CN101574486B - 治疗风寒感冒的中药胶囊剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种治疗风寒感冒的中药胶囊剂的质量控制方法。该中药胶囊剂由荆芥穗、桑叶、防风、柴胡、羌活、葛根、桔梗、苦杏仁、白芷、苦地丁、芦根等原料药组成，可按常规工艺加入辅料制成胶囊剂。本发明中药组合物质量控制方法包括荆芥穗、葛根、苦地丁、柴胡、防风、桔梗的薄层定性检查，葛根素、升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的定量检测。该中药组合物在治疗风寒感冒方面有显著的效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗感冒的中药组合物，尤其涉及一种治疗风寒感冒的中药胶囊剂的质量控制方法，属于中药技术领域。
背景技术
感冒是四季常见的外感病，尤以冬春两季多见。许多家庭都备有治疗感冒的中成药，有的人患感冒后吃了不少药，但病症并没减轻，关键是没有辨证用药。中医认为感冒一般可分为风寒感冒与风热感冒两大类。这两种感冒病因病机、症状、治疗原则及用药差别很大。
中医治疗常选用麻黄、荆芥、防风、苏叶等解表散寒药。代表方剂为《葱豉汤》、《荆防败毒散》。服中成药可选用风寒感冒宁颗粒、正柴胡饮冲剂、感冒软胶囊、川芎茶调散、通宣理肺丸等等。虽然中成药副作用小、能够达到标本兼治的目的，但由于质量控制方法的片面性，很难确保药品疗效和质量的稳定性。所以充分发挥中药特点，利用现代先进的检测工具，制定出能够全面有效控制药品质量的检测方法是非常有必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗风寒感冒的中药胶囊剂的质量控制方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明提供了一种治疗风寒感冒的中药胶囊剂的质量控制方法，该中药胶囊剂是以荆芥穗800重量份、桑叶75重量份、防风500重量份、柴胡400重量分、羌活200重量份、葛根150重量份、桔梗300重量份、苦杏仁400重量份、白芷125重量份、苦地丁300重量份、芦根400重量份为原料药制成的，该质量控制方法包括下列a、b、c、d、e、f、g、h八种检测中的至少一种：
a、荆芥穗的定性检测
取胶囊剂内容物，加沸点在30-60℃的石油醚，浸渍1-2小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液；
取荆芥穗对照药材，加沸点在30-60℃的石油醚，浸渍1-2小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b、葛根的定性检测
取胶囊剂内容物，加乙醇，超声处理3-8分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解， 作为供试品溶液；
取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；
c、苦地丁的定性检测
取胶囊剂内容物，加浓氨试液湿润，加氯仿，冷浸10-30小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；
取苦地丁对照药材，加浓氨试液湿润，加氯仿，冷浸10-30小时，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以苯-乙醚-二氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d、柴胡的定性检测
取胶囊剂内容物，研细，加水使溶解，加乙醚振摇提取2-5次，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇振摇提取2-5次，合并正丁醇液，加入氨试液，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
另取柴胡对照药材，加甲醇，80℃水浴上加热回流1-3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，同供试品制备方法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点；紫外光下显相同的黄色荧光斑点；
e、防风的定性检测
取防风对照药材，加丙酮，超声处理10-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述柴胡薄层鉴别项下的供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出， 晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f、桔梗的定性检测
取胶囊剂内容物，加90％乙醇超声处理，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水使溶解，加盐酸，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，合并醋酸乙酯液，加入水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
取桔梗对照药材，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
g、葛根素的定量检测
对照品溶液的制备，精密称定葛根素对照品，置100ml量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，取胶囊剂装量差异项下的内容物，研细，精密称定，置锥形瓶中，加乙醇，冷浸10-20小时，滤过；用乙醇洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得；
测定方法，以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；
h、升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷的定量检测
对照品溶液制备，精密称取升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别用甲醇溶解并定容至50mL，再精密量取10mL溶液，分别定容至100mL，得升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液；
供试品溶液的制备，精密称取胶囊剂内容物，溶解于蒸馏水并转移至10mL量瓶中，用95％乙醇定容；离心，取上清液过滤得样品溶液；
测定方法，按照各对照品所对应的不同色谱条件下，分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。
上述中药胶囊剂的质量控制方法，优选下列a、b、c、d、e、f、g、h八种检测中的至少一种：
a、荆芥穗的定性检测
取胶囊剂内容物5g，加沸点在30-60℃的石油醚20ml，浸渍1小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液；
取荆芥穗对照药材1g，加沸点在30-60℃石油醚10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同-硅胶G薄层板上，以17∶3比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b、葛根的定性检测
取胶囊剂内容物0.5g，加乙醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；
c、苦地丁的定性检测
取胶囊剂内容物3g，加浓氨试液湿润，加氯仿20ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；
取苦地丁对照药材0.5g，加浓氨试液湿润，加氯仿10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以10∶5∶14比例的苯-乙醚-二氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d、柴胡的定性检测
取胶囊剂内容物4g，加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液；水液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，加入氨试液40ml，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml，80℃水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl、对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶7∶2比例的三氯甲烷-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点；紫外光下显相同的黄色荧光斑点；
