CN110755386B - 百蕊颗粒在制备治疗病菌感染导致高热症的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化学物质的新的医药用途领域，具体涉及一种百蕊颗粒在制备治疗病菌感染导致高热症的药物中的应用，本发明经研究发现百蕊颗粒可以有效抑制大肠杆菌和酵母菌致大鼠发热，可作为哺乳动物病菌致高热症的候选药物，且本发明药物原料来自于天然植物原材料，分布广泛，成本低廉，工艺及流程简单，安全性高。

Description

百蕊颗粒在制备治疗病菌感染导致高热症的药物中的应用

技术领域

本发明涉及化学物质的新的医药用途领域，具体涉及一种百蕊颗粒在制备治疗病菌导致高热症的药物中的应用。

背景技术

细菌或真菌干扰导致的高热症是人、猪和家禽等中比较常见的一种疾病，主要由单一或多种细菌感染导致，表现为高热不退，伴有口渴、多尿、无汗或少汗等症，目前尚无特效治疗方法，而高烧容易导致脑中枢神经系统损伤，从而导致脑瘫疾病发生，现有的治疗高热症的药物多为西药，安全性低，副作用大，因此，亟需开发新的具有明确的抑制或治疗高热症的药物，特别是天热植物学化合物，对新型治疗高热症的药物的研发与临床应用具有重要的理论意义的社会价值。

百蕊草，中文别名有百乳草、地石榴、细须草、一棵松、积药草、珍珠草、凤芽蒿、青龙草、珊瑚草、打食草、石菜子、松毛参、小草及白风草等，为檀香科(Santalaceae)百蕊草属(Thesium L.)多种植物药材的统称，分布于热带和温带地区，我国有8种，各省均产；百蕊草为百蕊草(Thesium chinense Turcz.)或其变种长梗百蕊草(T.chinense Turcz.varlongipedunculatum Chu)的干燥全草。研究发现，百蕊草主要含多糖、苷类、黄酮、生物碱、甾类、有机酸及矿质元素等成。百蕊具有清热消炎，止咳化痰等作用；用于急、慢性咽喉炎、气管炎、鼻炎、感冒发热、肺炎等。目前国内外对百蕊草治疗病菌导致高热症的相关研究未见有专利文献报道。本发明将为开发安全有效的治疗病菌导致高热症的药品提供一定的科学依据。

发明内容

因此，发明人通过研究发现百蕊颗粒对于酵母菌和大肠杆菌致大鼠发热具有明显的改善作用，可用于预防或治疗哺乳动物的病菌致高热症。

本发明提供了百蕊颗粒在制备治疗病菌感染导致高热症的药物中的应用。

进一步地，所述病菌感染包括酵母菌感染和大肠杆菌感染中的一种。

进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。

进一步地，所述药学可接受的载体选自药学上可接受的溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗粘合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂、高分子骨架材料和成膜材料中的至少一种。

进一步地，所述药物为以百蕊草的水提物、醇提物，或者所述水提物或者醇提物经精制纯化后的精制物为活性成分，向所述活性成分中加入常规辅料按照常规工艺制成临床上可接受的口服溶液、注射剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、药膜剂或喷雾剂。

进一步地，所述药物为百蕊颗粒，所述百蕊颗粒按重量份数剂包括如下原料：

进一步地，所述百蕊草提取物干粉的制备方法为取百蕊草加入体积百分数为30～60％的乙醇水溶液，提取1～3次，每次提取1～3小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.15～1.20，然后经真空干燥得百蕊草提取物干粉。

进一步地，所述百蕊颗粒的制备方法，包括如下步骤：

(1)取微晶纤维素、甘露醇和硬脂酸镁，加入上述百蕊草提取物干粉，并加入占羟丙基纤维素总量60％～70％的羟丙基纤维素，混合均匀，得混合物料；

(2)取剩余羟丙基纤维素加入水，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

本发明还提供了一种用于治疗病菌感染导致高热症的药物，所述药物以百蕊草、百蕊草的水提物或醇提物，或者所述水提物或者醇提物经精制纯化后的精制物为活性成分。

进一步地，向所述活性成分中加入常规辅料按照常规工艺制成临床上可接受的口服溶液、注射剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、药膜剂或喷雾剂。

