CN111920848A - 一种抗菌抗氧化外用软膏及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗菌抗氧化外用软膏及其制备方法,由基质45~75份,水15~25份,香青兰提取物5~15份,乳化剂1~10份,防腐剂0.1~1份构成。按比例将基质放入烧杯水浴加热,融化后的基质中加入一定量的香青兰提取物,搅拌溶解,得有机相;然后在常温下将乳化剂加入水中,溶解后,加防腐剂,搅拌均匀,得水相;将水相缓慢加入有机相中,顺时针搅拌至半固体状,自然冷却后即得产品。采用本发明配方及工艺制得的软膏有效提高了香青兰提取物的稳定性,保持显著的抗菌、抗氧化能力,有效治疗因细菌感染、氧化而引起的各种皮肤症状。其次,经证实该软膏透皮性好,皮肤易吸收,安全无副作用;且工艺简单,疗效确切,适合于大规模生产。
Description
技术领域
本发明属于皮肤外用医药领域,涉及一种抗菌抗氧化外用软膏的制备方法以及采用该方法制得的抗菌抗氧化外用软膏。
背景技术
皮肤位于体表,是机体抵御外界各种刺激的第一道防线,可以通过调节水分蒸发来保护身体免受外部感染。细菌感染是临床上常见的皮肤病。然而,抗生素药物的不合理使用是催生细菌耐药的重要原因。随着抗生素的大量应用,耐药菌感染呈现出增长趋势,尤其是多重耐药菌感染,在抗菌药物选择方案有限的情况下,已成为全球关注的焦点。目前,外界污染、放射线照射等因素造成人体产生自由基。研究表明,癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关,皮肤细胞中的过量自由基引起氧化应激并促进皮肤老化。已提出许多抗氧化物质来保护皮肤免受由过量自由基引起的细胞损伤。因此,抗氧化产品研发也是市场最重要的功能性诉求之一。
香青兰(Dracocephalum moldovica L.)为唇形科青兰属植物,系蒙古族和维吾尔族习惯药用植物,主要分布于我国华北、东北、西北等省区,尤其是内蒙古和新疆地区资源丰富。香青兰药用部分富含挥发油、黄酮类、萜类、苯丙素类、多酚类和多糖类等多种化学成分,具有缓解心绞痛、改善心肌缺血、降低血粘度和血小板聚集率等功效作用。开发和研究香青兰更多更好的医药功效,是许多中医药学领域的重要研究课题之一。最近发现,香青兰提取物在杀菌、消炎、抗氧化上具有很好的效果,对于各类细菌具有广谱的杀菌能力,并有很强的清除自由基的作用。但香青兰提取物溶解性、稳定性、透皮速率均不理想,而且,关于香青兰提取物的制备方法研究较少,也没有关于香青兰提取物用于治疗皮肤病的相关报道。
因此,提供一种稳定性好、透皮速率高的香青兰提取物外用软膏及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
鉴于上述不足,本发明目的是提供一种抗菌抗氧化外用软膏及其制备方法。该软膏中的有效活性成份香青兰提取物具有抗菌、抗氧化能力,能有效治疗因细菌感染、氧化而引起的各种皮肤症状。该软膏安全、绿色、无副作用。
本发明采用下述技术方案实现:
一种抗菌抗氧化外用软膏,包括:
基质45~75份;
水15~25份;
香青兰提取物5~15份;
乳化剂1~10份;
防腐剂0.1~1份。
进一步的,该抗菌抗氧化外用软膏,包括:
基质60份;
水20份;
香青兰提取物10份;
乳化剂5份;
防腐剂0.5份。
进一步的,所述基质为二甲基硅油、液体石蜡、石蜡、甘油明胶、凡士林、蜂蜡中的一种或几种。
进一步的,所述香青兰提取物包括香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物。
进一步的,所述乳化剂为单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸三乙醇胺中的一种或几种。
进一步的,所述防腐剂为尼泊金乙酯、苯甲酸钠、乙醇、醋酸氯己定、薄荷油中的一种或几种。
本发明还公开了一种制备上述任一抗菌抗氧化外用软膏的方法,包括:
(1)将基质放入烧杯,置于水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将乳化剂加入水中,溶解后,加防腐剂,搅拌均匀,得水相备用;
(3)将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
进一步的,步骤(1)所述水浴温度为60~80℃。
本发明还公开了一种根据上述任一制备方法制得的抗菌抗氧化外用软膏。