e、防风的定性检测
取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述柴胡薄层鉴别项下的供试品溶液8μl及上述对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4∶1比例的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f、桔梗的定性检测
取胶囊剂内容物4g，加90％乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水20mL使溶解，加盐酸2mL，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加入25mL水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以1∶1比例的氯仿-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
g、葛根素的定量检测
照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10∶90比例的乙腈-水为流动相；检测波长250nm；理论板数按葛根素峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备，精密称定葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，取胶囊剂装量差异项下的内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，加30％乙醇30ml，冷浸16小时，滤过；用30％乙醇洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得；
测定方法，以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；
h、升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷的定量检测
照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；升麻苷以65∶35比例的醋酸钠水溶液-甲醇为流动相，其中醋酸钠水溶液密度为 40mmol/L，pH为6.9，5-O-甲基维斯阿米醇苷以62∶38∶1比例的水-甲醇-四氢呋喃为流动相：；检测波长为254nm；理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液制备，精密称取升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品约10mg，分别用甲醇溶解并定容至50mL，再精密量取10mL溶液，分别定容至100mL，得升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液；
供试品溶液的制备，精密称取胶囊剂内容物0.2g溶解于7mL蒸馏水并转移至10mL量瓶中，用95％乙醇定容；1500rpm离心20min，取上清液过滤得样品溶液；
测定法，分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
上述质量控制方法中中药胶囊剂的制备方法为：
称取原料药荆芥穗800重量份、桑叶75重量份、防风500重量份、柴胡400重量分、羌活200重量份、葛根150重量份、桔梗300重量份、苦杏仁400重量份、白芷125重量份、苦地丁300重量份、芦根400重量份；然后取荆芥穗、薄荷、紫苏叶加水10倍量，提取挥发油4小时，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余防风等八味加水煎煮二次，加水量分别为8倍量、6倍量，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.30(50℃)，干燥，粉碎成细粉，过筛，加入上述荆芥穗等挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
上述的中药胶囊剂原料药中桑叶可以用薄荷、牛蒡子或菊花替换；羌活可以用紫苏叶、藁本或辛夷替换；芦根可以用天花粉、竹叶或栀子替换。
本发明药物组合物中荆芥穗、防风辛温，祛风解表散寒，为君药。紫苏叶、白芷解表散寒，柴胡、薄荷、葛根发表解肌，清散伏热，以上五药加强君药解表退热之功，共为臣药。芦根清肺胃之热、生津止渴，苦地丁清热解毒，桔梗祛痰利咽，杏仁降气止咳，共为佐药。诸药合用，共奏疏风散寒，解表清热之效，临床应用效果显著，安全可靠。
本发明所提供的中药胶囊剂的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定中进行了含量测定的方法学考察，表明该方法稳定、准确，可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。
具体实施方式
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
试验例1
1.试验动物与药物
1.1实验动物：昆明种小鼠，：体重18-23g，雌雄各半；Wistar大白鼠，250～300g，由中国医学科学院医学实验动物中心饲养场提供。豚鼠150-200g，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。
1.2实验药物：按照实施例1制备的本发明药物。阳性药对照药物：风寒感冒宁颗粒，昆明金殿制药有限公司生产。空白对照：蒸馏水。
2实验方法与结果：
2.1对酵母致大鼠体温升高的解热作用
大鼠24只随机分4组，灌胃药物或水，药后1h皮下注射10％酵母悬液10m]/kg，在第3、4、5、10、24h各测量一次体温，以不同时间的体温与基础体温的温度差表示药物作用强度.结果见表1。
表1对酵母所致大鼠体温升高的解热作用
与阴性对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，与风寒感冒宁颗粒组比较#＜0.05，##P＜0.01。
结果表明，本发明药物与阳性对照药物均对大鼠因酵母引起的体温升高有明显的解热作用，本发明药物起效较快.解热作用持续时间更长，本发明药物的解热作用与阳性对照药物比较解热效果有显著性提高。
2.2对小鼠流感病毒性肺炎的作用：将小鼠按体重随机分为4组，每组小鼠12只，分为不给药的病毒对照组、本发明药物小剂量组和大剂量组及阳性对照风寒感冒宁颗粒组，按剂量给药。于感染前1天开始，连续给药5天。感染当天，将小鼠经乙醚轻度麻醉，用15LD50得流 感病毒鼠肺适应株FM1进行滴鼻感染。于感染后第4天将小鼠先称体重后解剖取肺称肺重。计算肺指数值(100×肺重/体重)，进行统计处理，并求出药物对肺炎的抑制率。抑制率(％)＝应对照肺指数均值-给药组肺指数均值/病毒对照肺指数均值，结果用统计软件处理，求出各组肺指数均值，并作t检验，比较组间差异。结果见下表：
表2对小鼠流感病毒性肺炎的作用
| 组别 | 给药剂量(g生药/鼠/d) | 肺指数(x±s) |
| 病毒对照组 | --- | 1.3481±0.132 |
| 本发明药物小剂量组 | 2.4 | 1.1623±0.136** |
| 本发明药物大剂量组 | 4.8 | 1.1315±0.123**# |
| 阳性药物对照组 | 12 | 1.2378±0.113* |
与病毒对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与风寒感冒宁颗粒组比较#P＜0.05。
本发明药物小剂量组、本发明药物大剂量组和风寒感冒宁颗粒组与对照组相比，差异有显著性(P＜0.05)，本发明药物大、小剂量组与风寒感冒宁颗粒组相比，均优于风寒感冒宁颗粒组，其中本发明药物大剂量组的抑制率显著高于阳性阳性对照药物。
2.3药物对呼吸道的镇咳作用：小白鼠氮水引咳法，取5L真空玻璃干燥器，盖上的活塞打开，通空气，容器底部放一培养皿，存放浓氨水。称取实验用小白鼠按体重随机分为4组，空白对照组和本发明药物大剂量组每组小白鼠14只，风寒感冒宁颗粒组和本发明药物小剂量组每组小白鼠13只。按照2.3给药剂量灌胃给药，服药1小时后，每组小白鼠取1只，放入已存有0.5ml氨水容器中，观察记录各组小白鼠咳嗽潜伏期。结果见下表：
表3对小鼠咳嗽潜伏期的影响
| 组别 | 给药剂量(g生药/鼠/d) | 咳嗽潜伏期 |
| 空白对照组 | --- | 139.5±49.5 |
| 本发明药物小剂量组 | 2.4 | 205±70.4** |
| 本发明药物大剂量组 | 4.8 | 221.3±75.2** |
| 阳性对照药物组 | 12 | 184.5±71.3* |
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
本发明药物大剂量组小白鼠咳嗽潜伏期最长，与阴性对照组相比差异有非常显著性，本发明药物制剂有显著镇咳作用，与阳性对照药物比较效果更好。
