CN1416880A - 四逆散及其活性部位的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开四逆散及其活性部位新用途，该活性部位为淡棕色的粉末，具有吸湿性，易溶于水和稀乙醇，难溶于亲脂性有机溶剂。三氯化铁、三氯化铝、盐酸－镁粉、醋酐－浓硫酸、α－萘酚－浓硫酸反应阳性。该活性部位主要含有黄酮类和皂苷类成分，其中总黄酮类成分的含量为39.5～45.5％，总皂苷类成分的含量为11.0～12.0％。该活性部位是将四逆散中的柴胡、炙甘草、枳实、白芍按比例混合、煎煮，通过大孔吸附树脂纯化分离而制得。该四逆散及其活性部位具有良好的抗抑郁作用。

Description

四逆散及其活性部位的新用途

发明领域

本发明涉及一种中成药及其活性部位的新用途，特别是涉及四逆散及其活性部位的新用途。

背景技未

随着多种应急因素的加剧，抑郁症已成为现代社会的常见病和高发病，其发病率正在快速攀升。据不完全统计，目前全世界抑郁症患者已占世界人口的3～5％。WHO预测，到2005年，抑郁症发病率将达到总人口的10％，抑郁症在21世纪造成社会最沉重负担的疾病中居第2位。目前临床使用的抗抑郁药主要有三环类、5-HT再摄取抑制剂、5-HT-NE再摄取抑制剂和单胺氧化酶-A抑制剂等，但因为抑郁症发病机理比较复杂，诱发因素较多，上述仅针对某单一环节的药物往往难以取得满意疗效。同时这些药物存在抗抑郁谱窄、副作用大、易复发等缺陷。近年来，国内外在抗抑郁药的研制与开发方面越来越注重传统药物。但目前从纯中药制剂中分离出具有抗抑郁活性的药物有效部位及活性成分的方法及相关制剂并不多见。

发明内容

本发明的一个目的在于提供四逆散活性部位；本发明的目的还在于提供四逆散及其活性部位的抗抑郁新用途。

本发明抗抑郁活性部位为淡棕色的粉末，具有一定的吸湿性，易溶于水和稀乙醇，难溶于氯仿、石油醚等亲脂性有机溶剂。三氯化铁反应阳性，三氯化铝反应阳性，盐酸-镁粉反应阳性，醋酐-浓硫酸反应阳性，α-萘酚-浓硫酸反应阳性。主要含有黄酮类和皂苷类成分，其中总黄酮类成分的含量为39.5～45.5％，总皂苷类成分的含量为11.0～12.0％。HPLC测定新橙皮苷含量为19.5～21.5％，甘草酸含量为3.0～3.5％。另含有一定量的单萜苷类和其它成分。

本发明的抗抑郁活性部位的制备方法：

按6∶6∶6∶9的比例称取柴胡、炙甘草、枳实、白芍，将4味药混合均匀，加水煎煮2～3次，合并各次水煎液，浓缩，通过弱极性的大孔吸附树脂进行吸附，待水煎液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得到复方中药抗抑郁活性部位；

以下实验例采用小鼠强迫游泳模型、小鼠悬尾模型、大鼠强迫游泳模型、大鼠慢性应激抑郁模型药物筛选方法，考察了四逆散及四逆散有效部位抗抑郁作用。

按药剂学方法，可以将本发明药物组合物制备成多种临床药物剂型，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。本发明药物还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等。

实验例1：小鼠强迫游泳、悬尾模型药物筛选实验

1.动物及分组：雄性昆明种三级小鼠90只，重量20～25g，15只1组饲养。分对照组、氯丙咪嗪组及四逆散、四逆散提取物(抗抑郁有效部位)大小剂量组，共12组。每天8:00～10:00am给药，共3周。强迫游泳、悬尾实验前24h、5h、1h给药。

2.行为学测试方法：强迫游泳实验：量筒内装21～23℃水10cm，量筒之间放置一个不透明板，防止小鼠彼此看到。末次灌药后1小时，小鼠被投入量量筒，并滞留6min，计算后4min的不动时间，四只小鼠同时测量。判断不动的标准：停止挣扎，垂直体位，不动漂浮，仅做一些必要的活动使它的头露出水面。悬尾实验：末次灌药后1小时，水平放置一棒状物，用胶带在距离小鼠尾尖30mm处将之固定于其上，中间用板隔开，防止彼此看到对方。小鼠距离最近的物体大约100mm。悬挂6min，记录后4min的不动时间，每次测量5只。

3.结果：氯丙咪嗪明显减少了小鼠强迫游泳和悬尾的不动时间。大剂量四逆散有效部位(抗抑郁有效部位)明显减少了小鼠强迫游泳的不动时间，效果与氯丙咪嗪相近。大剂量四逆散减少了小鼠悬尾的不动时间。

