CN102283910A - 抗抑郁作用的中药组合物及其制剂和制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗抑郁作用的中药组合物，由下列重量份的提取物制成：白芍提取物1-10份，柴胡提取物1-10份。还公开了由如上所述的中药组合物制成的制剂。还公开了上述中药组合物的制备方法。本技术方案疗效显著、纯度高、服用量小、副反应少，经现代制药工艺提取柴胡总皂苷和白芍总皂苷，按一定配伍比例制成解郁胶囊，具有明确的药用有效部位和明确的疗效，制备方法简单，操作可行，且环境污染小，适合工业化生产，能取得较好的社会效益和经济效益。

Description

抗抑郁作用的中药组合物及其制剂和制备方法

技术领域

本发明属于中药领域，尤其涉及一种抗抑郁作用的中药有效部位组合物，以及含该组合物的中药制剂，以及该组合物的制备方法。

背景技术

抑郁症(Depression)是由各种原因引起的以抑郁为主要症状的一组心境障碍(MoodDisorders)或情感性障碍(Affective Disorders)，是一组以抑郁心境自我体验为中心的临床症状群或状态，是一种不愉快的心境体验。抑郁症是一种影响到躯体、情绪和思维的精神科常见疾病，它严重影响到人的进食、睡眠规律；影响个人对自己的感觉、思考问题的方式。常表现为：丧失愉快、精力减退、精神运动迟滞或激越、自卑或有内疚感、思考能力下降、有自杀倾向或自伤行为、睡眠障碍、食欲减退和性欲减退等症状。

据世界卫生组织发表的《2002年世界卫生组织报告》，抑郁症已位居世界10大疾病的第4位，预计到2020年将跃至第2，居心肌梗死之后，癌症之前。WHO的数字显示，当前全球的抑郁症患者有8500万，预计到2005年其发病率将达到总人口的10％。据最新资料显示，精神障碍在疾病总负担中的排名已经跃居首位，而上海的抑郁症患者已占总人口5％以上。在北美地区和欧盟各国，抑郁症可造成每年高达1500亿美元的损失。同时抑郁症患者的自杀率高达15％。但是由于认识不足，绝大部分的抑郁症患者没有得到正确的诊断治疗。因此增强对抑郁症的认识，加强抗抑郁药的研究，保证社会健康发展有着十分重要的意义，并将产生较大的经济效益和社会效益。

抑郁症的治疗方法可分为药物治疗、精神疗法、社会疗法和行为疗法。高发且难以根治的抑郁症正在逐渐构筑可观的抗抑郁药市场，这正是近年来国内外对中枢神经系统药物研究开发特别活跃的主要原因之一。据统计，抗抑郁药物在美国2000年约占中枢神经系统药品市场的40％以上。抗抑郁药市场的销售额1995年为30亿美元，1998年为60亿美元，呈逐年大幅上升趋势。2000年世界药品市场销售额排名前10位的治疗药物中，抗抑郁药年销售额达134亿美元，占全球销售份额的4.2％，位居第3；销售额增长率为18％，位居第5。在国内，对北京、上海、广州、重庆、武汉、南京、成都、杭州等8大城市1997年～2002年抗抑郁药使用情况的调查表明，我国抗抑郁药物市场在迅速增长。可以预见，未来抗抑郁药物市场的潜力会相当大，世界卫生组织自2001年以来已把关注精神疾病问题作为它的主要任务之一，中国卫生部门也已将抑郁症列为今后的防治重点。

临床上抗抑郁多采用化学药物进行治疗。目前常用的有单胺氧化酶抑制剂(MAGI)，如苯乙肼，苯异丙肼等。三环类抗抑郁药(TCA)，如去甲丙咪嗪、阿米替林、去甲替林等。杂环类抗抑郁药(HCA)，如马普替林、米安色林等。选择性的5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)，如氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、西酞普莱等。5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)，文拉法辛、度洛西汀、米那普仑等。去甲肾上腺素和特定5-羟色胺再摄取抑制剂(NaSSA)，如米氮平等。除以上几大类外，还有不少具有一定抗抑郁作用的药物用于临床，如调整多种中枢神经递质传导功能的药物、5-羟色胺受体阻断剂、多巴胺再摄取阻滞剂等，同时有些抗精神病药也有抗抑郁作用，可作辅助治疗。

尽管西药抗抑郁的前景较好，但是发病机制的复杂性和用药的单一性，使得抗抑郁治疗处于一种明显的不对称局面。抗抑郁药物治疗现存的问题是：第一，对一些难治性抑郁症不能奏效；第二，抑郁药治疗中不良反应繁多，如体重增加、性功能障碍、失眠、嗜睡、虚弱等，还具有撤药综合征，不利于长期服用；第三，起效缓慢，大约需要2-3周才能产生效果，不利于抓住时机，控制症状，使本来依从性差的患者丧失信心；第四，抑郁症治愈后的复发率仍然较高。因此国内外在抗抑郁药的研制与开发方面越来越注重天然药物，特别是有两千多年历史的中药。

目前研究较多的有明确抗抑郁作用的古方逍遥散、四逆散、柴胡桂枝汤、柴胡疏肝散、大柴胡汤、平肝开郁汤、宣郁通经汤等，经验方疏郁达神汤、解郁合欢汤、柴芍六君子汤、柴桂温胆定志汤等，都以柴胡、白芍为方中主药。据统计，《伤寒论》42首抗抑郁效方中，柴胡出现23次，芍药出现16次，为疏肝解郁和活血补血出现频率最高的单味药物。中医认为，常见的抑郁症中医证型分别是：肝郁气滞证、肝郁脾虚证、肝郁痰阻证、心脾两虚证和肝郁血瘀证。其中又以肝郁气滞证最为常见症。可见，选择柴胡、白芍作为抗抑郁中药基础方，具有临床实际意义。

发明内容

为了克服治疗抑郁症的西药不良反应多，起效慢，复发率高的缺陷，本发明的目的之一是提供一种抗抑郁作用的中药有效部位组合物及中药制剂，其疗效显著、纯度高、服用量小、副反应少。

本发明的目的之二是提供一种上述中药组合物的制备方法，其工艺稳定，操作可行，提取率高，纯度高，环境污染小，适合工业化生产。

为了达到上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种抗抑郁作用的中药组合物，由下列重量份的提取物制成：白芍提取物1-10份，柴胡提取物1-10份。