2.5祛痰作用：用毛细管排痰量法，大白鼠随机分为4组，每组10只。分为空白对照组、本发明药物制剂小剂量组、本发明药物制剂大剂量组和阳性药物对照组。均用乌拉坦1g/kg，腹腔麻醉，仰位固定，剪开颈中部皮肤，分离出气管，与甲状软骨下缘正中两软骨环之间，用尖锐针头扎1个小孔，插入毛细管，使毛细管接触气管底部表面，借以吸取痰液，当毛细 管内衬痰液充满时，立即另换1根，以毛细管吸取痰液长度位评价药物的化痰效果，记录给药前2小时的正常分泌量，分别灌药，灌药后继续观察2小时的分泌量，比较给药前后平均每小时分泌量，给药后是否有增加。结果见下表：
表4给药后对大白鼠排痰量的影响
| 组别 | 给药剂量(g生药/鼠/d) | 给药前排痰量 | 给药后排痰量 |
| 空白对照组 | 2.12±0.59cm | 2.32±0.4cm | |
| 阳性对照组 | 84 | 2.22±0.36cm | 2.81±0.74cm** |
| 本发明药物大剂量 | 33.6 | 2.1±0.47cm | 3.70±0.87cm**# |
| 本发明药物小剂量 | 16.8 | 2.20±0.59cm | 2.96±0.86cm** |
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与风寒感冒宁颗粒组比较#P＜0.05。
本发明药物制剂大、小剂量组和阳性药物对照组与空白对照组给药前后排痰量比较差异有非常显著性，其中本发明药物大剂量组较阳性对照药物也有显著性差异，本发明药物制剂有显著祛痰作用。
2.4药物的平喘作用：用气雾引喘法，将幼年豚鼠分别放入玻璃钟罩(容积约4L)中以400mmHg的压力喷入2％氢化乙酞胆碱和0.1％磷酸组织胺等容积的混合液15g，观察豚鼠的引喘潜伏期(即喷雾开始到哮喘发作，呼吸极度困难，直至抽搐跌倒时间)，挑选120s以内产生哮喘作用的豚鼠供实验用。将豚鼠随机分为4组：空白对照组、阳性对照组、本发明药物制剂大剂量组和本发明药物制剂小剂量组，前3组每组豚鼠10只，本发明药物制剂小剂量组豚鼠9只。给药剂量：空白对照组口服蒸馏水，阳性对照组口服风寒感冒宁颗粒，本发明药物制剂大、小剂量组均口服本发明药物制剂。给药1.5小时后，重新测定其引喘潜伏期。结果见下表：
表5给药后对豚鼠引喘潜伏期的影响
| 组别 | 给药剂量(g生药/鼠/d) | 引喘潜伏期 |
| 空白对照组 | 28.1±16.65 | |
| 阳性对照组 | 147 | 56.0±32.35* |
| 本发明药物大剂量 | 58.8 | 75.8±33.75**# |
| 本发明药物小剂量 | 29.4 | 65.7±36.65** |
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与风寒感冒宁颗粒组比较#P＜0.05。
阳性对照组、本发明药物大剂量组、本发明药物制剂小剂量组与空白对照组比较，差异有显著性；本发明药物大剂量组与阳性对照组(风寒感冒宁颗粒)相比引喘潜伏期有显著性；本发明药物延长引喘潜伏期的作用强于阳性对照药物。
2.5镇痛作用
选用18～22g雌性小鼠，按热板法原理，将玻璃杯置于恒温(55±2℃)水浴箱，以添足为指标，测定小鼠基础痛阈二次，每次间隔5min，30s内不出现添足者弃之不用。将60只小鼠随机分成本发明药物大剂量组、本发明药物小剂量组、阳性对照药物(风寒感冒宁颗粒)组、30％蔗糖组。分别按照1.2给药剂量给动物灌胃给药，于药后30、60、120、180、240min分别测定各组小鼠痛阈值。痛阈值超过60s者按60s计算。结果见下表。
表6对小鼠痛阈的影响(X±SD)
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与风寒感冒宁颗粒组比较#P＜0.05。
实验结果表明，本发明药物制剂在180min和240min时，可使小鼠基础痛阈明显提高，而且阵痛作用持续时间较长，自120min起，其作用就优于阳性对照药物组，同时阵痛作用随药量的增加而增强。
2.6对免疫机能的影响
选取18～22g小鼠32只，雌雄各半，随机分为4组，按照1.2给药剂量分别给药，每日灌胃一次，连续7d。于第8天尾静脉注射印度墨汁0.1ml/只，分别于注射后1min，5min从小鼠眶后静脉取血20μl，溶于0.1％NaHCO3溶液中。用721分光光度计比色，计算K值，K＝logOD1-logOD5/(t1-t2)。结果见下表：
表7对免疫功能的影响
| 组别 | n | K值 |
| 生理盐水组 | 8 | 0.014±0.08 |
| 本发明药物小剂量组 | 8 | 0.046±0.038**# |
| 本发明药物大剂量组 | 8 | 0.062±0.054**# |
| 阳性对照药物 | 8 | 0.022±0.016* |
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与风寒感冒宁颗粒组比较#P＜0.05。
实验结果表明，在该试验条件下，本发明药物对小鼠的单核巨噬细胞系统的吞噬功能有一定的抑制作用，且本发明药物的作用强于阳性对照药物，具有显著性差异。
试验例2
以下试验例所用供试品全部为按照实施例1成功制备所得。
1、荆芥穗的薄层鉴别
供试品溶液的制备：取本品内容物5g，加沸点在30-60℃的石油醚20ml，浸渍1小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：取荆芥穗对照药材1g，加沸点在30-60℃石油醚10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液；
阴性对照品溶液的制备：按照实施例1制备缺荆芥穗的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，即得。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰，比较不同展开剂下供试品溶液的展开效果。结果见下表
表8、展开剂的选择
| 展开剂配比 | 石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(37∶3) | 石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(17∶3) | 正己烷-乙酸乙酯(17∶3) | 正己烷-乙酸乙酯(37∶3) |
| 展开效果 | 供试品溶液展开效果较差，有干扰。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果好，无干扰、拖尾现象。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 |
从上表可以看出，展开剂以正己烷-乙酸乙酯比例为17∶3时，供试品溶液与对照品溶液展开效果均较好，无干扰、拖尾现象，符合试验要求。
2、葛根的薄层鉴别
供试品溶液的制备
①取按照实施例1制备的胶囊剂内容物0.5g，加乙酸乙酯10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液a；
②取按照实施例1制备的胶囊剂内容物0.5g，加乙醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液b；
③取按照实施例1制备的胶囊剂内容物0.5g，加甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液c；
对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
阴性对照品溶液的制备：按照实施例1制备缺葛根的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，即得。
照薄层色谱法试验，吸取上述a、b、c供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5分钟，置365nm紫外光灯下检视；比较供试品溶液的展开效果。结果见下表：
表9供试品溶液制备方法的比较
| 供试品溶液制备方法 | ① | ② | ③ |
| 展开效果 | 供试品溶液显色效果差，且阴性有干扰。 | 供试品溶液显色效果好，斑点清晰。 | 供试品溶液显色效果差，且阴性有干扰。 |
从上表可以看出，以②作为供试品溶液制备方法，不仅节约时间，而且显色效果好，阴性无干扰，符合试验要求。
3、苦地丁的薄层鉴别
供试品溶液的制备：取按照实施例1制备的胶囊剂内容物3g，加浓氨试液湿润，加氯仿20ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：取苦地丁对照药材0.5g，加浓氨试液湿润，加氯仿10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；
阴性对照品溶液的制备：按照实施例1制备缺苦地丁的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，即得。
照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；比较应用不同配比展开剂，供试品溶液与对照品溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表：
