CN102218085B - 多穗石柯叶药材的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及多穗石柯叶药材的质量控制，提供了多穗石柯叶药材的质量控制方法，在评价该药材的含量检测、薄层鉴别、性状鉴别、显微鉴别以及水分灰分控制方法的基础上，为规范多穗石柯叶药材质量提供了科学依据。

Description

多穗石柯叶药材的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种壳斗科栎(石柯)属常绿植物多穗石柯叶Lithocarpuslitseifolius(Hance)Chun药材的质量控制领域，提供了多穗石柯叶药材的质量控制方法。

背景技术

多穗石柯，拉丁学名为Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun，属于壳斗科Fagaceae，栎(石柯)属Lithoearpus常绿植物，别名多穗石柯《中华本草》、《中药大辞典》、黑石虎《广西药用植物名录》、大叶稠子(大叶稠)、鸡山柯《中国树木志》、多穗柯《中国高等植物图鉴》、绵石栎、绵柯、刚板栗、羊角栎、绵槠、青皮刚、大青冈、灰稠、稠木、稠栗、《全国中草药汇编二版下册》《新华本草纲要第三册》、甜茶。人们习惯上称为甜荼或甘茶。

文献中收载的植物来源中植物名不一致，《海南植物志》收载的植物来源为壳斗科栎属(石柯属)植物Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun(中文名为多穗石柯)，而《中华本草》、《中药大辞典》、《全国中草药汇编》、《新华本草纲要》、《中药志》、《中国高等植物图鉴》收载的植物来源为壳斗科栎属(石柯属)植物Lithocarpus polystachyus Rehd(中文名为多穗石柯、多穗柯等)，经与《中国植物志》及《Flora of China》比照鉴定，认定该植物标本的种名为Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun(＝L.polystachyus Rehd.)。

该叶味甘甜清爽，不仅生津止渴，且对人体有较好的药理作用和保健功能。据《中药志》上记载及有关文献资料报导：“能防治高血压、治疗湿热痢疾、皮肤瘙痒、痈疽恶疮等症。并具有滋养肝肾和胃降逆、润肺止咳、解困醒酒等作用；《本草纲目》记载：“气味甘、平”、“无毒、疗痔、止血及血痢、止渴、活血、利小便”；《中药大辞典》记载：“治高血压”；《中华本草》对多穗石柯叶记载：“清热解毒，化痰，祛风，降压。主治湿热泻痢，肺热咳嗽，痈疽疮疡，皮肤瘙痒，高血压。”，其中《四川常用中草药》记载清热、止泻，治痈疽恶毒疮，皮肤瘙痒，湿热痢疾。《浙江药用植物志》记载治高血压病。

多穗石柯叶特有的药效已被学术界获得认同，目前市场上已开始对多穗石柯叶作为食品、保健食品开发，但对多穗石柯叶的质量如何控制没有涉及，因此需要对其质量控制方法进行规范，以控制多穗石柯叶的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种多穗石柯药材的含量检测方法；

本发明的另一目的是提供一种多穗石柯药材的鉴别方法；

本发明的再一目的是提供一种多穗石柯药材的质量检查方法；

本发明的再一目的是提供一种多穗石柯药材的质量检测方法。

发明详述：

本发明所述的多穗石柯叶药材为为壳斗科植物栎(石柯)属Lithoearpus常绿植物多穗石柯Lithocarpus litseifolius Chun的干燥叶，该药材出自于《海南植物志》。《中华本草》、《中药大辞典》、《中国本草彩色图鉴》收载品名为多穗石柯叶；《全国中草药汇编》、《中药辞海》收载品名均为多穗石柯，《中国高等植物图鉴》收载品名为多穗柯。

文献中收载的植物来源中植物名不一致，《海南植物志》收载的植物来源为壳斗科栎属(石柯属)植物Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun(中文名为多穗石柯)，而《中华本草》、《中药大辞典》、《全国中草药汇编》、《新华本草纲要》、《中药志》、《中药辞海》、《云南植物志》、《中国高等植物图鉴》收载的植物来源为壳斗科栎属(石柯属)植物Lithocarpus polystachyus Rehd，其中《全国中草药汇编》、《新华本草纲要》收载的植物名为绵石栎，《中华本草》、《中药辞海》、《云南植物志》收载的植物名为多穗石栎，《中药大辞典》、《中国高等植物图鉴》收载的植物名为多穗柯。经与《中国植物志》及《Flora of China》比照鉴定，认定该植物标本的种名为Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun(＝L.polystachyus Rehd.)。

