CN102112155B - 针对病毒包膜蛋白的氨基酸序列和用于治疗病毒疾病的包含其的多肽 - Google Patents
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Abstract
本发明部分涉及针对病毒的包膜蛋白和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，以及包含一种或多种所述氨基酸序列或基本由一种或多种所述氨基酸序列组成的化合物或构建体，和具体地是蛋白和多肽。
Description
发明领域
本发明涉及针对病毒包膜蛋白和/或可以特异性结合于病毒包膜蛋白的氨基酸序列，以及包括一种或多种所述氨基酸序列或基本上由一种或多种所述氨基酸序列组成的化合物或构建体，且特别是蛋白和多肽(在本文中也分别称为“本发明的氨基酸序列”、“本发明的化合物”、和“本发明的多肽”)。
本发明还涉及编码所述氨基酸序列和多肽的核酸(在本文也称为“本发明的核酸”或“本发明的核苷酸序列”)；制备所述氨基酸序列和多肽的方法；表达或能够表达所述氨基酸序列或多肽的宿主细胞；包含所述氨基酸序列、多肽、核酸和/或宿主细胞的组合物，且特别是药物组合物；和所述氨基酸序列或多肽、核酸、宿主细胞和/或组合物，特别地对预防、治疗或诊断目的，如本文所提及的预防、治疗或诊断目的的应用。
通过本文进一步的描述，本发明的其他方面、实施方案、优势和应用将会变得清楚。
背景技术
有包膜病毒通过在宿主细胞的膜上出芽进行装配(Compans等.在综合病毒学(Comprehensive Virology)，Fraenkel和Wagner，编辑，Plenum出版社，纽约4：179-252(1975)中；Choppin和Compans，在综合病毒学(Comprehensive Virology)，Fraenkel和Wagner，编辑，Plenum出版社，纽约4：96-178(1975)；Wagner，在综合病毒学(ComprehensiveVirology)，Fraenkel和Wagner，编辑Plenum出版社，纽约4：1-94(1975))中。在该过程中，它们需要具有脂双层、糖蛋白和非糖基化的M-蛋白的包膜，所述脂双层的组成反映宿主膜的组成，所述糖蛋白形成在病毒颗粒的表面上的突起或突出，和所述非糖基化的M-蛋白与病毒颗粒的脂双层的内表面缔合。病毒体缔合的蛋白是病毒特异性的。
在病毒感染中的一个关键步骤是在病毒膜和宿主细胞膜之间的融合，这是由病毒糖蛋白所介导的，如病毒附着蛋白和病毒融合蛋白。
该病毒膜融合可以在质膜或在病毒通过内吞作用摄取后的细胞内定位处发生(Earp等.现代微生物和免疫学观点(Curr.Topics Microbiol.Immunol.)285，25-66(2005)；Smith等.科学(Science)304，237-242(2004))。属于反转录病毒科(Retroviridae)，副黏液病毒科(Paramyxoviridae)，疱疹病毒科(Herpesviridae)，和冠状病毒科(Coronaviridae)家族的病毒典型地以不依赖pH的方式起始融合，其中开始使病毒体与细胞表面受体结合，随后使病毒膜与宿主细胞的质膜在中性pH融合。
第二种更复杂的进入路径特征在于是受体介导的，如网格蛋白依赖性的，胞膜窖(caveola)依赖性的摄取或非网格蛋白依赖性的，非胞膜窖依赖性的摄取(Smith等.科学(Science)304，237-242(2004)；Sieczkarski等.现代微生物和免疫学观点(Curr.TopicsMicrobiol.Immunol.)285，1-23(2005))。使用这些途径的病毒通常具有融合反应，所述融合反应需要暴露于内吞作用途径的细胞器官中的温和的酸性pH(Helenius等.细胞生物学杂志(J.Cell Biol).84，404-420(1980))。属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，披膜病毒科(Togaviridae)，杆状病毒科(Rhabdoviridae)，布尼亚病毒科(Bunyaviridae)，和砂粒病毒科(Arenaviridae)家族的病毒通常需要低pH介导的事件以用于病毒和宿主细胞膜的有效融合。
确定许多病毒融合蛋白在它们融合前和/或融合后状态中的完整胞外结构域或核心区的原子结构已经揭示了较大的构象多样性。然而，在迄今研究的所有情形中，从融合前向融合后构象的结构转变导致形成稳定的发夹构象，这导致两种膜锚定物，即跨膜和融合肽结构域在三聚延长的杆状结构的同一末端的定位。到目前为止，基于它们一般的融合后结构基序已经鉴定了三种不同种类的病毒融合蛋白(表C-3)(Kielian等.自然微生物学综述(Nat.Rev.Microbiol).4：67-76(2006)；Weissenhorn等.FEBS Lett.581，2150-2155(2007))。
在它们最终的融合后状态，I类病毒融合蛋白的特征在于膜-近侧C端区域与更多的N-端三聚α-螺旋卷曲螺旋结构域形成发夹三聚体的相互作用，所述发夹三聚体使融合肽和跨膜结构域在一起(Skehel等.细胞(Cell)95：871-874(1998))。重要的是，对于一些I类蛋白，包含这些C-端或N-端相互作用区域的序列的肽可以结合于病毒融合蛋白并且通过防止重新折叠为最终的发夹构象而抑制融合和感染(综述，见Moore和Doms美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA).100：10598-10602(2003))。最终的三聚体发夹结构通常称为六螺旋束。关于两种I类蛋白的激活融合之前的状态，已经通过晶体学对两种I类蛋白的结构状态进行确定。对于一种蛋白，流感病毒血凝素(HA)，它们的起始状态未显示六螺旋束(Wilson等.自然(Nature)289：366-373(1981))，而对于另一种蛋白，即猿猴副流感病毒5融合(F)蛋白，已经存在六螺旋束(Yin等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)102：9288-9293(2005))，但是该结构与最终的螺旋束不相同。在这两种情形中，在从它们的起始状态向最终状态的转变中，所述蛋白经历二级结构的变化，所述变化导致蛋白的部分，特别是融合肽移动较长的距离(Baker等.分子细胞学(Mol.Cell)3：309-319(1999).Chen等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)96：8967-8972(1999))。表达I类融合蛋白的病毒家族的实例是正粘病毒科、副黏液病毒科、丝状病毒科(Filoviridae)、逆转录病毒科和冠状病毒科。
已知表达II类蛋白的病毒属于甲病毒属(披膜病毒科家族)以及黄热病毒科(Flaviviridae)家族(Kielian等.病毒学(Virology)344：38-47(2006))。甲病毒属和黄热病毒科是包含用衣壳蛋白包装的正链RNA基因组的小的球状病毒。核壳体由包含病毒膜融合蛋白(甲病毒E1或黄病毒E)的脂双层包膜。在成熟的病毒体中，甲病毒E1与病毒E2蛋白缔合作为异源二聚体，而发现黄病毒E蛋白作为E-E同型二聚体。低pH导致融合蛋白向融合后构象的重要重排，使其二聚体相互作用解离并且产生靶标膜-插入的同源三聚体，认为其驱动膜融合反应。尽管甲病毒和黄病毒融合蛋白不具有可检测的氨基酸序列类似性，它们具有显著类似的二级和三级结构，指示它们的进化关系并导致它们作为II类病毒融合蛋白的最早成员的分类(Lescar等.细胞(Cell)105：137-148(2001))。已经关于甲病毒属塞姆利基森林病毒(alphavirus Semliki Forest virus)(SFV；Lescar等.细胞(Cell)105：137-148(2001))和黄病毒TBE，DV2，和DV3(Rey 375：291-298(1995)；Modis美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)100：6986-6991(2003))确定了融合蛋白胞外结构域的中性pH(即，融合前)结构。所述蛋白是几乎完全由β-链组成的延长的分子并且包含三个结构域：结构域I，其位于中央；结构域II，其位于结构域I的一侧并且在其末端包含靶-膜相互作用融合肽环；以及Ig-样结构域III，其与结构域I的另一侧连接。尽管在胞外结构域结构中不存在，在全长蛋白中，在结构域III的C-端，在融合环的蛋白的相对端发现干区和跨膜锚定物。融合蛋白以二十面体对称性排列并且与病毒膜正切(几乎平行)排列。从晶体学确定的起始状态向最终状态的转变所必需的II类融合蛋白的构象变化不包括二级结构中的实质变化。相反，II类蛋白结构域在“枢轴点”旋转从而大范围的移动使融合环和跨膜结构域接近，形成由β-结构组成的发夹的三聚体。
第三类融合蛋白通过组合两种结构元件以其融合后状态形成发夹三聚体。与I类融合蛋白类似，III类融合蛋白显示中央α-螺旋三聚体核心；然而，每个融合结构域暴露位于延长的β-折叠末端的两个融合环，揭示与II类融合蛋白的显著趋同性(Roche等.科学(Science)313：187-191(2006)；Heldwein等.科学(Science)313：217-220(2006))。表达III类融合蛋白的病毒家族的实例是杆状病毒科和疱疹病毒科。
到目前为止，中和抗体对于针对与包膜病毒相关的疾病提供保护是关键的。原则上，这些抗体可以针对游离病毒和感染的细胞两者作用。抗体的最显著的抗病毒活性以及对于抗体介导的保护最重要的活性是中和游离病毒颗粒。针对游离病毒颗粒的抗病毒活性可以通过将所述抗体与病毒体表面的特异性靶标如包膜蛋白结合而获得，其可以导致病毒感染的抑制(中和)和/或导致可以引起病毒清除的效应子系统的引发。特异性针对感染的细胞的抗体也可以介导一些抗病毒活性。Fc-介导的效应子系统可以导致由抗体依赖的细胞毒性(ADCC)或补体依赖的细胞毒性(CDC)引起的细胞裂解或清除。已经特别关于神经元的病毒感染描述了通过使抗体与在细胞膜上表达的病毒分子结合，推测是通过信号传导机制来抑制细胞内的病毒复制(Fujinami等.自然(Nature)279：529-530(1979)；Levine等.科学(Science)254：856-860(1991))。抗体还可以抑制病毒从被感染的细胞中释放(Gerhard等.现代微生物和免疫学观点(Curr.Top.Microbiol.Immunol.)260：171-190(2001))以及病毒的细胞-细胞传递(Pantaleo等.欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol.)25：226-231(1995)；Burioni等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)91：355-359(1994))。中和抗体倾向于对被感染的细胞和游离病毒颗粒有效，因为它们结合于在被感染的细胞以及病毒体上存在的包膜分子。然而，非中和抗体通过结合于在感染的细胞上，而非在病毒体上表达的分子，例如流感病毒的M2蛋白，针对被感染的细胞也是有效的。(Fiers等.病毒研究(Virus research 103(1-2)：173-176(2004)).Okuno等.(1993，病毒学杂志(J.Virol.)67：2552-2558)描述了这样的单克隆抗体(MAb C179)，其结合于HA的干区并且抑制HA的融合活性，导致病毒中和细胞融合的抑制。
在临床上，使用多克隆和单克隆抗体(mAbs)进行的抗体治疗有效作为针对水痘、甲型肝炎、乙型肝炎、狂犬病(Montano-Hirose等.疫苗(Vaccine)11：1259-1266(1993)和Schumacher等.疫苗(Vaccine)10：754-760(1992))，和呼吸道合胞病毒感染(Sawyer抗病毒研究(Antiviral Res).47：57-77(2000))的预防。在最近10年里，已经批准了两种抗体用于病毒适应症，即RespiGam和Synagis这两种都用于预防呼吸道合胞病毒感染。RespiGam是人血浆来源的抗体，Synagis是人源化的单克隆抗体，是被批准用于感染性疾病适应症的第一个这样的抗体。用于预防肾移植患者的巨细胞病毒感染的CytoGam最近被准予用于扩展的适应症，包括用于肺、肝、胰腺和心脏移植患者。到目前为止，对患有流感的人患者进行的基于抗体的治疗研究极少。Nabi-HB是用于治疗HBV急性或围产期暴露的市售人血浆来源的抗体。然而，已经显示特异性单克隆抗体可以赋予小鼠针对流感的预防和治疗保护(Smirnov等.病毒学进展(Arch Virol.)145：1733-1741(2000)；Renegar等.免疫学杂志(JImmunol).173：1978-1986(2004)；Palladino等.病毒学杂志(J Virol.)69：2075-2081(1995))。已经在小鼠模型中将特异于流感病毒的血凝素H5蛋白的人源化的小鼠mAbs和马F(ab′)2片段有效用于预防和治疗(Lu等.呼吸系统研究(Respir Res).7：43(2006)；Hanson等.呼吸系统研究(Respir Res).7：126(2006))。
还已经在体外和体内动物模型(主要是在小鼠中)中证实抗体片段，如F(ab’)2片段，Fab片段(Lamarre等.免疫学杂志(J.Immunol).154：3975-3984(1995)；Thullier等.生物技术杂志(J.Biotechnol.)69：183-190(1999)；Schofield等.基因病毒杂志(J.Gen.Virol).78：2431-2439(1997)；Barbas等.PNAS 89：10164(1992)；Crowe等.PNAS91：1386(1994)；Prince等.JVI 64：3091(1990))和单链Fv片段(Mason等.病毒学(Virology)224：548(1996))成功中和多种有包膜病毒。
已经针对马尔堡病毒(Marburg virus)的核蛋白(Sherwood等.al.感染疾病杂志(J.Infect.Dis.)196(2)：S213-219(2007))，针对猪逆转录病毒的p15基质蛋白(Dekker等.病毒学杂志(J.Virol).77(22)：12132-12139(2003))，针对人乙型肝炎病毒的HBsAg(Serruys等.第12届病毒性肝炎和肝病国际讨论会(12th International Symposium onViral Hepatitis and Liver Disease)(2006)；Serruys等.与病原性微生物斗争的新化合物和策略(Novel compounds & strategies to combat pathogenic microorganisms(海报))(2006)；Serruys等.乙型肝炎病毒的分子生物学(海报)(The Molecular Biology ofHepatitis B Viruses(poster))(2007)；Serruys HBV多样性、发病机理、诊断和治疗的新视角(口头报告)(New insights in HBV diversity，pathogenesis，diagnosis andtreatment(oral presentation))(2007)；Serruys NBC-12：单结构域胞内抗体在小鼠中抑制乙型肝炎病毒复制(口头报告)(NBC-12：Single-domain intrabodies inhibitHepatitis B virus replication in mice(oral presentation))(2008))，针对痘苗病毒(Goldman等.Anal.Chem.78(24)：8245-8255(2006))，并且针对HIV-1的gp120(Forsman等.摘要EU-WHO Neut Workshop，意大利，2007年3月)产生衍生自骆驼科(camelid)动物物种重链抗体的可变结构域，在一些情形中在体外和/或体内导致有效阻断病毒复制或中和(在小鼠模型中)。
上述讨论的现有技术清楚显示开发有效和有力的抗病毒药物仍旧是一个大的科学挑战。目前仅对于少部分的病毒感染存在有效的预防和/或治疗化合物。
然而，目前存在的抗病毒药物具有许多副作用，如恶心、呕吐、皮疹、偏头痛、虚弱、震颤，和更少有地，癫痫发作。
此外，病毒的可突变性以及随之而来的适应性给设计长期有效的抗病毒策略带来了巨大困难。尽管药物设计已经得益于在病毒生长过程的分子了解上取得的进展，许多最初有效的药物随时间失去它们的功效，因为出现了抗药性毒株。当出现减弱或抵消药物的抑制作用的突变时，携带这样的突变的病毒株获得了生长优势，并且随后在病毒群体中被选择。
因此，对于大多数目前已知的人类病毒性疾病，存在对于有效的抗病毒药物的迫切需要，所述抗病毒药物可以用于有效治疗和预防这些疾病。此外，存在对于这样的备选和提高的抗病毒药物的需要，其在功效和/或效能(长期)上超过现存的药物，克服了目前遭遇的不利，如例如不需要的副作用和病毒逃避/病毒逃逸。
发明简述
本发明的一个目的是提供这样的氨基酸序列，其针对病毒的包膜蛋白和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白。根据本发明所述的氨基酸序列，其针对病毒的包膜蛋白和/或特异性结合于病毒的包膜蛋白，可以通常用于调节，和具体地抑制和/或防止病毒-介导的生物学途径，在所述生物学途径中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体。具体地，本发明的氨基酸序列可以用于中和病毒(如本文定义)和/或调节、减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)。
更具体地，根据本发明所述的氨基酸序列可以在病毒感染的进入前阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞发生前和/或过程中)和/或在病毒感染进入后阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞发生后)可以中和病毒(如本文定义)和/或调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)。因此，在本文认为在病毒感染进入前阶段中(即，在病毒进入靶宿主细胞已经发生之前和/或过程中)中和病毒(如本文定义)和/或调节、减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)的本发明的氨基酸序列调节，并且具体地抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒进入(如本文进一步定义)。此外，在本文认为，在病毒感染的进入后阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞已经发生后)中和病毒(如本文定义)和/或调节、减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)的本发明的氨基酸序列调节并且具体地抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒复制(如本文进一步定义)。
因此，本发明的氨基酸序列可以通过在所述生物学途径的任何适合的阶段通过特异性结合于病毒的包膜蛋白调节并且具体地抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒进入和/或病毒复制；优选地，本发明的氨基酸序列可以通过结合于病毒的包膜蛋白从而使病毒体聚集被诱导和/或病毒体结构被去稳定化和/或病毒体对靶宿主细胞的附着被调节、抑制和/或防止(例如通过调节和/或抑制和/或防止在病毒包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用和/或病毒的包膜蛋白和靶宿主细胞之间的相互作用或通过与所述包膜蛋白竞争与所述病毒受体和/或所述靶宿主细胞的结合)和/或病毒与所述靶宿主细胞的融合被调节、抑制和/或防止(例如，在靶宿主细胞膜或在所述靶宿主细胞的内体和/或溶酶体区室中)，例如通过防止所述病毒的包膜蛋白进行构象变化，来调节和具体地抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中。备选地，本发明的氨基酸序列可以通过在所述生物学途径的任何适合阶段特异性结合于病毒的包膜蛋白来调节并且具体地在靶宿主细胞中抑制和/或防止病毒复制(如本文定义)；优选地，本发明的氨基酸序列可以通过结合于病毒的包膜蛋白从而使病毒基因组的转录和/或翻译受到影响、抑制和/或防止和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成受到影响、抑制和/或防止和/或新生病毒体在靶宿主细胞膜上的出芽受到减少、抑制和/或防止，从而在靶宿主细胞中调节并且具体地抑制和/或防止病毒复制。
像这样，本发明的多肽和组合物可以用于预防和治疗(如本文定义)病毒性疾病。一般地，“病毒性疾病”可以定义为由一种或多种病毒导致的疾病和病症；具体地病毒性疾病可以是这样的疾病，其可以分别通过向需要其的受试者(即，具有所述疾病或病症或其至少一种症状和/或处于引起或发展所述疾病或病症的风险中)适当地施用本发明的氨基酸序列、多肽、或组合物(和具体地，其药物活性量)和/或针对病毒的包膜蛋白或其中涉及病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体的病毒介导的生物学途径(并且具体地，其药用活性量)的已知抗病毒化合物进行预防和/或治疗。基于本文的公开内容，所述病毒性疾病的实例对于技术人员是清楚的，并且例如包括下列疾病和病症(由下列病毒导致)：AIDS(由HIV引起)，AIDS相关并发症(由HIV引起)，无菌性脑膜炎(Aseptic meningitis)(由HSV-2引起)，细支气管炎(Bronchiolitis)(由例如RSV引起[RSV病毒和由RSV病毒引起的疾病在Ogra P.儿科呼吸病综述(Paediatric Respiratory Reviews)5：S119-S126(2004)中综述])，加利福尼亚脑炎(California encephalitis)(由加利福尼亚脑炎病毒引起)，水痘(Chickenpox)(由水痘带状疱疹病毒引起)，科洛拉多蜱传热(Colorado tick fever)(由科洛拉多蜱传热病毒引起)，普通感冒(由例如RSV引起[RSV病毒和由RSV引起的疾病综述见Ogra P.儿科呼吸病综述(Paediatric Respiratory Reviews)5：S119-S126(2004)]或由副流感病毒引起)，结膜炎(由例如单纯疱疹病毒引起)，牛痘(由痘苗病毒引起)，哮吼(Croup)(由例如副流感病毒1-3引起)，巨细胞病毒感染(由巨细胞病毒引起)，登革热(由登革病毒引起)，东方马脑炎(Eastern equine encephalitis)(由EEE病毒引起)，埃博拉出血热(Ebola hemorrhagicfever)(由埃博拉病毒引起)，在羊中的脑炎和慢性肺炎(由绵羊髓鞘脱落病毒(Visnavirus)引起)，脑炎(由塞姆利基森林病毒引起)，龈口炎(Gingivostomatitis)(由HSV-1引起)，汉滩病毒出血热/汉滩-韩国出血热(Hantavirus hemorrhagic fever/Hantaan-Korean hemorrhagic fever)(由汉滩病毒引起)，肝炎(由肝炎病毒引起)，生殖器疱疹(Genital herpes)(由HSV-2引起)，唇疱疹(Herpes labialis)(由HSV-1引起)，新生儿疱疹(neonatal herpes)(由HSV-2引起)，生殖器HSV(由单纯疱疹病毒引起)，传染性单核细胞增多症(由例如埃巴病毒引起)，流感(Flu)(由流感病毒A、B和C引起[流感病毒，由流感病毒引起的疾病和治疗这些疾病的药物由Subbarao等.自然免疫学综述(Nat.Rev.Immunol.)7：267-278(2007)综述])，日本脑炎病毒(由JEE病毒引起)，角膜结膜炎(Keratoconjunctivitis)(由HSV-1引起)，拉沙热(Lassa fever)，白血病和淋巴瘤(由例如人T细胞白血病病毒或莫罗尼鼠白血病病毒引起)，下呼吸道感染(由例如RSV引起[RSV病毒和由RSV引起的疾病由Ogra P.儿科呼吸病综述(Paediatric Respiratory Reviews)5：S119-S126(2004)综述]或仙台病毒引起)，麻疹(由麻疹病毒引起)，马尔堡出血热(由马尔堡病毒引起)，传染性软疣(Molluscum contagiosum)(由软疣引起)，单核细胞增多症样综合症(由CMV引起)，流行性腮腺炎(mumps)(由腮腺炎病毒引起)，新城疫(由禽副粘病毒1引起)，诺如病毒(Norovirus)，Orf(由口疮病毒引起)，咽炎(由例如RSV引起[RSV病毒和由RSV引起的疾病由Ogra P.儿科呼吸病综述(Paediatric Respiratory Reviews)5：S119-S126(2004)]综述，由流感病毒引起[流感病毒，由流感病毒引起的疾病和治疗这些疾病的药物由Subbarao等.自然免疫学综述(Nat.Rev.Immunol.)7：267-278(2007)综述]，由副流感病毒和埃巴病毒引起)，肺炎(病毒性)(由例如RSV引起[RSV病毒和由RSV引起的疾病由OgraP.儿科呼吸病综述(Paediatric Respiratory Reviews)5：S119-S126(2004)综述]或由CMV病毒引起)，进行性多灶性白质脑病(Progressive multifocal leukencephalopathy)，狂犬病(由狂犬病病毒引起[狂犬病病毒和由狂犬病毒引起的疾病由WoldehiwetZ.Res.Vet.Sci.73：17-25(2002)和Dietzschold等.病毒学杂志(J.Virol.)56：12-18(1985)]综述)，玫瑰疹(Roseola)(由HHV-6引起)，风疹(由风疹病毒引起)，SARS(由人冠状病毒引起)，带状疱疹(由水痘带状疱疹病毒引起)，天花(由天花病毒引起)，圣路易脑炎(St.Louis encephalitis)(由SLE病毒引起)，脓毒性咽喉炎(Strep Throat)(由例如下列引起：RSV[RSV病毒和由RSV引起的疾病由Ogra P.儿科呼吸病综述(PaediatricRespiratory Reviews)5：S119-S126(2004)综述]，流感病毒[流感病毒，由流感病毒引起的疾病和治疗这些疾病的药物在Subbarao等.Nat.Rev.Immunol.7：267-278(2007)中综述]，副流感病毒，埃巴病毒)，辛德毕斯热(辛德毕斯病毒)，颞叶脑炎(Temporal lobeencephalitis)(由HSV-1引起)，尿道炎(由单纯疱疹病毒引起)，疱疹性口炎(Vesicularstomatitis)(由疱疹性口炎病毒引起)，病毒性脑炎，病毒性胃肠炎，病毒性脑膜炎，病毒性肺炎，西部马脑炎(Western equine encephalitis)(由WEE病毒引起)，西尼罗河病(WestNile disease)，黄热病(Yellow fever)(由黄热病病毒引起)，和带状疱疹(由水痘带状疱疹病毒引起)。根据本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以用于治疗前述任一种病毒性疾病。所述病毒性疾病的其它实例对于技术人员是清楚的；例如，根据本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以用于治疗在“病毒学领域(Fields Virology)”手册，第5版(2007)中公开的任一种病毒性疾病，所述手册由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；DianeE.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；Stephen E.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
因此，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以用于预防和治疗这样的病毒性疾病，所述疾病的特征在于其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的病毒介导的生物学途径。
具体地，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以用于预防和治疗这样的病毒性疾病，其特征在于其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的任何病毒介导的生物学途径。然而，优选地，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以用于预防和治疗这样的病毒性疾病，其特征在于在靶宿主细胞中的病毒进入，如病毒体与靶宿主细胞的附着和/或病毒与靶宿主细胞的融合。此外优选地，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以用于预防和治疗这样的病毒性疾病，其特征在于在靶宿主细胞中的病毒复制，如病毒转录和/或病毒翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体在靶宿主细胞膜上的出芽。
这些应用的一些具体，但非限制性的实例是：
-针对血凝素H5的本发明的氨基酸序列和多肽，和包含其的药物组合物，可以用于预防和治疗流感(flu)、咽炎、脓毒性咽喉炎、普通感冒和呼吸道感染；
-针对hRSV的本发明的氨基酸序列和多肽，以及包含其的药物组合物，可以用于预防和治疗下呼吸道感染、细支气管炎、普通感冒、咽炎、病毒性肺炎和脓毒性咽喉炎；
-针对狂犬病的本发明的氨基酸序列和多肽，以及包含其的药物组合物，可以用于预防和治疗狂犬病、脑部炎症和(急性)脑炎；
基于本文的公开内容，所述应用的其它实例对于技术人员是清楚的。
因此，但不限于此，本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以例如用于预防和/或治疗目前用已知抗病毒化合物预防或治疗的所有疾病和病症，所述抗病毒化合物可以调节其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的病毒介导的生物学途径，如在上述现有技术中提及的那些。还意欲本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以用于预防和/或治疗所有的疾病和病症，对于所述疾病和病症，目前正在开发、已经提议或在未来将提议或开发用所述抗病毒化合物进行的治疗。此外，因为它们如本文进一步描述的有利性质，设想可以将本发明的氨基酸序列、多肽和组合物用于预防和治疗除了正在使用这些已知抗病毒化合物或提议或开发的那些之外的其它疾病和病症和/或本发明的氨基酸序列、多肽和组合物可以提供用于治疗本文描述的疾病和病症的新方法和方案。
从本文的进一步公开内容，对于熟练的技术人员来说本发明的氨基酸序列和多肽的其他应用和用途将变得显而易见。
一般地，本发明的一个目的是提供药理学活性剂，以及包括其的组合物，它们可用于病毒性疾病以及本文提到的其他疾病和病症的诊断、预防和/或治疗中；以及提供用于这些疾病和病症的诊断、预防和/或治疗的方法，这些方法涉及这些药剂和组合物的施用和/或应用。
特别地，本发明的一个目的是提供与本领域中目前所用的和/或所知的药剂、组合物和/或方法相比具有某些优点的此类药理学活性剂、组合物和/或方法。这些优点将从下文的进一步描述而变得显而易见。
更特别地，本发明的一个目的是提供可以用作药理学活性剂的治疗性蛋白，以及包括其的组合物，其用于诊断、预防和/或治疗病毒性疾病以及本文提及的其他的疾病和病症；和提供用于诊断、预防和/或治疗所述疾病和病症的方法，所述方法涉及所述治疗性蛋白和组合物的施用和/或应用。
因此，本发明的具体目的是提供针对(如本文所定义)病毒的包膜蛋白、特别是针对能够感染温血动物的病毒的包膜蛋白，更特别是针对能够感染哺乳动物的病毒的包膜蛋白，并且尤其是针对能够感染人的病毒的包膜蛋白的氨基酸序列；并且提供包括至少一种所述氨基酸序列或基本上由其组成的蛋白和多肽。
特别地，本发明的具体目的是提供适合在温血动物、并且特别是在哺乳动物、且更特别是在人中用于预防、治疗和/或诊断应用的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。
更特别地，本发明的具体目的是提供可以在温血动物、特别是在哺乳动物、且更特别是在人中用于预防、治疗、减轻和/或诊断一种或多种与病毒进入和/或病毒复制相关和/或由病毒的包膜蛋白和/或其受体介导的疾病、病症或病况(如本文所提及的疾病、病症和病况)的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。
本发明还有一个具体目的是提供可以用于制备用于预防和/或治疗温血动物、特别是哺乳动物、且更特别是人中的一种或多种与病毒进入和/或病毒复制相关的和/或由病毒的包膜蛋白和/或其受体介导的疾病、病症或病况(如本文所提及的疾病、病症和病况)的药物或兽医用组合物的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。
在本发明中，通常，这些目的通过利用本文所述的氨基酸序列、蛋白、多肽和组合物实现。
一般地，本发明提供针对(如本文所定义)和/或可以特异性结合(如本文所定义)病毒的包膜蛋白的氨基酸序列；以及包括至少一种所述氨基酸序列的化合物和构建体、且特别是蛋白和多肽。优选地，本发明的氨基酸序列和多肽所针对的和/或特异性结合的所述病毒的包膜蛋白可以由病毒基因组编码，即可以是病毒特异性的包膜蛋白。备选地，所述病毒的包膜蛋白也可以由病毒基因组编码，但是可以例如由“所述病毒的靶宿主细胞”的基因组编码(如本文进一步定义)。此外，所述病毒的包膜蛋白优选地是膜蛋白，其结合或附着于和/或包埋在所述病毒的病毒包膜的脂双层膜层中，和/或与其杂交。在另一个优选，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽所针对和/或由本发明的氨基酸序列和/或多肽所特异性结合的所述病毒的包膜蛋白可以是糖蛋白。备选地，所述包膜蛋白可以是非糖基化的蛋白。
更特别地，本发明提供可以以如本文所定义的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)与病毒的包膜蛋白结合的氨基酸序列；以及包含至少一种所述氨基酸序列的化合物和构建体、且特别是蛋白和多肽。
特别地，本发明的氨基酸序列和多肽优选是这样的，即，它们：
-以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与病毒的包膜蛋白结合；
和/或是这样的，即，它们：
-以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与病毒的包膜蛋白结合；
和/或是这样的，即，它们：
-以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与病毒的包膜蛋白结合。
优选地，本发明的单价氨基酸序列(或包含仅一个本发明的氨基酸序列的多肽)优选是这样的，即，它将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和力与病毒的包膜蛋白结合。
对于本发明的氨基酸序列或多肽与病毒的包膜蛋白结合的一些优选的IC50值将从本发明的进一步描述和实施例中变得显而易见。
对于与病毒的包膜蛋白合，本发明的氨基酸序列通常将在其氨基酸序列内包含一个或多个氨基酸残基、或氨基酸残基的一个或多个序列(即，每个“序列(stretch)”包括彼此相邻或彼此紧邻的两个以上氨基酸残基，即，在该氨基酸序列的一级或三级结构上)，通过其本发明的氨基酸序列可以与病毒的包膜蛋白结合，因此所述氨基酸残基或氨基酸残基的序列形成结合病毒的包膜蛋白的“位点”(本文还称为“抗原结合位点”)。
本发明提供的氨基酸序列优选地基本上采用分离形式(如本文所定义)、或形成本发明的蛋白或多肽的一部分(如本文所定义)，其可以包括一种或多种本发明的氨基酸序列或基本上由其组成，并且其可以任选地还包括一种或多种其它的氨基酸序列(全部任选地通过一个或多个适当的接头连接)。例如，并且不限于，本发明的一个或多个氨基酸序列可以用作在这样的蛋白或多肽内的结合单位，所述蛋白或多肽可以任选地包含可以充当结合单位的一个或多个其它的氨基酸序列(即，针对除病毒的包膜蛋白外的一种或多种其它靶标，本发明的氨基酸序列可以特异性结合于和/或针对所述病毒的包膜蛋白)，以便分别提供单价、多价或多特异性的本发明的多肽，全如本发明所述。这样的蛋白或多肽还可以采用基本上分离的形式(如本文所定义)。
因此，本发明的氨基酸序列和多肽优选地基本上由不通过二硫键与任一另一氨基酸序列或链连接(但是其可以或可以不包含一个或多个分子内二硫键。例如，已知纳米抗体----如本文所述----有时可以含有在CDR3和CDR1或FR2之间的二硫键)的单个氨基酸链组成。然而，应该注意，一个或多个本发明的氨基酸序列可以彼此连接和/或与其他氨基酸序列连接(例如，通过二硫键)，以提供也可以用于本发明的肽构建体(例如，Fab’片段，F(ab’)2片段，ScFv构建体，“双抗体”和其他多特异性构建体。例如，参考Holliger和Hudson，Nat Biotechnol.(自然生物技术)2005年9月；23(9)：1126-36的综述)。
一般地，当本发明的氨基酸序列(或包括其的化合物、构建体或多肽)意欲施用给受试者时(例如，为了如本文所述的治疗和/或诊断目的)，优选其是在所述受试者内天然不存在的氨基酸序列；或当它在所述受试者内天然存在时，采用基本上分离的形式(如本文所定义)。
熟练的技术人员还应该清楚，对于药物应用，本发明的氨基酸序列(以及包括其的化合物、构建体和多肽)优选地针对病毒的包膜蛋白；而对于兽医用目的，本发明的氨基酸序列和多肽优选地针对能够感染待治疗的物种的病毒的包膜蛋白，或至少与能够感染待治疗的物种的病毒的包膜蛋白交叉反应。
此外，本发明的氨基酸序列可以任选地，并且除了所述至少一个针对病毒的包膜蛋白结合的结合位点之外，包含针对其它抗原、蛋白或靶标结合的一个或多个其它的结合位点。
本发明的氨基酸序列和多肽的功效、以及包括其的组合物的功效可以使用任何适合的体外测定、基于细胞的测定、体内测定和/或本身已知的动物模型、或它们的任何组合进行检测，这取决于所涉及的具体的疾病或病症。适当的测定和动物模型对于熟练的技术人员来说将是清楚的，并且例如，包括Biacore测定法；例如通过使用识别已知表位的单克隆抗体的表位作图；用于不同病毒毒株的基于细胞的中和测定法(例如，用于流感的病毒中和测定法，如在Vanlandschoot等.病毒学(Virol.)212：526-534(1995)和Vanlandschoot等.基因病毒学杂志(J.Gen.Virol.)79：1781-1791(1998)中所述或用于狂犬病的快速荧光聚焦抑制测试(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test)(RFFIT)，如在来自WHO狂犬病实验室技术的标准手册(1996)中所述)；细胞-细胞传播的体外抑制(Dietzschold等.病毒学杂志(J.Virol).56：12-18(1985))；细胞-细胞融合抑制测定法(Vanlandschoot等.基因病毒学杂志(J.Gen.Virol.)79：1781-1791(1998))；检验对抗体的抗性或敏感性的空斑测定法(Vanlandschoot等.基因病毒学杂志(J.Gen.Virol.)79：1781-1791(1998))；在巨噬细胞系和原代巨噬细胞中研究ADEI并且在用本发明的抗体和氨基酸序列和多肽预温育和未用本发明的抗体和氨基酸序列和多肽预温育的情况下，比较感染率(Tirado等.病毒免疫学(Viral Immunol).16：69-86(2003))；研究针对H5N1病毒感染的中和抗体反应的可复制型病毒的逆转录病毒和慢病毒假型(Temperton等.Emerg.Infect.Dis.11：411-416(2005))；研究RSV的棉鼠模型(Murphy等.病毒研究(Virus Res.)11：1-15(1988))；体内筛选对通过在小鼠中脑内接种的狂犬病感染的中和能力；验证根据本发明的氨基酸序列和多肽用于暴露后预防的应用(Schumacher等.疫苗(Vaccine)10：754-760(1992))；评估本发明的氨基酸序列和多肽治疗正在进行的病毒脑感染的治疗潜力；用于H5N1感染的Ferret模型(Yen等.病毒学杂志(J.Virol.)81：6890-6898(2007))；评估本发明的氨基酸序列和多肽治疗流感感染的小鼠的预防和治疗潜力(Simmons等.Plos Medicine 4(5)：928-936)；以及用于下面的实验部分和本文提及的现有技术中的测定法和动物模型。
并且，根据本发明，针对能够感染第一温血动物物种的病毒的包膜蛋白的氨基酸序列和多肽可以或可以不表现出与能够感染一种或多种其它温血动物物种的病毒的包膜蛋白的交叉反应性。例如，针对能够感染人的病毒的包膜蛋白的氨基酸序列和多肽可以或可以不表现出与能够感染一种或多种其它灵长类物种(诸如，不限于，来自猕猴属(Macaca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和/或恒河猴(恒河猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus)))的病毒的包膜蛋白的交叉反应性，和/或与能够通常用于疾病的动物模型中(例如小鼠、大鼠、兔、猪或狗)、且特别是用于与病毒的进入和/或病毒复制相关和/或由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体的包膜蛋白介导的疾病的动物模型中的一种或多种动物物种(诸如本文提及的物种和动物模型)的病毒的包膜蛋白的交叉反应性。在这一方面，对于熟练的技术人员应该清楚，从药物开发观点来看，所述交叉反应性，当存在时，可能具有优点，因为它允许所述针对能够感染人的病毒的包膜蛋白的氨基酸序列和多肽在所述疾病模型中被检测到。
更一般地，与能够感染多个哺乳动物物种的病毒的两种以上的同源包膜蛋白交叉反应的本发明的氨基酸序列和多肽将通常有利于用于兽医应用，原因在于它将允许在多种物种之间使用相同的氨基酸序列或多肽。因此，在本发明的范围内还包括，针对能够感染动物物种的病毒的包膜蛋白的氨基酸序列和多肽(诸如针对能够感染人的病毒的包膜蛋白的氨基酸序列和多肽)可以用于治疗其它动物物种，只要所述氨基酸序列和/或多肽的应用在待治疗的物种中提供所需要的作用。
本发明在其最广泛意义上也不特别限于或限定于本发明的氨基酸序列和多肽所针对的病毒的包膜蛋白或病毒包膜蛋白的具体种类、分类或类型。例如，所述氨基酸序列和多肽可以针对病毒的任一种包膜蛋白。病毒包膜蛋白是本领域中已知的并且例如包括，但不限于：RSV病毒的F蛋白，RSV病毒的G蛋白，RSV病毒的SH蛋白，RSV病毒的M蛋白，RSV病毒的M2蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5 F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒(Tick-borne encephalitis)的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
本发明的氨基酸序列和多肽可以针对前述任一种病毒包膜蛋白.病毒包膜蛋白的其它实例对于技术人员是清楚的；例如，根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以针对在病毒学领域(Fields Virology)手册，第5版(2007)中公开的任一种病毒包膜蛋白，其由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；Stephen E.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
然而，通常设想并且优选本发明的氨基酸序列和多肽优选地针对病毒的包膜蛋白，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白(如本文进一步定义)；和/或病毒融合蛋白(如本文进一步定义)；和/或病毒附着蛋白和病毒融合蛋白(如本文进一步定义)。
因此，在一个优选的，但非限制性方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对和/或特异性结合于病毒的包膜蛋白，所述病毒的包膜蛋白是病毒附着蛋白(如本文进一步定义)。病毒附着蛋白是本领域已知的并且例如包括但不限于：RSV病毒的G蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，和西尼罗河病毒的E蛋白。
本发明的氨基酸序列和多肽可以针对任一种前述病毒附着蛋白。病毒附着蛋白的其它实例对于技术人员是清楚的；例如本发明的氨基酸序列和多肽可以针对在“病毒学领域(Fields Virology)”手册，第5版(2007)中公开的任一种病毒附着蛋白，其由DavidM.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；Stephen E.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
多种病毒附着蛋白的结构和功能特征和作用机理是本领域已知的并且例如在下列文献“病毒学领域(Fields Virology)”，第5版(2007)中详细描述，其由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；MalcolmA.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；Stephen E.Straus，MD(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)编辑。
要理解具体的功能病毒附着蛋白(如本文定义)可以以其功能形式进行表达或以其(无活性)前体蛋白形式表达。在所述特定功能病毒附着蛋白以(无活性)前体蛋白表达的情形中，其可以在病毒的靶宿主细胞(如本文定义)(例如在专门的细胞器官，如反高尔基区室)中进行翻译后加工和/或修饰(例如通过用一种或多种酶，如蛋白酶裂解)，得到功能性附着蛋白和任选地至少一种其它主要蛋白部分。在所述功能性附着蛋白和任选地所述至少一种其它主要蛋白部分已经形成后，这些可以仍旧彼此附着(如通过共价结合，例如通过一个或多个二硫键，或通过非共价结合，例如通过形成蛋白复合物)，或这些可以彼此分离；然而在两种情形中(保持彼此附着或彼此分离)，仅得到的功能性附着蛋白或得到的功能性附着蛋白和任选地至少一种其它主要蛋白部分二者可以直接参与在病毒体和其靶宿主细胞之间的附着过程(如本文定义)(例如通过结合于在所述靶宿主细胞表面上表达的特定病毒受体)。然而，优选仅得到的功能性附着蛋白直接参与病毒体和其靶宿主细胞之间的附着过程(例如通过结合于在所述靶宿主细胞表面上表达的特定病毒受体)。这样的通过翻译后修饰形成的功能性附着蛋白的实例包括但不限于HIV-1病毒的gp120蛋白和流感的HA1蛋白。然而，所述形成的至少一种其它主要蛋白部分参与(直接或间接)病毒体及其靶宿主细胞之间的附着过程(如本文定义)和/或所述形成的至少一种其它主要蛋白部分参与(直接或间接)作为所述病毒体的感染和/或复制过程一部分的其它过程(如例如所述病毒体与其靶宿主细胞的融合)也不被排除在外。
在另一个非限制性的优选方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对和/或特异性结合于病毒的包膜蛋白，所述病毒的包膜蛋白是病毒融合蛋白(如本文进一步定义)。
病毒融合蛋白是本领域已知的并且例如包括，但不限于：RSV病毒的F蛋白，流感A病毒的HA蛋白，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
本发明的氨基酸序列和多肽可以针对前述任一种病毒融合蛋白。病毒融合蛋白的其它实例对于技术人员是清楚的；例如，根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以针对在“病毒学领域(Fields Virology)手册”，第5版(2007)中公开的任一种病毒融合蛋白，所述手册由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；RobertA.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；Stephen E.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
多种病毒融合蛋白的结构和功能特征以及作用机制是本领域已知的并且例如详细描述在下列文献中：Baker等.分子细胞学(Mol.Cell)3：309-319(1999)；Chen等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)96：8967-8972(1999)；Earp等.Curr.TopicsMicrobiol.Immunol.285，25-66(2005)；Heldwein等.科学(Science)313：217-220(2006)；Helenius等.细胞生物学杂志(J.Cell Biol).84，404-420(1980)；Kielian等.Nat.Rev.Microbiol.4：67-76(2006)；Lescar等.细胞(Cell)105：137-148(2001)；Modis美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)100：6986-6991(2003)；Moore和Doms美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA).100：10598-10602(2003)；Rey 375：291-298(1995)；Roche等.科学(Science)313：187-191(2006)；Sieczkarski等.Curr.TopicsMicrobiol.Immunol.285，1-23(2005)；Smith等.科学(Science)304，237-242(2004)；Skehel等.细胞(Ce//)95：871-874(1998)；Weissenhorn等.FEBS Lett.581，2150-2155(2007)；Wilson等.自然(Nature)289：366-373(1981)和Yin等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)102：9288-9293(2005)；“病毒学领域”手册，第5版(2007)，由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；Stephen E.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
要理解具体的功能病毒融合蛋白(如本文定义)可以以其功能形式进行表达或以其(无活性)前体蛋白形式表达。在所述特定功能病毒融合蛋白以(无活性)前体蛋白表达的情形中，其可以在病毒的靶宿主细胞(如本文定义)(例如在专门的细胞器官，如反高尔基区室中)中进行翻译后加工和/或修饰(例如通过用一种或多种酶，如蛋白酶裂解)，得到功能性融合蛋白和任选地至少一种其它主要蛋白部分。在所述功能性融合蛋白和任选地所述至少一种其它主要蛋白部分已经形成后，这些可以仍旧彼此附着(如通过共价结合，例如通过一个或多个二硫键，或通过非共价结合，例如通过形成蛋白复合物)，或这些可以彼此分离；然而在两种情形中(保持彼此附着或彼此分离)，仅得到的功能性融合蛋白或得到的功能性融合蛋白和任选地至少一种其它主要蛋白部分二者可以直接参与在病毒体和其靶宿主细胞之间的附着过程(如本文定义)(例如通过结合于在所述靶宿主细胞的膜成分)。然而，优选仅得到的功能性融合蛋白直接参与病毒体和其靶宿主细胞之间的融合过程(例如通过结合于所述靶宿主细胞的膜成分)。这样的通过翻译后修饰形成的功能性融合蛋白的实例包括但不限于HIV-1病毒的gp41蛋白和流感HA蛋白的HA2亚基。然而，所述至少一种其它主要蛋白部分参与(直接或间接)病毒体及其靶宿主细胞之间的融合过程和/或所述至少一种其它主要蛋白部分参与(直接或间接)作为所述病毒体的感染和/或复制过程一部分的其它过程(如例如所述病毒体与其靶宿主细胞的附着)也不被排除在外。
此外，在另一个优选，但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列和多肽针对和/或特异性结合于病毒的包膜蛋白，所述病毒的包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白(如本文进一步定义)。
作为病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者的病毒包膜蛋白是本领域已知的并且例如包括但不限于：流感A病毒的HA蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白和辛德毕斯病毒的E1蛋白。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对前述任一种作为病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者的病毒包膜蛋白。作为病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者的病毒包膜蛋白的其它实例对于技术人员是清楚的；例如，根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以针对在“病毒学领域”手册，第5版(2007)中公开的作为病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者的任一种病毒包膜蛋白，所述手册由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；BernardRoizman，ScD；Stephen E.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
作为病毒附着蛋白和病毒融合蛋白二者的多种包膜蛋白的结构和功能特征和作用机理是本领域已知的并且例如在下列文献中详细描述：“病毒学领域”手册，第5版(2007)，由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；RobertA.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；Stephen E.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
作为附着和融合蛋白的特定功能病毒包膜蛋白，可以以其功能形式表达或可以以(无活性)前体蛋白形式表达。在所述特定功能病毒附着蛋白和融合蛋白以(无活性)前体蛋白表达的情形中，其可以在病毒的靶宿主细胞(如本文定义)(例如在专门的细胞器官，如反高尔基区室中)中进行翻译后加工和/或修饰(例如通过用一种或多种酶，如蛋白酶裂解)，得到功能性病毒附着蛋白和融合蛋白和任选地至少一种其它主要蛋白部分。在所述功能性病毒附着蛋白和融合蛋白和任选地所述至少一种其它主要蛋白部分已经形成后，这些可以仍旧彼此附着(如通过共价结合，例如通过一个或多个二硫键，或通过非共价结合，例如通过形成蛋白复合物)，或这些可以彼此分离；然而在两种情形中(保持彼此附着或彼此分离)，仅得到的功能性病毒附着蛋白和融合蛋白或得到的功能性病毒附着蛋白和融合蛋白和任选地至少一种其它主要蛋白部分两者可以直接参与在病毒体和其靶宿主细胞之间的融合过程(例如通过结合于在所述靶宿主细胞表面上表达的特定病毒受体和/或所述靶宿主细胞的膜成分)。然而，优选仅得到的功能性病毒附着蛋白和融合蛋白直接参与病毒体和其靶宿主细胞之间的融合过程(例如通过结合于在所述靶宿主细胞表面上表达的特定病毒受体和/或所述靶宿主细胞的膜成分)。然而，所述至少一种其它主要蛋白部分参与(直接或间接)病毒体及其靶宿主细胞之间的融合过程(如本文定义)和/或所述至少一种其它主要蛋白部分参与(直接或间接)作为所述病毒体的感染和/或复制过程一部分的其它过程(如例如所述病毒体仅与其靶宿主细胞的附着或所述病毒体仅与其靶宿主细胞融合)也不被排除在外。
本发明不特别限于本发明的氨基酸序列和多肽所针对的所述包膜蛋白的特定构象和/或二级结构和/或三级结构和/或四级结构或由其限定。因此，所述包膜蛋白的特征可以在于任何构象和/或二级结构和/或三级结构和/或四级结构。例如，当病毒的包膜蛋白以激活的构象或以失活构象或以融合前和融合后构象或状态存在时，本发明的氨基酸序列和多肽可以结合于这些构象的任一种，或可以结合于这两种构象(即，以可以相同或不同的亲和性和/或特异性结合)。
此外，例如，本发明的氨基酸序列和多肽可以结合于其中结合(如本文进一步定义)结合配偶体的病毒的包膜蛋白的构象，可以结合于其中其不结合配偶体的病毒包膜蛋白的构象，或可以结合于这两种构象(同样以可以是相同或不同的亲和性和/或特异性结合)。
更具体地，所述包膜蛋白特征可以在于融合前构象状态(如本文进一步定义)和/或中间构象状态(如本文进一步定义)和/或融合后构象状态(如本文进一步定义)。具体地，所述包膜蛋白，其特征在于融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态可以是病毒附着蛋白；备选地和更优选地，所述包膜蛋白，其特征在于融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态可以是病毒融合蛋白(如本文定义)；此外，所述包膜蛋白，其特征在于融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态可以是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白。
在其中所述至少一种融合蛋白特征在于融合前构象状态的情形中，所述融合前构象状态可以是融合蛋白三聚体，如例如(但不限于)发夹三聚体或六螺旋束。当病毒融合蛋白的所述融合前构象状态是融合蛋白三聚体时，包含在所述蛋白三聚体中的三个蛋白亚基优选地是相同的，但是也可以彼此不同。此外，所述融合蛋白三聚体的特定蛋白亚基可以在病毒体及其靶宿主细胞之间的融合过程(如本文定义)之前、过程中和之后保持完整或未裂解，或可以在所述融合过程之前、过程中或之后裂解(例如通过一种或多种酶，如蛋白酶)从而形成来自所述蛋白三聚体的所述亚基的至少两个主要蛋白部分。在如上所述的所述融合蛋白三聚体的所述蛋白亚基被裂解的情形中，所述至少两种主要蛋白部分可以彼此附着(如通过共价结合，例如通过一个或多个二硫键，或非共价结合，例如通过形成蛋白复合物)或可以是来自相同亚基的完全分离的蛋白部分；然而在两种情形中，即彼此附着或彼此完全分离，所述主要蛋白部分(来自所述融合蛋白三聚体的相同亚基)的仅一种，或至少两种，或两种以上或全部，可以直接参与在病毒体及其靶宿主细胞之间的融合过程(如本文定义)。然而，优选地，仅一种所述主要蛋白部分(来自所述融合蛋白三聚体的相同亚基)直接参与在病毒体及其靶宿主细胞之间的融合过程(如本文定义)。直接参与在病毒体及其靶宿主细胞之间的融合过程的所述主要蛋白部分的实例包括但不限于RSV病毒的F2蛋白和流感病毒HA蛋白的HA2亚基。
特征在于融合前构象状态，是融合蛋白三聚体如例如发夹三聚体或六螺旋束的病毒融合蛋白的实例包括但不限于流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，呼吸道合胞病毒F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1 gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1 gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白和SARS冠状病毒E2蛋白。
备选地，所述病毒融合蛋白特征可以在于融合前构象状态(如本文定义)，其中所述融合前构象状态是蛋白二聚体(包含两个蛋白亚基)，如例如融合蛋白同型二聚体(包含两个相同蛋白亚基)或蛋白异源二聚体(包含两个不同蛋白亚基)。要理解当病毒融合蛋白的所述融合前构象状态是蛋白二聚体，如融合蛋白同型二聚体或蛋白异源二聚体时，在所述蛋白二聚体(包含两个蛋白亚基)中，所述蛋白二聚体的两个蛋白亚基的两个或仅一个可以直接参与病毒体及其靶宿主细胞之间的融合过程(如本文定义)。此外，要理解所述蛋白二聚体的两个蛋白亚基可以彼此附着(如例如，通过共价结合或非共价结合)或可以被裂解(例如，通过一种或多种酶，如蛋白酶)从而在病毒体和其靶宿主细胞之间的融合过程之前、过程中或之后形成两个单独的蛋白单体。
最后，所述病毒融合蛋白特征可以在于融合前构象状态(如本文定义)，其中所述融合前构象状态是融合蛋白单体。
特征在于融合前构象状态，是蛋白二聚体，如融合蛋白同型二聚体或蛋白异源二聚体，或蛋白单体的病毒融合蛋白的实例包括但不限于蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
在其中所述至少一种融合蛋白特征在于融合后构象状态的情形中，所述融合后构象状态可以是融合蛋白三聚体，如例如(但不限于)发夹三聚体或六螺旋束。更具体地，病毒融合蛋白的所述融合后构象状态可以是融合蛋白三聚体，其包含α-螺旋卷曲螺旋和/或β-结构和/或α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
特征在于融合后构象状态(是包含α-螺旋卷曲螺旋的发夹三聚体)的病毒融合蛋白的实例包括但不限于流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5 F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，人呼吸道合胞病毒F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1 gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1 gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白和SARS冠状病毒E2蛋白。
特征在于融合后构象状态(其是包含β-结构的发夹三聚体)的病毒融合蛋白的实例包括但不限于蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
特征在于融合后构象状态(其是包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构的发夹三聚体)的病毒融合蛋白的实例包括但不限于疱疹性口炎病毒G蛋白，狂犬病G蛋白和单纯疱疹病毒gB蛋白。
本发明由此通常提供可以针对和/或可以特异性结合于所述包膜蛋白的任何构象和/或二级结构和/或三级结构和/或四级结构(当应用时)的氨基酸序列和多肽。
在第一个具体方面，本发明提供针对和/或特异性结合于作为病毒附着蛋白(如本文定义)的包膜蛋白的融合前构象状态(如本文定义)的氨基酸序列和多肽，如例如(但不限于)针对和/或特异性结合于病毒附着蛋白的融合前构象状态的氨基酸序列和多肽，其中所述融合前构象状态特征在于发夹三聚体或六螺旋束；此外，本发明提供针对和/或特异性结合于作为病毒附着蛋白的包膜蛋白的中间构象状态(如本文定义)的氨基酸序列和多肽；最终，本发明提供针对和/或特异性结合于作为病毒附着蛋白的包膜蛋白的融合后构象状态(如本文定义)的氨基酸序列和多肽，如例如(但不限于)针对和/或特异性结合于病毒附着蛋白的融合后构象状态的氨基酸序列和多肽，其中所述融合后构象状态特征在于发夹三聚体，所述三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋或包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
在本发明的该方面中，还包括所述氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒附着蛋白的融合前构象状态和中间构象状态；此外，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒附着蛋白的融合前构象状态和融合后构象状态；此外，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒附着蛋白的中间构象状态和融合后构象状态。
此外，在本发明的该具体方面包括氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒附着蛋白的融合前构象状态和中间构象状态和融合后构象状态。
在第二个具体和优选的方面，本发明提供针对和/或特异性结合于作为病毒融合蛋白(如本文定义)的包膜蛋白的融合前构象状态(如本文定义)的氨基酸序列和多肽，如例如(但不限于)针对和/或特异性结合于病毒融合蛋白的融合前构象状态的氨基酸序列和多肽，其中所述融合前构象状态特征在于发夹三聚体或六螺旋束；此外，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于作为病毒融合蛋白的包膜蛋白的中间构象状态(如本文定义)；最终，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于作为病毒融合蛋白的包膜蛋白的融合后构象状态(如本文定义)，如例如(但不限于)这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于病毒融合蛋白的融合后构象状态，其中所述融合后构象状态特征在于这样的发夹三聚体，其包含α-螺旋卷曲螺旋或包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
在本发明的该方面，还包括所述氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒融合蛋白的融合前构象状态和中间构象状态；此外，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒融合蛋白的融合前构象状态和融合后构象状态；此外，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒融合蛋白的中间构象状态和融合后构象状态。
此外，在本发明的该具体方面中包括所述氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述病毒融合蛋白的融合前构象状态和中间构象状态和融合后构象状态。
在第三个具体方面中，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于作为病毒附着蛋白和病毒融合蛋白(如本文定义)的包膜蛋白的融合前构象状态(如本文定义)，如例如(但不限于)这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于包膜蛋白的融合前构象状态，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白，其中所述融合前构象状态特征在于发夹三聚体或六螺旋束；此外，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于包膜蛋白的中间构象状态(如本文定义)，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白；最终，本发明提供这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于包膜蛋白的融合后构象状态(如本文定义)，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白，如例如(但不限于)这样的氨基酸序列和多肽，其针对和/或特异性结合于包膜蛋白的融合后构象状态，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白，其中所述融合后构象状态特征在于发夹三聚体，其包含α-螺旋卷曲螺旋或包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
在本发明的该方面中，还包括氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述包膜蛋白的融合前构象状态和中间构象状态，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者；此外，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述包膜蛋白的融合前构象状态和融合后构象状态，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者；此外，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述包膜蛋白的中间构象状态和融合后构象状态，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者。
此外，在本发明的该具体方面中，包括所述氨基酸序列和多肽可以针对和/或可以特异性结合于所述包膜蛋白的融合前构象状态和中间构象状态和融合后构象状态，所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白两者。
如本文进一步所述，本发明的多肽可以是二价和/或多价的(如本文定义)，并且包含针对病毒的包膜蛋白的两种以上的本发明的氨基酸序列。一般地，与本发明的单一氨基酸序列比较，所述多肽以增加的抗体亲抗原性结合于病毒的包膜蛋白。还观察到所述多肽显示(协同性地)关于病毒的不同基因型、亚型、逃避突变型(escape mutant)和/或毒株的增加的结合、竞争和/或体外和/或体内中和。
所述多肽可以例如包含针对病毒的包膜蛋白的相同的抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)(其可以是或可以不是相互作用位点)的本发明的两种氨基酸序列；或所述多肽可以是二互补位和/或多互补位的(如本文定义)并且包含本发明的至少一种“第一”氨基酸序列，所述“第一”氨基酸序列针对病毒的包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)(其可以是或不是相互作用位点)；和至少一种本发明的第二氨基酸序列，其针对所述病毒的包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)，其中所述第二抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象与第一抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象不同(并且也可以是或可以不是相互作用位点)。优选地，在本发明的这样的“二互补位和/或多互补位”多肽中，至少一种本发明的氨基酸序列针对相互作用位点(如本文定义)，尽管本发明在其最广泛的意义上不限于此。
因此，也在本发明的范围内的是，如果适合，本发明的多肽可以结合于病毒包膜蛋白的两种以上抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象。在这样的情形中，本发明的氨基酸序列和/或多肽所结合的所述病毒的包膜蛋白的抗原决定簇，表位，部分，结构域或亚基可以基本是相同的(例如，如果病毒的包膜蛋白包含重复的结构基序或以多聚体形式存在)或可以是不同(并且在后一种情形中，认为本发明的氨基酸序列和多肽是“二互补位和/或多互补位的”并且可以以相同或不同的亲和性和/或特异性结合于所述病毒的包膜蛋白的所述不同的抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基。因此，本发明的二互补位或多互补位多肽针对和/或特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少两个表位，并且例如(但不限于)针对和/或可以特异性结合于相同的病毒包膜蛋白的三种以上的表位的多肽。
例如，并且一般地，本发明的二价多肽可以包含可以适当连接的针对病毒包膜蛋白的抗原决定簇，表位，部分或结构域的两种本发明的氨基酸序列，所述连接例如通过如本文进一步所述的适合的接头进行。优选地，所述本发明的二价多肽是这样的，即当其结合于病毒包膜蛋白时，其能够同时结合于两种抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过能够结合于所述抗原决定簇，表位，部分或结构域的两种本发明的氨基酸序列)。所述本发明的二价多肽的实例通过本文的进一步描述将变得清楚。此外，本发明的三价多肽可以包含针对病毒包膜蛋白的抗原决定簇，表位，部分或结构域的三种本发明的氨基酸序列，并且一般地，本发明的多价多肽可以包含针对病毒包膜蛋白的抗原决定簇，表位，部分或结构域的至少两种本发明的氨基酸序列。一般地，所述本发明的二价、三价和多价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各种优选的方面也应用于本发明的这些二价、三价和多价多肽(例如，本发明的这些二价、三价和多价多肽优选地包含单可变结构域和更优选地纳米抗体)。
在本发明的一个方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽能够结合于基本相同的病毒的包膜蛋白的两种以上抗原决定簇，表位，部分，结构域。在该背景中，本发明的氨基酸序列和多肽也称为“多价(单特异性)”(如例如，“二价(单特异性)”或“三价(单特异性)等”)氨基酸序列和多肽。本发明的多价氨基酸序列和多肽可以针对所述病毒的包膜蛋白的任何抗原决定簇，表位，部分，和/或结构域。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的，并且针对在RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白上的抗原性位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。在优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域并且针对RSV F蛋白的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。
一般地，所述本发明的二价多肽可以包含这样的两种本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)和更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)。一般地，本发明的所述二价多肽可以进一步如本文所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于这些本发明的二价多肽(例如，这些本发明的二价多肽可以包含适合的接头；优选是这样的，即它们可以同时结合于Synagis结合位点；并且优选地包含单可变结构域和更优选地纳米抗体)。
在另一个优选，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中(如本文进一步定义)和/或能够通过与Synagis相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽是二价的并且针对在RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。在优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于在RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI和更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于这些本发明的二价多肽(例如，这些本发明的二价多肽可以包含适合的接头；优选地是这样的，即它们可以同时结合101F结合位点；并且优选地包含单可变结构域和更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；至少能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；至少能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或能够调节并且具体地通过与101F相同的作用机制抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的这样两种氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于唾液酸结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于VN04-2结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的并且在结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或能够通过与VN04-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAbC179结合位点和/或能够与竞争MAb C179与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于MAbC179结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或能够通过与MAb C179相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的并且针对狂犬病的G包膜蛋白的mAb 8-2结合位点(并且优选地针对位于抗原位点IIa中的表位)和/或能够与mAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的两种氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的mAb 8-2结合位点(优选地结合于位于抗原位点IIa中的表位)和/或能够与mAb8-2竞争与G包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于mAb8-2结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二价的并且在与G包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒；能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或能够通过与MAb 8-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在优选的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽能够结合于病毒的包膜蛋白的两种以上不同的抗原决定簇，表位，部分，结构域。在该情形中，本发明的氨基酸序列和多肽也称为“多互补位”(如例如“二互补位”或“三互补位”，等)的氨基酸序列和多肽。所述多互补位的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对病毒的包膜蛋白的任何抗原决定簇，表位，部分，和/或结构域。
例如，并且一般地，本发明的二互补位多肽可以包含至少一种针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的本发明的氨基酸序列和至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于所述第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述氨基酸序列可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。优选地，所述本发明的二互补位多肽进一步是这样的，即当其结合于病毒包膜蛋白时，其能够同时结合于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过至少一种能够结合于所述第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的本发明的氨基酸序列)和结合于所述第二抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过至少一种能够结合于所述第二抗原决定簇，表位，部分或结构域的本发明的氨基酸序列)。所述本发明的二互补位多肽的实例由本文进一步描述是清楚的。此外，本发明的三互补位多肽可以包含至少一种其它的本发明的氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(不同于第一和第二抗原决定簇，表位，部分或结构域)，并且一般地，本发明的多互补位多肽可以包含至少两种这样的本发明的氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的至少两种不同的抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位，三互补位和多互补位多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于这些本发明的二互补位，三互补位和多互补位多肽(例如，这些本发明的二互补位，三互补位和多互补位多肽优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的并且针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合，并且针对RSV F蛋白的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。在优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域，并且针对RSV F蛋白的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。
一般地，这样的本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合，(和具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含至少一种其它的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于Synagis结合位点和RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或能够通过与Synagis相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽是二互补位的(或多互补位)并且针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合，并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。在一个优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，并且包含至少一种其它本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与101F相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位的，至少针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点并且针对RSV F蛋白上的101F结合位点。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。在优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。在其它优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域并且针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。在其它优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。在其它优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。在其它优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域并且针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域，并且包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，本发明的这些二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和101F结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与Synagis和101F相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
