CN1397560A - 从桔梗中提取桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷d的方法及其医药新用途和中药制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从桔梗中提取桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D的方法及其医药用途和中药制剂。将中药桔梗用乙醇提取，或用水提取乙醇沉淀纯化，再经D101大孔吸附树脂柱纯化干燥得桔梗总皂苷。上述得到的桔梗总皂苷在中低压柱层析上分离，用硅胶薄层鉴定，相同Rf值斑点的流分合并，(其中最大的斑点为桔梗皂苷D)，挥去溶剂，得单体桔梗皂苷D(Platycodin D)。本发明的桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D可用于制备治疗和预防高血糖症和由糖尿病引起的并发症等疾病的药物。本发明可以根据需要制成口服、直肠给药、肌肉注射等给药方式用于治疗和预防糖尿病。

Description

从桔梗中提取桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D的方法 及其医药新用途和中药制剂

技术领域：

本发明公开了一种从药桔梗中提取的总皂苷和单体桔梗皂苷D的方法。同时也公开了桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D的医药新用途及其中药制剂，属于中药有效成分提取制备方法及其医药新用途技术领域。

背景技术：

桔梗[Platycodon grandflorum(Jacq.)A.DC.]是最常用中药之一，中医常用来治疗各种咳嗽痰多、胸闷不畅、及感冒咽痛等疾病。现代药理研究表明桔梗还具有明显的抗炎和抑制胃酸分泌和抗溃疡作用，也具有降低大鼠胆固醇的作用。用中药桔梗为原料，大量制备桔梗总皂苷和单体皂苷D并制成降血糖药物用于糖尿病的预防和治疗至今未见报道。

发明内容：

本发明公开了一种从桔梗中制备大量桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D的方法，这种提取方法适用于工业化生产。

本发明的另一目的是提供将桔梗总皂苷制备成新的药物的方法并用于高血糖症的预防和治疗。

本发明的技术解决方案包括以下几个步骤：

1.桔梗总皂苷的提取：取中药桔梗药材制成常规的饮片，用3～8倍量的60～95％的乙醇提取三次，或用水提取95％乙醇沉淀的方法提取，提取液用2％的药用活性碳脱色，过滤，回收乙醇，再用去离子水适当稀释，过滤，经D101大孔吸附树脂柱纯化，先用去离子水洗近无色，再用60～95％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液干燥得桔梗总皂苷。

2.单体桔梗皂苷D的制备：上述得到的桔梗总皂苷，用甲醇溶解，过滤，加桔梗总皂苷重量的6～12倍量的层析硅胶G混合均匀，干燥，在中低压柱层析上分离，用正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上层为展开剂进行分离。用硅胶薄层鉴定，相同Rf值斑点的流分合并，(其中最大的斑点为桔梗皂苷D)，挥去溶剂，得单体桔梗皂苷D(Platycodin D)。

本发明制备桔梗总皂苷经D101大孔吸附树脂柱纯化乙醇洗脱浓度优选含有50％-95％的乙醇。

本发明制备桔梗皂苷经D101大孔吸附树脂柱纯化乙醇洗脱浓度优选最好含有85％乙醇和15％的水。

本发明的降血糖药物优选含有1％-99％的桔梗总皂苷或单体桔梗皂苷D和99％-1％的药用赋形剂。

本发明的降血糖药物优选含有10％-90％的桔梗总皂苷或单体桔梗皂苷D和90％-10％的药用赋形剂。

本发明的降血糖药物优选含有30％-80％的桔梗总皂苷或桔梗单体皂苷D和70％-20％的药用赋形剂。

本发明的降血糖药物最好优选含有60％-70％的桔梗总皂苷或单体桔梗皂苷D和40％-60％的赋形剂。

本发明的桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D作为药物制剂含有治疗有效量的提取物为活性成分，以及含有一种或多种药学上允许的药物载体。

本发明的提取物桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D可用于治疗和预防糖尿病药物的制备。

本发明可以根据需要制成口服、直肠给药、肌肉注射等给药方式用于治疗和预防糖尿病。按药剂学领域的常规生产方法制成各种剂型，如片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、栓剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂。也可将其活性成分与一种或多种载体或药物混合，制成所需剂型。

上文的载体是指药剂学常规应用的载体，其中包括：防腐剂、矫味剂、稀释剂、崩解剂、吸附剂、着色剂、赋形剂等。

本发明的药物对人的用药剂量可根据年龄、体重和糖尿病的类型及病情的严重程度而确定，安全有效剂量为20-100mg/人/次，由以下试验得到验证。

桔梗总皂苷的药理作用：

摘要在5、10、20mg/kg剂量下，多次灌服桔梗总皂苷对肾上腺素、葡萄糖、链脲佐菌素和四氧嘧啶引起的高血糖均有明显的降低作用，且有明显的量效关系。但对动物正常血糖却无明显影响。

