 (APAP)	사염화 탄소 (CCl₄)
장길 (mg/kg)	대조군	0	10	50	100	0	10	50	100
혈청 ALT (U/liter)	35±4	2175±221	1613±172	627±75	61±6	3862±736	3126±339	834±92	321±49
혈청 AST(U/liter)	26±3	1472±151	1021±103	524±61	41±5	1811±187	1091±123	467±58	366±41

이 표에서 알 수 있듯이 아세트아미노펜과 사염화 탄소에 의한 간 손상으로 간 세포에서 혈청으로 유리된 알라닌 아미노트랜스퍼라제 와 아스파레이트아미노 트렌스퍼라제 활성도를 측정한 결과 장길을 전 처리한 군들은 아세트아미노펜과 사염화 탄소만을 전 처리한군에 비해 처리 농도에 의존적으로 활성이 감소하였으며 특히 장길의 100 mg/kg을 전 처리한 군에서는 대조군과 유사한 활성도를 나타내었다.

3. 간장의 지질과산화측정

아세트아미노펜 및 사염화 탄소에 의하여 생성된 지질과산화에 대한 장길 (CK)의 간손상 방지효과를 확인하기 위해 간 100 mg을 10 ml의 완충액 (Tris-HCl)에 넣은 후 분쇄기 (homogenizer)로 부순 다음 과산화 지질의 분해 생성물인 말론디알데하이드 (malon- dialdehyde, MDA) 와 치오바비토릭산 (2-Thiobarbituric acid, TBA)을 100℃에서 20분간 가열 반응시켜 생긴 치오바비토릭산 색소를 532 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과를 표 2에 나타내었다.

[표2]

구 분	대조군	아세트 아미노펜 (APAP)	사염화 탄소 (CCl₄)
장길 (mg/kg)	대조군	0	10	50	100	0	10	50	100
간지질과산화(MDA, nmol/g)	3.1±0.4	8.6±0.9	6.1±0.7	4.1±0.4	3.6±0.4	10.5±0.9	8.1±0.7	5.4±0.6	4.8±0.4

위 표에서 알수 있듯이, 산화 스트레스에 의한 간독성 방어 기작을 확인하기 위해 지질 과산화 수준을 측정한 결과느 장길을 전처리한 군들이 아세트아미노펜 및 사염화 탄소만을 처리한 군에 비해 농도 의존적으로 감소 하였으며, 100 mg/kg 전 처리한 경우 대조군의 지질과산화 정도와 유사하게 측정되었다.

4. 조직학적 관찰

간을 10% 고정용액 (neutral buffered formalin: NBF)에 12시간 고정하였다. 고정이 끝난 조직에서 고정액을 제거하기 위하여 1시간 동안 흐르는 물에 세척한 후 저농도에서 고농도 (70-100%) 에탄올 (ethanol) 과정을 거쳐 탈수하였다. 자일렌(Xylene)으로 알콜을 제거한 후 조직을 투명화하여 파라핀을 침투시켜 포매하였다. 조직의 이탈을 방지하기 위하여 폴리-엘- 라이신(poly-L-lysine, Sigma Chem., Chembio., Co., Seoul)을 슬라이드에 도말 건조시켰다. 박편절단기 (Microtome, Lipshow)를 사용하여 4㎛로 박절한 후 핵과 세포질을 관찰하기 위하여 슬라이드를 자이렌에 넣어 파라핀을 제거한 후 알콜과정을 거쳐 물에 세척한 후 헤마톡실린 (hematoxylin)에 5분동안 핵을 염색한 후, 1% 염산 -알콜 (HCl-alcohol)에 탈색시키고, 흐르는 물에 10분동안 방치하였다. 그 후 에오신으로 2분간 세포질을 염색한 후 알콜과정을 거쳐 탈수시켰으며, 자일렌에서 투명시킨 후 봉입제 (Canada Balsam, Wako)로 봉입한 후 광학현미경 (Zeiss; Axioscope)을 사용하여 100배에서관찰하였다.

그 결과는 그림 2에 나타내었다.

[그림 1]

위 그림 2에서 알 수 있듯이, 대조군의 경우 정상 간 세포들이 고르게 분포하였으며, 형태적인 이상도 관찰되지 않았다. 그러나 아세트 아미노펜만을 투여한 군에서는 대조군에 비해 50-60%의 간 손상이 나타났으며, 재복구 (Regeneration) 세포와 괴사 (Necrosis) 세포들이 중앙 관 형성지역에 많이 나타났다. 10mg/kg의 장길을 전 처리한 경우는 아세트아미노펜만 처리한 군에 비하여 40-50% 간 세포 손상이 감소함을 관찰할 수 있었고, 50mg/kg의 장길을 전 처리한 경우는 아세트아미노펜만 처리한 군에 비하여 80-90% 간 세포 손상이 감소함을 관찰할 수 있었으며, 100mg/kg의 장길을 전 처리한 경우는 대조군과 유사하게 간 세포들이 복구 되었음을 관찰할 수 있었다.