此外，上述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，本发明的这些二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于Synagis结合位点和101F结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位的，其中两个互补位针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白上的抗原位点II(也称为位点A)(一个互补位或两个互补位)。在优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域(一个互补位或两个互补位)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位的，其中两个互补位针对RSV F蛋白上的101F结合位点。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白上的抗原位点IV-VI(一个互补位或两个互补位)。在优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域(一个互补位或两个互补位)。
此外，上述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于两个结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。
一般地，这样的本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且包含至少一种本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位的(或多互补位)并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且针对在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且包含至少一种其它的本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与VN04-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且针对在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明氨基酸序列，其能够结合于在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且包含至少一种本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb C179相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，并且针对在G包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，并且包含至少一种其它的本发明的氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于在G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点以及在G包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在与G包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb 8-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
此外，本发明的多肽也可以针对和/或可以特异性结合于病毒的至少一种特定的包膜蛋白和其它靶标的至少一种其它表位，所述其它靶标的至少一种其它表位不同于所述至少一种特定的包膜蛋白。例如(但不限于)，本发明的多肽可以针对和/或可以特异性结合于病毒的至少一种特定的包膜蛋白和病毒的至少一种其它表位，例如病毒蛋白的至少一种其它表位，如其它特定的病毒包膜蛋白的至少一种其它表位。因此，根据本发明所述的多肽可以针对和/或可以特异性结合于至少两种不同包膜蛋白的至少两个(或甚至更多个)表位。此外，病毒的所述至少一种其它表位可以或可以不参与一个或多个病毒介导的生物学途径，在所述生物学途径中包括病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体；更具体地，病毒的所述至少一种其它表位可以或可以不涉及病毒在靶宿主细胞中的进入，如病毒体附着于靶宿主细胞和/或病毒融合于靶宿主细胞或病毒的所述至少一种其它表位可以或可以不涉及病毒在靶宿主细胞中的复制，如病毒转录和/或病毒翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体在靶宿主细胞膜上出芽。
一般地，根据本发明所述的二价，和多价(如本文定义)，二特异性和多特异性(如本文定义)，以及二互补位和多互补位(如本文定义)多肽可以通过特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少一种表位和靶标的至少一种其它表位(其可以不同于所述至少一种表位或可以同于所述至少一种表位)用于病毒性疾病的预防和/或治疗，其中所述靶标可以不同于或可以同于所述包膜蛋白。
优选地，根据本发明所述的二互补位多肽和多互补位多肽(如本文定义)可以通过特异性结合于病毒的相同包膜蛋白的至少两个(或甚至更多个)表位(其可以相同或不同)用于病毒性疾病的预防和/或治疗。
备选地，本发明的多肽可以针对和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少一个表位和其它靶标的至少一个其它表位，所述其它表位不同于所述特定的包膜蛋白并且例如是病毒的其它表位，如病毒蛋白的其它表位或其它特定的病毒包膜蛋白的其它表位。
在另一个优选的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽能够结合于病毒的包膜蛋白的三种(不同的)抗原决定簇，表位，部分，结构域。在该情形中，本发明的氨基酸序列和多肽也称为“三价”(如例如，“三价三互补位”或“三价二互补位”，“三价单互补位”，等)氨基酸序列和多肽。所述本发明的三价氨基酸序列和多肽可以针对病毒的包膜蛋白的任何抗原决定簇，表位，部分，和/或结构域。
例如，并且一般地，本发明的三价多肽可以包含三种本发明的氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的相同抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述氨基酸序列可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的三价多肽可以包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，和包含至少一种本发明的这样的氨基酸序列，其针对不同于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述氨基酸序列可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价二互补位的”。本发明的三价多肽可以包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于第一和第二抗原决定簇，表位，部分或结构域的病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述氨基酸序列可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价三互补位的”。本发明的三价多肽可以包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于第一病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价二特异性的”。本发明的三价多肽还可以包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的相同病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于第一病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述氨基酸序列可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价三特异性的”。本发明的三价多肽还可以包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于所述第一病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对不同于所述第一和第二病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述氨基酸序列可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价三特异性的”。
优选地，本发明的这样的三价多肽进一步是这样的，即，当其结合于病毒包膜蛋白时，其能够同时结合于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过能够结合于所述第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的至少一种本发明的氨基酸序列)，结合于所述第二抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过能够结合于所述第二抗原决定簇，表位，部分或结构域的至少一种本发明的氨基酸序列)并且结合于所述第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过能够结合于所述第三抗原决定簇，表位，部分或结构域的至少一种本发明的氨基酸序列)。本发明的这样的三价多肽的实例通过本文的进一步描述将变得清楚。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合，以及包含本发明的这样两种氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含能够结合于RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域的本发明的两种其它氨基酸序列。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点以及RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含本发明的这样两种氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合，以及包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含一种能够结合于RSV F蛋白上的它抗原决定簇，表位，部分或结构域的一种其它本发明的氨基酸序列。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含本发明的三种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的三种氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于Synagis结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与Synagis相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合，以及包含本发明的这样两种氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，以及包含两种这样的其它本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含这样的本发明的两种氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合，以及包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，以及包含一种这样的其它本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的101F结合位点以及RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含这样的三种本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的本发明的三种氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于101F结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与101F相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含这样的本发明的两种氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白结合，以及包含这样的一种本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白结合。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含一种这样的本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于Synagis结合位点和RSV F蛋白的101F结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白，以及包含本发明的这样的两种氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。针对RSVF蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSVF蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含两种这样的本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白的Synagis结合位点和101F结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白，包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白，以及包含一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，一种其它的本发明的氨基酸序列，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，以及一种其它的本发明的氨基酸序列，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白的Synagis结合位点，101F结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与Synagis和/或101F相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含：一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及这样的本发明的两种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：这样的至少一种本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及两种这样的本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含：这样的本发明的两种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的其它的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含本发明的这样的三种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的本发明的三种氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于唾液酸结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含：一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及这样的本发明的两种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：这样的至少一种本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及本发明的这样的两种其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的VN04-2结合位点以及两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含：本发明的这样的两种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的VN04-2结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含这样的本发明的三种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的这样的三价多肽包含三种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于VN04-2结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与VN04-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含：一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAbC179结合位点和/或能够与MAb C179竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及本发明的这样的两种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：至少一种这样的本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及两种这样的本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点以及两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含：本发明的这样两种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，以及一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：这样的本发明的两种氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，以及一种这样的本发明的其它本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的并且包含这样的三种本发明的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，本发明的所述三价多肽包含三种本发明的氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于MAb C179结合位点；并且优选地包含单可变结构域并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb C179相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含：一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，以及本发明的这样的两种氨基酸序列，其针对G包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：至少一种本发明的氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，以及两种这样的本发明的其它氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含：这样的本发明的两种氨基酸序列，其针对G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，以及一种这样的本发明的氨基酸序列，其针对G包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含：本发明的这样的两种氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争结合于G包膜蛋白，以及一种这样的其它本发明的氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且包含这样的本发明的三种氨基酸序列，其针对G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的本发明的三种氨基酸序列，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争结合于G包膜蛋白。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于MAb 8-2结合位点；并且优选地包含单可变结构域，并且更优选地包含纳米抗体)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在与狂犬病病毒的G包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb 8-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
本发明优选的二价和三价构建体在表C-6、表A-2、表A-4、表A-5和表A-6中给出。
优选地，与本发明的单氨基酸序列比较，如前文所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性，和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽以增加的抗体亲抗原性结合于病毒的包膜蛋白。
更具体地，根据本发明所述的二互补位、三互补位和多互补位多肽和/或二特异性、三特异性和多特异性多肽可以用于分别靶向在相同和不同包膜蛋白上的多个病毒受体结合位点，与本发明的单一氨基酸序列比较，这可以导致增加的病毒中和功效(如本文定义)。此外，根据本发明的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以用于结合某些病毒的不同基因型，不同亚型和/或不同毒株。此外，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以用于防止病毒逃逸和/或病毒逃脱。
在本发明具体的方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价、二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位，三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H1N1。在其它的方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H3N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H2N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H2N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。但是在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H2N2以及流感亚型H3N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1，流感亚型H2N2，以及流感亚型H3N2。在另一个方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合于狂犬病病毒基因型1以及基因型5。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对RSV并且可以结合RSV的不同逃避突变型(如例如，在Lopez等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：6922-6928中所述)和/或特异于抗原位点II、特异于抗原位点IV-VI或特异于两种抗原位点的组合的一种或多种逃避突变型。
最终，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以用于预防和/或抑制病毒感染(如本文定义)和/或病毒体与其靶宿主细胞的病毒融合或可以通过诱导所述病毒的病毒体聚集用于中和病毒。
一般地，根据本发明所述的氨基酸序列可以用于调节，和具体地抑制和/或防止病毒的包膜蛋白和结合配偶体(例如，病毒受体，靶宿主细胞，特定的细胞膜成分或其它结合配偶体，如可应用)之间的相互作用，并因此调节，和具体地抑制，防止或调节病毒介导的生物学途径，在所述生物学途径中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体。因此，例如，当所述包膜蛋白是结合对的一部分时，所述氨基酸序列和多肽可以是这样的，即它们与结合配偶体(例如，病毒受体或其它结合配偶体，如可应用)竞争与所述包膜蛋白的结合，和/或是这样的，即它们(完全或部分)中和结合配偶体与所述包膜蛋白的结合。
在该背景中，优选的是，根据本发明的氨基酸序列可以与病毒的包膜蛋白的病毒受体和/或与靶宿主细胞竞争与所述包膜蛋白的结合。
当根据本发明的氨基酸序列与靶宿主细胞竞争结合于所述包膜蛋白时，根据本发明的所述氨基酸序列可以例如与所述靶宿主细胞的特定的细胞膜成分如病毒受体、磷脂、蛋白和/或糖蛋白竞争与所述包膜蛋白的结合。
包膜蛋白的病毒受体是本领域已知的并且包括但不限于下列实例：唾液酸，可溶的(2，3)唾液酸，(2，6)唾液酸，CD4，CCR5，CXCR4，半乳糖基神经酰胺(galactosylceramide)，ACE2，HveA，CD155，ICAM-1，CAR，αv整联蛋白，硫酸肝素蛋白聚糖，JAM-1，烟碱乙酰胆碱受体(AchR)，神经细胞黏着分子(NCAM)，和膜联蛋白II。
本发明的氨基酸序列和多肽可以与任何前述病毒受体竞争与包膜蛋白的结合。病毒受体的其它实例对于技术人员是清楚的；例如根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与这样的任何病毒受体竞争与包膜蛋白的结合，所述病毒受体在“病毒学领域”手册，第5版(2007)中公开，其由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；StephenE.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
根据本发明所述的氨基酸序列可以通常用于调节，并且具体地抑制和/或防止病毒的包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用和/或病毒的包膜蛋白和靶宿主细胞之间的相互作用。
当根据本发明所述的氨基酸序列调节，和具体地抑制和/或防止病毒的包膜蛋白和靶宿主细胞之间的相互作用时，根据本发明所述的氨基酸序列可以例如调节，并且具体地抑制和/或防止在病毒的包膜蛋白和所述靶宿主细胞的特定细胞膜成分之间的相互作用，所述细胞膜成分如结合于所述包膜蛋白的病毒受体、磷脂、蛋白和/或糖蛋白。
在一个优选的方面中，根据本发明所述的氨基酸序列可以通常用于调节，和具体地抑制和/或防止在病毒的包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用。根据本发明所述的氨基酸序列可以通常用于调节，和具体地抑制和/或防止在病毒的包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用，其中在包膜蛋白和病毒受体之间的所述相互作用选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA与唾液酸；(2，3)唾液酸；和/或(2，6)唾液酸的相互作用；HIV-1病毒的gp120与CD4；CCR5；CXCR4；和/或半乳糖基神经酰胺的相互作用；SARS冠状病毒的S1与ACE2的相互作用；gD；gB；gC的相互作用；单纯疱疹1病毒的异源二聚体gH/gL和HveA的相互作用；脊髓灰质炎病毒1的VP1；VP2；VP3与CD155的相互作用；鼻病毒3的VP1；VP2；和/或VP3与ICAM-1的相互作用；腺病毒2纤维与CAR的相互作用；腺病毒2五邻体基质与αv整联蛋白；唾液酸；(2，3)唾液酸；(2，6)唾液酸；和/或硫酸肝素蛋白聚糖的相互作用；呼肠孤病毒1的σ1与JAM-1；唾液酸；(2，3)唾液酸；和/或(2，6)唾液酸的相互作用；和狂犬病病毒的G-蛋白与烟碱乙酰胆碱受体(AchR)；和/或神经细胞黏着分子(NCAM)的相互作用(Thoulouze等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：7181-7190)。
本发明的氨基酸序列和多肽可以通常用于调节，和具体地抑制和/或防止在病毒的包膜蛋白和病毒受体之间的任何前述相互作用和/或在病毒的包膜蛋白和所述靶宿主细胞的特定细胞膜成分，如病毒受体、磷脂、蛋白和/或糖蛋白之间的任何前述相互作用。
在病毒的包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用的其它实例对于技术人员是清楚的；例如根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以通常用于调节，和具体地抑制和/或防止在这样的病毒的包膜蛋白和病毒受体之间的任何相互作用，所述相互作用在“病毒学领域”手册，第5版(2007)中公开，由David M.Knipe，PhD；Peter M.Howley，MD；Diane E.Griffin，MD，PhD；Robert A.Lamb，PhD，ScD；Malcolm A.Martin，MD；Bernard Roizman，ScD；StephenE.Straus，MD编辑(ISBN-10：0781760607；ISBN-13：9780781760607)。
在该情形中，如上所述的根据本发明的二互补位、三互补位和多互补位多肽可以与病毒的至少一种或至少两种(或甚至更多种)包膜蛋白的至少一种、至少两种或至少三种(或甚至更多种)病毒受体竞争与所述包膜蛋白的结合。
此外，根据本发明所述的氨基酸序列和多肽还可以与病毒的包膜蛋白的至少一种结合配偶体(其不同于其天然病毒受体)竞争与所述包膜蛋白的结合。关于包膜蛋白的至少一种结合配偶体，其通常意味着针对和/或特异性结合于所述包膜蛋白的任何分子。例如，包膜蛋白的结合配偶体可以是免疫球蛋白，如抗体，并且可以更具体地是单克隆抗体或其可以特异性结合于所述包膜蛋白的任何片段。在该情形中，根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与针对和/或特异性结合于包膜蛋白的单克隆抗体竞争与所述包膜蛋白的结合。例如，根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与针对和/或特异性结合于RSV病毒的F-蛋白的A-抗原位点和/或氨基酸255-280的单克隆抗体Synagis(Zhao和Sullender病毒学杂志(J.Virol.)79：396(2005))竞争与RSV病毒的所述F-蛋白的结合；和/或根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与针对和/或特异性结合于F1a位点和/或包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸389的区域的单克隆抗体9C5(Krivitskaia等.，Vopr.Virusol.44：279(1999))竞争与RSV病毒的所述F-蛋白的结合；和/或根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与针对和/或特异性结合于RSV病毒的F-蛋白的氨基酸422-438的Fab片段101F(Wu等.，遗传病毒学杂志(J.Gen Virol.)88：2719(2007))竞争与RSV病毒的F-蛋白的结合；和/或根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与针对和/或特异性结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点的单克隆抗体VN04-2(Hanson等.呼吸道研究(RespiratoryResearch)7：126(2006))竞争与所述血凝素H5包膜蛋白的结合；和/或根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与针对和/或特异性结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的干区的单克隆抗体C179(Okkuno等.病毒学杂志(J.Virol.)67：255202558(1993))竞争与所述所述血凝素H5包膜蛋白的结合；和/或根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以与针对和/或特异性结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白的单克隆抗体MAb 8-2或mAb 8-2小鼠IgG2α(等.疫苗(Vaccine)11(12)：1259-1266(1993))竞争与所述G包膜蛋白的结合。
在该情形中，如上所述的根据本发明的二互补位，三互补位和多互补位多肽可以与病毒的至少一种，至少两种，至少三种(或甚至更多种)包膜蛋白的至少一种，至少两种，至少三种(或甚至更多种)结合配偶体竞争与所述包膜蛋白的结合，其中所述结合配偶体可以是针对和/或特异性结合于所述包膜蛋白的任何分子，所述结合配偶体如例如免疫球蛋白，如抗体和更具体地单克隆抗体或其可以特异性结合于所述包膜蛋白的任何片段。例如，根据本发明所述的二互补位、三互补位或多互补位多肽可以与单克隆抗体Synagis(如上所述)和/或单克隆抗体9C5(如上所述)和/或Fab片段101F Fab或其任何适合的组合竞争与RSV病毒的F-蛋白的结合。例如，根据本发明所述的二互补位多肽，三互补位多肽或多互补位多肽可以与单克隆抗体Synagis(如上所述)和/或单克隆抗体9C5(如上所述)和/或Fab片段101F Fab或其任何适合的组合竞争与RSV病毒的F-蛋白的结合。根据本发明所述的二互补位、三互补位或多互补位多肽可以与VN04-2和/或MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。根据本发明所述的二互补位多肽，三互补位多肽或多互补位多肽可以与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
本发明在其最广泛的意义上也不特别限于本发明的氨基酸序列和多肽所针对的病毒包膜蛋白的特定抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)或由其所限定。例如，所述氨基酸序列和多肽可以或可以不针对“相互作用位点”(如本文定义)。
然而，通常设想并且优选本发明的氨基酸序列和多肽优选地针对相互作用位点(如本文定义)，并且具体地针对病毒的包膜蛋白的至少一种表位，以致其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的至少一种病毒-介导的生物学途径被抑制、防止和/或调节。
具体地，设想并且优选本发明的氨基酸序列、多肽和组合物针对病毒的包膜蛋白的至少一种表位，从而使病毒进入靶宿主细胞中(如例如病毒体附着于靶宿主细胞和/或病毒与靶宿主细胞融合)和/或病毒在靶宿主细胞中复制(如例如病毒转录和/或病毒翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体形成和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜上出芽)被抑制，防止和/或调节。
所述氨基酸序列和多肽可以针对病毒的包膜蛋白的至少一种表位，其是表面暴露的或位于由病毒的包膜蛋白形成的腔或裂缝中。本发明的氨基酸序列和多肽可以针对相互作用位点(如本文定义)，并且具体地针对位于由融合蛋白的三聚体(如作为发夹三聚体或六螺旋束的融合蛋白三聚体)或融合蛋白的二聚体形成的腔或裂缝中的表位，其中所述融合蛋白可以以它们的融合前构象状态，中间构象状态或融合后构象状态存在。
此外，本发明的氨基酸序列和多肽也可以针对位于融合蛋白的干区和/或颈区和/或球状头区中的表位。优选地，本发明的氨基酸序列和多肽针对位于融合蛋白的干区中的表位，如例如针对位于包含流感HA的HA1亚基的氨基酸318-322的一个或多个的区域中的表位和/或位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸47-58的一个或多个的区域中的表位；针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸的1-38的一个或多个的N-端区域中的表位；针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸38-112的一个或多个的区域中的表位；针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸125-175的一个或多个的区域中的表位；或针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸176-185的一个或多个的区域中的表位。备选地，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对位于融合蛋白的球状头中的表位(其中所述球状头可以例如包含β-桶型结构或免疫球蛋白型β-夹层结构域和β-片层结构域)。
此外，具体地，本发明的氨基酸序列和多肽可以优选地针对相互作用位点，其选自由下列各项组成的组：RSV病毒的A-抗原位点和/或F-蛋白的氨基酸255-280，F1a位点和/或包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸389，RSV病毒的F-蛋白的氨基酸422-438的区域，流感病毒的H5HA包膜蛋白的唾液酸结合位点，烟酸乙酰胆碱受体(AchR)和/或狂犬病病毒的G-蛋白的神经细胞黏着分子(NCAM)结合位点(Thoulouze等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：7181-7190)。
在本发明的一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。具体地，它们可以针对RSV F蛋白的抗原位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。
在本发明的其它方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合。具体地，它们可以针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。
在本发明的又一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
在本发明的又一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb 179结合位点和/或能够与MAb 179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
在本发明的又一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对狂犬病病毒G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
本发明的氨基酸序列和多肽还可以针对位于融合蛋白的C-端区域和/或在融合蛋白的N-端结构域和/或在包含融合蛋白的融合肽的区域中和/或在融合蛋白的跨膜结构域中和/或在融合蛋白的α-螺旋卷曲螺旋中和/或在融合蛋白的β-结构中和/或在融合蛋白的结构域I中和/或在融合蛋白的结构域II中，如例如在融合蛋白的结构域II的融合肽中，和/或在融合蛋白的结构域III中，如例如在融合蛋白的结构域III的C-端的干区中，或在融合蛋白的结构域III的C-端的跨膜锚定物中的任何表位。
此外，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对病毒的包膜蛋白的任何其它表位(例如接近前述表位之一的任何其它表位)。
因此，在一个优选，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽通常针对任何表位或具体地针对病毒的包膜蛋白的上述表位之一，并且如本文进一步定义。例如，所述表位可以存在于病毒的包膜蛋白上，所述包膜蛋白选自由下列各项组成的组：RSV病毒的F蛋白，RSV病毒的G蛋白，RSV病毒的SH蛋白，RSV病毒的M蛋白，RSV病毒的M2蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质，呼肠孤病毒1的σ1，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
因此，本发明的氨基酸序列和多肽可以针对在病毒的包膜蛋白上存在的任何表位，其选自由下列各项组成的组：RSV病毒的F蛋白，RSV病毒的G蛋白，RSV病毒的SH蛋白，RSV病毒的M蛋白，RSV病毒的M2蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质，呼肠孤病毒1的σ1，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
还包括在本发明的范围内的是，如果适合，本发明的氨基酸序列可以结合于病毒的所述包膜蛋白的两种以上抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象。在这样的情形中，本发明的氨基酸序列和/或多肽所结合的病毒的所述包膜蛋白的抗原决定簇，表位，部分，结构域或亚基可以是基本相同的(例如，如果病毒的所述包膜蛋白包含重复的结构基序或以多聚体形式存在)或可以是不同的(并且在后一种情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以可以相同或不同的亲和性和/或特异性结合于病毒的所述包膜蛋白的这样的不同的抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基)。此外，例如当病毒的所述包膜蛋白以激活的构象或以失活的构象或融合前和融合后构象或状态存在时，本发明的氨基酸序列和多肽可以结合于这些构象或状态之一，或可以结合于这些构象或状态两者(即，以可以相同或不同的亲和性和/或特异性)。
还预期本发明的氨基酸序列和多肽通常结合于病毒的所述包膜蛋白的所有天然存在或合成的类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段；或至少结合于病毒的所述包膜蛋白的那些类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段，所述类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段包含与本发明的氨基酸序列和多肽结合病毒的所述包膜蛋白(例如，在野生型病毒包膜蛋白中)的抗原决定簇(s)或表位(s)基本相同的一个或多个抗原决定簇或表位。此外，在这样的情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以与本发明的氨基酸序列与病毒的(野生型)所述包膜蛋白结合的亲和性和特异性相同或不同(即，更高或更低)的亲和性和/或特异性结合于所述类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段。在本发明的范围内还包括本发明的氨基酸序列和多肽结合于病毒的所述包膜蛋白的一些类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段，但是不结合于其它。
在本发明的具体方面中，所述氨基酸序列是多价的(如二价或三价)并且与单价氨基酸序列相比，显示对于某些病毒的不同基因型、亚型、病毒、逃避突变型和/或毒株的提高的亲和性和/或提高的交叉反应性。在一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H1N1。在另一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H3N2。在另一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。在另一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H2N2。在又一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。在又一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H2N2以及流感亚型H3N2。在又一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H2N2。在又一个方面中，所述氨基酸序列针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1，流感亚型H2N2以及流感亚型H3N2。在其它方面中，所述氨基酸序列针对狂犬病病毒并且可以结合狂犬病病毒基因型1以及基因型5。在又一个方面中，所述氨基酸序列针对RSV并且可以结合RSV的不同毒株(如例如，Long，A-2和/或B-1)。在又一个方面中，所述氨基酸序列针对RSV并且可以结合RSV的不同逃避突变型(如例如，在Lopez等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：6922-6928中所述)和/或特异于抗原位点II、抗原位点IV-VI或这两个抗原位点的组合的逃避突变型。
当所述病毒的包膜蛋白以单聚体形式和以一个或多个多聚体形式存在时，在本发明范围内的是本发明的氨基酸序列和多肽仅结合于以单体形式存在的所述病毒的包膜蛋白，仅结合于以多聚体形式存在的所述病毒的包膜蛋白，或结合于单聚体形式和多聚体形式二者。此外，在所述情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以与本发明的氨基酸序列与多聚体形式结合的亲和性和特异性相同或不同(即，更高或更低)的亲和性和/或特异性结合于单聚体形式。
例如，当病毒的包膜蛋白以单聚体形式和以三聚体形式存在时，在本发明范围内的是，本发明的氨基酸序列和多肽仅结合于单体形式的所述病毒的包膜蛋白，仅结合于三聚体形式的所述病毒的包膜蛋白，或结合于单聚体和三聚体形式二者。此外，在所述情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以与本发明的氨基酸序列与三聚体形式结合的亲和性和特异性相同或不同(即，更高或更低)的亲和性和/或特异性结合于单聚体形式。
此外，当所述病毒的包膜蛋白可以与其它蛋白或多肽缔合以形成蛋白复合物(例如，具有多个亚基)时，在本发明范围内的是，本发明的氨基酸序列和多肽结合于以其非缔合状态存在的所述病毒的包膜蛋白，结合于以其缔合状态存在的所述病毒的包膜蛋白，或结合于两者。
在所有的这些情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以与本发明的氨基酸序列和多肽结合于以其单聚体状态和非缔合状态存在的所述病毒的包膜蛋白的亲和性和/或特异性相同或不同(即更高或更低)的亲和性和/或特异性结合于所述多聚体或缔合的蛋白复合物。
此外，如对于技术人员是清楚的，与相应的单体氨基酸序列相比，包含两种以上针对所述病毒的包膜蛋白的氨基酸序列的蛋白或多肽可以以更高的抗体亲抗原性结合于所述病毒的包膜蛋白。例如，但不限于，包含两种以上针对所述病毒的包膜蛋白的不同表位的氨基酸序列的蛋白或多肽可以(并且通常)以比每种不同的单体更高的抗体亲抗原性结合，并且包含两种以上针对所述病毒的包膜蛋白的氨基酸序列的蛋白或多肽可以(并且通常)也以更高的抗体亲抗原性结合于所述病毒的包膜蛋白的多聚体(如，例如三聚体)。
一般地，本发明的氨基酸序列和多肽至少结合于所述病毒的包膜蛋白的那些形式(包括单聚体、多聚体和缔合形式)，所述形式从生物学和/或治疗观点是最相关的，这对于技术人员是清楚的。
在本发明范围内的是，使用本发明的氨基酸序列和多肽的部分，片段，类似物，突变体，变体，等位基因和/或衍生物，和/或使用包含一个或多个所述部分，片段，类似物，突变体，变体，等位基因和/或衍生物或基本由其组成的蛋白或多肽，只要这些是适合本文所设计的应用的。所述部分，片段，类似物，突变体，变体，等位基因和/或衍生物通常包含用于结合所述病毒的包膜蛋白的(至少部分)功能性抗原-结合位点；并且更优选地能够特异性结合于所述病毒的包膜蛋白，并且甚至更优选地能够以如本文定义的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际或表观的)，KA-值(实际或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地表示为IC50值，如本文进一步定义)结合于所述病毒的包膜蛋白。所述部分，片段，类似物，突变体，变体，等位基因，衍生物，蛋白和/或多肽的一些非限制性的实例通过本文的进一步描述将变得清楚。本发明的另外的片段或多肽也可以通过适当地组合(即，通过连接或遗传融合)如本文所述的一个或多个(更小的)部分或片段进行提供。
在本发明的一个具体而非限制性方面中，其将在本发明中进一步描述，与它们衍生而来的氨基酸序列相比，所述类似物、突变体、变体、等位基因、衍生物在血清中具有增加的半衰期(如本文进一步所述)。例如，可以将本发明的氨基酸序列连接到(化学或其他方式)一个或多个延长半衰期的基团或部分(诸如PEG)上，以提供具有增加的半衰期的本发明的氨基酸序列的衍生物。
在一个具体而非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列可以是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，或可以是在适当条件(诸如生理条件)下能够形成免疫球蛋白折叠(即，通过折叠)的氨基酸序列。其中特别参考Halaby等，(1999蛋白质工程(Protein Eng.)12，563-71)的综述。优选地，当正确折叠以形成免疫球蛋白折叠时，这样的氨基酸序列能够特异性结合(如本发明所定义)所述病毒的包膜蛋白；并且更优选地能够以如本发明所定义的亲和力(适当地测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)结合所述病毒的包膜蛋白。此外，所述氨基酸序列的部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物优选是这样的，以致它们包括免疫球蛋白折叠或者能够在适当的条件下形成免疫球蛋白折叠。
特别地，但不限于，本发明的氨基酸序列可以是基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列；或所述氨基酸序列的任何适当的片段(那么其通常将包含至少一些形成至少一个CDR的氨基酸残基，如本文进一步所述)。
本发明的氨基酸序列可以特别是免疫球蛋白序列或其适当的片段，并且更特别地是免疫球蛋白可变结构域序列或其适当的片段，诸如轻链可变结构域序列(例如，VL-序列)或其适当的片段；或重链可变结构域序列(例如，VH-序列)或其适当的片段。当本发明的氨基酸序列是重链可变结构域序列时，它可以是来源于常规四链抗体的重链可变结构域序列(诸如，不限于，来源于人抗体的VH序列)，或是来源于所谓的“重链抗体”(如本文所定义)的所谓的VHH-序列(如本文所定义)。
然而，应该注意到，本发明不限制本发明的氨基酸序列的来源(或用于表达其的本发明的核苷酸序列的来源)，也不限制产生或获得(或已经产生或获得)本发明的氨基酸序列或核苷酸序列的方法。因此，本发明的氨基酸序列可以是天然存在的氨基酸序列(来自任何适当的物种)或合成的或半合成的氨基酸序列。在本发明的具体而非限制性方面，所述氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适当的物种)或合成的或半合成的免疫球蛋白序列，包括但不限于“人源化的”(如本文所定义)免疫球蛋白序列(诸如部分或完全人源化的小鼠或兔免疫球蛋白序列，并且特别是部分或完全人源化的VHH序列或纳米抗体)，“骆驼源化的(camelized)”(如本文所定义)免疫球蛋白序列，以及已经通过下列技术获得的免疫球蛋白序列：诸如亲和力成熟(例如，起始于合成的、随机的或天然存在的免疫球蛋白序列)，CDR移植，镶盖术(veneering)，组合来源于不同的免疫球蛋白序列的片段，利用重叠的引物进行的PCR装配，以及熟练的技术人员公知的加工免疫球蛋白序列的类似技术；或前述任一项的任何适当的组合。例如，参考标准手册，以及进一步描述和本文提及的现有技术。
类似地，本发明的核苷酸序列可以是天然存在的核苷酸序列或合成的或半合成的序列，并且例如，可以是通过PCR从适当的天然存在的模板(例如，从细胞分离的DNA或RNA)分离的序列，已经从文库(并且特别是表达文库)分离的核苷酸序列，已经通过向天然存在的核苷酸序列中引入突变(利用任何适当的本身已知的技术，诸如错配PCR)而制备的核苷酸序列，已经使用重叠的引物通过PCR制备的核苷酸序列，或已经利用本身已知的DNA合成技术制备的核苷酸序列。
本发明的氨基酸序列可以特别是结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)，单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)，″dAb″(或适合用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体(如本文所定义，并且包括但不限于VHH序列)；其它单可变结构域，或它们中任一种的任何适当的片段。对于(单)结构域抗体的概括描述，还参考上文引用的现有技术，以及参考EP 0 368 684。对于术语“dAb’s”，例如，参考Ward等(自然(Nature)1989年10月12日；341(6242)：544-6)，参考Holt等，生物技术趋势(Trends Biotechnol.)，2003，21(11)：484-490；以及例如参考WO 06/030220，WO 06/003388与Domantis有限公司(Domantis Ltd.)的其它公布的专利申请。还应该注意到，尽管由于它们不是哺乳动物来源的，在本发明的情形中较不优选，但是单结构域抗体或单可变结构域可以来源于某些鲨鱼(shark)物种(例如，所谓的“IgNAR结构域”，参见例如WO 05/18629)。
特别地，本发明的氨基酸序列可以是纳米抗体(如本文所定义)或其适当的片段。[注意：纳米抗体(Nanobody)，纳米抗体(Nanobodies)和纳米克隆(Nanoclone)为埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的注册商标]。所述针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体在本文也称为“本发明的纳米抗体”。
对于纳米抗体的概括描述，参考下文的进一步描述，以及参考本文所引用的现有技术。在这一方面，然而，应该注意到，本文描述和现有技术主要描述所谓“VH3种类”的纳米抗体(即，与VH3种类的人种系序列如DP-47、DP-51或DP-29具有高度序列同源性的纳米抗体)，所述纳米抗体形成本发明的优选方面。然而，应该注意到，本发明在其最广泛意义上通常涵盖任何类型的针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体，并且例如，还涵盖属于所谓的“VH4种类”的纳米抗体(即，与VH4种类的人种系序列如DP-78具有高度序列同源性的纳米抗体)，例如，如在WO 07/118670中描述。
一般地，纳米抗体(特别是VHH序列和部分人源化的纳米抗体)可以特别地特征在于，在一个或多个构架序列(同样如本文进一步所述)中存在一个或多个“标志残基(hallmark residues)”(如本文所述)。
因此，通常，纳米抗体可以定义为具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中一个或多个标志残基如本文进一步所定义。
特别地，纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中所述构架序列如本文进一步所定义。
更特别地，纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基中的一个或多个选自下表B-2中提及的标志残基；
并且其中：
ii)所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一种氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基(在序列SEQ ID NO’s：1-22中表示为X)。
在这些纳米抗体中，所述CDR序列通常如本文进一步所定义。
因此，本发明还涉及这样的纳米抗体，其可以结合(如本文定义)病毒的包膜蛋白和/或针对病毒的包膜蛋白，涉及其适当的片段，以及涉及包括一种或多种所述纳米抗体和/或适当的片段或基本上由其组成的多肽。
SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)给出已经针对病毒的包膜蛋白获得的多种VHH序列的氨基酸序列。
表A-1：优选的VHH序列或纳米抗体序列(在本文也称为具有特定名称或SEQ IDNO：X的序列，其中X是参考相关氨基酸序列的编号)：
在上面的表A-1中，SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128指针对和/或特异性结合于流感的血凝素H5的本发明的氨基酸序列；SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581指针对和/或特异性结合于hRSV的F蛋白的本发明的氨基酸序列；并且SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717指针对和/或特异性结合于狂犬病病毒的G蛋白的本发明的氨基酸序列。
具体地，本发明在一些具体的方面中提供：
-针对(如本文定义)病毒的包膜蛋白且与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一种氨基酸序列具有至少80％、优选至少85％、如90％或95％或更多的序列同一性的氨基酸序列；这些氨基酸序列可以进一步是这样的，以致它们中和结合配偶体(如病毒受体)与病毒的包膜蛋白的结合；和/或与结合配偶体(如病毒受体)竞争与病毒的包膜蛋白的结合；和/或针对病毒的包膜蛋白上的相互作用位点(如本文定义)(诸如病毒受体结合位点)；
-交叉阻断(如本文定义)SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一种氨基酸序列与病毒的包膜蛋白的结合和/或与SEQID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表1)的至少一种氨基酸序列竞争与病毒的包膜蛋白结合的氨基酸序列。同样地，这些氨基酸序列可以进一步是这样的，以致它们中和结合配偶体(如病毒受体)与病毒的包膜蛋白的结合；和/或与所结合配偶体(如病毒受体)竞争与病毒的包膜蛋白的结合；和/或针对病毒的包膜蛋白上的相互作用位点(如本文定义)(诸如病毒受体结合位点)；
所述氨基酸序列可以如本文进一步所述(且可以例如是纳米抗体)；以及包括一种或多种所述氨基酸序列的本发明的多肽(其可以如本文进一步所述，且可以例如是双特异性和/或二互补位多肽，如本文所述)，和编码所述氨基酸序列和多肽的核酸序列。所述氨基酸序列和多肽不包括任何天然存在的配体。
因此，本发明的一些特别优选的纳米抗体是可以结合(如本文进一步所定义)和/或针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体，且其：
i)与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基。在这一方面，还参考表B-1，其列出了SEQ IDNO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的纳米抗体的构架1序列(SEQ ID NO’s：408-689，2449-2466，2582-2589，2718-2753和3129-3193)，构架2序列(SEQ ID NO’s：972-1253，2485-2502，2598-2605，2790-2825和3259-3323)，构架3序列(SEQ ID NO’s：1536-1817，2521-2538，2614-2621，2862-2897和3389-3453)和构架4序列(SEQ ID NO’s：2100-2381，2557-2573，2630-2637，2934-2969和3519-3583)(关于在所述构架1序列的位置1-4和27-30的氨基酸残基，还参考下文的评述。因此，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略这些残基)；
并且其中：
ii)优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自下表B-2中提及的标志残基。在这些纳米抗体中，所述CDR序列通常如本文进一步所定义。
同样地，所述纳米抗体可以以任何适当的方式获得，并且来源于任何适当的来源，并且例如，可以是天然存在的VHH序列(即，来自于适当的骆驼(Camelid)物种)或合成的或半合成的氨基酸序列，包括但不限于“人源化的”(如本文所定义)纳米抗体，“骆驼源化的”(如本文所定义)免疫球蛋白序列(并且特别是骆驼源化的重链可变结构域序列)，以及已经通过下列技术获得的纳米抗体：诸如亲和性成熟(例如，起始于合成的、随机的或天然存在的免疫球蛋白序列)，CDR移植，镶盖术，组合来源于不同的免疫球蛋白序列的片段，利用重叠的引物进行的PCR装配，以及熟练的技术人员公知的加工免疫球蛋白序列的类似技术；或前述任一项的任何适当的组合，这如本文进一步描述。此外，当纳米抗体包括VHH序列时，所述纳米抗体可以适当地被人源化，如本文进一步所述，以便提供一个或多个本发明的进一步(部分或完全)人源化的纳米抗体。类似地，当纳米抗体包括合成的或半合成的序列(诸如部分人源化的序列)时，所述纳米抗体可以任选地进一步适当地被人源化，同样如本文所述，同样以便提供一个或多个本发明的进一步(部分或完全)人源化的纳米抗体。
特别地，人源化的纳米抗体可以是如前述段落中关于纳米抗体概括定义的氨基酸序列，但是其中存在至少一个这样的氨基酸残基(并且特别地，在至少一个构架残基中)，所述氨基酸残基是人源化的取代和/或对应人源化的取代(如本文所定义)。基于本文公开的内容，对于熟练的技术人员，一些优选的、而非限制性的人源化取代(及其适当的组合)将变得清楚。另外，或者备选地，通过比较天然存在的VHH序列的构架区序列与一个或多个紧密相关的人VH序列的相对应的构架序列，可以确定其它潜在有用的人源化取代，此后，可以将由此确定的一个或多个潜在有用的人源化取代(或其组合)引入到所述VHH序列中(以本身已知的任何方式，如本文进一步所述)，并且可以检测所得到的人源化的VHH序列对靶标的亲和性、稳定性、表达的容易性和水平、和/或其它需要的特性。以这种方式，通过利用有限的试验和误差程度，熟练的技术人员基于本文公开的内容可以确定其它适当的人源化取代(或其适当的组合)。此外，基于前述内容，纳米抗体(的构架区)可以是部分人源化的或完全人源化的。
本发明一些特别优选的人源化的纳米抗体是SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的纳米抗体的人源化变体，其中SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)的氨基酸序列是一些特别优选的实例。
因此，本发明一些其它优选的纳米抗体是这样的纳米抗体，其可以结合(如本文进一步所述)病毒的包膜蛋白，并且其：
i)是SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的氨基酸序列之一的人源化变体；和/或
ii)与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一个氨基酸序列和/或SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；
并且其中：
iii)优选地，在依据Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的一个或多个氨基酸残基选自下表B-2中提及的标志残基。
按照本发明的另一个具体方面，本发明提供许多特别适合结合病毒的包膜蛋白的氨基酸残基的序列(streches)(即，小肽)。这些氨基酸残基的序列可以存在于，和/或可以结合在本发明的氨基酸序列中，特别以它们形成本发明的氨基酸序列的(部分)抗原结合位点这样的方式存在和/或结合。由于这些氨基酸残基序列最初作为针对病毒的包膜蛋白产生的重链抗体或VHH序列的CDR序列产生(或可以基于和/或来源于所述CDR序列，如本文进一步所述)，在本发明中它们还将通常被称为“CDR序列”(即，分别称为CDR1序列，CDR2序列和CDR3序列)。然而，应该注意到，本发明在其最广泛意义上不限于这些氨基酸残基序列可能在本发明的氨基酸序列中具有的特有的结构作用或功能，只要这些氨基酸残基序列允许本发明的氨基酸序列与病毒的包膜蛋白结合。因此，一般地，本发明在其最广泛意义上包括任何这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与病毒的包膜蛋白结合，并且包括一个或多个本文所述的CDR序列，并且特别地两个或更多个所述CDR序列的适当组合，其通过一个或多个其它氨基酸序列彼此适当连接，以致整个氨基酸序列形成能够结合病毒的包膜蛋白的结合结构域和/或结合单位。然而，还应该注意到，在本发明的氨基酸序列中仅存在一个所述CDR序列可以本身已经足以提供能够结合病毒的包膜蛋白的本发明的氨基酸序列；例如，同样参考WO 03/050531中描述的所谓的“派遣片段(Expedite fragments)”。
因此，在另一个具体而非限制性的方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括选自由本文所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列(或它们的任何适当的组合)组成的组的至少一个氨基酸序列。特别地，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个抗原结合位点的氨基酸序列，其中所述抗原结合位点包括选自由本文所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列(或它们的任何适当的组合)组成的组的至少一个氨基酸序列。
一般地，在本发明的这一方面中，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个氨基酸残基序列的任何氨基酸序列，其中所述氨基酸残基序列具有与本文所述的至少一个CDR序列的序列相对应的氨基酸序列。这样的氨基酸序列可以或可以不包括免疫球蛋白折叠。例如，并且不限于，这样的氨基酸序列可以是适当的免疫球蛋白序列片段，所述片段包括至少一个所述CDR序列，但是其不够大，不足以形成(完整)的免疫球蛋白折叠(例如，同样参考WO 03/050531中所述的“派遣片段”)。备选地，这样的氨基酸序列可以是适当的“蛋白支架”，所述蛋白支架包括与这样的CDR序列相对应(即，作为其抗原结合位点的一部分)的至少一个氨基酸残基序列。用于呈递氨基酸序列的适当的支架对于熟练的技术人员将是清楚的，并且例如，包括，但不限于，基于或来源于免疫球蛋白的结合支架(即，除了本文已经描述的免疫球蛋白序列之外)，来源于蛋白质A结构域的蛋白支架(诸如AffibodiesTM)，淀粉酶抑肽(tendamistat)，纤连蛋白，脂笼蛋白，CTLA-4，T-细胞受体，设计的锚蛋白重复序列，高亲和性多聚体(avimers)和PDZ结构域(Binz等，Nat.Biotech(自然生物技术)2005，卷23：1257)，和基于DNA或RNA的结合部分，包括但不限于DNA或RNA适体(Ulrich等，组合化学高通量筛选(Comb Chem High Throughput Screen)20069(8)：619-32)。
同样地，包括一个或多个这些CDR序列的任何本发明的氨基酸序列优选是这样的，以致其可以特异性结合(如本文所定义)病毒的包膜蛋白，并且更特别地是这样的，以致其可以以如本文所限定的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本文进一步所述)与病毒的包膜蛋白结合。
更特别地，本发明该方面所述的氨基酸序列可以是包括至少一个抗原结合位点的任何氨基酸序列，其中所述抗原结合位点包括选自由本文所述的CDR1序列、本文所述的CDR2序列和本文所述的CDR3序列组成的组的至少两个氨基酸序列，以致(i)当第一氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列时，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR2序列或本文所述的CDR3序列；(ii)当第一氨基酸序列选自本文所述的CDR2序列时，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列或本文所述的CDR3序列；或(iii)当第一氨基酸序列选自本文所述的CDR3序列时，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列或本文所述的CDR3序列。
甚至更特别地，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个抗原结合位点的氨基酸序列，其中所述抗原结合位点包括选自由本文所述的CDR1序列、本文所述的CDR2序列和本文所述的CDR3序列组成的组的至少三个氨基酸序列，以致第一氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR2序列，并且第三氨基酸序列选自本文所述的CDR3序列。CDR1、CDR2和CDR3序列的优选组合将通过本文的进一步描述变得清楚。对于熟练的技术人员将是清楚的，这样的氨基酸序列优选是免疫球蛋白序列(如本文进一步所述)，但是例如，它也可以是包括呈递所述CDR序列的适当的支架的任何其它的氨基酸序列。
因此，在一个具体而非限制性方面中，本发明涉及针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
当本发明的氨基酸序列包含b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，在b)和/或c)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，b)和/或c)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，b)和/或c)所述的氨基酸序列可以是来源于a)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
类似地，当本发明的氨基酸序列包含e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，在e)和/或f)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，e)和/或f)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，e)和/或f)所述的氨基酸序列可以是来源于d)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
此外，类似地，当本发明的氨基酸序列包含h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，在h)和/或i)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，h)和/或i)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，h)和/或i)所述的氨基酸序列可以是来源于g)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
应该理解，最后的前述段落通常也适用于分别包括b)，c)，e)，f)，h)或i)所述的一个或多个氨基酸序列的本发明的任何氨基酸序列。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合病毒的包膜蛋白的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，本发明涉及针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ IDNO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388或SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258或SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ IDNO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258或SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合病毒的包膜蛋白的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，本发明涉及针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，其包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合病毒的包膜蛋白的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与SEQ ID NO’s 126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s 126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)病毒的包膜蛋白；并且更特别地以如本文所定义的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)结合病毒的包膜蛋白。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由SEQ ID N0’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)病毒的包膜蛋白；并且更特别地以如本文所定义的亲和力(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本文进一步所述)结合病毒的包膜蛋白。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸序列和SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度而确定(以本文所述的方式)，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
在一个更具体的，但同样非限制性的方面中，本发明涉及针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一种表位的氨基酸序列，其包括选自由下列组成的组的一种或多种氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
当本发明的氨基酸序列包含b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，在b)和/或c)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，b)和/或c)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，b)和/或c)所述的氨基酸序列可以是来源于a)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
类似地，当本发明的氨基酸序列包含e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，在e)和/或f)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，e)和/或f)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，e)和/或f)所述的氨基酸序列可以是来源于d)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
此外，类似地，当本发明的氨基酸序列包含h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，在h)和/或i)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，h)和/或i)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，h)和/或i)所述的氨基酸序列可以是来源于g)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
应该理解，最后的前述段落通常也适用于分别包括b)，c)，e)，f)，h)或i)所述的一个或多个氨基酸序列的本发明的任何氨基酸序列。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合人RSV病毒的F-蛋白的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，本发明涉及针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；
(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613或SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597或SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597或SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合人RSV病毒的F-蛋白的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，本发明涉及针对人RSV病毒的F-蛋白的氨基酸序列，其包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组中：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组中：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由SEQ IDNO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合人RSV病毒的F-蛋白的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与SEQ ID NO’s 158-236，248-407，2448和2574-2581(见表A-1)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s 158-236，248-407，2448和2574-2581(见表A-1)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)人RSV病毒的F-蛋白；并且更特别地以如本文所定义的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)结合人RSV病毒的F-蛋白。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由SEQ IDNO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FRI-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或所述氨基酸序列的任何适合的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列组成的组；和CDR2选自由SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列组成的组；和CDR3选自由SEQ IDNO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列组成的组。
同样地，CDR序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位；并且更特别地以如本文所定义的亲和性结合人RSV病毒的F-蛋白(所述亲和性适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸序列和SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
在另一个具体，但非限制性的方面中，本发明涉及这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素的至少一个表位。
具体地，本发明涉及这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5蛋白，所述氨基酸序列包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
当本发明的氨基酸序列包含b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，在b)和/或c)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，b)和/或c)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，b)和/或c)所述的氨基酸序列可以是来源于a)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
类似地，当本发明的氨基酸序列包含e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，在e)和/或f)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，e)和/或f)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，e)和/或f)所述的氨基酸序列可以是来源于d)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
此外，类似地，当本发明的氨基酸序列包含h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，在h)和/或i)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，h)和/或i)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，h)和/或i)所述的氨基酸序列可以是来源于g)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
应该理解，最后的前述段落通常也适用于分别包括b)，c)，e)，f)，h)或i)所述的一个或多个氨基酸序列的本发明的任何氨基酸序列。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合流感病毒的血凝素H5蛋白的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；
