CN115177782B - 一种高透气、促愈合的液体创可贴及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,包括如下重量百分数的原材料:成膜母液96.5%~99.9%、矫味剂0%~2%、含干细胞外泌体的脂质体0.1%~1.5%;所述成膜母液的制备方法为:将羟乙基纤维素与多元醇在溶剂的存在下,加入相转移剂,在无机酸的催化作用下进行醚化反应,反应结束后取上层有机相用水萃取直至所述有机相为中性,该中性的有机相即为所述成膜母液。本发明将羟乙基纤维素进行醚化改性后制得的成膜材料具有较好的成膜性,涂抹后,可快速形成防水、隔菌、保湿、高柔韧性、高透气性、低刺激性气味的液体创可贴薄膜。
Description
技术领域
本发明涉及医疗器械技术领域,具体涉及一种高透气、促愈合的液体创可贴及其制备方法。
背景技术
皮肤是一个复杂的器官,具有重要的身体屏障功能,且很容易受到各种各样的伤害。例如,急性创伤、慢性皮肤创伤,急性烧伤、寒冷、高温、干燥以及紫外线等都会使肌肤屏障受损。皮肤创面愈合是一个复杂而精细的过程,大致可分为三个阶段:炎症期、增殖期和重塑期。创伤敷料在治疗和修复创面上应用十分广泛,它可以保护创面不受外界因素的干扰如微生物的感染等,通过人体强大的自我修复能力,等待创面的自然愈合。
传统创可贴存在诸多弊端:不防水、透气性差;封闭效果差,细菌易进入感染伤口;伤口愈合周期长;更换时易造成伤口机械性损伤;不能降解,造成垃圾污染。液体创可贴的出现,解决了传统创可贴的某些弊端。液体创可贴最主要的特点就是在创面上形成一层薄膜,具有良好的创面防护的基本功能,但仍存在着透气性差、柔韧性差和创面愈合速度慢等缺点。目前市售占比较大的液体创可贴产品主要由成膜材料(聚乙烯醇、硝基纤维素等);促进成膜剂(乙酸乙酯、乙酸丁酯等);改性剂(蓖麻油、橄榄油、苯甲醇等)组成。虽然具有良好的创面防护及防水等基本功能,但仍存在刺激性气味大、透气性和创面促愈性能不好等缺点,相比传统创可贴产品,以上几方面应用关键性能有待改善。
中国专利CN11859989A公开了一种液体创可贴及其制备方法,按重量百分数计包括乙酸丁酯50~55份,苯甲醇17~19份,乙酸乙酯14~15份,硝化纤维素5~10份,丙二醇3~5份,聚乙二醇1~2份和生育酚乙酸酯1~2份,包含EGF、FGF细胞因子的脂质体5~10份。该专利采用低氮硝化纤维素(又称硝基纤维素)作为成膜材料,虽然具有良好的成膜特性和防水特性,涂于皮肤创面可快速形成防水、柔软的保护膜,具有阻菌、良好的防水,促进伤口愈合等特点。但其还存在一些问题如:采用低氮纤维素成膜的透气性欠佳;仅包含EGF、FGF细胞因子的脂质体直接作用创面的促创面修复速度较慢(伤口愈合过程是依赖于生长因子、细胞因子和化学因子协调细胞过程的复杂信号的整合)。
因此,研发一种兼具透气防水性能好、抑菌抗炎可快速促伤口愈合、柔韧性佳亲肤性能好,气味舒适低刺激性的液体创可贴产品,以更好满足大众日常生活护理需求,创造良好的社会效益。
发明内容
为了解决现有液体创可贴透气性欠佳及创面修复速度较慢的技术问题,而提供一种高透气、促愈合的液体创可贴及其制备方法。本发明的液体创可贴具有高透气性,且能够促进创面快速愈合。
为了达到以上目的,本发明通过以下技术方案实现:
一种高透气、促愈合的液体创可贴,包括如下重量百分数的原材料:成膜母液96.5%~99.9%、矫味剂0%~2%、含干细胞外泌体的脂质体0.1%~1.5%;
所述成膜母液的制备方法为:将羟乙基纤维素与多元醇在溶剂的存在下,加入相转移剂,在无机酸的催化作用下进行醚化反应,反应结束后取上层有机相用水萃取直至所述有机相为中性,该中性的有机相即为所述成膜母液。未改性的羟乙基纤维素作为成膜物质获得的液体创可贴的韧性及透气性均较差,故而需对其进行改性。
