CN101854909B - 含有桔梗皂苷-d的皮肤美白剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含桔梗皂苷-D作为有效成分的皮肤美白用化妆品和药学组合物。本发明的桔梗皂苷-D可以对皮肤没有副作用地安全使用，此外抑制黑色素生成并在色素沉着阻碍效果方面是优异的。因此，含有桔梗皂苷-D作为有效成分的组合物在色斑和雀斑等的改善和皮肤美白中可以非常有效地使用。

Description

含有桔梗皂苷-D的皮肤美白剂

技术领域

本发明涉及皮肤美白用组合物；更详细地，涉及这样的皮肤美白用化妆品和药学组合物，其制品稳定性优异并且含有桔梗皂苷-D(platycodin-D)，所述桔梗皂苷-D对皮肤没有副作用且可以安全使用，以及抑制黑色素生成且色素沉着阻碍效果优异。

背景技术

人的肤色由皮肤内部的黑色素浓度和分布决定，除遗传因素以外，其也受到太阳紫外线和疲劳、应激反应等环境或生理条件的影响。由人体皮肤黑色素细胞生成的黑色素是具有黑的色素和蛋白质的复合形式的酚类高分子物质，发挥着遮断由紫外线产生的皮肤损伤的重要作用。据报告，在黑色素的生物合成中，黑色素细胞中存在的酪氨酸酶(tyrosinase)的作用最重要。酪氨酸酶通过将作为氨基酸中的一种的酪氨酸转换为黑色素聚合物生成的中间产物——即多巴、多巴醌(dopaquinone)——而在皮肤黑化过程中发挥核心作用。然而，虽然黑色素的生成途径成为公知，但关于酪氨酸酶作用以前阶段的黑色素合成的诱导机理尚未详细解析清楚。

如果这样的黑色素合成在皮肤内进行过度，皮肤色调就变黑，此外，产生色斑和雀斑等。因此，通过阻碍皮肤内的黑色素合成，能够使皮肤色调变亮且实现皮肤美白，此外，能够改善以紫外线、激素和遗传性原因为起因而产生的色斑和雀斑等皮肤色素过度沉着症。

因此在以往，使用例如氢醌(hydroquinone)和抗坏血酸(ascorbicacid)、曲酸(kojic acid)、谷胱甘肽(glutathione)等对酪氨酸酶具有阻碍活性的物质来改善皮肤美白效果或皮肤色素过度沉着症。然而，虽然氢醌发挥特定的美白效果，但其皮肤刺激性强从而存在必须将掺入量限制为极少量的问题。抗坏血酸容易氧化，因此掺入该抗坏血酸的化妆品产生变色、变臭等问题。曲酸在溶液内不安全，因此存在化妆品的制造工序变得复杂的缺点。另外，谷胱甘肽和半胱氨酸等硫醇类化合物具有特有的令人不快的气味，此外在经皮吸收方面也存在问题，这些配糖体和衍生物极性也高，所以难以作为化妆品的掺入成分使用。此外，在维生素C的情况下，在水溶液状态下容易氧化，存在不出现持续效果的问题。因此，最近开发了含有天然草药提取物的皮肤美白用组合物。但是，含有该天然草药提取物的皮肤美白用组合物大部分呈现颜色并且在掺入方面存在问题，其有效成分没有被鉴定，因此在制造制品时存在不能期望同样效果的问题。

另一方面，桔梗皂苷-D是在桔梗的根中存在的三萜皂苷(triterpenoid saponin)化合物之一，报告称其具有抗炎效果、抗肥胖效果、降低胆固醇效果、镇痛效果。另外，在美国专利申请第2002/0197334号中公开了桔梗皂苷-D对糖尿病有效，在国际公开WO2005/007181号中公开了桔梗皂苷-D通过抑制新血管生成的机制来显示抑制癌的效果。这样，对天然物质桔梗皂苷-D的效能进行着多种多样的研究。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于提供含有桔梗皂苷-D的皮肤美白用化妆品组合物。