(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或
(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388或SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258或SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258或SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合流感病毒的血凝素H5蛋白的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：690-721和2467-2483的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合流感病毒的血凝素H5蛋白的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128(见表A-1)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128(见表A-1)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)流感病毒的血凝素H5蛋白；并且更特别地以如本文所定义的亲和性结合流感病毒的血凝素H5蛋白(所述亲和性适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)流感病毒的血凝素H5蛋白；并且更特别地以如本文所定义的亲和性结合流感病毒的血凝素H5蛋白(所述亲和性适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本文进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸序列和SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
具体地，本发明涉及针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其包括选自由下列组成的组的一种或多种氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
当本发明的氨基酸序列包含b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，在b)和/或c)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，b)和/或c)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，b)和/或c)所述的氨基酸序列可以是来源于a)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
类似地，当本发明的氨基酸序列包含e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，在e)和/或f)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，e)和/或f)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，e)和/或f)所述的氨基酸序列可以是来源于d)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
此外，类似地，当本发明的氨基酸序列包含h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时：
i)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，在h)和/或i)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，h)和/或i)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，h)和/或i)所述的氨基酸序列可以是来源于g)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。
应该理解，最后的前述段落通常也适用于分别包括b)，c)，e)，f)，h)或i)所述的一个或多个氨基酸序列的本发明的任何氨基酸序列。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
或它们的任何适当组合。
此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合狂犬病病毒的G-蛋白的抗原结合位点的一部分。
在一个更具体而同样非限制性的方面中，本发明涉及针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列：
i)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；和
iii)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
以致，(i)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861或SEQID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789或SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789或SEQ IDNO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列之一。
此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合狂犬病病毒的G-蛋白的抗原结合位点的一部分。
在甚至更具体而非限制性的方面中，本发明涉及针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
g)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
h)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
j)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合狂犬病病毒的G-蛋白的抗原结合位点的一部分。
所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与SEQ ID NO’s 237-247和2684-2717(见表A-1)的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以例如通过确定所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s 237-247和2684-2717(见表A-1)中的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)狂犬病病毒的G-蛋白；并且更特别地以如本文所定义的亲和性结合狂犬病病毒的G-蛋白(所述亲和性适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)。
当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列组成的组；和/或CDR2选自由SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列组成的组。
特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样，以致：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。
特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列组成的组。
同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。
此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)狂犬病病毒的G-蛋白；并且更特别地以如本文所定义的亲和性结合狂犬病病毒的G-蛋白(所述亲和性适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地作为IC50值，如本文进一步所述)。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100％的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸序列和SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。
在这样的本发明的氨基酸序列中，所述构架序列可以是任何适当的构架序列，并且例如，基于标准手册和进一步公开的内容以及本文引用的现有技术，适当的构架序列的实例对于熟练的技术人员将是清楚的。
所述构架序列优选是免疫球蛋白构架序列或已经来源于免疫球蛋白构架序列(例如，通过人源化或骆驼源化)的构架序列(的适当组合)。例如，所述构架序列可以是来源于轻链可变结构域(例如，VL-序列)和/或来源于重链可变结构域(例如，VH-序列)的构架序列。在一个特别优选的方面中，所述构架序列是已经来源于VHH-序列的构架序列(其中所述构架序列可以任选地已经被部分或完全人源化)或是已经骆驼源化(如本文所定义)的常规VH序列。
所述构架序列优选地是这样的，以致本发明的氨基酸序列是结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)；是单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)；是″dAb″(或适合用作dAb的氨基酸序列)；或是纳米抗体(包括但不限于VHH序列)。同样地，例如，基于标准手册和进一步的公开内容以及本文所提及的现有技术，适当的构架序列对于熟练的技术人员将是清楚的。
特别地，在本发明的氨基酸序列中存在的所述构架序列可以包含一个或多个标志残基(如本文所定义)，以致本发明的氨基酸序列是一种纳米抗体。所述构架序列(的适当的组合)的一些优选的、而非限制性的实例将通过本文进一步的公开内容变得清楚。
同样地，如本文关于本发明的氨基酸序列概括所述，还可以使用前述任一种的适当的片段(或片段组合)，诸如包含适当与一个或多个构架序列侧连和/或通过一个或多个构架序列连接的一个或多个CDR序列的片段(例如，以与这些CDR相同的顺序，并且构架序列可以以所述片段所来源的完全大小的免疫球蛋白序列存在)。所述片段还可以也是这样的，以致它们包括或可以形成免疫球蛋白折叠，或者备选地是这样的，以致它们不包括或不能形成免疫球蛋白折叠。
在一个具体的方面中，这样的片段包括如本文所述的单CDR序列(并且特别是CDR3序列)，其在每一边侧连构架序列(的一部分)(并且特别地，在所述片段所来源的免疫球蛋白序列中与所述CDR序列相邻的构架序列的一部分。例如，CDR3序列可以在FR3序列(的一部分)之后并且在FR4序列(的一部分)之前)。这样的片段还可以包含二硫键，并且特别是连接分别在所述CDR序列之前和之后的两个构架区的二硫键(为了形成这样的二硫键的目的，可以使用在所述构架区中天然存在的半胱氨酸残基，或备选地，半胱氨酸残基可以合成添加或引入到所述构架区)。对于这些“派遣片段”的进一步描述，同样参考WO 03/050531，以及WO 08/068280。
在另一个方面中，本发明涉及这样的化合物和构建体，且特别是蛋白或多肽(本文也分别称为“本发明的化合物”或“本发明的多肽”)，其包括一个或多个本发明的氨基酸序列(或其适当的片段)或基本上由其组成，且任选地还包括一个或多个其他基团、残基、结构部分或结合单位。熟练的技术人员通过本文进一步的公开内容将清楚，所述其他基团、残基、结构部分、结合单位或氨基酸序列可以或可以不为本发明的氨基酸序列(和/或为其所存在于其中的化合物或构建体)提供进一步的官能性，且可以或可以不修饰本发明的氨基酸序列的特性。
例如，所述其它基团、残基、结构部分或结合单位可以是一个或多个额外的氨基酸序列，以致所述化合物或构建体是一种(融合)蛋白或(融合)多肽。在一个优选而非限制性的方面中，所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是免疫球蛋白序列。甚至更优选地，所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位选自由下列各项组成的组：结构域抗体、适合用作结构域抗体的氨基酸序列、单结构域抗体、适合用作单结构域抗体的氨基酸序列、“dAb”、适合用作dAb的氨基酸序列、或纳米抗体。
备选地，例如，所述基团、残基、结构部分或结合单位可以是化学基团、残基、结构部分，其自身可以是或可以不是生物学和/或药理学活性的。例如，并且不限于，所述基团可以连接到一个或多个本发明的氨基酸序列上，以提供本发明的氨基酸序列或多肽的“衍生物”，如本文进一步所述。
也在本发明范围内的是这样的化合物或构建体，其包括一个或多个本文所述的衍生物或基本上由其组成，并且任选地还包括任选地通过一个或多个接头连接的一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位。优选地，所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是氨基酸序列。
在上述化合物或构建体中，所述一个或多个本发明的氨基酸序列以及所述一个或多个基团、残基、结构部分或结合单位可以彼此直接连接和/或通过一个或多个适当的接头或间隔体连接。例如，当所述一个或多个基团、残基、结构部分或结合单位是氨基酸序列时，所述接头可以也是氨基酸序列，以致所得到的化合物或构建体是融合(蛋白)或融合(多肽)。
如从上文进一步描述和本文中所清楚的，这意味着本发明的氨基酸序列可以用作“结构单元”以形成本发明的多肽，即通过将它们与其它基团、残基、结构部分或结构单元组合从而形成如本文所述的化合物或构建体(如，但不限于，如本文所述的本发明的二互补位、三互补位、多互补位，二价、三价、多价和二特异性、三特异性、多特异性多肽)，所述化合物或构建体在一个分子内组合一种或多种需要的性质或生物学功能。
本发明的化合物或多肽通常可以通过这样的方法制备，所述方法包括将所述一个或多个本发明的氨基酸序列任选地通过一个或多个适当的接头适当地连接到所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位上的至少一个步骤，以提供本发明的化合物或多肽。本发明的多肽还可以优选地通过这样的方法制备，所述方法通常至少包括下述步骤：提供编码本发明的多肽的核酸，以适当方式表达所述核酸，和回收所表达的本发明的多肽。这样的方法可以以本身已知的方式进行，例如，基于本发明进一步所述的方法和技术，其对于熟练的技术人员将是清楚的。
由本发明的氨基酸序列起始，设计/选择和/或制备本发明的化合物或多肽的方法在本发明中还称为“格式化”所述的本发明的氨基酸序列；并且组成本发明的化合物或多肽的一部分的本发明的氨基酸被认为是“格式化的”或采用所述的本发明的化合物或多肽的“格式”。基于本发明的公开内容，熟练的技术人员将清楚本发明的氨基酸序列可以被格式化的方法实例以及所述格式的实例；并且所述格式化的氨基酸序列形成本发明的另一个方面。
在本发明的一个具体方面中，与相对应的本发明的氨基酸序列相比，本发明的化合物或本发明的多肽可以具有增加的半衰期。基于本文进一步的公开内容，所述化合物和多肽的一些优选而非限制性实例对于熟练的技术人员将变得清楚，并且例如包括下列各项：已经被化学修饰以增加其半衰期(例如，通过聚乙二醇化方式)的本发明的氨基酸序列或多肽；包括至少一个用于结合血清蛋白(诸如血清白蛋白)的另外的结合位点的本发明的氨基酸序列；或包括至少一个与增加本发明的氨基酸序列的半衰期的至少一个部分(并且特别是至少一个氨基酸序列)连接的本发明的氨基酸序列的本发明的多肽。基于本发明进一步的公开内容，包括所述半衰期延长部分或氨基酸序列的本发明的多肽的实例对于熟练的技术人员将变得清楚；并且例如，包括，但不限于，这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列适当地连接一个或多个血清蛋白或其片段(诸如(人)血清白蛋白或其适当的片段)或连接一个或多个可以结合血清蛋白的结合单位(诸如，例如，结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，“dAb”’，适合用作dAb的氨基酸序列，或可以结合血清蛋白如血清白蛋白(诸如人血清白蛋白)、血清免疫球蛋白如IgG、或运铁蛋白的纳米抗体；参考进一步的描述和本发明提及的参考文献)；这样的多肽，其中本发明的氨基酸序列连接Fc部分(诸如人Fc)或其适当的部分或片段；或这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列适当连接一个或多个可以结合血清蛋白的小蛋白或肽(诸如，但不限于，记述在WO 91/01743，WO 01/45746，WO 02/076489和WO 08/068280中的蛋白和肽)。
通常，具有增加的半衰期的本发明的化合物或多肽优选地具有是相对应的本发明的氨基酸序列本身的半衰期的至少1.5倍、优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的半衰期。
在本发明的一个优选而非限制性方面中，与相对应的本发明的氨基酸序列本身相比，所述本发明的化合物或多肽具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的血清半衰期。
在本发明的另一个优选而非限制性方面中，所述本发明的化合物或多肽在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，本发明的化合物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的半衰期。
在另一个方面中，本发明涉及编码本发明的氨基酸序列或本发明的多肽(或其适当的片段)的核酸。这样的核酸在本发明中还称为“本发明的核酸”，并且例如，可以采用遗传构建体的形式，如本发明进一步所述。
在另一个方面中，本发明涉及表达(或在适当的环境下能够表达)本发明的氨基酸序列和/或本发明的多肽的宿主或宿主细胞，和/或包含本发明的核酸的宿主或宿主细胞。通过本文进一步的描述，所述宿主或宿主细胞的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及一种产品或组合物，所述产品或组合物包含或包括至少一种本发明的氨基酸序列、至少一种本发明的多肽(或其适当的片段)，至少一种本发明的化合物和/或至少一种本发明的核酸、以及任选地一种或多种所述组合物本身已知的其它成分，即，取决于所述组合物的目的用途。例如，这样的产品或组合物可以是药物组合物(如本文所述)、兽医用组合物或用于诊断用途的产品或组合物(同样如本文所述)。通过本发明进一步的描述，所述产品或组合物的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或多肽、或包括其的组合物在体外(例如，在体外或细胞测定法中)或体内(例如，在单个细胞中或在多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，且更特别是在人类中，诸如在处于病毒性疾病的危险中或患有其的人中)调节病毒进入和/或病毒复制和/或调节由病毒的包膜蛋白(和/或其病毒受体)介导的生物学途径中的应用。
本发明还涉及使用至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或多肽用于体外(例如，在体外或细胞测定法中)或体内(例如，在单个细胞中或在多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，且更特别是在人类中，诸如在处于病毒性疾病的危险中或患有其的人中)调节病毒进入和/或病毒复制和/或调节由病毒的包膜蛋白(和/或其病毒受体)介导的生物学途径的方法，所述方法至少包括使病毒的包膜蛋白与至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或多肽、或包括其的组合物以适于调节病毒进入和/或病毒复制和/或调节由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的生物学途径的方式和量相接触的步骤。
本发明还涉及一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或多肽在制备用于体外(例如，在体外或细胞测定法中)或体内(例如，在单个细胞中或在多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，且更特别是在人类中，诸如在处于病毒性疾病的危险中或患有其的人中)调节病毒进入和/或病毒复制和/或调节由病毒的包膜蛋白(和/或其病毒受体)介导的生物学途径的组合物(诸如，但不限于如本文进一步所述药物组合物或制剂)中的应用。
在本发明的上下文中，“调节(modulating)”或“调节(to modulate)”通常意指减少、防止或抑制病毒的进入和/或病毒复制和/或减少、防止或抑制由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的生物学途径，如使用适当的体外、细胞或体内测定法(诸如本文提及的那些)测量的。特别地，“调节(modulating)”或“调节(to modulate)”可以意指减少、防止或抑制病毒的进入和/或病毒复制和/或减少、防止或抑制由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的生物学途径，如使用适当的体外、细胞或体内测定法(诸如本文提及的那些)测量的，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或多肽的条件下，在相同测定中的正常(即天然存在的)病毒的进入和/或病毒复制和/或由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的正常生物学途径相比较，减少、防止或抑制至少1％，优选至少5％，诸如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％或更多。
熟练的技术人员应该清楚，“调节”还可以包括与相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或多肽相比较，对病毒的包膜蛋白对其结合配偶体中的一种或多种的结合特异性和/或选择性施加改变(其可以是增加或减少)；和/或对病毒的包膜蛋白对于在所述病毒的包膜蛋白存在于其中的介质或环境中的一种或多种条件(诸如pH、离子强度、辅因子的存在、等等)的敏感性施加改变(其可以是增加或减少)。熟练的技术人员应该清楚，这同样可以以任何适当的方式和/或使用本身已知的任何适当的测定法来确定，诸如本文或在本文引用的现有技术中所述的测定法。
“调节”还可以意指对包括病毒的包膜蛋白(或其中包括其结合配偶体或途径)的一种或多种生物学或生理学机制、作用、反应、功能、途径或活性施加改变。同样，熟练的技术人员应该清楚，这可以以任何适当方式和/或使用本身已知的任何适当的(体外且通常是细胞或体内测定法)测定法确定，诸如本文或在本文引用的现有技术中所述的测定法。特别地，关于其中包括病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体的一种或多种生物学或生理学机制，作用，反应，功能，途径或活性，施加改变可以是在相同条件下但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或多肽的相同测定法中，与所述生物学或生理学机制、效果、反应、功能、途径或活性比较，至少1％，优选至少5％，诸如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％或更多的改变。
例如，调节还可以包括减少、防止或抑制病毒的包膜蛋白与其一种结合配偶体的结合和/或与天然结合配偶体竞争与病毒的包膜蛋白的结合。调节可以是可逆的或不可逆的，但是对于制药学和药学目的，通常应该是以可逆的方式。
因此，本发明还涉及这样的氨基酸序列和多肽，所述氨基酸序列和多肽可以用于调节，和具体地抑制和/或防止其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的病毒-介导的生物学途径。具体地，本发明的氨基酸序列和多肽可以用于中和病毒(如本文定义)和/或调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)。
更具体地，根据本发明所述的氨基酸序列和多肽可以在病毒感染的进入前阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞发生前和/或过程中)和/或在病毒感染进入后阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞发生后)中和病毒(如本文定义)和/或调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)。因此，在本文认为在病毒感染进入前阶段中(即，在病毒进入靶宿主细胞已经发生之前和/或过程中)中和病毒(如本文定义)和/或调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)的本发明的氨基酸序列和多肽调节，并且具体地抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中(如本文进一步定义)。此外，在本文认为，在病毒感染的进入后阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞已经发生后)中和病毒(如本文定义)和/或调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)的本发明的氨基酸序列和多肽调节并且具体地抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒复制(如本文进一步定义)。
在一个具体的方面中，本发明涉及这样的多价(如二价，二互补位，二特异性的，三价，三互补位，三特异性，如本文进一步定义)氨基酸序列和多肽，其调节，和具体地抑制和/或防止其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的病毒-介导的生物学途径。具体地，本发明的多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽可以中和病毒(如本文定义)和/或调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)。在一个方面中，与相应的单价氨基酸序列比较，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对流感的血凝素H5包膜蛋白并且显示流感病毒的增加的体外和/或体内中和(如例如，通过如本文所述的假型中和测定法所测量的)。与在相同的测定法中，在相同的条件下，用相应的单价氨基酸序列进行的中和相比，所述中和可以增加至少2倍，优选地至少3倍，如至少5倍或至少10倍，例如至少15倍，至少20倍，至少30倍，至少50倍，或100倍以上。在其它方面中，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对狂犬病病毒的G包膜蛋白并且与相应的单价氨基酸序列比较，显示狂犬病病毒的增加的体外和/或体内中和(如例如，通过如本文所述的RFITT测定法所测量的)。与在相同的测定法中，在相同的条件下，用相应的单价氨基酸序列进行的中和相比，所述中和可以增加至少2倍，优选地至少3倍，如至少5倍或至少10倍，例如至少15倍，至少20倍，至少30倍，至少50倍，或100倍以上。在其它方面中，这些单价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对RSV的F-蛋白并且与相应的单价氨基酸序列比较显示RSV的增加的体外和/或体内中和。与在相同的测定法中，在相同的条件下，用相应的单价氨基酸序列进行的中和相比，所述中和可以增加至少2倍，优选地至少3倍，如至少5倍或至少10倍，例如至少15倍，至少20倍，至少30倍，至少50倍，或100倍以上。在又一个方面中，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白并且与相应的单价氨基酸序列比较，显示与唾液酸对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的增加的竞争。与在相同的测定法中，在相同的条件下，用相应的单价氨基酸序列进行的竞争相比，所述竞争可以增加至少2倍，优选地至少3倍，如至少5倍或至少10倍，例如至少15倍，至少20倍，至少30倍，至少50倍，或100倍以上。在又一个方面中，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽显示对于某些病毒的不同的基因型、亚型、逃避突变型和/或毒株的增加的交叉反应性和/或中和。在一个方面中，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对狂犬病病毒的G包膜蛋白并且可以显示对于狂犬病病毒的不同基因型(如例如，基因型1和5)的交叉反应性和/或中和。在其它方面中，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白并且显示对于流感病毒的不同亚型和/或毒株(如例如，H5N1和H1N1；H3N2和H1N1；H5N1和H3N2；H5N1和H2N2；H5N1，H1N1和H3N2；H5N1，H2N2和H3N2；H5N1，H1N1和H2N2；H5N1，H1N1，H2N2和H3N2)的交叉反应性和/或中和性。在又一个方面中，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对RSV的F蛋白并且显示对于RSV的不同毒株(如例如，Long和A-2，Long和B-1，A-2和B-1，Long，A-2和B-1)的交叉反应性和/或中和性。在又一个方面中，这些多价(优选地二价，更优选地三价)氨基酸序列和多肽针对RSV的F蛋白并且显示对于RSV的不同逃避突变型的交叉反应性和/或中和(如例如，在抗原位点II的逃避突变型，在抗原位点IV-VI的逃避突变型，和/或在抗原位点II和抗原位点IV-VI的逃避突变型)。
因此，本发明的氨基酸序列和(多价)多肽可以通过在所述生物学途径的任何适合的阶段通过特异性结合于病毒的包膜蛋白调节并且具体地抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒进入和/或病毒复制；优选地，本发明的氨基酸序列和多肽可以通过结合于病毒的包膜蛋白从而使病毒体聚集被诱导和/或病毒体结构被去稳定化和/或病毒体对靶宿主细胞的附着被调节、抑制和/或防止(例如通过调节和/或抑制和/或防止在病毒包膜蛋白和靶宿主细胞上的病毒受体之间的相互作用和/或病毒的包膜蛋白和靶宿主细胞之间的相互作用或通过与所述包膜蛋白竞争与所述病毒受体和/或所述靶宿主细胞的结合)和/或病毒与所述靶宿主细胞的融合被调节、抑制和/或防止(例如，在靶宿主细胞膜或在所述靶宿主细胞的内体和/或溶酶体区室中)，例如通过防止所述病毒的包膜蛋白进行构象变化，来调节和具体地抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中。备选地，本发明的氨基酸序列和多肽可以通过在所述生物学途径的任何适合阶段特异性结合于病毒的包膜蛋白来调节并且具体地抑制和/或防止靶宿主细胞中的病毒复制(如本文定义)；优选地，本发明的氨基酸序列可以通过结合于病毒的包膜蛋白从而使病毒基因组的转录和/或翻译受到影响、抑制和/或防止和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成受到影响、抑制和/或防止和/或新生病毒体在靶宿主细胞膜上的出芽受到减少、抑制和/或防止，从而可以在靶宿主细胞中调节并且具体地抑制和/或防止病毒复制。
此外，根据这一方面，根据本发明所述的二价和多价(如本文定义)，二特异性和多特异性(如本文定义)和二互补位和多互补位(如本文定义)多肽可以通过特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少一个表位和靶标的至少一个其它表位(其可以不同于所述至少一个表位或同于所述至少一个表位)来用于病毒性疾病的预防和/或治疗，其中所述靶标可以不同于或可以同于所述包膜蛋白。
因此，本发明还涉及根据本发明所述的二互补位氨基酸序列和多肽或包含其的组合物，其组合两种不同的作用模式，例如减少、防止和/或抑制病毒进入(如，例如在病毒附着，病毒融合等的阶段)和/或病毒复制(如例如在转录、翻译、病毒包装、出芽等的阶段)，所述作用模式分别由本发明的二互补位氨基酸序列和/或多肽的一个结合单位介导，其中每个结合单位结合所述病毒的包膜蛋白的不同位点。
此外，本发明还涉及根据本发明所述的三互补位氨基酸序列和多肽或包含其的组合物，其组合两种或三种不同的作用模式，如减少、防止和/或抑制病毒进入(如，例如在病毒附着，病毒融合等的阶段)和/或病毒复制(如例如在转录、翻译、病毒包装、出芽等的阶段)，所述作用模式分别由本发明的三互补位氨基酸序列和/或多肽的一个结合单位介导，其中每个结合单位结合所述病毒的包膜蛋白的不同位点。
更一般地，本发明涉及根据本发明所述的多互补位氨基酸序列和多肽或包含其的组合物，其组合两种以上不同的作用模式，如减少、防止和/或抑制病毒进入(如，例如在病毒附着，病毒融合等的阶段)和/或病毒复制(如例如在转录、翻译、病毒包装、出芽等的阶段)，所述作用模式分别由本发明的多互补位氨基酸序列和/或多肽的一个结合单位介导，其中每个结合单位结合所述病毒的包膜蛋白的不同位点。
本发明还涉及用于制备或产生本文所述的氨基酸序列、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的方法。所述方法的一些优选但非限制性的实例将通过本文进一步的描述变得清楚。
一般地，这些方法可以包括下列步骤：
a)提供氨基酸序列的组、集合或文库；和
b)从所述氨基酸序列的组、集合或文库中筛选可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的氨基酸序列；
和
c)分离所述可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的氨基酸序列。
在这样的方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是任何适当的氨基酸序列的组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列的组、集合或文库(如本文所述)，诸如免疫球蛋白序列的首次用于实验的组、集合或文库；免疫球蛋白序列的合成的或半合成的组、集合或文库；和/或已经进行了亲和力成熟的免疫球蛋白序列的组、集合或文库。
此外，在这样的方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是重链可变结构域(诸如VH结构域或VHH结构域)或轻链可变结构域的组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是结构域抗体或单结构域抗体的组、集合或文库，或可以是能够作为结构域抗体或单结构域抗体行使功能的氨基酸序列的组、集合或文库。
在本方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列的免疫组、集合或文库，例如，来自已经用病毒的包膜蛋白适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物的免疫球蛋白序列的免疫组、集合或文库。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
在上述方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体、或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选氨基酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。同样参考Hoogenboom在Nature Biotechnology(自然生物技术)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
在另一个方面中，用于产生氨基酸序列的方法包括至少下列步骤：
a)提供表达氨基酸序列的细胞的集合或样品；
b)从所述细胞的集合或样品中筛选表达可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的氨基酸序列的细胞；
和
c)(i)分离所述氨基酸序列；或(ii)从所述细胞分离编码所述氨基酸序列的核酸序列，然后表达所述氨基酸序列。
例如，当所需要的氨基酸序列是免疫球蛋白序列时，所述细胞的集合或样品可以是，例如，B细胞的集合或样品。此外，在该方法中，细胞样品可以来源于已经用病毒的包膜蛋白适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
上述方法可以以任何适当的方式进行，这对于熟练的技术人员将是清楚的。例如，参考EP 0 542 810，WO 05/19824，WO 04/051268和WO 04/106377。步骤b)的筛选优选地使用流式细胞术技术诸如FACS进行。对于此，例如，参考Lieby等，Blood(血液)，卷97，No.12，3820(2001)。
在另一个方面中，用于产生针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列的方法可以包括至少下列步骤：
a)提供编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；
b)从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的氨基酸序列的核酸序列；
和
c)分离所述核酸序列，然后表达所述氨基酸序列。
在这样的方法中，所述编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库可以是，例如，编码免疫球蛋白序列的首次用于实验的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；编码免疫球蛋白序列的合成的或半合成的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；和/或编码已经进行了亲和力成熟的免疫球蛋白序列的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库。
此外，在这样的方法中，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码重链可变结构域(诸如VH结构域或VHH结构域)或轻链可变结构域的组、集合或文库。例如，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码结构域抗体或单结构域抗体的组、集合或文库，或编码能够作为结构域抗体或单结构域抗体行使功能的氨基酸序列的组、集合或文库。
在该方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是核酸序列的免疫的组、集合或文库，例如，所述核酸序列来源于已经用病毒的包膜蛋白适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
例如，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码重链可变结构域或轻链可变结构域的免疫的组、集合或文库。在一个具体的方面中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以编码VHH序列的组、集合或文库。
在上述方法中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选编码氨基酸序列的核苷酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。同样参考Hoogenboom在NatureBiotechnology(自然生物技术)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
在另一个方面中，所述用于产生针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列的方法可以包括至少下列步骤：
a)提供编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；
b)从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码这样的氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性且被交叉阻断或交叉阻断本发明的纳米抗体(如SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(表A-1)之一)，或本发明的人源化纳米抗体(如SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8))，或包含本发明的至少一种纳米抗体的本发明的多肽或构建体(如SEQ IDNO’s：2382-2415，2423-2430，2641-2659，2663-2681，2978-2998，3016-3056和3584-3591(见表A-2，表A-4，表A-5，表A-6，表A-9和表A-10)之一)；和
c)分离所述核酸序列，然后表达所述氨基酸序列。
本发明还涉及通过上述方法或备选地通过包括上述方法之一以及至少下列步骤的方法可获得和/或获得的氨基酸序列，所述步骤为：确定所述免疫球蛋白序列的核苷酸序列或氨基酸序列；并且以本身已知的方式表达或合成所述氨基酸序列，诸如通过在适当的宿主细胞或宿主生物体内表达，或通过化学合成。
此外，在上述步骤后，一个或多个本发明的氨基酸序列可以适当地被人源化(或备选地，被骆驼源化)；和/或可以将这样获得的氨基酸序列彼此连接，或连接一个或多个其它适当的氨基酸序列(任选地，通过一个或多个适当的接头)，以提供本发明的多肽。此外，编码本发明的氨基酸序列的核酸序列可以被适当地人源化(或备选地，被骆驼源化)并且适当地表达；和/或编码本发明的氨基酸序列的一个或多个核酸序列可以彼此连接，或连接编码其它适当的氨基酸序列的一个或多个核酸序列(任选地通过编码一个或多个适当的接头的核苷酸序列)，然后，这样获得的核苷酸序列可以进行适当地表达，以提供本发明的多肽。
在本发明中还包括用于制备和产生本发明的多价(如例如，二价，三价等)，多互补位(如例如，二互补位，三互补位等)和/或多特异性(如例如，二特异性的，三特异性等)氨基酸的方法。
用于制备本发明的多价、多互补位和/或多特异性氨基酸序列或构建体的方法可以至少包括将本发明的两种以上单价氨基酸序列或单价构建体和例如一个或多个接头以适合的方式连接在一起的步骤。单价构建体(和接头)可以通过本领域已知的任何方法连接并且如本文进一步所述。优选的技术包括连接编码单价构建体(和接头)的核酸序列从而制备表达多价、多互补位和/或多特异性氨基酸或构建体的遗传构建体。用于连接氨基酸序列或核酸序列的技术对于技术人员是清楚的，并且还参考标准手册，如上述提及的，Sambrook等.和Ausubel等，以及下面的实施例。
因此，本发明还涉及单价构建体(其可以包括本发明的氨基酸序列(如结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体)或基本由其组成)在提供和/或制备多价(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性，等)化合物或构建体中的应用。然后，将单价构建体作为结合结构域或结合单位用于提供和/或制备多价(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体，所述构建体包含两个(例如，在二价和/或二互补位构建体中)，三个(例如，在三价和/或三互补位构建体中)或更多(例如，在多价和/或多互补位构建体)结合单位。在这一方面中，所述单价构建体可以作为结合结构域或结合单位用于提供和/或制备本发明的多价和优选地二价或三价(如多互补位，和优选地，二互补位或三互补位)构建体，其包含两个、三个或更多结合单位。
在一个方面中，本发明涉及针对RSV的F-蛋白的多价多肽，其中使用本发明的至少一种单价构建体(和具体地，至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。
在另一个方面中，本发明涉及针对RSV的F-蛋白的多价多肽，其中使用本发明的至少一种单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合；和使用至少一种本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。在本发明这样优选的多互补位构建体中，最优选这样的接头，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)以及RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域两者，同样最优选以允许具有增加的抗体亲抗原性的结合，以及分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位，用于提供和/或制备多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性，等)构建体的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接从而使多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性，等)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在又一个方面中，本发明涉及针对RSV的F-蛋白的多价多肽，其中使用本发明的至少一种单价构建体(和具体地，至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合。
在另一个方面中，本发明涉及针对RSV的F-蛋白的多价多肽，其中使用本发明的至少一种单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合；和使用至少一种本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。在本发明这样优选的多互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)以及RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域两者，同样最优选以允许具有增加的抗体亲抗原性的结合，以及分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白上的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位，用于提供和/或制备多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性，等)构建体的应用，其中将结合结构域或结构单位通过接头连接从而使多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性，等)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在另一个方面中，本发明涉及针对RSV的F-蛋白的多价多肽，其中使用本发明的至少一种单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合；和使用至少一种本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合。在本发明这样优选的多互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)以及RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，同样最优选以允许具有增加的抗体亲抗原性的结合，以及分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白上的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，和包含针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位，用于提供和/或制备多互补位(如二互补位)构建体的应用，其中将结合结构域或结构单位通过接头连接从而使多互补位(如二互补位)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二互补位多肽中，使用针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的至少一种本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)；和使用针对RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的至少一种本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)。在本发明的这样的优选二互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的二互补位构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)以及RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位用于提供和/或制备二互补位构建体的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接从而使二互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二互补位多肽中，使用针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的本发明的至少一种单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)；和使用针对RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的至少一种本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)。在本发明的这样优选的二互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的二互补位构建体能够(同时)结合于RSVF蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)以及RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSVF蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位用于提供和/或制备二互补位构建体的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二互补位多肽中，使用针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的至少一种单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)；和使用针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的本发明的至少一种单价构建体(具体地至少一种本发明的纳米抗体)。在本发明的这样优选的二互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的二互补位构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)以及RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)二者，同样最优选是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSVF蛋白的抗原位点IV，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)的单价构建体，和包含针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位用于提供和/或制备二互补位构建体的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二价多肽中，使用至少两种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少两种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。在本发明的所述优选二价构建体中，所述接头最优选是这样的，以致本发明的二价构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的两个Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，同样最优选是这样的从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸序列(和具体地纳米抗体)的两种单价构建体，作为结合结构域或结合单位用于提供和/或制备二价构建体的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二价多肽中，使用至少两种这样的本发明单价构建体(和具体地至少两种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。在本发明的所述优选二价构建体中，所述接头最优选是这样的，以致本发明的二价构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的两个101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，同样最优选是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSVF蛋白的抗原位点IV，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)的两种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的。
在本发明的一些最优选的三价(二互补位或三互补位)多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选三价(二互补位或三互补位)构建体中，接头最优选是这样的，从而使RSV F蛋白的三价(二互补位或三互补位)结合位点(并且具体地针对RSVF蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)以及RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域，同样最优选是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括使用针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的包含本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价、二互补位或三互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使所述三价或三互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的本发明的至少一种单价构建体(和更具体地至少一种纳米抗体)。
在本发明的一些最优选的三价(二互补位或三互补位)多肽中，使用这样的至少一种本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白；和使用针对RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的至少一种本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)。在本发明的所述优选的三价(二互补位或三互补位)构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价(二互补位或三互补位)构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)以及RSV F蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域，同样最优选是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的包含本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价、二互补位或三互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价、二互补位或三互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价(二互补位或三互补位)多肽中，使用至少一种这样的本发明单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合；和使用本发明的至少一种这样的单价构建体，其针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。在本发明的所述优选的三价(二互补位或三互补位)构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价(二互补位或三互补位)构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)以及RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，同样最优选是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的包含本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)的单价构建体，和针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的包含本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价(二互补位或三互补位)构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价(二互补位或三互补位)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少三种这样的本发明单价构建体(和具体地至少三种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。在本发明的所述优选的三价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的三个Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括这样的三种单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价构建体中的应用，所述单价构建体包含针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点II，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少三种这样的本发明单价构建体(和具体地至少三种纳米抗体)，其针对RSV F蛋白的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。在本发明的所述优选的三价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价构建体能够(同时)结合于RSV F蛋白上的三个101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV-VI，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括这样的三种单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价构建体中的应用，所述单价构建体包含针对RSV F蛋白上的101F结合位点(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原位点IV，并且更具体地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在另一个方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的多价多肽，其中使用针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的至少一种本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)。
在另一个方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的多价多肽，其中使用至少一种这样的本发明单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选多互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性的等)构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在又一个方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的多价多肽，其中使用至少一种这样的本发明单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
在又一个方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的多价多肽，其中使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选多互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和更优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在又一个方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的多价多肽，其中使用针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合的本发明的至少一种单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)。
在又一个方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的多价多肽，其中使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C1792竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选多互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和更优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二互补位多肽中，使用至少一种这样的本发明单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的这样优选的二互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的二互补位构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二互补位多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选二互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二互补构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二互补位多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选二互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域二者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二互补构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二价多肽中，使用这样的至少两种本发明的单价构建体(和具体地至少两种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。在本发明的所述优选二价构建体中，所述接头最优选是这样的，以致本发明的二价构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个唾液酸结合位点，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明氨基酸(和具体地纳米抗体)的两种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二价多肽中，使用这样的至少两种本发明的单价构建体(和具体地至少两种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。在本发明的所述优选二价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的二价构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个VN04-2结合位点，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地至少一种纳米抗体)的两种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二价多肽中，使用这样的至少两种本发明的单价构建体(和具体地至少两种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。在本发明的所述优选二价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的二价构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个MAb C179结合位点，同样最优选地是这样的从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地至少一种纳米抗体)的两种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的至少一种本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)。
在本发明的一些最优选的三价(二互补位或三互补位)多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选的三价(二互补位或三互补位)构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价(二互补位或三互补位)构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价、二互补位或三互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价或三互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
在本发明的一些最优选的三价(二互补位或三互补位)多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选的三价(二互补位或三互补位)构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价(二互补位或三互补位)构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域两者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价、二互补位或三互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价、二互补位或三互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
在本发明的一些最优选的三价(二互补位或三互补位)多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选的三价(二互补位或三互补位)构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价二互补位或三互补位)构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点以及流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域两者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价、二互补位或三互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价、二互补位或三互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少三种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少三种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。在本发明的所述优选的三价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的三个唾液酸结合位点，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)的三种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少三种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少三种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。在本发明的所述优选三价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的三个VN04-2结合位点，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)的三种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少三种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少三种纳米抗体)，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。在本发明的所述优选三价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价构建体能够(同时)结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的三个MAb C179结合位点，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)的三种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在另一个方面中，本发明涉及针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白的多价多肽，其中使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白的结合。
在另一个方面中，本发明涉及针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白的多价多肽，其中使用针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白竞争的结合的至少一种本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)；和使用针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的至少一种本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)。在本发明的所述优选多互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的多互补位构建体能够(同时)结合于狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点以及狂犬病病毒的G-包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域两者，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和更优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使多价或多互补位(如多特异性，多互补位，和更优选地三价，二价，三互补位，二互补位，三特异性，二特异性等)构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二互补位多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白竞争的结合；和使用至少一种这样的本发明的氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明这样优选的二互补位构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的二互补位构建体能够(同时)结合于狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点以及狂犬病病毒的G-包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白竞争的结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的二价多肽中，使用至少两种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少两种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白竞争的结合。在本发明的所述优选二价构建体中，所述接头最优选是这样的，以致本发明的二价构建体能够(同时)结合于狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的两个MAb 8-2结合位点，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括包含针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白结合的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的两种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备二价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使二价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白的结合。
在本发明的一些最优选的三价(二互补位或三互补位)多肽中，使用至少一种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白的结合；和使用至少一种这样的本发明氨基酸序列(和具体地至少一种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在本发明的所述优选的三价(二互补位或三互补位)构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价(二互补位或三互补位)构建体能够(同时)结合于狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点以及狂犬病病毒的G-包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白竞争的本发明的氨基酸(和具体地纳米抗体)的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价、二互补位或三互补位构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价或三互补位构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
在本发明的一些最优选的三价多肽中，使用至少三种这样的本发明的单价构建体(和具体地至少三种纳米抗体)，其针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白的结合。在本发明的所述优选的三价构建体中，接头最优选是这样的，从而使本发明的三价构建体能够(同时)结合于狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的三个MAb 8-2结合位点，同样最优选地是这样的，从而允许具有增加的抗体亲抗原性的结合和分子内结合和/或识别。
因此，本发明还包括将包含针对狂犬病病毒的G-包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G-包膜蛋白结合的三种单价构建体，作为结合结构域或结合单位在提供和/或制备三价构建体中的应用，其中将结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使三价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的应用和用途，以及涉及用于预防和/或治疗与病毒进入和/或病毒复制相关和/或由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的的疾病和病症的方法。通过本发明进一步的描述，一些优选的但非限制性的应用和用途将变得清楚。
本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物用于治疗。
特别地，本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物用于这样的疾病和病症的治疗，所述疾病和病症可以通过给需要其的受试者施用(药物有效量的)如本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体或多肽而预防或治疗。
更特别地，本发明涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物用于病毒性疾病的治疗。
通过本文进一步的描述，本发明的其它方面、实施方案、优点和应用也将变得清楚，其中本发明将更详细地描述和讨论本发明的纳米抗体以及包括其的本发明的多肽，其形成本发明的一些优选方面。
如通过本发明进一步的描述将变得清楚，与“dAb”或相似的(单)结构域抗体或免疫球蛋白序列相比，纳米抗体通常提供某些优点(本发明所述的)，本发明的纳米抗体也提供所述优点。然而，熟练的技术人员应该清楚，下述教导的更通用的方面也可以适用于(直接或类似地)本发明的其它氨基酸序列。
发明详述
在本描述、实施例和权利要求中：
a)除非另外指明或限定，所用的所有术语具有它们在本领域内的通用意思，其对于熟练的技术人员应该是清楚的。例如，参考在WO 08/020079的第46页的段落a)上的标准手册；
b)除非另外指明，术语“免疫球蛋白序列”，“序列”，“核苷酸序列”和“核酸”如在WO08/020079的第46页的段落b)上所述；
c)除非另外指明，所有没有具体详细描述的方法、步骤、技术和操作可以以本身已知的方式进行并且已经进行，这对于熟练的技术人员是清楚的。例如，仍旧参考标准手册，参考本发明所提及的公知背景技术，和参考其中所引用的其它参考文献；以及参考例如下述综述Presta，Adv.Drug Deliv.Rev.(高级药物递送综述)2006，58(5-6)：640-56；Levin和Weiss，Mol.Biosyst.2006，2(1)：49-57；Irving等，J.Immunol.Methods，(免疫学方法杂志)2001，248(1-2)，31-45；Schmitz等，Placenta，2000，21增刊.A，S106-12，Gonzales等，Tumour Biol.(肿瘤生物学)，2005，26(1)，31-43，其描述了用于蛋白质加工的技术，诸如亲和力成熟，和用于提高蛋白如免疫球蛋白的特异性和其他需要的特性的其他技术；
d)氨基酸残基按照标准的三字母或一字母的氨基酸密码显示。参考在埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的WO 08/020079的第48页上的表A-2，WO 08/020079题为，针对“IL-6R的氨基酸序列和包含其的多肽用于治疗与Il-6介导的信号传导相关的疾病和病症(Amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprisingthe same for the treatment of diseases and disorders associated with Il-6mediated signalling)；
e)出于比较两种或更多种核苷酸序列的目的，第一核苷酸序列和第二核苷酸序列之间的“序列同一性”百分数可以如在WO 08/020079(结合在本文作为参考)的第49页的段落c)中所述进行计算或确定，如通过用[第一核苷酸序列中与第二核苷酸序列中相应位置的核苷酸相同的核苷酸数目]除以[第一核苷酸序列中的核苷酸总数]并且乘以[100％]而计算，其中在第二核苷酸序列中核苷酸的每一删除、插入、取代或添加——与第一核苷酸序列相比——都视作在单一核苷酸(位置)的差异；或使用适合的计算机算法或技术来计算或确定，也如在WO 08/020079(结合在本文作为参考)的第49页的段落c)中所述。
f)出于比较两种或更多种氨基酸序列的目的，第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的“序列同一性”百分数(在本文还称为“氨基酸同一性”)可以通过如在WO 08/020079(结合在本文作为参考)的第49和50页的段落f)中所述进行计算或确定，如通过用[第一氨基酸序列中与第二氨基酸序列中相应位置的氨基酸残基相同的氨基酸残基数目]除以[第一氨基酸序列中的氨基酸残基总数]并且乘以[100％]而计算，其中第二氨基酸序列中氨基酸残基的每一删除、插入、取代或添加——与第一氨基酸序列相比——都视作在单一氨基酸残基(位置)上的差异，即，视作本文所定义的“氨基酸差异”；或两种氨基酸序列之间的序列同一性程度可以使用适合的计算机算法或技术进行计算或确定，也如在WO 08/020079(结合在本文作为参考)的第49和50页的段落f)中所述。
此外，在确定两种氨基酸序列之间的序列同一性程度时，熟练的技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸取代，如在WO 08/020079的第50页所述。