表10、展开剂配比的选择
| 展开剂配比 | 苯-乙醚-二氯甲烷(8∶3∶10) | 苯-乙醚-二氯甲烷(10∶5∶14) | 苯-乙醚-二氯甲烷(12∶7∶18) | 苯-乙醚-二氯甲烷(12∶5∶10) |
| 展开效果 | 供试品溶液展开效果较差，有干扰。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果好，无干扰、拖尾现象。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 |
从上表可以看出，展开剂以苯-乙醚-二氯甲烷比例为10∶5∶14时，供试品溶液与对照品溶液展开效果均较好，无干扰、拖尾现象，符合试验要求。
4、柴胡的薄层鉴别
供试品溶液的制备：取按照实施例1制备的胶囊剂内容物4g，加水30ml使溶解，加乙 醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液；水液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，加入氨试液40ml，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml，80℃水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同法制成对照药材溶液；
阴性对照品溶液的制备：按照实施例1制备缺柴胡的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，即得。
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各8μl、对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视；比较供试品溶液和对照品溶液的展开效果，结果见下表：
表11、展开剂配比的选择：
| 展开剂配比 | 三氯甲烷-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液(13∶7∶2) | 三氯甲烷-甲醇-水10~25℃放置的下层溶液(13∶7∶2) | 三氯甲烷-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液(30∶10∶1) | 乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1) |
| 展开效果 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果好，无干扰、拖尾现象。 | 供试品溶液与对照品溶液展开后，有干扰。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 |
从上表可以看出，展开剂以三氯甲烷-甲醇-水比例为10∶5∶14，在10℃以下放置的下层溶液，供试品溶液与对照品溶液展开效果均较好，无干扰、拖尾现象，符合试验要求。
5、防风的薄层鉴别
对照药材溶液的制备：取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
阴性对照品溶液的制备：按照实施例1制备缺防风的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，即得。
照薄层色谱法试验，吸取柴胡鉴别项下的供试品溶液8μl及上述对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4∶1比例的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
表12、展开剂配比的选择：
| 展开剂配比 | 三氯甲烷-甲醇(4∶1) | 石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(4∶1) | 三氯甲烷-甲醇(5∶1) | 石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(5∶1) |
| 展开效果 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果好，无干扰、拖尾现象。 | 供试品溶液与对照品溶液展开后，有干扰。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 | 供试品溶液与对照品溶液展开效果均较差，有脱尾。 |
从上表可以看出，展开剂以三氯甲烷-甲醇比例为10∶5∶14时，供试品溶液与对照品溶液展开效果均较好，无干扰、拖尾现象，符合试验要求。
6、桔梗的薄层鉴别
方法一、取按照实施例1制备的胶囊剂内容物4g，加90％乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水20mL使溶解，加盐酸2mL，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加入25mL水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；按照实施例1制备缺桔梗的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，即得；吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以1∶1比例的氯仿-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。方法二、取本品内容物4g，加硫酸乙醇溶液(7→100)-水(1∶3)的混合溶液30ml，加热回流3小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次30ml，合并三氯甲烷提取液，用水30ml洗涤，弃去水洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；按照实施例1制备缺桔梗的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，即得。吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以1∶1比例的氯仿-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，但阴性有干扰。
结果：选择方法一为桔梗的薄层鉴别方法，不仅重现性好，且阴性无干扰。
7、葛根素的含量测定
检测仪器(室温检测)：Agilent 1100型高效液相色谱仪
色谱柱：(Zorbax C18 4.6×150mm，5μm)
厂家：Agilent Techologies安捷伦科技有限公司(中国)
流动相：乙腈-水(10∶90)
检测波长：250nm 流速：1.000ml/min 柱温：室温
液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得；
阴性对照溶液的制备：按实施例1方法制备缺葛根的空白样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
测定方法：用微孔滤膜(0.45μm)滤过。分别精密吸取阴性对照液，对照品液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
含量测定方法考察：
(1)稳定性试验 对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表：
表13稳定性试验结果
(2)线性关系考察 取对照品溶液(14ug/ml)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，表明葛根素在28ng-168ng间呈线性关系，其回归方程为：Area＝59.8119234*Amt+1.64967(r＝0.99991)
表14线性关系考察结果
(3)精密度试验 精密吸取供试品溶液，(按照实施例1成功制备)10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表：
表15精密度考察结果
(4)重现性试验 按正文方法，取同一批号(按照实施例1成功制备)样品五份，对每份进行测定，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表：
表16重现性考察结果
(5)回收率试验 精密称取已知含量的同一批号(按照实施例1成功制备)的样品0.05g，再分别精密称取葛根素对照品0.45mg，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：
表17重现性测定结果
从以上方法学考察结果可以看出，本发明胶囊剂中葛根素的含量测定方法精密度、重现性、稳定性等均符合试验要求，故确定以测定葛根中葛根素的含量为质量控制方法之一。
8、升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定