本发明还公开了上述任一抗菌抗氧化外用软膏在皮肤病治疗中的应用,使用时直接用于人体,药物与人体之间没有裱褙材料和胶布。
本发明的有益效果在于:
(1)采用本发明独特的配方制得的软膏,能有效提高香青兰提取物的稳定性,保持抗菌、抗氧化能力,有效治疗因细菌感染、氧化而引起的各种皮肤症状。 且有效解决了传统香青兰提取物软膏透皮性差、皮肤吸收能力不佳的缺陷,最终得到的软膏透皮性好,皮肤易吸收,且安全无副作用。
(2)本发明制得的软膏药源广泛,工艺简单,价格低廉,疗效确切,适合于大规模生产,具有显著的临床价值与市场价值。
具体实施方式
实施例1
一种抗菌抗氧化外用软膏的制备方法
(1)将50.2g蜂蜡、19.5g液体石蜡、2.35g凡士林、2.75g石蜡混合后放入烧杯,70℃水浴加热融化,融化后的基质加入14.6g香青兰提取物粉末(该香青兰提取物由香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物),充分搅拌溶解,形成有机相;
(2)常温下将2.5g单硬脂酸甘油酯加入20g纯净水中,溶解后,加入0.1g尼泊金乙酯,搅拌均匀,形成水相;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边不断地顺时针搅拌,至溶液呈半固体状,自然冷却后即得软膏。
实施例2
(1)将二甲基硅油14.3g、液体石蜡20.1g、甘油明胶28.7g放入烧杯,置于60℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)9.6g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将单硬脂酸甘油酯3.3g、十二烷基硫酸钠4.7g加入水22.5g中,溶解后,加醋酸氯己定0.1g、薄荷油0.4g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例3
(1)将石蜡22.3g、甘油明胶18.9g、凡士林30.5g放入烧杯,置于62℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)8.9g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将硬脂酸三乙醇胺7.2g加入水22.4g中,溶解后,加苯甲酸钠0.35g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例4
(1)将甘油明胶13.3g、凡士林17.9g、蜂蜡33.6g放入烧杯,置于75℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)9.6g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将单硬脂酸甘油酯3.1g、十二烷基硫酸钠0.9g、硬脂酸三乙醇胺4.2g加入水17.8g中,溶解后,加苯甲酸钠0.2g、乙醇0.3g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例5
(1)将液体石蜡25.7g、凡士林35.9g放入烧杯,置于65℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)8.9g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将单硬脂酸甘油酯4.6g加入水20.3g中,溶解后,加醋酸氯己定0.7g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例6
(1)将甘油明胶45.2g放入烧杯,置于60℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)5.8g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将单硬脂酸甘油酯1.2g加入水15.1g中,溶解后,加尼泊金乙酯0.1g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例7
(1)将甘油明胶60.8g放入烧杯,置于70℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)9.7g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将单硬脂酸甘油酯5.4g加入水20.8g中,溶解后,加尼泊金乙酯0.5g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例8