用于本文所述的多肽的任何氨基酸取代还可以基于Schulz等，蛋白质结构原理(Principles of Protein Structure)，Springer-Verlag，1978研究的不同物种的同源蛋白之间的氨基酸变异频率的分析，基于Chou和Fasman，生物化学(Biochemistry)13：211，1974和高级酶学(Adv.Enzymol.)，47：45-149，1978研究的结构形成潜力的分析，和基于Eisenberg等，美国国家科学院学报(Proc.Nad.Acad Sci.USA)81：140-144，1984；Kyte和Doolittle；分子生物学杂志(J Molec.Biol.).157：105-132，1981，以及Goldman等，物理化学综述年刊(Ann.Rev.Biophys.Chem.).15：321-353，1986研究的蛋白中疏水模式的分析，所有这些通过引用完全结合于此。在本文描述和上文引用的公知背景技术中给出关于纳米抗体的一级、二级和三级结构的信息。此外，出于这一目的，例如，Desmyter等，自然结构生物学(Nature Structural Biology)，卷3，9，803(1996)；Spinelli等，自然结构生物学(Natural Structural Biology)(1996)；3，752-757；和Decanniere等，结构(Structure)，卷7，4，361(1999)给出来自美洲驼(llama)的VHH结构域的晶体结构。关于在常规VH结构域中形成VH/VL界面的一些氨基酸残基和在这些位置的潜在的骆驼源化(camelizing)取代的其它信息可以在上文引用的现有技术中找到。
g)如果在它们的全长有100％的序列同一性(如本文所定义)，那么认为氨基酸序列和核酸序列“完全相同”。
h)当比较两种氨基酸序列时，术语“氨基酸差异”是指与第二序列相比，在第一序列位置上的单个氨基酸残基的插入、删除或取代；应该理解两种氨基酸序列可以包含1个、2个或多个这样的氨基酸差异。
i)当认为核苷酸序列或氨基酸序列分别“包括”另一个核苷酸序列或氨基酸序列，或“基本由”另一个核苷酸序列或氨基酸序列“组成”时，其具有在WO 08/020079的第51-52页上的段落i)给出的意义。
j)术语“(以)基本上分离的(形式)”具有在WO 08/020079的第52-53页上的段落j)中给出的意义；
k)术语“结构域”和“结合结构域”具有在WO 08/020079的第53页上的段落k)中给出的意义；
l)术语“抗原决定簇”和“表位”在本文中还可以互换地使用，具有在WO 08/020079的第53页上的段落l)中给出的意义；
m)如在WO 08/020079的第53页上的段落m)中进一步所述，对于特定的抗原决定簇、表位、抗原或蛋白(或对于至少其的一部分、片段或表位)可以(特异性)结合、具有亲和性和/或具有特异性的氨基酸序列(诸如本发明的纳米抗体、抗体、多肽，或通常为抗原结合蛋白或多肽或其片段)认为是“针对(against)”或者“针对(directed against)”所述抗原决定簇、表位、抗原或蛋白。
n)术语“特异性”具有在WO 08/020079的第53-56页上的段落n)中给出的意义；并且如本文提及是指特定的抗原-结合分子或抗原-结合蛋白(诸如本发明的纳米抗体或多肽)分子可以结合的许多不同类型的抗原或抗原决定簇的数目。一种抗原-结合蛋白的特异性可以依据亲和性和/或抗体亲抗原性(avidity)而确定。亲和性，如在WO 08/020079(结合在本文中作为参考)的第53-56页中所述，其还描述用于测量在抗原结合分子(如本发明的纳米抗体或多肽)和相关抗原之间的结合的一些优选的技术。典型地，抗原-结合蛋白(诸如本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽)将以10-5-10-12摩尔/升(M)或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升(M)或更小并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))而结合它们的抗原。任何大于104摩尔/升的KD值(或任何小于104M-1的KA值)升/摩尔通常认为指示非特异性结合。优选地，本发明的单价免疫球蛋白序列将以小于500nM、优选地小于200nM、更优选地小于10nM诸如小于500pM的亲和性与理想的抗原结合。抗原-结合蛋白与抗原或抗原决定簇的特异性结合可以以本身已知的任何适当的方法确定，其包括，例如，斯卡查德分析和/或竞争结合检测，诸如放射性免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心式(sandwich)竞争测定，和本领域本身已知的其不同的变化；以及本文提及的其它技术。如技术人员清楚的，并且如在WO 08/020079的第53-56页上所述，解离常数可以是实际的或表观解离常数。确定解离常数的方法对于熟练的技术人员应该是清楚的，并且例如，包括WO 08/020079的第53-56页上提及的技术。
o)本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的半衰期通常可以如在WO 08/020079的第57页上的段落o)所述，并且在本文是指所述氨基酸序列、化合物或多肽的血清浓度在体内减少50％所花费的时间，例如，由于所述序列或化合物的降解和/或通过天然机制对所述序列或化合物的清除或螯合(sequestration)。本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的体内半衰期可以以本身已知的任何方式确定，诸如通过药物动力学分析。适当的技术对于本领域熟练的技术人员应该是清楚的，并且可以例如在WO 08/020079的第57页上的段落o)所述。如在WO 08/020079的第57页上的段落o)所述，半衰期可以使用参数如t1/2-α，t1/2-β和曲线下面积(AUC)表示。例如，参考下述实验部分，以及标准手册，诸如Kenneth，A等：药物的化学稳定性：药剂师手册(Chemical Stability of Pharmaceuticals：A Handbook forPharmacists)和Peters等，药物动力学分析：实践方法(Pharmacokinete analysis：APractical Approach)(1996)。还参考″药物动力学(Pharmacokinetics)″，M Gibaldi和DPerron，Marcel Dekker出版，第2综述版(2nd Rev.edition)(1982)。术语“半衰期增加”或“增加的半衰期”也如WO 08/020079的第57页段落o)所定义，并且特别是指t1/2-β的增加，具有或不具有t1/2-α和/或AUC或二者的增加。
p)在本发明的上下文中，“调节(modulating)”或“调节(to modulate)”通常意指减少或抑制靶标或抗原的活性，或备选地增加靶标或抗原的活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法测量的。特别地，“调节(modulating)”或“调节(to modulate)”可以意指减少或抑制靶标或抗原的活性，或备选地增加靶标或抗原的(相关或目的)生物学活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法(其通常将取决于包括的靶标或抗原)测量的，与在相同条件但不存在本发明的构建体的条件下，在相同测定中的所述靶标或抗原的活性相比较，减少或抑制至少1％，优选至少5％，诸如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％或更多。
熟练的技术人员应该清楚，“调节”还可以包括与相同条件但不存在本发明的构建体相比较，对靶标或抗原对其结合配偶体、缔合成同源多聚体或异源多聚体形式的配偶体的一种或多种的亲和性、抗体亲抗原性、特异性和/或选择性施加改变(其可以是增加或减少)；和/或对所述靶标或抗原对于在所述靶标或抗原存在于其中的介质或环境的一种或多种条件(诸如pH、离子强度、辅因子的存在、等等)的敏感性施加改变(其可以是增加或减少)。熟练的技术人员应该清楚，这同样可以以适当的方式和/或使用本身已知的任何适当的测定法来确定，这取决于所包括的靶标或抗原。
“调节”还可以意指对包括所述靶标或抗原(或其中包括其结合配偶体或途径，如其信号传导途径或代谢途径以及它们相关的生物学或生理学作用)的一种或多种生物学或生理学机制、作用、反应、功能、途径或活性施加改变(即，分别作为激动剂、作为拮抗剂或作为反激动剂的活性，这取决于所述靶标或抗原和需要的生物学或生理学作用)。同样，熟练的技术人员应该清楚，这样的作为激动剂或拮抗剂的作用可以以任何适当方式和/或使用本身已知的任何适当的(体外且通常是细胞或体内测定法)测定法确定，这取决于所包括的靶标或抗原。特别地，作为激动剂或拮抗剂的作用可以是这样的，以致与在相同条件下但不存在本发明的构建体的相同测定法中的生物学或生理学活性相比，分别将目的生物学或生理学活性增加或减少至少1％，优选至少5％，诸如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％或更多。
例如，调节还可以包括所述靶标或抗原的别构调节；和/或减少或抑制所述靶标或抗原与其结合配偶体之一的结合和/或与天然配偶体竞争与所述靶标或抗原的结合。调节还可以包括激活所述靶标或抗原或其中包括所述靶标或抗原的机制或途径。例如，调节还可以包括对所述靶标或抗原的折叠或构象、或对所述靶标或抗原折叠的能力施加改变，以改变其构象(例如，在与结合配偶体结合时)，以与其他(亚)基缔合，或以解聚。例如，调节还可以包括对所述靶标或抗原转运其他化合物或作为其他化合物(诸如离子)的通道的能力施加改变。
调节可以是可逆的或不可逆的，但是对于制药学和药学目的，通常应该是以可逆的方式。
q)关于靶标或抗原，术语在所述靶标或抗原上的“相互作用位点”意指在所述靶标或抗原上的位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列，其是所述靶标或抗原的用于结合受体或其他结合配偶体的位点、催化位点、分解位点、别构相互作用的位点、参与多聚体化(如同源多聚体化或异源多聚体化)的位点；或是在所述靶标或抗原上的参与所述靶标或抗原的生物学作用或机制的任何其他位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列。更一般地，“相互作用位点”可以是在所述靶标或抗原上的本发明的氨基酸序列或多肽可以与之结合的任何位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列，以致调节(如本文定义)所述靶标或抗原(和/或其中包括所述靶标或抗原的任何途径、相互作用、信号传导、生物学机制或生物学作用)。
r)认为这样的氨基酸序列或多肽是对第一靶标或抗原“特异性的”，即，与第二靶标或抗原相比较，当与第一抗原以是所述氨基酸序列或多肽与第二靶标或多肽结合的亲和力的至少10倍、如至少100倍、且优选至少1000倍、且多至10000倍或更多的亲和力(如上述，且适当表示为KD值、KA值、koff-速率和/或kon-速率)结合时。例如，所述第一抗原可以以比所述氨基酸序列或多肽与所述第二靶标或多肽结合的KD小至少10倍、如小至少100倍、且优选小至少1000倍、如小10000倍或者甚至更小的KD值结合所述靶标或抗原。优选地，当氨基酸序列或多肽与第二靶标或抗原相比较对第一靶标或抗原是“特异性的”时，它针对(如本文定义)所述第一靶标或抗原，但是不针对所述第二靶标或抗原。
s)术语“交叉阻断(cross-block)”，“交叉阻断的(cross-blocked)”和“交叉阻断(cross-blocking)”在本文可以互换使用，用来意指氨基酸序列或其他结合试剂(如本发明的多肽)干扰本发明的其他氨基酸序列或结合试剂与给定靶标的结合的能力。本发明的氨基酸序列或其他结合试剂能够干扰另一种对靶标的结合的程度，且因此其能否被认为是本发明所述的交叉阻断的，可以使用竞争结合测定法确定。一种特别适当的定量交叉阻断测定法使用Biacore机器，其可以使用表面等离子体共振技术测量相互作用的程度。另一种适当的定量交叉阻断测定法使用基于ELISA的方法来测量氨基酸序列或其他结合试剂之间对于它们与所述靶标的结合的竞争。
以下概括描述用于确定氨基酸序列或其他结合试剂是否交叉阻断或按照本发明能够交叉阻断的适当的Biacore测定法。应该理解，所述测定法可以与本文所述的任何氨基酸序列或其他结合试剂一起使用。按照供应商的建议使用Biacore机器(例如，Biacore3000)。因此，在一种交叉阻断测定法中，使用标准胺偶联化学将目标蛋白偶联到CM5Biacore芯片上，以产生由所述靶标包被的表面。典型地，200-800个共振单位的靶标将被偶联到芯片上(易于给出可测量水平的结合但是易于被所用的测试试剂的浓度饱和的量)。将两种待检测它们彼此交叉阻断的能力的测试氨基酸序列(称为A*和B*)以结合位点1∶1摩尔比例混合在适当的缓冲液中，以产生测试混合物。当基于结合位点计算浓度时，假设氨基酸序列的分子量是氨基酸序列的总分子量除以所述氨基酸序列上的靶标结合位点的数目。测试混合物中每种氨基酸序列的浓度应该足够高，足以易于饱和所述氨基酸序列关于捕获在Biacore芯片上的靶标分子的结合位点。在所述混合物中的氨基酸序列处于相同的摩尔浓度(基于结合)，且所述浓度典型地为1.00-1.5微摩尔(基于结合)。还制备仅包含A*和仅包含B*的分开的溶液。在这些溶液中的A*和B*应该处在与在所述测试混合物中相同的缓冲液中和相同的浓度。将测试混合物通过靶标-包被的Biacore芯片，且记录结合的总量。然后，以这样的方式处理芯片，以在不损坏芯片-结合的靶标的条件下去除结合的氨基酸序列。典型地，这通过用30mM HCl处理芯片60秒进行。然后，将仅有A*的溶液通过靶标-包被的表面，并记录结合的量。同样处理芯片，以在不损坏芯片-结合的靶标的条件下去除所有结合的氨基酸序列。然后，将仅有B*的溶液通过靶标-包被的表面，并记录结合的量。接着计算A*和B*混合物的最大理论结合，且为每种氨基酸序列在单独通过靶标表面时的结合的总和。如果实际记录的混合物的结合小于该理论最大值，则该两种氨基酸序列彼此是交叉阻断的。因此，通常，按照本发明的交叉阻断的氨基酸序列或其他结合试剂是一种将在上述Biacore交叉阻断测定法中与靶标结合的，以致在该测定法中且在存在本发明的第二氨基酸序列或其他结合试剂时，所记录的结合是组合的两种氨基酸序列或结合试剂的最大理论结合(如上文定义)的80％-0.1％(例如，80％-4％)，特别地是最大理论结合的75％-0.1％(例如，75％-4％)，且更特别地是最大理论结合的70％-0.1％(例如，70％-4％)。上述Biacore测定法是用来确定氨基酸序列或其他结合试剂彼此是否是按照本发明交叉阻断的主要测定法。在很少的情形中，特定的氨基酸序列或其他结合试剂可能不与通过胺化学偶联到CM5Biacore芯片上的靶标结合(这通常在靶标上的相关结合位点通过与芯片的偶联而被遮蔽或破坏时发生)。在这样的情形中，交叉阻断可以使用标记形式的靶标，例如N端His-标记的形式确定。以这种特定的形式，抗-His氨基酸序列将被偶联到Biacore芯片上，然后将His-标记的靶标通过芯片表面，并被所述抗-His氨基酸序列捕获。交叉阻断分析将基本上按照上述进行，除了在每次芯片再生循环之后，新的His-标记的靶标将被重新负载到抗-His氨基酸序列包被的表面上。除了使用N端His-标记的靶标给出的实例之外，可以备选地使用C端His-标记的靶标。此外，本领域已知的各种其他标记和标记结合蛋白组合可以用于这样的交叉阻断分析(例如，具有抗-HA抗体的HA标记；具有抗-FLAG抗体的FLAG标记；具有链霉抗生物素蛋白的生物素标记)。
下述概括描述用于确定针对靶标的氨基酸序列或其他结合试剂是否交叉阻断或如本文所定义那样能够交叉阻断的ELISA测定法。应该理解，所述测定法可以与本文所述的任何氨基酸序列(或其他结合试剂，如本发明的多肽)一起使用。本测定法的一般原理是使得针对所述靶标的氨基酸序列或结合试剂包被到ELISA平板的孔上。将过量的量的第二、潜在的交叉阻断、抗-靶标氨基酸序列添加到溶液中(即，不与ELISA平板结合)。然后将有限量的靶标添加到孔中。所述包被的氨基酸序列和溶液中的氨基酸序列竞争与有限量的靶标分子的结合。洗涤平板，以去除未与包被的氨基酸序列结合的过量的靶标，且还去除第二、溶液相氨基酸序列以及在所述第二、溶液相氨基酸序列和靶标之间形成的任何复合物。然后，使用适于检测所述靶标的试剂测量结合的靶标的量。相对于在不存在第二、溶液相的氨基酸序列的条件下所述包被的氨基酸序列可以结合的靶标分子的数量，溶液中能够交叉阻断所包被的氨基酸序列的氨基酸序列将能够引起所述包被的氨基酸序列可以结合的靶标分子的数量的减少。在其中选择第一氨基酸序列如Ab-X作为固定的氨基酸序列的情形中，它被包被到ELISA平板的孔上，之后使用适当的封闭溶液来封闭该平板，以最小化随后添加的试剂的非特异性结合。然后，将过量的量的第二氨基酸序列如Ab-Y添加到该ELISA平板中，以致在包被所述ELISA平板的过程中，每孔Ab-Y靶标结合位点的摩尔数比每孔所用的Ab-X靶标结合位点的摩尔数高至少10倍。然后，加入靶标，以致每孔加入的靶标的摩尔数比用于包被每孔的Ab-X靶标结合位点的摩尔数低至少25倍。在适当的温育时间之后，洗涤ELISA平板，且加入用于检测所述靶标的试剂，以测量由所述包被的抗-靶标氨基酸序列(在该情形中为Ab-X)特异结合的靶标的量。关于该测定法的背景信号定义为在使用所述包被的氨基酸序列(在该情形中为Ab-X)、第二溶液相氨基酸序列(在该情形中为Ab-Y)、仅有靶标缓冲剂(即，无靶标)和靶标检测试剂的孔中获得的信号。关于该测定法的阳性对照信号定义为在使用所述包被的氨基酸序列(在该情形中为Ab-X)、仅有第二溶液相氨基酸序列缓冲剂(即，无第二溶液相氨基酸序列)、靶标和靶标检测试剂的孔中获得的信号。该ELISA测定法可以以这样的方式运行，以使得阳性对照信号是背景信号的至少6倍。为了避免由选择哪种氨基酸序列用作包被氨基酸序列和哪种用作第二(竞争剂)氨基酸序列导致的任何假象(例如，Ab-X和Ab-Y之间对于靶标的显著不同的亲和力)，该交叉阻断测定法可以以两种形式运行：1)形式1是其中Ab-X是包被到ELISA平板上的氨基酸序列，Ab-Y是在溶液中的竞争氨基酸序列，和2)形式2是其中Ab-Y是包被到ELISA平板上的氨基酸序列，Ab-X是在溶液中的竞争氨基酸序列。如果在形式1或在形式2中，与在不存在溶液相抗-靶标氨基酸序列的条件下(即，阳性对照孔)获得的靶标检测信号相比较，所述溶液相抗-靶标氨基酸序列能够引起靶标检测信号(即，由所述包被的氨基酸序列结合的靶标的量)减少60％-100％，特别地70％-100％，且更特别地80％-100％，则Ab-X和Ab-Y被定义为是交叉阻断的。
t)如果它对于这两种不同的抗原或抗原决定簇是特异性的(如本文定义)，则认为氨基酸序列对于两种不同的抗原或抗原决定簇(如例如来自哺乳动物的两个不同物种的血清白蛋白，如例如人血清白蛋白和猕猴血清白蛋白，如例如病毒的不同毒株的相同包膜蛋白，如例如病毒的不同基因型的相同包膜蛋白)是“交叉反应的”。
u)“基本上不依赖pH”的结合在本文通常意指在动物或人体细胞内存在的pH值(如本文进一步所述)氨基酸序列对血清蛋白(如血清白蛋白)的缔合常数(KA)是在所述细胞外存在的pH值所述氨基酸序列对相同血清蛋白的缔合常数(KA)的至少5％，如至少10％，优选至少25％，更优选至少50％，甚至更优选至少60％，如甚至更优选至少70％，如至少80％或90％或更多(或甚至大于100％，如大于110％，大于120％或甚至130％或更多，或甚至大于150％，或甚至大于200％)。备选地，“基本上不依赖pH”的结合在本文通常意指在动物或人体细胞内存在的pH值(如本文进一步所述，例如5.5左右的pH，例如5.3-5.7)氨基酸序列对血清蛋白(如血清白蛋白)的koff速率(通过Biacore测量)是在所述细胞外存在的pH值如pH7.2-7.4所述氨基酸序列对相同血清蛋白的koff速率的至少5％，如至少10％，优选至少25％，更优选至少50％，甚至更优选至少60％，如甚至更优选至少70％，如至少80％或90％或更多(或甚至大于100％，如大于110％，大于120％或甚至130％或更多，或甚至大于150％，或甚至大于200％)。“在动物或人体细胞内存在的pH值”意指可能在细胞内，且特别是在参与血清蛋白再循环的细胞内存在的pH值。特别地，“在动物或人体细胞内存在的pH值”意指可能存在于参与血清蛋白的再循环(例如，作为胞饮作用、内吞作用、胞转作用、胞外分泌和吞噬作用或类似的摄入或在所述细胞内内在化的机制)的(亚)细胞区室或小泡内如内涵体、溶酶体或胞饮泡内的pH值。
v)如本文进一步所述，纳米抗体中氨基酸残基总数可以在110-120区间，优选112-115，并且最优选113。然而，应该注意纳米抗体的部分、片段、类似物或衍生物(如本文进一步所述)不特别局限于它们的长度和/或大小，只要这样的部分、片段、类似物或衍生物满足本发明列出的深层要求，并且还优选地适于本文所述的目的；
w)如在WO 08/020079(结合在本文作为参考)的第58和第59页的段落q)中进一步所述，纳米抗体的氨基酸残基按照Kabat等(“免疫学目的蛋白的序列(Sequence ofproteins of immunological interest)”，美国公众健康服务中心(US Public HealthServices)，NIH Bethesda，MD，Publication No.91)给出的关于VH结构域的通用编号方式进行编号，这种编号方式在Riechmann和Muyldermans，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)2000年6月23日；240(1-2)：185-195的文章中用于来自骆驼科动物的VHH结构域(例如，参见本公布的图2)，并且因此纳米抗体的FR1包括位置1-30的氨基酸残基，纳米抗体的CDR1包括位置31-35的氨基酸残基，纳米抗体的FR2包括位置36-49的氨基酸，纳米抗体的CDR2包括位置50-65的氨基酸残基，纳米抗体的FR3包括位置66-94的氨基酸残基，纳米抗体的CDR3包括位置95-102的氨基酸残基，以及，纳米抗体的FR4包括位置103-113的氨基酸残基。
x)在本发明的上下文中，“(病毒的)靶宿主细胞”通常是指特定的细胞，其是或来自活的受试体，对于所述病毒的感染敏感。
y)术语“病毒的感染性”，用于本文时，指当暴露于所述病毒时，实际上被所述病毒所感染的活的受试者的比例。
z)术语“病毒的中和”，用于本文时，指通过将中和化合物与病毒体结合来调节和/或减少和/或预防和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的。具体地，“中和(病毒)(neutralizing(a virus))”或“中和(病毒)(to neutralize(a virus))”可以意为调节、减少、防止或抑制病毒的感染性(如本文定义)(其可以通过病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体所介导)，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的，与在相同的条件下，但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的情况下，在相同的测定法中，由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的病毒的正常(即天然存在)的感染性(如本文定义)相比，所述调节、减少、防止或抑制病毒的感染性至少1％，优选地至少5％，如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％或更多。
aa)术语“病毒附着蛋白”，用于本文时，是这样的任一种蛋白，其存在于病毒体表面上，并且能够直接(例如通过与病毒受体相互作用)或间接(例如通过介导一种或多种其它蛋白或分子与病毒受体的相互作用)介导病毒附着于靶宿主细胞。
bb)术语“病毒融合蛋白”，用于本文时，是这样的任一种蛋白，其存在于病毒体表面上，并且能够直接(例如通过与靶宿主细胞的膜化合物相互作用)或间接(例如通过介导一种或多种其它蛋白或分子与靶宿主细胞的膜化合物的相互作用)介导病毒融合于靶宿主细胞。
cc)术语“病毒附着和病毒融合蛋白”，用于本文时，是这样的任一种蛋白，其存在于病毒体表面上，并且能够直接(例如通过与病毒受体和/或靶宿主细胞的膜化合物相互作用)或间接(例如通过介导一种或多种其它蛋白或分子与病毒受体和/或靶宿主细胞的膜化合物的相互作用)介导病毒附着和病毒融合于靶宿主细胞。
dd)术语“(病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白)的融合前构象状态”，用于本文时，指在病毒体与其靶宿主细胞融合过程之前和/或过程中，病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白的初级和/或二级和/或三级和/或四级构象状态，其中所述病毒体具有暴露在其表面上的所述病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白。
ee)术语“(病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白)的中间融合构象状态”，用于本文时，指在病毒体与其靶宿主细胞融合过程中，病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白的初级和/或二级和/或三级和/或四级构象状态，其中所述病毒体具有暴露在其表面上的所述病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白。
ff)术语“(病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白)的融合后构象状态”，用于本文时，指在病毒体与其靶宿主细胞融合过程中和/或之后，病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白的初级和/或二级和/或三级和/或四级构象状态，其中所述病毒体具有暴露在其表面上的所述病毒(附着，融合，或附着和融合)蛋白。
gg)术语“病毒受体”，用于本文时，指细胞的具体分子成分，其能够识别并且与病毒相互作用，并且在结合于所述病毒后，其能够产生起始导致生物学反应的事件链的信号。
hh)术语“病毒进入”用于本文时，包括完成病毒体附着于靶宿主细胞和/或病毒融合于靶宿主细胞所需要的任何病毒介导的生物学途径。本发明包括可以是完成病毒体附着于靶宿主细胞和/或病毒融合于靶宿主细胞所需要的任何病毒-介导的生物学途径的病毒进入，可以通过本发明的氨基酸序列，纳米抗体，多肽和/或化合物特异性结合于病毒的包膜蛋白来进行调节和/或减少和/或预防和/或抑制，如使用适合的体外/细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的。具体地，可以通过病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的病毒进入，可以通过本发明的氨基酸序列，纳米抗体，多肽和/或化合物与病毒的包膜蛋白特异性结合而被调节、减少、防止或抑制，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的，其与在相同的条件下，在不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和/或化合物的情况下的相同测定法中，可以通过病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的正常(即，天然存在)的病毒进入(如本文定义)比较，被调节、减少、防止或抑制至少1％，优选地至少5％，如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％以上。因此，还包括病毒附着和/或病毒融合可以通过本发明的氨基酸序列，纳米抗体，多肽和/或化合物与病毒的包膜蛋白特异性结合来进行调节和/或减少和/或防止和/或抑制，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的。具体地，可以通过病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的病毒附着和/或病毒融合，可以通过本发明的氨基酸序列，纳米抗体，多肽和/或化合物与病毒的包膜蛋白特异性结合来进行调节、减少、防止或抑制，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的，其与在相同条件下，但是不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和/或化合物的情况下，在相同的测定法中，可以由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的正常(即天然存在的)病毒附着和/或病毒融合相比，被调节、减少、防止或抑制至少1％，优选地至少5％，如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％以上。
ii)术语“病毒复制”用于本文时，包括完成病毒基因组的转录和/或翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜的出芽所需要的任何病毒介导的生物学途径。本发明包括可以是完成病毒基因组的转录和/或翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜的出芽所需要的任何病毒-介导的生物学途径的病毒复制，可以通过本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和/或化合物特异性结合于病毒的包膜蛋白来进行调节和/或减少和/或预防和/或抑制，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的。具体地，可以由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的病毒复制，可以通过本发明的氨基酸序列，纳米抗体，多肽和/或化合物与病毒的包膜蛋白特异性结合而被调节、减少、防止或抑制，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的，其与在相同的条件下，在不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和/或化合物的情况下的相同测定法中，可以通过病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的正常(即，天然存在)的病毒复制(如本文定义)比较被调节、减少、防止或抑制至少1％，优选地至少5％，如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％以上。因此，还包括病毒基因组的转录和/或翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜的出芽可以通过本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和/或化合物与病毒的包膜蛋白特异性结合来进行调节和/或减少和/或防止和/或抑制，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的。具体地，可以由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的病毒基因组的转录和/或翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜的出芽，可以通过本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和/或化合物与病毒的包膜蛋白特异性结合来进行调节、减少、防止或抑制，如使用适合的体外、细胞或体内测定法(如本文提及的那些)所测量的，其与在相同条件下，但是不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和/或化合物的情况下，在相同的测定法中，可以由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的正常(即天然存在的)病毒基因组的转录和/或翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜的出芽相比，被调节、减少、防止或抑制至少1％，优选地至少5％，如至少10％或至少25％，例如至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或90％以上。
jj)在本发明的上下文中，“病毒”可以是通常为本领域所公知的任何病毒。具体地，所述病毒可以选自由下列各项组成的组中：DNA病毒(如但不限于dsDNA病毒或ssDNA病毒)，RNA病毒(如但不限于dsRNA病毒，正义ssRNA病毒或负义ssRNA病毒)和反转录酶(RT)病毒(如但不限于dsDNA-RT病毒和ssRNA-RT病毒)。例如，所述病毒可以属于选自由下列各项组成的组中的病毒家族：正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副黏液病毒科(Paramyxoviridae)、丝状病毒科(Filoviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、冠状病毒科(Coronaviridae)，披膜病毒科(Togaviridae)和黄热病毒科(Flaviviridae)、杆状病毒科(Rhabdoviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、砂粒病毒科(Arenaviridae)、玻那病毒科(Bornaviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)和痘病毒科(Poxviridae)；并且所述病毒可以例如属于选自由甲病毒属(Alphaviruses)和黄病毒属(Flaviviruses)组成的组的病毒属中。因此，根据本发明所述的氨基酸序列、多肽和组合物可以针对任一前述病毒的包膜蛋白的至少一个表位，所述病毒选自由下列各项组成的组中：DNA病毒(如但不限于dsDNA病毒或ssDNA病毒)，RNA病毒(如但不限于dsRNA病毒，正义ssRNA病毒或负义ssRNA病毒)和反转录酶(RT)病毒(如但不限于dsDNA-RT病毒和ssRNA-RT病毒)。例如，所述病毒可以属于选自由下列各项组成的组中的病毒家族：正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副黏液病毒科(Paramyxoviridae)、丝状病毒科(Filoviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、冠状病毒科(Coronaviridae)，披膜病毒科(Togaviridae)和黄热病毒科(Flaviviridae)、杆状病毒科(Rhabdoviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、砂粒病毒科(Arenaviridae)、玻那病毒科(Bornaviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)和痘病毒科(Poxviridae)；并且具体地所述病毒可以属于选自由甲病毒属(Alphaviruses)和黄病毒属(Flaviviruses)组成的组的病毒属中。
kk)给出附图、序列表和实验部分/实施例只是进一步举例说明本发明，并且不应该被以任何方式解释为或者认为限制本发明和/或附上的权利要求的范围，除非本文中另外明确指明。
关于重链抗体及其可变结构域的概括描述，其中特别参考本文引用的现有技术，以及在WO 08/020079的第59页上提及的现有技术，还参考在国际申请WO 06/040153第41-43页提及的参考文献列表，该现有技术和参考文献通过引用结合于此。
按照本领域中所用的术语学(参见上述参考文献)，在天然存在的重链抗体中存在的可变结构域还叫作“VHH结构域”，以将它们与在常规的4-链抗体中存在的重链可变结构域(其在下文中叫作“VH结构域”)区分，以及与在常规4-链抗体中存在的轻链可变结构域(其在下文中叫作“VL结构域”)区分。
如在上文提到的现有技术中提及，VHH结构域具有许多独特的结构特征和功能特性，这使得分离的VHH结构域(以及基于此的纳米抗体，其与天然存在的VHH结构域一起具有这些结构特征和功能特性)以及包含其的蛋白高度有利地用作功能性抗原-结合结构域或蛋白。特别地，并且不限于此，VHH结构域(其天然地就“设计”为功能性地结合抗原，而无需存在轻链可变结构域，并且无需与轻链可变结构域的任何相互作用)和纳米抗体可以作用为单一的、相对小的、功能性抗原-结合结构单位、结构域或蛋白。这将VHH结构域与常规4-链抗体的VH和VL结构域区分开，其本身通常不适合作为单一抗原-结合蛋白或结构域用于实际应用，但是需要以某种形式或另一蛋白或结构域结合以提供功能性抗原-结合单位(例如，在常规抗体片段诸如Fab片段中；在ScFv’s片段中，其由共价连接到VL结构域上的VH结构域组成)。
由于这些独特的特性，VHH结构域和纳米抗体用作单一抗原-结合蛋白或用作抗原-结合结构域(即，作为更大的蛋白或多肽的部分)提供许多优于常规VH和VL结构域、scFv’s或常规抗体片段(诸如Fab-或F(ab’)2-片段)应用的显著优点，包括在WO 08/020079的第60和第61页上列出的优点。在一个具体并且优选的方面中，本发明提供针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体，和具体地针对能够感染温血动物的病毒的包膜蛋白的纳米抗体，和更具体地针对能够感染哺乳动物的病毒的包膜蛋白的纳米抗体，尤其是针对人病毒的包膜蛋白的纳米抗体；以及包含至少一种所述纳米抗体的蛋白和/或多肽。
特别地，本发明提供针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体，和包括其的蛋白和/或多肽，与常规针对病毒的包膜蛋白的抗体或其片段相比，与可基于所述常规抗体或抗体片段的构建体(如Fab’片段，F(ab’)2片段，ScFv构建体，“二抗体”和其他多特异性构建体(参见例如Holliger和Hudson，Nat Biotechnol.(自然生物技术)2005年9月；23(9)：1126-36)的综述)相比，且还与所谓的“dAb’s”或来源于常规抗体的可变结构域相似的(单)结构域抗体相比，其具有提高的治疗和/或药学特性和/或其他有利特性(诸如，例如，改进的制备容易性和/或减少的商品成本)。这些提高的和有利的特性将通过本文的进一步描述变得清楚，且例如包括但不限于，下述各项的一种或多种：
-提高的针对病毒的包膜蛋白的亲和性和/或抗体亲抗原性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价或三价形式)和/或以多特异性形式(例如，本文所述的多特异性形式之一)；
-对于以多价形式(例如，以二价或三价形式)格式化的更好的适合性；
-对于以多特异性形式(例如，本文所述的多特异性形式之一)格式化的更好的适合性；
-提高的对“人源化”取代(如本文定义)的适合性或易感性；
-更小的免疫原性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价或三价形式)和/或以多特异性形式(例如，本文所述的多特异性形式之一)；
-增加的稳定性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价或三价形式)和/或以多特异性形式(例如，本文所述的多特异性形式之一)；
-增加的针对病毒的包膜蛋白的特异性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价或三价形式)和/或以多特异性形式(例如，本文所述的多特异性形式之一)；
-减少或在需要时提高与来自不同物种的病毒的包膜蛋白的交叉反应性；
和/或
-一种或多种药学应用(包括预防应用和/或治疗应用)和/或诊断应用(包括但不限于成像目的)需要的其他改善的特性，不论以单价形式，以多价形式(例如，以二价或三价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)。
如本文关于本发明的氨基酸序列概括所述，本发明的纳米抗体优选以基本上分离的形式(如本文定义)存在，或形成本发明的蛋白或多肽(如本文定义)的一部分，其可以包括一个或多个本发明的纳米抗体或基本上由其组成，且其可以任选地还包括一个或多个其他氨基酸序列(所有任选地通过一个或多个适当的接头连接)。例如，且不限于，所述本发明的一个或多个氨基酸序列可以在所述蛋白或多肽中用作结合单位，其可以任选地包含一个或多个可以作为结合单位的其他氨基酸序列(即，针对除病毒的包膜蛋白外的一个或多个其他的靶标)，以分别提供单价的、多价的或多特异性的本发明的多肽，所有均如本文所述。特别地，这样的蛋白或多肽可以包括一个或多个本发明的纳米抗体和任选地一个或多个(其他)纳米抗体(即，针对除病毒的包膜蛋白外的其他的靶标)或基本上由其组成，所有均任选地通过一个或多个适当的接头连接，以分别提供单价的、多价的或多特异性的纳米抗体构建体，如本文进一步所述。这样的蛋白或多肽也可以以基本上分离的形式(如本文定义)存在。
在本发明的纳米抗体中，用于针对病毒的包膜蛋白结合的结合位点优选地由CDR序列形成。任选地，本发明的纳米抗体还可以，且除了用于针对病毒的包膜蛋白结合的至少一个结合位点之外，包含一个或多个用于针对其他抗原、蛋白或靶标结合的其他结合位点。对于引入所述第二结合位点的方法和位置，例如，参考Keck和Huston，BiophysicalJournal，(生物物理学杂志)71，1996年10月，2002-2011；EP 0 640 130和WO 06/07260。
如本文关于本发明的氨基酸序列概括所述，当意欲将本发明的纳米抗体(或包括其的本发明的多肽)施用给受试者时(例如，用于预防、治疗和/或诊断目的，如本文所述)，它优选地针对能够感染人的病毒的包膜蛋白；而对于兽医用目的，它优选地针对能够感染被治疗的物种的病毒的包膜蛋白。此外，如使用本发明的氨基酸序列，本发明的纳米抗体可以或可以不是交叉反应的(即，针对能够感染两种或多种哺乳动物物种的病毒的两种以上的同源包膜蛋白，如针对能够感染人和本文提及的至少一种哺乳动物物种的病毒的两种以上的同源包膜蛋白)。
本发明的纳米抗体对某些病毒的两种以上的不同基因型、亚型、病毒逃避突变型和/或毒株可以具有或可以不具有交叉反应性。在该方面中，本发明提供多价纳米抗体或多肽，与相应的单价纳米抗体相比，其显示对于某些病毒的不同基因型、亚型、病毒逃避突变型和/或毒株的增加的交叉反应性。在一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H1N1。在另一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H3N2。在另一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。在另一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H2N2。在又一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。在又一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H2N2以及流感亚型H3N2。在又一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H2N2。在又一个方面中，(多价)纳米抗体针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1，流感亚型H2N2以及流感亚型H3N2。在另一个方面中，(多价)纳米抗体针对狂犬病病毒并且可以结合狂犬病病毒基因型1以及基因型5。在又一个方面中，(多价)纳米抗体针对RSV并且可以结合RSV的不同毒株(如例如，Long，A-2和/或B-1)。在又一个方面中，(多价)纳米抗体针对RSV并且可以结合RSV的不同逃避突变型(如例如，在Lopez等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：6922-6928中所述)和/或特异于抗原性位点II、抗原性位点IV-VI或两种抗原性位点的组合的逃避突变型。
此外，同样如本文关于本发明的氨基酸序列所述，本发明的纳米抗体可以通常针对病毒的包膜蛋白的任何抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)。
然而，通常设想并且优选本发明的纳米抗体和氨基酸序列优选地针对相互作用位点(如本文定义)，并且具体地针对病毒的包膜蛋白的至少一个表位，以致其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的至少一种病毒-介导的生物学途径被抑制、防止和/或调节。
具体地，设想并且优选本发明的纳米抗体、多肽和组合物针对病毒的包膜蛋白的至少一个表位，从而使病毒进入靶宿主细胞中(如例如病毒体附着于靶宿主细胞和/或病毒与靶宿主细胞融合)和/或病毒在靶宿主细胞中复制(如例如病毒转录和/或病毒翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体形成和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜上出芽)被抑制、防止和/或调节。
所述纳米抗体和多肽可以针对病毒的包膜蛋白的至少一个表位，其是表面暴露的或位于由病毒的包膜蛋白形成的腔或裂缝中。优选地，本发明的纳米抗体和多肽针对相互作用位点(如本文定义)，并且具体地针对位于由融合蛋白的三聚体形成的腔或裂缝中的表位(如作为发夹三聚体或六螺旋束的融合蛋白三聚体)或融合蛋白的二聚体，其中所述融合蛋白可以以它们的融合前构象状态、中间构象状态或融合后构象状态存在。
此外，本发明的纳米抗体和多肽也可以针对位于融合蛋白的干区和/或颈区和/或球状头区中的表位。优选地，本发明的纳米抗体和多肽针对位于融合蛋白的干区中的表位，如例如针对位于包含流感HA的HA1亚基的氨基酸318-322的一个或多个的区域中的表位和/或位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸47-58的一个或多个的区域中的表位；针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸的1-38的一个或多个的N-端区域中的表位；针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸38-112的一个或多个的区域中的表位；针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸125-175的一个或多个的区域中的表位；或针对位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸176-185的一个或多个的区域中的表位。备选地，本发明的纳米抗体和多肽可以针对位于融合蛋白的球状头中的表位(其中所述球状头可以例如包含β-桶型结构或免疫球蛋白型β-夹层结构域和β-片层结构域)。
此外，具体地，本发明的纳米抗体和多肽可以优选地针对相互作用位点，其选自由下列各项组成的组：RSV病毒的A-抗原性位点和/或F-蛋白的氨基酸255-280，RSV病毒的F1a位点和/或包含F-蛋白的氨基酸389的区域，RSV病毒的F-蛋白的氨基酸422-438，流感病毒的H5HA包膜蛋白的唾液酸结合位点，狂犬病病毒的烟酸乙酰胆碱受体(AchR)和/或G-蛋白的神经细胞黏着分子(NCAM)结合位点(Thoulouze等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：7181-7190)。
最后，本发明的纳米抗体和多肽可以针对位于下列区域中中的任何表位：位于融合蛋白的C-端区域和/或在融合蛋白的N-端结构域和/或在包含融合蛋白的融合肽的区域中和/或在融合蛋白的跨膜结构域中和/或在融合蛋白的α-螺旋卷曲螺旋中和/或在融合蛋白的β-结构中和/或在融合蛋白的结构域I中和/或在融合蛋白的结构域II中，如例如在融合蛋白的结构域II的融合肽中，和/或在融合蛋白的结构域III中，如例如在融合蛋白的结构域III的C-端的干区中，或在融合蛋白的结构域III的C-端的跨膜锚定物中。
在一个方面中，本发明的纳米抗体和多肽针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。具体地，它们可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。
在另一个方面中，本发明的纳米抗体和多肽针对RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合。具体地，它们可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。
在又一个方面中，本发明的纳米抗体和多肽针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
在又一个方面中，本发明的纳米抗体和多肽针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb 179结合位点和/或能够与MAb 179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
在又一个方面中，本发明的纳米抗体和多肽针对狂犬病病毒G包膜蛋白上的MAb8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
此外，本发明的纳米抗体和多肽可以针对病毒的包膜蛋白的任何其它表位(例如接近前述表位之一的任何其它表位)。
因此，在一个优选，但非限制性的方面中，本发明的纳米抗体和多肽通常针对任何表位或具体地针对病毒的包膜蛋白的上述表位之一，并且如本文进一步定义。例如，所述表位可以存在于病毒的包膜蛋白上，所述包膜蛋白选自由下列各项组成的组：RSV病毒的F蛋白，RSV病毒的G蛋白，RSV病毒的SH蛋白，RSV病毒的M蛋白，RSV病毒的M2蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质，呼肠孤病毒1的σ1，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
因此，本发明的纳米抗体和多肽可以针对在病毒的包膜蛋白上存在的任何表位，其选自由下列各项组成的组：RSV病毒的F蛋白，RSV病毒的G蛋白，RSV病毒的SH蛋白，RSV病毒的M蛋白，RSV病毒的M2蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S 1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质，呼肠孤病毒1的σ1，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
如本文已经所述，可以认为纳米抗体的氨基酸序列和结构----然而，不限于此----包括4个构架区或“FR’s”(或有时还称为“FW’s”)，其在本领域和本文中分别称为“构架区1”或“FR1”；“构架区2”或“FR2”；“构架区3”或“FR3”；和“构架区4”或“FR4”；所述构架区由3个互补性决定区或“CDR’s”中断，其在本领域分别称为“互补性决定区1”或“CDR1”；“互补性决定区2”或“CDR2”；和“互补性决定区3”或“CDR3”。在本发明的纳米抗体中存在的一些优选的构架序列和CDR’s(及其组合)如本文所述。其他适当的CDR序列可以通过本文所述的方法获得。
按照本发明的非限制性但是优选的方面，本发明的纳米抗体(中存在的CDR序列)是这样的，以致：
-所述纳米抗体可以以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与病毒的包膜蛋白结合；
和/或这样，以致：
-所述纳米抗体可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M- 1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与病毒的包膜蛋白结合；
和/或这样，以致：
-所述纳米抗体可以以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与病毒的包膜蛋白结合。
优选地，本发明的纳米抗体(中存在的CDR序列)是这样的，以致：本发明的单价纳米抗体(或包含仅一个本发明的纳米抗体的多肽)优选是这样，以致它将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与病毒的包膜蛋白结合。
本发明的纳米抗体针对病毒的包膜蛋白的亲和性可以以本身已知的方式确定，例如，使用本文提及的用于测量KD.KA，koff或kon的通用技术，以及本文所述的一些具体的测定法确定。
对于本发明的纳米抗体(和包括其的多肽)与病毒的包膜蛋白结合的一些优选的IC50值将从本发明的进一步描述和实施例中变得清楚。
在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适合的片段。
具体地，根据该优选的但非限制性的方面，本发明涉及针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在更特别优选，但非限制性的方面中，本发明涉及针对人RSV病毒的F-蛋白的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
具体地，根据该优选的，但非限制性的方面，本发明涉及针对人RSV病毒的F-蛋白的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629；的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629；的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629；的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
在另一个特别优选，但非限制性的方面中，本发明涉及针对流感病毒的血凝素的纳米抗体(如本文定义)，和更特别地针对流感病毒的血凝素H5的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
具体地，根据该优选的但非限制性的方面，本发明涉及针对流感病毒的血凝素的纳米抗体(如本文定义)，和更特别地针对流感病毒的血凝素H5的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID N0’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
最后，在又一个特别优选的但非限制性的方面中，本发明涉及针对狂犬病病毒的G-蛋白的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组中
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组中
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
具体地，根据该优选的，但非限制性的方面，本发明涉及针对狂犬病病毒的G-蛋白的纳米抗体(如本文定义)，其由其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组中
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组中
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或所述氨基酸序列的任何适当的片段。
通常如本文关于本发明的氨基酸序列所提及的，当本发明的纳米抗体包含一个或多个b)和/或c)所述的CDR1序列时：
i)与a)所述的相对应CDR相比，在b)和/或c)所述的CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与a)所述的相对应CDR相比，b)和/或c)所述的CDR优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，b)和/或c)所述的CDR可以是来源于a)所述的CDR的CDR。
类似地，当本发明的纳米抗体包含e)和/或f)所述的一个或多个CDR2序列时：
i)与d)所述的相对应CDR相比，在e)和/或f)所述的CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与d)所述的相对应CDR相比，e)和/或f)所述的CDR优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，e)和/或f)所述的CDR可以是来源于d)所述的CDR的CDR。
此外，类似地，当本发明的纳米抗体包含h)和/或i)所述的一个或多个CDR3时：
i)与g)所述的相对应CDR相比，在h)和/或i)所述的CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与g)所述的相对应CDR相比，h)和/或i)所述的CDR优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)利用一种或多种本身已知的的亲和性成熟技术通过亲和性成熟的方式，h)和/或i)所述的CDR可以是来源于g)所述的CDR的CDR。
应该理解，最后三段落通常也适用于分别包括b)，c)，e)，f)，h)或i)所述的一个或多个CDR1序列、CDR2序列和/或CDR3序列的本发明的任何纳米抗体。
在本发明的纳米抗体中，包括一个或多个上文清楚列出的CDR’s的纳米抗体是特别优选的；包括两个或多个上文清楚列出的CDR’s的纳米抗体是更特别优选的；且包括三个上文清楚列出的CDR’s的纳米抗体是最特别优选的。
CDR序列的一些特别优选的而非限制性的组合，以及CDR序列和构架序列的优选的组合，在下表B-1中提及，其列出了在许多优选的(但非限制性的)本发明的纳米抗体中存在的CDR序列和构架序列。如熟练的技术人员应该清楚的，在同一克隆中存在的CDR1、CDR2和CDR3序列的组合(即，在表B-1中同一行中提及的CDR1、CDR2和CDR3序列)通常是优选的(尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，且还包括表B-1中提及的CDR序列的其他适当的组合)。此外，在同一克隆中存在的CDR序列和构架序列的组合(即，在表B-1中同一行中提及的CDR序列和构架序列)通常是优选的(尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，且还包括表B-1中提及的CDR序列和构架序列的其他适当的组合，以及所述CDR序列和其他适当的构架序列的组合，例如，如本文进一步所述)。
此外，在包括表B-1中提及的CDR’s组合的本发明纳米抗体中，每个CDR可以被选自由与所提及的CDR’s具有至少80％、优选至少90％、优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组的CDR替换；其中：
i)与表B-1中提及的相对应的CDR序列相比较，在这样的CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或
ii)与表B-1中提及的相对应的CDR序列相比较，任何所述CDR序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；
和/或
iii)任何所述CDR序列是通过通过本身已知的用于亲和力成熟的技术得到的CDR，并且其特别起始自如表B-1中提及的相应的CDR序列。
然而，如熟练的技术人员应该清楚的，表B-1中提及的CDR序列(的组合)、以及CDR序列和构架序列(的组合)通常是优选的。
因此，在本发明的优选纳米抗体中，存在的CDR1，CDR2和CDR3序列中的至少一个适当分别选自由在表B-1中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组；或分别选自这样的CDR1，CDR2和CDR3序列的组，所述CDR1，CDR2和CDR3序列与在表B-1中分别列出的CDR1，CDR2和CDR3序列的至少一个具有至少80％，优选地至少90％，更优选地至少95％，甚至更优选地至少99％的“序列同一性”(如本文定义)；和/或分别选自这样的CDR1，CDR2和CDR3序列的组，所述CDR1，CDR2和CDR3序列与在表B-1中分别列出的CDR1，CDR2和CDR3序列的至少一个具有3，2或仅1个“氨基酸差异”(如本文定义)。
在该情形中，“适当选择”意指，在适用时，分别地，CDR1序列选自适当的CDR1序列(即，如本文定义)，CDR2序列选自适当的CDR2序列(即，如本文定义)，和CDR3序列选自适当的CDR3序列(即，如本文定义)。更特别地，CDR序列优选这样选择，以致本发明的纳米抗体以本文定义的亲和性(适当测量的和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地表示为IC50值，如本发明进一步所述)结合病毒的包膜蛋白。
特别地，在优选的本发明的纳米抗体中，至少存在的CDR3序列适当地选自由表B-1中列出的CDR3序列组成的组，或选自由与表B-1中列出的至少一种CDR3序列具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR3序列组成的组；和/或选自由与表B-1中列出的至少一种CDR3序列具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR3序列组成的组。
优选地，在本发明的纳米抗体中，存在的CDR1，CDR2和CDR3序列中的至少两种适当地分别选自由表B-1中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组，或分别选自与分别在表B-1中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列的至少之一具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的“序列同一性”的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组；和/或分别选自由分别与表B-1中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列的至少一种具有3、2或仅有1个“氨基酸差异”的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组。
特别地，在本发明的纳米抗体中，至少存在的CDR3序列适当地选自由表B-1中列出的CDR3序列组成的组，或选自由与表B-1中列出的CDR3序列的至少一种具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR3序列组成的组；和存在的CDR1和CDR2序列中的至少之一适当地分别选自分别由表B-1中列出的CDR1和CDR2序列组成的组，或分别选自由分别与表B-1中列出的CDR1和CDR2序列的至少之一具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR1和CDR2序列组成的组；和/或分别选自由分别与表B-1中列出的CDR1和CDR2序列的至少之一具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR1和CDR2序列组成的组。
最优选地，在本发明的纳米抗体中，所有三种存在的CDR1，CDR2和CDR3序列适当地分别选自由分别在表B-1中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组；或分别选自与分别在表B-1中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列中的至少之一具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的“序列同一性”的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组；和/或分别选自由分别与表B-1中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列中的至少之一具有3、2或仅有1个“氨基酸差异”的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组。
甚至更优选地，在本发明的纳米抗体中，存在的CDR1，CDR2和CDR3序列中的至少之一适当地分别选自由表B-1列出的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组。优选地，在该方面中，存在的另外两种CDR序列中的至少一种或优选地两种适当地分别选自与表B-1列出的相对应的CDR序列中的至少之一具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR序列，和/或分别选自由与表B-1列出的相对应的序列中的至少之一具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组。
特别地，在本发明的纳米抗体中，至少存在的CDR3序列选自由表B-1列出的CDR3序列组成的组。优选地，在该方面中，存在的CDR1和CDR2序列中的至少一种和优选地两种适当地分别选自由分别与表B-1列出的CDR1和CDR2序列具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR1和CDR2序列组成的组，和/或分别选自由分别与表B-1列出的CDR1和CDR2序列中的至少之一具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR1和CDR2序列组成的组。
甚至更优选地，在本发明的纳米抗体中，存在的CDR1，CDR2和CDR3序列中的至少两种适当地分别选自由表B-1列出的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组。优选地，在该方面中，其余存在的CDR序列适当地选自由与表B-1列出的相对应的CDR序列中的至少之一具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR序列组成的组；和/或选自由与表B-1列出的相对应的序列中的至少之一具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组。
特别地，在本发明的纳米抗体中，至少CDR3序列适当地选自由表B-1列出的CDR3序列组成的组，和CDR1序列或CDR2序列适当地分别选自由表B-1列出的CDR1和CDR2序列组成的组。优选地，在该方面中，其余存在的CDR序列适当选自由与表B-1中列出的相对应的CDR序列中的至少之一具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR序列组成的组；和/或选自由与表B-1列出的相对应的CDR序列具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组。
甚至更优选地，在本发明的纳米抗体中，存在的所有三种CDR1，CDR2和CDR3序列适当地分别选自由表B-1列出的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组。
此外，一般地，优选表B-1中列出的CDR’s组合(即，在表B-1中同一行提及的那些)。因此，通常优选，当本发明纳米抗体中的CDR是表B-1中提及的CDR序列或适当地选自由与表B-1中列出的CDR序列具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR序列组成的组；和/或选自由与表B-1列出的CDR序列具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组，其它CDR中的至少一种和优选的两种适当地选自属于表B-1中同一组合(即，在表B-1中同一行中提及的)的CDR序列，或适当地选自与属于同一组合的CDR序列具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的序列同一性的CDR序列组成的组，和/或选自由与属于同一组合的CDR序列具有3、2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组。前述段落中所述的其他优先选择也适用于表B-1中提及的CDR组合。
因此，通过非限制性实施例，本发明的纳米抗体可以，例如，包括与表B-1中提及的CDR1序列之一具有大于80％的序列同一性的CDR1序列，与表B-1中提及的CDR2序列之一(但是属于不同的组合)具有3、2或1个氨基酸差异的CDR2序列，和CDR3序列。
一些优选的本发明的纳米抗体可以，例如，包括：(1)与表B-1中提及的CDR1序列之一具有大于80％的序列同一性的CDR1序列；与表B-1中提及的CDR2序列之一(但是属于不同的组合)具有3、2或1个氨基酸差异的CDR2序列；和与表B-1中提及的CDR3序列之一(但是属于不同的组合)具有大于80％的序列同一性的CDR3序列；或(2)与表B-1中列出的CDR1序列之一具有大于80％的序列同一性的CDR1序列；CDR2序列，和表B-1中列出的CDR3序列之一；或(3)CDR1序列；与表B-1中列出的CDR2序列之一具有大于80％的序列同一性的CDR2序列；和与表B-1中提及的属于与所述CDR2序列同一组合的CDR3序列具有3、2或1个氨基酸差异的CDR3序列。
一些特别优选的本发明的纳米抗体可以，例如，包括：(1)与表B-1中提及的CDR1序列之一具有大于80％的序列同一性的CDR1序列；与表B-1中提及的属于同一组合的CDR2序列具有3、2或1个氨基酸差异的CDR2序列；和与表B-1中提及的属于同一组合的CDR3序列具有大于80％的序列同一性的CDR3序列；(2)CDR1序列；表B-1中列出的CDR2和表B-1中列出的CDR3序列(其中所述CDR2序列和所述CDR3序列可以属于不同的组合)。
一些甚至更优选的本发明的纳米抗体可以，例如，包括：(1)与表B-1中提及的CDR1序列之一具有大于80％的序列同一性的CDR1序列；表B-1中列出的属于同一组合的CDR2序列；和表B-1中列出的属于不同组合的CDR3序列；或(2)表B-1中提及的CDR1序列；与表B-1中提及的属于同一组合的CDR2序列具有3、2或1个氨基酸差异的CDR2序列；和与表B-1中提及的属于同一或不同组合的CDR3序列具有大于80％的序列同一性的CDR3序列。
特别优选的本发明的纳米抗体可以，例如，包括表B-1中提及的CDR1序列，与表B-1中提及的属于同一组合的CDR2序列具有超过80％序列统一性的CDR2序列；和表B-1中提及的属于同一组合的CDR3序列。
在最优选的本发明的纳米抗体中，存在的CDR1、CDR2和CDR3序列适当地分别选自表B-1中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列的组合之一。
按照本发明另一个优选的而非限制性的方面，(a)CDR1具有1-12个氨基酸残基的长度，且通常为2-9个氨基酸残基，如5，6或7个氨基酸残基；和/或(b)CDR2具有13-24个氨基酸残基的长度，且通常为15-21个氨基酸残基，如16和17个氨基酸残基；和/或(c)CDR3具有2-35个氨基酸残基的长度，且通常为3-30个氨基酸残基，如6-23个氨基酸残基。
在另一个优选的而非限制性的方面中，本发明涉及这样的纳米抗体，其中CDR序列(如本文定义)与氨基酸序列SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)中的至少之一的CDR序列具有大于80％、优选大于90％、更优选大于95％、如99％或更多的序列同一性(如本文定义)。
一般地，具有上述CDR序列的纳米抗体可以如本文进一步所述，且优选地具有也如本文进一步所述的构架序列。因此，例如，且如本文所提及，这样的纳米抗体可以是(来自任何适当的物种的)天然存在的纳米抗体，天然存在的VHH序列(即，来自适当的骆驼科物种)或合成的或半合成的氨基酸序列或纳米抗体，包括但不限于部分人源化的纳米抗体或VHH序列、完全人源化的纳米抗体或VHH序列、骆驼源化的重链可变结构域序列、以及已经通过本文提及的技术获得的纳米抗体。
因此，在一个具体而非限制性的方面中，本发明涉及人源化的纳米抗体，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中CDR1-CDR3如本文所述，且其中所述人源化的纳米抗体包括至少一个人源化的取代(如本文定义)，且特别地是在其至少一个构架序列(如本文定义)中的至少一个人源化的取代。
在另一个优选而非限制性的方面中，本发明涉及这样的纳米抗体，其中所述CDR序列与氨基酸序列SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)中的至少一种的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性、优选至少80％的氨基酸同一性、更优选至少90％的氨基酸同一性、如95％的氨基酸同一性或更多或甚至基本上为100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以，例如，通过确定在所述纳米抗体和SEQID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)序列中的一种或多种之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)来确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。所述纳米抗体可以进一步如本文所述。
在另一个优选而非限制性的方面中，本发明涉及具有这样的氨基酸序列的纳米抗体，所述氨基酸序列选自由SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)组成的组或选自由与氨基酸序列SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)中的至少一种具有大于80％、优选大于90％、更优选大于95％、如99％或更多的序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组。
本发明另一个优选的而非限制性的方面涉及SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)纳米抗体的人源化变体，与常规的天然VHH序列相比较，其包括至少一个人源化的取代(如本文定义)，且特别是在至少其构架序列(如本文定义)之一中的至少一个人源化的取代。这样的人源化变体的一些优选的而非限制性的实例是SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)的人源化的纳米抗体。因此，本发明还涉及具有这样的氨基酸序列的人源化的纳米抗体，所述氨基酸序列选自由SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)组成的组，或选自由与SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)氨基酸序列中的至少之一具有大于80％、优选大于90％、更优选大于95％、如99％或更多序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组，(其中与相对应的SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)序列相比较，选自后一组氨基酸序列的氨基酸序列可以包含较多数量或较少数量的人源化取代，只要它们保留存在于相对应的SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)序列中的至少一个人源化的取代)。
本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体，或基本上由其组成。本发明的多肽的一些优选的但非限制性的实例在SEQ ID NO’s：2382-2415，2423-2430，2641-2659，2663-2681，2978-2998，3016-3056和3584-3591(见表A-2，表A-4，表A-5，表A-6，表A-9，表A-10)给出。
熟练的技术人员应该清楚，本文提及为“优选的”(或“更优选的”、“甚至更优选的”、等等)纳米抗体也是优选的(或更优选的，或甚至更优选的，等等)用于本文所述的多肽中。因此，包括一个或多个“优选的”本发明的纳米抗体或基本上由其组成的多肽通常将是优选的，且包括一个或多个“更优选的”本发明的纳米抗体或基本上由其组成的多肽通常将是更优选的，等等。
一般地，包括单一纳米抗体(如本发明的单一纳米抗体)或基本上由其组成的蛋白或多肽在本文称为“单价的”蛋白或多肽或称为“单价的”构建体。包括两个或多个纳米抗体(如至少两个本发明的纳米抗体或至少一个本发明的纳米抗体和至少一个其他纳米抗体)或基本上由其组成的蛋白和多肽在本文称为“多价的”蛋白或多肽或称为“多价的”构建体，且与相对应的本发明的单价纳米抗体相比较，这些可以提供某些优点。通过本文的进一步描述，所述多价构建体的一些非限制性的实例将变得清楚。
根据一个具体的，但非限制性的方面，本发明的多肽包含至少两个本发明的纳米抗体，如两个或三个本发明的纳米抗体，或基本由其组成。如本文进一步所述，与包含本发明的单纳米抗体或基本由其组成的蛋白或肽相比，所述多价构建体可以提供某些优势，如提高很多的对于病毒的包膜蛋白的抗体亲抗原性。所述多价构建体或多肽基于本文的公开内容对于技术人员是清楚的。
在一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二价的，并针对在RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白上的抗原性位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域并且针对RSV F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
一般地，所述本发明的二价多肽可以包含这样的两种本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)和更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)。一般地，本发明的所述二价多肽可以进一步如本文所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于这些本发明的二价多肽(例如，这些本发明的二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于Synagis结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二价的并且针对在RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。在优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的两种纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于在RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI和更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于这些本发明的二价多肽(例如，这些本发明的二价多肽可以包含适合的接头；优选地是这样的，即它们可以同时结合101F结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二价的并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的这样两种纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于唾液酸结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二价的并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于VN04-2结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二价的，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于MAbC179结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二价的并且针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合。
一般地，所述本发明的二价多肽包含本发明的两种纳米抗体，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合。一般地，所述本发明的二价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二价多肽(例如，本发明的这些二价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于MAb 8-2结合位点)。
在优选的方面中，本发明的多肽能够结合于病毒的包膜蛋白的两个以上不同的抗原决定簇、表位、部分、结构域。在该情形中，本发明的多肽也称为“多互补位”(如例如“二互补位”或“三互补位”，等)的多肽。所述本发明的多互补位多肽可以针对病毒的包膜蛋白的任何抗原决定簇、表位、部分、和/或结构域。
例如，并且一般地，本发明的二互补位多肽可以包含至少一种针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的本发明的纳米抗体和至少一种这样的本发明的纳米抗体，其针对不同于所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域(其中所述纳米抗体可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。优选地，所述本发明的二互补位多肽进一步是这样的，即当其结合于病毒包膜蛋白时，能够同时结合于第一抗原决定簇、表位、部分或结构域(即，通过至少一种能够结合于所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的本发明的纳米抗体)和结合于所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域(即，通过至少一种能够结合于所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域的本发明的纳米抗体)。所述本发明的二互补位多肽的实例由本文进一步描述是清楚的。此外，本发明的三互补位多肽可以包含至少一种其它的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体针对病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇、表位、部分或结构域(不同于第一和第二抗原决定簇、表位、部分或结构域)，并且一般地，本发明的多互补位多肽可以包含至少两种这样的本发明的纳米抗体，其针对病毒包膜蛋白的至少两种不同的抗原决定簇、表位、部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位、三互补位和多互补位多肽可以如本文进一步所述。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的并且针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合，并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。在优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域，并且针对RSV F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