本发明的另一目的在于提供含有桔梗皂苷-D的皮肤美白用药学组合物。

本发明的又一目的在于提供通过在包含人的哺乳动物的皮肤上涂布上述组合物而美白皮肤的方法。

有利效果

根据本发明，桔梗皂苷-D具有比现有的美白剂主要成分维生素C高的对细胞内酪氨酸酶活性的阻碍效果和黑色素生成抑制效能。另外，对人体的稳定性试验结果是桔梗皂苷-D不产生任何毒性或刺激，因此其被判定为对人体使用时安全的物质。因此，本发明的桔梗皂苷-D在用于皮肤美白的化妆品和医药等中可以有用地使用。

最佳实施方式

一个实施方式中，本发明涉及含有桔梗皂苷-D的皮肤美白用化妆品组合物。

本发明的桔梗皂苷-D是具有下述化学式1结构的、来自植物的三萜皂苷类(triterpenoid saponin)中的一种。

[化学式1]

本发明的桔梗皂苷-D是从天然来源(例如桔梗等)分离的、或对来自天然来源的三萜皂苷进行化学改性而制造的、或化学合成制造的，或是商业制造的商品(例如Pharmavan社的桔梗皂苷-D)。作为一个具体例子，本发明的桔梗皂苷-D可以使用水、醇或丙酮等溶剂在0℃～50℃下从桔梗根提取和分离。这样的提取和分离方法是本领域技术人员公知的。

为了研究本发明的桔梗皂苷-D的美白效果，测定与作为现有的美白化妆品原料使用的维生素C相比、在美白物质筛选中通常使用的细胞内酪氨酸酶活性和黑色素生成抑制效能，其结果是，在同样浓度下，本发明的桔梗皂苷-D显示比维生素C优异约10％以上的酪氨酸酶活性抑制和黑色素生成抑制效能。因此，本发明的桔梗皂苷-D具有优异的美白效果。

考虑到本领域的技术水平，对本领域技术人员显而易见的是，本发明的上述化学式1的桔梗皂苷-D包含在本领域通常进行的取代基加成或置换反应得到的衍生物中显示由黑色素生成抑制和/或酪氨酸酶活性抑制产生的皮肤美白效果的衍生物。

在本发明的皮肤美白用化妆品组合物中，相对全部组合物，桔梗皂苷-D的含量是0.001～10重量％、优选是0.001～5重量％。桔梗皂苷-D含量小于0.001重量％时，美白效果非常微弱；桔梗皂苷-D含量大于15重量％时，由含量增加产生的效果增加是微小的，存在不能确保剂型稳定性的问题。

本发明的皮肤美白用化妆品组合物除作为有效成分的桔梗皂苷-D以外，还可以包含在化妆品组合物中通常使用的成分。例如，存在抗氧化剂、稳定剂、溶解剂、维生素、颜料和香料等通常的助剂和/或载体。另外，为了增进皮肤美白效果，所述化妆品组合物还可以包含皮肤吸收促进物质。

本发明的化妆品组合物也可以制造成本领域中被通常制造的任意剂型，例如，可以制成溶液、悬浊液、乳浊液、糊、凝胶、霜、露(lotion)、粉剂、皂、含有表面活性剂的清洁剂、油、粉底、乳浊液底、蜡底和喷雾剂等剂型，但不限于这些剂型。可以优选制成柔软化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华、眼霜、清洁霜、清洁泡沫、清洁水、美容涂敷剂、喷雾剂或粉的剂型。

在本发明的剂型是糊、霜或凝胶的情况下，可以利用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶(トラカント)、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等作为载体成分。

在本发明的剂型是粉剂或喷雾剂的情况下，可以利用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末作为载体成分，特别是在喷雾剂的情况下，可以进一步包含氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚等推进剂。

在本发明的剂型是溶液或乳浊液的情况下，利用溶剂、溶解剂或乳化剂作为载体成分，例如，水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁基乙二醇油、脂族甘油酯、聚乙二醇或脱水山梨糖醇脂肪酸酯。

