CN101584743A - 一种治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,取丹参药材,切片或粉碎成粗颗粒,20~80℃水提取2~4次,分别加水4~12倍量,提取1~3小时;取三七药材,切片或粉碎成粗颗粒,加水煎煮提取2~4次,分别加水4~12倍量,煎煮提取1~3小时;合并丹参水提液与三七水提液,调节pH=1~7,搅匀,静置0.5~12小时,滤过或离心,上清液过大孔吸附树脂柱,水洗至流出液还原糖反应呈阴性,弃水洗液,再用30~100%乙醇洗脱,采集洗脱液;将洗脱液回收乙醇,浓缩干燥,得丹参三七合提物;加入冰片,加入辅料制成片剂、胶囊、软胶囊、口服液、滴丸、喷雾剂或颗粒剂。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域,具体涉及一种治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法。
背景技术
心脑血管疾病是导致人类死亡的第一病种,随着社会生活水平的提高以及人口的老龄化,心脑血管疾病药物的研究成为药物开发的热点。冠状动脉粥样硬化性心脏病,简称冠心病,其病因是由于一些不能渗进动脉壁的血脂类物质如胆固醇、甘油三脂等,沉积在动脉内膜上形成“粥样斑块”后,使得原来富有弹性的动脉变硬,随着动脉内膜上的粥样斑块范围加大,导致血管变窄甚至阻塞,引起心肌缺血、缺氧或坏死。缺血性脑中风(脑梗塞),在急性发作期以及在中风前期和恢复期均是其预防和治疗的重要时机。中医药在上述疾病的预防和治疗中发挥着重要的作用,尤其是以丹参为主要原料的单方或复方制剂均有着确切的疗效,如复方丹参片、复方丹参注射液、精制冠心颗粒、乐麦胶囊等,这些制剂中丹参发挥着主要作用。
近几年来,关干丹参的提取及丹参复方制剂临床应用的报道很多。出现了很多剂型,如复方丹参片、复方丹参滴丸、复方丹参胶襄、复方丹参颗粒、复方丹参气雾剂、复方丹参口服液等。这些产品的研制成功为丹参的临床应用开辟了更为广阔的前景。但这些产品多是采用水煮醇沉法或醇提取的旧工艺,提取过程中温度较高,丹参的水溶性有效成分丹酚酸B大部分丢失或被破坏。另外传统的提取工艺所得产品原生药中非活性成份含量很高,提取物重量一般为原生药的20%至50%左右,其中大部分为非活性物质。传统的丹参制剂多采用醇提法。如根据《中国药典》2005年版一部复方丹参片中丹参需提取三次,第一次加乙醇回流1.5小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至适量,备用;药渣加50%乙醇加热回流1.5小时,提取液滤过,滤液回收乙醇并浓缩至适量,备用;药渣加水煎煮2小时,煎液滤过,滤液浓缩至适量,这种工艺所制成的复方丹参片中的丹参有效成分丹酚酸B由于长时间受热而损失严重;发明专利(专利号ZL 02157377.8)“一种治疗心脑血管疾病的复方丹参制剂及其制备方法”中丹参水提时没有控制温度,使大量的丹酚酸B在高温受热下破坏成活性较低的丹参素和原儿茶醛。
发明内容
本发明所要解决的问题是:如何提供一种治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,该制备方法能克服现有技术中的不足,制备方法简单合理,制备出的药物有效成分破坏少,转移率高,生物利用度高,毒副作用小。
本发明所提出的技术问题是这样解决的:提供一种治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于:
①取以下重量份的处方:
丹参药材 40~90份
三七药材 5~50份
冰片 0.5~10份
②取丹参药材,切片或粉碎成粗颗粒,20~80℃水提取2~4次,分别加水4~12倍量,提取1~3小时,该步骤中有效成分没有遭到破环,转移率高,原制剂是直接加水煎煮,有效成分大量破坏,转移率低;
③取三七药材,切片或粉碎成粗颗粒,加水煎煮提取2~4次,分别加水4~12倍量,煎煮提取1~3小时,现有技术中直接以生药入药,生物利用度低,易带入泥土中的重金属和其他杂质;
④合并步骤②所得的丹参水提液与步骤③所得的三七水提液,调节pH=1~7,搅匀,静置0.5~12小时,滤过或离心,上清液过大孔吸附树脂柱,水洗至流出液还原糖反应呈阴性,弃水洗液,再用30~100%乙醇洗脱,采集洗脱液,该步骤的作用是除去大部分的蛋白质、糖类等吸湿性成分,稳定性更好,可减少服用量,同时降低了包装成本;
⑤将步骤④所得的洗脱液回收乙醇,浓缩干燥,得丹参三七合提物;
⑥加入冰片,加入辅料制成片剂、胶囊、软胶囊、口服液、滴丸、喷雾剂或颗粒剂等。