进一步地，所述百蕊颗粒按重量份数剂包括如下原料：

进一步地，所述百蕊颗粒的制备方法，包括如下步骤：

(1)取微晶纤维素、甘露醇和硬脂酸镁，加入上述百蕊草提取物干粉，并加入占羟丙基纤维素总量60％～70％的羟丙基纤维素，混合均匀，得混合物料；

(2)取剩余羟丙基纤维素加入水，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明通过实验发现百蕊颗粒可以有效的治疗酵母和大肠杆菌内毒素所致小鼠发热，可作为哺乳动物病菌致高热症的候选药物，且原料来自于天然可食用植物原材料，分布广泛，成本低廉，制备艺及流程简单，安全性高；

2.本发明通过对百蕊颗粒的处方和工艺进行改进，使用微晶纤维素、甘露醇、羟丙基纤维素、硬脂酸镁和水相互配合，相比于现有的百蕊颗粒，能够显著提高颗粒剂中有效成分的含量均匀性，提高稳定性；

3、本发明通过实验发现将羟丙基纤维素分两步加入颗粒剂中，能够提高颗粒剂中有效成分的含量和含量均匀度，具有明显优势。

具体实施方式

实施例1百蕊颗粒

处方：百蕊草提取物干粉1000g，微晶纤维素150g，甘露醇10g，羟丙基纤维素20g，硬脂酸镁40g，水250g；

制法：取百蕊草加入乙醇水溶液，第一次加入体积百分数为50％的乙醇水溶液，第二次加入体积百分数为75％的乙醇水溶液，共提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.20，在40℃下真空干燥，得百蕊草提取物干粉，取微晶纤维素、甘露醇和硬脂酸镁，加入上述百蕊草提取物干粉，并加入12g的羟丙基纤维素，混合均匀，得混合物料；取8g羟丙基纤维素加入水中，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

实施例2百蕊颗粒

处方：百蕊草提取物干粉1000g，微晶纤维素150g，甘露醇10g，羟丙基纤维素20g，硬脂酸镁40g，水250g；

制法：取百蕊草加入乙醇水溶液，第一次加入体积百分数为50％的乙醇水溶液，第二次加入体积百分数为75％的乙醇水溶液，共提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.20，在40℃下真空干燥，得百蕊草提取物干粉，取微晶纤维素、甘露醇和硬脂酸镁，加入上述百蕊草提取物干粉，混合均匀，得混合物料；取羟丙基纤维素20g加入水中，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

实施例3百蕊颗粒

处方：百蕊草提取物干粉1000g，微晶纤维素180g，甘露醇12g，羟丙基纤维素30g，硬脂酸镁30g，水300g；

制法：取百蕊草加入乙醇水溶液，第一次加入体积百分数为30％的乙醇水溶液，第二次加入体积百分数为80％的乙醇水溶液，共提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.17，在40℃下真空干燥，得百蕊草提取物干粉，取微晶纤维素、甘露醇和硬脂酸镁，加入上述百蕊草提取物干粉，并加入21g的羟丙基纤维素，混合均匀，得混合物料；取9g羟丙基纤维素加入水中，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

实施例4百蕊颗粒

处方：百蕊草提取物干粉1100g，微晶纤维素100g，甘露醇80g，羟丙基纤维素25g，硬脂酸镁30g，水200g；

制法：取百蕊草加入乙醇水溶液，第一次加入体积百分数为50％的乙醇水溶液，第二次加入体积百分数为50％的乙醇水溶液，共提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.15，在40℃下真空干燥，得百蕊草提取物干粉，取微晶纤维素、甘露醇和硬脂酸镁，加入上述百蕊草提取物干粉，并加入15g的羟丙基纤维素，混合均匀，得混合物料；取10g羟丙基纤维素加入水中，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

对比例1百蕊颗粒

处方：百蕊草提取物干粉1000g，微粉硅胶10g，蔗糖100g，糊精40g，水250g；

制法：取百蕊草加入乙醇水溶液，第一次加入体积百分数为50％的乙醇水溶液，第二次加入体积百分数为75％的乙醇水溶液，共提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.20，在40℃下真空干燥，得百蕊草提取物干粉，取微粉硅胶和蔗糖，加入上述百蕊草提取物干粉，混合均匀，得混合物料；取糊精加入水中，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

对比例2百蕊颗粒

处方：百蕊草提取物干粉1000g，微晶纤维素150g，甘露醇10g份，羟丙基纤维素20g，微粉硅胶40g，水250g；

制法：取百蕊草加入乙醇水溶液，第一次加入体积百分数为50％的乙醇水溶液，第二次加入体积百分数为75％的乙醇水溶液，共提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.20，在40℃下真空干燥，得百蕊草提取物干粉，取微晶纤维素、甘露醇和微粉硅胶，加入上述百蕊草提取物干粉，并加入12g的羟丙基纤维素，混合均匀，得混合物料；取8g羟丙基纤维素加入水中，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