在本发明的剂型是悬浊液的情况下，可以利用例如水、乙醇或丙二醇等液状稀释剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯等悬浊剂，微晶纤维素，氢氧化铝氧化物，膨润土，琼脂或西黄蓍胶等作为载体成分，

在本发明的剂型是含有表面活性剂的清洁剂的情况下，可以利用脂肪族硫酸醇、脂肪族硫酸醇醚、磺基琥珀酸一酯、羟乙磺酸、咪唑鎓衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸、脂肪酸硫酸酰胺醚、烷基酰胺甜菜碱、脂族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等作为载体成分。

作为其它实施方式，本发明涉及含有上述桔梗皂苷-D的皮肤美白用药学组合物。

在本发明的药学组合物中，相对全部组合物，桔梗皂苷-D可以以0.001～10重量％、优选0.001～5重量％被包含。

根据治疗目的，所述药学组合物可以作为药学领域中通常的制剂进行剂型化，例如，可以制成锭剂、胶囊剂、散剂、颗粒、悬浊剂、乳剂、糖浆剂、乳浊剂、硬膏剂、软膏剂、喷雾剂、油剂、凝胶剂、酒精剂、酊剂、浴剂、擦剂、洗剂、贴剂、衬垫剂、霜剂等剂型。优选是在患部直接涂布、以局部给予为目的的皮肤外用剂，其为软膏剂、洗剂、喷雾剂、凝胶等形式。另外，这些皮肤外用剂可以包含在可在治疗部位直接适用的支撑基底(support base)或基质等中。支撑基底的例子包含纱布或绷带。在所述剂型化中使用的药学组合物可以是胶体状或干粉状等。

在作为软膏剂剂型化的情况下，必须考虑皮肤的表面温度、皮肤的pH、经皮水分消失(transdermal water loss)值、表皮的总脂质值等，例如与凡士林、液体石蜡、石蜡、液体石腊和聚乙烯的复合软膏基质(プラステイベ一ス)、硅、猪油、植物油、蜡、精制羊毛脂(purifiedlanolin)等油脂性基剂、水溶性基剂、乳剂性基剂、悬浊性基剂等组合而剂型化。这样的软膏剂可以和抗氧化剂(例如生育酚、BHA、BHT、NDGA等)、防腐剂(例如酚类物質、氯丁醇、苯甲醇、对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸等)、保湿剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇)、助溶剂(例如乙醇、丙二醇)、软化助剂(例如液体石蜡、甘油、丙二醇、表面活性剂等)等添加剂共同组合。

在作为洗剂剂型化的情况下，可以制造成为溶液型、悬浊型或乳剂型等洗剂。特别是在皮肤上涂布的洗剂的情况下，可以制造成为例如具有200cps～500cps的粘性，为了在涂布时赋予柔软感，优选组合湿润剂例如甘油、丙二醇等进行制造。

在作为喷雾剂剂型化的情况下，分散水分散的浓缩物或湿润粉末的推进剂等可以与添加剂共同组合。

在作为贴剂剂型化的情况下，为了增加通过皮肤的化合物吸收，可以使用吸收促进剂。

本发明的药学组合物还可以包含在药学组合物的制造中通常使用的适当载体、赋形剂和稀释剂。

本发明的药学组合物的剂型可以通过通常的方法，以例如散剂、颗粒剂、锭剂、胶囊剂、悬浊液、乳液、糖浆剂、气溶胶等经口型剂型，例如软膏、霜等外用剂，栓剂和灭菌注射溶液等起始进行剂型化而使用，也可以制成为适合于药学制剂的任何形态而使用。

本发明相关的药学组合物可以在大鼠、小鼠、家畜、人等哺乳动物中以非经口、经口等各种路径给予。可以预期所有给予方式，例如，可以通过经口、直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内经膜或脑血管内注射来给予。此时，非经口路径优选经皮给予，其中最优选局部涂布。所述局部给予包含带来全身效果的经皮传递。局部给予的情况下，可以包含赋形剂(例如，乳糖、淀粉、纤维素、乳糖、聚乙二醇等)、润滑剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸、二十二烷酸甘油酯、滑石等)、保存剂(例如，苯扎氯铵(benzyl alkonium chloride)等)等。