(1)将甘油明胶75g放入烧杯,置于80℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)15g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将单硬脂酸甘油酯10g加入水25g中,溶解后,加尼泊金乙酯1g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例9
(1)将凡士林15.1g、蜂蜡30.5g放入烧杯,置于60℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)5.6g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将十二烷基硫酸钠0.5g、硬脂酸三乙醇胺0.5g加入水15g中,溶解后,加乙醇、薄荷油0.1g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
实施例10
(1)将凡士林30.3g、蜂蜡45.2g放入烧杯,置于80℃水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物(香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物)15.6g,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将十二烷基硫酸钠6.5g、硬脂酸三乙醇胺3.7g加入水25.1g中,溶解后,加乙醇0.5g、薄荷油0.5g,搅拌均匀,得水相备用;
(3)70℃条件下,将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
试验例1
抑菌实验
1.1药敏纸片的制备将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片,直径为6.0mm,置于干燥洁净的试管内,放入高压灭菌锅中经121℃、15~20min高压灭菌后,取出放入恒温干燥箱内进行干燥。取经干燥后的纸片一定数量,放入实施例1、2、3、4、5、6供试溶液中,浸润后备用。
1.2培养基的制备在容量为1000ml的三角烧瓶中加入蒸馏水1000ml,放在电炉上加热。用天平准确称取35g营养琼脂,放入三角烧瓶中并不断搅拌使琼脂完全溶解,然后放入高压灭菌锅中经121℃、15~20min高压灭菌,取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中,厚度约3~5mm,冷却凝固后备用。
1.3菌株的培养在无菌操作条件下,用接种环取金黄色葡萄球菌菌株一环,用划线法接种在制作好的培养基中,然后用不同接种环分别以同样方法对A组链球菌进行接种。把各菌种置37℃恒温培养箱中培养24小时,24小时后取出放入4℃冰箱中保存备用。
1.4体外抑菌试验分别取上述菌株的新鲜培养物,在无菌操作条件下,用不同涂布棒均匀涂抹在接种过不同菌种的琼脂培养基上,再用无菌镊子,将在制备实施例1、2、3、4、5、6供试溶液中浸润后的纸片均匀间隔贴于各琼脂培养基表面,轻压纸片使接触良好,放入37℃恒温培养箱中,24小时后取出,观察抑菌圈,测量并记录结果。结果判断:以抑菌圈直径小于10mm为低度敏感(+),10~15mm为中度敏感(++),大于15mm为高度敏感(+++)。
1.5最低抑菌浓度(MIC)测定目前国内外尚无统一中草药对细菌的MIC标准,故参照文献中同类实验的标准作为判断标准,即MIC<7.81mg/ml生药浓度时为较高敏感,当MIC在7.81~250.00mg/ml生药浓度时为中度敏感,当MIC>250.00mg/ml生药浓度时为不敏感。具体结果如表1所示:
表1 各组实施例制得的乳膏体外抑菌效果
根据表1结果可知,本发明软膏对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人状葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、屎肠球菌及粪肠球菌等7种革兰阳性病原菌具有抑制作用,其中,金黄色葡萄球菌显示为高度敏感,其他菌株显示为中度敏感。
试验例2
体外抗氧化试验