实验例1百蕊颗粒总黄酮的含量测定方法

照高效液相色谱法(中国药典2015版)分别测定颗粒中的黄酮类活性成分的含量，具体方法如下：

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5％磷酸溶液(62：38)为流动相；检测波长为368nm；柱温：30℃；流速1.0ml/min。理论板数按山奈酚峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥48小时的山柰酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含山柰酚40μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取百蕊颗粒，取1g，精密称定，置于容量瓶中，加10ml蒸馏水，加热使溶解，放冷，缓慢加入乙醇80ml，静置30分钟，过滤，残渣用85％乙醇少量洗涤两次，合并滤液与洗涤液，蒸干，残渣加水40ml使溶解，加于已处理好的聚酰胺柱(30～60目，7g，内径2cm，用水湿法装柱)上，控制流速1滴/3～4s，用水100ml洗脱，弃去水洗液，再用200ml60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至干，残渣加甲醇30ml使溶解，再加入25％盐酸5ml水浴回流1小时，放冷，加甲醇定容至50ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实验例2总黄酮检测方法的方法学考察

1线性关系的考察

精密吸取上述对照品溶液，稀释得一系列标准品溶液，精密吸取10μl标准品溶液分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，对照品的进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制山奈酚的标准曲线，回归方程：y＝2476317.31x-75167.52，R²＝0.9999；结果表明，实验例1所述的检测方法可有效将山奈酚进行检测，线性关系良好。

2精密度试验

精密量取上述对照品溶液，按实验例1中的色谱条件重复进样6次，测定山奈酚的峰面积，计算峰面积的RSD值。其中，山奈酚峰面积的RSD值为0.91％。结果表明，本色谱条件下仪器精密度良好。

3重复性试验

取上述颗粒剂，按实验例1中记载的方法平行操作，制备供试品溶液六份，并测定山奈酚的峰面积，计算含量及RSD值，其中，山奈酚含量的RSD值为2.14％。结果表明，本方法重复性良好。

4回收率试验

采用100％加样回收法。精密称取上述颗粒剂约1.5g，共6份，按实验例1供试品溶液的制备方法制得六份供试品溶液，分别加入一定量的对照品溶液，按照实验例1记载的色谱条件进行测定，按下式计算回收率，回收率＝(实测值-供试品含量×取样量)/加入量×100％，其中，山奈酚的平均回收率为100.37％，RSD值为2.13％。结果表明，本方法的回收率符合要求。

实验例3百蕊颗粒的含量均匀度考察

分别实施例1～4和对比例1和2制得的百蕊颗粒样品进行含量均匀度测定，分别取上述样品，每组10袋，各取2g，精密称定，分别放置于容量瓶中，按照实验例1所述的含量测定方法，结果见下表所示，相比于现有制剂(对比例1和对比例2)，采用本发明的辅料组成和方法制备的百蕊颗粒能够显著提高黄酮类活性成分的含量和含量均匀度，而且，相比于实施例2，实施例1、实施例3和实施例4的黄酮类活性成分的含量和含量均匀度也有明显提高，说明本发明的两步法加入羟丙基纤维素能够提高本发明百蕊颗粒有效成分的稳定性。

表1实施例1～4和对比例1和2的百蕊颗粒的含量及含量均匀度的考察

实验例4百蕊颗粒对酵母和大肠内毒素致雄性大鼠发热的影响

1.实验动物

Wistar大鼠，SPF级，体重160-180g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK(京)2016-0006。饲育在屏障环境下，实验动物使用许可证号：SYXK(京)2013-0035。小鼠购买以后，按照标准的小鼠饲养环境饲养小鼠，自由采食水和饲料。

2.药物与试剂

百蕊颗粒：按照实施例1所述的制法制备得到；

阳性对照药：阿司匹林泡腾片，购自阿斯利康制药有限公司，批号：1708164，临床日用量为2.0g，按动物与人体表面积比折算，大鼠等效剂量为0.18g/kg。

安琪高活性干酵母，购自安琪酵母股份有限公司，批号：20180412；脂多糖，购自SIGMA-ALORICH公司，批号：057M4013V；氯化钠注射液(0.9％)，购自石家庄四药有限公司，批号：1612173206。