       表1  药物对小鼠强迫游泳模型不动时间的影响

   组别           例数      不动时间      与空白组相比变化

                   (n)          (s)              (％)

   对照            15      158.35±32.84          -

 氯丙咪嗪          15      75.64±37.88          -52

四逆散大剂量       15      128.02±44.54         -19

四逆散小剂量       15      132.69±54.99         -50四逆散有效部位大剂量   15      79.58±38.94^**       -50四逆散有效部位小剂量   15      132.78±46.85         -16

^*p＜0.05与对照组相比，^**p＜0.01与对照组相比

          表2药物对小鼠悬尾模型不动时间的影响

    组别           例数      不动时间    与空白组相比变化

                                (s)             ％

    空白            15     113.08±24.15        -

四逆散大剂量        15     42.49±30.79         -62

四逆散小剂量        15     60.75±26.39         -46四逆散有效部位大剂量    15     75.80±37.85         -32四逆散有效部位小剂量    15     91.71±30.07         -19

^**p＜0.01，与对照组相比

4.结论：四逆散及其有效部位(抗抑郁有效部位)具有抗抑郁作用。不同模型对二者的敏感性有一定差别。实验例2：四逆散有效部位对大鼠强迫游泳模型作用

1、动物及分组：雄性SD大鼠45只，体重180g。随机分为3组：对照组15只，四逆散组15只，四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)组15只。每组动物分3笼饲养，每笼5只。每天上午8-9h进行灌胃，以使动物适应给药时的抓摸刺激。

2、实验方法：灌胃12天，实验第13天大鼠被投入40cm高，直径18cm的容器中，内含25℃水20cm，强迫游泳15min，取出后烘干。于第14天第二次强迫游泳前23.5h、5h、1h分别给药。实验第14天第二次强迫游泳，观察大鼠不动时间。强迫游泳结束60min后，同笼中5只动物在5min内，迅速给与1％戊巴比妥钠(80mg/kg)腹腔内注射，麻醉后腹主动脉取血，离心取血清，测定皮质醇。开胸经心脏灌注固定，先用生理盐水100ml冲净血液，然后用预冷(4℃)的4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液(PB，0.1mol/L，PH7.4)灌注，先快灌，继之慢灌。取脑，用4％多聚甲醛后固定2h，再将脑组织块放入含20％蔗糖磷缓液(PB，0.1mol/L，PH7.4)，4℃过夜。组织块完全沉底后用冰冻切片机行40μm连续冠状切片，免疫组化检测C-FOS阳性神经元表达。

3.结果：3.1与对照组比较，四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)可以显著缩短大鼠强迫游泳不动时间。

      表3  四逆散有效部位对强迫游泳大鼠模型的影响

  组别                     例数              不动时间(s)

 对照组                     14               138.77±32.90

四逆散组                    15               146.58±28.40四逆散有效部位组                14               109.42±32.60^*

^*p＜0.005，与对照组相比

3.2对血清皮质醇的影响

FST对大鼠血清皮质醇含量有明显的影响，对照组FST1小时后皮质醇仍保留在较高水平，四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)组预防能明显降低其含量。

  表4  四逆散有效部位对大鼠强迫游泳模型血清皮质醇的影响组别                   例数           血清皮质醇浓度(ng/ml)对照组                    8                7.185±2.607四逆散组                   8                5.045±1.699四逆散有效部位              8                4.287±0.987

3.3对脑神经元C-FOS蛋白表达的影响

强迫游泳可使大鼠脑内C-FOS阳性神经元表达增加，而四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)可以降低大鼠前额叶皮层、海马CA3区C-FOS阳性神经元表达。

4.结论：

证实四逆散、四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)对强迫游泳模型具有抗抑郁作用。实验例3：四逆散有效部位对大鼠慢性应激抑郁模型的影响

1、动物及方法：SD大鼠18只，重量180～200g。分组：适应性饲养一周，期间进行蔗糖水消耗和旷场实验，根据结果，半随机分3组。对照组每笼6只，模型组孤养。第21天动物断头处死，取大鼠大脑，于冰皿分离海马，称重。用高效液相电化学检测法测定单胺类神经递质及其代谢产物的变化。

2、结果：模型组大鼠海马多巴胺递质及其代谢产物含量比值下降，四逆散有效部位对多巴胺代谢有影响，能显著增加抑郁模型大鼠的水平运动和垂直运动。

             表5海马多巴胺递质含量比值

  分组                  例数                    DA/DOPAC

 对照组                   6                     6.65±1.73

 模型组                   6                     2.49±4.62四逆散有效部位组              6                     26.62±5.67

    表6  四逆散及其有效部位对大鼠抑郁模型行为学作用

 分组                    例数     水平运动        垂直运动

模型组                    10     11.47±10.33     3.65±3.99四逆散有效部位组              10     39.11±33.10     6.28±5.03