本发明的药学组合物以药学上有效的量给予。在本发明中，“药学上有效的量”意指以可用于医学治疗或预防的合理的益处/危险比治疗或预防疾病的足够量。有效用量的水平可以根据疾病种类及其严重程度；药物的活性；患者的年龄、体重、健康和性别；患者对药物的敏感度；被使用的特定提取物的给予时间、给予路径和排出比例；治疗时间；以及含有与被使用的特定提取物组合或同时使用的药物的要素和其它在医药领域中公知的要素决定。一般地，在外用剂的情况下，可以每日1.0～3.0mL、1日1～5次连续涂布1个月以上。另外，在经口型剂型的情况下，虽然根据患者的年龄、性别和体重而不同，但可以1日1次～数次给予0.1～100mg/kg的量。

作为其它实施方式，本发明涉及在包含人的哺乳动物的皮肤上涂布所述化妆品组合物或药学组合物而美白皮肤的方法。

在本发明中，“美白”指的是防止或改善老化、紫外线、污染的环境等多种原因导致的黑色素沉着而发生的皮肤黑化。

在具体实施中，即使与以皮肤美白为目的、作为化妆品等的原料而一直以来被使用的维生素C比较，本发明的桔梗皂苷-D在约10％以上酪氨酸酶活性抑制和黑色素生成抑制效能方面是优异的。因此，在本发明的化妆品组合物和药学组合物中作为有效成分被包含的桔梗皂苷-D的皮肤美白效果非常优异，因而在皮肤上涂布所述组合物可以使皮肤有效地美白。

在本发明的具体实施中，对桔梗皂苷-D的皮肤累积刺激试验结果证明桔梗皂苷-D是天然物质和对人体无害的物质。因此，本发明的桔梗皂苷-D几乎没有毒性和副作用，因而即使在长期使用时也可以放心使用，特别是可以安全地适用如所述的化妆品组合物和药学组合物等。

实施方式

以下，通过实施例更详细地说明本发明。这些实施例是为了更具体地说明本发明，而不是限制本发明。

实施例1：由桔梗皂苷-D产生的黑色素生成抑制效果的测定

使用大鼠的色素细胞(B16黑素瘤细胞)测定由桔梗皂苷-D(Sigma)产生的黑色素生成抑制效果，将该测定效果与已知抑制黑色素生成的由维生素C产生的黑色素生成抑制效果相比较。

本实验在6孔板上以每孔1×10⁵接种大鼠黑素瘤(B16 F10)细胞，在含有10％的FBS(胎牛血清)的DMEM培养基中，在5％CO₂和37℃下培养成细胞在孔的底部粘附约80％。培养后除去培养基，用将桔梗皂苷-D和维生素C稀释到适当浓度的DMEM培养基进行替换，在5％CO₂、37℃下培养3日。桔梗皂苷-D的浓度范围确定在没有细胞毒性的0.1μM、0.5μM、1μM。与桔梗皂苷-D同样，维生素C的浓度范围为0.1μM、0.5μM、1μM。所述培养后除去培养基，用PBS(磷酸盐缓冲液)洗净收集到的细胞，将其用胰蛋白酶处理并回收细胞。被回收的细胞使用血细胞计数器测定细胞数，以5,000～10,000rpm离心分离10分钟，然后除去上清液得到沉淀。使该细胞沉淀在60℃干燥，然后加入100μL含有10％DMSO的1M氢氧化钠溶液，在60℃的恒温槽中得到细胞内的黑色素。使用该液体，通过酶标仪(microplatereader)在490nm测定吸光度，求出每一定数细胞的黑色素量。在表1中显示该结果。

[表1]

试样	处理浓度(μM)	黑色素生成抑制率(％)
			维生素C	0.1	0
维生素C	0.5	0
			维生素C	1	2
桔梗皂苷-D	0.1	0
			桔梗皂苷-D	0.5	34
桔梗皂苷-D	1	52