目的  桔梗总皂苷为吉林天药科技股份有限公司研制的治疗糖尿病的新药，为在实验动物身上验证其疗效，我们对其主要药效学进行了研究。现报告如下：

药物桔梗总皂苷由吉林天药科技股份有限公司提供，为淡黄色粉末，批号：20010617，桔梗皂苷D也由吉林天药科技股份有限公司提供。糖尿乐胶囊由吉林省东丰药业股份有限公司出品，规格：0.3g/粒，批号：20010301。实验时用蒸馏水配成所需浓度。链脲佐菌素和四氧嘧啶均为Sigma公司产品。

动物  昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄兼用，动物质量合格证编号为：10-5113；Wistar大鼠，雄性，体重210-230g，动物质量合格证编号为：10-5112，以上动物均由中国人民解放军农牧大学实验动物中心提供。

统计结果均经“t”检验，结果以 X±SD表示。

试验结果

1.1桔梗总皂苷对小鼠正常血糖的影响

取雌雄各半小鼠50只，按体重随机分为5组，分别为空白对照组(10ml/kg)，糖尿乐胶囊组(2g/kg)，桔梗总皂苷三个剂量组(20、10和5mg/kg)，于7日内每天灌胃给药一次，灌胃体积均为10ml/kg，末次给药后1小时，小鼠眶静脉取血，用葡萄糖氧化酶法测血糖。结果表明桔梗总皂苷对小鼠正常血糖无明显影响。上述各组动物血糖平均值分别为6.14±1.295；6.27±1.495；6.05±1.623；5.87±2.101；6.88±1.450mmol/L。

1.2桔梗总皂苷对葡萄糖引起小鼠高血糖的影响

取雌雄各半小鼠180只，按体重随机分为6组，分别为空白对照组(10ml/kg水)，模型对照组(10ml/kg水)，糖尿乐胶囊组(2g/kg)，桔梗总皂苷三个剂量组(20、10和5mg/kg)，于7日内每天灌胃给药一次，灌胃体积均为10ml/kg，末次给药前禁食5小时，末次给药1小时后，除空白对照组外，其余各组均腹腔注射葡萄糖2g/kg，分别于注射葡萄糖后0.5、1和2小时，将每组动物处死10只(雌雄各半)，取血，以葡萄糖氧化酶法测血糖。结果表明：桔梗总皂苷在注射葡萄糖后0.5和1小时可明显降低葡萄糖引起的高血糖。见表1表1  桔梗总皂苷对葡萄糖引起小鼠高血糖的影响(X±SD)组别       剂量     动物数                  血糖值(mmol/L)

          mg/kg     (只)          0.5h           1h             2h正常对照组    -         10        4.89±1.235    3.61±0.767    3.50±0.744模型对照组    -         10        11.5±3.329    9.48±2.168    5.35±1.560糖尿乐胶囊    2g/kg     10        7.54±3.027^*  7.27±2.134^*  4.91±0.881桔梗总皂苷    20        10        7.75±2.530^*  6.89±2.494^*  5.14±1.290

          10        10        8.10±2.395^*  7.50±1.323^*  4.87±1.464

          5         10        9.93±2.105    7.23±1.400^*  4.89±0.956

注：*P＜0.05；**P＜0.01

1.3桔梗总皂苷对肾上腺素引起小鼠高血糖的影响

分组与给药同实验二。不同之处为末次给药(不禁食)1小时后，除空白对照组外，其余各组均腹腔注射肾上腺素250ug/kg，分别于注射肾上腺素后0.5、1和2小时，将每组动物处死10只(雌雄各半)，取血，以葡萄糖氧化酶法测血糖。结果表明：桔梗总皂苷在所观察时间范围内均可明显降低肾上腺素引起的高血糖，尤以0.5小时作用最为显著，见表2。

表2桔梗总皂苷对肾上腺素引起小鼠高血糖的影响( X±S)

组别	剂量	动物数	血糖值(mmol/L)
							mg/kg	(只)	0.5h	1h	2h
正常对照组	-	10	4.38±0.934	4.66±0.785	4.48±1.119
						模型对照组	-	10	9.35±1.686	8.33±2.570	6.90±2.007
糖尿乐胶囊	2g/kg	10	6.94±1.782**	6.29±1.528*	5.36±0.814*
						桔梗总皂苷	20	10	6.24±1.523***	5.53±0.824**	5.23±0.866*
	10	10	7.42±0.922**	6.11±0.614*	6.50±1.244
							5	10	8.14±1.088	5.97±0.622*	5.68±0.586