作为优选，所述白芍提取物为9份，柴胡提取物为1份。

一种中药制剂，由如上所述的中药组合物制成，其剂型为口服液、片剂、胶囊剂、滴丸剂和颗粒剂中的任意一种，优选为胶囊剂。

一种中药制剂，由如上所述的中药组合物加入等重量的淀粉，混合均匀，灌装于胶囊中制得，胶囊中含芍药苷的含量不得少于7.50％，白芍总皂苷的含量不得少于25.0％，柴胡皂苷d的含量不得少于0.50％，柴胡总皂苷的含量不得少于2.50％。

一种中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

1)制备白芍提取物：取白芍饮片，分别加入8倍量70％乙醇，提取3次，每次2小时，所得提取液减压回收乙醇，浓缩至2.0g生药/ml，取1BV体积的浓缩液，以1BV/小时的流速过AB-8大孔吸附树脂，静置2小时后，用去离子水以1BV/小时的流速清洗至流出液无色，用10BV 70％乙醇以2BV/小时的速度进行洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至浸膏，60℃真空干燥，取出，粉碎，得到白芍提取物；

2)制备柴胡提取物：取柴胡饮片，分别加入10倍量含1.0％碳酸钠的80％乙醇，加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液；所得的提取液减压回收乙醇，浓缩至0.2g生药/ml，量取1BV提取液，以1BV/小时的流速过AB-8大孔吸附树脂，静置2小时后，用去离子水10BV以1BV/小时的流速洗脱，弃去洗脱液，再用20％乙醇10BV以1BV/小时的流速清洗，弃去清洗液，用70％乙醇10BV以2BV/小时的速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至浸膏，60℃真空干燥，取出，粉碎，得到柴胡提取物；

3)制备组合物：按白芍提取物∶柴胡提取物为9∶1的重量配比，称取上述两种提取物，混合均匀制成上所述的中药组合物。

其中，“70％乙醇”即为浓度为70％的乙醇溶液，“80％乙醇”、“20％乙醇”同理，“含1.0％碳酸钠的80％乙醇”即为浓度为80％的乙醇溶液中含有重量百分比为1.0％的碳酸钠；“6倍量70％乙醇”即为重量为饮片重量的6倍的浓度为70％的乙醇溶液，“8倍量、10倍量”同理。

本发明所用白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，以补养阴血见长，又能柔肝平肝，缓急止痛，清解虚热。柴胡为狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根，轻清，长于疏达走窜，辛散善行，为疏肝理气，开郁结退热之佳品，二药相伍，柴胡得白芍之柔，行肝气而不致疏泄太过，耗肝之体；白芍得柴胡之散，补肝血而不致郁遏气阴，碍肝之用，共奏疏肝、解郁和解表里止痛之功。既能疏肝解郁，以治肝用之不达，又能柔肝益阴以补肝体，为体用兼顾之最佳配伍。

本发明经现代制药工艺提取柴胡总皂苷和白芍总皂苷，按一定配伍比例制成解郁胶囊，具有明确的药用有效部位和明确的疗效，制备方法简单，操作可行，且环境污染小，适合工业化生产，能取得较好的社会效益和经济效益。

具体实施方式

以下是对抗抑郁作用的中药有效部位组合物及其制备方法中各因素的分析和实验：

一、白芍提取物制备：

1、白芍总皂苷提取工艺优选

白芍的有效成分为芍药苷、白芍苷、氧化芍药苷和苯甲酞芍药苷等单萜类化合物，简称白芍总皂苷。影响白芍总皂苷提取的因素有乙醇浓度、乙醇用量(体积重量比，即乙醇体积与药材重量的比值)、提取时间、提取次数，本实验采用L₁₈(3⁷)正交设计和单因素考察相结合的方法，测定白芍提取物中白芍总皂苷和芍药苷的含量，并以白芍总皂苷和芍药苷含量的加权分数作为评价指标，优选了白芍总皂苷提取工艺，见表1至表5。

表1白芍皂苷提取实验设计表

表2实验计划表

分别按上述实验设计进行提取，滤过，合并滤液，定容至一定的体积。测定提取液中白芍总皂苷和芍药苷的含量，结果见表3。

表3各提取液中白芍总皂苷及芍药苷的含量

以白芍总皂苷及芍药苷的含量为指标进行加权评分，公式如下：

将分值进行正交分析见表4：

表4直观分析表

表5方差分析表

结果表明，提取次数有显著性差异，从直观分析表看出，乙醇浓度为70％，用量为8倍量，每次2小时，提取效果最佳，因此将该条件固定，对提取3次和4次进行比较，结果表明，提取3次与提取4次的效果相差不大，故确定提取次数为3次。

验证试验：取白芍饮片200g，共3份，置10000ml圆底烧瓶中，加入8倍量70％乙醇，3份提取3次，3份提取4次，每次2小时，滤过，合并滤液，滤液定容至6000ml，测定提取液中白芍总皂苷及芍药苷的含量。结果表明芍药苷的平均含量21.49mg/g，白芍总皂苷的平均含量为42.90mg/g。与最佳工艺(第13组)的结果相近。

最终确定白芍总皂苷的提取工艺为：取白芍饮片，分别加入8倍量，70％乙醇，提取3次，每次2小时。

2、白芍总皂苷纯化工艺优选

静态吸附量的考察

称取各大孔吸附树脂5.0g(干重)，树脂类型分别为：DM-130、860021、DM-2、DM-131、AB-8、D101，分别加入15ml白芍提取液(0.2g生药/ml)，放置24小时。抽滤，滤液定容至25ml，测定溶液中白芍总皂苷的含量，结果表明，AB-8大孔吸附树脂的静态吸附能力明显优于其它树脂，故选择AB-8大孔吸附树脂。

最大动态吸附量的考察

称取已预处理的AB-8大孔吸附树脂80g(湿重)，装柱(内径4cm，柱高26cm)，取白芍提取液(2.0g生药/ml)50ml，以80ml/h(1BV)的速度上样，收集流出液。放置2小时后，加去离子水以80ml/h的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液及洗脱液中白芍总皂苷的含量。结果最大动态吸附量为相当于68.27ml上样溶液，每克干树脂可吸附白芍提取液2ml(2.0g生药/ml)。

