CN101537039A - 一种香青兰总黄酮提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种香青兰总黄酮提取物,是通过以下方法制备的:先用乙醇进行提取,然后上大孔树脂柱或聚酰胺柱吸附,乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,进行减压浓缩或真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥,即得香青兰总黄酮提取物。所述香青兰总黄酮提取物中总黄酮含量大于50%,主要有效成分黄酮类化合物田蓟苷含量大于5.0%。所得香青兰总黄酮提取物可以用来制备治疗动脉硬化、冠心病、心绞痛的药物或保健品。
Description
技术领域
本发明涉及一种香青兰总黄酮提取物及其制备方法与应用。
背景技术
冠心病是严重危害人类健康的疾病之一,该病发病率高、致死率高,发病机制复杂,使得该病的防治成为难点,此类治疗药物一直是药学工作者研究的热点。植物药在冠心病的防治方面具有独特的优势,取得了较好的临床结果。
香青兰(Dracocephalum moldavica L)是唇形科青兰属一年生草本植物,系维吾尔族、蒙古族习用药材。药材标准收载于《卫生部药品标准》维药分册(标准号:WS3-BW-0073-98)和1977年版《中国药典》。药用部位为干燥地上部分,夏季盛花期采割,除去杂质,晒干。维药分册记载的功能主治为益心护脑,保肝健脾,增强感觉力,补充保护力,填益智慧力,开通脑中闭塞。用于心悸心痛,头晕脑胀,反应迟钝,感觉低下,思维不敏,胃虚肝弱,机体自然力下降。维医用于治疗冠心病及血液质旺盛(高血压)等疾病,几百余年的实践证明,疗效确切。部颁标准维药分册收载的成方制剂中,组方含香青兰的制剂有6种,多用于心悸、心痛方面疾病的治疗。香青兰提取物对于多种自由基具有清除作用,对于异丙肾上腺素诱导的小鼠急性心肌缺血具有保护作用。单方制剂“益心巴迪然吉布亚颗粒”治疗冠心病具有良好的疗效。临床研究表明,益心巴迪然吉布亚颗粒治疗冠心病心绞痛在总有效率达到85.5%,与复方丹参片疗效相当。
尽管近年来,有关香青兰提取物清除自由基、治疗冠心病、降血脂等方面的文献较多,但研究对象均为香青兰水煎液或提取物,益心巴迪然吉布亚颗粒也属水煎浓缩制得的粗制剂,药效物质不明确,服药量大,质量可控性不强。本申请的发明人对香青兰进行了系统成分研究,结果表明,香青兰主要含有黄酮、三萜类成分,其中黄酮类成分为公认的具有抗氧化、清除自由基作用的一类化合物,银杏总黄酮、山楂总黄酮已经是临床应用的心血管疾病治疗药物。
发明内容
针对上述现有技术,本发明提供了一种总黄酮含量高的香青兰总黄酮提取物。
一种香青兰总黄酮提取物,是通过以下方法制备的:
(1)将香青兰地上部分粉碎,用0~95%乙醇(指体积份数,当取到“0”时即为纯水)回流提取1~8次,每次溶剂用量为药材重量的1~20倍,每次提取时间为0.5~10小时,合并提取液,过滤,回收乙醇(如减压回收),浓缩得浸膏;
(2)将上述得到的浸膏加水稀释,加水量为浸膏重量的2~20倍,然后上大孔树脂柱或聚酰胺柱吸附,浸膏重量与吸附填料体积的比是1∶0.5~10,单位g∶ml,色谱柱径与柱高比为1∶1~30,然后依次用水和浓度为5~95%的乙醇洗脱,流速为0.5~3.5个柱体积/小时;
(3)收集乙醇洗脱液,进行减压浓缩或真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥,即得香青兰总黄酮提取物。
所述香青兰总黄酮提取物中总黄酮含量大于50%,主要有效成分黄酮类化合物田蓟苷含量大于5.0%。
一种香青兰总黄酮提取物的制备方法,步骤如下:
(1)将香青兰地上部分粉碎,用0~95%乙醇(指体积份数,当取到“0”时即为纯水)回流提取1~8次,每次溶剂用量为药材重量的1~20倍,每次提取时间为0.5~10小时,合并提取液,过滤,回收乙醇(如减压回收),浓缩得浸膏;
(2)将上述得到的浸膏加水稀释,加水量为浸膏重量的2~20倍,然后上大孔树脂柱或聚酰胺柱吸附,浸膏重量与吸附填料体积的比是1∶0.5~10,单位g∶ml,色谱柱径与柱高比为1∶1~30,然后依次用水和浓度为5~95%的乙醇洗脱,流速为0.5~3.5个柱体积/小时;
(3)收集乙醇洗脱液,进行减压浓缩或真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥,即得香青兰总黄酮提取物。
所述的香青兰总黄酮提取物在制备治疗动脉硬化、冠心病、心绞痛药物中的应用。
