CN114209739A - 一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用，涉及药学技术领域，所述白头翁提取物为白头翁皂苷。本发明通过白头翁提取物溶于PBS缓冲溶液中，制得用药，对小鼠进行建模，给药，发现抑郁症模型小鼠症状消失，说明白头翁提取物对抑郁症具有确切的疗效。

Description

一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用
技术领域
本发明涉及药学技术领域，具体讲是一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用。
背景技术
随着我国社会经济快速发展，人们面临的生活压力越来越重，公众心理压力普遍增加，造成抑郁症的发病率逐年升高且趋向年轻化。抑郁症是一种精神障碍类疾病。据WHO统计数据显示，全球约3.2亿人患有抑郁症，给家庭和社会带来深重危害，也为各国带来重大疾病医疗负担。近几十年来，多种理论试图解释抑郁症的发病机理。包括神经递质紊乱，内分泌免疫系统功能障碍和神经解剖学异常等，然而抑郁症发病机制至今仍未阐述清楚，更缺乏安全有效的治疗方法。同时许多患者对传统的抗抑郁药物治疗反应不佳，且耗费大量时间。此外，常规抗抑郁药引起的腹泻、镇静、恶心、睡眠障碍和性功能障碍等一系列副作用使患者难以坚持治疗。因此，开发高效、低副作用的抗抑郁药物迫在眉睫。
目前在市面上已经出现很多种类抗抑郁药物主要包含单胺氧化酶类抑制剂、三环类药物和选择性五轻色胺再摄取抑制剂。但是这些药物都普遍存在见效时间长、副作用强以及人群药物敏感性差异等问题。分析其原因可能在于疾病的发病机理复杂。因而了解抑郁症发病机制能更好的指导治疗疾病成为我们亟待解决的问题。越来越多的研究报道了炎症与抑郁的双向作用，它们相互促进和滋养。在这种双向循环中，抑郁促进炎症反应，炎症促进抑郁。炎症加剧是许多疾病和系统性疾病的特征，包括心血管疾病、糖尿病、代谢综合征、风湿性关节炎、哮喘、多发性硬化症、慢性疼痛和牛皮癣；这些症状中，每一种都会增加患抑郁症的风险。
白头翁是毛茛科(Ranunculaceae)白头翁属植物白头翁(Pulsatilla chinensis(Bunge)Regel)的干燥根，具有清热解毒、凉血止痢的功效，为治痢之要药，临床上白头翁及其制剂常用来治疗肠道疾病。白头翁的主要有效成分包括白头翁素和白头翁皂苷等，其中白头翁皂苷可通过水提或醇提得到。现代药理研究发现，白头翁皂苷具有增强免疫功能、抗炎、抗肿瘤、抗病原微生物等作用，因此受到广泛的研究和关注。
因此，开发出一种高效、安全、药性温和、适用人群广、适合长期服用的抗抑郁中药是迫切需要本领域技术人员解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用。
本发明的技术解决方案如下：
一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用，所述白头翁提取物为白头翁皂苷。
进一步地，所述白头翁皂苷包括齐墩果烷型五环三萜皂苷和/或常春藤型皂苷。
进一步地，所述白头翁皂苷包括白头翁皂苷B4。
本发明还公开了一种抗抑郁药物，其活性成分包括白头翁皂苷，所述所述药物的浓度为1-50mg/ml。
本发明还公开了一种抗抑郁药物，其活性成分包括白头翁皂苷B4或其立体异构体、或其溶剂合物、或其水解产物、或其前体药物。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，例如：顺反异构体、对映异构体、构象异构体等。
“溶剂合物”，溶剂如乙醇、水等，其中，可含有不同量的水，如一水合物、半水合物、一个半水合物、二水合物或者三水合物。
“水解产物”是指分子中的糖基经酸水解后可得到白头翁皂苷苷元。
“前体药物”是白头翁皂苷B4的衍生物，其在可能具有较弱的活性或甚至没有活性，但在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)转化为本发明的活性成分，从而发挥其药理作用的化合物。例如，含有羟基的化合物可形成生理上可水解的酯，其通过在体内水解以得到白头翁皂苷B4本身而充当前药。前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
进一步地，将白头翁皂苷溶于PBS缓冲溶液中，制得药物。
进一步地，所述药物的浓度为2-72mg/ml。
进一步地，其给药量为按照给药对象的体重0.1ml/10g。