실시예 4 : 간 손상물질에 의해 감소된 글루타치온 (Glutathion, GSH) 양 회복

적출한 간을 증류수로 씻은 후에 잠시 말렸다가 무게를 잰 다음 간의 일부분을 사용하여 글루타치온양을 측정한다. 그 방법으로는 적출한 간 100 mg을 0.02M EDTA에 넣은 후 분쇄기 (Homogneizer)를 이용하여 조직을 부순다. 이 수용액을 12000 rpm에서 30분간 원심분리한 후 상등액 100ul 만 취한다. 이 상등액에 1.8 ml 포스페이트-이디티에이 (phospate -EDTA) 완충액과 프탈이알데하이드 (O-Phthaldiadehyde) 100 ul를 넣은 후 15분 후에 플로로메타 (Flourometer)로 412nm에서 흡광도를 측정한다.

그 결과는 그림 3 가, 나로 나타내었다.

[그림 2 가]

[그림 2 나]

위 그림 2 가와 나에서 알 수 있듯이, 장길이 간 조직내에서 아세트아미노펜 및 사염화 탄소 해독작용으로 소실된 글루타치온 결손양을 회복시킴을 확인하기 위해 간 조직내 글루타치온(GSH) 양을 측정한 결과는 장길 (CK)을 전처리 한 군들이 아세트 아미노펜 및 사염화 탄소만을 처리한 군에 비해 농도 의존적으로 증가하였으며, 장길 100 mg/kg을 전 처리한 경우 대조군의 글루타치온양과 유사하게 측정되었다.

실시예 5 : 간독성 유발물질의 대사활성에 관련된 사이토크롬 P450 (cytochrome P450) 약물대사 효소활성도 변화 조사

1. 인비트로 (In vitro)실험을 위한 실험동물 처리

P450 효소를 증가시키기 위해서 3일간 P450 1A1/2 유도체인 메칠콜란스렌 (3-methycholanthrene)과 P450 2E1 유도체인 피리딘 (pyridine)을 먹였다. 4일째, 생쥐를 마취하에 희생시킨 후, 간을 적출하여 사용시까지 -80℃에서 보관하였다.

2. EROD와 PROD 활성도 측정

0.1 M 포타슘포스페이트 (Potassium Phosphate, pH 7.4)에 2 mg/ml의 소혈청 단백질(bovine serum albumin), 10㎛ 디코마롤 (Dicoumarol), NADPH 재생계 (degeneration system) (5 mM 글루코스-6 포스페이트, 5 unit/ml 글루코스-6-포스페이트 디하이드로제나), 10㎛ NADPH, 2.5㎛ 에톡실레졸루핀 (7-ethoxyresorufin)과 마이크로좀 (Microsome) 시료를 혼합한 후에 37℃에서 20분간 반응시켰다. 반응 후 형성된 레졸루핀 (resorufin)은 발광 (excitaion) 파장 550 nm, 방출 (emission) 파장 585 nm에서의 플로로센스를 측정했다. 마이크로좀 시료내의 단백질의 농도는 로리 등의 방법으로 결정했다 (Lowry 등.,1951). PROD 효소 활성도는위의 EROD 측정과 동일하게 실시하였으며, 에톡실레졸루핀 대신 펜톡실레졸루핀 (7-Pentoxyresorufin)을 가하여 측정했다.

3. 아닐린 하이드록실레이제 (Aniline hydroxylase) 활성도 측정

P450 2E1과 관련이 있는 아닐린 하이드록실레이제 (aniline hydroxylase)의 측정은 기질로 아닐린을 사용하여 생성된 하이드로실 아닐린 (4-hydroxy aniline)의 양을 630 nm에서 흡광도를 측정함으로써 정량했다. 간단히 기술하면 아닐린 (5-20 mM)과 10 uM NADPH, NADPH 재생산 시스템 (regenerating system) 및 마이크로좀 시료를 0.1 M 포타슘포스페이트 완충액 (potassium phosphate buffer, pH 7.4)에 혼합한 후 37 ℃ 항온 수조 (shacking water incubator)에서 20 min동안 반응시킨 다음 20% TCA를 가하여 반응을 종결시켰고 5% 페놀과 2.5 N 수산화나트륨 (NaOH)을 가하여 혼합한 다음, 2.5 N 탄산나트륨 (Na₂CO₃)를 가하여 30분 동안 실온에서 방치하면서 발색시켰다. 630 nm에서 흡광도를 측정하고 하이드로실 아닐린 (4-hydroxyaniline) 검량선으로부터 활성도를 계산했다.