所述的香青兰总黄酮提取物在制备预防动脉硬化、冠心病、心绞痛保健品中的应用。
所述应用是将香青兰总黄酮提取物与磷脂按照重量比1∶0.2~1∶25的比例制成磷脂复合物,可以直接将磷脂复合物制成口服制剂服用。也可以将香青兰总黄酮提取物与医学上可接受的辅料混合制成胶囊剂(包括软胶囊)、片剂、散剂、颗粒、口服液、酒剂、丸剂、微丸剂、合剂、酊剂中的任意一种服用,优选颗粒剂、胶囊剂、片剂。
所述磷脂为大豆磷脂或卵磷脂。
所述乙醇的浓度均为体积份数。
本申请的发明人对提取物进行了成分分离,得到的主要成分经NMR确定为田蓟苷,结构如下:
采用紫外分光光度法,以田蓟苷为对照品,对提取物进行含量测定,总黄酮含量以田蓟苷计大于50%,HPLC测定田蓟苷的含量,其在总黄酮提取物中含量大于5.0%,色谱图如图1、图2所示。
本发明采用大孔树脂或聚酰胺吸附的方法,分离得到了香青兰总黄酮,其中田蓟苷(tilianin)是其主要成分。采用紫外比色法,以田蓟苷为对照品,测定了香青兰总黄酮含量不低于50%。高效液相色谱法测定田蓟苷含量不低于5.0%。该提取对于结扎冠状动脉前支造成的急性犬心肌缺血具有保护作用,可明显减轻犬急性心肌缺血程度,缩小缺血范围,明显增加麻醉犬冠脉流量。
附图说明
图1为香青兰总黄酮提取物HPLC色谱图;
图2为田蓟苷对照品HPLC色谱图。
具体实施方式
以下将在实施例中对本发明进行详细的说明,但下述实施例仅为说明之目的,并非用于限制本发明。
实施例1:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50Kg,以药材重量10倍的50%乙醇回流提取3次,每次1小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水10倍稀释,上大孔树脂柱吸附(HPD100,河北宝恩化工),原药材重量与大孔树脂体积比为1∶5(g∶ml),色谱柱径高比为1∶10,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用75%乙醇洗脱,流速为1柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为2.5%。
实施例2:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50Kg,以药材重量8倍的50%乙醇回流提取3次,每次1小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水10倍稀释,上聚酰胺柱吸附(60~90目),原药材重量与聚酰胺体积比为1∶3(g∶ml),色谱柱径高比为1∶8,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用75%乙醇洗脱,流速为1柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为2.8%。
实施例3:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50Kg,以与药材重量等重的95%乙醇回流提取8次,每次5小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水20倍稀释,上大孔树脂柱吸附(HPD100,河北宝恩化工),原药材重量与大孔树脂体积比为1∶10(g∶ml),色谱柱径高比为1∶20,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用95%乙醇洗脱,流速为2柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为1.9%。
实施例4:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50Kg,以与药材重量等重的75%乙醇回流提取5次,每次10小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水10倍稀释,上大孔树脂柱吸附(HPD100,河北宝恩化工),原药材重量与大孔树脂体积比为1∶0.5(g∶ml),色谱柱径高比为1∶30,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用50%乙醇洗脱,流速为3.5柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为1.7%。