对本发明实施例1制得的软膏性体外抗氧化活性测定。
2.1超氧阴离子的清除实验
参照参照《中国调味品》,2017年12月第42卷第12期,枸杞叶黄酮类化合物体外清除自由基作用研究中的方法并略做修改。取5mL,0.05 mol/L Tris-HCl缓冲溶液(pH 8.2)于具塞试管中,25℃水浴中预热20min,分别加入1 mL不同浓度(0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 mg/mL)的样品溶液,再加入25℃预热的3mmol/L的邻苯三酚溶液0.5mL,混匀后于25℃水浴中反应5min,加入1mL,8mmol/L的盐酸终止反应,在299nm处测定溶液的吸光度,其值记为Ai;空白对照组以相同体积的蒸馏水代替样品溶液在紫外可见分光光度计下测定溶液的吸光度,其值记为A0;以0.5mL的蒸馏水代替邻苯三酚溶液在299 nm处测定吸光度,其值记为Aj。按照公式(1)计算得出清除率SR(%)。
SR(%)=[A0-(Ai-Aj)]/A0×100.0%。(1)
2.2羟基自由基的清除活性测定
取12支25 mL的具塞试管并编号,分别向1~5号具塞试管中加入1mL 0.15 mg/mL的邻二氮菲溶液、2mL、pH 7.4的PBS缓冲溶液、1mL、0.2mg/mL的FeSO4溶液摇匀。将0.2mg/mL的样品溶液以0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mL分别加入试管中,混匀。6号、7号试管分别标记为受损伤管和空白参照管,8~12号试管以蒸馏水代替样品作为样品参照。除空白参照管外,其余试管于37℃水浴中恒温1 h,于波长536nm处测定吸光度值,按照公式(2)计算得出清除率SR(%);式中:A1为损伤管的吸光度值;A2为空白参照管的吸光度值;A3为样品管的吸光度值;A4为样品参照管的吸光度值。以Vc和BHT为对照。
SR(%)=[ (A1- A2)- (A3-A4)]/A1×100.0%。(2)
2.3DPPH+的清除活性测定
量取2mL不同浓度(0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mg/mL)的样品溶液于具塞试管中,分别加入2mL,70%的乙醇溶液混匀,避光静置60min后在波长517nm处测定其吸光度,其值记为Aj;分别量取样品溶液2mL及2mL DPPH溶液(浓度为2.0×10-4mol/L)于具塞试管中,混匀后避光静置60 min,在波长517nm处测定其吸光度,其值记为Ai;最后再量取70%乙醇溶液2mL,DPPH溶液2mL置于具塞试管中,混匀避光静置60 min,在波长517 nm处测定其吸光度,其值记为A0,按照公式(3)计算得出清除率SR(%)。同时以Vc和BHT为阳性对照。
SR(%)=[A0-(A0-A1)]/A0×100.0%。(4)
2.4ABTS+的清除活性测定
制备浓度为2mg/mL的样品溶液,以Vc和BHT为阳性对照。配制浓度为7 mmol/L的ABTS溶液,与等体积浓度为2.45mmol/L的过硫酸钾溶液混合,避光、4 ℃条件下放置12~16 h。 用蒸馏水稀释ABTS溶液使其在734 nm下的吸光值在(0.7±0.02)之间,取ABTS溶液3.9mL,加入0.1mL不同浓度(0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mg/mL)的样品溶液,摇匀,室温放置6 min,于734nm波长处测定吸光度。用蒸馏水代替样品作为空白对照,按照公式(4)计算得出清除率SR(%)。式中: A0为空白管的吸光值;A1为样品的吸光值。
SR(%)=[A0-(A0-A1)]/A0×100.0%。(4)
2.5本发明软膏的体外抗氧化结果
本发明实施例1制得的软膏在不同浓度情况下对各类氧化物的清除活性结果比较详见表2.
表2
根据表2结果可知,本发明软膏对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH+、ABTS+四种自由基均有较好的清除效果,在0.5mg/ml浓度时,其超氧阴离子、羟基自由基、DPPH+和ABTS+最大清除率分别是99.1%,98.8%, 79.5%,93.7%。由此可见,采用本发明工艺及配方制得的软膏具有显著的抗氧化活性。
试验例3
软膏稳定性分析
3.1离心稳定性:将实施例1制得的软膏取10g装入带刻度的离心管中,2500r/min转速离心30min,结果显示,软膏无分层现象。