如在表1中表示的，在同一处理浓度，桔梗皂苷-D表明比维生素C优异的黑色素生成抑制率。

实施例2：由桔梗皂苷-D产生的细胞内酪氨酸酶活性抑制效果的测定

使用大鼠的色素细胞(B16黑素瘤细胞)测定由桔梗皂苷-D产生的黑色素生成抑制效果，将该测定效果与已知抑制黑色素生成的由维生素C产生的细胞内酪氨酸酶活性抑制效果相比较。

本实验在6孔板上以每孔1×10⁵接种小鼠黑素瘤(murine melanoma)(B16F10)细胞，在含有10％的FBS(胎牛血清)的DMEM培养基中，在5％CO₂和37℃下培养成细胞在孔的底部粘附约80％以上。培养后除去培养基，用将桔梗皂苷-D和维生素C稀释到适当浓度的DMEM培养基进行替换，在5％CO₂、37℃下培养3日。桔梗皂苷-D和维生素C的浓度与实施例1同样为0.1μM、0.5μM、1μM。所述培养后除去培养基，用PBS(磷酸盐缓冲液)洗净收集到的细胞，将其用胰蛋白酶处理并回收细胞。被回收的细胞使用血细胞计数器测定细胞数，然后以5,000～10,000rpm离心分离10分钟，除去上清液得到沉淀。使用裂解缓冲液粉碎该细胞沉淀，然后以12,000rpm离心分离10分钟收集上清液。使用该液体，通过酶标仪在490nm测定吸光度，求出每一定数细胞的酪氨酸酶活性。在表2中显示该结果。

[表2]

试样	处理浓度(μM)	细胞内酪氨酸酶活性抑制率(％)
			维生素C	0.1	0
维生素C	0.5	0
			维生素C	1	4
桔梗皂苷-D	0.1	1
			桔梗皂苷-D	0.5	33
桔梗皂苷-D	1	49

如在表2中表示的，在同一处理浓度，桔梗皂苷-D表明比维生素C优异的细胞内酪氨酸酶活性抑制率。

实施例3：动物水平的美白效果评价

使用已知与人同样地由紫外线引起色素沉着的褐色豚鼠(Tortoiseshell guinea pig；Brown guinea pigs)，测定由桔梗皂苷-D产生的美白效果。

为了在所述褐色豚鼠中诱发紫外线(UV)产生的色素沉着，在除去了褐色豚鼠腹部的毛的皮肤上粘合设置了3×3cm²的正方形开口的遮光用铝箔，然后用SE灯(波长290～320nm，东芝)照射紫外线(总照射能量＝1350mJ/m²)。紫外线照射后，剥去铝箔，用下述方法涂布试样(桔梗皂苷-D和维生素C)。在紫外线照射2、3日后出现色素沉着，约2周后到达最高。从此时开始涂布各试样。

涂布以1日1次或2次回收连续50日。试样使用特定溶剂(丙二醇∶乙醇∶水＝5∶3∶2的混合溶剂)溶解和稀释，以棉棒涂布，在其它部位设置必须涂布溶剂的对照部位。在判断效果的同时，也观察累积刺激性。

使用色差计(美能达CR2002色彩照度计)测定皮肤的黑白程度和判断效果，在表3中表示该判断效果。在表示颜色中使用L^*A^*B^*表色计，在本发明中以L^*值作为指标。L^*值用标准白板校正，L^*值在1个部位反复测定5次以上，使色素沉着成为均等。求出涂布开始时和涂布结束时的肤色差异(L^*)，从该值判断效果。对涂布试样部位和对照组部位求出L^*值后，如果对它们进行比较，就可以确认美白物质的效果。在表3中表示该结果。

[实验式1]

L^*＝涂布оо日后的L^*值-涂布开始日的L^*值

[表3]