[표 3]

구 분	대조군	장길 (mg/ml)
구 분	대조군	2	5	10
MROD	5.89±0.60	5.34±0.55	3.47±0.35	1.62±0.17
PNPH	4.78±0.48	2.97±0.31	1.92±0.21	1.44±0.15
AH	12.62±1.23	7.62±0.81	5.21±0.53	4.43±0.42

위의 표 3에서 알 수 있듯이, P450 1A1/2 및 P450 2E1에 각각 특이적인 EROD (ethoxyresorufin O-deethylase), AH (aniline hydroxylase), PROD (pentoxyresolufin O-dealkylase) 활성도는 장길의 처리농도에 비례하여 감소하였다.

이러한 결과를 종합해 볼 때, 아세트아미노펜이나 사염화 탄소에 의해 손상받은 간세포 손상이 장길에 의해 회복됨을 혈청 내 효소들(ALT, AST)과 간세포내 지질과산화 수준 그리고, 간세포의 조직학적인 관찰을 통해 확인하였다. 또한 이러한 간손상 방어효과는 농도에 의존적으로 나타남을 조사하였다.

이러한 아세트아미노펜이나 사염화 탄소는 간 내의 물질 대사계 중 사이토크롬 P450의 효소들에 의하여 아세틸-파라-벤조퀴논 이민 (N-acetyl-p-benzoquinone imine, NAPQI)이 생성되고, 이 물질이 단백질과 DNA와 결합하여 세포독성을 나타낸다. 이러한 대사경로를 기초로 하여 장길의 회복 기작을 사이토크롬 P450의 효소들과 글루타치온 결손효과를 조사 한 결과로 먼저 마이크로좀내 P450 1A1/2 와 P450 2E1의 효소활성이 장길에 의해 농도의존적으로 감소를 확인할 수 있었으며, 이는 아세트아미노펜이나 사염화 탄소에 의한 아세틸벤조퀴논 이민이 생성이 감소하여 간 독성을 저해한다고 추정할 수 있다.

이와는 별도의 해독과정으로는 글루타치온이 아세틸벤조퀴논 이민과 결합하여 해독하는 과정이 있다. 장길의 경우는 글루타치온의 양의 변화와는 상관이 없으며, 글루타치온을 생성하게 하는 글루타치온-S-트렌스퍼라제의 활성에도 별다른 영향을 주지 않았다. 다만, P450 1A1/2 와 P450 2E1의 효소활성의 저해로 아세틸벤조퀴논 이민생성이 저해되고, 글루타치온과 아세틸-파라-벤조퀴논 이민 결합이 줄어듬으로서 간에 존재하는 글루타치온의 양의 결손을 줄임을 관찰 할 수 있었다. 그러나, 장길이 직접적으로 아세트아미노펜이나 사염화 탄소과 결합을 하여 간 내글루타치온의 결손을 줄이거나 글루크로나이드(Glucuronide)나 설페이트(Sulfate) 결합과 같이 아세트아미노펜이나 사염화 탄소가 직접적으로 제거되는 다른 기작에 대해서는 아직 밝혀진 바가 없으며, 좀 더 많은 연구가 필요하다.

이와 같이 본 발명의 장생도라지 추출물은 아세트아미노펜이나 사염화 탄소와 같은 외부물질이나 바이러스 감염에 의해 발생되는 간질병을 예방 및 치료하기 위한 생물학적 조절제로소 임상적으로 유용하게 사용할 수 있을 것이다.

상술한 바와 같이 장생도라지 추출물을 포함하는 본 발명에 따른 간 질병의 예방 및 치료용 간장질환용제는 외부 물질이나 바이러스 감염에 의해 발생되는 간질병을 예방 및 치료제로서 유용한 매우 훌륭한 발명이다.

Claims

장생도라지에서 추출한 추출물과 담체를 혼합하여 제조된 조성물에 있어서,

외부물질이나 바이러스 감염에 의해 발생되는 간질병의 예방 및 치료작용을 약효성분으로 갖는 상기 조성물로 이루어진 간 질병의 예방 및 치료용 간장질환 용제.