进一步地，上述药物还包括药学上可接受的辅料。“药学上可接受的”是指当给药至动物例如哺乳动物(例如鼠)时生理学上可耐受且通常不会产生过敏或类似的不良反应的添加剂或组合物。药物载体和赋形剂可以包括但不限于稀释剂，例如葡萄糖、蔗糖、碳酸钙、双飞粉、高岭土；润滑剂；聚乙二醇；粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；并且，如果需要的话，还包括崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其盐如海藻酸钠；和/或吸附剂、着色剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂和甜味剂。
更进一步地，上述的抗抑郁药物可以制成以下制剂，所述制剂为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂。
本发明的有益效果是：一种白头翁提取物皂苷在制备治疗抑郁病药物中的应用，白头翁皂苷属于纯天然制剂，在抗抑郁治疗剂量下，安全可靠、无毒副作用，对抑郁病药物具有潜在的开发价值。
附图说明
图1为本发明实例中糖水偏好实验的结果；
图2为本发明实例中强迫游泳的结果；
图3为本发明实例中高架十字迷宫实验进入开放臂的时间统计结果。
图4为本发明实例中高架十字迷宫实验开放臂的次数统计结果；
图5位本发明白头翁皂苷提取物在负离子模式下总离子流图；
图中，*P<0.05，**P<0.01，****P<0.0001，均与模型组比较(MX)。
具体实施方式
本部分将详细描述本发明的具体实施例，但其不能理解为对本发明保护范围的限制。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1小鼠抑郁模型建立及白头翁皂苷的给药
白头翁皂苷的提取与制备：
干燥的白头翁药材，10倍量75％乙醇回流提取3次，合并三次提取液，浓缩干燥。干燥物加入15％(g/mL)的NaOH水溶液，反应20小时后，用盐酸调节至中性，再上D101大孔树脂柱(料液比为1:2)，经不同比例(1、10、50、75、99％)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥即得。
应用LTQ-LC-MS/MS技术对白头翁提取物进行化学成分进行分析和鉴定，该提取物含有31种三萜皂苷(见表2)，分别属于齐墩果烷型和羽扇豆烷型五环三萜，其中含有白头翁皂苷B4。苷元类型主要为齐墩果酸皂苷元、常春藤皂苷元和23-羟基白桦酸皂苷元3种。进一步，对该提取物主要成分(响应值最高的19个物质，图5中标记为1-19号峰)的相对含量进行了分析，其中排在前13个的化合物在总提取物中的相对量占85％以上。详细信息见图5和表1。
表1：白头翁皂苷主要成分的LTQ-LC-MS/MS分析鉴定结果
Figure BDA0003414018640000051
Figure BDA0003414018640000061
Figure BDA0003414018640000071
Figure BDA0003414018640000081
注:表格中的序号，与图5中的色谱峰相对应；序号依据各化合物响应值由高到低排列。
表2白头翁皂苷提取物所含成分
Figure BDA0003414018640000082
Figure BDA0003414018640000091
Figure BDA0003414018640000101
实验动物采取雄性、7周龄C57小鼠。所有小鼠自由摄食饮水，采用12h的昼夜周期(8：00-20：00为夜，20：00-8：00为白昼。)
将上述制备的白头翁皂苷配加入PBS缓冲液中，制成20mg/ml的浓度，为白头翁提取物用药浓度；
将市购的白头翁皂苷B4(成都埃法生物科技有限公司、批号：AF21041406)，用生理盐水配制，浓度为30mg/ml，为白头翁皂苷B4用药浓度；
将小鼠随机分为空白组(Con)、模型组(MX)、白头翁提取物组(BTW)，白头翁皂苷B4组(B4)，每组12只。
除空白组小鼠外，其余组小鼠均需建立抑郁模型。模型建立的方式是采取小鼠慢性不可预知刺激的方式。在本次实验中，共采用了14种应激源，14个应激方式分别为改变光照性质、调整昼夜节律、禁水、禁食、4℃冰水游泳、45℃高温游泳、倾斜45℃鼠笼、潮湿垫料、水平震荡、轻夹鼠尾、束缚、白噪音、间断(闪光)刺激，悬尾，共14种。具体的应激方式见表3。CUMS组小鼠每日不定时随机给予2种应激，每种应激源不连续出现2次。
表3 CUMS抑郁造模应激刺激试验日程表
Figure BDA0003414018640000111
Figure BDA0003414018640000121
模型建立完成以后，需对各造模组进行给药。按照已安排好的组别分别进行给药，边造模边给药，具体如下。
(1)空白组(不需要建立模型)：作为空白对照，除每日给予灌胃0.2mL/20g的生理盐水外，不进行任何处理，连续灌胃15天。
(2)模型组：作为阴性对照，在小鼠造模成功后，每日给予灌胃0.2mL/20g的生理盐水，连续灌胃21天。
(3)白头翁提取物组：作为实验组1，小鼠造模成功后，每日给予灌胃0.2mL/20g的浓度为20mg/ml的白头翁提取物，连续灌胃21天。