(1)色谱条件
升麻苷 色谱柱：APEX ODS色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：醋酸钠水溶液(40mmol·L-1，pH 6.9)-甲醇(65∶35)；流速：0.mL·min-1；检测波长：254nm；柱温：30℃；灵敏度0.02 性、稳定性等均符合试验要求，故确定以测定葛根中葛根素的含量为质量控制方法之一。
8、升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定
(1)色谱条件
升麻苷 色谱柱：APEX ODS色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：醋酸钠水溶液(40mmol·L-1，pH 6.9)-甲醇(65∶35)；流速：0.mL·min-1；检测波长：254nm；柱温：30℃；灵敏度0.02AUFS；进样量：20μL。
5-O-甲基维斯阿米醇苷流动相：水-甲醇-四氢呋喃(62∶38∶1)；其余条件同2.1.1项下。
(2)溶液配制
对照品溶液精密称取升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品约10mg，分别用甲醇溶解并定容至50mL，再精密量取10mL溶液，分别定容至100mL，得升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液。
供试品溶液精密称取本品内容物0.2g溶解于7mL蒸馏水并转移至10mL量瓶中，用95％乙醇定容；。1500rpm离心20min，取上清液过滤得样品溶液。
(3)专属性试验
按实施例1方法制备缺防风的空白样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。按(1)项下两种色谱条件分别测定样品液、对照品液和阴性对照溶液，得色谱图。由图可见，待测组分处无干扰峰方法的专属性良好。
(4)含量测定方法考察：
4.1线性关系考察
升麻苷精密量取升麻苷对照品溶液3，5，7，9mL于25mL量瓶中，用30％乙醇稀释定容，各浓度溶液按2.1项下色谱条件进样测定。以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，得Y＝2.025×104X-6.260×102，r＝0.9999，线性范围0.72～6.5μg·mL-1。
5-O-甲基维斯阿米醇苷 依次精密量取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品贮备液0.5，1，3，5，7，9mL于10mL量瓶中，用30％乙醇稀释定容，各浓度溶液按(1)项下色谱条件进样测定。以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，得Y＝2.146×104X+4.059×102，r＝0.9999，线性范围0.92～16.5μg·mL-1。
4.2精密度试验
精密吸取供试品溶液，(按照实施例1成功制备)10μl，重复进样6次，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表：
表18精密度试验结果
| 含量平均值/mg·g-1 | RSD | |
| 升麻苷 | 0.65 | 1.0％ |
| 5-O-甲基维斯阿米醇苷 | 0.81 | 1.9％ |
4.3回收率试验
精密称取已知含量的实施例1的胶囊剂0.2g，分别加入升麻苷对照品溶液0.5mL和1.0mL各3份、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液1.0mL和2.0mL各3份，挥干甲醇，按(2)项下制备供试品溶液，测得升麻苷的平均回收率为100.3％(RSD2.1％)，5-O-甲基维斯阿米醇苷的平均回收率94.7％(RSD2.8％)。
4.4稳定性试验
取供试品溶液，分别于配制后第1、2、3、4、5天，依法测定，结果表明，其在5天内基本稳定，结果见下表：
表20稳定性实验结果
| 第1天 | 第2天 | 第3天 | 第4天 | 第5天 | |
| 升麻苷(mg·g-1) | 0.62 | 0.61 | 0.64 | 0.61 | 0.63 |
| 5-O-甲基维斯阿米醇苷(mg·g-1) | 0.83 | 0.82 | 0.84 | 0.81 | 0.82 |
从以上方法学考察结果可以看出，本发明胶囊剂中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法精密度、重现性、稳定性等均符合试验要求，故确定以测定防风中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量为质量控制方法之一。
以下实施例均能够实现以上试验例所述效果。
实施例1、
荆芥穗800g、薄荷75g、防风500g、柴胡400g、紫苏叶200g、葛根150g、桔梗300g、苦杏仁400g、白芷125g、苦地丁300g、芦根400g。
以上十一味，取荆芥穗加水10倍量，提取挥发油4小时，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余防风等十味加水煎煮二次，加水量分别为8倍量、6倍量，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.30(50℃)，干燥，粉碎成细粉，过筛，加入上述荆芥穗挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
(1)取本品内容物5g，加石油醚(30-60℃)20ml，浸渍1小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液。另取荆芥穗对照药材1g，加石油醚(30-60℃)10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品内容物0.5g，加乙醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液 氯仿10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以苯-乙醚-二氯甲烷(10∶5∶14)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品内容物4g，加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液。水液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，加入氨试液40ml，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml，80℃水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液8μl、对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点；紫外光下显相同的黄色荧光斑点。
(5)取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。另取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取鉴别(4)项下的供试品溶液8μl及上述对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4∶1比例的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品内容物4g，加90乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水20mL使溶解，加盐酸2mL，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加入25mL水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(1)照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10∶90比例的乙腈-水为流动相；检测波长250nm。理论板数按葛根素峰计算不低于2000。对照品溶液的制备，精密称定葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇使 溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备，取本品装量差异项下的内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，加30％乙醇30ml，冷浸16小时，滤过。用30％乙醇洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得。测定方法 以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得。