一般地，这样的本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含至少一种其它的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位的(或多互补位)并且针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合，并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。在一个优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域并且针对RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，并且包含至少一种其它本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于RSV F蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位的，至少针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点并且针对RSV F蛋白上的101F结合位点。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。在优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。在其它优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域并且针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。在其它优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。在其它优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。在其它优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域并且针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域，并且包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，本发明的这些二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和101F结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；能够调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；能够调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或能够通过与Synagis和/或101F相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位的，具有针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的两个互补位。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白(一个互补位或两个互补位)上的抗原性位点II(也称为位点A)。在一个优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白(一个互补位或两个互补位)上氨基酸250-275区域。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位的，具有针对RSV F蛋白上的101F结合位点的两个互补位。本发明的多肽可以针对RSV F蛋白(一个互补位或两个互补位)上的抗原性位点IV-VI。在一个优选的方面中，本发明的多肽针对RSV F蛋白(一个互补位或两个互补位)上氨基酸423-436区域。
此外，本发明的上述二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，本发明的这些二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于两个结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
一般地，这样的本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且包含至少一种本发明的其它纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于唾液酸结合位点和流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位的(或多互补位)并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且针对在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且包含至少一种其它的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。一般地，本发明的所述二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于VN04-2结合位点和流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与VN04-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的，并且针对在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAbC179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，并且包含至少一种本发明的其它纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb C179相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的，并且针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，并且针对在G包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，并且包含至少一种其它的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于G包膜蛋白上的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。一般地，所述本发明的二互补位(或多互补位)多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些二互补位(或多互补位)多肽(例如，这些本发明的二互补位和多互补位多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点以及至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是二互补位(或多互补位)的，并且在与G包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb 8-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的方面中，本发明的多肽能够结合于病毒的包膜蛋白的三个(不同的)抗原决定簇，表位，部分，结构域。在该情形中，本发明的多肽也称为“三价”(如例如，“三价三互补位”或“三价二互补位”，“三价单互补位”，等)氨基酸序列和多肽。所述本发明的三价多肽可以针对病毒的包膜蛋白的任何抗原决定簇，表位，部分，和/或结构域。
例如，并且一般地，本发明的三价多肽可以包含三种本发明的纳米抗体，其针对病毒包膜蛋白的相同抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中纳米抗体可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的三价多肽可以包含本发明的这样的两种纳米抗体，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种本发明的这样的纳米抗体，其针对不同于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述纳米抗体可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价二互补位的”。本发明的三价多肽可以包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，至少一种这样的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体针对不同于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的纳米抗体，其针对不同于第一和第二抗原决定簇，表位，部分或结构域的病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述纳米抗体可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价三互补位的”。本发明的三价多肽可以包含本发明的这样的两种纳米抗体，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的纳米抗体，其针对不同于第一病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价二特异性的”。本发明的三价多肽还可以包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，至少一种这样的本发明的纳米抗体，其针对不同于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的相同病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的纳米抗体，其针对不同于第一病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述纳米抗体可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价三特异性的”。本发明的三价多肽还可以包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇，表位，部分或结构域，至少一种这样的本发明的纳米抗体，其针对不同于所述第一病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分或结构域，和至少一种这样的本发明的纳米抗体，其针对不同于所述第一和第二病毒包膜蛋白的病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(其中所述纳米抗体可以适当地连接，例如通过如本文进一步所述的适合的接头)。本发明的这样的三价多肽也可以称为“三价三特异性的”。
优选地，本发明的这样的三价多肽进一步是这样的，即，当其结合于病毒包膜蛋白时，其能够同时结合于第一抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过能够结合于所述第一抗原决定簇，表位，部分或结构域的至少一种本发明的纳米抗体)，结合于所述第二抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过能够结合于所述第二抗原决定簇，表位，部分或结构域的至少一种本发明的纳米抗体)并且结合于所述第三抗原决定簇，表位，部分或结构域(即，通过能够结合于所述第三抗原决定簇，表位，部分或结构域的至少一种本发明的纳米抗体)。本发明的这样的三价多肽的实例通过本文的进一步描述将变得清楚。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合，以及本发明的这样两种纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白(和具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)的结合，以及能够结合于RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的本发明的两种其它纳米抗体。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点以及RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含本发明的这样两种纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合，以及包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含一种能够结合于RSV F蛋白上的它抗原决定簇，表位，部分或结构域的一种其它本发明的纳米抗体。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含本发明的三种纳米抗体，所述纳米抗体针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的三种纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV F蛋白的结合(和具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于Synagis结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与Synagis相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合，以及本发明的这样两种纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的多肽针对RSVF蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI，并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，以及包含两种这样的其它本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和RSV F蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含这样的本发明的两种纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSVF蛋白的结合，以及包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的多肽可以针对RSVF蛋白的抗原性位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的多肽针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV F蛋白的结合(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且更优选地针对RSVF蛋白的氨基酸423-436区域)，以及包含一种这样的其它本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的101F结合位点以及RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含这样的三种本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的多肽可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的多肽针对RSVF蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的本发明的三种纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI，并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于101F结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与101F相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含这样的本发明的两种纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白，以及包含这样的一种本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的纳米抗体可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的纳米抗体针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的纳米抗体可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白的101F结合位点的本发明的纳米抗体针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含一种这样的本发明的其它纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，本发明的这样的三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和101F结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白，以及包含本发明的这样的两种纳米抗体，其针对RSV F蛋白的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的纳米抗体可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的纳米抗体针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的纳米抗体可以针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白的101F结合位点的本发明的纳米抗体针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含一种这样的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，以及包含两种这样的本发明的其它纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且更优选地针对RSVF蛋白的氨基酸423-436区域)。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白的Synagis结合位点和101F结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白，一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白，以及一种这样的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的纳米抗体可以针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的Synagis结合位点的本发明的纳米抗体可以针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域。针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的氨基酸序列和多肽针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。在优选的方面中，针对RSV F蛋白上的101F结合位点的本发明的纳米抗体可以针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含一种这样的本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点II(也称为位点A)并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸250-275区域)，一种其它的本发明的纳米抗体，其能够结合于RSV F蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争结合于RSV F蛋白(并且具体地针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI并且更优选地针对RSV F蛋白的氨基酸423-436区域)，以及一种其它的本发明的纳米抗体，其针对RSV F蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于RSV F蛋白的Synagis结合位点，101F结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且在结合于RSV F蛋白时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与Synagis和/或101F相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及这样的本发明的两种纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的至少一种本发明的纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及两种这样的本发明的其它纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且包含这样的本发明的两种纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的其它的纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含本发明的这样的三种纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的本发明的三种纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于唾液酸结合位点)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及这样的本发明的两种纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的至少一种本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及本发明的这样的两种其它纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的VN04-2结合位点以及两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且包含本发明的这样的两种纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及一种这样的本发明的其它纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的VN04-2结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含这样的本发明的三种纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的这样的三价多肽包含三种这样的本发明的纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够VN04-2竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于VN04-2结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与VN04-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及本发明的这样的两种纳米抗体，所述纳米抗体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含至少一种这样的本发明的纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白，以及两种这样的本发明的其它纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAbC179结合位点以及两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含本发明的这样两种纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，以及一种这样的本发明的纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的本发明的两种纳米抗体，所述纳米抗体能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，以及一种这样的本发明的其它本发明的纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点以及其它抗原决定簇，表位，部分或结构域；和流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含这样的三种本发明的纳米抗体，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，本发明的所述三价多肽包含三种本发明的纳米抗体，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAbC179结合位点和/或能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于MAb C179结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和(具体地)多肽是三价的，并且在与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb C179相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
在一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含一种这样的本发明的纳米抗体，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，以及本发明的这样的两种纳米抗体，其针对G包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含至少一种本发明的纳米抗体，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，以及两种这样的本发明的其它纳米抗体，其能够结合于G包膜蛋白上的两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和两种其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的并且包含这样的本发明的两种纳米抗体，其针对G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合，以及一种这样的本发明的纳米抗体，其针对G包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的这样的三价多肽包含本发明的这样的两种纳米抗体，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争结合于G包膜蛋白，以及一种这样的其它本发明的纳米抗体，其能够结合于G包膜蛋白上的其它抗原决定簇，表位，部分或结构域。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和其它抗原决定簇，表位，部分或结构域)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且包含这样的本发明的三种纳米抗体，其针对G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与G包膜蛋白的结合。一般地，本发明的这样的三价多肽包含这样的本发明的三种纳米抗体，其能够结合于G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争结合于G包膜蛋白。一般地，本发明的所述三价多肽可以如本文进一步所述，并且如本文所述的本发明的各个优选方面也应用于本发明的这些三价多肽(例如，本发明的这些三价多肽可以包含适合的接头；并且优选是这样的，即它们可以同时结合于MAb 8-2结合位点)。
在另一个优选的，但非限制性的方面中，本发明的多肽是三价的，并且在与狂犬病病毒的G包膜蛋白结合时，至少能够中和病毒(如本文定义)；调节，减少和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)；调节并且具体地抑制和/或防止病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中；和/或通过与MAb 8-2相同的作用机制调节并且具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
本发明优选的二价和三价多肽在表C-6，表A-2，表A-4，表A-5，表A-6，表A-9和表A-10中给出。
一些优选的但非限制性的所述多价(二价和三价)纳米抗体构建体是SEQ ID NO’s：2382-2415，2423-2430，2641-2659，2663-2681，2978-2998，3016-3056和3584-3591。
根据另一个具体的，但非限制性的方面，本发明的多肽包含至少一种本发明的纳米抗体和至少一种其它结合单位(即，针对其它表位、抗原、靶标、蛋白或多肽)，或基本由其组成，所述结合单位优选也是纳米抗体。所述蛋白或多肽在本文也称为“多特异性”蛋白或多肽或“多特异性构建体”，并且与本发明的相应的单价纳米抗体相比，这些可以提供某些优势(如从本文对一些优选的、但非限制性的多特异性构建体的进一步讨论所清楚的)。
按照另一个具体的但非限制性的方面，本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体、任选地一个或多个其他纳米抗体、和至少一个赋予本发明的纳米抗体和/或赋予所得到的融合蛋白至少一种需要的特性的其他氨基酸序列(如蛋白或多肽)，或基本上由其组成。同样地，与相对应的本发明的单价纳米抗体相比较，所述融合蛋白可以提供某些的优点。所述氨基酸序列和所述融合构建体的一些非限制性的实例将通过本文的进一步描述变得清楚。
还可以组合两个或多个上述方面，例如，以提供三价双特异性构建体，其包括两个本发明的纳米抗体，和一个其他的纳米抗体，和任选地一个或多个其他的氨基酸序列。所述构建体的其他非限制性的实例，以及在本发明的情形中特别优选的一些构建体，将通过本文的进一步描述变得清楚。在上述构建体中，所述一个或多个纳米抗体和/或其他氨基酸序列可以直接彼此连接和/或适当地通过一个或多个接头序列彼此连接。所述接头的一些适合的但非限制性的实例将通过本文的进一步所述变得清楚。
在本发明的一个具体的方面中，与本发明相对应的氨基酸序列和纳米抗体相比较，本发明的纳米抗体或包括至少一个本发明的纳米抗体的本发明的化合物、构建体或多肽可以具有增加的半衰期。基于本文进一步公开的内容，熟练的技术人员应该清楚所述纳米抗体、化合物和多肽的一些优选的但非限制性的实例，且例如，包括已经进行化学修饰(例如，通过聚乙二醇化)提高其半衰期的本发明的纳米抗体序列或多肽；包括至少一个用于结合血清蛋白(如血清白蛋白，见例如EP 0 368 684 B1，第4页)的额外的结合位点的本发明的氨基酸序列或纳米抗体；或包括至少一个与至少一个增加本发明的纳米抗体的半衰期的部分(且特别是至少一个氨基酸序列)连接的本发明的纳米抗体的本发明的多肽。基于本文进一步的公开内容，熟练的技术人员应该清楚包括所述半衰期延长部分或氨基酸序列的本发明的多肽的实例；且例如包括，不限于，这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的纳米抗体适当地与下列各项连接：一个或多个血清蛋白或其片段(如血清白蛋白或其适当的片段)，或一个或多个可以结合血清蛋白的结合单位(如例如，可以结合血清蛋白如血清白蛋白、血清免疫球蛋白如IgG、或运铁蛋白的纳米抗体或(单)结构域抗体)；这样的多肽，其中本发明的纳米抗体与Fc部分(如人Fc)或其适当的部分或片段连接的多肽；或这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的纳米抗体适当地与可以结合血清蛋白的一个或多个小蛋白或肽(诸如，不限于，记述在WO 91/01743，WO 01/45746，WO 02/076489和WO 08/068280中的蛋白和肽)连接。
同样地，如熟练的技术人员应该清楚的，所述纳米抗体、化合物、构建体或多肽可以包含一个或多个另外的基团、残基、结构部分或结合单位，如一个或多个其他氨基酸序列，且特别是一个或多个另外的纳米抗体(即，不针对病毒的包膜蛋白)，以提供三特异性或多特异性纳米抗体构建体。
一般地，具有增加的半衰期的本发明的纳米抗体(或包括其的化合物、构建体或多肽)优选地具有是相对应的本发明的纳米抗体本身的半衰期的至少1.5倍、优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的纳米抗体本身相比，具有增加的半衰期的本发明的纳米抗体、化合物、构建体或多肽可以具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的半衰期。
在本发明的一个优选而非限制性方面中，所述本发明的纳米抗体、化合物、构建体或多肽在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，本发明的化合物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的半衰期。
在本发明的另一个方面中，本发明的多肽包括与允许所得到的本发明的多肽穿过血脑屏障的一个或多个(诸如两个并且优选一个)氨基酸序列连接(任选地通过一个或多个适当的接头序列连接)的一个或多个(诸如两个或优选一个)本发明的纳米抗体。特别地，允许所得到的本发明的多肽穿过血脑屏障的所述一个或多个氨基酸序列可以是一个或多个(诸如两个并且优选一个)纳米抗体，诸如在WO 02/057445中所述的纳米抗体，其中FC44(WO06/040153的SEQ ID NO：189)和FC5(WO 06/040154的SEQ ID NO：190)是优选的实例。
特别地，包括一个或多个本发明的纳米抗体的多肽优选是这样的，以致它们：
-以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与病毒的包膜蛋白结合；
和/或这样，以致它们：
-以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与病毒的包膜蛋白结合；
和/或这样，以致它们：
-以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与病毒的包膜蛋白结合。
优选地，包含仅一个本发明的氨基酸序列或纳米抗体的多肽优选是这样，以致它将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与病毒的包膜蛋白结合。在这一方面中，熟练的技术人员应该清楚，与包含仅一个本发明的氨基酸序列或纳米抗体的多肽相比较，包含两个或多个本发明的纳米抗体的多肽可以以增加的抗体亲抗原性结合病毒的包膜蛋白。
对于本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽与病毒的包膜蛋白结合的一些优选的IC50值将从本发明的进一步描述和实施例中变得清楚。
按照本发明该优选方面的其他多肽可以，例如，选自由与氨基酸序列SEQ ID NO’s：2382-2415，2423-2430，2641-2659，2663-2681，2978-2998，3016-3056和3584-3591(见表A-2，表A-4，表A-5，表A-6，表A-9和表A-10)中的一种或多种具有大于80％、优选大于90％、更优选大于95％、如99％或更多“序列同一性”(如本文定义)的氨基酸序列组成的组，其中在所述氨基酸序列内包括的所述纳米抗体优选地如本文进一步所定义。
本发明的另一个方面涉及编码本发明的氨基酸序列(如本发明的纳米抗体)或包括其的本发明的多肽的核酸。同样地，如本文关于本发明的核酸概括所述，这样的核酸可以以遗传构建体的形式存在，如本文定义。
在另一个方面中，本发明涉及表达或能够表达本发明的氨基酸序列(如纳米抗体)和/或包括其的本发明的多肽的宿主或宿主细胞；和/或包含本发明的核酸的宿主或宿主细胞。通过本文进一步的描述，所述宿主或宿主细胞的一些优选的但非限制性的实例将变得清楚。
本发明的另一个方面涉及包含或包括至少一个本发明的氨基酸序列或纳米抗体、至少一个本发明的多肽和/或至少一个本发明的核酸的产品或组合物，和任选地本身已知的所述组合物的一种或多种其他成分，即，取决于所述组合物的目的用途。例如，所述产品或组合物可以是药物组合物(如本文所述)，兽医用组合物或用于诊断应用(也如本文所述)的产品或组合物。通过本文进一步的描述，所述产品或组合物的一些优选的但非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及用于制备或产生本文所述的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的方法。通过本文进一步的描述，所述方法的一些优选的但非限制性的实例将变得清楚。
本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的应用和用途，以及用于预防和/或治疗与病毒进入和/或病毒复制相关和/或由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导的疾病和病症的方法。通过本文进一步的描述，一些优选的但非限制性的应用和用途的实例将变得清楚。
通过下文的进一步描述，本发明的其他方面、实施方案、优点和应用也变得清楚。
一般地，应该注意，术语纳米抗体在用于本文时在其最广泛意义上不限于具体的生物来源或具体的制备方法。例如，如在下文更详细讨论的，本发明的纳米抗体通常可以通过在WO 08/020079的第61和第62页上的技术(1)-(8)中的任一种，或本身已知的任何其它适合的技术获得。一个优选的纳米抗体种类对应于针对病毒的包膜蛋白的天然存在的重链抗体的VHH结构域。如本文进一步所述，这样的VHH序列通常可以这样产生或获得：通过用病毒的包膜蛋白适当免疫骆驼科动物物种(即，以产生针对病毒的包膜蛋白的免疫反应和/或重链抗体)，通过获得来自所述骆驼科动物的适当的生物样品(诸如血液样品、血清样品或B-细胞样品)，并且通过利用本身已知的任何适当技术从所述样品开始产生针对病毒的包膜蛋白的VHH序列。所述技术对于熟练的技术人员应该是清楚的，和/或在本文中进一步所述。
备选地，所述针对病毒的包膜蛋白天然存在的VHH结构域可以从首次用于实验的骆驼科动物VHH序列文库获得，例如，通过使用本身已知的一种或多种筛选技术用病毒的包膜蛋白、或其至少一部分、片段、抗原决定簇或表位筛选这样的文库。例如，这样的文库和技术记述在WO 99/37681，WO 01/90190，WO 03/025020和WO 03/035694中。备选地，可以使用来源自首次用于实验的VHH文库的改进的合成的或半合成的文库，诸如通过诸如随机诱变和/或CDR重排的技术从首次用于实验的VHH文库获得的VHH文库，所述技术如例如记述在WO 00/43507中。
因此，在另一个方面中，本发明涉及用于产生针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体的方法。在一个方面中，所述方法至少包括下列步骤：
a)提供纳米抗体序列的组、集合或文库；和
b)从所述纳米抗体序列的组、集合或文库中筛选可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的纳米抗体序列；
和
c)分离所述可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的氨基酸序列。
在这样的方法中，所述纳米抗体序列的组、集合或文库可以是纳米抗体序列的首次用于实验的组、集合或文库；纳米抗体序列的合成的或半合成的组、集合或文库；和/或已经进行了亲和性成熟的纳米抗体序列的组、集合或文库。
在本方法的优选方面中，所述纳米抗体序列的组、集合或文库可以是纳米抗体序列的免疫组、集合或文库，特别是，来自已经用病毒的包膜蛋白适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科物种的VHH序列的免疫组、集合或文库。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
在上述方法中，所述纳米抗体或VHH序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体、或适当的微生物(诸如酵母)上，如以促进筛选。用于展示和筛选纳米抗体序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本发明进一步的公开内容。还参考WO 03/054016和Hoogenboom在NatureBiotechnology(自然生物技术)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
在另一个方面中，所述用于产生纳米抗体序列的方法包括至少下列步骤：
a)提供来源于骆驼科物种的表达免疫球蛋白序列的细胞的集合或样品；和
b)从所述细胞集合或样品中筛选：(i)表达可以结合和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的免疫球蛋白序列的细胞；和(ii)表达重链抗体的细胞，其中亚步骤(i)和(ii)可以基本上按照一个筛选步骤或作为两个独立的筛选步骤以任何适当的顺序进行，以提供至少一种表达可以结合和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的重链抗体的细胞；
和
c)(i)从所述细胞分离存在于所述重链抗体中的VHH序列；或(ii)从所述细胞分离编码存在于所述重链抗体中的VHH序列的核酸序列，然后表达所述VHH结构域
在该方面所述的方法中，所述细胞的集合或样品可以是，例如，B细胞的集合或样品。此外，在该方法中，细胞样品可以来源于已经用病毒的包膜蛋白适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位
上述方法可以以任何适当的方式进行，这对于熟练的技术人员将是清楚的。例如，参考EP 0 542 810，WO 05/19824，WO 04/051268和WO 04/106377。步骤b)的筛选优选地使用流式细胞术技术诸如FACS进行。对于此，例如，参考Lieby等，血液(Blood)，卷97，No.12，3820。特别参考在埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的国际申请WO 06/079372中记述的所谓的“纳米抗体”技术。
在另一个方面中，所述用于产生针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列的方法可以包括至少下列步骤：
a)提供编码重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列的组、集合或文库；
b)从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码可以结合病毒的包膜蛋白和/或具有针对病毒的包膜蛋白的亲和性的重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列；
和
c)分离所述核酸序列，然后分别表达存在于所述重链抗体中的VHH序列、或表达所述纳米抗体序列。
在这样的方法中，所述编码重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列的组、集合或文库可以是，例如，编码重链抗体或VHH序列的首次用于实验的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；编码纳米抗体序列的合成的或半合成的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；和/或编码已经进行了亲和性成熟的纳米抗体序列的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库。
在该方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是编码重链抗体或VHH序列的核酸序列的免疫的组、集合或文库，所述核酸序列来源于已经用病毒的包膜蛋白适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。
在上述方法中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体或适当的微生物(诸如酵母)上，如以促进筛选。用于展示和筛选编码氨基酸序列的核苷酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。还参考WO 03/054016和Hoogenboom在自然生物技术(Nature Biotechnology)，23，9，1105-1116(2005)中的综述。
熟练的技术人员应该清楚，本文所述的方法的筛选步骤也可以作为选择步骤进行。因此，术语“筛选”在用于本说明书时，可以包括选择、筛选或选择和/或筛选技术的任何适当的组合。此外，当使用序列的组、集合或文库时，它可以包含任何适当数量的序列，如1，2，3或约5，10，50，100，500，1000，5000，104，105，106，107，108或更多序列。
此外，上述氨基酸序列的组、集合或文库中的一个或多个或全部序列可以通过理性的、或半经验的方法如计算机建模技术或生物统计学或数据收集(datamining)技术获得或定义。
此外，这样的组、集合或文库可以包括作为来自另一种的变体(例如，具有设计的点突变或具有随机的位置)的一个、两个或多个序列，包括(compromise)来源于不同的天然多样性序列的组(例如，免疫文库)的多个序列，或不同序列的任何其他来源(例如，如在Hoogenboom等，Nat Biotechnol(自然生物技术)23：1105，2005和Binz等，Nat Biotechnol(自然生物技术)2005，23：1247中所述)。所述序列的组、集合或文库可以展示在噬菌体颗粒、核糖体、细菌、酵母细胞、哺乳动物细胞的表面上，且在这些载体内与编码所述氨基酸序列的核苷酸序列连接。这使得所述组、集合或文库易于进行选择步骤，从而分离需要的本发明的氨基酸序列。更一般地，当将序列展示在适当的宿主或宿主细胞上时，还可以(且习惯上)首先从所述宿主或宿主细胞分离编码所需要的序列的核苷酸序列，然后通过在适当的宿主生物体内适当表达所述核苷酸序列而获得所需要的序列。同样地，这可以以本身已知的任何适当的方式进行，其是熟练的技术人员应该清楚的。
用于获得针对病毒的包膜蛋白的VHH序列或纳米抗体序列的另一种技术包括适当地免疫能够表达重链抗体的转基因哺乳动物(即，以产生针对病毒的包膜蛋白的免疫应答和/或重链抗体)，从所述转基因哺乳动物获得包含(编码)所述VHH序列或纳米抗体序列(的核酸序列)的适当的生物样品(如血液样品、血清样品或B-细胞样品)，然后使用本身已知的任何适当的技术(如例如本文所述的任何方法或杂交瘤技术)由所述样品起始产生针对病毒的包膜蛋白的VHH序列。例如，为了该目的，可以使用记述在WO 02/085945，WO 04/049794和WO 06/008548和Janssens等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(美国国家科学院学报)2006 10月10日；103(41)：15130-5中的表达重链抗体的小鼠和其他方法和技术。例如，所述表达重链抗体的小鼠可以表达具有任何适当的(单)可变结构域、如来源于天然来源的(单)可变结构域(例如，人(单)可变结构域、骆驼科(单)可变结构域或鲨鱼(单)可变结构域)、以及例如合成的或半合成的(单)可变结构域的重链抗体。
本发明还涉及通过上述方法、或备选地通过包括上述方法之一和另外至少下列步骤的方法可获得和/或获得的VHH序列或纳米抗体序列，所述步骤为：确定所述VHH序列或纳米抗体序列的核苷酸序列或氨基酸序列；和以本身已知的方式，如通过在适当的宿主细胞或宿主生物体内表达或通过化学合成，表达或合成所述VHH序列或纳米抗体序列。
如本文提及，本发明纳米抗体的一种特别优选的种类包括具有与天然存在的VHH结构域的氨基酸序列相对应的但是已被“人源化”的氨基酸序列的纳米抗体，“人源化”即，用在来自于人类的常规4-链抗体的VH结构域中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基替换所述天然存在的VHH序列的氨基酸序列中(并且，特别是在构架序列中的)的一个或多个氨基酸残基(例如上文所示)，如在WO 08/020079上所述，并且使用在WO 08/020079的第63页上提及的技术。本发明纳米抗体的另一种特别优选的种类包括具有与天然存在的VH结构域的氨基酸序列相对应但已被“骆驼源化”的氨基酸序列的纳米抗体，“骆驼源化”即，用在重链抗体的VHH结构域中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基替换常规4-链抗体的天然存在的VH结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基，如在WO 08/020079上所述，并且使用在WO 08/020079的第63页上提及的技术。
从天然存在的VH序列或优选地VHH序列起始获得本发明的纳米抗体和/或编码其的核酸的其它适合的方法对于技术人员是清楚的，并且可以例如包括在WO 08/020079的第64页上提及的技术。如本文提及，纳米抗体可以特别特征在于在一个或多个构架序列中存在一个或多个“标志残基(Hallmark residues)”(如本文所述)。
因此，按照本发明的一个优选的但非限制性的方面，纳米抗体在其最广泛意义上通常可以定义为这样的多肽，所述多肽包括：
a)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中在按照Kabat编号方式的位置108的氨基酸残基是Q；
和/或：
b)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本发明所定义)或半胱氨酸残基，并且在位置44的氨基酸残基优选是E；
和/或：
c)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组。
因此，在第一优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中
a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或其中：
b)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸或半胱氨酸，并且按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基优选是E；
和/或其中：
c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
特别地，纳米抗体在其最广泛意义上可以通常定义为这样的多肽，所述多肽包括：
a)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或：
b)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
和/或：
c)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P，R和S组成的组，并且特别是选自由R和S组成的组。
因此，根据优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中
a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或其中：
b)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
和/或其中：
c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
特别地，按照本发明针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中
a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
和/或其中：
b)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
和/或其中：
c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
特别地，按照本发明方面的一个优选的但非限制性的方面，纳米抗体通常可以定义为包括包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列的多肽，其中：
a-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，G，Q，R，S，L组成的组；并且优选地选自由G，E或Q组成的组；和
a-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R或C组成的组；并且优选地选自由L或R组成的组；和
a-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R或S组成的组；并且优选地是W或R，并且最优选地为W；
a-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
或者其中：
b-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由E和Q组成的组；和
b-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；和
b-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R和S组成的组；并且优选地为W；
b-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；并且优选地为Q；
或者其中：
c-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，Q，R，S，和L组成的组；并且优选地选自由G，E和Q组成的组；和
c-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R和C组成的组；并且优选地选自由L和R组成的组；和
c-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P，R和S组成的组；并且特别选自由R和S组成的组；和
c-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；优选地为Q；
并且其中
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
因此，在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
a-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，G，Q，R，S，L组成的组；并且优选地选自由G，E或Q组成的组；
并且其中：
a-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R或C组成的组；并且优选地选自由L或R组成的组；
并且其中：
a-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R或S组成的组；并且优选地选自由W或R组成的组，并且最优选地为W；
并且其中：
a-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
b-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由E和Q组成的组；
并且其中：
b-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R；
并且其中：
b-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R和S组成的组；并且优选地为W；
并且其中：
b-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；并且优选地为Q；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选的但非限制性方面中，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
c-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，G，E，D，Q，R，S，和L组成的组；并且优选地选自由G，E和Q组成的组；
并且其中：
c-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L，R和C组成的组；并且优选地选自由L和R组成的组；
并且其中：
c-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P，R和S组成的组；并且特别选自由R和S组成的组；
并且其中：
c-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组；优选地为Q；
并且其中：
d)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
本发明纳米抗体的两个特别优选的但非限制性的组是按照上述a)；按照上述(a-1)到(a-4)；按照上述b)；按照上述(b-1)到(b-4)；按照上述(c)；和/或按照上述(c-1)到(c-4)的那些，其中：
i)按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW(或如本文所述的GLEW-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q；
或其中：
ii)按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE(或如本文所述的KERE-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q或L，并且优选地为Q。
因此，在另一个优选的但非限制性方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW(或如本发明定义的GLEW-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q；
并且其中：
ii)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE(或KERE-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q或L，并且优选是Q；
并且其中：
ii)CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
在所述其中按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE的本发明的纳米抗体中，在位置37的氨基酸残基最优选是F。在所述其中按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW的本发明的纳米抗体中，在位置37的氨基酸残基选自由Y，H，I，L，V或F组成的组，并且最优选是V。
因此，但不以任何方式局限于此，基于在上述位置存在的氨基酸残基，本发明的纳米抗体可以通常基于下述三组分类：
i)“GLEW-组”：按照Kabat编号方式在位置44-47具有氨基酸序列GLEW并且按照Kabat编号方式在位置108具有Q的纳米抗体。如本文进一步所述，在这一组内的纳米抗体通常在位置37具有V，并且可以在位置103具有W，P，R或S，并且优选地在位置103具有W。所述GLEW组还包括一些GLEW-样的序列，诸如下表B-2中提及的那些。更一般地，且不限于，属于GLEW-组的纳米抗体可以定义为在位置44具有G和/或在位置47具有W的纳米抗体，其中位置46通常为E，且其中优选地位置45不是带电荷的氨基酸残基且不是半胱氨酸；
ii)“KERE-组”：按照Kabat编号方式在位置43-46具有氨基酸序列KERE或KQRE(或另一种KERE-样序列)并且按照Kabat编号方式在位置108具有Q或L的纳米抗体。如本文进一步所述，在这一组内的纳米抗体通常在位置37具有F，在位置47具有L或F；并且可以在位置103具有W，P，R或S，并且优选地在位置103具有W。更一般地，且不限于，属于KERE-组的纳米抗体可以定义为在位置44具有K，Q或R(通常为K)的纳米抗体，其中位置45是带电荷的氨基酸残基或半胱氨酸，且位置47如本文进一步所定义；
iii)“103 P，R，S-组”：在位置103具有P，R或S的纳米抗体。这些纳米抗体可以在按照Kabat编号方式的位置44-47具有氨基酸序列GLEW或者在按照Kabat编号方式的位置43-46具有氨基酸序列KERE或KQRE，后者最优选地与位置37的F和位置47的L或F结合(如关于KERE-组所定义)；并且可以在按照Kabat编号方式的位置108具有Q或L，并且优选地具有Q。
此外，在适当的情形中，纳米抗体可以属于这些种类的两种或更多种(即，具有其特征)。例如，一个特别优选的纳米抗体组在位置44-47具有GLEW或GLEW-样序列；在位置103具有P，R或S(并且特别是R)；并且在位置108具有Q(其可以是对L人源化的)。
更一般地，应该注意，上述定义描述和应用于以天然(即，非人源化的)VHH序列的形式存在的纳米抗体，且这些纳米抗体的人源化的变体可以包含除了上述显示的那些(即，如本文定义的一个或多个人源化的取代)之外的其他氨基酸残基。例如，且不限于，在GLEW-组或103 P，R，S-组的一些人源化的纳米抗体中，在位置108的Q可以被人源化为108L。如本文已经提及的，基于本文的公开内容，其他人源化的取代(及其适当的组合)将为熟练的技术人员所清楚。另外，或备选地，其他潜在有用的人源化取代可以通过将天然存在的VHH序列的构架区序列与一个或多个紧密相关的人VH序列的相对应的构架序列进行比较而确定，之后，可以将由此确定的一个或多个潜在有用的人源化取代(或其组合)引入到所述VHH序列中(以本身已知的任何方式，如本文进一步所述)，且由此人源化的VHH序列可以检测针对靶标的亲和性、稳定性、表达的容易性和水平、和/或其他需要的特性。以这种方式，通过有效程度的试验和误差，其他适当的人源化取代(或其适当的组合)可以由熟练的技术人员基于本文的公开内容确定。此外，基于前述，纳米抗体(的构架区)可以被部分人源化或完全人源化。
因此，在另一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以是属于GLEW-组(如本文所定义)的纳米抗体，并且其中CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。
在另一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以是属于KERE-组(如本文所定义)的纳米抗体，并且其中CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
因此，在另一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以是属于103 P，R，S-组(如本发明所定义)的纳米抗体，并且其中CDR1，CDR2和CDR3如本发明所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
此外，更一般地，并且除了上文提及的108Q，43E/44R和103P，R，S残基之外，本发明的纳米抗体可以在常规VH结构域中形成(部分)VH/VL界面的一个或多个位置包含一个或多个氨基酸残基，所述氨基酸残基比在相对应的天然存在的VH序列同一位置天然存在的氨基酸残基更加高度带电荷，并且特别是一个或多个带电荷的氨基酸残基(如在WO 08/020079的国际申请第48页上的表A-2中提及)。这样的取代包括，但不限于下表B-2中提及的GLEW-样序列；以及国际申请WO 00/29004中所述关于所谓的“微体(microbodies)”的取代，例如以获得在位置108具有Q和在位置44-47具有KLEW组合的纳米抗体。基于本发明的公开内容，在这些位置的其它可能的取代对于熟练的技术人员应该是清楚的。
在本发明的纳米抗体的一个方面中，在位置83的氨基酸残基选自由L，M，S，V和W组成的组；并且优选地为L。
此外，在本发明的纳米抗体的一个方面中，位置83的氨基酸残基选自由R，K，N，E，G，I，T和Q组成的组；并且最优选地为K或E(对于与天然存在的VHH结构域相对应的纳米抗体)或R(对于“人源化”纳米抗体，如本发明所述)。在一个方面中，位置84的氨基酸残基选自由P，A，R，S，D T，和V组成的组，并且最优选地是P(对于与天然存在的VHH结构域相对应的纳米抗体)或R(对于“人源化”纳米抗体，如本发明所述)。
此外，在本发明的纳米抗体的一个方面中，位置104的氨基酸残基选自由G和D组成的组；并且最优选地是G。
总而言之，在所述纳米抗体中如上文提及的在位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基在本文中还叫作“标志残基”。所述标志残基以及在最接近的相关的人VH结构域，即VH3的相对应的位置的氨基酸残基总结在表B-2中。
在天然存在的VHH结构域中存在的这些标志残基的一些特别优选但非限制性的组合在表B-3中提及。为了比较，将叫作DP-47的人VH3的相对应氨基酸残基以斜体显示。
表B-2：纳米抗体中的标志残基
在所述纳米抗体中，在除所述标志残基外的任何其它位置的每一氨基酸残基可以是在天然存在的VHH结构域的相应位置(按照Kabat编号方式)天然存在的任何氨基酸残基。
熟练的技术人员对于这样的氨基酸残基应该是清楚的。表B-4-表B-7提及一些非限制性的残基，其可以存在于天然存在的VHH结构域的FR1、FR2、FR3和FR4的任一位置(按照Kabat编号方式)。对于任一位置，在天然存在的VHH结构域的任一位置最经常存在的氨基酸残基(并且其在纳米抗体中对于所述位置是最优选的氨基酸残基)以粗体显示；并且对于每一位置的其它优选的氨基酸残基已加下划线(注意：在天然存在的VHH结构域的位置26-30发现的氨基酸残基的数目支持Chothia(同前所述)的构成编号方式的基础的假说，即，在这些位置的残基已经形成CDR1的部分。)
在表B-4-表B-7中，还已经提及可以在人VH3结构域的任一位置存在的一些非限制性的残基。此外，对于每一位置，在天然存在的人VH3结构域的每一位置最经常存在的氨基酸残基以粗体显示；并且其它优选的氨基酸残基加下划线。
仅是为了参考，表B-4-表B-7还包含对于代表性样品1118 VHH序列关于在每个氨基酸位置的VHH熵(“VHH Ent.”)和VHH可变性(“VHH Var.”)的数据(数据由乌得勒支大学(Utrecht University)的David Lutje Hulsing和Theo Verrips教授馈赠)。关于VHH熵和VHH可变性的数值提供对于被分析的1118 VHH序列之间的氨基酸残基的可变性和保守度的测量：低数值(即＜1，诸如＜0.5)表示在所述VHH序列之间氨基酸残基是高度保守的(即，几乎没有可变性)。例如，在位置8的G和在位置9的G分别具有0.1和0的VHH熵数值，这表示这些残基是高度保守的，并且具有很小的可变性(并且假设在所分析的所有1118序列中位置9是G)，而对于形成CDR部分的残基通常发现1.5或更大的数值(数据未显示)。注意：(1)在表B-4-表B-7第二栏列出的氨基酸残基是基于比最后两栏引用的为确定VHH熵和VHH可变性而分析的1118 VHH序列大的样品；并且(2)下述数据支持这样的假说：在位置27-30的氨基酸残基以及还可能甚至在位置93和94的氨基酸残基已经形成CDR的一部分(尽管本发明不限于任何具体的假说或解释，并且如上文所提及，本发明使用按照Kabat的编号方式)。对于序列熵的一般解释，序列可变性以及用于确定其的方法，参见Oliveira等，蛋白质：结构，功能和遗传(PROTEINS：Structure，Function and Genetics)，52：544-552(2003)。
表B-4：FR1中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表B-2的脚注)
表B-4：FR1中的氨基酸残基的非限制性实例(续表)
表B-5：FR2中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表B-2的脚注)
表B-6：FR3中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表B-2的脚注)
表B-6：FR3中的氨基酸残基的非限制性实例(续表)
表B-7：FR4中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表B-2的脚注)
因此，在另一个优选的但非限制性的方面中，本发明的纳米抗体可以定义为具有下述(通用)结构的氨基酸序列
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的一个或多个氨基酸残基优选选自表B-2中提及的标志残基；
并且其中：
ii)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如本发明的一个更优选的方面而定义。
上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
特别地，本发明的纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中：
i)(优选地)在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自下表B-2中提及的标志残基(应该理解，VHH序列应该包含一个或多个标志残基；并且部分人源化的纳米抗体应该通常，且优选地，[仍然]包含一个或多个标志残基[尽管依据本发明在适当的情形中提供部分人源化的纳米抗体也在本发明的范围内，在所述部分人源化的纳米抗体中，所有的标志残基，而不是一个或多个其余氨基酸残基，已经被人源化]；并且在完全人源化的纳米抗体中，依据本发明在适当的情形中，所有在标志残基位置上的氨基酸残基应该是在人VH3序列中存在的氨基酸残基。基于本发明公开的内容，熟练的技术人员应该清楚，所述VHH序列、所述具有至少一个标志残基的部分人源化的纳米抗体、所述不具有标志残基的部分人源化的纳米抗体、和所述完全人源化的纳米抗体均形成本发明的方面)；
并且其中：
ii)所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度，忽略形成CDR序列的氨基酸残基(在序列SEQ ID NO’s：1-22中用X表示)；
iii)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本文的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。
上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
特别地，本发明KERE-组的纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中：
i)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本文定义)或半胱氨酸残基，且位置44优选地是E；
且其中：
ii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-9：KERE-组纳米抗体的代表性FW1序列。
| KERE FW1序列号1 | SEQ ID NO：23 | QVQRVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTSS |
| KERE FW1序列号2 | SEQ ID NO：24 | QVQLVESGGGLVQTGDSLSLSCSASGRTFS |
| KERE FW1序列号3 | SEQ ID NO：25 | QVKLEESGGGLVQAGDSLRLSCAATGRAFG |
| KERE FW1序列号4 | SEQ ID NO：26 | AVQLVESGGGLVQPGESLGLSCVASGRDFV |
| KERE FW1序列号5 | SEQ ID NO：27 | EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCEVLGRTAG |
| KERE FW1序列号6 | SEQ ID NO：28 | QVQLVESGGGWVQPGGSLRLSCAASETILS |
| KERE FW1序列号7 | SEQ ID NO：29 | QVQLVESGGGTVQPGGSLNLSCVASGNTFN |
| KERE FW1序列号8 | SEQ ID NO：30 | EVQLVESGGGLAQPGGSLQLSCSAPGFTLD |
| KERE FW1序列号9 | SEQ ID NO：31 | AQELEESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFN |
且其中：
iii)FR2是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-10：KERE-组纳米抗体的代表性FW2序列。
| KERE FW2序列号1 | SEQ ID NO：41 | WFRQAPGKEREFVA |
| KERE FW2序列号2 | SEQ ID NO：42 | WFRQTPGREREFVA |
| KERE FW2序列号3 | SEQ ID NO：43 | WYRQAPGKQREMVA |
| KERE FW2序列号4 | SEQ ID NO：44 | WVYRQGPGKQRELVA |
| KERE FW2序列号5 | SEQ ID NO：45 | WIRQAPGKEREGVS |
| KERE FW2序列号6 | SEQ ID NO：46 | WFREAPGKEREGIS |
| KERE FW2序列号7 | SEQ ID NO：47 | WYRQAPGKERDLVA |
| KERE FW2序列号8 | SEQ ID NO：48 | WFRQAPGKQREEVS |
| KERE FW2序列号9 | SEQ ID NO：49 | WFRQPPGKVREFVG |
且其中：
iv)FR3是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-11：KERE-组纳米抗体的代表性FW3序列。
| KERE FW3序列号1 | SEQ ID NO：50 | RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYRCYF |
| KERE FW3序列号2 | SEQ ID NO：51 | RFAISRDNNKNTGYLQMNSLEPEDTAVYYCAA |
| KERE FW3序列号3 | SEQ ID NO：52 | RFTVARNNAKNTVNLEMNSLKPEDTAVYYCAA |
| KERE FW3序列号4 | SEQ ID NO：53 | RFTISRDIAKNTVDLLMNNLEPEDTAVYYCAA |
| KERE FW3序列号5 | SEQ ID NO：54 | RLTISRDNAVDTMYLQMNSLKPEDTAVYYCAA |
| KERE FW3序列号6 | SEQ ID NO：55 | RFTISRDNAKNTVYLQMDNVKPEDTAIYYCAA |
| KERE FW3序列号7 | SEQ ID NO：56 | RFTISKDSGKNTVYLQMTSLKPEDTAVYYCAT |
| KERE FW3序列号8 | SEQ ID NO：57 | RFTISRDSAKNMMYLQMNNLKPQDTAVYYCAA |
| KERE FW3序列号9 | SEQ ID NO：58 | RFTISRENDKSTVYLQLNSLKPEDTAVYYCAA |
| KERE FW3序列号10 | SEQ ID NO：59 | RFTISRDYAGNTAYLQMNSLKPEDTGVYYCAT |
且其中：
v)FR4是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-12：KERE-组纳米抗体的代表性FW4序列。
| KERE FW4序列号1 | SEQ ID NO：60 | WGQGTQVTVSS |
| KERE FW4序列号2 | SEQ ID NO：61 | WGKGTLVTVSS |
| KERE FW4序列号3 | SEQ ID NO：62 | RGQGTRVTVSS |
| KERE FW4序列号4 | SEQ ID NO：63 | WGLGTQVTISS |
且其中：
vi)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
在上述纳米抗体中，一个或多个其他标志残基优选地如本文所述(例如，当它们为VHH序列或部分人源化的纳米抗体时。)
此外，上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
关于构架1，熟练的技术人员应该清楚，当上述氨基酸序列通过表达核苷酸序列而产生时，前4个氨基酸序列(即，按照Kabat编号方式的氨基酸残基1-4)可以通常通过已经用来生成所述核酸的引物来确定。因此，为了确定氨基酸同一性的程度，优选忽略前4个氨基酸残基。
此外，关于构架1，且尽管按照Kabat编号方式的氨基酸位置27-30被认为是构架区的一部分(且不是CDR’s)，通过分析多于1000个VHH序列的数据库已经发现，位置27-30具有比在位置1-26的可变性高得多的可变性(以VHH熵和VHH可变性表示----参见表B-4-表B-7)。因为此，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地也忽略在位置27-30的氨基酸残基。
考虑到此，KERE种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列，其中：
i)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本文定义)或半胱氨酸残基，且位置44优选地是E；
且其中：
ii)FR1是这样的氨基酸序列，其在按照Kabat编号方式的位置5-26与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性：
表B-13：KERE-组纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。
| KERE FW1序列号10 | SEQ ID NO：32 | VESGGGLVQPGGSLRLSCAASG |
| KERE FW1序列号11 | SEQ ID NO：33 | VDSGGGLVQAGDSLKLSCALTG |
| KERE FW1序列号12 | SEQ ID NO：34 | VDSGGGLVQAGDSLRLSCAASG |
| KERE FW1序列号13 | SEQ ID NO：35 | VDSGGGLVEAGGSLRLSCQVSE |
| KERE FW1序列号14 | SEQ ID NO：36 | QDSGGGSVQAGGSLKLSGAASG |
| KERE FW1序列号15 | SEQ ID NO：37 | VQSGGRLVQAGDSLRLSCAASE |
| KERE FW1序列号16 | SEQ ID NO：38 | VESGGTLVQSGDSLKLSCASST |
| KERE FW1序列号17 | SEQ ID NO：39 | MESGGDSVQSGGSLTLSCVASG |
| KERE FW1序列号18 | SEQ ID NO：40 | QASGGGLVQAGGSLRLSCSASV |
且其中：
iii)FR2，FR3和FR4如本文关于KERE-种类的纳米抗体的FR2，FR3和FR4所提及的；
且其中：
iv)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义
上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
GLEW种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中
i)优选地，当所述GLEW-种类的纳米抗体是非人源化的纳米抗体时，在位置108的氨基酸残基是Q；
ii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-14：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW1序列
| GLEW FW1序列号1 | SEQ ID NO：64 | QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS |
| GLEW FW1序列号2 | SEQ ID NO：65 | EVHLVESGGGLVRPGGSLRLSCAAFGFIFK |
| GLEW FW1序列号3 | SEQ ID NO：66 | QVKLEESGGGLAQPGGSLRLSCVASGFTFS |
| GLEW FW1序列号4 | SEQ ID NO：67 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVCVSSGCT |
| GLEW FW1序列号5 | SEQ ID NO：68 | EVQLVESGGGLALPGGSLTLSCVFSGSTFS |
且其中：
iii)FR2是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-15：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW2序列。
| GLEW FW2序列号1 | SEQ ID NO：72 | WVRQAPGKVLEWVS |
| GLEW FW2序列号2 | SEQ ID NO：73 | WVRRPPGKGLEWVS |
| GLEW FW2序列号3 | SEQ ID NO：74 | WVRQAPGMGLEWVS |
| GLEW FW2序列号4 | SEQ ID NO：75 | WVRQAPGKEPEWVS |
| GLEW FW2序列号5 | SEQ ID NO：76 | WVRQAPGKDQEWVS |
| GLEW FW2序列号6 | SEQ ID NO：77 | WVRQAPGKAEEWVS |
| GLEW FW2序列号7 | SEQ ID NO：78 | WVRQAPGKGLEWVA |
| GLEW FW2序列号8 | SEQ ID NO：79 | WVRQAPGRATEWVS |
且其中：
iv)FR3是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-16：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW3序列。
| GLEW FW3序列号1 | SEQ ID NO：80 | RFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCVK |
| GLEW FW3序列号2 | SEQ ID NO：81 | RFTISRDNARNTLYLQMDSLIPEDTALYYCAR |
| GLEW FW3序列号3 | SEQ ID NO：82 | RFTSSRDNAKSTLYLQMNDLKPEDTALYYCAR |
| GLEW FW3序列号4 | SEQ ID NO：83 | RFIISRDNAKNTLYLQMNSLGPEDTAMYYCQR |
| GLEW FW3序列号5 | SEQ ID NO：84 | RFTASRDNAKNTLYLQMNSLKSEDTARYYCAR |
| GLEW FW3序列号6 | SEQ ID NO：85 | RFTISRDNAKNTLYLQMDDLQSEDTAMYYCGR |
且其中：
v)FR4是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-17：GLEW-组的纳米抗体的代表性FW4序列。
| GLEW FW4序列号1 | SEQ ID NO：86 | GSQGTQVTVSS |
| GLEW FW4序列号2 | SEQ ID NO：87 | LRGGTQVTVSS |