本发明中多穗石柯叶药材的原植物多穗石柯Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun为常绿乔木，高11-15m。小枝幼时淡褐色，老时干后暗黑褐色。叶片革质，长椭圆形或卵状长椭圆形，长7-14cm，宽3-4cm，先端急尖或突然渐尖，基部碶形，全缘，无毛，下面稍带灰白色，侧脉7-10对，支脉纤细，疏离，稍明显，小脉通常不明显。雄花序极少复穗状；雌花3朵一簇，常1朵结实。果序长8-10cm，轴纤细，直径约5mm；壳斗浅盘形，包围坚果基部，直径9-14mm，高3-5mm；鳞状苞片轮状排列，细小，除顶部外与壳斗愈合，被褐黑色绒毛；坚果扁球形，直径1.6-1.8cm，长9-13mm，未成熟时顶部锥尖状，成熟时近平坦，中央有短尖头，基部截平，无毛；果脐深内陷，直径6-8mm。花期5-9月，果期翌年5-9月。

野生于海拔400-2000m的温暖山林密林中，路边灌木林中偶见。在湖南、江西、重庆等地有栽培。主产于长江以南各省区，尤以湖南、江西、广西、安徽等省资源丰富，而且集中；广东、云南、四川、福建等省次之。以江西、福建交界的武夷山脉、湖南地区的武陵山脉分布最广。印度、泰国也有分布。

本发明通过多穗石柯药材的薄层、性状、显微三方面的鉴别方法来控制药材的质量。

本发明中多穗石柯叶药材优选的薄层色谱为：取本品粉末0.1-10g，加乙醇10-100ml，加热回流0.1-2小时，滤过；滤液浓缩至1-50ml，作为供试品溶液。另取根皮苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.1-50mg根皮苷的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液1-20μl，对照品溶液1-20μl，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(3∶1∶1)5～15℃放置0.1-50小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1-70％香草醛浓硫酸溶液，在50-200℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与根皮苷对照品色谱相应的位置，显相同颜色的斑点。

本发明中多穗石柯叶药材最优选的薄层色谱为：取本品粉末0.2-5g，加乙醇20-50ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过；滤液浓缩至2-20ml，作为供试品溶液。另取根皮苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.2-20mg根皮苷的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2-10μl，对照品溶液2-10μl，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(3∶1∶1)5～15℃放置0.5-20小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5-50％香草醛浓硫酸溶液，在80-150℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与根皮苷对照品色谱相应的位置，显相同颜色的斑点。

本发明中多穗石柯叶药材薄层色谱的展开系统，是在尝试了各种展开溶剂，包括石油醚、氯仿(三氯甲烷)、乙酸乙酯、甲醇、丙酮等溶剂，进行深入研究，不断组合筛选，而后确定了较理想的展开体系即三氯甲烷-丙酮-甲醇，通过调整三者间的相互比例，最终研究确定了最为合理的展开系统：三氯甲烷-丙酮-甲醇(3∶1∶1)。

本发明中多穗石柯叶药材的优选性状鉴别方法为：叶多扁平或皱缩卷曲，有些破碎不全，完整叶长5-25cm，宽1-10cm，叶片革质，卵状披针形至长椭圆形，叶脉在背面突出，先端渐尖或长渐尖。叶绿色，上面色深，下面色淡，基部契形，全缘，无毛，叶柄长0.5-4cm，基部增粗，常呈暗褐色。质脆，气微，味甜。

本发明中多穗石柯叶药材的最优选性状鉴别方法为：叶多扁平或皱缩卷曲，有些破碎不全，完整叶长7-20cm，宽2-8cm，叶片革质，卵状披针形至长椭圆形，叶脉在背面突出，先端渐尖或长渐尖。叶绿色，上面色深，下面色淡，基部契形，全缘，无毛，叶柄长1-2.5cm，基部增粗，常呈暗褐色。质脆，气微，味甜。

本发明中多穗石柯叶药材的优选显微鉴别方法为：粉末灰绿色或灰棕色，叶的下表皮细胞呈多角形，壁薄，非腺毛单细胞，直径1-15μm，长15-75μm。气孔不定式或不等式，纤维多已折断，成束或单根散在，直径3-25μm，螺纹或网纹导管。可见栅栏组织碎片和棕色块状物，薄壁细胞含草酸钙簇晶。