本品中每粒含葛根以葛根素(C21H20O9)计，不得少于2.5mg。
(2)照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；升麻苷以65∶35比例的醋酸钠水溶液(40mmol·L-1，pH 6.9)-甲醇为流动相，5-O-甲基维斯阿米醇苷以62∶38∶1比例的水-甲醇-四氢呋喃为流动相：；检测波长为254nm。理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000。对照品溶液制备，精密称取升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品约10mg，分别用甲醇溶解并定容至50mL，再精密量取10mL溶液，分别定容至100mL，得升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液。供试品溶液的制备，精密称取本品内容物0.2g溶解于7mL蒸馏水并转移至10mL量瓶中，用95％乙醇定容。1500rpm离心20min，取上清液过滤得样品溶液。测定法，分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品中每粒含防风以升麻苷(C37H54O11)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)的总量计，不得少于0.9mg。
实施例2、
荆芥穗800g、桑叶75g、防风500g、柴胡400g、羌活200g、葛根150g、桔梗300g、苦杏仁400g、白芷125g、苦地丁300g、芦根400g。
以上十一味，取荆芥穗、薄荷、紫苏叶加水10倍量，提取挥发油4小时，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余防风等八味加水煎煮二次，加水量分别为8倍量、6倍量，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.30(50℃)，干燥，粉碎成细粉，过筛，加入上述荆芥穗等挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
(1)取本品内容物5g，加石油醚(30-60℃)20ml，浸渍1小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液。另取荆芥穗对照药材1g，加石油醚(30-60℃)10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品内容物0.5g，加乙醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液 各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶2.5∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品内容物3g，加浓氨试液湿润，加氯仿20ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦地丁对照药材0.5g，加浓氨试液湿润，加氯仿10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以苯-乙醚-二氯甲烷(10∶5∶14)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品内容物4g，加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液。水液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，加入氨试液40ml，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml，80℃水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液8μl、对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点；紫外光下显相同的黄色荧光斑点。
(5)取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。另取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取鉴别(4)项下的供试品溶液8μl及上述对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4∶1比例的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品内容物4g，加90乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水20mL使溶解，加盐酸2mL，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加入25mL水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚(1∶1)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
实施例3、
荆芥穗800g、牛蒡子75g、防风500g、柴胡400g、藁本200g、葛根150g、桔梗300g、苦杏仁400g、白芷125g、苦地丁300g、竹叶400g。
以上十一味，取荆芥穗加水10倍量，提取挥发油4小时，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余防风等十味加水煎煮二次，加水量分别为8倍量、6倍量，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.30(50℃)，干燥，粉碎成细粉，过筛，加入上述荆芥穗挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
(1)照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10∶90比例的乙腈-水为流动相；检测波长250nm。理论板数按葛根素峰计算不低于2000。对照品溶液的制备，精密称定葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备，取本品装量差异项下的内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，加30％乙醇30ml，冷浸16小时，滤过。用30％乙醇洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得。测定方法 以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得。
本品中每粒含葛根以葛根素(C21H20O9)计，不得少于2.5mg。
(2)照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；升麻苷以65∶35比例的醋酸钠水溶液(40mmol·L-1，pH 6.9)-甲醇为流动相，5-O-甲基维斯阿米醇苷以62∶38∶1比例的水-甲醇-四氢呋喃为流动相：；检测波长为254nm。理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000。对照品溶液制备，精密称取升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品约10mg，分别用甲醇溶解并定容至50mL，再精密量取10mL溶液，分别定容至100mL，得升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液。供试品溶液的制备，精密称取本品内容物0.2g溶解于7mL蒸馏水并转移至10mL量瓶中，用95％乙醇定容。1500rpm离心20min，取上清液过滤得样品溶液。测定法，分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品中每粒含防风以升麻苷(C37H54O11)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)的总量计，不得少于0.9mg。
实施例4、
荆芥穗800g、菊花75g、防风500g、柴胡400g、辛夷200g、葛根150g、桔梗300g、苦杏仁400g、白芷125g、苦地丁300g、栀子400g。
以上十一味，取荆芥穗加水10倍量，提取挥发油4小时，蒸馏后的水溶液另器收集，药 渣与其余防风等十味加水煎煮二次，加水量分别为8倍量、6倍量，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.30(50℃)，干燥，粉碎成细粉，过筛，加入上述荆芥穗挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