3.实验方法与结果

3.1百蕊颗粒对酵母致大鼠发热的影响

(1)实验方法：试验前三日，每天测动物肛温一次。试验前禁食16小时，试验当日晨测动物肛温2次为基础肛温。用20％酵母溶液背部皮下注射致热(2ml/kg体重)。致热后4小时后测肛温，升高0.8℃以上者用于试验，以肛温升高值随机分组，分别为模型对照组、百蕊颗粒高、中、低三个剂量组(对应地5.40、2.70、1.35g颗粒/kg大鼠体重)、阳性对照药阿司匹林泡腾片组(0.18g/kg大鼠体重)，每组11只(雄性6只、雌性5只)。各组大鼠分别灌胃给药，模型对照组灌胃给予相同体积的蒸馏水(10mL/kg大鼠体重)。药后1、2、3、4小时各测肛温一次，以不同时间所测肛温与基础肛温之差值，作为体温变化的指标，以t检验进行统计学处理。

(2)实验结果

模型对照组显示20％酵母皮下注射后可致大鼠发热，致热后4小时体温升高值在0.8℃以上者用于试验。百蕊颗粒低、中、高剂量组在给药后4小时内均可不同程度地降低酵母致大鼠体温升高，高剂量组(5.40g/kg)在给药后1小时和2小时可显著降低大鼠体温升高值，与模型对照组相比有显著性差异，高剂量组作用强于中、低剂量组；表明百蕊颗粒具有解热作用。结果见表2-5。

表2百蕊颗粒对酵母致雄性大鼠发热的影响

表3百蕊颗粒对酵母致雌性大鼠发热的影响

表4百蕊颗粒对酵母致雄性大鼠发热体温升高值的影响(

n＝6)

表5百蕊颗粒对酵母致雌性大鼠发热体温升高值的影响(

n＝5)

3.2百蕊颗粒对大肠内毒素(LPS)致大鼠发热的影响

(1)实验方法：试验前三日，每天测动物肛温一次。试验前禁食16小时，试验当日晨测动物肛温2次为基础肛温。用2.5μg/mL的大肠杆菌内毒素(LPS)尾静脉注射致热(5mL/kg体重)。致热后2.5小时后测肛温，升高0.8℃以上者用于试验，以肛温升高值随机分组，共设5组，分别为模型对照组、百蕊颗粒高、中、低三个剂量组(5.40、2.70、1.35g颗粒/kg体重)、阳性对照药阿司匹林泡腾片组，每组10只。各组大鼠分别灌胃给药，模型对照组灌胃给予相同体积的蒸馏水(10mL/kg体重)。药后1、2、3、4小时各测肛温一次，以不同时间所测肛温与基础肛温之差值作为体温变化的指标，以t检验进行统计学处理。

(2)实验结果

大肠杆菌内毒素尾静脉注射后可致大鼠发热，致热2.5小时后体温升高值超过0.8℃以上者用于试验。百蕊颗粒低、中、高剂量组在给药后4小时内均可不同程度地降低内毒素致大鼠体温升高值，在给药后1小时和2小时可显著降低大鼠体温升高值，与模型对照组相比有显著性差异，高剂量组作用强于中、低剂量组；表明百蕊颗粒具有解热作用。结果见表6和表7。

表6百蕊颗粒对大肠杆菌内毒素致大鼠发热的影响

表7百蕊颗粒对大肠杆菌内毒素致大鼠发热的影响(

n＝10)

综上所述，上述实验证明百蕊颗粒可以有效的治疗酵母和大肠杆菌内毒素所致小鼠发热，可作为哺乳动物病菌致高热症的候选药物。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (3)

1.百蕊颗粒在制备治疗病菌感染导致高热症的药物中的应用；所述百蕊颗粒按重量份数计包括如下原料：

所述百蕊颗粒的制备方法，包括如下步骤：

(1)取微晶纤维素、甘露醇和硬脂酸镁，加入上述百蕊草提取物干粉，并加入占羟丙基纤维素总量60％～70％的羟丙基纤维素，混合均匀，得混合物料；

(2)取剩余羟丙基纤维素加入水，混合均匀，制得粘合剂溶液，加入步骤(1)中的混合物料，制粒，干燥，整粒，得百蕊颗粒。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病菌感染包括酵母菌感染和大肠杆菌感染中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述百蕊草提取物干粉的制备方法为取百蕊草加入体积百分数为30～80％的乙醇水溶液，提取1～3次，每次提取1～3小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.15～1.20，然后经真空干燥得百蕊草提取物干粉。