| GLEW FW4序列号3 | SEQ ID NO：88 | RGQGTLVTVSS |
| GLEW FW4序列号4 | SEQ ID NO：89 | RSRGIQVTVSS |
| GLEW FW4序列号5 | SEQ ID NO：90 | WGKGTQVTVSS |
| GLEW FW4序列号6 | SEQ ID NO：91 | WGQGTQVTVSS |
且其中：
vi)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本文的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们为VHH序列或部分人源化的纳米抗体时。)
关于构架1，同样熟练的技术人员应该清楚，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略在位置1-4和27-30的氨基酸残基。
考虑到此，GLEW种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中：
i)优选地，当GLEW-种类的纳米抗体是非人源化的纳米抗体时，在位置108的氨基酸残基为Q；
且其中：
ii)FR1是这样的氨基酸序列，其在按照Kabat编号方式的位置5-26与下述氨基酸序列至少之一具有至少80％的氨基酸同一性：
表B-18：KERE-组的纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。
| GLEW FW1序列号6 | SEQ ID NO：69 | VESGGGLVQPGGSLRLSCAASG |
| GLEW FW1序列号7 | SEQ ID NO：70 | EESGGGLAQPGGSLRLSCVASG |
| GLEW FW1序列号8 | SEQ ID NO：71 | VESGGGLALPGGSLTLSCVFSG |
且其中：
iii)FR2，FR3和FR4如本文关于GLEW-种类的纳米抗体的FR2，FR3和FR4所提及的；
且其中：
iv)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们是VHH序列或部分人源化的纳米抗体时)。
P，R，S 103种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中：
i)在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基不同于W；且其中：
ii)优选地，在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基是P，R或S，且更优选是R；
且其中：
iii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-19：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW1序列。
| P，R，S 103 FW1序列号1 | SEQ ID NO：92 | AVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFS |
| P，R，S 103 FW1序列号2 | SEQ ID NO：93 | QVQLQESGGGMVQPGGSLRLSCAASGFDFG |
| P，R，S 103 FW1序列号3 | SEQ ID NO：94 | EVHLVESGGGLVRPGGSLRLSCAAFGFIFK |
| P，R，S 103 FW1序列号4 | SEQ ID NO：95 | QVQLAESGGGLVQPGGSLKLSCAASRTIVS |
| P，R，S 103 FW1序列号5 | SEQ ID NO：96 | QEHLVESGGGLVDIGGSLRLSCAASERIFS |
| P，R，S 103 FW1序列号6 | SEQ ID NO：97 | QVKLEESGGGLAQPGGSLRLSCVASGFTFS |
| P，R，S 103 FW1序列号7 | SEQ ID NO：98 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVCVSSGCT |
| P，R，S 103 FW1序列号8 | SEQ ID NO：99 | EVQLVESGGGLALPGGSLTLSCVFSGSTFS |
且其中：
iv)FR2是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-20：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW2序列。
| P，R，S 103 FW2序列号1 | SEQ ID NO：102 | WFRQAPGKEREFVA |
| P，R，S 103 FW2序列号2 | SEQ ID NO：103 | WVRQAPGKVLEWVS |
| P，R，S 103 FW2序列号3 | SEQ ID NO：104 | WVRRPPGKGLEWVS |
| P，R，S 103 FW2序列号4 | SEQ ID NO：105 | WIRQAPGKEREGVS |
| P，R，S 103 FW2序列号5 | SEQ ID NO：106 | WVRQYPGKEPEWVS |
| P，R，S 103 FW2序列号6 | SEQ ID NO：107 | WFRQPPGKEHEFVA |
| P，R，S 103 FW2序列号7 | SEQ ID NO：108 | WYRQAPGKRTELVA |
| P，R，S 103 FW2序列号8 | SEQ ID NO：109 | WLRQAPGQGLEWVS |
| P，R，S 103 FW2序列号9 | SEQ ID NO：110 | WLRQTPGKGLEWVG |
| P，R，S 103 FW2序列号10 | SEQ ID NO：111 | WVRQAPGKAEEFVS |
且其中：
v)FR3是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-21：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW3序列。
| P，R，S 103 FW3序列号1 | SEQ ID NO：112 | RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA |
| P，R，S 103 FW3序列号2 | SEQ ID NO：113 | RFTISRDNARNTLYLQMDSLIPEDTALYYCAR |
| P，R，S 103 FW3序列号3 | SEQ ID NO：114 | RFTISRDNAKNEMYLQMNNLKTEDTGVYWCGA |
| P，R，S 103 FW3序列号4 | SEQ ID NO：115 | RFTISSDSNRNMIYLQMNNLKPEDTAVYYCAA |
| P，R，S 103 FW3序列号5 | SEQ ID NO：116 | RFTISRDNAKNMLYLHLNNLKSEDTAVYYCRR |
| P，R，S 103 FW3序列号6 | SEQ ID NO：117 | RFTISRDNAKKTVYLRLNSLNPEDTAVYSCNL |
| P，R，S 103 FW3序列号7 | SEQ ID NO：118 | RFKISRDNAKKTLYLQMNSLGPEDTAMYYCQR |
| P，R，S 103 FW3序列号8 | SEQ ID NO：119 | RFTVSRDNGKNTAYLRMNSLKPEDTADYYCAV |
且其中：
vi)FR4是与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列：
表B-22：P，R，S 103-组的纳米抗体的代表性FW4序列。
| P，R，S 103 FW4序列号1 | SEQ ID NO：120 | RGQGTQVTVSS |
| P，R，S 103 FW4序列号2 | SEQ ID NO：121 | LRGGTQVTVSS |
| P，R，S 103 FW4序列号3 | SEQ ID NO：122 | GNKGTLVTVSS |
| P，R，S 103 FW4序列号4 | SEQ ID NO：123 | SSPGTQVTVSS |
| P，R，S 103 FW4序列号5 | SEQ ID NO：124 | SSQGTLVTVSS |
| P，R，S 103 FW4序列号6 | SEQ ID NO：125 | RSRGIQVTVSS |
且其中：
vii)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们为VHH序列或部分人源化的纳米抗体时。)
关于构架1，同样熟练的技术人员应该清楚，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略在位置1-4和27-30的氨基酸残基。
考虑到此，P，R，S 103种类的纳米抗体可以是包括由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中：
i)在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基不同于W；
且其中：
ii)优选地，在按照Kabat编号方式的位置103的氨基酸残基是P，R或S，且更优选是R；
且其中：
iii)FR1是这样的氨基酸序列，其在按照Kabat编号方式的位置5-26与下述氨基酸序列中的至少之一具有至少80％的氨基酸同一性：
表B-23：P，R，S 103-组纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。
| P，R，S 103 FW1序列号9 | SEQ ID NO：100 | VESGGGLVQAGGSLRLSCAASG |
| P，R，S 103 FW1序列号10 | SEQ ID NO：101 | AESGGGLVQPGGSLKLSCAASR |
且其中：
iv)FR2，FR3和FR4如本文关于P，R，S 103-种类的纳米抗体的FR2，FR3和FR4所提及的；
且其中：
v)CDR1，CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本发明的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。
上述纳米抗体可以，例如，是VHH序列或可以是人源化的纳米抗体。当上述纳米抗体序列为VHH序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。
在上述纳米抗体中，其他标志残基中的一个或多个优选地如本文所述(例如，当它们是VHH序列或部分人源化的纳米抗体时)。
在另一个优选的但非限制性的方面中，本发明涉及如上文所述的纳米抗体，其中CDR序列与氨基酸序列SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)中的至少一种的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％的氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。这种氨基酸同一性程度可以，例如，通过确定在所述纳米抗体和SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的一个或多个序列之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。所述纳米抗体可以如本文进一步所述。
如本文已经提及的，本发明的另一个优选的但非限制性的方面涉及具有这样的氨基酸序列的纳米抗体，所述氨基酸序列选自由SEQ IDNO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)组成的组，或选自由与氨基酸序列SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)中的至少一种具有大于80％、优选大于90％、更优选大于95％、如99％或更多的序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组。
此外，在上述纳米抗体中：
i)与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的相对应氨基酸序列相比，任何氨基酸取代(当其不是如本文定义的人源化取代时)优选是保守氨基酸取代，(如本文所定义)；
和/或：
ii)与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的相对应氨基酸序列相比，其氨基酸序列优选地包含仅一个氨基酸取代，或另外优选地不多于5个、优选地不多于3个、且更优选地仅1或2个氨基酸删除或插入；
和/或
iii)CDR’s可以是利用亲和性成熟，例如，由SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的相对应氨基酸序列的CDR’s起始来源的CDR’s。
优选地，在本发明的纳米抗体中的CDR序列和FR序列是这样的，以致本发明的纳米抗体(和包括其的本发明的多肽)：
-以10-5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10-12摩尔/升或更小、并且更优选地10-8-10-12摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与病毒的包膜蛋白结合；
和/或这样，以致它们：
-以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的kon-速率与病毒的包膜蛋白结合；
和/或这样，以致它们：
-以1s-1(t1/2＝0.69s)-10-6s-1(假定具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的koff速率与病毒的包膜蛋白结合。
优选地，在本发明的纳米抗体中存在的CDR序列和FR序列是这样的，以致本发明的纳米抗体将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与病毒的包膜蛋白结合。
按照本发明的一个非限制性方面，纳米抗体可以是如本文所定义的，但是具有这样的限制条件：与天然存在的人VH结构域的相对应的构架区相比，并且特别是与DP-47的相对应的构架区相比，其在至少一个构架区具有至少“一个氨基酸差异”(如本文所定义)。更特别地，按照本发明的一个非限制性方面，纳米抗体可以是如本文所定义的，但是具有这样的限制条件：与天然存在的人VH结构域的相对应的构架区相比，并且特别是与DP-47的相对应的构架区相比，其在至少一个标志残基(包括在位置108，103和/或45的那些)具有至少“一个氨基酸差异”(如本文所定义)。通常，纳米抗体应该在FR2和/或FR4中的至少一种中，并且特别是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基(同样，(包括在位置108，103和/或45的那些))与天然存在的VH结构域具有至少一个这样的氨基酸差异。
此外，人源化的本发明的纳米抗体可以如本发明所定义，但是具有这样的限制条件：与天然存在的VHH结构域的相对应的构架区相比，其在至少一个构架区具有“至少一个氨基酸差异”(如本文所定义)。更特别地，按照本发明的一个非限制性方面，人源化的纳米抗体可以如本文所定义，但是具有下述限制条件：与天然存在的VHH结构域的相对应的构架区相比，其在至少一个标志残基(包括在位置108，103和/或45的那些)具有至少“一个氨基酸差异”(如本文所定义)。通常，人源化的纳米抗体应该在FR2和/或FR4中的至少一个、并且特别是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基(同样，包括在位置108，103和/或45的那些)关于天然存在的VHH结构域具有至少一个所述氨基酸差异。
从本发明的公开内容应该清楚，使用如本发明所定义的本发明的纳米抗体的天然或合成的类似物、突变体、变体、等位基因、同系物和直向同源物(本发明笼统称为“类似物”)，并且特别是SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的纳米抗体的类似物也在本发明的范围之内。因此，按照本发明的一个方面，术语“本发明的纳米抗体”在其最广泛意义上还涵盖所述类似物。
通常，在所述类似物中，与如本发明所定义的本发明纳米抗体相比，一个或多个氨基酸残基可以被取代、删除和/或添加。这样的取代、插入或删除可以在一个或多个构架区和/或在一个或多个CDR内进行。当所述取代、插入或删除在一个或多个构架区内进行时，它们可以在一个或多个标志残基处和/或在构架残基中的一个或多个其它位置进行，尽管通常较不优选在标志残基处的取代、插入或删除(除非这些是如本文所述的适当的人源化取代)。
通过非限制性实例的方式，例如，取代可以是保守取代(如本文所述)和/或氨基酸残基可以被天然存在于另一个VHH结构域中相同位置处的另一个氨基酸残基取代(关于这样的取代的一些非限制性实例参见表B-4-表B-7)，尽管本发明通常不限于此。因此，在本发明的范围内包括任何一个或多个取代、删除或插入，或它们的任何组合，所述取代、删除或插入或其组合改善本发明的纳米抗体的特性，或至少没有将本发明的纳米抗体的理想特性或理想特性的平衡或组合减损太多(即，到所述纳米抗体不再适合其目的应用的程度)。基于本发明的公开内容，以及任选地在有限程度的常规实验之后，例如，常规实验可以包括引入有限数目的可能的取代并且确定它们对这样获得的纳米抗体特性的影响，熟练的技术人员通常应该能够确定并且选择适当的取代、删除或插入、或它们的适当的组合。
例如，并且取决于用于表达本发明的纳米抗体或多肽的宿主生物体，所述删除和/或取代可以以这样的方式设计，所述方式去除一个或多个翻译后修饰的位点(诸如一个或多个糖基化位点或十四烷基化位点(myristilation site))，这应该在本领域技术人员的能力范围内。备选地，可以设计取代或插入，以引入一个或多个附着官能团(如本文所述)的位点，例如，以允许位点-特异性的聚乙二醇化(pegylation)(同样如本文所述)。
从在上述表B-4-表B-7中提供的关于VHH熵和VHH可变性的数据可以看出，在构架区中的一些氨基酸残基比其它的更保守。通常，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，优选在较不保守的位置进行任何取代、删除或插入。此外，通常，氨基酸取代优于氨基酸删除或插入。
所述类似物优选是这样的，以致它们可以以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和性(适当测量的和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地表示为IC50值，如本发明进一步所述)结合病毒的包膜蛋白。
所述类似物优选还是这样的，以致它们保留所述纳米抗体的有利特性，如本文所述。
此外，按照一个优选的方面，所述类似物与SEQ ID NOs：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的一个纳米抗体具有至少70％、优选至少80％、更优选至少90％、如至少95％或99％或更多的序列同一性程度；和/或优选地具有至多20个、优选地至多10个、甚至更优选地至多5个、如4，3，2或仅有1个氨基酸差异(如本文定义)。
此外，所述类似物的构架序列和CDR’s优选是这样的，以致它们与本文定义的优选方面一致。更一般地，如本文所述，所述类似物具有：(a)在位置108的Q；和/或(b)在位置45的带电荷氨基酸或半胱氨酸残基，和优选地在位置44为E，更优选地在位置44为E和在位置45为R；和/或(c)在位置103的P，R或S。
本发明纳米抗体的类似物的一个优选的种类包括已经被人源化的纳米抗体(即，与天然存在的本发明的纳米抗体的序列相比较)。如在本发明引用的背景技术中提及的，这样的人源化通常包括用在人VH结构域如人VH3结构域中相同位置存在的氨基酸残基取代在天然存在的VHH序列中的一个或多个氨基酸残基。熟练的技术人员应该清楚可能的人源化取代的实例或人源化取代的组合，例如，从本发明的表格，从在本发明引用的背景技术中提及的可能的人源化取代，和/或从纳米抗体序列和天然存在的人VH结构域序列之间的比较获知。
所述人源化取代应该这样选择，以致所得到的人源化的纳米抗体仍然保留如本发明所定义的纳米抗体的有利特性，并且更优选这样选择，以致它们如在前段中关于类似物的描述。基于本文的公开内容，并且任选地在有限程度的常规实验之后，所述常规实验包括，例如，引入有限数量的可能的人源化取代，并且确定它们对这样获得的纳米抗体的特性的影响，熟练的技术人员通常能够确定并选择适当的人源化取代或适当的人源化取代的组合。
一般地，作为人源化的结果，本发明的纳米抗体可以变得更加“人-样”，同时仍然保留如本发明所述的本发明的纳米抗体的有利特性。结果，与相对应的天然存在的VHH结构域相比，这样人源化的纳米抗体可以具有一些优点，诸如减小的免疫原性。同样，基于本发明的公开内容，并且任选在有限程度的常规实验之后，熟练的技术人员应该能够选择人源化取代或适当的人源化取代组合，其最优化或获得一方面在通过人源化取代提供的有利特性和另一方面在天然存在的VHH结构域的有利特性之间的理想的或适当的平衡。
本发明的纳米抗体可以在任何构架残基处被适当人源化，诸如在一个或多个标志残基处(如本文所定义)或在一个或多个其它构架残基处(即，非标志残基)或它们的任何适当的组合。关于“P，R，S-103组”或“KERE组”的纳米抗体的一个优选的人源化取代是将Q108取代成L108。“GLEW种类”的纳米抗体也可以通过将Q108取代成L108被人源化，条件是其它标志残基中的至少一个含有骆驼科动物(骆驼源化)取代(如本文所定义)。例如，如上文所提及，人源化的纳米抗体的一个特别优选的种类在位置44-47具有GLEW或GLEW-样序列；在位置103具有P，R或S(并且特别是R)，并且在位置108具有L。
人源化的和其它类似物，以及编码其的核酸序列，可以以本身已知的任何方式提供。例如使用在WO 08/020079的第103页和104页上提及的一种或多种技术。
如本文提及，熟练的技术人员还应该清楚，本发明的纳米抗体(包括它们的类似物)还可以从人VH序列(即，氨基酸序列或相对应的核苷酸序列)起始设计和/或制备，所述人VH序列诸如例如人VH3序列，诸如DP-47、DP-51、或DP-29，即，通过引入一个或多个骆驼源化的取代(即，将在所述人VH结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基改变成在VHH结构域相对应位置存在的氨基酸残基)，以提供本发明的纳米抗体序列，和/或将纳米抗体的有利特性赋予这样获得的序列。同样地，这通常可以应用前段中提到的各种方法和技术进行，其应用人VH结构域的氨基酸序列和/或核苷酸序列作为起点。
一些优选的而非限制性的骆驼源化取代可以来自表B-4-表B-7。同样应该清楚，在一个或多个标志残基的骆驼源化取代通常将比在一个或多个其它氨基酸位置的取代对所需要的特性有更大的影响，尽管这两种取代以及它们的任何适当的组合均包括在本发明范围之内。例如，可以引入一个或多个已经赋予至少一些所需要的特性的骆驼源化取代，并且然后引入进一步的骆驼源化取代，其进一步改善所述特性和/或赋予额外的有利特性。同样地，基于本发明的公开内容，并且任选地在有限程度的常规实验之后，所述常规实验可以包括，例如，引入有限数量的可能的骆驼源化取代，并且确定是否获得或改善纳米抗体的有利特性(即，与原始VH结构域相比)，熟练的技术人员将通常能够确定并选择适当的骆驼源化取代或适当的骆驼源化取代的组合。
然而，一般地，所述骆驼源化取代优选是这样的以致得到的氨基酸序列至少包含：(a)在位置108的Q；和/或(b)在位置45的带电荷的氨基酸或半胱氨酸残基以及优选地也在位置44的E，以及更优选地在位置44的E和在位置45的R；和/或(c)在位置103的P，R或S；和任选地一种或多种其它的骆驼源化取代。更优选地，所述骆驼源化取代是这样的以致它们导致本发明的纳米抗体和/或其类似物(如本文定义)，如得到人源化的类似物和/或优选地如在前述段落中定义的类似物。
如通过本文的公开内容清楚的，在本发明范围内还包括使用如本文定义的本发明的纳米抗体的部分或片段，或两个以上部分或片段的组合，和具体地SEQ ID NOs：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的纳米抗体的部分或片段。因此，根据本发明的一个方面，术语“本发明的纳米抗体”在其最广泛的意义上还涵盖这些部分或片段。
一般地，本发明的纳米抗体(包括其类似物)的所述部分或片段具有这样的氨基酸序列，其中，与相对应的本发明的全长纳米抗体(或其类似物)的氨基酸序列相比较，已经删除和/或去除在N末端的一个或多个氨基酸残基，在C末端的一个或多个氨基酸残基，一个或多个连续的内部氨基酸残基，或它们的任何组合。
所述部分或片段优选是这样的，以致它们可以以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本发明进一步所述))结合病毒的包膜蛋白。
任何部分或片段优选地是这样，以致其包括相对应的本发明的全长纳米抗体的氨基酸序列的至少10个连续的氨基酸残基，优选地至少20个连续的氨基酸残基，更优选地至少30个连续的氨基酸残基，诸如至少40个连续的氨基酸残基。
此外，任何部分或片段优选是这样的，以致其包括CDR1、CDR2和/或CDR3中的至少一个或至少其部分(并且特别是至少CDR3或至少其部分)。更优选地，任何部分或片段是这样的，以致其包括至少一个CDR(并且优选至少CDR3或其部分)，和至少一个其它CDR(即，CDR1或CDR2)或至少其部分，优选通过适当的构架序列或至少其部分连接。更优选地，任何部分或片段是这样的，以致其包括至少一个CDR(且优选至少CDR3或其部分)，和至少两个剩余CDR的部分，同样优选通过适当的构架序列或至少其部分连接。
按照另一个特别优选的但非限制性的方面，这样的部分或片段包括至少CDR3，诸如相对应的本发明全长纳米抗体的FR3、CDR3和FR4，即，例如，如在国际申请WO 03/050531(Lasters等)中所述。
如上文已经提及，还可以组合两个或更多个这样的部分或片段(即，来自相同的或不同的本发明的纳米抗体)，即，以提供本发明纳米抗体的类似物(如本文所定义)和/或以提供其它部分或片段(如本文所定义)。例如，还可以将本发明纳米抗体的一个或多个部分或片段与人VH结构域的一个或多个部分或片段组合。
按照一个优选方面，所述部分或片段与纳米抗体SEQ ID NOs：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)中的一个有至少50％、优选地至少60％、更优选地至少70％、甚至更优选地至少80％、诸如至少90％、95％或99％或更多的序列同一性程度。
所述部分和片段，以及编码其的核酸序列可以以本身已知的任何方式提供并且任选地组合。例如，所述部分或片段可以通过在编码本发明的全长纳米抗体的核酸中插入终止密码子，并且然后以本身已知的方式(例如，如本文所述)表达这样获得的核酸而获得。备选地，编码所述部分或片段的核酸可以这样获得，即，通过适当限制性酶切(restrict)编码本发明的全长纳米抗体的核酸或通过以本身已知的方式合成这样的核酸。部分或片段还可以使用本身已知的肽合成技术提供。
本发明在其最广泛意义上还包括本发明的纳米抗体的衍生物。这样的衍生物通常可以通过本发明的纳米抗体和/或形成本发明的纳米抗体的一个或多个氨基酸残基的修饰而获得，并且特别是通过化学和/或生物(例如，酶促)修饰获得。
熟练的技术人员应该清楚这样的修饰的实例，以及纳米抗体序列中可以以这样的方式修饰的氨基酸残基的实例(即，在蛋白骨架上但是优选地在侧链上)，可以用来引入所述修饰的方法和技术以及所述修饰的潜在用途和优点。
例如，这样的修饰可以包括向本发明的纳米抗体内或向本发明的纳米抗体上引入(例如，通过共价连接或以其它适当的方式)一个或多个官能团、残基或部分，并且特别是赋予本发明的纳米抗体一种或多种理想的特性或官能性的一个或多个官能团、残基或部分。熟练的技术人员应该清楚所述官能团的实例。
例如，所述修饰可以包括引入(例如，通过共价结合或以任何其它适当的方式)一个或多个这样的官能团，即，所述官能团增加本发明的纳米抗体的半衰期、溶解性和/或吸收，减少本发明的纳米抗体的免疫原性和/或毒性，消除或减弱本发明的纳米抗体的任何不理想的副作用，和/或赋予本发明的纳米抗体和/或多肽其它的有利特性和/或减少本发明的纳米抗体和/或多肽的不理想特性；或者两种或多种上述的任何组合。所述官能团的实例以及引入所述官能团的技术的实例应该为熟练的技术人员清楚，并且通常可以包括上文引用的综合背景技术中提及的所有官能团和技术，以及本身已知的用于修饰药物蛋白并且特别用于修饰抗体或抗体片段(包括ScFv’s和单结构域抗体)的官能团和技术，关于其的参考文献例如参考雷明顿药物科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)，第16版，Mack出版公司，Easton，PA(1980)。例如，所述官能团可以直接连接(例如共价地)到本发明的纳米抗体上，或者任选地通过适当的接头或间隔臂(spacer)连接，这也为熟练的技术人员所清楚。
关于增加半衰期和/或减少药物蛋白的免疫原性最广泛应用的一种技术包括适当的药用聚合物诸如聚(乙二醇)(PEG)或其衍生物(诸如甲氧基聚(乙二醇)或mPEG)的附着。一般地，可以应用聚乙二醇化作用的任何适当的形式，诸如本领域中用于抗体和抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv’s)的聚乙二醇化作用；例如，参考Chapman，自然生物技术(Nat.Biotechnol.)，54，531-545(2002)；Veronese和Harris(2002)，高级药物递送综述(Adv.Drug Deliv.Rev.)54，453-456，Harris和Chess，自然药物发现综述(Nat.Rev.Drug.Discov.)，2，(2003)以及在WO 04/060965中。用于蛋白聚乙二醇化的各种试剂还可以商购，例如从美国Nektar治疗公司(Nektar Therapeutics)购得。
优选地，应用定向聚乙二醇化，特别是通过半胱氨酸-残基(参见例如Yang等，蛋白质工程(Protein Engineering)，16，10，761-770(2003))。例如，为了这一目的，PEG可以附着到在本发明的纳米抗体中天然存在的半胱氨酸残基上，本发明的纳米抗体可以这样进行修饰，以适当地引入一个或多个用于PEG附着的半胱氨酸残基，或者可以将包括一个或多个用于PEG附着的半胱氨酸残基的氨基酸序列融合到本发明的纳米抗体的N-和/或C-端，本身为熟练的技术人员所了解的所有应用的蛋白质加工技术。
优选地，对于本发明的纳米抗体和蛋白，使用具有大于5000的分子量的PEG，诸如大于10,000并且小于200,000，诸如小于100,000；例如在20,000-80,000范围内。
另一种通常较不优选的修饰包括N-连接的或O-连接的糖基化，通常作为共翻译和/或翻译后修饰的一部分，其取决于为了表达本发明的纳米抗体或多肽所用的宿主细胞。
此外，较不优选的修饰包括十四烷基化，通常作为共翻译和/或翻译后修饰的一部分，这取决于用于表达本发明的纳米抗体或多肽的宿主细胞。
另一种修饰可以包括引入一种或多种可检测的标记或其它信号-产生基团或部分，其取决于所标记纳米抗体的目的用途。适宜的标记以及附着、使用和检测它们的技术是熟练的技术人员所清楚的，并且例如包括但不限于，荧光标记，磷光性标记、化学发光标记、生物发光标记、放射性-同位素、金属、金属螯合物、金属阳离子、发色团和酶，如在WO 08/020079的第109页上提及的那些。其它适宜的标记为熟练的技术人员所清楚，并且例如包括可以应用NMR或ESR光谱检测的部分。
例如，这样标记的本发明的纳米抗体和多肽可以用于体外、体内或原位检测(包括本身已知的免疫检测，诸如ELISA，RIA，EIA和其它“夹心式检测”等)，以及体内诊断和成像目的，这取决于特定的标记的选择。
熟练的技术人员应该清楚，另一种修饰可以包括引入螯合基团，例如以螯合上文提到的金属或金属阳离子中的一种。例如，适当的螯合基团包括但不限于二乙烯三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)。
另一种修饰可以包括引入作为特异性结合对诸如生物素-(链霉)抗生物素蛋白结合对的一部分的官能团。这样的官能团可以用来将本发明的纳米抗体与另一种蛋白、多肽或化学化合物结合，所述另一种蛋白、多肽或化学化合物与所述结合对的另一半结合，即，通过形成所述结合对。例如，本发明的纳米抗体可以缀合到生物素上，并且连接到与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合的另一种蛋白、多肽、化合物或载体上。例如，这样缀合的纳米抗体可以用作报道子，例如在产生可检测的信号的试剂与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合的诊断系统中用作报道子。例如，这种结合对还可以用来将本发明的纳米抗体与载体结合，所述载体包括适用于药物目的的载体。一个非限制性的实例是Cao和Suresh，药物靶向杂志(Journal of Drug Targetting)，8，4，257(2000)所述的脂质体制剂。这种结合对还可以用来将治疗活性剂与本发明的纳米抗体结合。
对于一些应用，特别是对于意欲杀死表达本发明的纳米抗体所针对的靶标的细胞(例如，在治疗癌症时)，或者意欲减少或减缓所述细胞的生长和/或增殖的那些应用中，本发明的纳米抗体还可以与毒素或者毒性残基或部分连接。例如，可以与本发明的纳米抗体连接以提供细胞毒性化合物的毒性部分、化合物或残基的实例对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如，可以在上文引用的现有技术和/或本文的进一步描述中找到。一个实例是记述在WO 03/055527中的所谓的ADEPTTM技术。
熟练的技术人员应该清楚其它潜在的化学和酶促修饰。这种修饰还可以为研究目的引入(例如，为了研究功能-活性关系)。例如，参考Lundblad和Bradshaw，生物技术和应用生物化学(Biotechnol.Appl.Biochem.)，26，143-151(1997)。
优选地，所述衍生物是这样的，以致它们以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或koff-速率，或备选地为IC50值，如本发明进一步所述)与病毒的包膜蛋白结合。
如上文提及，本发明还涉及基本上由至少一个本发明的纳米抗体组成或包括至少一个本发明的纳米抗体的蛋白或多肽。“基本上由……组成”意指本发明的多肽的氨基酸序列与本发明纳米抗体的氨基酸序列完全相同，或者与本发明纳米抗体的氨基酸序列相对应，其将有限数目的氨基酸残基，诸如1-20个氨基酸残基，例如1-10个氨基酸残基并且优选地1-6个氨基酸残基，诸如1，2，3，4，5或6个氨基酸残基添加到所述纳米抗体的氨基酸序列的氨基末端、羧基末端或者氨基末端和羧基末端两端。
所述氨基酸残基可以或者可以不变化、改变或者另外影响所述纳米抗体的(生物学)特性，并且可以或者可以不为所述纳米抗体添加其它的官能性。例如，所述氨基酸残基：
-可以包括N-端Met残基，例如，作为在异源宿主细胞或宿主生物体内表达的结果；
-可以形成信号序列或前导序列，当合成时其引导所述纳米抗体从宿主细胞中分泌。适宜的分泌性前导肽应该是熟练的技术人员所清楚的，并且可以是本文进一步所述的。通常，这样的前导序列与所述纳米抗体的N端连接，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此；
-可以形成这样的序列或信号，即，所述序列或信号允许所述纳米抗体导向和/或透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或所述序列或信号允许所述纳米抗体透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述氨基酸序列的实例对于熟练的技术人员是清楚的。所述氨基酸序列的实例对于技术人员是清楚的，并且包括在WO 08/020079的第112页上的段落c)中提及的那些。
-可以形成“标记”，例如允许或促进所述纳米抗体的纯化的氨基酸序列或残基，例如使用针对所述序列或残基的亲和技术进行纯化。然后，所述序列或残基可以被去除(例如，通过化学或酶促裂解)，以提供纳米抗体序列(为了这一目的，所述标记可以任选地通过可裂解的接头序列与所述纳米抗体序列连接或包含可裂解的基序)。这种残基的一些优选的但非限制性的实例是多组氨酸残基、谷胱甘肽(glutatione)残基以及myc-标记(例如参见WO 06/12282的SEQ ID NO：31)；
-可以是已经被官能化和/或可以作为官能团附着的位点的一个或多个氨基酸残基。适宜的氨基酸残基和官能团应该是熟练的技术人员所清楚的，并且包括但不限于，本文为本发明的纳米抗体的衍生物提及的氨基酸残基和官能团。
按照另一个方面，本发明的多肽包括本发明的纳米抗体，所述多肽在其氨基末端、在其羧基末端、或者在其氨基末端和其羧基末端两端融合至少一个其它氨基酸序列，即，以提供包括所述本发明的纳米抗体和一个或多个其它氨基酸序列的融合蛋白。这种融合体在本文还叫作“纳米抗体融合体”。
所述一个或多个其它氨基酸序列可以是任何适宜的和/或理想的氨基酸序列。所述其它氨基酸序列可以或可以不变化、改变或另外影响所述纳米抗体的(生物学)特性，并且可以或可以不为本发明的纳米抗体或多肽加入其它的官能性。优选地，所述其它氨基酸序列是这样的，以致它赋予本发明的纳米抗体或多肽一种或多种理想的特性或官能性。
例如，所述其他氨基酸序列也可以提供第二结合位点，所述结合位点可以针对任何需要的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位(包括但不限于与本发明的纳米抗体所针对的相同的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位，或不同的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位)。
这样的氨基酸序列的实例是熟练的技术人员所清楚的，并且通常可以包括基于常规抗体及其片段(包括但不限于ScFv’s和单结构域抗体)的用于肽融合的所有氨基酸序列。例如，参考Holliger和Hudson，自然生物技术(Nature Biotechnology)，23，9，1126-1136(2005)的综述。
例如，与本发明的纳米抗体本身相比，这样的氨基酸序列可以是这样的氨基酸序列，即，其增加本发明的多肽的半衰期、溶解性、或吸收，减少本发明的多肽的免疫原性或毒性，消除或减弱本发明的多肽的不理想的副作用，和/或赋予本发明的多肽其它有利的特性和/或减少本发明的多肽的不理想特性。所述氨基酸序列的一些非限制性实例为血清蛋白，诸如人血清白蛋白(参见，例如WO 00/27435)或半抗原分子(例如被循环抗体识别的半抗原，参见例如WO 98/22141)。
特别地，在本领域中已经描述，免疫球蛋白(如VH结构域)与血清白蛋白或与其片段的连接片段可以用来增加半衰期。参考WO 00/27435和WO 01/077137。按照本发明，本发明的纳米抗体优选地与血清白蛋白(或与其适当的片段)直接连接，或通过适当的接头连接，且特别地通过适当的肽连接，以致本发明的多肽可以作为遗传融合体(蛋白)表达。按照一个具体的方面，本发明的纳米抗体可以与血清白蛋白片段连接，所述血清白蛋白片段至少包括血清白蛋白的结构域III或其部分。例如，参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO 07/112940。
备选地，所述其它的氨基酸序列还可以提供第二结合位点或结合单位，所述结合位点或结合单位针对血清蛋白(诸如例如，人血清白蛋白或另一种血清蛋白，诸如IgG)，以在血清中提供增加的半衰期。例如，所述氨基酸序列包括下述纳米抗体，以及在WO 91/01743，WO 01/45746和WO 02/076489中所述的小肽和结合蛋白，和在WO 03/002609和WO04/003019所述的dAb’s。还参考Harmsen等，疫苗(Vaccine)，23(41)；4926-42，2005，以及EP0 368 684，以及WO 08/028977，WO 08/043821，WO 08/043822和WO 08/068280。
所述氨基酸序列可以特别针对血清白蛋白(并且更特别是人血清白蛋白)和/或针对IgG(并且更特别是人IgG)。例如，所述氨基酸序列可以是下列氨基酸序列：针对(人)血清白蛋白的氨基酸序列，和可以结合在(人)血清白蛋白上不参与血清白蛋白与FcRn结合的氨基酸残基的氨基酸序列(例如，参见WO 06/0122787)，和/或能够结合在血清白蛋白上不形成血清白蛋白结构域III的一部分的氨基酸残基的氨基酸序列(例如，同样参见WO 06/0122787)；具有或可以提供增加的半衰期的氨基酸序列(例如，参见埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的WO 08/028977)；与来自至少一个哺乳动物物种的、并且特别是与至少一个灵长类物种(诸如但不限于，来自猕猴属(Macaca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和/或恒河猴(恒河猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus))，同样参考WO 08/028977)的血清白蛋白交叉反应的针对人血清白蛋白的氨基酸序列；可以以不依赖pH方式结合血清白蛋白的氨基酸序列(参见，例如，WO2008/043821)，和/或是条件粘合剂的氨基酸序列(例如，见WO 08/043822)。
按照另一个方面，所述一个或多个其他氨基酸序列可以包括常规4-链抗体(且特别是人抗体)和/或重链抗体的一个或多个部分、片段或结构域。例如，尽管通常较不优选，本发明的纳米抗体可以与常规(优选人)VH或VL结构域连接或与VH或VL结构域的天然或合成的类似物连接，同样任选地通过接头序列(包括但不限于其他(单)结构域抗体，如Ward等所述的dAb’s)。
所述至少一个纳米抗体还可以与一个或多个(优选人的)CH1、CH2和/或CH3结构域连接，这任选地通过接头序列连接。例如，与适宜的CH1结构域连接的纳米抗体，可以例如——与适当的轻链一起——用来产生类似于常规Fab片段或F(ab’)2片段的抗体片段/结构，但是其中一个或者(F(ab’)2片段的情形中)一个或两个常规VH结构域已被本发明的纳米抗体取代。此外，两个纳米抗体可以与CH2和/或CH3结构域(任选通过接头)连接，以提供具有增加的体内半衰期的构建体。
按照本发明的多肽的一个具体方面，一个或多个本发明的纳米抗体可以与一个或多个恒定结构域(例如，2或3个可以用作Fc部分的一部分/形成Fc部分的恒定结构域)、Fc部分和/或一个或多个抗体部分、片段或结构域连接(任选地通过适当的接头或铰链区)，其赋予本发明的多肽一种或多种效应子功能，和/或可以赋予与一个或多个Fc受体结合的能力。例如，为了这一目的，并且不限于此，所述一个或多个其它氨基酸序列可以包括抗体、诸如来自重链抗体(如本文所述)并且更优选来自常规人4-链抗体的一个或多个CH2和/或CH3结构域；和/或可以形成Fc区域的(部分)和Fc区域，例如来自IgG(例如，来自IgG1，IgG2，IgG3或IgG4)，来自IgE或来自另一种人Ig如IgA，IgD或IgM。例如，WO 94/04678描述了包括骆驼科动物VHH结构域或其人源化的衍生物的重链抗体(即，纳米抗体)，其中所述骆驼科动物CH2和/或CH3结构域已被人CH2和CH3结构域取代，以提供由2条重链组成的免疫球蛋白，其中每条重链包括纳米抗体和人CH2与CH3结构域(但是无CH1结构域)，所述免疫球蛋白具有由所述CH2和CH3结构域提供的效应子功能，并且所述免疫球蛋白可以在无需任何轻链的存在下行使功能。熟练的技术人员应该清楚可以适当与本发明的纳米抗体连接以提供效应子功能的其它氨基酸序列，并且可以基于所需要的效应子功能进行选择。例如，参考WO 04/058820，WO 99/42077，WO 02/056910和WO 05/017148，以及Holliger和Hudson，同前所述的综述，和参考埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2007年12月4日提交的题目为“Constructscomprising single variable domains and an Fc portion derived from IgE(包括但可变结构域和来源于IgE的Fc部分的构建体)”的未预先公布的美国临时申请(也见PCT/EP2008/066366)。与相对应的本发明的纳米抗体相比，本发明的纳米抗体与Fc部分偶联也可以导致增加的半衰期。对于一些应用，使用赋予增加的半衰期而无任何生物学显著效应子功能的Fc部分和/或恒定结构域(即，CH2和/或CH3结构域)也可以是适当的或者甚至是优选的。熟练的技术人员应该清楚包括具有增加的体内半衰期的一个或多个纳米抗体和一个或多个恒定结构域的其它适当的构建体，并且例如，其可以包括与CH3结构域连接的两个纳米抗体，任选地通过接头序列连接。通常，具有增加的半衰期的任何融合蛋白或衍生物将优选具有大于50kD的分子量，50kD是肾吸收的截留值。
在另一个优选的但非限制性的方面中，为了形成本发明的多肽，一个或多个本发明的氨基酸序列可以与具有减少的(或基本上没有)自我缔合成二聚体的倾向(即，与在常规4-链抗体中天然存在的恒定结构域相比较)的天然存在、合成的或半合成的恒定结构域(或其类似物、变体、突变体、部分或片段)连接(任选地通过适当的接头或铰链区)。所述单体(即，无自我缔合的)Fc链变体，或其片段，是熟练的技术人员所清楚的。例如，Helm等，JBiol Chem(生物化学杂志)19962717494，描述了可以用于本发明的多肽链中的单体Fc□链变体。
此外，所述单体Fc链变体优选是这样的，以致它们仍然能够结合补体或相关的Fc受体(取决于它们所来源的Fc部分)，和/或是这样的，以致它们仍然具有它们所来源的Fc部分的一些或全部的效应子功能(或处于仍然适用于目的用途的减少的水平)。备选地，在这样的本发明的多肽链中，单体Fc链可以用来赋予所述多肽链增加的半衰期，在这种情形中，所述单体Fc链还可以不具有或基本上不具有效应子功能。
本发明的二价/多价、双特异性/多特异性或二互补位/多互补位多肽也可以与Fc部分连接，以提供于2007年12月4日提交的题目为“immunoglobulin constructs(免疫球蛋白构建体)”的未预先公布的美国临时申请US 61/005,331中记述的那种类型的多肽构建体(还见PCT/EP2008/066368)。
所述其它氨基酸序列还可以形成信号序列或前导序列，当合成时其引导本发明的纳米抗体或多肽从宿主细胞中分泌(例如，以提供本发明的多肽的前体-(pre-)、原-(pro-)或前原-(prepro-)形式，这取决于用来表达本发明的多肽的宿主细胞)。
所述其它氨基酸序列还可以形成这样的序列或信号，即，所述序列或信号允许本发明的纳米抗体或多肽导向和/或透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或所述序列或信号允许本发明的纳米抗体或多肽透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述氨基酸序列的适当的实例对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如包括但不限于，WO 08/020079的第118页上提及的那些。对于一些应用，特别是对于意欲杀死表达本发明的纳米抗体所针对的靶标的细胞(例如，在治疗癌症时)，或者意欲减少或减缓所述细胞的生长和/或增殖的那些应用中，本发明的纳米抗体还可以与(细胞)毒性蛋白或多肽连接。例如，可以与本发明的纳米抗体连接以提供本发明的细胞毒性多肽的所述毒性蛋白和多肽的实例对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如，可以在上文引用的现有技术和/或本文的进一步描述中找到。一个实例是在WO 03/055527中所述的所谓的ADEPTTM技术。
按照一个优选但非限制性的方面，所述一个或多个其它氨基酸序列包括至少一个其它的纳米抗体，以提供包括至少两个、诸如三个、四个、五个或更多个纳米抗体的本发明的多肽，其中所述纳米抗体可以任选地通过一个或多个接头序列(如本发明所定义)连接。如在WO 08/020079的第119页和第120页所述，包括两个或更多个纳米抗体的本发明的多肽，其中至少一个是本发明的纳米抗体，在本发明中还将称为本发明的“多价”多肽，并且在所述多肽中存在的纳米抗体还将在本发明中称为处于“多价形式”。例如，本发明的“二价”和“三价”多肽可以如WO 08/020079的第119和第120页上进一步所述。
包含至少两个纳米抗体的本发明的多肽，其中至少一个纳米抗体针对第一抗原(即，针对病毒的包膜蛋白)，并且至少一个纳米抗体针对第二抗原(即，不同于病毒的包膜蛋白)，还叫作本发明的“多特异性”多肽，并且存在于所述多肽中的纳米抗体在本文中还叫作处于“多特异性形式”。因此，例如，本发明的“双特异性”多肽是包括至少一个针对第一抗原(即病毒的包膜蛋白)的纳米抗体和至少一个针对第二抗原(即，不同于病毒的包膜蛋白)的其它纳米抗体的多肽，而本发明的“三特异性”多肽是这样的多肽，即，其包括至少一个针对第一抗原(即病毒的包膜蛋白)的纳米抗体，至少一个针对第二抗原(即，不同于所述病毒的包膜蛋白)的其它纳米抗体，和至少一个针对第三抗原(即，不同于病毒的所述包膜蛋白和第二抗原二者)的其它纳米抗体；等等。
因此，以其最简单的形式，本发明的双特异性多肽是本发明的二价多肽(如本文所定义)，其包括针对病毒的包膜蛋白的第一纳米抗体，和针对第二抗原的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文所定义)而连接；而以其最简单形式存在的本发明的三特异性多肽是本发明的三价多肽(如本文所定义)，其包括针对病毒的包膜蛋白的第一纳米抗体，针对第二抗原的第二纳米抗体，和针对第三抗原的第三纳米抗体，其中所述第一、第二和第三纳米抗体可以任选地通过一个或多个，并且特别是一个或多个特别是两个接头序列连接。
然而，从上文所述应该清楚，本发明并不限于此，在这种意义上，本发明的多特异性多肽可以包括至少一个针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体，和任何数目的针对一个或多个不同于病毒的包膜蛋白的抗原的纳米抗体。
此外，尽管所述多个纳米抗体在本发明的多肽中的特定顺序或排列可能对本发明最终的多肽的特性具有一些影响(包括，但不限于针对病毒的包膜蛋白的或针对所述一个或多个其它抗原的亲和性、特异性或抗体亲抗原性)也包括在本发明的范围内，但是所述顺序或排列通常不是关键的，并且可以由熟练的技术人员适当选择，任选地基于本发明的公开内容在一些有限的常规实验之后选择。因此，当提及本发明的特异性多价或多特异性多肽时，应该注意到，这包括相关纳米抗体的任何顺序或排列，除非另外明确指明。
最后，本发明的多肽包含两个或更多个纳米抗体以及一个或多个其它氨基酸序列(如本发明所提及)也在本发明的范围之内。
如本文进一步所述，本发明的多肽可以包含两种以上针对病毒的包膜蛋白的本发明的氨基酸序列和/或纳米抗体。一般地，所述多肽以与本发明的单氨基酸序列或纳米抗体比较增加的抗体亲抗原性结合于病毒的包膜蛋白。所述多肽可以例如包含针对病毒的包膜蛋白的相同的抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)(其可以是或可以不是相互作用位点)的本发明的两种氨基酸序列和/或纳米抗体；或包含本发明的至少一种“第一”氨基酸序列，所述“第一”氨基酸序列针对病毒的包膜蛋白的第一相同抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)(其可以是或不是相互作用位点)；和至少一种本发明的第二氨基酸序列和/或纳米抗体，其针对所述病毒的包膜蛋白的第二抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象(如果适合)，其中所述第二抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象与第一抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象不同(并且也可以是或可以不是相互作用位点)。优选地，在本发明的这样的“二互补位”多肽中，至少一种本发明的氨基酸序列和/或纳米抗体针对相互作用位点(如本文定义)，尽管本发明在其最广泛的意义上不限于此。
因此，也在本发明的范围内的是，如果适合，本发明的多肽可以结合于病毒包膜蛋白的两种以上抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基或构象。在这样的情形中，本发明的氨基酸序列和/或多肽所结合的所述病毒的包膜蛋白的抗原决定簇，表位，部分，结构域或亚基可以基本是相同的(例如，如果病毒的包膜蛋白包含重复的结构基序或以多聚体形式存在)或可以是不同的(并且在后一种情形中，认为本发明的氨基酸序列和多肽是“二和/或多互补位的”并且可以以相同或不同的亲和性和/或特异性结合于所述病毒的包膜蛋白的所述不同的抗原决定簇，表位，部分，结构域，亚基。因此，本发明的二或多互补位多肽针对和/或特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少两个表位，并且例如(但不限于)针对和/或可以特异性结合于病毒的相同包膜蛋白的三种以上的表位的多肽。
此外，本发明的多肽也可以针对和/或可以特异性结合于病毒的至少一种特定的包膜蛋白和其它靶标的至少一种其它表位，所述其它靶标的至少一种其它表位不同于所述至少一种特定的包膜蛋白。例如(但不限于)，本发明的多肽可以针对和/或可以特异性结合于病毒的至少一种特定的包膜蛋白和病毒的至少一种其它表位，例如病毒蛋白的至少一种其它表位，如其它特定的病毒包膜蛋白的至少一种其它表位。因此，根据本发明所述的多肽可以针对和/或可以特异性结合于至少两种不同包膜蛋白的至少两个(或甚至更多个)表位。此外，病毒的所述至少一种其它表位可以或可以不参与一个或多个病毒介导的生物学途径，在所述生物学途径中包括病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体；更具体地，病毒的所述至少一种其它表位可以或可以不涉及病毒在靶宿主细胞中的进入，如病毒体附着于靶宿主细胞和/或病毒融合于靶宿主细胞或病毒的所述至少一种其它表位可以或可以不涉及病毒在靶宿主细胞中的复制，如病毒转录和/或病毒翻译和/或病毒包装和/或功能病毒体的形成和/或新生病毒体在靶宿主细胞膜上出芽。
一般地，根据本发明所述的二价，三价和多价(如本文定义)，二特异性，三特异性和多特异性(如本文定义)，和二互补位，三互补位和多互补位(如本文定义)多肽可以通过特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少一种表位和靶标的至少一种其它表位(其可以不同于所述至少一种表位或可以同于所述至少一种表位)用于病毒性疾病的预防和/或治疗，其中所述靶标可以不同于或可以同于所述包膜蛋白。
优选地，根据本发明所述的二价、三价和多价(如本文定义)和二互补位、三互补位和多互补位多肽(如本文定义)可以通过特异性结合于病毒的相同包膜蛋白的至少两个(或甚至更多个)表位(其可以相同或不同)用于病毒性疾病的预防和/或治疗。
备选地，本发明的多肽可以针对和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少一个表位和其它靶标的至少一个其它表位，所述其它表位不同于所述特定的包膜蛋白并且例如是病毒的其它表位，如病毒蛋白的其它表位或其它特定的病毒包膜蛋白的其它表位。
优选地，所述二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性，和二互补位、三互补位和多互补位多肽，如上文讨论，将以与本发明的单氨基酸序列和/或纳米抗体比较提高的抗体亲抗原性结合于病毒的(包膜蛋白)。
更具体地，根据本发明所述的二价、三价和多价，二互补位、三互补位和多互补位，和二特异性、三特异性和多特异性多肽可以用于分别靶向在相同和不同包膜蛋白上的多个病毒受体结合位点，与本发明的单一氨基酸序列比较，这可以导致增加的病毒中和的功效(如本文定义)。此外，根据本发明所述的二价、三价和多价，和二互补位、三互补位和多互补位多肽(即，针对和/或特异性结合于相同的包膜蛋白上的至少两个表位)可以用于防止病毒逃逸和/或病毒逃脱。
此外，根据本发明的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以用于结合某些病毒的不同基因型，不同亚型和/或不同毒株。此外，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以用于防止病毒逃逸和/或病毒逃脱。
在本发明具体的方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价、二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位，三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H1N1。在其它的方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H3N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H5N1以及流感亚型H2N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H2N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1以及流感亚型H3N2。但是在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H2N2以及流感亚型H3N2。在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对流感病毒并且可以结合流感亚型H5N1，流感亚型H1N1，流感亚型H2N2，以及流感亚型H3N2。
在另一个方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对狂犬病病毒的G包膜蛋白并且可以结合于狂犬病病毒基因型1以及基因型5。
在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以针对RSV并且可以结合RSV的不同逃避突变型(如例如，在Lopez等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：6922-6928中所述)和/或特异于抗原性位点II，特异于抗原性位点IV-VI或特异于两种抗原性位点的组合的一种或多种逃避突变型。
在该方面中，在本发明中观察到根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示对某些病毒的不同基因型、不同亚型和/或不同毒株和/或分枝体的提高的结合和/或体外和/或体内中和。此外，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性，三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示对于病毒逃避突变型的提高的结合和/或中和。
在一个具体的方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示对流感的某些亚型(如H1，H2，H3和H5)的提高的结合和/或中和。根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示对于流感病毒的不同分枝体的提高的结合和/或中和。根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示与唾液酸对于结合流感病毒的血凝素H5的提高的竞争。
在其它方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示对于狂犬病病毒的不同毒株的提高的结合和/或中和。根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽还显示对于狂犬病病毒的不同基因型(如基因型1和基因型5)的提高的结合和/或中和。
在又一个方面中，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示对于RSV的不同毒株的提高的结合和/或中和(如Long，A-2和B-1)。根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽显示对于RSV的不同逃避突变型的提高的结合和/或中和(如例如，在Lopez等.1998，病毒学杂志(J.Virol.)72：6922-6928中所述的逃避突变型，一个或多个特异于抗原性位点II的逃避突变型、特异于抗原性位点IV-VI的逃避突变型，特异于两个抗原性位点的组合的逃避突变型)。
最后，根据本发明所述的二价、三价和多价，二特异性、三特异性和多特异性和/或二互补位、三互补位和多互补位多肽可以用于预防和/或抑制病毒感染和/或病毒体与其靶宿主细胞的融合(如本文定义)或可以通过诱导所述病毒的病毒体聚集来中和病毒。
对于包含一个或多个VHH结构域的多价和多特异性多肽及其制备物，还参照Conrath等.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，卷276，10.7346-7350，2001；Muyldermans，在分子生物技术中的综述(Reviews in MolecularBiotechnology)74(2001)，277-302；还参照例如WO 96/34103和WO 99/23221。本发明的一些具体多特异性和/或多价多肽的其它实例可以见于本文提及的埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的申请。
在一个方面中，本发明的纳米抗体可以附于非纳米抗体多肽。非纳米抗体多肽可以是给所述纳米抗体提供另外的官能性的多肽。例如，所述非纳米抗体多肽可以给本发明的纳米抗体提供增加的稳定性和/或体内半衰期。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽可以是抗体的非抗原结合片段。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽可以是人IgG1的Fc片段。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽还可以包含Fc片段的铰链区。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽可以通过一个或多个接头偶联于纳米抗体。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽可以偶联于多个纳米抗体。在一些实施方案中，多个纳米抗体在非纳米抗体多肽的每一侧偶联(见图59)。在一些实施方案中，多个纳米抗体在非纳米抗体多肽一侧偶联(见图60)。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽偶联于如上所述的二价、三价或多价，二互补位、三互补位或多互补位或二特异性、三特异性或多特异性多肽。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽在非纳米抗体多肽的一侧偶联于如上所述的二价、三价或多价，二互补位、三互补位或多互补位或二特异性、三特异性或多特异性多肽(图60和61)。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽在非纳米抗体多肽的两侧偶联于如上所述的二价、三价或多价，二互补位、三互补位或多互补位或二特异性、三特异性或多特异性多肽(图62)。在一些实施方案中，非纳米抗体多肽在非纳米抗体多肽的一侧偶联于如上所述的纳米抗体，并且在非纳米抗体多肽的一侧偶联于如上所述的二价、三价或多价，二互补位、三互补位或多互补位或二特异性、三特异性或多特异性多肽(图63)。在一些实施方案中，多个纳米抗体针对相同的抗原。在一些实施方案中，多个纳米抗体针对相同抗原上的不同表位。在一些实施方案中，多个纳米抗体针对相同的抗原上的相同表位。在一些实施方案中，多个纳米抗体是相同的。包含IgG1 Fc片段的纳米抗体构建体的非限制性实例在图46，表A-5和实施例53中提供。本发明包含Fc片段的优选纳米抗体是SEQ ID NO’s：2641-2659和2978-2988(表A-5)。
在该方面中，本发明通常还涉及这样的纳米抗体构建体(也称为“本发明的多肽链构建体”)，其包含两个多肽链(分别是“本发明的多肽链”)，其中每个多肽链包含两种以上单可变结构域，所述单可变结构域通常通过适合的铰链区或接头在最终的构建体中连接于一个或多个恒定结构域，从而一起形成Fc部分。所述单可变结构域可以在恒定结构域的一侧连接或单可变结构域可以在恒定结构域的两侧连接。
因此，由本发明提供的多肽链构建体通常包含Fc部分(如本文定义)，其中形成Fc部分的两条多肽链中的每条，任选地通过适合的接头或铰链区连接于两个以上单可变结构域(也如本文定义)。更具体地，在一个方面中，一个可变结构域可以连接在Fc部分的每一侧。在其它方面中，两个可变结构域可以连接在Fc部分的一侧。在其它方面中，三个可变结构域可以连接在Fc部分的一侧。在其它方面中，两个可变结构域可以连接在Fc部分的每一侧。在其它方面中，三个可变结构域可以连接在Fc部分的每一侧。在另一方面中，两个可变结构域可以连接在Fc部分的一侧，并且一个可变结构域可以连接在Fc部分的另一侧。
本发明的多肽链，和它们在形成本发明的多肽链构建体中的应用，形成本发明的另外方面。此外，在本发明的一个具体方面中，如本文进一步所述，本发明的这些多肽链也可以像这样使用(即没有与其它的多肽链的相互作用和/或不作为本发明的构建体的部分)。
优选地，在本发明的多肽链构建体中，本发明的每条多肽链包含两个，三个或四个单可变结构域，并且更优选地仅包含两个或三个单可变结构域，甚至更优选地仅包含两个单可变结构域。换言之，本发明的多肽链构建体优选地共包含四个(即，在每条多肽链中两个)，6个(即，在每条多肽链中三个)或8个(即，在每条多肽链中4个)单可变结构域，并且更优选地包含共4个单可变结构域(即，在每条多肽链中2个)或6个(即，在每条多肽链中3个)，和甚至更优选地共4个单可变结构域(即，在每条多肽链中2个)。
此外，本发明的每条多肽链通常包含两个恒定结构域(例如在衍生自IgG，IgA或IgD的Fc部分的情形中)，或三个恒定结构域(例如，在衍生自IgM或IgE的Fc部分的情形中)，从而在最终的构建体中，两条多肽链的恒定结构域形成Fc部分，例如衍生自IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4)的Fc部分、IgA、IgD、IgE或IgM或其变体、类似物、突变型、部分或片段(包含嵌合Fc部分)，其可以具有或可以不具有效应子功能，如本文进一步定义。
为方便起见，并且因为这些多肽链构建体通常优选用于实践中，本发明现在参照包含四个恒定结构域的多肽链构建体(即，在每条多肽链中2个恒定结构域)更详细进行描述，其中所述可变结构域通过适合的接头彼此连接，并且通过适合的接头或铰链区连接于恒定结构域。然而，对于技术人员清楚的是本发明的教导可以同等地应用于本发明的多肽链构建体，所述多肽链构建体包含6个恒定结构域(例如，在衍生自IgM或IgE的Fc部分的情形中)，和/或其中恒定结构域直接彼此连接和/或直接连接于可变结构域(例如，当Fc部分衍生自IgE时，可能不需要在Fc部分和可变结构域之间的铰链区)。
具有四个单可变结构域和四个恒定结构域的本发明多肽链构建体(例如形成衍生自IgG或IgA的Fc部分，或其类似物、突变体或变体)图示于非限制性的图59和60中。
在图59中，多肽链构建体包含两条多肽链(1)和(2)，其分别包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)和“第二”单可变结构域(6)。第一单可变结构域(5)任选地通过适合的接头或铰链区(7)连接于恒定结构域(3)。第二单可变结构域(6)，任选地通过适合的接头或铰链区(8)连接于恒定结构域(4)。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的恒定结构域(3)和(4)在一起形成Fc部分(9)。
在图60中，多肽链构建体包含两条多肽链(1)和(2)，其分别包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)和“第二”单可变结构域(6)。第一单可变结构域(5)任选地通过适合的接头(7)连接于第二单可变结构域(6)，并且也任选地(和一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接于恒定结构域。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的恒定结构域(3)和(4)在一起形成Fc部分(9)。
具有超过4个单可变结构域的本发明的多肽链构建体的实例图示于非限制性的图61，62和63中。
图61显示具有6个单可变结构域和四个恒定结构域的本发明的多肽链构建体(例如形成衍生自IgG或IgA的Fc部分，或其类似物、突变型或变体)。所述构建体包含两条多肽链(1)和(2)，其分别包含两个恒定结构域(3)和(4)，第一单可变结构域(5)，“第二”单可变结构域(6)和“第三”单可变结构域(10)。第一单可变结构域(5)，任选地通过适合的接头(7)连接于第二单可变结构域(6)，并且也任选地(和一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接于恒定结构域。所述第三单可变结构域(11)，任选地通过适合的接头(12)，连接于第二单可变结构域(6)。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)一起形成Fc部分(9)。
图62显示具有8个单可变结构域和4个恒定结构域的本发明的多肽链构建体(例如形成衍生自IgG或IgA的Fc部分，或其类似物、突变型或变体)。构建体包含两条多肽链(1)和(2)，其分别包含两条恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)，“第二”单可变结构域(6)，“第三”单可变结构域(10)和“第四”单可变结构域(13)。第一单可变结构域(5)，任选地通过适合的接头(7)，连接于第二单可变结构域(6)，并且还任选地(并且一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接于恒定结构域(3)。所述第三单可变结构域(10)，任选地通过适合的接头(12)连接于第四单可变结构域(13)，并且还任选地(并且一般地)通过适合的接头或铰链区(14)连接于恒定结构域(4)。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)一起形成Fc部分(9)。
图63显示具有6个单可变结构域和四个恒定结构域的本发明的多肽链构建体(例如形成衍生自IgG或IgA的Fc部分，或其类似物、突变型或变体)。所述构建体包含两条多肽链(1)和(2)，其分别包含两个恒定结构域(3)和(4)，第一单可变结构域(5)，“第二”单可变结构域(6)和“第三”单可变结构域(10)。第一单可变结构域(5)，任选地通过适合的接头(7)连接于第二单可变结构域(6)，并且也任选地(和一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接于恒定结构域(3)。所述第三单可变结构域(10)，任选地(并且一般地)通过适合的接头或铰链区(14)，连接于恒定结构域(4)。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)一起形成Fc部分(9)。
在具有超过6个或8个单可变结构域的多肽链构建体中，每条链(1)和(2)可以包含一个或多个另外的单可变结构域(未显示)；其可以也任选地通过适合的接头连接于本发明的单可变结构域。
在本发明的多肽链构建体中，存在于构建体中的所有单可变结构域可以分别针对不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。然而，这通常是较不优选的。优选地，存在于每条多肽链中的两个“第一”单可变结构域针对相同的靶标或抗原，并且存在于每条多肽链中的两个“第二”单可变结构域针对相同的靶标或抗原(对于“第三”、“第四”和其它的单可变结构域也是如此)。
在本发明的该方面中，第一单可变结构域和第二单可变结构域(对于“第三”，“第四”和其它的单可变结构域也是如此)可以针对不同的靶标或抗原(从而使本发明的构建体能够同时结合于两种以上的不同靶标或抗原)，或可以针对相同的靶标或抗原(以致在所述构建体中存在的所有单可变结构域能够结合于相同的靶标或抗原)。
如本文进一步所述，当在本发明的多肽链构建体中存在两种以上单可变结构域能够结合于相同的靶标或抗原时，它们可以结合于所述靶标或抗原的相同的表位，抗原决定簇，部分，结构域或亚基，或所述靶标或抗原的不同表位，抗原决定簇，部分，结构域或亚基。
本发明的多特异性多肽的一个优选而非限制性的实例包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个提供增加的半衰期的纳米抗体。例如，所述纳米抗体可以是针对血清蛋白、且特别是人血清蛋白的纳米抗体，所述血清蛋白诸如人血清白蛋白、甲状腺素结合蛋白、(人)转铁蛋白、凝血因子I、免疫球蛋白如IgG、IgE或IgM、或WO 04/003019中列出的一种血清蛋白。在这些中，可以结合血清白蛋白(且特别是人血清白蛋白)或结合IgG(且特别是人IgG，例如，参见在Muyldermans，同前所述的综述中记述的纳米抗体VH-1)的纳米抗体是特别优选的(尽管，例如，对于在小鼠或灵长类动物中的实验，可以使用分别针对小鼠血清白蛋白(MSA)或来自所述灵长类动物的血清白蛋白的纳米抗体或与之交叉反应的纳米抗体。然而，对于药物应用，通常优选针对人血清白蛋白或人IgG的纳米抗体。)提供增加的半衰期且可以用在本发明的多肽中的纳米抗体包括针对血清白蛋白的纳米抗体，其记述在埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的WO 04/041865，WO 06/122787和其他专利申请中，如上文所述的那些。
例如，提供增加的半衰期以用于本发明的所述一些优选的纳米抗体包括可以与(人)血清白蛋白上不参与血清白蛋白与FcRn结合的氨基酸残基结合的纳米抗体(例如，参见WO 06/0122787)；能够与血清白蛋白上不形成血清白蛋白结构域III的一部分的氨基酸残基结合的纳米抗体(例如，参见WO 06/0122787)；具有或可以提供增加的半衰期的纳米抗体(例如，参见WO 2008/028977)；针对与来自至少一个哺乳动物物种、且特别是至少一个灵长类物种(诸如但不限于，来自猕猴属(Macaca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和/或恒河猴(恒河猴(Macaca mulatta)))和狒狒(豚尾狒狒(Papio ursinus))，例如，参见WO 2008/028977)的血清白蛋白交叉反应的针对人血清白蛋白的纳米抗体；可以以不依赖pH的方式结合血清白蛋白的纳米抗体(例如，参见WO 08/043821)和/或是条件粘合剂的纳米抗体(例如，参见WO 08/043822)。
一些特别优选的提供增加的半衰期且可以用于本发明的多肽中的纳米抗体包括WO 06/122787中公开的纳米抗体ALB-1至ALB-10(参见表II和III)，其中ALB-8(WO 06/122787中的SEQ ID NO：62)是特别优选的。
按照本发明的一个具体的但非限制性的方面，除了一个或多个本发明的纳米抗体之外，本发明的多肽还包含至少一个针对人血清白蛋白的纳米抗体。
一般地，包含一个或多个本发明的纳米抗体的具有增加的半衰期的任何本发明的多肽，和具有增加的半衰期的本发明的纳米抗体的任何衍生物或所述多肽的任何衍生物，优选地具有是相对应的本发明的纳米抗体本身半衰期的至少1.5倍、优选至少2倍、如至少5倍、例如至少10倍或多于20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的纳米抗体本身相比较，所述具有增加的半衰期的衍生物或多肽可以具有增加超过1小时、优选超过2小时、更优选超过6小时、如超过12小时、或甚至超过24、48或72小时的半衰期。
在本发明的一个优选的但非限制性的方面中，所述衍生物或多肽可以在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，所述衍生物或多肽可以具有至少5天(如约5-10天)、优选至少9天(如约9-14天)、更优选至少约10天(如约10-15天)、或至少约11天(如约11-16天)、更优选至少约12天(如约12-18天或更多)、或大于14天(如约14-19天)的半衰期。
按照本发明的一个方面，所述多肽能够与可以增加所述多肽的体内半衰期的一个或多个分子结合。
本发明的多肽在体内是稳定的，并且它们的半衰期通过与抗降解和/或清除或螯合的分子结合来增加。典型地，所述分子是本身具有长久的体内半衰期的天然存在的蛋白。
本发明的多特异性多肽的另一个优选而非限制性的实例包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个这样的纳米抗体，即，所述纳米抗体是本发明的多肽所针对的，和/或允许本发明的多肽透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或允许所述纳米抗体透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述的纳米抗体的实例包括针对所需要的器官、组织或细胞的特异性的细胞表面蛋白、标记或表位(例如，与肿瘤细胞相关的细胞表面标记)的纳米抗体，和在WO 02/057445和WO 06/040153中描述的单结构域靶向脑的抗体片段，其中FC44(WO 06/040153中的SEQ ID NO：189)和FC5(WO 06/040154中的SEQ ID NO：190)是优选的实例。
在本发明的多肽中，所述一个或多个纳米抗体和所述一个或多个多肽可以直接彼此连接(例如在WO 99/23221中所述)和/或可以通过一个或多个适宜的间隔体或接头或其任意组合而彼此连接。
用于多价、多互补位和多特异性多肽和多肽链的适宜的间隔体或接头应该是熟练的技术人员所清楚的，并且通常可以是本领域用来连接氨基酸序列的任何接头或间隔体。优选地，所述接头或间隔体适合用于构建意欲药用的蛋白或多肽。
一些特别优选的间隔体包括本领域中用于连接抗体片段或抗体结构域的间隔体和接头。这些包括上文所引用的公知背景技术中提及的接头，以及例如在本领域中用于构建双抗体或ScFv片段的接头(在这一方面，然而，应该注意，尽管在双抗体和在ScFv片段中，所用的接头序列应该具有某种长度、某种程度的柔性以及允许相关的VH和VL结构域靠近在一起形成完整的抗原-结合位点的其它特性，但是，由于每一纳米抗体本身形成完整的抗原-结合位点，所以对于用于本发明的多肽的接头的长度或柔性没有特别的限制)。
例如，接头可以是适当的氨基酸序列，并且特别是1-50、优选1-30、诸如1-10个氨基酸残基的氨基酸序列。所述氨基酸序列的一些优选实例包括gly-ser接头，例如，(glyxsery)z型的，诸如(例如(gly4ser)3或(gly3ser2)3，如在WO 99/42077中所述，和在本文提及的Ablynx的申请中描述的GS30，GS15、GS9和GS7接头(例如，参见WO 06/040153和WO06/122825)，以及铰链样区域如天然存在的重链抗体的铰链区或类似的序列(如在WO94/04678中所述)。
一些其他特别优选的接头是聚丙氨酸(如AAA)，以及接头GS30(在WO 06/122825中的SEQ ID NO：85)和GS9(在WO 06/122825中的SEQ ID NO：84)。其它优选的接头可以包含铰链区，(Glyx-Sery)重复序列或(Glyx-Sery)与铰链区的组合(如例如在表A-5的构建体中使用和/或在表A-7中描述)。
其它适宜的接头通常包括有机化合物或聚合物，特别是适用于药用蛋白的那些。例如，聚(乙二醇)部分已经用来连接抗体结构域，参见例如WO 04/081026。
下列情形也在本发明范围内，所用的接头的长度、柔性程度和/或其他特性(尽管不是关键的，由于它通常是用在ScFv片段中的接头)可以对本发明最终的多肽的特性具有一些影响，包括但不限于针对病毒的包膜蛋白、或针对一种或多种其他抗原的亲和性、特异性或抗体亲抗原性。基于本文的公开内容，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
例如，在包括针对多聚体抗原(诸如多聚体受体或其他蛋白)的纳米抗体的本发明的多价多肽中，所述接头的长度和柔性优选是这样的，以致其允许在所述多肽中存在的每一个本发明的纳米抗体结合在所述多聚体每个亚基上的抗原决定簇。类似地，在包括针对在同一个抗原上的两个或更多个不同抗原决定簇(例如，针对抗原的不同表位和/或针对多聚体受体、通道或蛋白的不同亚基)的纳米抗体的本发明的多特异性多肽中，所述接头的长度和柔性优选是这样的，以致其允许每个纳米抗体与其目的抗原决定簇结合。同样地，基于本文的公开内容，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
下列情形也在本发明范围内：所用接头赋予本发明的多肽一种或多种其它有利特性或官能性，和/或提供用于形成衍生物和/或用于官能团附着的一个或多个位点(例如，如本文关于本发明的纳米抗体的衍生物的描述)。例如，包含一个或多个带电荷氨基酸残基(参见上表A-2和WO 08/020079的国际申请的第48页上)的接头可以提供提高的亲水特性，而形成或包含小的表位或标记的接头可以用于检测、鉴定和/或纯化目的。并且，基于本文的公开内容，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
最后，当两个或更多个接头用于本发明的多肽时，这些接头可以相同或不同。并且，基于本文的公开内容，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。
通常，为了使表达和生产容易，本发明的多肽将是线性多肽。然而，本发明在其最广泛意义上不限于此。例如，当本发明的多肽包括三个或多个纳米抗体时，可以利用具有三个或更多个“臂”的接头连接它们，所述每个“臂”与纳米抗体连接，以提供“星形”的构建体。尽管通常较不优选，但是还可以使用环形的构建体。
本发明还包括本发明多肽的衍生物，其可以基本上类似于本发明纳米抗体的衍生物，即，如本文所述。
本发明还包括“基本上由”本发明的多肽“组成的蛋白或多肽”(其中措辞“基本上由……组成”具有基本如上文所示相同的意思)。
按照本发明的一个方面，本发明的多肽基本上以分离的形式存在，如本文所定义。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和核酸可以以本身已知的方式制备，熟练的技术人员应该从本文的进一步描述中而清楚。例如，本发明的纳米抗体和多肽可以以本身已知用于制备抗体且特别是用于制备抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的任何方式制备。制备所述氨基酸序列、纳米抗体、多肽和核酸的一些优选但非限制性的方法包括本文所述的方法和技术。
熟练的技术人员应该清楚，用于制备本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽的一种特别有用的方法通常包括下列步骤：
i)在适宜的宿主细胞或宿主生物体(本文还叫作“本发明的宿主”)中或在另一种适宜的表达系统中，表达编码所述本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的核酸(本文还叫作“本发明的核酸”)，任选地接着进行：
ii)分离和/或纯化这样获得的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。特别地，这样的方法可以包括下列步骤：
i)在某种条件下培养和/或维持本发明的宿主，所述条件是这样的，以致所述本发明的宿主表达和/或生产至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽；任选地接着进行：
ii)分离和/或纯化这样获得的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。
本发明的核酸可以是单链或双链DNA或RNA的形式，并且优选地是双链DNA形式。例如，本发明的核苷酸序列可以是基因组DNA、cDNA或合成的DNA(诸如具有特别适用于在要用的宿主细胞或宿主生物体中表达的密码子应用的DNA)。
按照本发明的一个方面，本发明的核酸是基本上分离的形式，如本文所定义。
本发明的核酸还可以是这样的形式，存在于和/或是载体的一部分，诸如例如质粒、黏端质粒或YAC，其也可以是基本上分离的形式。
本发明的核酸可以以本身已知的方法制备或获得，其基于关于本文给出的本发明的多肽的氨基酸序列的信息，和/或可以从适当的天然来源分离。为了提供类似物，例如，编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列可以进行位点定向诱变，以提供编码所述类似物的本发明的核酸。并且，熟练的技术人员应该清楚，为了制备本发明的核酸，一些核苷酸序列，诸如至少一种编码纳米抗体的核苷酸序列，以及例如编码一种或多种接头的核酸，还可以以适当的方法连接在一起。