下列实施例均能实现上述实验例的效果。实施例1

按比例称取柴胡2.4kg、炙甘草2.4kg、枳实2.4kg、白芍3.6kg，混合均匀，加水煎煮2次，其中第一次加水100L，煎煮2小时；第二次加水80L，煎煮1.5小时；合并2次水煎液，浓缩至60L；通过弱极性的AB-8大孔吸附树脂，树脂体积为15L，进行吸附，吸附流速为2L/h；待水煎液全部通过树脂柱后，用8倍树脂体积，约120L的水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用8倍树脂体积，约120L的50％7醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，洗脱流速为2L/h；收集50％乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得到本发明抗抑郁有效部位707.4g。其中总黄酮类成分的含量为39.5～45.5％，总皂苷类成分的含量为11.0～12.0％，HPLC测定新橙皮苷含量为19.5～21.5％，甘草酸含量为3.0～3.5％，加入赋形剂按常规工艺制成胶囊2000粒，每粒0.33克，治疗抑郁症，每日4粒。实施例2  胶囊剂的制备

本发明抗抑郁有效部位1000g，药用淀粉1000g，混合均匀，装入1号胶囊，每粒0.2g，每次口服2-3粒，每日两次。实施例3 片剂的制备

本发明抗抑郁有效部位1000g，药用淀粉400g，糊精100g，混合均匀，用适量乙醇制粒，经整粒机整粒，压片，每片0.25g，口服，每次2片，每日两次。实施例4  颗粒剂的制备

本发明抗抑郁有效部位100g，淀粉1000g，糖粉100g，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装即得。口服，一次5g，一日两次。实施例5  注射剂的制备

本发明抗抑郁有效部位10g，丙二醇20ml，聚乙二醇-400 50ml，注射用水300m1，混合，水浴加热30分钟，加苯甲醇50ml，再用注射用水加至1000ml，在超声波中处理10分钟，再水浴上加热30分钟，调PH值5.5-6.5，过滤澄明，灌封，灭菌即得。每支2ml，肌肉注射，一次2ml，一日1-2次。实施例6

柴胡6kg、炙甘草6kg、枳实6kg、白芍9kg，制成口服液，10ml/瓶，治疗抑郁症，一次10-20ml，一日2-3次。

Claims (11)

1.一种四逆散的有效部位，其特征在于该有效部位的理化性质为：

淡棕色的粉末，具有一定的吸湿性，易溶于水和稀乙醇，难溶于氯仿、石油醚等亲脂性有机溶剂；三氯化铁反应阳性，三氯化铝反应阳性，盐酸-镁粉反应阳性，醋酐-浓硫酸反应阳性，α-萘酚-浓硫酸反应阳性。

2、如权利要求1所述的有效部位，其特征在于该有效部位主要含有黄酮类和皂苷类成分，其中总黄酮类成分的含量为39.5～45.5％，总皂苷类成分的含量为11.0～12.0％；HPLC测定新橙皮苷含量为19.5～21.5％，甘草酸含量为3.0～3.5％。

3、一种四逆散的有效部位的制备方法，其特征在于该制备方法为：

按6∶6∶6∶9的比例称取柴胡、炙甘草、枳实、白芍，将4味药混合均匀，加水煎煮2～3次，合并各次水煎液，浓缩，通过弱极性的大孔吸附树脂进行吸附，待水煎液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得到复方中药抗抑郁活性部位。

4、如权利要求3所述的有效部位的制备方法，其特征在于该制备方法为：

按6∶6∶6∶9的比例称取柴胡、炙甘草、枳实、白芍，将4味药混合均匀，加水煎煮2次，其中第一次加水100L，煎煮2小时；第二次加水80L，煎煮1.5小时；合并2次水煎液，浓缩至60L；通过弱极性的AB-8大孔吸附树脂，树脂体积为15L，进行吸附，吸附流速为2L/h；待水煎液全部通过树脂柱后，用8倍树脂体积，约120L的水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用8倍树脂体积，约120L的50％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，洗脱流速为2L/h；收集50％乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得到本发明抗抑郁有效部位。

5.如权利要求1或2所述的有效部位在制备抗抑郁的药物中的应用。

6.四逆散在制备抗抑郁的药物中的应用。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于抗抑郁是指提高多巴胺递质及其代谢产物含量比值或降低脑神经元C-FOS阳性神经元表达。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于抗抑郁是指提高多巴胺递质及其代谢产物含量比值或降低脑神经元C-FOS阳性神经元表达。

9.如权利要求1或2所述的有效部位，其特征在于还可加入药学上可接受的敷料或赋形剂。

10.如权利要求1或2所述的有效部位，其特征在于可制成临床可接受的剂型。

11、如权利要求10所述的有效部位，其特征在于可制成的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂、注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。