本发明中多穗石柯叶药材的最优选显微鉴别方法为：粉末灰绿色或灰棕色，叶的下表皮细胞呈多角形，壁薄，非腺毛单细胞，直径3-9μm，长22-50μm。气孔不定式或不等式，纤维多已折断，成束或单根散在，直径7-17μm，螺纹或网纹导管。可见栅栏组织碎片和棕色块状物，薄壁细胞含草酸钙簇晶。

本发明中多穗石柯叶药材的薄层色谱鉴别方法为：取本品粉末0.1-10g，加乙醇10-100ml，加热回流0.1-2小时，滤过；滤液浓缩至1-50ml，作为供试品溶液。另取根皮苷对照品，加乙醇制成每1ml含0.1-50mg根皮苷的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液1-20μl，对照品溶液1-20μl，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(1-4∶0-2∶0-2)5～15℃放置0.1-50小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1-70％香草醛浓硫酸溶液，在50-200℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与根皮苷对照品色谱相应的位置，显相同颜色的斑点。

本发明通过提供一种多穗石柯药材的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物质量检查方法来控制药材的质量。

本发明通过采集湖南芷江3-9月份野生、栽培的多穗石柯叶共14份样品，每份平行试验，参照水分、灰分、浸出物测定法测定。

为确定总灰分的性质，对3-5月份各抽检1分进行总灰份和酸不溶性灰分的检测：

表1.部分样品的总灰分与酸不溶性灰分对比

样品名称            总灰分(％)    酸不溶性灰分(％)

基地苔叶4月(090402) 3.50          0.07

野生叶5月(090501)   3.84          0.11

野生嫩芽3月(090301) 5.22          0.23

由表1可知，总灰分高的样品对应酸不溶性灰分也相应增高。

本发明通过采集湖南芷江3-9月份野生、栽培的多穗石柯叶共14份样品，每份平行试验，照醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法用70％乙醇作溶剂测定。

表2.样品的水分、灰分与浸出物的结果

由表2可知，本发明中多穗石柯叶药材的水分优选不得超过10％。

本发明中多穗石柯叶药材的水分最优选不得超过8％。

本发明中多穗石柯叶药材的总灰分优选不得超过8％。

本发明中多穗石柯叶药材的总灰分最优选不得超过6.5％。

本发明中多穗石柯叶药材的酸不溶性灰分优选不得超过0.3％。

本发明中多穗石柯叶药材的浸出物优选不得低于15％。

本发明中多穗石柯叶药材的浸出物最优选不得低于18％。

本发明提供了一种多穗石柯叶的含量检测方法。

本发明照高效液相色谱法，对多穗石柯叶药材中的根皮苷含量的色谱条件在经过多次实验，流动相的有机相与水相须梯度洗脱才能够达到较好的分离度，流动相增加有机相比例可以提高根皮苷的理论塔板数，反之，提高水相的比例可以提高根皮苷与三叶苷的分离度。另外，水相中保持一定的酸度可以提高主峰与杂质峰的分离效果。

本发明照高效液相色谱法，对多穗石柯叶药材中的根皮苷含量的色谱条件优选以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.01-1％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为250-300nm；柱温10-60℃。理论板数按根皮苷峰计算应不低于2000，根皮苷与三叶苷的分离度大于1.5。

本发明照高效液相色谱法，对多穗石柯叶药材中的根皮苷含量的色谱条件最优选以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.05-0.5％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为270-290nm；柱温20-40℃。理论板数按根皮苷峰计算应不低于3000，根皮苷与三叶苷的分离度大于2.0。

本发明在对根皮苷含量的检测来控制多穗石柯叶药材的质量。

本发明通过采集湖南芷江3-9月份野生、栽培的多穗石柯叶共14份样品，每份平行试验，以上述高效液相色谱条件按外标法对根皮苷含量进行测定，根皮苷含量最高为14.63％，最低为1.40％，总平均值为6.85％，具体见表3。

表3.14批样品含量测定结果

样品名称	根皮苷含量(％)	三叶苷含量(％)
			基地嫩叶3月(090302)	6.94	15.15
野生嫩芽3月(090301)	3.99	19.06
			基地苔叶4月(090402)	8.79	27.69
野生嫩芽4月(090401)	1.40	32.23
			野生叶5月(090501)	2.07	20.92
基地老叶6月(090602)	8.18	0.19
			野生老叶6月(090601)	6.02	0.44
基地老叶7月(090702)	6.53	0.35
			野生老叶7月(090701)	7.97	0.13
基地老叶8月3号(090803)	8.86	0.24
			野生老叶1号8月(090801)	2.69	0.01
野生老叶2号8月(090802)	14.63	0.44
			基地老叶9月(090902)	8.59	0.45
野生老叶9月(090901)	9.21	0.44