按照本发明所提供的治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于,在步骤⑤中,洗脱液回收乙醇,浓缩至相对密度1.05~1.25,加乙醇至含醇量达70~90%,冷藏保存2~24小时,滤过,滤液回收乙醇,浓缩干燥,得丹参三七合提物,该步骤可除去一些色素类无效成分,进一步纯化样品,减少服用量,稳定性更好。
按照本发明所提供的治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于,大孔吸附树脂为非极性、弱极性或极性大孔吸附树脂,型号包括:AB-8,HPD-100,D101,DA201,DM130,WLD-3,YPR-II,X5,Dx-5,NKA-9等。
本发明的有益效果:采用本发明所得的药物有效成分破坏少,转移率高,生物利用度高,重金属等杂质含量微少,稳定性好,服用量小,成本低廉,功效明显,毒副作用小,服用方便,质量稳定可靠,具有很好的临床推广运用价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述:
实施例1
称取丹参药材13.5kg,切片,80℃水温浸提取3次,每次所用水的重量为药材重量的8倍,每次1小时,滤过,得滤液A;三七4.24kg,粉碎成粗颗粒,水煎煮提取3次,每次所用水的重量为药材重量的8倍,每次1.5小时,滤过,得滤液B;合并滤液B与滤液A,调节pH=3,搅匀,静置1小时,离心,上清液通过预处理好的HPD-100大孔吸附树脂柱,先用水洗至流出液还原糖反应呈阴性,再用75%乙醇(洗脱剂)洗至流出液无色,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.1,加乙醇至含醇量达80%,冷藏保存12小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩成浸膏,于70℃减压(真空度:-0.08Mpa)干燥,得到干浸膏1.1kg,粉碎,过5号筛,加入可溶性淀粉1kg、硬脂酸镁20g、羧甲基淀粉钠140g,混匀,制粒,干燥。冰片240g,研细,与上述颗粒混匀,压制成10000片,包薄膜衣。每片0.25g,相当于原生药1.8g。所制得的样品以下简称FDS片。
上述制备方法中,所述的丹参的提取方法为浸提,提取次数可为2~4次,提取时间可为1~3小时,丹参饮片的水提温度可为20~80℃;所述的三七提取方法为煎煮,提取次数可为2~4次,提取时间可为1~3小时;所述的洗脱剂所用乙醇浓度可为30-100%;冷藏温度可为0~10℃;所述的辅料可为药学上可接受的辅料(例如淀粉、乳糖、微粉硅胶、滑石粉等),可将本发明的中药复方丹参制剂制成多种剂型。
按以上方法制备的药物,经检测,丹酚酸B转移率为82.1%,人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的总量转移率为90.3%,而出膏率由45.5%降为6.2%,表明该制备工艺科学合理,保留了药物中主要有效成分,同时显著减少了服用量,达到了精制的目的。
实施例2
称取丹参药材14kg,切片,70℃水温浸提取3次,每次所用水的重量为药材重量的10倍,每次1小时,滤过,得滤液A;三七3.8kg,粉碎成粗颗粒,水煎煮提取3次,每次所用水的重量为药材重量的10倍,每次2小时,滤过,得滤液B;合并滤液B与滤液A,调节pH=5,搅匀,静置1小时,离心,上清液通过预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱,先用水洗至流出液还原糖反应呈阴性,再用70%乙醇(洗脱剂)洗至流出液无色,收集洗脱液,回收乙醇并浓缩成浸膏,于75℃减压(真空度:-0.07Mpa)干燥,粉碎,得到浸膏粉1.2kg,过5号筛,加入1.4kg微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素0.1kg、滑石粉0.1kg混匀,制粒,干燥。冰片0.1kg,研细,与上述颗粒混匀,分装,制成胶囊10000粒。每粒0.3g,相当于原生药1.8g。所制得的胶囊以下简称FDS胶囊。
按以上方法制备的药物,经检测,丹酚酸B转移率为84.5%,人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的总量转移率为91.6%,而出膏率为6.7%。
实施例3