用于产生本发明的核酸的技术应该是熟练的技术人员所清楚的，并且例如可以包括但不限于，自动化DNA合成；位点定向诱变；将两个或多个天然存在的和/或合成的序列(或者其两个或更多个部分)组合，引入引起剪截表达产物表达的突变；引入一个或多个限制性位点(例如，以产生可以使用适宜的限制性酶容易地消化和/或连接的盒和/或区)，和/或通过使用一个或多个“错配”引物，使用例如病毒包膜蛋白的天然存在形式的序列作为模板的PCR反应的方法引入突变。这些以及其它技术应该是熟练的技术人员所清楚的，并且参考也参见上文提及的标准手册，诸如Sambrook等和Ausubel等，以及下文的实施例。
本发明的核酸还可以是这样的形式，存在于和/或是遗传构建体的一部分，这对于本领域的技术人员应该是清楚的并且如在WO 08/020079(通过引用结合于此)的第131-134页上所述。这样的遗传构建体通常包括至少一种本发明的核酸，其任选地与本身已知的一个或多个遗传构建体元件连接，诸如例如一个或多个适宜的调节元件(诸如适当的启动子、增强子、终止子、等等)和本文提到的其它遗传构建体元件。包括至少一种本发明的核酸的所述遗传构建体在本文也叫作“本发明的遗传构建体”。
本发明的遗传构建体可以是DNA或RNA，并且优选地是双链DNA。本发明的遗传构建体还可以是适于意欲的宿主细胞或宿主生物体的转化的形式，适于结合到要用的宿主细胞的基因组DNA中的形式，或者适于在要用的宿主生物体中独立复制、维持和/或遗传的形式。例如，本发明的遗传构建体可以是载体形式，诸如例如质粒、黏端质粒、YAC、病毒载体或转座子。特别地，所述载体可以是表达载体，即，可以提供体外和/或体内表达的载体(例如，在适宜的宿主细胞、宿主生物体和/或表达系统中)。
在一个优选的但非限制性的方面中，本发明的遗传构建体包括：
i)至少一种本发明的核酸；其可操作性地连接
ii)一个或多个调节元件，诸如启动子和任选地适宜的终止子；
并且任选地还有
iii)一个或多个本身已知的其它遗传构建体元件；
其中术语“可操作性地连接”(operably connected and operably linked)具有它们在WO 08/020079的第131-134页上所给出的含义；并且其中“调节元件”，“终止子”和“其它元件”，如在WO 08/020079的第131-134页上所述；并且其中所述遗传构建体可以进一步如在WO 08/020079的第131-134页上所述。
本发明的核酸和/或本发明的遗传构建体可以用于转化宿主细胞或宿主生物体，即，用于表达和/或生产本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。适当的宿主或宿主细胞是熟练的技术人员所清楚的，并且例如可以是任何适当的真菌的、原核的或真核的细胞或细胞系，或者任何适当的真菌的、原核的或真核的生物体，例如在WO 08/020079的第134页和第135页上所述的那些；以及本身已知的用于表达和生产抗体及抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的所有其它宿主或宿主细胞，这对于熟练的技术人员应该是清楚的。参考还参见上文引用的公知背景技术，以及例如WO 94/29457；WO 96/34103；WO99/42077；Frenken等，(1998)，同前所述；Riechmann和Muyldermans，(1999)，同前所述；vander Linden，(2000)，同前所述；Thomassen等，(2002)，同前所述；Joosten等，(2003)，同前所述；Joosten等，(2005)，同前所述；以及本文所引用的其它参考文献。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以被引入多细胞生物体的一个或多个细胞、组织或器官中并且在其中表达，例如用于预防和/或治疗目的(例如，作为基因治疗)，如在WO 08/020079的第135页和第136页上所述，并且在WO 08/020079引用的其它参考文献中所述。
对于纳米抗体在细胞中的表达，它们还可以作为所谓的“细胞内抗体”表达，例如在WO 94/02610，WO 95/22618和US-A-7004940；WO 03/014960中所述；在Cattaneo，A.和Biocca，S.(1997)细胞内抗体：开发和应用(Intracellular Antibodies：Development和Applications).Landes和Springer-Verlag；以及在Kontermann，方法(Methods)34，(2004)，163-170中所述。
例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以在转基因哺乳动物的乳中产生，例如在兔、母牛、山羊或绵羊的乳中(对于将转基因引入哺乳动物的通用技术参见例如US-A-6,741,957，US-B-6,304,489和US-A-6,849,992)，在植物中或植物的部分中产生，所述植物部分包括但不限于它们的叶、花、果实、种子、根或茎(例如在烟草、玉米、大豆或苜蓿中)中，或者例如在蚕家蚕(Bombix mori)的蛹中。
此外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以在不含细胞的表达系统中表达和/或生产，并且这样的系统的适当的实例应该是熟练的技术人员所清楚的。一些优选的但非限制性的实例包括在麦芽胚系统中的表达；在兔网织红细胞裂解物中表达；或者在大肠杆菌(E.coli)Zubay系统中表达。
如上文提及，应用纳米抗体的一个优点在于，基于此的多肽可以通过在适宜的细菌系统中表达而制备，并且适宜的细菌表达系统、载体、宿主细胞、调节元件等对熟练的技术人员是清楚的，例如参考上文引用的参考文献。然而，应该注意，本发明在其最广泛意义上并不限于在细菌系统中表达。
优选地，在本发明中，应用(体内或体外)表达系统，诸如细菌表达系统，其以适于药用的形式提供本发明的多肽，并且所述表达系统也是熟练的技术人员所清楚的。熟练的技术人员还应该清楚，适于药用的本发明的多肽可以使用肽合成技术制备。
对于工业规模的生产，用于纳米抗体或包含纳米抗体的蛋白治疗物的(工业)生产的优选的异源宿主包括大肠杆菌、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、酿酒酵母(S.cerevisiae)的菌株，其适用于大规模表达/生产/发酵，并且特别适用于大规模药物(即，GMP级别)表达/生产/发酵。所述菌株的适当的实例是熟练的技术人员所清楚的。所述菌株以及生产/表达系统也可从公司诸如Biovitrum(Uppsala，瑞典)获得。
备选地，哺乳动物细胞系，特别是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，可以用于大规模表达/生产/发酵，并且特别用于大规模药物表达/生产/发酵。并且，所述表达/生产系统也可从上文提及的一些公司获得。
具体的表达系统的选择部分取决于特定的翻译后修饰的需要，更具体地是糖基化的需要。生产包含纳米抗体的重组蛋白，对于所述重组蛋白糖基化是理想的或者必需的，将使得应用具有将所表达的蛋白糖基化的能力的哺乳动物表达宿主成为必要。在这一方面，熟练的技术人员应该清楚，获得的糖基化模式(即，附着的残基的种类、数量和位置)将取决于表达所用的细胞或细胞系。优选地，使用人细胞或细胞系(即，形成基本上具有人糖基化模式的蛋白)，或者使用另一种哺乳动物细胞系，其可以提供基本上和/或功能上与人糖基化作用相同的糖基化模式或者至少模拟人糖基化作用。一般地，原核宿主诸如大肠杆菌不具有将蛋白糖基化的能力，并且应用更低等真核细胞诸如酵母通常导致与人糖基化作用不同的糖基化模式。不过，应该理解，所有前述宿主细胞和表达系统可以用于本发明，这取决于要获得的理想的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。
因此，按照本发明的一个非限制性方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽被糖基化。按照本发明的另一个非限制性方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽未被糖基化。
按照本发明的一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在细菌细胞中生产，特别是在适于大规模药物生产的细菌细胞，诸如上文提及的菌株的细胞中生产。
按照本发明另一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在酵母细胞中生产，特别是在适于大规模药物生产的酵母细胞，诸如上文提及的物种的细胞中生产。
按照本发明另一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在哺乳动物细胞中生产，特别是在人细胞或人细胞系的细胞中，并且更特别是在适于大规模药物生产的人细胞或人细胞系的细胞中，诸如上文提及的细胞系中生产。
如在WO 08/020079的第138页和第139页上进一步所述，当在宿主细胞中的表达用于生产本发明的氨基酸序列，纳米抗体和多肽时，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以在细胞内生产(例如，在细胞溶胶中，在周质中或在内含体中)，接着由宿主细胞分离并且任选地进一步纯化；或可以在细胞外产生(例如，在其中培养宿主细胞的培养基中)，接着由培养基分离并任选地进一步纯化。因此，根据本发明的一个非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽是这样的氨基酸序列、纳米抗体或多肽，其在细胞内产生并且分离自宿主细胞，具体地分离自细菌细胞或分离自细菌细胞的包含体。根据本发明的另一个非限制性方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽是这样的氨基酸序列、纳米抗体或多肽，其已经在细胞外产生，并且分离自培养宿主细胞的培养基。
关于这些宿主细胞使用的一些优选的，但非限制性的启动子包括在WO 08/020079的第139和第140页上提及的那些。
关于这些宿主细胞使用的一些优选的，但非限制性的分泌序列包括在WO 08/020079的第140页上提及的那些。
用于转化本发明的宿主或宿主细胞的适宜的技术对熟练的技术人员是清楚的，并且可以取决于要用的宿主细胞/宿主生物体和要用的遗传构建体。参考也参见上文提及的手册和专利申请。
转化后，可以进行检测并且选择已经成功转化了本发明的核苷酸序列/遗传构建体的那些宿主细胞或宿主生物体的步骤。例如，这可以是基于存在于本发明的遗传构建体中的选择标记的选择步骤，或者是包括检测本发明的氨基酸序列的步骤，例如，使用特异的抗体进行。
转化的宿主细胞(其可以是稳定的细胞系的形式)或宿主生物体(其可以是稳定的突变系或株系的形式)形成本发明的另一方面。
优选地，这些宿主细胞或宿主生物体是这样的，以致它们表达或者(至少)能够表达(例如，在适宜的条件下)本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽(并且在宿主生物体的情形中：在它的至少一种细胞、部分、组织或器官中)。本发明还包括本发明的宿主细胞或宿主生物体的其它世代、后代和/或子代，例如，其可以通过细胞分裂或者通过有性或无性生殖获得。
为了生产/获得本发明的氨基酸序列的表达，所述转化的宿主细胞或转化的宿主生物体通常可以在本发明(理想的)氨基酸序列、纳米抗体或多肽得到表达/生产的条件下保存、维持和/或培养。适宜的条件对熟练的技术人员是清楚的，并且通常取决于所用的宿主细胞/宿主生物体，以及取决于控制本发明的(相关)核苷酸序列表达的调节元件。此外，参考参见在上文关于本发明的遗传构建体段落中提及的手册和专利申请。
一般地，适宜的条件可以包括使用适宜的培养基，存在适宜的食物来源和/或适宜的营养素，使用适当的温度，并且任选地存在适当的诱导因子或化合物(例如，在本发明的核苷酸序列在可诱导启动子的控制下的情形中)；所有这些可以由熟练的技术人员选择。此外，在这样的条件下，本发明的氨基酸序列可以以组成型方式、以瞬时方式、或者只在适当地诱导时表达。
熟练的技术人员还应该清楚，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以(首先)以不成熟的形式(如上文提及)产生，其然后可以进行翻译后修饰，这取决于所用的宿主细胞/宿主生物体。并且，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以被糖基化，这也取决于所用的宿主细胞/宿主生物体。
然后，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以从宿主细胞/宿主生物体和/或从培养所述宿主细胞或宿主生物体的培养基中分离，这使用本身已知的蛋白分离和/或纯化技术，诸如(制备级)层析和/或电泳技术、差别沉淀技术、亲和技术(例如，使用与本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽融合的特异性的、可裂解的氨基酸序列)和/或制备级免疫学技术(即，使用针对要被分离的氨基酸序列的抗体)进行。
通常，对于药物应用，本发明的多肽可以配制成药物制剂或组合物，其包括至少一种本发明的多肽和至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂，并且任选地一种或多种其它药物活性多肽和/或化合物。通过非限制性实例的方式，这样的制剂可以是适于下列各项的形式：口服给药，肠胃外给药(诸如通过静脉内、肌内或皮下注射或静脉内输注)，局部给药，通过吸入、皮肤贴片、植入物、栓剂给药，等等。所述适宜的给药形式——其可以是固体、半固体或液体，取决于给药的方式——以及制备其所用的方法和载体，对熟练的技术人员是清楚的，并且在本文中进一步描述。
因此，在另一个方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含至少一种本发明的氨基酸，至少一种本发明的纳米抗体，至少一种本发明的化合物或构建体，或至少一种本发明的多肽，以及至少一种适当的载体、稀释剂或赋形剂(即，适于药用)，以及任选地一种或多种其它活性物质。
通常，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽可以以本身已知的任何适当的方法配制和施用，例如，关于其的参考文献参见上文引用的公知背景技术(并且特别参见WO 04/041862，WO 04/041863，WO 04/041865，WO 04/041867和WO 08/020079)，以及参见标准手册，诸如雷明顿药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，第18版，Mack出版公司，美国(1990)或雷明顿，制药科学和实践(Remington，the Science和Practice of Pharmacy)，第21版，Lippincott Williams和Wilkins (2005)；或治疗抗体手册(the Handbook of Therapeutic Antibodies)(S.Dubel，Ed.)，Wiley，Weinheim，2007(例如，参见第252-255页)。
例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽可以本身已知的用于常规抗体及抗体片段(包括ScFv’s和双抗体)和其它药物活性蛋白的任何方法配制和施用。所述制剂以及制备其的方法对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如，包括适于肠胃外给药(例如静脉内、腹膜内、皮下、肌内、腔内、动脉内或鞘内给药)或适于局部(及透皮的或皮内)给药的制剂。
例如，用于肠胃外给药的制剂可以是适于输注或注射的无菌溶液、混悬液、分散液或乳剂。例如，用于所述制剂的适宜的载体或稀释剂包括但不限于，在WO 08/020079的第143页上提及的那些。通常优选水性溶液或混悬液。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽还可以使用递送的基因治疗方法进行施用。参见，例如，美国专利号5,399,346，其完全结合作为参考。使用递送的基因治疗方法，转染了编码本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的基因的原代细胞另外可以用组织特异性启动子转染，以靶向特异的器官、组织、移植物、肿瘤或细胞，并且另外可以使用用于亚细胞定位表达的信号和稳定序列进行转染。
因此，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽可以全身施用，例如，口服地，与药用赋形剂诸如惰性稀释剂或可同化的食用载体组合。它们可以包封在硬壳或软壳的明胶胶囊中，可以压缩成片剂，或者可以直接与患者日常饮食的食物组合。对于口服治疗性施用，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽可以与一种或多种赋形剂组合，并且以可吸收的片剂、颊含片剂、药片、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆、糯米纸囊剂等形式使用。所述组合物和制剂应该包含至少0.1％的本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体或多肽。当然，所述组合物和制剂的百分数可以变化，并且可以便利地在所给单位剂型的约2-约60重量％之间。本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体或多肽在这样的治疗有效组合物中的量是这样的，以致获得有效的剂量水平。
所述片剂、药片、丸剂、胶囊等还可以包含：粘合剂；赋形剂；崩解剂；润滑剂和甜味剂或者调味剂，例如在WO 08/020079的第143-144页上提及的那些。当单位剂型是胶囊时，除上述类型的物质之外，它还可以包含液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其它物质可以作为涂层存在，或者另外修饰所述固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂、或胶囊可以用胶、蜡、紫胶或糖等包被。糖浆或酏剂可以包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽，作为甜味剂的蔗糖或果糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯类，染料和调味剂诸如樱桃或橙味调味剂。当然，在制备任何单位剂型中所用的任何物质都应该是药物可接受的，并且在所用的量上基本上无毒。另外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽可以结合在持续释放的制剂和装置中。
用于口服给药的制备物和制剂还可以被提供以肠衣，所述肠衣允许本发明的构建体抵抗胃环境，并且进入肠内。更一般地，用于口服给药的制备物和制剂可以适当地配制成用于递送到胃肠道的任何理想的部分。另外，适宜的栓剂可以用于递送到胃肠道内。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽还可以通过输注或注射进行静脉内或腹膜内施用，如在WO 08/020079的第144和第145页上进一步所述。
对于局部给药，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽可以以纯的形式应用，即，在它们是液体的情形中。然而，通常理想地将它们作为与皮肤病学可接受的载体结合的组合物或制剂施用到皮肤上，所述载体可以是固体或液体，如在WO 08/020079的第145页上进一步所述。
通常，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽在液体组合物诸如洗液中的浓度约0.1-25重量-％，优选地约0.5-10重量-％。在半固体或固体组合物诸如凝胶或粉剂中的浓度约0.1-5重量-％，优选地约0.5-2.5重量-％。
在优选的方面中，本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物，构建体和/或多肽和/或包含其的组合物被施用于肺组织。在本发明的背景中，“肺组织(pulmonary tissue)”在本发明中用于与肺组织(lung tissue)或肺(lung)相同的目的。肺包含2个不同的区：传导区和呼吸区，在其中存在呼吸道和血管区室(见例如，“肺药物递送(Pulmonary DrugDelivery)”，由Karoline Bechtold-Peters和Henrik Luessen编辑，2007，ISBN 978-3-87193-322-6第16-28页)。
对于肺递送，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽可以以纯的形式应用，即当它们是液体或干粉时应用。然而，优选将它们作为包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物构建体和/或多肽和适用于肺递送的载体的组合物或制剂施用于肺组织。因此，本发明还涉及包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽和适用于肺递送的载体的药物组合物。适用于肺递送的载体是本领域已知的。
本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物，构建体和/或多肽也可以作为纯药的微粒或纳米粒进行施用，所述微粒或纳米粒具有有利于肺递送的粒径和分布。
因此，本发明还涉及适合用于本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物，构建体和/或多肽的肺递送并且适合于包含其的组合物的应用的药物装置。该装置可以是用于包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽的液体的吸入器(例如精细固体颗粒的混悬液或小滴)。优选地，该装置是包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽的气溶胶。所述装置也可以是以干粉的形式包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽的干粉吸入器。
在优选的方法中，向肺组织的施用通过吸入本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物，构建体和/或多肽和/或在气溶胶云状物中包含其的组合物进行。根据本发明，吸入气溶胶云状物可以通过吸入器装置进行。所述装置应该在哺乳动物的吸入循环的适合时刻，从包含本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物，构建体和/或多肽和/或包含其的组合物的制剂产生需要粒径(分布)的气溶胶云状物，其包含合适剂量的本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽(“肺药物递送(Pulmonary drug delivery)”，Bechtold-Peters和Luessen，编辑，ISBN 978-3-87193-322-6，第125页)。
在本发明的上下文中，“气溶胶”意为精细固体颗粒或液体小滴(或其组合)在气体中的混悬剂，其中对于本发明的目的，所述颗粒和/或小滴包含本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物，构建体和/或多肽。
所述装置应该在哺乳动物的吸入循环的适合时刻，从所述制剂产生需要粒径(分布)的气溶胶云状物，其包含合适剂量的本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽。应该考虑下面的4项要求(制剂，粒径，时间和剂量)(“肺药物递送(PulmonaryDrug Delivery)”，Bechtold-Peters和Luessen，编辑，见上文，第125和第126页)：
-在所述装置中使用的制剂可以从在喷雾器中使用的水溶液或混悬液到在定量定压式吸入器中使用的基于推进剂的溶液或混悬液或甚至用于干粉吸入器的特别加工的粉末混合物。所有这些不同的制剂需要关于气溶胶产生的不同原理，这强调了装置和制剂的相互依赖性；
-由于气溶胶颗粒沉积的位点取决于它们的(空气动力学)大小和速度，并且气溶胶云状物的需要的粒径根据沉积物在肺中的需要位点变化，这与施用的治疗目的相关；
-由于气溶胶云状物可以被调节从而在由哺乳动物产生的吸入循环的不同时刻释放，因此优选对于本发明的药剂(沉积在肺的外周部分)，所述气溶胶在吸入循环的起点释放；
-剂量可以变化得相当大，并且可以例如对于人，从数微克变化到数百微克或甚至数毫克，例如约多到约10毫克。
各种吸入系统例如在综述(“肺药物递送(Pulmonary Drug Delivery)”，Bechtold-Peters和Luessen，编辑，见上文)的第129到第148页上描述，并且包括，但不限于，喷雾器，定量定压式吸入器，定量定压式液体吸入器和干粉吸入器。也可以使用考虑了关于受控的吸入机动操纵的最优和个性化的呼吸模式的装置(见在“肺药物递送(Pulmonary Drug Delivery)”的第157页上的AKITA技术，Bechtold-Peters和Luessen，编辑，见上文)。
然而，所述装置不仅对于本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽的肺递送是重要的，而且合适的制剂对于获得有效的递送是关键的。这原则上可以通过使用下述方法中的一项获得：
-施用包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽的水溶液或混悬液(例如滴鼻剂)到鼻腔中；
-雾化包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽的水溶液或混悬液；
-通过液化的推进剂雾化；和
-分散干粉。
因此，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽的制剂必须根据所选择的吸入装置使用和调整。适合的制剂，即赋形剂加上本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和/或多肽，例如在“肺药物递送(Pulmonary Drug Delivery)”，Bechtold-Peters和Luessen，编辑，的第IV章中描述，见上文。
在治疗中使用所需要的本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽的量不仅关于选定的特定氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体或多肽变化，还根据施用路径、被治疗的病症的性质和患者的年龄和病症变化，并且最终根据住院医师或临床医师判断变化。此外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物、构建体和多肽的剂量根据靶宿主细胞、肿瘤、组织、移植物或器官变化。
理想的剂量可以便利地以单一剂量或作为在适当的时间间隔施用的分剂量而存在，例如，作为每天2、3、4次或更多的亚剂量。所述亚剂量本身可以进一步分割，例如，分割成许多次不连续的宽松间隔的施用；诸如从吸入器多次吸入，或者通过使用多滴到眼睛中。
施用方案可以包括长期的、日常的治疗。“长期”意指至少2周，并且优选地数周、数月或数年的持续时间。在这一剂量范围的必要的修改可以由本领域的普通技术人员仅仅使用本文的教导所给的常规实验而确定。参见雷明顿药物科学(Remington’sPharmaceutical Sciences)(Martin，E.W.，第4版)，Mack出版公司，Easton，PA。在任何并发症情形中，剂量还可以由个别医生进行调整。
在另一方面中，本发明涉及预防和/或治疗至少一种病毒性疾病的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。
在本发明的内容中，术语“预防和/或治疗”不但包括预防和/或治疗疾病，而且通常包括预防所述疾病的发作，减缓或逆转疾病进程，防止或减缓与所述疾病相关的一种或多种症状的发作，减少和/或减轻与所述疾病相关的一种或多种症状，减少所述疾病和/或与之相关的任何症状的严重性和/或持续时间，和/或防止所述疾病的严重性和/或与之相关的任何症状的进一步增加，防止、减少或逆转由所述疾病引起的任何生理损害以及通常对被治疗的患者有益的任何药理作用。
待治疗的受试者可以是任何温血动物，但是特别是哺乳动物，并且更特别是人类。熟练的技术人员应该清楚，待治疗的受试者特别是患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的人。
本发明涉及预防和/或治疗至少一种与病毒的进入和/或病毒复制相关和/或由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导，与其生物学或药学活性、和/或与其中涉及病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体的病毒介导的生物学途径相关的疾病或病症的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。特别地，本发明涉及一种用于预防和/或治疗可以通过调节和具体地抑制和/或预防其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的病毒介导的生物学途径的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。具体地，本发明涉及一种用于预防和/或治疗可以通过中和病毒(如本文定义)和/或调节，减轻和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)治疗的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。药物有效量可以是这样的量，其足以调节并且具体地抑制和/或防止其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的病毒-介导的生物学途径；和/或在循环中提供足以调节并且具体地抑制和/或防止其中涉及病毒的包膜蛋白和/或病毒受体的病毒-介导的生物学途径的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体水平的量。
更具体地，所述方法用于预防和/或治疗可以在病毒感染的进入前阶段(即在病毒进入靶宿主细胞发生之前和/或过程中)和/或在病毒感染的进入后阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞发生之后)中和病毒(如本文定义)和/或调节，减轻和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)的至少一种疾病或病症。因此，用于预防和/或治疗可以包括在病毒感染的进入前阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞已经发生之前和/或过程中)中和病毒(如本文定义)和/或调节、减轻和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)的至少一种疾病或病症的所述方法，认为在本文包括调节和具体地抑制和/或预防病毒进入(如本文进一步定义)靶宿主细胞中。此外，用于预防和/或治疗可以在病毒感染的进入后阶段(即，在病毒进入靶宿主细胞已经发生之后)中和病毒(如本文定义)和/或调节、减轻和/或抑制病毒的感染性(如本文定义)的至少一种疾病或病症的方法，在本文认为包括调节和具体地抑制和/或预防病毒在靶宿主细胞中的复制(如本文进一步定义)。
因此，本发明涉及用于通过在所述生物学途径的任何适合阶段特异性结合于病毒的包膜蛋白来预防和/或治疗可以通过调节和具体地抑制和/或防止病毒在靶宿主细胞中的进入和/或复制来治疗的至少一种疾病或病症的方法；优选地，本发明的方法可以包括通过结合于病毒的包膜蛋白从而诱导病毒体聚集和/或病毒体结构被去稳定化和/或病毒体对靶宿主细胞的附着被调节、抑制和/或防止(例如通过调节和/或抑制和/或预防在病毒的包膜蛋白和靶宿主细胞上的病毒受体之间的相互作用或通过与所述包膜蛋白竞争与所述病毒受体的结合)和/或病毒与所述靶宿主细胞的融合被调节、抑制和/或防止(例如在所述靶宿主细胞膜，或在所述靶宿主细胞的内体和/或溶酶体区室)，例如通过防止所述病毒的包膜蛋白进行构象变化，来调节和具体地抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒进入。备选地，本发明的方法可以包括通过在所述生物学途径的任何适合的阶段特异性结合于病毒的包膜蛋白调节和具体地抑制和/或预防在靶宿主细胞中的病毒复制(如本文定义)；优选地，本发明的方法可以包括通过结合于病毒的包膜蛋白从而使病毒基因组的转录和/或翻译被影响、抑制和/或防止和/或病毒包装和/或功能病毒体形成被影响、抑制和/或防止和/或新生病毒体从靶宿主细胞膜的出芽被减少、抑制和/或防止来调节、和具体地抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒复制。
本发明还涉及用于预防和/或治疗可以通过向患者施用本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的化合物或构建体或本发明的多肽进行预防和/或治疗的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗至少一种病毒感染的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用药物活性量的本发明氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。
更具体地，本发明涉及用于预防和/或治疗选自由本文列出的疾病和病症组成的组中的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV，流感或狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV，流感或狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的三价氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的二价NC41纳米抗体(如例如，SEQ ID NO：2395)。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的三价NC41纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2415和2989-2998之一)。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的三价氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的二价202-C8纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2423和2424之一)。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的三价202-C8纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2425和2426之一)。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感H1N1(更具体地猪流感H1N1)导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明多价(例如三价、二价、三互补位、二互补位、三价二互补位)化合物或构建体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，更具体地是二价202-C8纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2423和2424之一)或三价202-C8纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2425和2426之一)。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明二价或二互补位氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的二价或二互补位纳米抗体，如在实施例50中所述。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV、流感或狂犬病导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明氨基酸序列、本发明纳米抗体、本发明多肽和/或包含其的药物组合物。
在另一个方面中，本发明涉及免疫治疗的方法，并且特别涉及被动免疫治疗的方法，所述方法包括给患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包括其的药物组合物。
在上述方法中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽和/或包含其的组合物可以以任何适当的方式施用，这取决于要用的特定的药物制剂或组合物。因此，例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/多肽和/或包含其的组合物可以口服、腹膜内(例如，静脉内、皮下、肌内、或者通过避开胃肠道的任何其它施用途径)、鼻内、透皮地、局部施用，通过栓剂、通过吸入方式施用，这也取决于要用的特定药物制剂或组合物。临床医生能够选择适当的施用途径和用于所述施用的适当的药物制剂或组合物，这取决于要预防或治疗的疾病或病症以及临床医生公知的其它因素。
因此，一般地，根据本发明所述的针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和多肽和/或包含其的组合物可以以任何适合的方式施用；，例如，但不限于此，根据本发明所述的针对病毒的包膜蛋白(如例如RSV病毒，流感病毒或狂犬病病毒)的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和多肽和包含其的组合物可以通过鼻内和/或通过吸入和/或通过任何其它适合的肺递送形式施用；用于肺递送和/或鼻内递送和/或通过吸入本发明的纳米抗体、氨基酸序列、化合物或构建体和/或多肽进行递送的方法对于技术人员是公知的，并且例如在下列文献中描述：Binghe Wang，Teruna Siahaan和RichardSoltero(编辑Wiley InterScience(John Wiley & Sons))的手册“Drug Delivery：Principles and Applications(药物递送：原理和应用)”；在埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)的题为“多肽和蛋白的鼻内递送(Intranasal delivery of polypeptidesand proteins)的国际申请WO 08/049897中；在Rosenfeld G.C.，Loose-Mitchell D.S.“药理学PreTestTM自我评价和综述(Pharmacology PreTestTM Self-Assessment andReview)”(第11版)；和在Lippincott Williams & Wilkins，纽约；Shlafer M.McGraw-Hill医药学出版分社，纽约的“药理学(Pharmacology)”(第3版)；Yang K.Y.，Graff L.R.，Caughey A.B.Blueprints Pharmacology，Blackwell出版。
因此，本发明还涉及用于施用有效量的针对病毒的包膜蛋白(如RSV病毒，流感病毒或狂犬病病毒的包膜蛋白)的本发明氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽和/或包含其的组合物的方法，其中所述方法包括向肺组织施用所述氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽和/或包含其的组合物。在所述方法中，所述氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽和/或包含其的组合物可以通过肺递送领域已知的任何方法进行施用，如例如通过使用吸入器或鼻内递送装置或气溶胶。
在本发明的一个方面中，所述氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽结合和/或中和在肺组织中存在的病毒。在肺组织中存在和/或感染肺组织的病毒是本领域已知的并且包括，例如但不限于流感病毒、RSV、鼻病毒(还见病毒学领域(FieldsVirology)，第5版，主编：David-M.Knipe，Peter M.Howley，Wolters Kluwer/lipincotWilliams&Wilkins，2007)。优选地，在用于肺递送的所述方法中，至少5％，优选地至少10％，20％，30％，40％，更优选地至少50％，60％，70％，和甚至更优选地至少80％以上的本发明氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽在至少24小时，优选地至少48小时更优选地至少72小时内在肺组织中是稳定的。
已经令人惊奇地发现，本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽在肺组织中具有长期持续的稳定性。例如，已经发现针对RSV的纳米抗体在肺中在至少48小时内仍旧是具有功能的(见实验部分)。因此，考虑到本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽的估计的长期持续的稳定性，具有治疗间隔如一天一次，每2天一次，每3天一次，每4天一次，每5天一次，每6天一次或每周一次的本发明实施方案是可能的。
因此，本发明涉及用于将本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽递送给受试者的肺组织，而不失活的方法，所述方法包括向所述受试者经肺施用本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽的步骤。
在本发明的其它方面中，所述氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽能够提供系统治疗或生物学活性。在该方面中，在经肺施用氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽和/或包含其的组合物之后，所述氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽进入血流并且结合和/或中和在血液中存在的病毒。感染非肺组织的病毒是本领域已知的，并且包括，例如但不限于，肝炎病毒、单纯疱疹I和II病毒、埃巴病毒、巨细胞病毒、西尼罗河病毒、狂犬病病毒，肠道病毒(脊髓灰质炎病毒、Coxcackieviruses)(也见病毒学领域(Fields Virology)，第5版，主编：David-M.Knipe，Peter M.Howley，WoltersKluwer/lipincot Williams & Wilkins，2007)。优选地，在经肺递送的所述方法中，关于本发明的氨基酸序列，纳米抗体，化合物或构建体和/或多肽的生物利用度与所述纳米抗体、多肽或蛋白的肠胃外施用比较，是至少1％，优选地至少2％，5％，10％，20％，30％，40％，更优选地至少50％，60％，70％，和甚至更优选地至少80％以上。
因此，本发明涉及将本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽递送到受试者的血流而不失活的方法，所述方法包括将所述氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽施用于所述受试者的步骤。
本发明还涉及用于预防和/或治疗至少一种病毒感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明的氨基酸序列，本发明的纳米抗体，本发明的多肽，本发明的化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。
更具体地，本发明涉及用于预防和/或治疗至少一种选自由本文列出的疾病和病症组成的组的疾病或病症的方法，所述方法包括，向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明多肽、本发明的化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV，流感或狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、本发明的化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV，流感或狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明纳米抗体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明的三价氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的二价NC41纳米抗体(如例如，SEQ ID NO：2395)。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由RSV导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的三价NC41纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2415和2989-2998之一)。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感引起的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感引起的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明三价氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感引起的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的二价202-C8纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2423和2424之一)。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感引起的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的三价202-C8纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2425和2426之一)。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由流感H1N1(更具体地猪流感H1N1)引起的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，更具体地二价202-C8纳米抗体(如例如，SEQ ID NO’s：2423和2424之一)或三价202-C8纳米抗体(如例如，SEQID NO’s：2425和2426之一)。
更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)氨基酸序列，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)纳米抗体，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)多肽，本发明多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的本发明二价或二互补位氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽。更具体地，本发明可以涉及用于预防和/或治疗由狂犬病病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的二价或二互补位纳米抗体，如在实施例50中所述。
此外，例如，但不限于此，根据本发明所述的针对狂犬病毒的包膜蛋白的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和多肽和包含其的组合物可以通过肌内和/或通过任何适合递送到脑内的形式，如允许所述氨基酸序列、纳米抗体、多肽、化合物或构建体和包含其的组合物运送穿过血脑屏障的任何适合的递送形式进行施用。用于将本发明的纳米抗体、氨基酸序列和/或多肽肌内递送和/或任何递送到脑的适合形式对于技术人员是公知的，并且例如在下列文献中描述：Binghe Wang，Teruna Siahaan和Richard Soltero(编辑WileyInter科学(Science)(John Wiley&Sons))的手册“Drug Delivery：Principles andApplications(药物递送：原理和应用)(2005)”；在Rosenfeld G.C.，Loose-Mitchell D.S.“药理学PreTestTM自我评价和综述(Pharmacology PreTestTM Self-Assessment andReview)”(第11版)；和在Lippincott Williams & Wilkins，纽约；Shlafer M.McGraw-Hill医药学出版分社，纽约的“药理学(Pharmacology)”(第3版)；Yang K.Y.，Graff L.R.，Caughey A.B.Blueprints Pharmacology，Blackwell出版。
本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽和/或包含其的组合物按照治疗方案进行施用，所述治疗方案适于预防和/或治疗要被预防或治疗的疾病或病症。临床医生通常能够确定适宜的治疗方案，这取决于下列因素，诸如要被预防或治疗的疾病或病症，要被治疗的疾病的严重性和/或其症状的严重性，要用的本发明的特定的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽，要用的特定的施用途径和药物制剂或组合物，患者的年龄、性别、体重、饮食、综合病况，以及临床医生公知的类似因素。
一般地，所述治疗方案包括以一种或多种药物有效量或剂量施用一种或多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽，或者包含其的一种或多种组合物。施用的具体量或剂量由临床医生确定，同样基于上文引用的因素。
通常，对于预防和/或治疗本文提及的疾病和病症，并且取决于要治疗的具体疾病或病症，要用的特定的本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物和构建体和多肽的功效，具体的施用途径和使用的特定的药物制剂或组合物，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和多肽一般以每天每kg体重1克-0.01微克的量施用，优选地每天每kg体重0.1克-0.1微克，诸如每天每kg体重约1，10，100或1000微克，作为单一的每日剂量连续施用(例如，通过输注)或者在一天内作为多次分剂量施用。临床医生通常能够确定适宜的日常剂量，这取决于本文提及的因素。还应该清楚，在具体的情形中，临床医生可以选择偏离这些量，例如，基于上文引用的因素以及他的专业判断。一般地，关于施用量的一些指导可从通过基本上相同的途径通常施用的相当的针对相同施用靶标的常规抗体或抗体片段的量而获得，但是要考虑亲和性/抗体亲抗原性、功效、生物分布、半衰期以及熟练的技术人员公知的类似因素的不同。
当所述氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽和/或包含其的组合物施用于肺组织时，所述治疗方案可以是每天一次或两次，优选地每天一次，或每2，3，4，5，6，或7天一次。
通常，在上述方法中，将使用单一的本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体，或多肽。然而，使用组合的两种或更多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体和/或多肽也在本发明范围之内。
本发明的纳米抗体、氨基酸序列、化合物或构建体和多肽还可以与一种或多种其它药物活性化合物或成分(principles)组合应用，即，作为组合治疗方案，其可以或者可以不引起增效效应。并且，基于上文所引用的因素及其专业判断，临床医生能够选择所述的其它化合物或成分，以及适宜的组合治疗方案。
特别地，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以与其它药物活性化合物或成分组合应用，所述其它药物活性化合物或成分是或者能够用于预防和/或治疗本文所引用的疾病和病症，结果可以或不可以获得增效效应。所述化合物和成分的实例，以及施用其的途径、方法和药物制剂或组合物是临床医生所清楚的。
具体地，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体，和多肽可以与其它药物活性化合物或成分组合使用，所述其它药物活性化合物或成分是或可以用于预防和/或治疗本文提及的疾病和病症，其结果是可以或可以不获得增效作用。所述化合物和成分，以及施用其的路径、方法和药物制剂和组合物的实例对于临床医生是清楚的。
当两种或更多种物质或成分用作组合治疗方案的一部分时，它们可以通过相同的施用途径或者通过不同的施用途径在基本上相同的时间或在不同时间(例如，基本上同时地、连续地、或者按照备选方案)施用。当所述物质或成分通过相同的施用途径同时施用时，它们可以作为不同的药物制剂或组合物或者作为组合的药物制剂或组合物的一部分进行施用，这是熟练的技术人员所清楚的。
此外，当两种或更多种活性物质或成分作为组合治疗方案的一部分使用时，每一物质或成分可以以相同的量施用，并且按照与当所述化合物或成分单独使用时相同的方案施用，并且所述组合应用可以或可以不引起增效效应。然而，当所述两种或更多种活性物质或成分的组合应用引起增效效应时，还可以可能地减少要施用的一种、多种或全部物质或成分的量，同时仍旧获得理想的治疗作用。例如，这可以用于避免、限制或减少当以它们的常规用量使用时与一种或多种所述物质或成分的应用相关的任何不需要的副作用，同时仍旧获得理想的药物或治疗效果。
按照本发明所用的治疗方案的效果可以以本身已知的用于所涉及的疾病或病症的任何方式进行确定和/或遵循，这是临床医生所清楚的。在适当的并且基于病例/病例基础的情形中，临床医生还应该能够改变或改进特定的治疗方案，以便获得理想的治疗效果，以避免、限制或减少不需要的副作用，和/或实现一方面获得理想的治疗效果与另一方面避免、限制或减少不理想的副作用之间的适当的平衡。
通常，应该遵循所述治疗方案，直到获得理想的治疗效果和/或只要维持所述理想的治疗效果。并且，这可以由临床医生确定。
在另一方面中，本发明涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽在制备用于预防和/或治疗至少一种病毒性疾病的药物组合物中的应用；和/或用于一种或多种本文所提及的治疗方法中的应用。
待治疗的受试者可以是任何温血动物，但是特别是哺乳动物，并且更特别是人类。熟练的技术人员应该清楚，待治疗的受试者特别是患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的人。
本发明还涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽在制备用于预防和/或治疗至少一种可以通过给患者施用本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽而得到预防和/或治疗的疾病或病症的药物组合物中的应用。
更特别地，本发明涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽在制备用于预防和/或治疗病毒性疾病、且特别是用于预防和治疗本发明列出的一种或多种疾病和病症的药物组合物的应用。
同样地，在这样的药物组合物中，所述一种或多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体、化合物或构建体或多肽还可以适当地与一种或多种其它活性成分如本发明提及的那些组合。
最后，尽管更优选本发明的纳米抗体(如本文所定义)和本发明的多肽的应用，但是基于本发明内容应该清楚，熟练的技术人员还应该能够以类似的方式设计和/或产生针对病毒的包膜蛋白的其它氨基酸序列、且特别是(单)结构域抗体，以及包括所述(单)结构域抗体的多肽。
例如，熟练的技术人员还应该清楚，可以可能地将上文提及的用于本发明的纳米抗体的一个或多个CDR’s“移植”到所述(单)结构域抗体或其它蛋白支架上，所述支架包括但不限于人支架或非-免疫球蛋白支架。用于这种CDR移植的适宜的支架和技术是熟练的技术人员所清楚的，并且是本领域公知的，参见在WO 08/020079中提及的那些。例如，可以以相似的方式应用本身已知的关于将小鼠或大鼠的CDR’s移植到人构架和支架上的技术，以提供包括一个或多个本发明的纳米抗体的CDR’s和一个或多个人构架区或序列的嵌合蛋白。
还应该注意，当本发明的纳米抗体包含除上文提及的优选的CDR序列之外的一个或多个其它CDR序列时，这些CDR序列可以以本身已知的任何方法获得，例如，使用在WO 08/020079中所述的一种或多种技术。
基于本文的公开内容，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽、核酸、遗传构建体以及宿主与宿主细胞的其它应用是熟练的技术人员所清楚的。例如，并且不限于，本发明的氨基酸序列可以连接在适当的载体或固体支持物上，以提供一种可以以本身已知的从包含病毒的包膜蛋白的组合物和制备物中纯化病毒的包膜蛋白的方式使用的介质。包括适当的可检测标记的本发明的氨基酸序列的衍生物也可以用作(定性或定量)确定病毒的包膜蛋白在组合物或制备物中存在的标记，或作为选择性检测病毒的包膜蛋白在细胞或组织表面存在的标记(例如，与适当的细胞分选技术结合)。
现在，经通过下述非限制性的优选方面、实施例和附图进一步描述本发明：
优选的方面：
方面A-1：氨基酸序列，其针对病毒的包膜蛋白和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面A-2：根据方面A-1所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列调节在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面A-3：根据方面A-1或A-2所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列抑制和/或防止在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面A-4：根据前述方面任一项所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与所述至少一种结合配偶体竞争结合于所述包膜蛋白。
方面A-5：根据方面A-4所述的氨基酸序列，其中所述至少一种结合配偶体是病毒的包膜蛋白的病毒受体。
方面A-6：根据方面A-5所述的氨基酸序列，其中所述病毒受体选自由下列各项组成的组中：唾液酸，可溶的(2，3)-唾液酸，(2，6)-唾液酸，CD4，CCR5，CXCR4，半乳糖基神经酰胺，ACE2，HveA，CD155，ICAM-1，CAR，αv整联蛋白，硫酸肝素蛋白聚糖，JAM-1，烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和神经细胞黏着分子(NCAM)。
方面A-7：根据方面A-5或A-6所述的氨基酸序列，其中所述在包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA与唾液酸；(2，3)唾液酸；和/或(2，6)唾液酸的相互作用；HIV-1病毒的gp120与CD4；CCR5；CXCR4；和/或半乳糖基神经酰胺的相互作用；SARS冠状病毒的S1与ACE2的相互作用；gD；gB；和/或gC的相互作用；单纯疱疹1病毒的异源二聚体gH/gL和HveA的相互作用；脊髓灰质炎病毒1的VP1；VP2；VP3与CD155的相互作用；鼻病毒3的VP1；VP2；和/或VP3与ICAM-1的相互作用；腺病毒2纤维与CAR的相互作用；腺病毒2五邻体基质与αv整联蛋白；唾液酸；(2，3)唾液酸；(2，6)唾液酸；和/或硫酸肝素蛋白聚糖的相互作用；呼肠孤病毒1的σ1与JAM-1；唾液酸；(2，3)唾液酸；和/或(2，6)唾液酸的相互作用；和狂犬病病毒的G-蛋白与烟碱乙酰胆碱受体(AchR)；和/或神经细胞黏着分子(NCAM)的相互作用。
方面A-8：根据方面A-4所述的氨基酸序列，其中所述至少一种结合配偶体是单克隆抗体或其抗原结合部分(如Fab，Fab2，Fv，scFv，VH，VHH，VL，纳米抗体等)，所述单克隆抗体或其抗原结合部分针对和/或特异性结合于所述病毒的包膜蛋白。
方面A-9：根据方面A-8所述的氨基酸序列，其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分选自Synagis，101F Fab，VN04-2，MAb C179和MAb 8-2。
方面A-10：根据前述方面任一项所述的氨基酸序列，其中所述包膜蛋白是病毒-特异性蛋白。
方面A-11：根据前述方面任一项所述的氨基酸序列，其中所述包膜蛋白是膜蛋白。
方面A-12：根据前述方面任一项所述的氨基酸序列，其中所述包膜蛋白是非糖基化蛋白。
方面A-13：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，其中所述包膜蛋白是糖蛋白。
方面A-14：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白。
方面A-15：根据方面A-14所述的氨基酸序列，其中所述病毒附着蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的G蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质和呼肠孤病毒1的σ1。
方面A-16：根据方面A-1到A-13任一项所述的氨基酸序列，其中所述包膜蛋白是病毒融合蛋白。
方面A-17：根据方面A-16所述的氨基酸序列，其中所述病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的F蛋白，流感A病毒的HA蛋白，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
方面A-18：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白。
方面A-19：根据方面A-18所述的氨基酸序列，其中所述病毒附着蛋白和病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，和辛德毕斯病毒的E1蛋白。
方面A-20：根据方面A-16或A-18所述的氨基酸序列，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面A-21：根据方面A-20所述的氨基酸序列，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是融合蛋白三聚体。
方面A-22：根据方面A-21所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面A-23：根据方面A-21或A-22所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面A-24：根据方面A-21到A-23中任一项所述的氨基酸序，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，人呼吸道合胞病毒F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1 gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1 gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白，SARS冠状病毒E2蛋白。
方面A-25：根据方面A-24所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白是流感A病毒HA蛋白。
方面A-26：根据方面A-24所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白是人呼吸道合胞病毒F蛋白。
方面A-27：根据方面A-20所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是蛋白二聚体。
方面A-28：根据方面A-27所述的氨基酸序列，其中所述二聚体是融合蛋白同型二聚体。
方面A-29：根据方面A-27所述的氨基酸序列，其中所述二聚体是蛋白异源二聚体。
方面A-30：根据方面A-20所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是融合蛋白单体。
方面A-31：根据方面A-27到A-30中任一项的氨基酸序列，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面A-32：根据方面A-20所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白特征在于融合后构象状态，其是融合蛋白三聚体。
方面A-33：根据方面A-32所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面A-34：根据方面A-32或A-33所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面A-35：根据方面A-33所述的氨基酸序列，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋。
方面A-36：根据方面A-32到A-35中任一项的氨基酸序列，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，呼吸道合胞F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1 gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1 gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白和SARS冠状病毒E2蛋白。
方面A-37：根据方面A-33所述的氨基酸序列，其中所述发夹三聚体包含β-结构。
方面A-38：根据方面A-32到A-34和A-37中任一项的氨基酸序列，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面A-39：根据方面A-33，A-35和A-37中任一项的氨基酸序列，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
方面A-40：根据方面A-39所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：疱疹性口炎病毒G蛋白，狂犬病病毒G蛋白和单纯疱疹病毒gB蛋白。
方面A-41：根据方面A-40所述的氨基酸序列，其中所述融合蛋白是狂犬病病毒G蛋白。
方面A-42：根据方面A-20到A-41中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面A-43：根据方面A-42所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或中间构象状态。
方面A-44：根据方面A-42所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面A-45：根据方面A-42所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或融合后构象状态。
方面A-46：根据方面A-21到A-45中任一项所述的氨基酸序列，其中所述表位位于由根据权利要求A-21到A-26和A-32到A-41所述的三聚体形成的腔或裂缝中或由根据权利要求A-27到A-31所述的二聚体形成的腔或裂缝中。
方面A-47：根据方面A-21到A-46中任一项的氨基酸序列，其中所述表位位于所述融合蛋白的干区中。
方面A-48：根据方面A-47所述的氨基酸序列，其中所述表位位于所述融合蛋白的干区中，所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含流感HA的HA1亚基的氨基酸318-322的一个或多个的区域中的表位和/或位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸47-58的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸1-38的一个或多个的N-端区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸38-112的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸125-175的一个或多个的区域中的表位和位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸176-185的一个或多个的区域中的表位。
方面A-49：根据方面A-21到A-46中任一项的氨基酸序列，其中所述表位位于所述融合蛋白的颈区中。
方面A-50：根据方面A-21到A-46中任一项的氨基酸序列，其中所述表位位于所述融合蛋白的球状头区域中。
方面A-51：根据方面A-50所述的氨基酸序列，其中所述球状头区域包含β-桶型结构。
方面A-52：根据方面A-50所述的氨基酸序列，其中所述球状头区域包含免疫球蛋白型β-夹层结构域和β-片层结构域。
方面A-53：根据方面A-1到A-52中任一项的氨基酸序列，其中所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含RSV病毒的A-抗原性位点和/或RSV病毒的F-蛋白的氨基酸255-280的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F1a位点的区域和/或包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸389的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸422-438的区域中的表位，位于包含流感病毒的H5HA包膜蛋白的唾液酸结合位点的区域中的表位，位于包含狂犬病病毒的G-蛋白的烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和/或神经细胞黏着分子(NCAM)结合位点的区域中的表位，位于融合蛋白的C-端区域中的表位，位于融合蛋白的N-端结构域中的表位，位于包含融合蛋白的融合肽中的表位，位于融合蛋白的跨膜结构域中的表位，位于融合蛋白的α-螺旋卷曲螺旋中的表位，位于融合蛋白的β-结构中的表位，位于融合蛋白的结构域I中的表位，位于融合蛋白的结构域II中的表位和位于融合蛋白的结构域III中的表位。
方面A-54：根据方面A-53所述的氨基酸序列，其中位于融合蛋白的结构域II中的表位是位于融合蛋白的结构域II的融合肽中的表位。
方面A-55：根据方面A-53所述的氨基酸序列，其中位于融合蛋白的结构域III中的所述表位选自由下列各项组成的组中：位于在融合蛋白的结构域III的C端干区中的表位和位于在融合蛋白的结构域III的C-端的跨膜锚定物中的表位。
方面A-56：根据方面A-1到A-55中任一项的氨基酸序列，其中所述病毒选自由下列各项组成的组中：DNA病毒，RNA病毒和反转录酶(RT)病毒。
方面A-57：根据方面A-56所述的氨基酸序列，其中所述DNA病毒选自由下列各项组成的组中：dsDNA病毒和ssDNA病毒。
方面A-58：根据方面A-56所述的氨基酸序列，其中所述RNA病毒选自由下列各项组成的组中：dsRNA病毒，正义ssRNA病毒和负义ssRNA病毒。
方面A-59：根据方面A-56所述的氨基酸序列，其中所述反转录酶(RT)病毒选自由下列各项组成的组中：dsDNA-RT病毒和ssRNA-RT病毒。
方面A-60：根据方面A-1到A-55中任一项的氨基酸序列，其中所述病毒属于选自由下列各项组成的组中的病毒家族：正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，副黏液病毒科(Paramyxoviridae)，丝状病毒科(Filoviridae)，反转录病毒科(Retroviridae)，冠状病毒科(Coronaviridae)，披膜病毒科(Togaviridae)和黄热病毒科(Flaviviridae)，杆状病毒科(Rhabdoviridae)，疱疹病毒科(Herpesviridae)，砂粒病毒科(Arenaviridae)，玻那病毒科(Bornaviridae)，布尼亚病毒科(Bunyaviridae)，嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)和痘病毒科(Poxviridae)。
方面A-61：根据方面A-60所述的氨基酸序列，其中所述病毒属于选自由甲病毒属(Alphaviruses)和黄病毒属(Flaviviruses)组成的组的病毒属中。
方面A-62：根据方面A-1到A-61中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列中和所述病毒。
方面A-63：根据方面A-1到A-62中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列调节所述病毒的感染性。
方面A-64：根据方面A-63所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面A-65：根据方面A-63或A-64中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在进入前阶段中和所述病毒和/或调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面A-66：根据方面A-65所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列调节、抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中。
方面A-67：根据方面A-1到A-66中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列诱导所述病毒的病毒体聚集。
方面A-68：根据方面A-1到A-67中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列使所述病毒的病毒体结构去稳定化。
方面A-69：根据方面A-1到A-68中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列抑制病毒体附着到所述病毒的靶宿主细胞。
方面A-70：根据方面A-69所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列通过调节在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面A-71：根据方面A-69或A-70所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列通过抑制和/或防止在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面A-72：根据方面A-69到A-71所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与所述包膜蛋白竞争与病毒受体的结合。
方面A-73：根据方面A-1到A-72中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列抑制所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合。
方面A-74：根据方面A-73所述的氨基酸序列，其中在所述靶宿主细胞膜上发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面A-75：根据方面A-73所述的氨基酸序列，其中在内体或溶酶体区室中发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面A-76：根据方面A-73到A-75中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列防止所述病毒的包膜蛋白进行构象变化。
方面A-77：根据方面A-63或A-64中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在进入后阶段中和所述病毒和/或调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面A-78：根据方面A-1到A-77中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列调节、抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒复制。
方面A-79：根据方面A-1到A-78中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列影响、抑制和/或防止病毒基因组的转录和/或翻译。
方面A-80：根据方面A-1到A-79中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列影响、抑制和/或防止病毒包装和/或功能病毒体的形成。
方面A-81：根据方面A-1到A-80中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列减少、抑制和/或防止新生病毒体在靶宿主细胞表面的出芽或释放。
方面A-82：根据方面A-1到A-81中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合于至少一种病毒的包膜蛋白的至少两个表位。
方面A-83：根据方面A-82所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合于病毒一个包膜蛋白的至少两个表位。
方面A-84：根据方面A-1到A-82中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合于病毒的至少两种包膜蛋白的至少两个表位。
方面A-85：根据方面A-1到A-82和A-84中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对病毒的包膜蛋白的三个以上的表位和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的三个以上的表位。
方面A-86：根据方面A-85所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位和/或可以特异性结合于病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位。
方面A-87：根据方面A-82到A-86中任一项的氨基酸序列，其中所述至少两个或三个以上的表位是相同或不同的。
方面A-88：根据方面A-84或A-86中任一项的氨基酸序列，其中所述至少两种包膜蛋白是相同或不同的。
方面A-89：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，其基本以分离形式存在。
方面A-90：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，其用于施用于受试者，其中所述氨基酸序列不是天然存在于所述受试者中的。
方面A-91：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以10-5到10-12摩尔/升以下，和优选地10-7到10-12摩尔/升以下，和更优选地10-8到10-12摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面A-92：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的缔合速率(kon-速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面A-93：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以1s-1-10-6s-1，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的解离速率(koff速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面A-94：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面A-95：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列是天然存在的氨基酸序列(来自任何适合的物种)或合成或半合成的氨基酸序列。
方面A-96：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含免疫球蛋白折叠或在适合的条件下能够形成免疫球蛋白折叠。
方面A-97：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成。
方面A-98：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列。
方面A-99：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适合的物种)或合成或半合成的免疫球蛋白序列。
方面A-100：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列是人源化的免疫球蛋白序列，骆驼源化的免疫球蛋白序列或通过如亲和性成熟的技术获得的免疫球蛋白序列。
方面A-101：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由轻链可变结构域序列(例如，VL-序列)；或重链可变结构域序列(例如，VH-序列)组成。
方面A-102：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由来自常规四链抗体的重链可变结构域序列组成或基本由来自重链抗体的重链可变结构域序列组成。
方面A-103：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)，单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)，″dAb″(或适合用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体(包括但不限于VHH序列)组成。
方面A-104：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由纳米抗体组成。
方面A-105：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由这样的纳米抗体组成，所述纳米抗体
a.与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一种氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；并且其中
b.优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基中的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面A-106：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由这样的纳米抗体组成，所述纳米抗体
a.与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；并且其中：
b.优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面A-107：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由人源化的纳米抗体组成。