本发明的多穗石柯叶其味甘甜清爽，不仅生津止渴，且对人体有较好的药理作用和保健功能。据《中药志》上记载及有关文献资料报导：“能防治高血压、治疗湿热痢疾、皮肤瘙痒、痈疽恶疮等症。并具有滋养肝肾和胃降逆、润肺止咳、解困醒酒等作用；《本草纲木》记载：“气味甘、平”、“无毒、疗痔、止血及血痢、止渴、活血、利小便”；《中药大辞典》记载：“治高血压”；《中华本草》对多穗石柯根记载：“补肝肾、祛风湿。主治肾虚腰痛、风湿痹痛。”，其中《四川常用中草药》记载治虚弱，《全国中草药汇编》记载补肾益阴，治虚损病，《四川中药志》记载滋养肝肾，祛风除湿，用于腰膝酸痛，风湿关节痹痛。对多穗石柯叶记载：“清热解毒，化痰，祛风，降压。主治湿热泻痢，肺热咳嗽，痈疽疮疡，皮肤瘙痒，高血压。”，其中《四川常用中草药》记载清热、止泻，治痈疽恶毒疮，皮肤瘙痒，湿热痢疾。《浙江药用植物志》记载治高血压病。对多穗石柯果记载：“和胃降逆。主治呃逆，噫膈”，其中《四川常用中草药》记载降逆、治哽疾病，《四川中药志》记载和胃降逆，用于噫膈呃逆。对多穗石柯茎记载：“祛风湿、活血止痛。主治风湿痹痛、损伤骨折。”此外，国外有大量权威文献报道多穗石柯叶的主要成分根皮苷具有降血糖而用于治疗糖尿病和糖尿病并发症，如Achim Starke等报道了根皮苷能矫正胰岛素缺乏的狗的高血糖并使其恢复至正常水平，Luclano Rossetti等也同样报道了根皮苷能矫正糖尿病老鼠的高血糖并使其胰岛素敏感性恢复正常，Dimitrios Dimitrakoudis等则报道了根皮苷能抑制肾脏中葡萄糖的重吸收而降低血糖。

本发明的多穗石柯叶药材可用于制备预防或治疗湿热泻痢、肺热咳嗽、痈疽疮疡、皮肤瘙痒、高血压、糖尿病及其并发症等疾病的药物中的应用。

本发明的多穗石柯叶药材优选用于制备预防或治疗糖尿病及其并发症等疾病的药物中的应用。

本发明中所述的糖尿病并发症包括1、肠胃功能紊乱(大便干稀不定)2、眼病(视力模糊，眼底出血，视网膜病变及脱落，白内障等)3、脑血管病(脑动脉硬化，脑出血，脑血栓，失眠)4、心血管病(冠心病，心律不齐，心跳过速等)5、肾病(尿蛋白，肾炎，肾蟀，尿毒症等)6、神经末梢病变(手脚麻木，发凉，神经疼，关节疼等)7、糖尿病足(下肢溃疡，坏疽等)。

本发明的多穗石柯叶药材可以内服或外服。内服可煎汤，10-15g或泡茶饮1-10g。外用适量，采用捣敷或煎水洗。

附图说明

图1.多穗石柯叶显微特征图-栅栏组织

图2.多穗石柯叶显微特征图-导管

图3.多穗石柯叶显微特征图-导管

图4.多穗石柯叶显微特征图-非腺毛

图5.多穗石柯叶显微特征图-草酸钙簇晶

图6.多穗石柯叶显微特征图-气孔

图7.多穗石柯叶的薄层鉴别

图8.根皮苷线性图

图9.三叶苷线性图

具体实施方式

下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明。但不以任何方式限制本发明。

实施例1.多穗石柯叶的薄层色谱分析

取本品粉末0.5g，加乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，对滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液点样用。另外取根皮苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液1μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(3∶1∶1)5～15℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛浓硫酸溶液(15g香草醛+250mL乙醇+2.5mL浓硫酸)，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与根皮苷对照品色谱相应的位置，显相同颜色的斑点，如图7(1.根皮苷对照品，2.样品090801，3.三叶苷对照品)。

实施例2.多穗石柯叶含量检测方法

经多次实验，发现流动相的有机相与水相须梯度洗脱才能够达到较好的分离度，流动相增加有机相比例可以提高根皮苷的理论塔板数，反之，提高水相的比例可以提高根皮苷与其它成分的分离度。另外，水相中保持一定的酸度可以提高主峰与杂质峰的分离效果。