称取丹参药材13kg,切片,65℃水温浸提取3次,每次所用水的重量为药材重量的9倍,每次1.5小时,滤过,得滤液A;三七4.78kg,切片,水煎煮提取3次,每次所用水的重量为药材重量的9倍,每次1.5小时,滤过,得滤液B;合并滤液B与滤液A,调节pH=3,搅匀,静置1小时,离心,上清液通过预处理好的D-101大孔吸附树脂柱,先用水洗至流出液还原糖反应呈阴性,再用75%乙醇(洗脱剂)洗至流出液无色,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.15,加95%乙醇至含醇量达85%,冷藏保存10小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩成浸膏,于65℃减压(真空度:-0.09Mpa)干燥,粉碎,得到浸膏粉1.08kg,过5号筛,加入冰片220g、丙二醇500g,混匀,加入1.7kg已熔融的聚乙二醇6000,在80℃加温下混匀,滴入甲基硅油中,制成滴丸10万粒。每粒35mg,相当于原生药0.18g。所制得的滴丸以下简称FDS滴丸。
按以上方法制备的药物,经检测,丹酚酸B转移率为83.5%,人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的总量转移率为90.8%,出膏率为6.1%。
原制剂的制法:照2005年版药典一部“复方丹参片”项下制法,称取丹参药材4.5kg,切片,加乙醇加热回流1.5小时,提取液滤过,滤液回收乙醇并浓缩至适量,备用;药渣加50%乙醇加热回流1.5小时,提取液滤过,滤液回收乙醇并浓缩至适量,备用;药渣加水煎煮2小时,煎液滤过,滤液浓缩至适量。三七药材1.41kg,粉碎成细粉,与上述浓缩液和适量的辅料制成颗粒,干燥。冰片80g研细,与上述颗粒混匀,压制成10000片,包薄膜衣,即得。所制得的样品以下简称复方丹参片。
通过对实施例1、2、3所制备的样品与复方丹参片在重金属、砷盐以及主要有效成分的转移率比较,说明本发明所制得的样品在除去杂质和有害成分的同时最大限度的保留了药品有效成分,并且显著的减少了服用量,达到了精制的目的。比较结果见表1。
表1:重金属、砷盐、出膏率及丹酚酸B转移率比较结果
检测项目 | FDS片 | FDS胶囊 | FDS滴丸 | 复方丹参片 |
重金属 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | >10ppm |
砷盐 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | >1ppm |
出膏率 | 6.2% | 6.7% | 6.1% | 45.5% |
丹酚酸B转移率 | 82.1% | 84.5% | 83.5% | 51.2% |
试验证明有益效果1:
通过对实施例1、2、3所制备的样品与复方丹参片体外抗氧化药效对比,证明本发明制备方法的有益效果。
一、试验动物
SD大鼠,20只,雌雄各半,体重220-250g,清洁级,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司,动物合格证号:SCXK(沪)2003-0002。
二、试验方法
1.微粒体制备
大鼠放血处死,经肝门静脉用TBS(0.1g KCl,4.0g NaCl,0.1g KH2PO4,0.72gNa2HPO4/1.04g Na2HPO4·12H2O,加水至500ml)灌流后,取大鼠肝组织,剪碎,称重,按1∶4加入TBS,用高速匀浆机匀浆(20,000rpm),冰浴下操作,每次约10s,间隔约10s,重复4~5次,成肝组织匀浆(25%匀浆),10,000g离心20min,取上清,100,000g离心60min,取沉淀以1∶10重新悬浮于30%甘油PBS(甘油∶PBS=30∶70(v/v))中,-80℃保存(分装于小管中)。用考马斯亮蓝法测定微粒体的蛋白含量。
2.Fe2+半胱氨酸诱发肝微粒体脂质过氧化的测定。
2.1诱导过程
反应液1ml内含有:微粒体(1∶10)100μl,1mmol/L FeSO4 50μl,10mmol/L半胱氨酸20μl,供试样品FDS片、FDS胶囊、FDS滴丸以及复方丹参片终浓度均为1.5mg原生药/ml,对照蒸馏水10μl,0.01M pH7.4 PBS 820μl。上述溶液混匀后,在37℃下温育30min,于4℃终止反应。
2.2MDA含量测定/过氧化抑制率测定
按丙二醛(MDA)测定试剂盒方法测定MDA,将上述反应液取100μl,按试剂盒要求在10ml试管中加样后用旋涡混悬器混匀,试管口用封口膜扎紧,刺一小孔,95℃水浴下加热反应80min,取出后用流水冷却,4000rpm离心10min,取上清液,在532nm处,1cm光径,三蒸水调零,测定OD值。
2.3数据处理