注：*P＜0.05；**P＜0.01  ***p＜0.001

1.4桔梗总皂苷对链脲佐菌素引起小鼠高血糖的影响

雄性小鼠90只，随机取10只作为空白对照组，其余小鼠尾静脉注射链脲佐菌素(在4C冰浴中用0.05M柠檬酸pH4.5溶液配制，立即使用)200mg/kg，造成糖尿病模型。注射后72小时小鼠眶静脉取血测血糖，删除未造成糖尿病模型者(测前禁食12小时，血糖值低于11.11mmol/L)，留用小鼠随机分为5组，每组10只，于7日内按表3所示剂量每天给药一次，末次给药后2小时，，眶静脉取血，以邻甲苯胺法(超微量法)测血糖。结果表明：桔梗总皂苷中剂量组和高剂量组对链脲佐菌素引起小鼠高血糖具有明显的降低作用，见表3。

表3桔梗总皂苷对链脲佐菌素引起小鼠高血糖的影响( X±S)

组别	剂量	动物数	血糖值(mmol/L)
							mg/kg	(只)	造型前	造型后	服药7天
正常对照组	-	10	6.16±1.221	5.99±0.722	6.11±1.166
						模型对照组	-	10	5.95±0.795	14.4±2.551	15.4±4.882
糖尿乐胶囊	2g/kg	10	6.05±0.777	14.2±2.609	9.93±2.609**
						桔梗总皂苷	20	10	6.16±0.888	15.7±3.521	9.66±3.441**
	10	10	6.11±0.833	16.3±4.112	10.7±3.774*
							5	10	5.94±0.666	16.2±6.120	12.3±4.829

注：*P＜0.05；**P＜0.01

1.5桔梗总皂苷对四氧嘧啶引起小鼠高血糖的影响

雄性小鼠120只，随机取20只作为空白对照组，其余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶70mg/kg，造成糖尿病模型，然后，随机分为6组，每组20只，。注射后第二天，开始按表4所示剂量每天给药一次，分别于注射后14天和21天，在当天给药后2小时，每组小鼠分别处死10只，取血，以葡萄糖氧化酶法测血糖。结果表明：在所用剂量下，桔梗总皂苷对四氧嘧啶引起小鼠高血糖具有明显的降低作用，且有明显量效关系，见表4。

表4桔梗总皂苷对四氧嘧啶引起小鼠高血糖的影响(X±S)

组别	剂量	动物数	血糖值(mmol/L)
							(mg/kg)	(只)	14d	21d
正常对照组	-	10	8.15±2.1407	7.78±1.881
						模型对照组	-	10	19.9±6.195	26.0±12.19
糖尿乐胶囊	2g/kg	10	14.6±4.356*	13.7±4.678*
						桔梗总皂苷	20	10	10.1±3.570***	10.1±3.164***
	10	10	11.3±6.017**	13.4±5.141**
							5	10	12.8±5.642*	15.1±6.538*

注：*P＜0.05；**P＜0.01  ***p＜0.001

桔梗总皂苷对四氧嘧啶引起大鼠高血糖的影响

雄性大鼠70只，随机取10只作为空白对照组，其余60只大鼠尾静脉注射四氧嘧啶50mg/kg，造成糖尿病模型，然后，随机分为6组，每组10只，。注射后第二天，开始按表5所示剂量每天给药一次，于注射后第10天，给药后2小时，摘眼球取血，以葡萄糖氧化酶法测血糖。结果表明：在所用剂量下，桔梗总皂苷对四氧嘧啶引起大鼠高血糖具有明显的降低作用，且有明显量效关系。赫博-d 10mg/kg对四氧嘧啶引起大鼠高血糖也具有明显的降低作用，见表5。

表5、桔梗总皂苷对四氧嘧啶引起大鼠高血糖的影响(X±S)

组别	剂量	动物数	血糖值(mmol/L)
							(mg/kg)	(只)	10d
正常对照组	-	10	6.06±1.376
						模型对照组	-	10	21.38±6.646
糖尿乐胶囊	2g/kg	10	15.70±4.202*
						桔梗总皂苷	20	10	12.27±5.998**
	10	10	13.80±5.577*
						桔梗皂苷D	510	1010	17.54±5.69813.97±4.387**