3.2耐热耐寒稳定性:将实施例1制得的软膏取三份,每份10g,装入乳膏盒中,分别置于烘箱(39±1)℃、室温(25±3)℃、冰箱(5±2)℃中30天,观察其稠度、失水、色泽、均匀性以及是否有霉败现象。结果显示,在高温(烘箱)、常温(室温)、低温(冰箱)环境下,所制得的软膏稠度基本无变化,均未出现变硬失水现象;且色泽光亮,无变色;均匀性良好,无霉变。
3.3活性稳定性:将实施例1制得的软膏取三份,每份10g,装入乳膏盒中,置于室温(25±3)℃,分别放置30天、60天和90天,观察其抗菌、抗氧化活性。结果显示,在常温环境下,所制得的软膏抗菌、抗氧化活性基本无变化。
试验例4
透皮试验
利用透皮测试仪测量本发明软膏的透皮性能,选择豚鼠皮肤为透皮模型,断颈处死,用8%的Na2S溶液脱毛,取背皮,剥离皮下脂肪和筋膜,用生理盐水清洗干净后,置于-20℃冰箱中冷冻保存,备用。称取本发明实施例1软膏,置给药池中,均匀涂于鼠皮上。在37℃条件下,给药2 h、4 h、8 h、16h和24h后于接收池收集透过的香青兰提取物,并测定浓度以计算累积渗透量。设置纯香青兰提取物对照组。已知香青兰提取物中田蓟苷含量较高,因此,通过HPLC法测定各组接收池中田蓟苷的含量,可以反映各组药物的透皮性能。
透皮吸收的单位面积累积渗透量(Q)计算公式:
式中V0为接收液总体积,V为取样量,qn为第n次实测单位面积渗透量;
qn=样品峰面积×对照品浓度×接收液取样量/(对照品峰面积×释放面积);
qi为第n次前各时间点每次测得的单位面积渗透量。
具体结果如表3所示:
表3 两组软膏在不同时间时对豚鼠皮肤的透皮性能比较(ng/cm2)
根据表3结果显示,本实施例1制得的软膏在第2h、第4h、第8h、第16h及第24h时,软膏组的田蓟苷单位面积累积透皮吸收量分别为5.25±0.56 ng/cm2,20.37±7.06 ng/cm2,39.01±10.42 ng/cm2,80.95±15.87 ng/cm2和121.80±17.49 ng/cm2,而纯香青兰提取物组的田蓟苷单位面积累积透皮吸收量分别为2.29±0.83 ng/cm2,5.37±1.32 ng/cm2,7.12±1.29 ng/cm2,9.87±1.95 ng/cm2和9.91±2.09 ng/cm2。与纯香青兰提取物相比,本发明软膏具有良好透皮性能,显著提高了香青兰提取物的透皮率(※P<0.01),具有显著的统计学意义,进一步证明了本发明软膏的。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种抗菌抗氧化外用软膏,包括:
基质45~75份;
水15~25份;
香青兰提取物5~15份;
乳化剂1~10份;
防腐剂0.1~1份。
2.根据权利要求1所述的抗菌抗氧化外用软膏,包括:
基质60份;
水20份;
香青兰提取物10份;
乳化剂5份;
防腐剂0.5份。
3.根据权利要求1或2所述的抗菌抗氧化外用软膏,其中:
所述基质为二甲基硅油、液体石蜡、石蜡、甘油明胶、凡士林、蜂蜡中的一种或几种。
4.根据权利要求1或2所述的抗菌抗氧化外用软膏,其中:
所述香青兰提取物包括香青兰乙醇浸膏经萃取、冷冻干燥获得的乙酸乙酯提取物。
5.根据权利要求1或2所述的抗菌抗氧化外用软膏,其中:
所述乳化剂为单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸三乙醇胺中的一种或几种。
6.根据权利要求1或2所述的抗菌抗氧化外用软膏,其中:
所述防腐剂为尼泊金乙酯、苯甲酸钠、乙醇、醋酸氯己定、薄荷油中的一种或几种。
7.一种制备权利要求1~6所述任一抗菌抗氧化外用软膏的方法,包括:
(1)将基质放入烧杯,置于水浴加热融化,融化后的基质中加入香青兰提取物,搅拌溶解,得有机相备用;
(2)于常温下,将乳化剂加入水中,溶解后,加防腐剂,搅拌均匀,得水相备用;
(3)将水相缓慢加入有机相中,边加边顺时针搅拌,至呈半固体状后,自然冷却,即得产品。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其中:
步骤(1)所述水浴温度为60~80℃。
9.一种根据权利要求7或8所述制备方法制得的抗菌抗氧化外用软膏。
10.一种根据权利要求1、2、9任一所述的抗菌抗氧化外用软膏在皮肤病治疗中的应用,使用时直接用于人体,药物与人体之间没有裱褙材料和胶布。
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