洗脱预实验

将上述吸附白芍提取液的AB-8树脂柱分别用10％、20％、30％、40％、50％、70％乙醇各200ml以80ml/h的速度洗脱，50ml/份收集洗脱液，测定洗脱液中白芍总皂苷的含量。

结果表明，10％～70％乙醇洗脱液中均含有白芍总皂苷，可能是AB-8大孔吸附树脂对白芍总皂苷的吸附能力较差，选择其它树脂进行洗脱预试验，发现结果基本相同，原因可能是白芍总皂苷的极性范围较广，不同浓度的乙醇对其都有一定的洗脱能力，考虑白芍提取液上柱，用水除杂后，直接用一定浓度的乙醇进行洗脱，测定洗脱液中白芍总皂苷的含量，如达到60％，说明该方法可行。

取已预处理的AB-8大孔吸附树脂80g(湿重)，装柱(内径4cm，柱高20cm)，取白芍提取液80ml，以80ml/h的速度上样，收集流出液，放置2小时后，加去离子水洗脱至流出液基本无色，再用70％乙醇200ml以80ml/h的速度洗脱，50ml/份收集洗脱液，测定洗脱液中苯甲酸的含量，结果表明，第一份洗脱液中不含白芍总皂苷，其余三份洗脱液中白芍总皂苷的含量均大于60％，故该方法可行。

上样速度的考察

取已预处理的AB-8大孔吸附树脂80g(湿重)，共三根，取白芍提取液100ml，分别以80ml/h、160ml/h、240ml/h的速度上样，收集流出液，放置2小时后，加去离子水以80ml/h(1BV/h)的速度洗脱至流出液颜色基本无变化，100ml/份收集洗脱液，测定流出液及洗脱液中苯甲酸的含量。结果表明，上柱速度为80ml/h的吸附量最大，故确定上柱速度为1BV/小时。

上柱液浓度的考察

取白芍提取液(2.0g生药/ml)100ml，共4份，分别稀释2、5、10、20倍，以80ml/小时的速度上样，收集流出液，放置2小时后，加去离子水800ml以80ml/h的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液和洗脱液中苯甲酸的含量。结果表明，不同浓度白芍提取液的吸附量基本相同，为缩短上样时间，故上柱液浓度选择(2.0g生药/ml)。

洗脱剂浓度及用量的考察

取已预处理的AB-8大孔吸附树脂80g(干重)，共三根，分别取白芍提取液80ml，以80ml/小时的速度上样，放置2小时后，加去离子水以80ml/h的速度洗脱至流出液颜色基本无变化，再分别用50％、60％、70％乙醇以80ml/h的速度洗脱至流出液颜色基本无变化，100ml/份收集洗脱液，测定洗脱液中苯甲酸的含量。结果表明，70％乙醇800ml，即10BV就能将白芍总皂苷基本洗脱完全，洗脱率为90.40％，故确定采用70％乙醇10BV作为洗脱剂。

洗脱速度的考察

取白芍提取液80ml(2.0g生药/ml)，共3份，上样，放置2小时后，用去离子水洗脱至洗脱液颜色基本无变化，分别用70％乙醇10BV对三根柱子以1BV/h、2BV/h、3BVh、4BV/h的速度进行洗脱，弃去第一个100ml洗脱液液，其余以200ml/份收集，洗脱液，测定洗脱液中苯甲酸的含量。结果表明，速度为1BV/h和2BV/h的洗脱率相差不大，考虑到2BV/小时的效率较高，故确定洗脱速度为2BV/小时。

径高比考察

取三根层析柱，分别称取80g、160g、240g(湿重)经预处理的AB-8大孔吸附树脂，装柱，取白芍提取液80ml、160ml、240ml(2.0g生药/ml)，以1BV/h的速度上样，放置2小时后，分别用水10BV、20％乙醇10BV洗脱，再用70％乙醇10BV洗脱，2BV/份收集70％乙醇洗脱液，测定洗脱液中苯甲酸的含量。结果表明，三种径高比的洗脱率基本一致，说明径高比对洗脱率影响不大。

验证实验

取经已处理的AB-8大孔吸附树脂，装柱(三根，内径9.1cm，高度70cm，保留体积1500ml)，分别取1500ml白芍提取液(2.0g生药/ml)上样以1500ml/h的速度上样，放置2小时后，用去离子水以1500ml/小时的速度洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇15000ml以3000ml/小时的速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，粉碎，得到3批白芍总皂苷，测定含量。结果表明，三批白芍总皂苷的得率基本一致，最高得率为78.89％，白芍总皂苷的含量也相近，该实验的重复性较好。

表6验证实验结果

最终确定白芍总皂苷的纯化工艺为：取经预处理的AB-8大孔吸附树脂，装柱，取1BV白芍提取液(2.0g生药/ml)以1BV/h的速度上样，放置2小时后，用去离子水以1BV/h的速度洗脱至洗脱液无色，弃去洗脱液，用70％乙醇10BV以2BV/h的速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至浸膏，60℃真空干燥，取出，粉碎，得到白芍提取物。

二、柴胡提取物制备：

1、柴胡总皂苷提取工艺优选

柴胡作为临床常用药，大多以煎煮法提取柴胡皂苷类成分，由于柴胡皂苷a、d化学结构均具不稳定性，遇酸或受热易分别降解生成活性较弱的次生苷b1、b2，因此随着提取时间的延长，柴胡皂苷a、d的量将逐渐降低，影响柴胡制剂的质量和临床疗效。目前国内关于柴胡提取工艺的文献报道较多，但多以柴胡皂苷a单独为指标进行考察，很少有同时考察柴胡皂苷a、d和柴胡总皂苷的文献报道。因此，本发明采用正交试验综合考察柴胡中柴胡皂苷a、d和柴胡总皂苷的含量，筛选最佳工艺。

吸水率、吸醇率的考察

取柴胡饮片50g，共2份，一份加入水300ml，一份加入50％乙醇300ml，放置至透心，滤过，测定吸水率、吸醇率。结果用水或50％乙醇提取时，分别应多加水1.8L/Kg或50％乙醇1.2L/Kg。

提取溶剂的考察

取柴胡饮片50g，共2份，一份加入水300ml，一份加50％乙醇300ml，加热回流提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，定容至1000ml，测定提取液中柴胡总皂苷的含量。结果表明50％乙醇的提取效果较水好。