求算出各受试样品对丙二醛产量的抑制百分率[(溶剂对照值-测定值)/溶剂对照值×100%],作为抗氧化活性指标,所有数据均经统计处理,数据以均数±标准差(x±s)表示。
三、试验结果
试验证明本发明制备方法所制得的样品FDS片、FDS胶囊以及FDS滴丸在同等原生药材量下体外抗氧化作用明显强于复方丹参片。结果见表2。
表2.FDS对大鼠肝微粒体脂质过氧化的抑制作用(x±s,n=10)
*P<0.05,**P<0.01与蒸馏水对照组相比。
试验证明有益效果2:
通过对实施例1、2、3所制备的样品与复方丹参片大鼠冠状动脉结扎急性心肌缺血的影响的药效对比,证明本发明制备方法的有益效果。
一、试验动物
SD大鼠,60只,雌雄各半,体重220-250g,清洁级,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司,动物合格证号:SCXK(沪)2003-0002。
二、试验方法
1.给药方法
1.1给药剂量:本发明制备方法所制得的FDS片、FDS胶囊、以及FDS滴丸与复方丹参片给药剂量均为0.5g原生药/kg/日。
1.2药物配制根据上述剂量,受试样品均分别用0.5%CMC-Na研磨混悬至相应浓度,等体积给药,假手术组和模型组给予相同体积的0.5%CMC-Na,受试样品均为当天配制。
1.3给药体积 1ml/100g.BW
1.4给药途径 灌胃
1.5给药时间 采用预防给药,于每天上午灌胃给药一次,连续7天。
2.大鼠心肌缺血模型建立
各组动物于最后1次给药后30min,乌拉坦(10%,1ml/100g),ip麻醉,固定,接动物呼吸机,同时监测心电图(肢体II导联),经胸骨左缘开胸,暴露心脏,撕开心包膜,在肺动脉圆锥与左心耳间的冠状静脉下,用5/0带线缝合针结扎左冠状动脉,以心电图T波显著升高作为结扎成功指标,闭紧胸腔(排尽胸腔内空气),稳定呼吸约10min左右,去除呼吸机恢复自主呼吸。结扎4h后,颈动脉放血,分离血清,按试剂盒说明书进行MDA、SOD、LDH、CK等生化指标测定;处死动物,取出心脏染色,进行缺血面积测定。
3.心肌缺血面积的测定
大鼠取出心脏,去除心房,心室用生理盐水洗净血后于-20℃冷冻10min后,徒手刀片切成1~2mm的心肌片,置于pH7.4PBS配制的1%TTC溶液中,37℃温育10min染色,心肌片上正常的心肌被染为深红色,缺血心肌呈灰白色。将染色后心肌片上正常和缺血部分心肌分别称重,以缺血部分心肌所占全部心室肌重量的比例作为缺血指标。
4.数据处理及统计方法
各组数据均以x±s表示,组间比较采用t检验考察显著性,以P<0.05作为显著性指标。
三.试验结果
实验证明本发明制备方法所制得的样品FDS片、FDS胶囊及FDS滴丸在0.5g原生药/kg剂量下可明显缩小大鼠冠状动脉结扎造成的心室梗死区(P<0.01,P<0.05)。血清生化指标检测结果表明,在模型组中,心肌缺血导致大鼠血清MDA水平明显增高(P<0.01),SOD活力显著下降(P<0.01),LDH和CK释放明显增加(P<0.01)。与模型组相比,FDS片、FDS胶囊及FDS滴丸在0.5g原生药/kg剂量下可显著降低血清MDA水平、减少心肌缺血引起的LDH和CK释放(P<0.01,P<0.05),同时对降低的SOD活力具有明显的升高作用(P<0.05)。
试验结果还表明本发明制备方法所制得的FDS片、FDS胶囊及FDS滴丸在同等原生药量下的作用强度大于复方丹参片。结果见表3、4。
表3.FDS对大鼠冠脉结扎急性心肌缺血模型心肌梗死区的影响(x±s,n=10)
**P<0.01与假手术组相比;#P<0.05,##P<0.01与模型组相比。
表4.FDS对大鼠冠脉结扎急性心肌缺血模型血清生化指标的影响(x±s,n=10)
**P<0.01与假手术组相比;#P<0.05,##P<0.01与模型组相比。
通过上述具体实施例试验数据,充分说明本发明制备方法所制得的样品在除去杂质和有害成分的同时最大限度的保留了药品有效成分,并且显著的减少了服用量,得到了精制的目的;本发明制备方法所制得的样品在治疗心脑血管疾病方面疗效显著,为临床提供了一种新的用药选择。
Claims (6)
1、一种治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于:
①取以下重量份的处方:
丹参药材 40~90份
三七药材 5~50份
冰片 0.5~10份;
②取丹参药材,切片或粉碎成粗颗粒,20~80℃水提取2~4次,分别加水4~12倍量,提取1~3小时;
③取三七药材,切片或粉碎成粗颗粒,加水煎煮提取2~4次,分别加水4~12倍量,煎煮提取1~3小时;