注：*P＜0.05；**P＜0.01

结论

上述实验结果表明：多次灌胃给予桔梗总皂苷可显著降低葡萄糖和肾上腺素所致的高血糖小鼠的血糖含量，而对正常小鼠的血糖含量则无明显影响。链脲佐菌素和四氧嘧啶为胰岛β细胞杀伤剂，可选择性地损伤胰岛β细胞，引起实验性糖尿病，灌服桔梗总皂苷可显著降低链脲佐菌素和四氧嘧啶所致的动物血糖升高，且作用强度随剂量的增加而加强，既有明显的量效关系，单剂量10mg/kg灌服桔梗皂苷D在大鼠四氧嘧啶模型中也具有明显的降血糖作用，提示桔梗总皂苷和单体桔梗皂苷D可能具有促进动物损伤的胰岛β细胞恢复作用。我们的上述药效学试验为临床应用桔梗总皂苷提供了一定的药理学依据。

具体实施方式：

实施例1

桔梗总皂苷的提取：取中药桔梗药材1kg，切成2mm厚的饮片，用5倍量的85％的乙醇提取三次，或用水提取95％乙醇沉淀的方法提取，提取液用2％的药用活性碳脱色，过滤，回收乙醇，再用去离子水稀释到1500ml，过滤，经D101大孔吸附树脂柱纯化，先用去离子水洗3000ml，再用85％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液干燥得桔梗总皂苷。

实施例2

单体桔梗皂苷D的制备：将实施例1得到的桔梗总皂苷10g，用甲醇溶解，过滤，加50g层析硅胶G混合均匀，干燥，在中低压柱层析上分离，用正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上层为展开剂进行分离。用硅胶薄层鉴定，相同Rf值斑点的流分合并，(其中最大的斑点为桔梗皂苷D)，挥去溶剂，得单体桔梗皂苷D(Platycodin D)。

实施例3

桔梗总皂苷1kg，药用淀粉0.5kg，用80％乙醇湿法制粒，整粒，干燥，装1#胶囊，每粒0.2。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项下要求。

实施例4

单体桔梗皂苷D 1kg，药用淀粉0.5kg，用80％乙醇湿法制粒，整粒，干燥，装1#胶囊，每粒0.2。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项下要求。

实施例5

桔梗总皂苷1kg，淀粉0.5kg，糊精1kg，50％乙醇适量，制粒，整粒，干燥，压片，每片0.3g。

实施例6

将1.5kg聚乙二醇4000在水浴上加热1小时得熔融液，趁热加入桔梗总皂苷细粉0.5kg，在保温锅中保持65℃约1小时。用定量泵滴丸机滴制，滴速约120丸/分，滴制温度65-70℃，在约14℃的液体石蜡中冷却，制得的丸重约60mg，按规定干燥后丸重约40-45mg。

Claims (10)

1、一种从中药桔梗中提取纯化的总皂苷的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

取中药桔梗药材切成常规的饮片，用60～95％乙醇提取三次，或用水提取60～95％乙醇沉淀的方法提取，提取液用2％的药用活性碳脱色，过滤，回收乙醇，再用去离子水稀释，过滤，经D101大孔吸附树脂柱纯化，先用去离子水洗近无色，再用60～95％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液干燥得桔梗总皂苷。

2、一种从中药桔梗中提取纯化的单体桔梗皂苷D的方法，其特征在于：将得到的桔梗总皂苷用甲醇溶解，过滤，加桔梗总皂苷重量6～12倍量的层析硅胶G混合均匀，干燥，在中低压柱层析上分离，用正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上层为展开剂进行分离；通过硅胶薄层鉴定，相同Rf值斑点的流分合并，最大的斑点为桔梗皂苷D，挥去溶剂，得单体桔梗皂苷D。

3、根据权利要求1所述的桔梗总皂苷提取方法，优选含有85％乙醇和15％的水。

4、桔梗总皂苷和单体皂苷桔梗皂苷D用于制备降血糖药物，其中包括I型和II型糖尿病的预防和治疗，也可以制成保健食品用于糖尿病的预防和患者恢复期用药。

5、根据权利要求1和2所得的提取物作为治疗有效量的活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。

6、根据权利要求3所述的药物，其特征在于：优选含有1％-99％的桔梗总皂苷或单体桔梗皂苷D和99％-1％的赋形剂。

7、根据权利要求4所述的药物，其特征在于：含有10％-90％的桔梗总皂苷或单体桔梗皂苷D和90％-10％的赋形剂。

8、根据权利要求4所述的药物，其特征在于：含有30％-80％的桔梗总皂苷或单体桔梗皂苷D和70％-20％的赋形剂。

9、根据权利要求4所述的药物，其特征在于：含有60％-70％的桔梗总皂苷或单体桔梗皂苷D和40％-30％的赋形剂。

10、根据权利要求4所述的药物，其特征在于所说的药物是任何一种药剂学上所说的剂型，包括片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、栓剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂；也可将其活性成分与一种或多种载体或药物混合，制成所需剂型。