实施例5:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50Kg,以药材重量20倍的5%乙醇回流提取2次,每次10小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水2倍稀释,上大孔树脂柱吸附(HPD100,河北宝恩化工),原药材重量与大孔树脂体积比为1∶1(g∶ml),色谱柱径高比为1∶1,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用20%乙醇洗脱,流速为0.5柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为1.5%。
实施例6:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50Kg,以药材重量5倍的0%乙醇(即为纯水)回流提取1次,提取10小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水15倍稀释,上聚酰胺柱吸附(60~90目),原药材重量与树脂体积比为1∶8(g∶ml),色谱柱径高比为1∶5,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用70%乙醇洗脱,流速为3柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为2.0%。
实施例7:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50 Kg,以药材重量10倍的20%乙醇回流提取7次,每次0.5小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水10倍稀释,上聚酰胺柱吸附(60~90目),原药材重量与树脂体积比为1∶5(g∶ml),色谱柱径高比为1∶25,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用50%乙醇洗脱,流速为2.5柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为2.2%。
实施例8:香青兰总黄酮提取物的制备
香青兰50Kg,以药材重量10倍的40%乙醇回流提取4次,每次6小时,合并提取液,过滤,浓缩至浸膏。浸膏加水10倍稀释,上聚酰胺柱吸附(60~90目),原药材重量与树脂体积比为1∶2(g∶ml),色谱柱径高比为1∶20,用蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,后用60%乙醇洗脱,流速为2柱体积/小时,乙醇洗脱液减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得,收率为2.0%。
实施例9:片剂的制备
香青兰总黄酮提取物20g,加入玉米淀粉40g,糊精25g,充分混匀,制颗粒,干燥,整粒,加适量滑石粉,压片,即得。
实施例10:胶囊剂的制备
香青兰总黄酮提取物20g,加入淀粉40g、糊精20g,微晶纤维素10g,充分混匀,制颗粒,干燥,整粒,加入适量硬脂酸镁,装胶囊,即得。
用实施例1制得的提取物进行药效学和毒理学研究:
一、香青兰总黄酮提取物对犬心肌缺血的保护作用
1、仪器与试剂:
BioPAC多导生理信号采集分析系统,美国BioPAC公司;CBI激光多普勒血流计,美国CBI公司;KNOE PRO型全自动生化分析仪,芬兰康艺仪器公司;AVL945型血气分析仪。
阳性药:复方丹参片,0.25g/片,广州白云山和记黄埔中药有限公司产品;
2、试验动物:杂种犬40只,体重11.0~16.0kg,雌雄兼有。
3、香青兰总黄酮对麻醉犬急性心肌缺血的影响
正常健康犬20只,雌雄兼有,随机分为4组,即香青兰总黄酮大剂量组20mg/kg,香青兰总黄酮小剂量组10mg/kg,阳性对照药复方丹参片100mg/kg及心肌缺血模型组。动物经2.5%戊巴比妥钠(25mg/kg)静脉麻醉,分离气管并插管,备接电动呼吸器行人工呼吸。分离股静脉备用。犬右侧卧位,于左侧第四肋间隙开胸,做心包床,分离冠状动脉左前降支1/2处,引线备结扎用。将心外膜电极缝于心外膜上,经波段开关与BioPAC多导生理信号采集分析系统相连记录心外膜电图。结扎冠状动脉后30min记录心外膜电图,记录30个导联ST段移位的总值(∑-ST)及ST段移位超过2mv的导联数(N-ST)作为药前值。经十二指肠给药,心肌缺血模型组给予生理盐水。分别记录给药开始后15min、30min、60min、90min、120min、180min及240min的心外膜电图,计算∑-ST、N-ST及其变化率。