进一步地,所诉多远醇为三羟基丙烷;所述溶剂为水和有机溶剂的混合物;所述相转移剂为十二烷基苯磺酸钠,可保证反应完全;所述无机酸为质量浓度为80%以上的浓磷酸。
再进一步地,所述水与所述有机溶剂的体积比为2:1;所述有机溶剂为正己烷和/或石油醚。在体温下易挥发,达到快速成膜效果。
进一步地,所述醚化反应的过程是在55℃~65℃的温度下进行反应4h~8h。
优选地,所述醚化反应的过程是在60℃的温度下进行反应4h。
进一步地,所述羟乙基纤维素、所述多元醇的质量比为1:2;所述羟乙基纤维素与所述多元醇的总质量与所述溶剂的体积之比为1g:5mL;所述相转移剂的用量为所述羟乙基纤维素质量的0.5%;所述无机酸的用量为所述羟乙基纤维素质量的0.01%。
进一步地,所述矫味剂为薰衣草油。
进一步地,所述含干细胞外泌体的脂质体中的干细胞外泌体为间充质干细胞的外泌体、脂肪源间充质干细胞的外泌体、人羊膜干细胞的外泌体中的一种或多种。
再进一步地,所述含干细胞外泌体的脂质体其制备方法为:
(1)收集干细胞培养液上清,然后在4℃下进行第一次离心收集上清;将第一次离心后得到的上清与外泌体提取试剂混合,室温下静置2.5h生成干细胞外泌体,再在4℃下进行第二次离心,第二次离心后弃去上清收集干细胞外泌体;
(2)将得到的所述干细胞外泌体与脂质体混合,在4℃下搅拌2h得到混合悬液,然后进行冷冻干燥处理,制得含干细胞外泌体的脂质体。该干细胞外泌体是一种能被大多数干细胞分泌的微小囊泡,直径大约在30~150nm,由脂质、蛋白质和核酸组成。干细胞外泌体被包裹在坚硬的脂质体中,脂质体是具有双层膜结构的物质能够保护外泌体,使外泌体能够在创面组织中长距离移动。当涂抹于伤口时脂质体双层膜可溶于组织液,干细胞外泌体内复杂的混合因子能作为信号分子传递给皮肤内其他细胞,从而改变其他细胞的功能,达到快速修复的效果。
本发明另一方面提供上述高透气、促愈合的液体创可贴的制备方法,包括如下步骤:将成膜母液与矫味剂先混合均匀,然后加入含干细胞外泌体的脂质体,再混合均匀后室温下分装即可。
有益技术效果:
本发明将羟乙基纤维素进行改性,采用羟乙基纤维素与三羟基丙烷进行羟基间的脱水醚化反应产生的醚化产物作为液体创可贴的成膜材料,该醚化产物的分子链上具有多个未反应的羟基与接枝上的三羟基丙烷小分子,接枝上的三羟基丙烷小分子能够实现羟乙基纤维素改性后的脂溶性并改善其柔韧性,使其溶于该反应体系的有机溶液中并改善成膜后的柔韧性,同时链上的多个未反应的羟基使得改性后的羟乙基纤维素具有较好的亲肤性,成膜后形成创可贴在使用过程中不受关节活动的限制,使用更方便。本发明中在液体创可贴中加入矫味剂如薰衣草油一方面可有效降低有机溶剂的气味,另一方面薰衣草油还具有抗菌消炎的作用。本发明在液体创可贴中加入干细胞外泌体,能够控制炎症,促进抗炎介质释放以及侧支血管的形成,进而改善损伤创面的局部微环境,加快创面愈合速度。
本发明将羟乙基纤维素进行醚化改性后制得的成膜材料具有较好的成膜性,涂抹后,可快速形成防水、隔菌、保湿、高柔韧性、高透气性、低刺激性气味的薄膜。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的,决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
除非另外具体说明,否则在这些实施例中阐述的数值不限制本发明的范围。对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法可能不作详细讨论,但在适当情况下,所述技术、方法应当被视为说明书的一部分。在这里示出和讨论的所有示例中,任何具体值应被解释为仅仅是示例性的,而不是作为限制。因此,示例性实施例的其它示例可以具有不同的值。