(1)取本品内容物5g，加石油醚(30-60℃)20ml，浸渍1小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液。另取荆芥穗对照药材1g，加石油醚(30-60℃)10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品内容物0.5g，加乙醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶2.5∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品内容物3g，加浓氨试液湿润，加氯仿20ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦地丁对照药材0.5g，加浓氨试液湿润，加氯仿10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以苯-乙醚-二氯甲烷(10∶5∶14)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品内容物4g，加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液。水液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，加入氨试液40ml，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml，80℃水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液8μl、对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点；紫外光下显相同的黄色荧光斑点。
(5)取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲 醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。另取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别(4)项下的供试品溶液8μl及上述对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4∶1比例的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品内容物4g，加90乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水20mL使溶解，加盐酸2mL，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加入25mL水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
实施例5、
荆芥穗800g、薄荷75g、防风500g、柴胡400g、藁本200g、葛根150g、桔梗300g、苦杏仁400g、白芷125g、苦地丁300g、天花粉400g。
以上十一味，取荆芥穗加水10倍量，提取挥发油4小时，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余防风等十味加水煎煮二次，加水量分别为8倍量、6倍量，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.30(50℃)，干燥，粉碎成细粉，过筛，加入上述荆芥穗挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
(1)照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10∶90比例的乙腈-水为流动相；检测波长250nm。理论板数按葛根素峰计算不低于2000。对照品溶液的制备，精密称定葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备，取本品装量差异项下的内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，加30％乙醇30ml，冷浸16小时，滤过。用30％乙醇洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得。测定方法 以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得。
本品中每粒含葛根以葛根素(C21H20O9)计，不得少于2.5mg。
(2)照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；升麻苷以65∶35比例的醋酸钠水溶液(40mmol·L-1，pH 6.9)-甲醇为流动相，5-O-甲基维斯阿米醇苷以62∶38∶1比例的水-甲醇-四氢呋喃为流动相：；检测波长为254nm。理论 板数按升麻素苷峰计算应不低于2000。对照品溶液制备，精密称取升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品约10mg，分别用甲醇溶解并定容至50mL，再精密量取10mL溶液，分别定容至100mL，得升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液。供试品溶液的制备，精密称取本品内容物0.2g溶解于7mL蒸馏水并转移至10mL量瓶中，用95％乙醇定容。1500rpm离心20min，取上清液过滤得样品溶液。测定法，分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品中每粒含防风以升麻苷(C37H54O11)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)的总量计，不得少于0.9mg。
实施例6
荆芥穗800g、薄荷75g、防风500g、柴胡400g、紫苏叶200g、葛根150g、桔梗300g、苦杏仁400g、白芷125g、苦地丁300g、芦根400g。
【制法】以上十一味，取荆芥穗、薄荷、紫苏叶加水10倍量，提取挥发油4小时，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余防风等八味加水煎煮二次，加水量分别为8倍量、6倍量，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.30(50℃)，干燥，粉碎成细粉，过筛，加入上述荆芥穗等挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
【性状】本品为胶囊剂，内容物为棕褐色的粉末；气香，味苦。
【鉴别】(1)取本品内容物5g，加石油醚(30-60℃)20ml，浸渍1小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液。另取荆芥穗对照药材1g，加石油醚(30-60℃)10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品内容物0.5g，加乙醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶2.5∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品内容物3g，加浓氨试液湿润，加氯仿20ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦地丁对照药材0.5g，加浓氨试液湿润，加氯仿10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以苯-乙醚-二氯甲烷(10∶5∶14)为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品内容物4g，加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液。水液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，加入氨试液40ml，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml，80℃水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液8μl、对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点；紫外光下显相同的黄色荧光斑点。