提取方式的考察

取柴胡饮片50g，共2份，分别用50％的乙醇300ml 60℃温浸、85℃回流提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，定容至1000ml，测定提取液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，加热回流提取的提取效果佳。

加碱对提取效果的影响

参考有关文献及《中国药典》2005年版一部，发现应在提取时加入一定量的碱，对加碱与不加碱提取进行比较。

取柴胡饮片50g，共2份，一份不加碱，一份加入5％碳酸钠提取，分别用50％乙醇300ml回流提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，定容至1000ml。测定提取液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，加碱后总皂苷的含量有所增加，因此提取时应加入一定量的碱。

正交设计考察柴胡总皂苷的提取工艺

影响柴胡总皂苷提取的因素有乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数以及碱的浓度(用量)，本实验采用L₁₈(3⁷)正交设计，以柴胡皂苷a、d和柴胡总皂苷为指标，考察上述因素对柴胡皂苷提取的影响。实验设计表及结果见表7～9。

表7柴胡皂苷提取实验设计表

以柴胡总皂苷及柴胡皂苷d的含量为指标进行加权评分，公式如下：

表8直观分析表

表9方差分析表

结果表明，乙醇浓度和提取次数有显著性差异，因此确定乙醇浓度为80％，提取次数为3次，从直观分析表可以看出，提取时间1.5小时和2小时差别不大，故确定提取时间为1.5小时，随着乙醇用量的增加，柴胡总皂苷及柴胡皂苷d的含量有所增加，应对乙醇用量8倍量和10倍量进行比较。

在提取过程中发现80％乙醇提取时，加入0.4％的无水碳酸钠不能全部溶解，应对80％乙醇提取时的碱用量进行考察。

碱用量的考察

分别称取柴胡饮片50g，置1000ml圆底烧瓶中，加入10倍量80％乙醇，并加入一定量的无水碳酸钠(以乙醇体积计)，80℃水浴回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，提取液定容至1500ml。测定提取液中柴胡总皂苷及柴胡皂苷d的含量。结果表明，碱浓度为1.0％时柴胡皂苷a、d的含量达到最大，故确定碱浓度为1.0％。

乙醇用量考察

取柴胡饮片500g，共2份，置10000ml圆底烧瓶中，分别加入8倍量、10倍量的含1.0％无水碳酸钠的80％乙醇，加热回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，滤液定容至15000ml，测定提取液中柴胡总皂苷及柴胡皂苷a、d的含量，实验平行2次。结果表明，乙醇用量为10倍量时，柴胡皂苷a、d及柴胡总皂苷的平均含量较8倍量乙醇高，故确定乙醇用量为10倍量。

验证试验

取柴胡饮片500g，共3份，置10L圆底烧瓶中，分别加入10倍量80％乙醇，并加入1.0％碳酸钠，加热回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，滤液定容至15000ml，测定提取液中柴胡总皂苷及柴胡皂苷a、d的含量。结果平均含量为柴胡皂苷a的含量1.1221mg/g，柴胡皂苷d含量为4.1216mg/g，柴胡总皂苷的含量为50.64mg/g。与最佳工艺的结果相近。

综上所述，确定柴胡总皂苷的提取工艺为：取柴胡饮片，分别加入10倍量含1.0％碳酸钠的80％乙醇，提取3次，每次1.5小时。

2、柴胡总皂苷纯化工艺优选

采用大孔吸附树脂进行纯化，影响大孔吸附树脂纯化效果的因素有大孔吸附树脂的类型、上柱液浓度、上柱速度、洗脱剂的浓度、用量以及洗脱速度等。

静态吸附量的考察

称取各大孔吸附树脂5.0g(干重)，树脂类型分别为：DM-130、860021、DM-2、DM-131、AB-8、D101，分别加入15ml柴胡提取液(0.8g生药/ml)，放置24小时。抽滤，滤液定容至25ml，测定溶液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，AB-8大孔吸附树脂的静态吸附能力明显优于其它树脂。

最大动态吸附量的考察

称取已预处理的AB-8树脂大孔吸附树脂20g(干重)，装柱(内径4cm，柱高21cm)，取柴胡提取液(0.8g生药/ml)50ml，加水稀释至200ml，以50ml/h(1BV/h)的速度上样，收集流出液。放置2小时后，加去离子水以50ml/h的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液及洗脱液中柴胡总皂苷的含量。最大动态吸附量为相当于177ml上样溶液，每克干树脂可吸附柴胡提取液88.5ml(0.8g生药/ml)。

洗脱预实验

将上述树脂柱分别用10％、20％、30％、40％、50％、70％乙醇各200ml以50ml/h的速度洗脱，50ml/份收集洗脱液，测定洗脱液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，10％～40％乙醇洗脱液中不含有柴胡总皂苷，50％乙醇洗脱液中含有柴胡总皂苷，但含量较少，说明50％乙醇对柴胡总皂苷的洗脱能力较弱，而70％乙醇洗脱液中含有较大量的柴胡总皂苷，说明70％乙醇可以作为柴胡总皂苷的洗脱剂。

上柱液浓度的考察

取柴胡提取液(0.8g生药/ml)50ml，共4份，分别稀释2、4、6、8倍，以50ml/小时(1BV/h)的速度上样，收集流出液，放置2小时后，加去离子水400ml以50ml/小时的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液和洗脱液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，在柴胡提取液稀释4倍，即0.2g生药/ml时的吸附量最大，确定上柱液浓度为0.2g生药/ml。

上柱液流速的考察

取柴胡提取液(0.2g生药/ml)200ml，共4份，分别以50ml/h(1BV/h)、100ml/h(2BV/h)、150ml/h(3BV/h)、200ml/h(4BV/h)的速度上样，收集流出液，放置2小时后，加去离子水400ml以50ml/h的速度洗脱，100ml/份收集，测定流出液和洗脱液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，上柱液流速为50ml/h(1BV/h)时，吸附量最大，故确定上柱液流速为1BV/h。

除杂溶液浓度的确定

从洗脱预实验中可以看出水及10％～40％乙醇可以作为除杂溶液。取柴胡提取液(0.2g生药/ml)150ml(最大动态吸附量的80％)上样，放置2小时后，分别用水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇进行洗脱，至洗脱液呈浅黄透明基本无变化，100ml/份收集洗脱液，测定洗脱液中固形物的重量。结果表明，去离子水洗脱500ml(10BV)后，洗脱液颜色基本无变化，且固形物较少；10％及20％乙醇能除去一定的杂质，而30％、40％乙醇除去的杂质较少。并对直接用20％乙醇洗脱进行考察，结果表明，其固形物与分别用10％和20％乙醇洗脱的总量基本一致，故确定采用20％乙醇进行除杂，并考察了20％乙醇的用量，确定用量为500ml(10BV)。