此外,需要说明的是,使用“第一”、“第二”等词语来限定离心,仅仅是为了便于对各步骤中离心进行区别,如没有另行声明,上述词语并没有特殊含义,因此不能理解为对本发明保护范围的限制。
以下实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照国家标准测定;若没有相应的国家标准,则按照通用的国际标准、或相关企业提出的标准要求进行。除非另有说明,否则所有的份数为重量份,所有的百分比为重量百分比。
实施例1
含干细胞外泌体的脂质体的制备:
(1)收集干细胞培养液上清,然后在4℃下进行第一次离心(离心力4000g,离心15min)收集上清;将第一次离心后得到的上清与外泌体提取试剂(常规商品化外泌体提取试剂盒)混合,室温下静置2.5h生成干细胞外泌体,再在4℃下进行第二次离心(离心力10000g,离心65min),第二次离心后弃去上清收集干细胞外泌体;
(2)将得到的所述干细胞外泌体与脂质体物(商品化的脂质体,是一种人工膜)按照质量比2:5混合,在4℃下搅拌2h得到混合悬液,然后在-45℃下进行冷冻干燥处理30min,制得含干细胞外泌体的脂质体。
其中干细胞分别为间充质干细胞、脂肪源间充质干细胞或人羊膜干细胞,生成的干细胞外泌体对应分别为间充质干细胞的外泌体、脂肪源间充质干细胞的外泌体、人羊膜干细胞的外泌体。
实施例2
羟乙基纤维素的醚化改性(即成膜母液的制备)方法为:将120g羟乙基纤维素与240g三羟基丙烷在1200mL水和600mL环己烷的存在下,加入0.6g十二烷基苯磺酸钠作为相转移催化剂,以0.012g磷酸作为催化剂,于60℃下进行醚化反应4h,反应结束后取上层有机相用水萃取直至所述有机相为中性,该中性的有机相即为成膜母液。
上述反应中发生了羟乙基纤维素与三羟基丙烷间羟基缩合的醚化反应,成膜母液的成分中至少包括一种羟乙基纤维素与三羟基丙烷间羟基缩合后的醚化产物。醚化产物中仍然含有未反应的羟基,羟乙基纤维素与三羟基丙烷间羟基缩合后的醚化产物其羟乙基纤维素的部分链上接枝了三羟基丙烷,具有一定的疏水性且还具有增韧的作用,醚化产物溶于有机溶剂中从而有效的形成液体创口贴的成膜材料,而醚化产物中羟乙基纤维素链上残余的羟基及接枝三羟基丙烷后多元醇残余的羟基具有很好的亲肤,增加成型后液体创可贴的舒适度。羟乙基纤维素与三羟基丙烷反应的可能产物结构式为:
实施例3
一种高透气、促愈合的液体创可贴,包括如下重量百分数的原材料:实施例2制得的成膜母液99.4%、薰衣草油0.1%、含干细胞外泌体的脂质体0.5%(间充质干细胞的外泌体)。
实施例4
一种高透气、促愈合的液体创可贴,包括如下重量百分数的原材料:实施例2制得的成膜母液97.7%、薰衣草油0.8%、含干细胞外泌体的脂质体1.5%(脂肪源间充质干细胞的外泌体)。
实施例5
一种高透气、促愈合的液体创可贴,包括如下重量百分数的原材料:实施例2制得的成膜母液98%、薰衣草油0.5%、含干细胞外泌体的脂质体0.5%(人羊膜干细胞的外泌体)。
实施例6
实施例3-5的液体创可贴的制备方法为:将成膜母液与矫味剂先混合均匀,然后加入含干细胞外泌体的脂质体,再混合均匀后室温下分装即可。
实施例7
试验效果
为了进一步阐述本发明产品,对实施例3-5以及同类市售产品进行各项指标的测定。下表1中液体创可贴市售产品1中的成分为:硝基纤维素、异丙醇、乙酸乙酯、柠檬酸三乙酯;液体创可贴市售产品2的成分为:乙基纤维素、乙醇、乙酸乙酯、甘油。
1.性能测试
1.1.成膜性
用毛刷蘸取0.2g液体敷料涂覆于载玻片上,室温固化后,从边缘揭起,得到一层半透明的、有韧性的膜。同时记录成膜时间。
1.2阻水性
按照YY/T 0471.3-2004接触性创面敷料试验方法第3部分:阻水性中的试验方法进行测试,计算阻水性。
1.3阻菌性
按照YY/T 0471.5-2005接触性创面敷料试验方法第5部分:阻菌性中的试验方法进行测试,RODAC板应无粘质沙雷菌生长。