(5)取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。另取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别(4)项下的供试品溶液8μl及上述对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4∶1比例的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品内容物4g，加90乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水20mL使溶解，加盐酸2mL，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加入25mL水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
【检查】应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IL)
【浸出物】取本品内容物约3g，精密称定，照醇溶性浸出物测定项下的热浸法(中国药典2005年版一部附录XA)测定，用乙醇作溶剂。
本品含乙醇浸出物不得少于11.0％。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(10∶90) 为流动相；检测波长250nm。理论板数按葛根素峰计算不低于2000。
对照品溶液的制备精密称定葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含葛根素10μg)。
供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，加30％乙醇30ml，冷浸16小时，滤过。用30％乙醇洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得。
测定方法 以上溶液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得。
本品中每粒含葛根以葛根素(C21H20O9)计，不得少于2.5mg。
Claims (1)
1.一种治疗风寒感冒的中药胶囊剂的检测方法，该中药胶囊剂是以荆芥穗800重量份、薄荷75重量份、防风500重量份、柴胡400重量分、紫苏叶200重量份、葛根150重量份、桔梗300重量份、苦杏仁400重量份、白芷125重量份、苦地丁300重量份、芦根400重量份为原料药制成的，其特征在于该检测方法包括下列a、b、c、d、e、f、g、h八种检测方法：
a、荆芥穗的定性检测
取胶囊剂内容物5g，加沸点在30-60℃的石油醚20ml，浸渍1小时，滤过，取滤液挥至0.5ml，作为供试品溶液；
取荆芥穗对照药材1g，加沸点在30-60℃石油醚10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥至0.5ml，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以17∶3比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b、葛根的定性检测
取胶囊剂内容物0.5g，加乙醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏5分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；
c、苦地丁的定性检测
取胶囊剂内容物3g，加浓氨试液湿润，加氯仿20ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；
取苦地丁对照药材0.5g，加浓氨试液湿润，加氯仿10ml，冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一用0.4％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以10∶5∶14比例的苯-乙醚-二氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d、柴胡的定性检测
取胶囊剂内容物4g，加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液；水液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，加入氨试液40ml，摇匀，放置使分层，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml，80℃水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，同法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl、对照药材溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶7∶2比例的三氯甲烷-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液1→10，加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点；紫外光下显相同的黄色荧光斑点；
e、防风的定性检测
取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
取升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述柴胡薄层鉴别项下的供试品溶液8μl及上述对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4∶1比例的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开二次，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f、桔梗的定性检测
取胶囊剂内容物4g，加90％乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸至无醇味，残渣加水20mL使溶解，加盐酸2mL，置热水浴中加热1h，趁热滤过，滤液放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加入25mL水洗涤1次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
取桔梗对照药材0.5g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以1∶1比例的氯仿-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
g、葛根素的定量检测
照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10∶90比例的乙腈-水为流动相；检测波长250nm；理论板数按葛根素峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备，精密称定葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，取胶囊剂装量差异项下的内容物，研细，取0.1g，精密称定，置锥形瓶中，加30％乙醇30ml，冷浸16小时，滤过；用30％乙醇洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，定容50ml量瓶中，摇匀，即得；
测定方法，以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；
h、升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷的定量检测
照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；升麻苷以65∶35比例的醋酸钠水溶液-甲醇为流动相，其中醋酸钠水溶液密度为40mmol/L，pH为6.9，5-O-甲基维斯阿米醇苷以62∶38∶1比例的水-甲醇-四氢呋喃为流动相：；检测波长为254nm；理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液制备，精密称取升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品10mg，分别用甲醇溶解并定容至50mL，再精密量取10mL溶液，分别定容至100mL，得升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液；
供试品溶液的制备，精密称取胶囊剂内容物0.2g溶解于7mL蒸馏水并转移至10mL量瓶中，用95％乙醇定容；1500rpm离心20min，取上清液过滤得样品溶液；
测定法，分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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