洗脱液浓度及用量的考察

取柴胡提取液(0.2g生药/ml)150ml，共3份，上样，放置2小时后，用去离子水10BV、20％乙醇10BV洗脱，分别用60％、70％、80％乙醇对三根柱子以1BV/h的速度进行洗脱，洗脱至洗脱液基本无色，100ml/份(2BV/份)收集洗脱液，测定洗脱液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，70％乙醇、80％乙醇洗脱900ml(18BV)能将90％的柴胡总皂苷洗脱，而60％乙醇1100ml(22BV)只能洗脱83.92％的柴胡总皂苷，故确定采用70％乙醇作为洗脱剂。70％乙醇中，前10BV就能将其中83％的柴胡总皂苷洗脱，故确定洗脱剂用量为10BV。

洗脱速度的考察

取柴胡提取液(0.2g生药/ml)150ml，共3份，上样，放置2小时后，用去离子水10BV、20％乙醇10BV洗脱，分别用70％乙醇10BV对三根柱子以1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h的速度进行洗脱，100ml/份(2BV/份)收集洗脱液，测定洗脱液中柴胡总皂苷的含量。

结果表明，速度为1BV/h的洗脱率为86.96％，速度为2BV/h的洗脱率为87.32％，速度为3BV/h的洗脱率为79.81％，速度为4BV/h的洗脱率为76.49％。速度为2BV/h的洗脱率最大，故确定洗脱速度为2BV/h。

径高比考察

取三根层析柱，分别称取20g、40g、60g(干重)经预处理的AB-8大孔吸附树脂，装柱，取柴胡提取液150ml、300ml、450ml(0.2g生药/ml)，以1BV/小时的速度上样，放置2小时后，分别用水10BV、20％乙醇10BV洗脱，再用70％乙醇10BV洗脱，2BV/份收集70％乙醇洗脱液，测定洗脱液中柴胡总皂苷的含量。结果表明，三种径高比的洗脱率基本一致，说明径高比对洗脱率影响不大。

验证实验

取经预处理的AB-8大孔吸附树脂，装柱(三根，内径9.1cm，高度70cm，保留体积1500ml)，分别取10000ml柴胡提取液(0.2g生药/ml)，以1500ml/h的速度上样，放置2小时后，用去离子水15000ml以1500ml/h的速度洗脱，弃去洗脱液，再用20％乙醇15000ml以1500ml/h的速度洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇15000ml以3000ml/h的速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，粉碎，得到3批柴胡总皂苷，测定含量。结果表明，三批柴胡总皂苷的得率基本一致，柴胡总皂苷的含量也相近，该实验的重复性较好。

表10验证实验结果

最终确定柴胡总皂苷的纯化工艺为：取经预处理的AB-8大孔吸附树脂，装柱，取柴胡提取液(0.2g生药/ml)1BV，以1BV/小时的流速过AB-8大孔吸附树脂，静置2小时后，用去离子水10BV以1BV/小时的流速洗脱，弃去洗脱液，再用20％乙醇10BV以1BV/小时的流速清洗，弃去清洗液，用70％乙醇10BV以2BV/小时的速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至浸膏，60℃真空干燥，取出，粉碎，得到柴胡提取物。

三、胶囊的制备方法：

根据药效筛选试验白芍总皂苷-柴胡总皂苷(9∶1)时药效最佳，取白芍总皂苷和柴胡总皂苷按上述比例混合均匀，对其进行堆密度、休止角的测定。

堆密度测定

取以上混合物10g，置50ml量筒中，测定体积，计算堆密度。结果表明，本品的堆密度为0.8197g/ml。

休止角的测定

对混合粉末的休止角进行测定，结果见表7。

表7总皂苷混合物休止角测定结果

结果表明，该粉末的流动性较好。

稀释剂用量的确定

本品每粒应含柴胡总皂苷和白芍总皂苷混合物150mg，采用2号胶囊灌装。2号胶囊的体积为0.4ml，淀粉的堆密度为0.6514g/ml，因此，每粒胶囊还可以装150mg淀粉。取总皂苷混合物和淀粉按(1∶1)混合均匀，测定混合物的堆密度及休止角。结果表明，本品的流动性较好，淀粉可以作为本品的稀释剂。本品的堆密度为0.7752g/ml，每粒胶囊装300mg，选择2号胶囊，进行试装。结果确定采用2号胶囊进行分装。

临界相对湿度测定

为了防止药粉吸潮，测定了药粉的临界相对湿度，为控制分装车间的相对湿度提供参考依据。

解郁胶囊内容物吸湿平衡曲线

测定方法：取药粉2份，精密称定，打开称量瓶盖，分别放入湿度为58％的玻璃干燥器中，在25℃培养箱中放置，于1，2，3，6，9，12，24，36，48，72小时精密称定称量瓶与药粉的重量，计算吸湿百分率，绘制吸湿平衡曲线。结果表明，放置48小时后，供试品达到吸湿平衡。

临界相对湿度的测定

测定方法：取药粉12份，分为2组，每组6份，每份约2g，精密称定，打开称量瓶盖，分别放入不同湿度的玻璃干燥器中，在25℃培养箱中放置，放置48h后，精密称定，计算吸湿率。绘制临界相对湿度曲线，结果表明，药粉的临界相对湿度为63％，因此在分装时，应将相对湿度控制在60％以下。

取三批白芍总皂苷各540g，三批柴胡总皂苷各60g，混合均匀，分别加入600g淀粉，混合均匀，灌装于2号胶囊中。胶囊中含芍药苷的含量不得少于7.50％，白芍总皂苷的含量不得少于25.0％，柴胡皂苷d的含量不得少于0.50％，柴胡总皂苷的含量不得少于2.50％。