(4)白头翁皂苷B4组：作为实验组2，小鼠造模成功后，每日给予灌胃0.1mL/10g的白头翁皂苷B4 30mg/ml，连续灌胃21天。
对上述各组动物进行下述试验：
试验一：小鼠糖水实验
糖水偏好实验用于评估小鼠糖水喜好，可反映小鼠快感缺失程度。在整个动物实验中，共进行两次糖水偏好实验。在造模前，通过糖水偏好实验测量所有小鼠蔗糖偏好系数，保证进行实验的小鼠状态一致。在实验结束后，糖水偏好实验作为动物行为学的一部分，用于评价小鼠快感缺失的程度。糖水偏好实验包括两个部分，分别为适应训练部分和测试部分。在训练中，小鼠在前24h每笼放入两瓶1％(w/v)的蔗糖溶液，紧接着24h将其中的一瓶换成纯水，适应结束后，禁食禁水24h，之后开始测量糖水偏好系数。在测试中，小鼠只能选择事前称量好的两个瓶子，一瓶为1％(w/v)的蔗糖溶液，另一瓶为纯水，禁食，24h后，取走两瓶并称重，记录小鼠的总液体消耗，糖水消耗和纯水消耗。糖水偏好系数计算方式为：糖水偏好系数(％)＝糖水消耗量/(糖水消耗量+纯水消耗量)×100％。
实验前，所有小鼠测量了糖水偏好基线，各组小鼠糖水基线无显著差异(图1A)。造模后，如图1B和1D所示，MX组糖水偏好系数均显著下降，而BTW组和B4组糖水偏好系数上升，说明BTW组和B4组均有一定的抗抑郁作用。
试验二：小鼠强迫游泳实验
强迫游泳实验仪器为一个装有纯净水的透明的圆形桶，直径12cm，水深25cm。纯水温度为23-25℃。仪器正前方装有摄像机，并与水面齐平。将小鼠放入水中后，采集其在水中6min的活动视频。采用分析软件分析视频后5min内小鼠的静止不动时间。静止不动行为定义为小鼠漂浮、不挣扎，或仅依靠偶尔摆动维持漂浮不动的行为。
实验结果以平均值±标准误差表示，以t检验统计处理。
强迫游泳实验结果如图2。MX组的静止不动时间均显著多于空白组。而BTW组和B4组的静止不动时间则显著少于MX组，绝望行为得到缓解，具有明显抗抑郁作用。
试验三：小鼠高架十字实验
高架十字迷宫装置为两条相对开放臂(50cm长×10cm宽)和两条相对闭合臂(50cm长×l0cm宽×40cm高)及中央区(10cm×l0cm)连接而成，将负重游泳模型小鼠放于中央区，记录内小鼠进入开放臂的次数，在开放臂的停留时间以及在开放臂的运动距离。用Smart软件进行录像分析。每只小鼠测试完毕需要用酒精擦洗箱底。
实验结果以平均值±标准误差表示，以t检验统计处理。
高架十字迷宫是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突行为来考察动物的焦虑状态。有效的抗抑郁药物会增加小鼠在高架十字迷宫实验中小鼠进入开放臂的次数以及运动距离。如图3和图4所示，白头翁提取物组和白头翁B4组均显著增加了小鼠进入开放臂的时间和次数。说明白头翁提取物组和白头翁B4均能改善小焦虑/抑郁症状。
经过以上动物实验模型验证，证明了白头翁总皂苷和白头翁皂苷B4口服可以增加小鼠的糖水偏好，缩短小鼠强迫游泳过程中的不动总时间，增加小鼠进入开放臂的时间和次数。综上所述，白头翁总皂苷和白头翁皂苷B4对抑郁症具有确切的疗效。并且，白头翁皂苷为天然制剂，在抗抑郁治疗剂量下，安全可靠无毒副作用，对抑郁病药物具有潜在的开发价值，更加经济实惠。
在不出现冲突的前提下，本领域技术人员可以将上述附加技术特征自由组合以及叠加使用。
以上所述仅为本发明的优选实施方式，只要以基本相同手段实现本发明目的的技术方案都属于本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用，其特征在于，所述白头翁提取物为白头翁皂苷。
2.根据权利要求1所述的一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用，其特征在于，所述白头翁皂苷包括齐墩果烷型五环三萜皂苷和/或常春藤型皂苷。
3.根据权利要求1所述的一种白头翁提取物在制备治疗抗抑郁药物上的应用，其特征在于，所述白头翁皂苷包括白头翁皂苷B4。
4.一种抗抑郁药物，其特征在于，其活性成分包括白头翁皂苷。
5.根据权利要求4所述的抗抑郁药物，其特征在于，所述药物的浓度为1-50mg/ml。
6.一种抗抑郁药物，其特征在于，其活性成分包括白头翁皂苷B4或其立体异构体、或其溶剂合物、或其水解产物、或其前体药物。
7.根据权利要求6所述的抗抑郁药物，其特征在于，将白头翁皂苷B4溶于PBS缓冲溶液中，制得药物。
8.根据权利要求7所述的抗抑郁药物，其特征在于，所述药物的浓度为2-72mg/ml。
9.根据权利要求8所述的抗抑郁药物，其特征在于，其给药量为按照给药对象的体重0.1ml/10g。
10.根据权利要求4-9任一项所述的抗抑郁药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。
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