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：4.6×150mm，检测波长：285nm，柱温：30℃，流速：0.8ml/min，以甲醇为流动相A，0.1％磷酸为流动相B，流动相梯度洗脱如下：理论板数按根皮苷峰计算不低于5000。根皮苷与三叶苷的分离度大于2.0。

流动相梯度洗脱        时间(分钟)        A(％)        B(％)

                      0                 40           60

                      10                75           25

                      15                75           25

实施例3.多穗石柯叶含量检测方法的系统适应性研究

精密取根皮苷工作对照品(080101)24.75mg、三叶苷工作对照品24.72mg加70％乙醇稀释并定容至100ml容量瓶中，移取1ml至10ml容量瓶中加70％乙醇定容后连续进样6针(进样量为10μl)，根皮苷、三叶苷的峰面积的RSD分别为0.09％、0.12％它们都＜2％；且两峰之间的分离度R＞1.5，根皮苷的理论塔板数大于5000，均符合规定，并且空白溶液对此没干扰，结果见表4：

表4.系统适应性数据

实施例4.多穗石柯叶含量检测中对照品定量限的确定

将系统适应性溶液稀释成适当浓度，量取10μl进样，经检测，根皮苷的峰高达到噪音峰高的10倍，连续6针的峰面积分别为6.8、6.6、6.9、6.6、6.7、6.6，RSD为1.89％，根皮苷的定量限定为2.475ng。三叶苷的峰高达到噪音峰高的10倍，连续6针的峰面积分别为7.5、7.5、7.7、7.6、7.4、7.7，RSD为1.60％，三叶苷的定量限定为2.472ng。

实施例5.多穗石柯叶含量检测方法的耐用性试验

主要改变有机相与水相的比例、柱温与流速，结果见表5，由结果分析可见有机相比例、柱温与流速稍有改变不影响检测结果。

表5.耐用性试验测定结果

实施例6.多穗石柯叶含量检测方法的稳定性研究

取基地苔叶4月的样品(090402)4g，精密称定，置250～300ml的锥形瓶中，精密加70％乙醇100ml，密塞精密称定，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时后精密称定，用70％乙醇补足重量，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液0.5ml，置100ml量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，摇匀，然后分别在放置0h、2.5h、5h、7.5h、10h、14h、24h后进样(10μl)，结果见表6：

表6.稳定性试验结果表

检测时间	根皮苷峰面积	三叶苷峰面积
			0h	413.8	1446.2
2.5h	415.5	1448.2
			5h	416.3	1449.7
7.5h	417.2	1450
			10h	417	1446.9
14h	418	1446.9
			24h	418	1443.3
RSD(％)	0.36	0.16

实施例7.多穗石柯叶含量检测方法的线性范围研究

精密取根皮苷工作对照品(080101)24.75mg、三叶苷工作对照品24.72mg加70％乙醇稀释并定容至同一100ml容量瓶中作为储备液，分别精密移取储备液4.0ml、2.0ml、1.5ml、1.0ml、0.8ml、0.5ml、0.3ml、0.2ml、0.1ml至10ml容量瓶加70％乙醇定容，相对应的限度为400％、200％、150％、100％、80％、50％、30％、20％、10％，再分别移取限度为50％、30％、20％、10％水平的溶液1ml至10ml容量瓶加70％乙醇定容，其相对应的限度为5％、3％、2％、1％，每份样品进两针，进样量为10μl，取平均峰面积对浓度作线性图，见图8、图9。根皮苷样品溶液的浓度在0.2475μg/ml～99μg/ml范围内的线性关系良好，线性回归系数r＝0.999；三叶苷溶液的浓度在0.2472μg/ml～98.88μg/ml范围内的线性关系良好，线性回归系数r＝0.999。试验结果见表7。

表7.线性范围试验结果表

实施例8.多穗石柯叶含量检测中对照品回收率试验

取基地嫩芽3月的样品(090302)4g，精密称定，置250～300ml的锥形瓶中，精密加70％乙醇100ml，密塞精密称定，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时后精密称定，用70％乙醇补足重量，用干燥滤器迅速滤过，续滤液作为储备液A，取根皮苷工作对照品(080101)62.90mg、三叶苷工作对照品62.55mg加70％乙醇稀释并定容至同一25ml容量瓶中作为储备液B，分别从储备液A中精密移取0.25ml共9份至不同100ml容量瓶中，再分别移取储备液B 0.8ml、1.0ml、1.2ml各3份至上述的100ml容量瓶中加70％乙醇定容，进样(进样10μl)。试验结果见表8、表9。根皮苷的平均回收率为105.7％，RSD＝0.85％，三叶苷的平均回收率为105.2％，RSD＝0.86％。