四、本发明组合物配方比例筛选试验

1、实验材料

1.1药品

上述柴胡提取物，上述白芍提取物，以0.5％CMC-Na为混悬剂，用高速均质机均质10min，使成混悬液，用前摇匀；

盐酸氯米帕明片(诺华制药，批号X0026，25mg/片)；

1.2实验动物

ICR小鼠，清洁级。雌雄各半，由浙江省实验动物中心提供，实验动物合格证号：浙医动字第2001001号。

1.3主要仪器

小鼠悬尾架(自制)，电子秒表等。

2、分组及给药

由于未见柴胡白芍提取物治疗抑郁症相关研究文献，根据经验拟定小鼠给药剂量为500mg/Kg.d(柴胡总皂苷加白芍总皂苷总量)，阳性组给盐酸氯米帕明片，给药剂量20mg/Kg，正常组给0.5％CMC-Na溶液。给药组剂量方案见表8。

表8提取物给药剂量方案设计

3、实验方法

3.1小鼠悬尾实验

小鼠连续灌胃给药7天，于末次灌胃1小时后，将小鼠尾端2cm处固定于水平杆上，使其呈倒挂状态，头部离台面约20cm，四周以板隔离动物视线，记录小鼠在6分钟内的不动时间。

3.2小鼠强迫游泳实验

先做预试验，将小鼠放入直径18cm，水深10cm的烧杯，水温保持25℃，小鼠游泳2分钟后，开始观察，观察持续4分钟，累计4分钟内小鼠在水中停止挣扎、呈漂浮状态、仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间(不动时间)，将不动时间超过120秒或低于60秒者小鼠剔除。将合格小鼠随机分组，连续灌胃7天，于末次灌胃1小时后，按预试验方法进行强迫游泳试验，累计4分钟内小鼠的不动时间。

4、实验结果

4.1不同配方比例对小鼠体重的影响

末次灌胃给药后，称量各组小鼠体重，结果见表9。发现治疗组体重均较正常组和阳性组轻，除治疗组1和治疗组7外，均有显著差异。

表9不同配方比例对小鼠体重的影响

注：与正常组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

4.2不同配方比例对小鼠悬尾不动时间的影响

小鼠在悬尾状态下很快会出现绝望行为，表现为不再挣扎，呈现持续安静不动状态。从表10可见，除治疗组9外，所有给药组与正常组相比，均能明显缩短悬尾不动时间，其中治疗组8效果最好。

表10不同配方比例对小鼠悬尾不动时间的影响

注：与正常组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

4.3不同配方比例对小鼠强迫游泳不动时间的影响

从表11可见，治疗组3、治疗组8和阳性组，与正常组相比，能明显缩短强迫游泳不动时间。

表11不同配方比例对小鼠强迫游泳不动时间的影响

注：与正常组比较：^*P＜0.05

5、结论

小鼠悬尾试验和小鼠强迫游泳试验是常用的抗抑郁药物筛选方法，且实验结果较可靠。实验结果表明，治疗组8(柴胡总皂苷∶白芍总皂苷＝1∶9)抗抑郁疗效最佳，治疗组9(柴胡总皂苷∶白芍总皂苷＝0∶10)抗抑郁疗效最差。所以，柴胡虽然量少，但起到关键性的作用，可是其他配方比例，甚至单用柴胡，抗抑郁疗效均不尽人意。由此可见，柴胡和白芍的配伍比例是影响其药理作用的关键性因素。实验中还发现，给药后治疗组体重较正常组和阳性组轻，提示可能有降脂减肥的功能。

按最佳疗效治疗组8，确定解郁胶囊的配方比例为柴胡总皂苷∶白芍总皂苷＝1∶9，小鼠用量为每日500mg/Kg，即柴胡总皂苷50mg/Kg、白芍总皂苷450mg/Kg。以体表面积换算，相当于成人每日服用解郁胶囊2000mg，即柴胡总皂苷200mg、白芍总皂苷1800mg，换算为生药量相当于柴胡4.8g，白芍58.7g。

五、本发明组合物的主要药效学研究

1、实验材料

1.1药品及试剂

上述柴胡提取物，上述白芍提取物，以0.5％CMC-Na为混悬剂，用高速均质机均质10min，使成混悬液，用前摇匀；

盐酸氯米帕明片(诺华制药，批号X0026，25mg/片)；

利血平注射液(广东邦民制药厂有限公司，批号090101，1mg/1ml)；

去甲肾上腺素(L-NE，SIGMA公司，批号A-9512)；

多巴胺(DA，SIGMA公司，批号H8502)

5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA，SIGMA公司，批号H8876)

5-羟色胺(5-HT，SIGMA公司，批号H7752)

醋酸、高氯酸、醋酸钠为分析纯试剂，甲醇为色谱纯试剂。

1.2实验动物

ICR小鼠和SD大鼠，均为清洁级。雌雄各半，由浙江省实验动物中心提供，实验动物合格证号：浙医动字第2001001号。

1.3主要仪器

小鼠悬尾架，自制，电击笼，自制。

动物精神行为分析仪，荷兰NOLDUS公司，Ethovision3.0分析软件。

高效液相色分析系统，荧光检测器，美国VARIAN公司。

自动匀浆器，离心机，电子秒表，电子体温计等。

2、分组及给药

2.1小鼠实验

正常组：给0.5％CMC-Na溶液；

组合物小剂量组：250mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬；

组合物中剂量组：500mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬；

组合物大剂量组：750mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬；

阳性组：盐酸氯米帕明片：20mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬。

按照0.1ml/10g体积灌胃。

2.2大鼠实验

正常组：给0.5％CMC-Na溶液；

模型组：给0.5％CMC-Na溶液；

组合物小剂量组：125mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬；

组合物中剂量组：250mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬；

组合物大剂量组：375mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬；

阳性组：盐酸氯米帕明片：10mg/kg，以0.5％CMC-Na均质混悬。

按照1ml/100g体积灌胃。

3、实验方法

3.1小鼠自主活动试验

小鼠连续灌胃解郁胶囊7天，于末次灌胃1小时后，放入75×75cm专用活动场地，并将场地平均分为25格，适应3分钟后，继续观察5分钟内小鼠的活动情况，以动物精神行为分析软件计算动物活动距离、边缘格活动率(即边缘格内活动距离占总活动距离的百分比)、两前肢离地次数、不动时间和中央格停留时间。

3.2小鼠悬尾实验

小鼠连续灌胃解郁胶囊7天，于末次灌胃1小时后后，将小鼠尾端2cm处固定于水平杆上，使其呈倒挂状态，头部离台面约10cm，四周以板隔离动物视线，记录小鼠在6分钟内的不动时间。