1.4舒适性
按照YY/T 0471.4-2005接触性创面敷料试验方法第4部分:舒适性中的试验方法进行测试,计算伸展性和永久变形。
1.5水蒸气透过率
精确称取液体敷料2.0g于烧杯中,加入20ml的乙酸乙酯充分溶解,搅拌均匀后倾入90mm的玻璃培养皿中,25℃±1℃待溶剂完全挥发后,取下液体敷料薄膜。参考YY/T0471.2接触性创面敷料试验方法第2部分,计算水蒸气透过率。
液体创可贴的物化性能测试试验结果见表1。
表1液体创可贴的物化性能数据
2.生物学性能
2.1细胞毒性
取液体创可贴3g,均匀涂布于90mm玻璃培养皿中,带溶剂挥干后,取膜,备用。
浸提液制备:取膜用剪刀剪成1.0cm×1.0cm小碎块,按0.2g/ml比例用无血清培养基在细胞培养箱37℃±1℃条件下提取24h。按GB/T16886.5-2003中8.2浸提液试验进行,结果应不大于2级。
2.2皮肤刺激性试验
取液体创可贴3g,均匀涂布于90mm玻璃培养皿中,带溶剂挥干后,取膜,备用
按GB/T16886.10-2011中第八部分中刺激与迟发型超敏反应试验方法进行。结果应无刺激性。
2.3微生物限度
按照《中华人民共和国药典(四部)》2020年版非无菌产品微生物限度检查:1105微生物计数法的平皿法和1106控制菌检查法测定。测定结果需氧菌总数应小于100cfu/g;霉菌和酵母菌总数应小于100cfu/g;不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。
2.4皮肤愈合试验
采用SPF级昆明小鼠,雌雄各30只,体重18加±4g。将小鼠背部进行脱毛处理,在脱毛部位进行全层皮肤去除,形成创口面,随机分成5组。第1组使用生理盐水;第2组使用市售产品1;第3组使用实施例3液体创可贴;第4组使用实施例4液体创可贴;第5组使用实施例5液体创可贴。每组小鼠从创伤后4小时给药,间隔24小时,连续给药28天,每天观察开始结痂和脱痂时间,结果见表2。
表2液体创可贴的生物学性能
组别 | 结痂时间(小时) | 脱痂时间(小时) |
第1组 | 156 | 412 |
第2组(市售产品1) | 96 | 234 |
第3组(实施例3) | 76 | 184 |
第4组(实施例4) | 80 | 192 |
第5组(实施例5) | 81 | 186 |
结合表1与表2中的数据,从表1可以看出,本发明液体创可贴具有优良的物理性能和生物学性能。从表2中可以看出,本发明液体创可贴具有较好的促进伤口愈合效果。
由以上实验测试结果可知,本发明液体创可贴具有较市售现有液体创可贴更快的快速成膜、更高的柔韧性、更低的刺激气味以及更快速促进伤口愈合的优点,兼具防水、透气性强的特点。
快速促进伤口愈合的机制可能是:在炎症早期,中性粒细胞是最重要的细胞,负责吞噬和细胞因子的释放来诱发炎症。在炎症后期,间充质干细胞来源的外泌体可促进受体巨噬细胞向抗炎M2表型转变(间充质干细胞释放富含microRNA let-7b的外泌体,当内化时,let-7b可以通过抑制TLR4/NF-κB通路和激活STAT3/AKT通路调节巨噬细胞极化),巨噬细胞成为主导细胞类型,并起控制炎症的作用。间充质干细胞来源的外泌体通过抑制炎性因子分泌,促进抗炎介质释放,以及侧支血管的形成,从而改善损伤局部微环境。增殖期开始于受伤后第2天,参与增殖阶段的细胞功能是复杂的,以迁移、增殖、细胞外基质沉积和血管生成为标志,而脂肪源间充质干细胞的外泌体可以激活AKT通路,加速真皮成纤维细胞和角质形成细胞的迁移和增殖,促进创面快速愈合。正常的疤痕是伤口愈合的重塑期,然而,过度瘢痕是由肌成纤维细胞产生的胶原蛋白异常和皮肤功能丧失造成的,人羊膜干细胞外泌体可通过刺激基质金属蛋白酶-1(MMP-1)控制细胞外基质的沉积来减少瘢痕,促进创面愈合。