表8.根皮苷加样回收率试验结果

表9.三叶苷加样回收率试验结果

实施例9.多穗石柯叶含量检测方法的中间精密度试验

取甜茶药材的3批样品由两个不同的分析人员分别用不同色谱柱在两台不同的色谱仪上在不同时间进行测定，结果见表10。

表10.中间精密度试验结果

A仪器Agilent1100高效液相色谱仪

B仪器岛津SPD-10Avp/LC-10ATvp高效液相色谱仪

A柱子汉邦科技Lichrospher C184.6*150mm

B柱子中国科学院大连化学物理研究所VP-ODS 4.6*150mm

实施例10.多穗石柯叶含量检测方法的重复性试验

取基地苔叶4月的样品(090402)平行配置六份进行测定，试验结果见表11。

表11.重复性试验结果

配置测定次数	根皮苷含量(％)	三叶苷含量(％)
			1	8.75	27.39
2	8.76	27.39
			3	8.79	27.69
4	8.74	27.35
			5	8.78	27.42
6	8.79	27.51
			平均值	8.77	27.45
RSD(％)	0.25	0.47

实施例11.多穗石柯叶水分、灰分及浸出物的限定

采集湖南芷江3-9月份野生、栽培的多穗石柯叶共13份样品，每份均平行试验，数据见表12。

表12.试验数据

样品名称	水分平均值(％)	灰分平均值(％)	浸出物平均值(％)	根皮苷含量
					野生嫩芽3月(090301)	7.5	4.9	48.2	3.99
基地嫩叶3月(090302)	6.3	5.2	48.7	6.94
					野生嫩芽4月(090401)	8.2	4.0	56.9	1.40
基地苔叶4月(090402)	6.6	3.5	61.0	8.79
					野生叶5月(090501)	6.8	3.8	47.9	2.07
野生老叶6月(090601)	6.3	4.2	21.7	6.02
					基地老叶6月(090602)	6.7	4.0	29.3	8.18
野生老叶7月(090701)	7.4	3.1	28.1	7.97
					基地老叶7月(090702)	6.7	4.1	31.1	6.53
野生老叶2号8月(090802)	7.8	3.8	18.8	2.69
					野生老叶2号8月(090802)	6.2	5.6	33.7	14.63

基地老叶3号8月(090803)	7.1	4.4	30.5	8.86
					野生老叶9月(090901)	6.3	5.9	33.2	9.21
基地老叶9月(090902)	6.7	3.9	32.3	8.59

实验数据显示，通过将水分限定在8％以下、总灰分限定在6.5％以下、浸出物不低于18％，根皮苷含量不低于2％能确保在现有工艺条件下获得的多穗石柯药材大部分符合要求；同时将水分限定在8％以下、总灰分限定在6.5％以下有利于提高同一批次的药材浸出物量和根皮苷含量，因此通过限定浸出物及根皮苷含量能控制同一批次药材的水分、灰分限度。

Claims (3)

1.用于通过对多穗石柯药材的根皮苷含量测定和薄层鉴别来对多穗石柯药材的质量进行检测的方法，其特征在于通过高效液相色谱法测定多穗石柯叶药材中根皮苷含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.01-1％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为250-300nm，柱温10-60℃；通过薄层色谱法鉴别，以多穗石柯叶药材粉末制成的溶液为供试品，以根皮苷溶液为对照品溶液，以三氯甲烷∶丙酮∶甲醇为3∶1∶1配比在5-15℃放置0.5-20小时的下层溶液为展开剂，以0.5-50％香草醛浓硫酸溶液为显色剂，在80-150℃加热至斑点显色清晰。

2.权利要求1中的用于通过对多穗石柯药材的根皮苷含量测定和薄层鉴别来对多穗石柯药材的质量进行检测的方法，其特征在于高效液相色谱法以0.05-0.5％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为270-290nm，柱温20-40℃。

3.权利要求1所述的用于通过对多穗石柯药材的根皮苷含量测定和薄层鉴别来对多穗石柯药材的质量进行检测的方法，其特征在于供试品是由多穗石柯叶药材粉末0.2-5g，加乙醇20-50ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过，滤液浓缩至2-20ml制成。