3.3小鼠强迫游泳实验

先做预试验，将小鼠放入直径18cm，水深10cm的烧杯，水温保持25℃，小鼠游泳2分钟后，开始观察，累计4分钟内小鼠在水中停止挣扎、呈漂浮状态、仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间(不动时间)，将不动时间超过120秒或低于60秒者小鼠剔除。将合格小鼠随机分组，连续灌胃7天，于末次灌胃1小时后，按预试验方法进行强迫游泳试验，累计4分钟内小鼠的不动时间。

3.4大鼠拮抗利血平实验

SD大鼠连续灌胃解郁胶囊7天，于末次灌胃1小时后，皮下注射利血平3.5mg/kg，观察大鼠出现眼睑下垂的时间，并在注射利血平后2h、18h测定肛温。

3.5慢性不可预知的应激模型试验

SD大鼠，实验前将大鼠单个置于盛有2/3自来水的塑料桶内(桶高55cm，

水温20℃)，游泳15min训练1次并熟悉环境。然后每天灌胃给药1次，参照文献方法，按下列顺序给予不良刺激：禁食不禁水48h(2d)-电击5min(36V，10mA，上下午各1次)(1d)-禁水不禁食24h(1d)-冰水游泳5min(1d)-夹尾悬吊5min(1d)，完成1轮刺激共6d。恢复1d，第7d称体重后，每笼2只(个别3只)饲养，禁食，并喂以1％蔗糖水溶液，测定24h蔗糖水饮用量(奖赏反应)。第8d恢复正常供食和供水，第9d开始同样方法第二轮刺激。完成第2轮刺激后同法测定蔗糖水饮用量。次日，灌胃给药后30min，将大鼠置于水桶内，1min后开始记时，并用秒表记录5min内大鼠累计漂浮在水面上不动的时间，恢复一天后，将动物处死，取大脑海马组织测定单胺类神经递质(L-NE、DA、5-HIAA、5-HT)的含量。

由于单胺类神经递质容易被氧化，因此样品处理时必须低温和避光条件下进行。在冰台上尽快取出海马，用生理盐水冲洗，除去血液，滤纸拭干，称重。每只大鼠的海马约加1.0ml冰冷的0.4mol/L高氯酸溶液，在冰浴中用高速匀浆机匀浆，将海马组织匀浆液转入2.0mlEpendet离心管中，置冷冻离心机内以12000r/min离心15分钟，取上清液转移至1.0ml容量瓶中，用0.4mol/L高氯酸溶液定容至刻度，得样品溶液，备用。

色谱条件：色谱柱：YMC-C18柱(250×4.6mm 5μm)。流动相0.1mol·L-1的醋酸钠(内含0.1mmol·L-1的EDTA-2Na)，用Hac调节PH5.1，用0.45μm的微孔滤膜过滤，超声脱气，此缓冲液为流动相B，甲醇为流动相A，按比例9∶1等度洗脱，流速为1.0ml/min，进样10μL，发射波长330nm，激发波长290nm。柱温：30℃。

4实验结果

4.1组合物对正常小鼠自主活动的影响

表12可见，除小剂量组前肢离地次数低于正常组外，组合物对正常小鼠自主活动各项指标并无显著影响，提示组合物并非中枢兴奋药。

表12组合物对正常小鼠自主活动的影响(n＝10)

注：与正常组比较：^*P＜0.05

4.2组合物对正常小鼠悬尾不动时间的影响

表13可见，阳性组、组合物小剂量组和中剂量组，与正常组相比，能明显减少悬尾不动时间。

表13组合物对小鼠悬尾不动时间的影响

注：与正常组比较：^*P＜0.05

4.3组合物对小鼠强迫游泳不动时间的影响

表14可见，阳性组、组合物小剂量组和中剂量组，与正常组相比，能明显减少强迫游泳不动时间。

表14组合物对小鼠强迫游泳不动时间的影响

注：与正常组比较：^*P＜0.05

4.4组合物对大鼠拮抗利血平的影响

利血平具有排空脑内单胺神经递质的作用，能引起大鼠眼睑下垂，并引起体温明显下降。表15可见，和正常大鼠相比，组合物能明显延长大鼠注射利血平后眼睑下垂出现时间，并且呈现一定的量效关系。同时，与模型组相比，组合物能使大鼠体温显著恢复。

表15组合物对大鼠拮抗利血平的影响

注：与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

与正常组比较：#P＜0.05

4.5组合物对慢性抑郁模型大鼠的影响

经多种不良刺激联合作用后大鼠体重增长速度明显下降，一般状态略差，皮毛蓬松，活动减少。表16可见，在第1轮刺激的7d中体重增长与正常组比较，明显减缓，大剂量组甚至出现体重减轻的现象。第2轮刺激的7d中，造模各组体重增长较第1轮有所改善，但仍低于正常组体重的增长。与模型组相比，给药组大鼠的体重在第1轮刺激中，大剂量组明显低于模型组，其余各组与模型组未见明显差异。至第2轮刺激完成后给药组大鼠的体重与模型组比较均无明显差异。

糖水饮用量反映动物对奖赏的反应程度，抑郁症的模型动物对奖赏的反应性下降，糖水饮用量显著降低。表17可见，本实验中模型组大鼠的饮水量在经过第1轮和第2轮刺激后仅为正常组的75％和66％。组合物可以明显增加模型动物的糖水饮用量，提高对奖赏的反应，并有一定的剂量关系。

当大鼠进入一个有限空间使之游泳，开始时拼命游动试图逃脱，经多次努力失败后出现绝望行为，表现为漂浮不动状态，实际是动物放弃逃脱的希望，属于行为绝望，静止不动时间长短可以代表大鼠绝望(抑郁)的程度。表18可见，模型组大鼠的游泳不动时间比正常组大鼠明显增加，组合物对慢性抑郁模型大鼠游泳绝望行为有明显的对抗作用，能使游泳不动时间明显缩短，量效关系明确。大剂量组游泳不动时间比模型组降低58％，中小剂量组也明显缩短游泳不动时间。表19可见，解郁胶囊能明显提高慢性抑郁模型动物海马中单胺类神经递质(L-NE、DA、5-HIAA、5-HT)的水平，初步阐明了提高脑内单胺类神经递质水平是解郁胶囊抗抑郁作用机理之一。