试样	处理浓度(％)	美白效果(L)
			桔梗皂苷-D	0.2	0.42
桔梗皂苷-D	1.0	0.58
			维生素C	1.0	0.44
对照组		0.30

根据表3，桔梗皂苷-D表明比维生素C优异的美白效果，因为在试验物质涂布试验过程中没有观察到累积刺激，所以可知在安全性方面也是优异的。

实施例4：桔梗皂苷-D对人体皮肤的安全性确认实验

4-1.含有桔梗皂苷-D的皮肤外用剂的制造

为了确认如所述的判断为美白效果优异的桔梗皂苷-D对人体皮肤也是安全的，制造含有桔梗皂苷-D和维生素C的皮肤外用剂，进行由其产生的皮肤安全性验证实验。

含有桔梗皂苷-D和维生素C的皮肤外用剂以表4的成分含量制造。在表4中，对照组是不含酪氨酸酶阻碍剂的皮肤外用剂，试验组1和试验组2分别是含有桔梗皂苷-D和维生素C的皮肤外用剂。

为了制造皮肤外用剂，混合净化水、甘油和丁二醇并在70℃溶解(水相部分)，在70℃溶解所述3种成分和三甲醇胺以外的剩余成分(油相部分)。在水相部分中添加所述油相部分，用均质器(日本特殊机化社生产)搅拌进行1次乳化，最后在其中添加三甲醇胺。除去在混合液中生成的气泡后，冷却到室温并制造皮肤外用剂。

[表4]

4-2.皮肤累积刺激试验

使用在实施例4-1中制造的各皮肤外用剂，以30名健康成人为对象，在上臂部位进行隔日合计9次的24小时累积贴布，测定桔梗皂苷-D是否对皮肤造成刺激。

贴布方法使用芬兰小室(Finn chamber)(Epitest Ltd.ピンランド)。在小室中每次15μl滴下所述各皮肤外用剂后进行贴布。将每次在皮肤上出现的反应程度通过实验式2评分，在表5中表示该结果。

[实验式2]

平均反应度＝{[反应指数×反应度/被检验总人数×最高分数(4分)]×100}/检查次数(9次)

此时，在反应度中，给予±是1分、+是2分、++是4分的分数，平均反应度低于3时判定为安全的组合物。

[表5]

在表5中，试验组1中相当于±、+、++的人数分别是1名、0名、0名，其它的没有出现反应。通过实验式2计算为{[(1×2)/(20×4)]×100}/9＝0.13，平均反应度成为0.37，其为3以下，判断为安全的组合物。

因此，如在表5中表示的，含有桔梗皂苷-D(试验组1)的皮肤外用剂没有象对照组或含有维生素C的皮肤外用剂那样地显示累积刺激形态，判定为对人体皮肤安全的物质。

工业实用性

本发明的桔梗皂苷-D具有比现有美白剂主要成分维生素C高的对细胞内酪氨酸酶活性的阻碍效果和黑色素生成抑制效能。另外，桔梗皂苷-D的人体稳定性试验结果是不产生任何毒性或刺激，所以被判断为对人体使用时安全的物质。因此，本发明的桔梗皂苷-D在用于皮肤美白的化妆品和医药等中可以有用地使用。

Claims (6)

1.桔梗皂苷-D在制备用于改善色素沉着的皮肤的化妆品中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征是，所述化妆品具有选自下列的剂型：溶液、悬浊液、乳浊液、糊、凝胶、霜、露、粉剂、皂、含有表面活性剂的清洁剂、油、粉底、乳浊液底、蜡底和喷雾剂。

3.桔梗皂苷-D在制备用于治疗色素沉着的皮肤的药物中的用途。

4.如权利要求1或2所述的用途，其中桔梗皂苷-D以相对全部化妆品总重量为0.001～10重量％被包含。

5.一种用于改善色素沉着的皮肤的方法，其包含在包括人的哺乳动物的皮肤上涂布包含桔梗皂苷-D的化妆品的阶段。

6.如权利要求3所述的用途，其中桔梗皂苷-D以相对全部药物总重量为0.001～10重量％被包含。