④合并步骤②所得的丹参水提液与步骤③所得的三七水提液,调节pH=1~7,搅匀,静置0.5~12小时,滤过或离心,上清液过大孔吸附树脂柱,水洗至流出液还原糖反应呈阴性,弃水洗液,再用30~100%乙醇洗脱,采集洗脱液;
⑤将步骤④所得的洗脱液回收乙醇,浓缩干燥,得丹参三七合提物;
⑥加入冰片,加入辅料制成片剂、胶囊、软胶囊、口服液、滴丸、喷雾剂或颗粒剂。
2、根据权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于:在步骤⑤中,洗脱液回收乙醇,浓缩至相对密度1.05~1.25,加乙醇至含醇量达70~90%,冷藏保存2~24小时,滤过,滤液回收乙醇,浓缩干燥,得丹参三七合提物。
3、根据权利要求1或者2所述的治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于:称取丹参药材13.5kg,切片,80℃水温浸提取3次,每次所用水的重量为药材重量的8倍,每次1小时,滤过,得滤液A;三七4.24kg,粉碎成粗颗粒,水煎煮提取3次,每次所用水的重量为药材重量的8倍,每次1.5小时,滤过,得滤液B;合并滤液B与滤液A,调节pH=3,搅匀,静置1小时,离心,上清液通过预处理好的HPD-100大孔吸附树脂柱,先用水洗至流出液还原糖反应呈阴性,再用75%乙醇洗至流出液无色,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.1,加乙醇至含醇量达80%,冷藏保存12小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩成浸膏,于70℃减压干燥,得到干浸膏1.1kg,粉碎,过5号筛,加入可溶性淀粉1kg、硬脂酸镁20g、羧甲基淀粉钠140g,混匀,制粒,干燥;冰片240g,研细,与上述颗粒混匀,压制成10000片。
4、根据权利要求1或者2所述的治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于:称取丹参药材14kg,切片,70℃水温浸提取3次,每次所用水的重量为药材重量的10倍,每次1小时,滤过,得滤液A;三七3.8kg,粉碎成粗颗粒,水煎煮提取3次,每次所用水的重量为药材重量的10倍,每次2小时,滤过,得滤液B;合并滤液B与滤液A,调节pH=5,搅匀,静置1小时,离心,上清液通过预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱,先用水洗至流出液还原糖反应呈阴性,再用70%乙醇洗至流出液无色,收集洗脱液,回收乙醇并浓缩成浸膏,于75℃减压干燥,粉碎,得到浸膏粉1.2kg,过5号筛,加入1.4kg微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素0.1kg、滑石粉0.1kg混匀,制粒,干燥;冰片0.1kg,研细,与上述颗粒混匀,分装,制成胶囊10000粒。
5、根据权利要求1或者2所述的治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于:称取丹参药材13kg,切片,65℃水温浸提取3次,每次所用水的重量为药材重量的9倍,每次1.5小时,滤过,得滤液A;三七4.78kg,切片,水煎煮提取3次,每次所用水的重量为药材重量的9倍,每次1.5小时,滤过,得滤液B;合并滤液B与滤液A,调节pH=3,搅匀,静置1小时,离心,上清液通过预处理好的D-101大孔吸附树脂柱,先用水洗至流出液还原糖反应呈阴性,再用75%乙醇洗至流出液无色,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.15,加95%乙醇至含醇量达85%,冷藏保存10小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩成浸膏,于65℃减压干燥,粉碎,得到浸膏粉1.08kg,过5号筛,加入冰片220g、丙二醇500g,混匀,加入1.7kg已熔融的聚乙二醇6000,在80℃加温下混匀,滴入甲基硅油中,制成滴丸10万粒。
6、根据权利要求1或者2所述的治疗心脑血管疾病的中药复方丹参制剂的制备方法,其特征在于:大孔吸附树脂为非极性、弱极性或极性大孔吸附树脂,型号包括:AB-8,HPD-100,D101,DA201,DM130,WLD-3,YPR-II,X5,Dx-5,NKA-9。
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