表16组合物对慢性抑郁模型大鼠体重影响

注：与正常组比较：##P＜0.01，###P＜0.001

与模型组比较：^**P＜0.01

表17组合物对慢性抑郁模型大鼠奖赏反应的影响

注：与正常组比较：#P＜0.05，##P＜0.01

与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

表18组合物对慢性抑郁模型大鼠强迫游泳不动时间的影响

注：与正常组比较：#P＜0.05

与模型组比较：^*P＜0.05，^***P＜0.001

表19组合物对慢性抑郁模型大鼠海马中单胺类神经递质的影响

注：与正常组比较：#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001

与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

5药效学试验总结

实验采用小鼠悬尾实验、小鼠强迫游泳实验、大鼠拮抗利血平实验、大鼠慢性不可预知的应激模型试验等公认的抗抑郁动物试验方法进行组合物药效学研究，同时应用动物精神行为分析系统观察了组合物对动物自主活动的影响。结果证实，组合物能够明显缩短小鼠悬尾不动时间，小鼠强迫游泳不动时间。对大剂量利血平造模大鼠，能够明显延长眼睑下垂出现时间，明显拮抗利血平引起的体温下降。对慢性抑郁模型大鼠，组合物能明显提高模型大鼠对蔗糖水的奖赏反应，能明显缩短模型大鼠强迫游泳不动时间，其作用与盐酸氯米帕明接近。通过开场试验，证实组合物对正常动物自主活动并无明显影响，说明组合物并非中枢兴奋类药物。通过测定慢性抑郁模型大鼠大脑海马区组织中的单胺类神经递质含量，证实组合物能明显提高模型动物海马中L-NE、DA、5-HIAA、5-HT的水平，初步阐明了提高脑内单胺类神经递质水平是组合物抗抑郁作用机理之一。

药效学试验中，对正常小鼠的悬尾实验和强迫游泳实验结果，并未发现剂量和疗效之间的相关性，且均以中剂量组效果最佳。而在需要造模的大鼠拮抗利血平实验和大鼠慢性不可预知的应激模型试验中，组合物均呈现明显的量效关系。可能由于组合物在病理状态下更容易发挥药效有关。同时也发现，组合物对动物体重增长也有一定的抑制作用，是否会影响动物的脂质代谢，也有待于进一步研究。

药效学实验表明，组合物小剂量组即有明显抗抑郁药理作用，按体表面积换算，相当于成人每日服用组合物1000mg，即柴胡总皂苷100mg、白芍总皂苷900mg，换算为生药量相当于柴胡2.4g，白芍29.4g。机理研究表明，小剂量组对模型动物海马中的神经递质并无明显的提高作用，提示组合物抗抑郁可能有其他的作用机理，多靶点共同起效。

六、本发明组合物的毒理学研究：

1、急性毒性试验：由于该组合物毒性很低，无法测出LD50，而测得小鼠最大给药量为7.5g/kg(组合物/体重)，相当于临床成人用药剂量(按体表面积换算)的1000倍，连续观察10天，未见明显毒性反应。

2、长期毒性试验：大鼠灌胃组合物，大剂量组7.5g/kg为临床成人用药剂量的1000倍，中剂量2.5g/kg为临床成人用药剂量的333倍，小剂量0.75g/kg为临床成人用药剂量的100倍。连续灌胃给药6个月，未见大鼠在大剂量状况下出现死亡情况，也未见明显毒性反应，说明该组合物安全性较大。

本发明组合物由柴胡和白芍组方而成，方中柴胡轻清，长于疏达走窜，辛散善行，为疏肝理气，开郁结退热之佳品；白芍之功以补养阴血见长，又能柔肝平肝，缓急止痛，清解虚热。二药相伍，柴胡得白芍之柔，行肝气而不致疏泄太过，耗肝之体；白芍得柴胡之散，补肝血而不致郁遏气阴，碍肝之用，共奏疏肝、解郁和解表里止痛之功。既能疏肝解郁，以治肝用之不达，又能柔肝益阴以补肝体，为体用兼顾之最佳配伍。

本发明经现代制药工艺提取柴胡总皂苷和白芍总皂苷，按一定配伍比例制成解郁胶囊，具有明确的药用有效部位和明确的疗效，且无明显毒副反应。本发明组合物制备方法工艺稳定，操作可行，提取率高，纯度高，环境污染小，适合工业化生产，能取得较好的社会效益和经济效益。

Claims (5)

1.一种抗抑郁作用的中药组合物，由下列重量份的提取物制成：白芍提取物1-10份，柴胡提取物1-10份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述白芍提取物为9份，柴胡提取物为1份。

3.一种中药制剂，由如权利要求1或2所述的中药组合物制成，其剂型为口服液、片剂、胶囊剂、滴丸剂和颗粒剂中的任意一种。

4.一种中药制剂，由如权利要求2所述的中药组合物加入等重量的淀粉，混合均匀，灌装于胶囊中制得，胶囊中芍药苷的含量不少于7.50％，白芍总皂苷的含量不少于25.0％，柴胡皂苷d的含量不少于0.50％，柴胡总皂苷的含量不少于2.50％。

5.一种中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备白芍提取物：取白芍饮片，分别加入8倍量70％乙醇，提取3次，每次2小时，所得提取液减压回收乙醇，浓缩至2.0g生药/ml，取1BV体积的浓缩液，以1BV/小时的流速过AB-8大孔吸附树脂，静置2小时后，用去离子水以1BV/小时的流速清洗至流出液无色，用10BV 70％乙醇以2BV/小时的速度进行洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至浸膏，60℃真空干燥，取出，粉碎，得到白芍提取物；

2)制备柴胡提取物：取柴胡饮片，分别加入10倍量含1.0％碳酸钠的80％乙醇，加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液；所得的提取液减压回收乙醇，浓缩至0.2g生药/ml，量取1BV提取液，以1BV/小时的流速过AB-8大孔吸附树脂，静置2小时后，用去离子水10BV以1BV/小时的流速洗脱，弃去洗脱液，再用20％乙醇10BV以1BV/小时的流速清洗，弃去清洗液，用70％乙醇10BV以2BV/小时的速度洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至浸膏，60℃真空干燥，取出，粉碎，得到柴胡提取物；

3)制备组合物：按白芍提取物∶柴胡提取物为9∶1的重量配比，称取上述两种提取物，混合均匀制成权利要求2所述的中药组合物。