通过上述技术方案在所述液体创可贴中加入干细胞外泌体,所述干细胞外泌体,是一种能被大多数干细胞分泌的微小囊泡,直径大约在30-150nm,由脂质、蛋白质和核酸组成。外泌体被包裹在坚硬的脂质体中,脂质体双层膜保护外泌体的内容物,使外泌体能够在组织中长距离移动。当涂抹于伤口时脂质体双层膜可以溶于组织液,外泌体内复杂的混合因子能作为信号分子传递给皮肤内其他细胞,从而改变其他细胞的功能,不论是三者合用还是单独使用均具有促进创面快速愈合功能,达到快速修复的效果。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,包括如下重量百分数的原材料:成膜母液96.5%~99.9%、矫味剂0%~2%、含干细胞外泌体的脂质体0.1%~1.5%;
所述成膜母液的制备方法为:将羟乙基纤维素与多元醇在溶剂的存在下,加入相转移剂,在无机酸的催化作用下进行醚化反应,反应结束后取上层有机相用水萃取直至所述有机相为中性,该中性的有机相即为所述成膜母液。
2.根据权利要求1所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述多元醇为三羟基丙烷;所述溶剂为水和有机溶剂的混合物;所述相转移剂为十二烷基苯磺酸钠;所述无机酸为质量浓度为80%以上的浓磷酸。
3.根据权利要求2所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述水与所述有机溶剂的体积比为2:1;所述有机溶剂为正己烷和/或石油醚。
4.根据权利要求1所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述醚化反应的过程是在55℃~65℃的温度下进行反应4h~8h。
5.根据权利要求4所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述醚化反应的过程是在60℃的温度下进行反应4h。
6.根据权利要求1所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述羟乙基纤维素、所述多元醇的质量比为1:2;所述羟乙基纤维素与所述多元醇的总质量与所述溶剂的体积之比为1g:5mL;所述相转移剂的用量为所述羟乙基纤维素质量的0.5%;所述无机酸的用量为所述羟乙基纤维素质量的0.01%。
7.根据权利要求1所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述矫味剂为薰衣草油。
8.根据权利要求1所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述含干细胞外泌体的脂质体中的干细胞外泌体为脂肪源间充质干细胞的外泌体、人羊膜干细胞的外泌体中的一种或多种。
9.根据权利要求8所述的一种高透气、促愈合的液体创可贴,其特征在于,所述含干细胞外泌体的脂质体其制备方法为:
(1)收集干细胞培养液上清,然后在4℃下进行第一次离心收集上清;将第一次离心后得到的上清与外泌体提取试剂混合,室温下静置2.5h生成干细胞外泌体,再在4℃下进行第二次离心,第二次离心后弃去上清收集干细胞外泌体;
(2)将得到的所述干细胞外泌体与脂质体混合,在4℃下搅拌2h得到混合悬液,然后进行冷冻干燥处理,制得含干细胞外泌体的脂质体。
10.根据权利要求1-9任一项所述的高透气、促愈合的液体创可贴的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:将成膜母液与矫味剂先混合均匀,然后加入含干细胞外泌体的脂质体,再混合均匀后室温下分装即可。
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