同时分别于给药前和给药后2h、4h由犬股静脉取血检测CK-MB、CK、AST、LDH。给药后4h,经左心耳根部向左房注入碳素墨水1.0ml/kg,迅速取下心脏,去除脂肪、心房及右室肌,于-20℃下冰冻30~40min,称重。在冠状动脉结扎点下平行冠状沟将左心室切成等厚的5片,分别称重,用求积仪测量每片心肌两面碳素墨水染色区(非缺血区)及未染色区(缺血区)面积,计算缺血区占左心室肌重量的百分率。然后将5片心肌置于37℃ N-BT染液中,振摇染色15min取出,如上测出梗塞区及非梗塞区面积,计算梗塞区占左心室肌重量的百分率,并计算出梗塞区占缺血区心肌重量的百分率。结果表明,香青兰总黄酮大剂量组给药后180min~240min可以明显减轻麻醉犬急性心肌缺血程度(∑-ST),与心肌缺血模型组比较有明显差异(p<0.05);小剂量组有一定药效作用,但无统计学意义。复方丹参片给药240min明显减轻麻醉犬急性心肌缺血程度(p<0.05)。香青兰总黄酮大剂量组给药后180min~240min明显缩小麻醉犬急性心肌缺血范围(N-ST),与心肌缺血模型组比较有明显差异(p<0.05),小剂量组无统计学意义,但有缩小趋势。复方丹参片给药240min明显缩小麻醉犬急性心肌缺血范围。用N-BT染色显示的心肌梗塞面积与心外膜电图测定的结果一致。
二、香青兰总黄酮提取物急性毒性试验
取正常小鼠20只,雌雄各半,灌胃给予香青兰总黄酮提取物,高剂量达到允许的最大给药浓度和小鼠最大给药体积,结果动物无一死亡,健康情况良好,皮毛光亮,活动度良好。14天后处死动物,肉眼观察主要脏器,未见明显异常。表明该提取物毒性极小。
结论:药效学研究结果表明,香青兰总黄酮经肠道给药可以明显缩小动物模型组心肌缺血范围,可用于治疗缺血性冠心病、心绞痛,毒性实验表明,该提取物毒性极低。
Claims (8)
1.一种香青兰总黄酮提取物,其特征在于:其总黄酮含量大于50%,总黄酮提取物中田蓟苷的含量大于5.0%,其是通过以下方法制备的:
(1)将香青兰地上部分粉碎,用0~95%乙醇回流提取1~8次,每次溶剂用量为原料药材重量的1~20倍,每次提取时间为0.5~10小时,合并提取液,过滤,回收乙醇,浓缩得浸膏;
(2)将上述得到的浸膏加水稀释,加水量为浸膏重量的2~20倍,然后上大孔树脂柱或聚酰胺柱吸附,浸膏重量与吸附填料体积的比是1∶0.5~10,单位g∶ml,色谱柱径与柱高比为1∶1~30,然后依次用水和浓度为5~95%的乙醇洗脱,流速为0.5~3.5个柱体积/小时;
(3)收集乙醇洗脱液,进行减压浓缩或真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥,即得香青兰总黄酮提取物。
2.一种香青兰总黄酮提取物的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将香青兰地上部分粉碎,用0~95%乙醇回流提取1~8次,每次溶剂用量为药材重量的1~20倍,每次提取时间为0.5~10小时,合并提取液,过滤,回收乙醇,浓缩得浸膏;
(2)将上述得到的浸膏加水稀释,加水量为浸膏重量的2~20倍,然后上大孔树脂柱或聚酰胺柱吸附,浸膏重量与吸附填料体积的比是1∶0.5~10,单位g∶ml,色谱柱径与柱高比为1∶1~30,然后依次用水和浓度为5~95%的乙醇洗脱,流速为0.5~3.5个柱体积/小时;
(3)收集乙醇洗脱液,进行减压浓缩或真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥,即得香青兰总黄酮提取物。
3.权利要求1所述的一种香青兰总黄酮提取物在制备治疗动脉硬化、冠心病、心绞痛药物中的应用。
4.权利要求1所述的一种香青兰总黄酮提取物在制备预防动脉硬化、冠心病、心绞痛保健品中的应用。
5.根据权利要求3或4所述的应用,其特征在于:是将香青兰总黄酮提取物与磷脂按照重量比1∶0.2~1∶25的比例制成磷脂复合物。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述磷脂为大豆磷脂或卵磷脂。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:将磷脂复合物直接制成口服制剂。
8.根据权利要求3或4所述的应用,其特征在于:将香青兰总黄酮提取物与医学上可接受的辅料混合制成胶囊剂、片剂、散剂、颗粒、口服液、酒剂、丸剂、微丸剂、合剂、酊剂中的任意一种。
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