方面A-108：根据方面A-107所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由这样的纳米抗体组成，所述纳米抗体可以(如本文进一步定义)结合于病毒的包膜蛋白，并且所述纳米抗体：
i)是SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的氨基酸序列之一的人源化变体；和/或
ii)与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一个氨基酸序列和/或SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；
并且其中：
iii)优选地，在依据Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的一个或多个氨基酸残基选自下表B-2中提及的标志残基。方面A-109：根据前述方面中任一项所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列除了结合病毒的包膜蛋白的至少一个结合位点之外，还包含结合其它抗原、蛋白或靶标的一个或多个其它结合位点。
方面B-1：针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列：
a.SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d.SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g.SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项的氨基酸序列。
方面B-2：根据方面B-1所述的氨基酸序列，其中至少一个所述氨基酸残基的序列形成结合病毒的包膜蛋白的抗原结合位点的部分。
方面B-3：氨基酸序列，其针对病毒的包膜蛋白和/或可以特异性结合病毒的包膜蛋白，所述氨基酸序列包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109，B-1或B-2中任一项的氨基酸序列。
方面B-4：根据方面B-3所述的氨基酸序列，其中至少两个氨基酸残基序列形成针对病毒的包膜蛋白结合的抗原结合位点的部分。
方面B-5：氨基酸序列，其针对病毒包膜蛋白和/或特异性结合病毒包膜蛋白，包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或B-1到B-4中任一项的氨基酸序列。
方面B-6：根据方面B-5所述的氨基酸序列，其中至少三个氨基酸残基序列形成结合病毒的包膜蛋白的抗原结合位点的一部分。
方面B-7：氨基酸序列，其针对病毒的包膜蛋白和/或可以特异性结合病毒的包膜蛋白，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s 126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或B-1到B-6中任一项的氨基酸序列。
方面C-1：针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，所述氨基酸序列交叉阻断SEQ IDNO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列与所述病毒的包膜蛋白结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或根据方面B-1到B-7中任一项的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面C-2：针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，其被SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128中的至少一种氨基酸序列交叉阻断与所述病毒的包膜蛋白的结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项的氨基酸序列和/或根据方面B-1到B-7的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面C-3：根据方面C-1或C-2中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面C-4：根据方面C-1或C-2中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面B-8：氨基酸序列，其针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列包含选自由下列各项组成的组中的一个或多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或其任何适当的片段。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项的氨基酸序列。
方面B-9：根据方面B-8所述的氨基酸序列，其中至少一个所述氨基酸残基序列形成结合人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的部分。
方面B-10：氨基酸序列，其针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列包含选自由下列各项组成的组中的一个或多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或其任何适当的片段；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109，B-8或B-9中任一项的氨基酸序列。
方面B-11：根据方面B-10所述的氨基酸序列，其中至少两个氨基酸残基序列形成结合人RSV病毒的F蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的一部分。
方面B-12：针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位和/或结合人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括三个以上的氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组中：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组中：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或B-8到B-11中任一项的氨基酸序列。
方面B-13：根据方面B-12所述的氨基酸序列，其中至少三个氨基酸残基序列形成结合人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的部分。
方面B-14：针对人RSV病毒的F-蛋白和/或可以特异性结合于人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s 158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或B-8到B-13中任一项的氨基酸序列。
方面C-5：针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，所述氨基酸序列交叉阻断SEQ ID NO’s 158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一个氨基酸序列与人RSV病毒的F-蛋白的所述至少一个表位的结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或根据方面B-8到B-14中任一项的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于人RSV病毒的F-蛋白。
方面C-6：针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，所述氨基酸序列被SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列交叉阻断与所述人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或根据方面B-8到B-14中任一项的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于人RSV病毒的F-蛋白。
方面C-7：根据方面C-5或C-6中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中进行检测。
方面C-8：根据方面C-5或C-6中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中进行检测。
方面B-15：氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列包含选自由下列各项组成的组中的一个或多个氨基酸残基序列：
a.SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d.SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g.SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项的氨基酸序列。
方面B-16：根据方面B-15所述的氨基酸序列，其中至少一个所述氨基酸残基序列形成结合流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的部分。
方面B-17：氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列包含选自由下列各项组成的组中的两种以上氨基酸残基序列：
a.SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d.SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g.SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109，B-15或B-16中任一项的氨基酸序列。
方面B-18：根据方面B-17所述的氨基酸序列，其中所述至少两种氨基酸残基序列形成结合流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的部分。
方面B-19：氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列包含三个以上的氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或B-15到B-18中任一项的氨基酸序列。
方面B-20：根据方面B-19所述的氨基酸序列，其中至少三个氨基酸残基序列形成结合流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的部分。
方面B-20：氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或B-15到B-20中任一项的氨基酸序列。
方面C-9：氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列交叉阻断SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一种氨基酸序列与所述流感病毒的血凝素HA5蛋白的至少一个表位的结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-10中任一项的氨基酸序列，和/或根据方面B-15到B-21中任一项的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于流感病毒的血凝素HA5蛋白。
方面C-10：氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素HA5蛋白的表位，所述氨基酸序列被SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128中的至少一种氨基酸序列交叉阻断与流感病毒的血凝素HA5蛋白的所述至少一个表位的结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项的氨基酸序列和/或根据方面B-1到B-21的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于流感病毒的血凝素HA5蛋白。
方面C-11：根据方面C-9或C-10中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面C-12：根据方面C-9或C-10中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面B-22：氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位，其包括选自由下列组成的组的一种或多种氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
或它们的任何适当的组合。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项的氨基酸序列。
方面B-23：根据方面B-22所述的氨基酸序列，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的部分。
方面B-24：氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d)，e)，f)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；
(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一；或
(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c)，d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109，B-22或B-23中任一项的氨基酸序列。
方面B-25：根据方面B-24所述的氨基酸序列，其中所述至少两个氨基酸残基序列形成结合狂犬病病毒的G蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的一部分。
方面B-26：氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位，其包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或B-22到B-25中任一项的氨基酸序列。
方面B-27：根据方面B-26所述的氨基酸序列，其中所述至少三个氨基酸残基序列形成结合狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位的抗原结合位点的一部分。
方面B-28：针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位和/或可以特异性结合于狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQID NO’s：237-247和2684-2717的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或根据方面B-22到B-27中任一项的氨基酸序列。
方面C-13：氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位，所述氨基酸序列交叉阻断SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列与狂犬病病毒的G-蛋白的所述至少一个表位结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109和/或根据方面B-22到B-28中任一项的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于狂犬病病毒的G-蛋白。
方面C-14：针对狂犬病病毒的G-蛋白的至少一个表位的氨基酸序列，所述氨基酸序列被SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717中的至少一种氨基酸序列交叉阻断与狂犬病病毒的G-蛋白的所述至少一个表位的结合。所述氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项和/或根据方面B-22到B-28的氨基酸序列。此外，优选地，所述氨基酸序列能够特异性结合于狂犬病病毒的G-蛋白。
方面C-15：根据方面C-13或C-14中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测
方面C-16：根据方面C-13或C-14中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面D-1：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16中任一项的氨基酸序列，其基本以分离的形式存在。
方面D-2：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16和/或D-1中任一项的氨基酸序列，其施用于受试者，其中所述氨基酸序列不是天然存在于所述受试者中的。
方面D-2：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16和/或D-1到D-2中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以10-5到10-12摩尔/升以下，和优选地10-7到10-12摩尔/升以下，和更优选地10-8到10-12摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少一个表位。
方面D-4：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16和/或D-1到D-3中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的缔合速率(kon-速率)与病毒的包膜蛋白的至少一个表位特异性结合。
方面D-5：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16和/或D-1到D-4中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以1s-1-10-6s-1，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-2，诸如10-4s-1-10-6s-1的解离速率(koff速率)与病毒的包膜蛋白的至少一个表位特异性结合。
方面D-6：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16和/或D-1到D-5中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与病毒的包膜蛋白的至少一个表位特异性结合。
根据方面D-1到D-6所述的氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项的氨基酸序列。
方面E-1：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16和/或D-1到D-6中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是天然存在的氨基酸序列(来自任何适合的物种)或合成或半合成的氨基酸序列。
方面E-2：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含免疫球蛋白折叠或在适合的条件下能够形成免疫球蛋白折叠。
方面E-3：根据B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-2中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列。
方面E-4：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-3中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适合的物种)或合成或半合成的免疫球蛋白序列。
方面E-5：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-4中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是人源化的免疫球蛋白序列，骆驼源化的免疫球蛋白序列或通过如亲和性成熟的技术获得的免疫球蛋白序列。
方面E-6：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-5中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由轻链可变结构域序列(例如，VL-序列)；或重链可变结构域序列(例如，VH-序列)组成。
方面E-7：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-6中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由来自常规四链抗体的重链可变结构域序列组成或基本由来自重链抗体的重链可变结构域序列组成。
方面E-8：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-7中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)，单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)，″dAb″(或适合用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体(包括但不限于VHH序列)组成。
方面E-9：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-8中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由纳米抗体组成。
方面E-10：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-9中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由这样的纳米抗体组成，所述纳米抗体
a.与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一种氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；并且其中
b.优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基中的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面E-11：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-10中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由这样的纳米抗体组成，所述纳米抗体
a.与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128中的至少一种氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；并且其中
b.优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基中的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面E-12：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-11中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由人源化的纳米抗体组成。
方面E-13：根据方面E-12所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由人源化的纳米抗体组成，所述纳米抗体可以(如本文进一步定义)结合于病毒的包膜蛋白并且其：
i)是SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的氨基酸序列之一的人源化变体；和/或
ii)与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128(见表A-1)的至少一个氨基酸序列和/或SEQ ID NO’s：2999-3015(见表A-8)的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；
并且其中：
iii)优选地，在依据Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的一个或多个氨基酸残基选自下表B-2中提及的标志残基。
方面E-14：根据方面B-1到B-28或C-1到C-16，D-1到D-5和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列除了由CDR序列形成的用于结合的至少一个结合位点之外，还包含一个或多个结合其它抗原、蛋白或靶标的其它结合位点。
根据方面E-1到E-14所述的氨基酸序列可以特别是根据方面A-1到A-109中任一项所述的氨基酸序列。
方面F-1：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a.SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d.SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g.SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对病毒的包膜蛋白和/或是可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-2：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a.SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d.SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g.SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对病毒的包膜蛋白和/或是可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-3：根据方面F-1或F-2中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
所述氨基酸序列优选地针对病毒的包膜蛋白和/或是可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-4：针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，所述氨基酸序列交叉阻断SEQ IDNO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128中的至少一种氨基酸序列与病毒的包膜蛋白的结合。
方面F-5：针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列，其被SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列交叉阻断与病毒的包膜蛋白的结合。
方面F-6：根据方面F-4或F-5中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面F-7：根据方面F-4或F-5中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面F-7：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对RSV病毒的F蛋白和/或是可以特异性结合于RSV病毒的F蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-9：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a)SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对RSV病毒的F蛋白和/或是可以特异性结合于RSV病毒的F蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-10：根据方面F-8或F-9中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
所述氨基酸序列优选地针对RSV病毒的F蛋白和/或是可以特异性结合于RSV病毒的F蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-11：针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸序列，所述氨基酸序列交叉阻断SEQ IDNO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面F-12：针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸序列，所述氨基酸序列被SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列交叉阻断与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面F-13：根据方面F-11或F-12中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面F-14：根据方面F-11或F-12中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面F-15：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对流感病毒的血凝素H5和/或是可以特异性结合于流感病毒的血凝素H5的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-16：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对流感病毒的血凝素H5和/或是可以特异性结合于流感病毒的血凝素H5的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-17：根据方面F-15或F-16中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
所述氨基酸序列优选地针对流感病毒的血凝素H5和/或是可以特异性结合于流感病毒的血凝素H5的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-18：针对流感病毒的血凝素H5的氨基酸序列，所述氨基酸序列交叉阻断SEQID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一种氨基酸序列与流感病毒的血凝素H5的结合。
方面F-19：针对流感病毒的血凝素H5的氨基酸序列，所述氨基酸序列被SEQ IDNO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一种氨基酸序列交叉阻断与流感病毒的血凝素H5的结合。
方面F-20：根据方面F-18或F-19中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面F-21：根据方面F-18或F-19中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面F-22：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a.SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组中
d.SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组中
g.SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对狂犬病病毒的G包膜蛋白和/或是可以特异性结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-23：氨基酸序列，其基本由4个构架区(分别为FR1到FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1到CDR3)组成，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a.SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组中
d.SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组中
g.SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
所述氨基酸序列优选地针对狂犬病病毒的G包膜蛋白和/或是可以特异性结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-24：根据方面F-22或F-23中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
所述氨基酸序列优选地针对狂犬病病毒的G包膜蛋白和/或是可以特异性结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白的氨基酸序列。此外，所述氨基酸序列优选地是根据方面A-1到A-109，C-1到C-16，D1到D-6和/或E-1到E-14中任一项的氨基酸序列。
方面F-25：针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的氨基酸序列，所述氨基酸序列交叉阻断SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面F-26：针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的氨基酸序列，所述氨基酸序列被SEQ IDNO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列交叉阻断与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面F-27：根据方面F-25或F-26中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面F-28：根据方面F-25或F-26中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面F-29：根据方面F-1到F-28中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本以分离形式存在。
方面F-30：根据方面F-1到F-29中任一项的氨基酸序列，用于施用于受试者，其中所述氨基酸序列不是天然存在于所述受试者中的。
方面F-31：根据方面F-1到F-30中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以10-5到10-12摩尔/升以下，和优选地10-7到10-12摩尔/升以下，和更优选地10-8到10-12摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少一个表位。
方面F-32：根据方面F-1到F-31中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的缔合速率(kon-速率)与病毒的包膜蛋白的至少一个表位特异性结合。
方面F-33：根据方面F-1到F-32中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以1s-1-10-6s-1，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的解离速率(koff速率)与病毒的包膜蛋白的至少一个表位特异性结合。
方面F-34：根据方面F-1到F-33中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与病毒的包膜蛋白的至少一个表位特异性结合。
方面F-35：根据方面F-1到F-34中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是天然存在的氨基酸序列(来自任何适合的物种)或合成或半合成的氨基酸序列。
方面F-36：根据方面F-1到F-35中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含免疫球蛋白折叠或在适合的条件下能够形成免疫球蛋白折叠。
方面F-37：根据方面F-1到F-36中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列。
方面F-38：根据方面F-1到F-37中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适合的物种)或合成或半合成的免疫球蛋白序列。
方面F-39：根据方面F-1到F-38中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列是人源化的免疫球蛋白序列，骆驼源化的免疫球蛋白序列或通过如亲和性成熟的技术获得的免疫球蛋白序列。
方面F-40：根据方面F-1到F-39中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由轻链可变结构域序列(例如，VL-序列)；或重链可变结构域序列(例如，VH-序列)组成。
方面F-41：根据方面F-1到F-40中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由来自常规四链抗体的重链可变结构域序列组成或基本由来自重链抗体的重链可变结构域序列组成。
方面F-42：根据方面F-1到F-41中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)，单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)，″dAb″(或适合用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体(包括但不限于VHH序列)组成。
方面F-43：根据方面F-1到F-42中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由纳米抗体组成。
方面F-44：根据方面F-1到F-43中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由这样的纳米抗体组成，所述纳米抗体
a.与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一种氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；并且其中
b.优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基中的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面F-45：根据方面F-1到F-44中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由这样的纳米抗体组成，所述纳米抗体：
a与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；
并且其中：
b优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面F-46：根据方面F-1到F-45中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列基本由人源化的纳米抗体组成。
方面F-47：根据方面F-1到F-46中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列除了由CDR序列形成的用于结合的至少一个结合位点之外，还包含结合其它抗原、蛋白或靶标的一个或多个其它结合位点。
方面H-1：纳米抗体，其针对病毒的包膜蛋白和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面H-2：根据方面H-1的纳米抗体，其中所述纳米抗体调节在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面H-3：根据方面H-1或H-2的纳米抗体，其中所述纳米抗体抑制和/或防止在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面H-4：根据方面H-1到H-3中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体与所述结合配偶体竞争与所述包膜蛋白的结合。
方面H-5：根据方面H-4的纳米抗体，其中所述至少一种结合配偶体是病毒包膜蛋白的病毒受体。
方面H-6：根据方面H-5的纳米抗体，其中所述病毒受体选自由下列各项组成的组中：唾液酸，可溶的(2，3)-唾液酸，(2，6)-唾液酸，CD4，CCR5，CXCR4，半乳糖基神经酰胺，ACE2，HveA，CD155，ICAM-1，CAR，αv整联蛋白，硫酸肝素蛋白聚糖，JAM-1，烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和神经细胞黏着分子(NCAM)。
方面H-7：根据方面H-5或H-6的纳米抗体，其中所述在包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA与唾液酸；(2，3)唾液酸；和/或(2，6)唾液酸的相互作用；HIV-1病毒的gp120与CD4；CCR5；CXCR4；和/或半乳糖基神经酰胺的相互作用；SARS冠状病毒的S1与ACE2的相互作用；gD；gB；和/或gC的相互作用；单纯疱疹1病毒的异源二聚体gH/gL和HveA的相互作用；脊髓灰质炎病毒1的VP1；VP2；VP3与CD155的相互作用；鼻病毒3的VP1；VP2；和/或VP3与ICAM-1的相互作用；腺病毒2纤维与CAR的相互作用；腺病毒2五邻体基质与αv整联蛋白；唾液酸；(2，3)唾液酸；(2，6)唾液酸；和/或硫酸肝素蛋白聚糖的相互作用；呼肠孤病毒1的σ1与JAM-1；唾液酸；(2，3)唾液酸；和/或(2，6)唾液酸的相互作用；和狂犬病病毒的G-蛋白与烟碱乙酰胆碱受体(AchR)；和/或神经细胞黏着分子(NCAM)的相互作用。
方面H-8：根据方面H-4的纳米抗体，其中所述至少一种结合配偶体是针对所述病毒的包膜蛋白和/或特异性结合于所述病毒的包膜蛋白的单克隆抗体。
方面H-9：根据方面H-8的纳米抗体，其中所述单克隆抗体是Synagis101F，VN04-2，MAb C179或MAb 8-2。
方面H-10：根据方面H-1到H-9中任一项的纳米抗体，其中所述包膜蛋白是病毒-特异性蛋白。
方面H-11：根据方面H-1到H-9中任一项的纳米抗体，其中所述包膜蛋白是膜蛋白。
方面H-12：根据方面H-1到H-11中任一项的纳米抗体，其中所述包膜蛋白是非糖基化的蛋白。
方面H-13：根据方面H-1到H-11中任一项的纳米抗体，其中所述包膜蛋白是糖蛋白。
方面H-14：根据方面H-1到H-13中任一项的纳米抗体，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白。
方面H-15：根据方面H-14的纳米抗体，所述病毒附着蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的G蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质和呼肠孤病毒1的σ1。
方面H-16：根据方面H-1到H-13中任一项的纳米抗体，其中所述包膜蛋白是病毒融合蛋白。
方面H-17：根据方面H-16的纳米抗体，其中所述病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的F蛋白，流感A病毒的HA蛋白，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
方面H-18：根据方面H-1到H-17中任一项的纳米抗体，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白。
方面H-19：根据方面H-18的纳米抗体，其中所述病毒附着蛋白和病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，和辛德毕斯病毒的E1蛋白。
方面H-20：根据方面H-16或H-18的纳米抗体，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面H-21：根据方面H-20的纳米抗体，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态，所述病毒融合蛋白是融合蛋白三聚体。
方面H-22：根据方面H-21的纳米抗体，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面H-23：根据方面H-21或H-22的纳米抗体，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面H-24：根据方面H-21到H-23中任一项的纳米抗体，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，人呼吸道合胞病毒F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白，SARS冠状病毒E2蛋白。
方面H-25：根据方面H-24的纳米抗体，其中所述融合蛋白是流感A病毒HA蛋白。
方面H-26：根据方面H-24的纳米抗体，其中所述融合蛋白是人呼吸道合胞病毒F蛋白。
方面H-27：根据方面H-20的纳米抗体，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，所述融合蛋白是蛋白二聚体。
方面H-28：根据方面H-27的纳米抗体，其中所述二聚体是融合蛋白同型二聚体。
方面H-29：根据方面H-2的纳米抗体，其中所述二聚体是蛋白异源二聚体。
方面H-30：根据方面20的纳米抗体，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，所述融合蛋白是融合蛋白单体。
方面H-31：根据方面H-27到H-30中任一项的纳米抗体，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面H-32：根据方面20的纳米抗体，其中所述融合蛋白特征在于融合后构象状态，其是融合蛋白三聚体。
方面H-33：根据方面H-32的纳米抗体，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面H-34：根据方面H-32或H-33的纳米抗体，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面H-35：根据方面H-33的纳米抗体，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋。
方面H-36：根据方面H-32到H-35中任一项的纳米抗体，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，呼吸道合胞F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1 gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1 gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白和SARS冠状病毒E2蛋白。
方面H-37：根据方面H-33的纳米抗体，其中所述发夹三聚体包含β-结构。
方面H-38：根据方面H-32到H-34和H-37中任一项的纳米抗体，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面H-39：根据方面H-33，H-35和H-37中任一项的纳米抗体，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
方面H-40：根据方面H-39的纳米抗体，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：疱疹性口炎病毒G蛋白，狂犬病病毒G蛋白和单纯疱疹病毒gB蛋白。
方面H-41：根据方面H-40的纳米抗体，其中所述融合蛋白是狂犬病病毒G蛋白。
方面H-42：根据方面H-20到H-41中任一项的纳米抗体，其中所述氨基酸序列针对所述融合蛋白的融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面H-43：根据方面H-42的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对所述融合蛋白的所述融合前构象状态和/或中间构象状态和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的所述融合前构象状态和/或中间构象状态。
方面H-44：根据方面H-42的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对所述融合蛋白的中间构象状态和/或融合后构象状态和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面H-45：根据方面H-42的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对所述融合蛋白的所述融合前构象状态和/或融合后构象状态和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的所述融合前构象状态和/或融合后构象状态。
方面H-46：根据方面H-21到H-45中任一项的纳米抗体，其中所述表位位于由根据权利要求H-21到H-26和H-32到H-41所述的三聚体形成的腔或裂缝中或由根据权利要求H-27到H-31所述的二聚体形成的腔或裂缝中。
方面H-47：根据方面H-21到H-46中任一项的纳米抗体，其中所述表位位于所述融合蛋白的干区中。
方面H-48：根据方面H-47的纳米抗体，其中位于所述融合蛋白的干区中的所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含流感HA的HA1亚基的氨基酸318-322的一个或多个的区域中的表位和/或位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸47-58的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸的1-38的一个或多个的N-端区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸38-112的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸125-175的一个或多个的区域中的表位和位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸176-185的一个或多个的区域中的表位。
方面H-49：根据方面H-21到H-46中任一项的纳米抗体，其中所述表位位于所述融合蛋白的颈区中。
方面H-50：根据方面H-21到H-46中任一项的纳米抗体，其中所述表位位于所述融合蛋白的球状头区域中。
方面H-51：根据方面H-50的纳米抗体，其中所述球状头区域包含β-桶型结构。
方面H-52：根据方面H-50的纳米抗体，其中所述球状头区域包含免疫球蛋白型β-夹层结构域和β-片层结构域。
方面H-53：根据方面H-1到H-52中任一项的纳米抗体，其中所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含RSV病毒的A-抗原性位点和/或RSV病毒的F-蛋白的氨基酸255-280的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F1a位点的区域和/或包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸389的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸422-438的区域中的表位，位于包含流感病毒的H5 HA包膜蛋白的唾液酸结合位点的区域中的表位，位于包含狂犬病病毒的G-蛋白的烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和/或神经细胞黏着分子(NCAM)结合位点的区域中的表位，位于融合蛋白的C-端区域中的表位，位于融合蛋白的N-端结构域中的表位，位于融合蛋白的融合肽中的表位或包含融合蛋白的融合肽的表位，位于融合蛋白的跨膜结构域中的表位，位于融合蛋白的α-螺旋卷曲螺旋中的表位，位于融合蛋白的β-结构中的表位，位于融合蛋白的结构域I中的表位，位于融合蛋白的结构域II中的表位和位于融合蛋白的结构域III中的表位。
方面H-54：根据方面H-53的纳米抗体，其中位于融合蛋白的结构域II中的表位是位于融合蛋白的结构域II的融合肽中的表位。
方面H-55：根据方面H-53的纳米抗体，其中位于融合蛋白的结构域III中的所述表位选自由下列各项组成的组中：位于在融合蛋白的结构域III的C端干区中的表位和位于在融合蛋白的结构域III的C-端的跨膜锚定物中的表位。
方面H-56：根据方面H-1到H-55中任一项的纳米抗体，其中所述病毒选自由下列各项组成的组中：DNA病毒，RNA病毒和反转录酶(RT)病毒。
方面H-57：根据方面H-56的纳米抗体，其中所述DNA病毒选自由下列各项组成的组中：ds DNA病毒和ssDNA病毒。
方面H-58：根据方面H-56的纳米抗体，其中所述RNA病毒选自由下列各项组成的组中：dsRNA病毒，正义ssRNA病毒和负义ssRNA病毒。
方面H-59：根据方面H-56的纳米抗体，其中所述反转录酶(RT)病毒选自由下列各项组成的组中：dsDNA-RT病毒和ssRNA-RT病毒。
方面H-60：根据方面H-1到H-55中任一项的纳米抗体，其中所述病毒属于选自由下列各项组成的组中的病毒家族：正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，副黏液病毒科(Paramyxoviridae)，丝状病毒科(Filoviridae)，反转录病毒科(Retroviridae)，冠状病毒科(Coronaviridae)，披膜病毒科(Togaviridae)和黄热病毒科(Flaviviridae)，杆状病毒科(Rhabdoviridae)，疱疹病毒科(Herpesviridae)，砂粒病毒科(Arenaviridae)，玻那病毒科(Bornaviridae)，布尼亚病毒科(Bunyaviridae)，嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)和痘病毒科(Poxviridae)。
方面H-61：根据方面H-60的纳米抗体，其中所述病毒属于选自由甲病毒属(Alphaviruses)和黄病毒属(Flaviviruses)组成的组的病毒属中。
方面H-62：根据方面H-1到H-61中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体中和所述病毒。
方面H-63：根据方面H-1到H-62中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体调节所述病毒的感染性。
方面H-64：根据方面H-63的纳米抗体，其中所述纳米抗体抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面H-65：根据方面H-63或H-64中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体在进入前阶段中和所述病毒和/或调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面H-66：根据方面H-65的纳米抗体，其中所述纳米抗体调节、抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中。
方面H-67：根据方面H-1到H-66中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体诱导所述病毒的病毒体聚集。
方面H-68：根据方面H-1到H-67中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体使所述病毒的病毒体结构去稳定化。
方面H-69：根据方面H-1到H-68中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体抑制病毒体附着到所述病毒的靶宿主细胞上。
方面H-70：根据方面H-69的纳米抗体，其中所述纳米抗体通过调节在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面H-71：根据方面H-69或H-70所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体通过抑制和/或防止在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面H-72：根据方面H-69到H-71所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体与所述包膜蛋白竞争与病毒受体的结合。
方面H-73：根据方面H-1到H-72中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体抑制所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合。
方面H-74：根据方面H-73的纳米抗体，其中在所述靶宿主细胞膜上发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面H-75：根据方面H-73的纳米抗体，其中在内体或溶酶体区室中发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面H-76：根据方面H-73到H-75中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体防止所述病毒的包膜蛋白进行构象变化。
方面H-77：根据方面H-63或H-64中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体中和所述病毒和/或在进入后阶段中调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面H-78：根据方面H-1到H-77中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体调节、抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒复制。
方面H-79：根据方面H-1到H-78中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体影响、抑制和/或防止所述病毒基因组的转录和/或翻译。
方面H-80：根据方面H-1到H-79中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体影响、抑制和/或防止病毒包装和/或功能病毒体的形成。
方面H-81：根据方面H-1到H-80中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体减少、抑制和/或防止新生病毒体在靶宿主细胞表面的出芽或释放。
方面H-82：根据方面H-1到H-81中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对病毒的包膜蛋白的至少两个表位和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少两个表位。
方面H-83：根据方面H-82的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对病毒一个包膜蛋白的至少两个表位和/或可以特异性结合于病毒一个包膜蛋白的至少两个表位。
方面H-84：根据方面H-1到H-82中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对病毒的至少两种包膜蛋白的至少两个表位和/或可以特异性结合于病毒的至少两种包膜蛋白的至少两个表位。
方面H-85：根据方面H-1到H-82和H-84中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对病毒的所述包膜蛋白的三个以上的表位和/或可以特异性结合于病毒的所述包膜蛋白的三个以上的表位。
方面H-86：根据方面H-85的纳米抗体，其中所述纳米抗体针对病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位和/或可以特异性结合于病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位。
方面H-87：根据方面H-82到H-86中任一项的纳米抗体，其中所述至少两个或三个以上的表位是相同或不同的。
方面H-88：根据方面H-84或H-86中任一项的纳米抗体，其中所述至少两种包膜蛋白是相同或不同的。
方面H-89：根据方面H-1到H-88中任一项的纳米抗体，其基本以分离形式存在。
方面H-90：根据方面H-1到H-89中任一项的纳米抗体，其可以以10-5到10-12摩尔/升以下，和优选地10-7到10-12摩尔/升以下，和更优选地10-8到10-12摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面H-91：根据方面H-1到H-90中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体可以以102M- 1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的缔合速率(kon-速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面H-92：根据方面H-1到H-91中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体可以以1s-1-10-6s-1，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的解离速率(koff速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面H-93：根据方面H-1到H-92中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体可以以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面H-94：根据方面H-1到H-93中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体是天然存在的纳米抗体(来自任何适合的物种)或合成或半合成的纳米抗体。
方面H-95：根据方面H-1到H-94中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体是VHH序列，部分人源化的VHH序列，完全人源化的VHH序列，骆驼源化的重链可变结构域或通过如亲和性成熟的技术获得的纳米抗体。
方面H-96：根据方面H-1到H-95中任一项的纳米抗体，其
a.与SEQ ID NO’s：1-22中的至少一种氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；
并且其中
b.优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基中的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面H-97：根据方面H-1到H-96中任一项的纳米抗体，其
a.与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；
并且其中：
b.优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45，47，83，84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自表B-2中提及的标志残基。
方面H-98：根据方面H-1到H-97中任一项的纳米抗体，
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a)SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c)与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d)SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f)与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g)SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i)与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-99：根据方面H-1到H-98中任一项的纳米抗体，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a.SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-971，2467-2484，2590-2597，2754-2789和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d.SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1535，2503-2520，2606-2613，2826-2861和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g.SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-2099，2539-2556，2622-2629，2898-2933和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-100：根据方面H-1到H-99中任一项的纳米抗体，其中所述CDR序列与SEQ IDNO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
方面H-101：根据方面H-1到H-100中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体。
方面H-102：根据方面H-1到H-101中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体是完全人源化的纳米抗体。
方面H-103：根据方面H-1到H-102中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体选自由下列各项组成的组中：SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128或选自由这样的氨基酸序列组成的组中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列具有超过80％，优选地超过90％，更优选地超过95％，如99％或更多序列同一性(如本文定义)。方面H-104：针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体交叉阻断SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列与病毒的包膜蛋白的结合。
方面H-105：针对病毒的包膜蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体被SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列交叉阻断与病毒的包膜蛋白的结合。
方面H-106：根据方面H-104或H-105中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中进行检测。
方面H-107：根据方面H-104或H-105中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中进行检测。
方面H-108：根据方面H-1到H-107中任一项的纳米抗体，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a.SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d.SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g.SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-109：根据方面H-1到H-108中任一项的纳米抗体，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a.SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：722-800，812-971，2484和2590-2597的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d.SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1286-1364，1376-1535，2520和2606-2613的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g.SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1850-1928，1940-2099，2556和2622-2629的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-110：根据方面H-1到H-109中任一项的纳米抗体，其中所述CDR序列与SEQID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
方面H-111：根据方面H-1到H-110中任一项的纳米抗体，其是部分人源化的纳米抗体。
方面H-112：根据方面H-1到H-111中任一项的纳米抗体，其是完全人源化的纳米抗体。
方面H-113：根据方面H-1到H-112中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体选自由SEQID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581组成的组中，或选自由与SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列具有超过80％，优选地超过90％，更优选地超过95％，如99％或更多的序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组中。
方面H-114：针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的纳米抗体，其交叉阻断SEQID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列与人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的结合。
方面H-115：针对人RSV病毒的F-蛋白的至少一个表位的纳米抗体，所述纳米抗体被SEQ ID NO’s：158-236，248-407，2448和2574-2581的至少一种氨基酸序列交叉阻断与人RSV病毒的F-蛋白的表位的结合。
方面H-116：根据方面H-114或H-115中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面H-117：根据方面H-114或H-115中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面H-118：根据方面H-1到H-117中任一项的纳米抗体，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a.SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d.SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g.SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-119：根据方面H-1到H-118中任一项的纳米抗体，其中：
-CDR1选自由下列各项组成的组：
a.SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：690-721，2467-2483，2754-2755和3194-3258的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组：
d.SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1254-1285，2503-2519，2826-2827和3324-3388的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组：
g.SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1818-1849，2539-2555，2898-2899和3454-3518的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-120：根据方面H-1到H-119中任一项的纳米抗体，其中所述CDR序列与SEQID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选至少80％的氨基酸同一性，更优选至少90％的氨基酸同一性，诸如95％的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
方面H-121：根据方面H-1到H-120中任一项的纳米抗体，其是部分人源化的纳米抗体。
方面H-122：根据方面H-1到H-121中任一项的纳米抗体，其是完全人源化的纳米抗体。
方面H-123：根据方面H-1到H-122中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体选自由SEQID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128组成的组中，或选自由与SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一种氨基酸序列具有超过80％，优选地超过90％，更优选地超过95％，如99％或更多的序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组中。
方面H-124：针对流感病毒的血凝素H5蛋白的至少一个表位的纳米抗体，所述纳米抗体交叉阻断SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128的至少一种氨基酸序列与流感病毒的血凝素H5蛋白的至少一个表位的结合。
方面H-125：针对流感病毒的血凝素H5蛋白的至少一个表位的纳米抗体，所述纳米抗体被SEQ ID NO’s：126-157，2431-2447，2682-2683和3064-3128中的至少一种氨基酸序列交叉阻断与流感病毒的血凝素H5蛋白的至少一个表位的结合。
方面H-126：根据方面H-124或H-125中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面H-127：根据方面H-124或H-125中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面H-128：根据方面H-1到H-127中任一项的纳米抗体，其中
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a.SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR2选自由下列各项组成的组中
d.SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和/或
-CDR3选自由下列各项组成的组中
g.SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-129：根据方面H-1到H-128中任一项的纳米抗体，其中
-CDR1选自由下列各项组成的组中：
a.SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的氨基酸序列；
b.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
c.与SEQ ID NO’s：801-811和2756-2789的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR2选自由下列各项组成的组中
d.SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的氨基酸序列；
e.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
f.与SEQ ID NO’s：1365-1375和2828-2861的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；
和
-CDR3选自由下列各项组成的组中
g.SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的氨基酸序列；
h.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有至少80％的氨基酸同一性的氨基酸序列；
i.与SEQ ID NO’s：1929-1939和2900-2933的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列。
方面H-130：根据方面H-1到H-129中任一项的纳米抗体，其中所述CDR序列与SEQID NO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70％的氨基酸同一性，优选地至少80％的氨基酸同一性，更优选地至少90％的氨基酸同一性，如95％氨基酸同一性或更多或甚至基本上100％的氨基酸同一性。
方面H-131：根据方面H-1到H-130中任一项的纳米抗体，其是部分人源化的纳米抗体。
方面H-132：根据方面H-1到H-131中任一项的纳米抗体，其是完全人源化的纳米抗体。
方面H-133：根据方面H-1到H-132中任一项的纳米抗体，所述纳米抗体选自由SEQID NO’s：237-247和2684-2717组成的组中，或选自由与SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列具有超过80％，优选地超过90％，更优选地超过95％，如99％或更多的序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组中。
方面H-134：针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的至少一个表位的纳米抗体，所述纳米抗体交叉阻断SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列与狂犬病病毒的G包膜蛋白的至少一个表位的结合。
方面H-135：针对狂犬病病毒的G包膜蛋白至少一个表位的纳米抗体，所述纳米抗体被SEQ ID NO’s：237-247和2684-2717的至少一种氨基酸序列交叉阻断与狂犬病病毒的G包膜蛋白至少一个表位的结合。
方面H-136：根据方面H-134或H-135中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在Biacore测定法中检测。
方面H-136：根据方面H-134或H-135中任一项的纳米抗体，其中所述纳米抗体交叉阻断或被交叉阻断的能力在ELISA测定法中检测。
方面K-1：多肽，其包含一种或多种根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列和/或一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，或基本由一种或多种根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列和/或一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体组成，并且任选地还包含任选地通过一个或多个肽接头连接的一个或多个其它氨基酸结合单位。
方面K-2：根据方面K-1的多肽，其中所述一个或多个其它结合单位是免疫球蛋白序列。
方面K-3：根据方面K-1或K-2中任一项的多肽，其中所述一个或多个其它结合单位选自由下列各项组成的组中：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″’s，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体。
方面K-4：根据方面K-1到K-3中任一项的多肽，其中所述本发明一种或多种氨基酸序列是免疫球蛋白序列。
方面K-5：根据方面K-1到K-4中任一项的多肽，其中所述本发明一种或多种氨基酸序列选自由下列各项组成的组中：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″’s，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体。
方面K-6：根据方面K-1到K-5中任一项的多肽，所述多肽包含一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体或基本由一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体组成，并且其中所述一个或多个其它结合单位是纳米抗体。
方面K-7：根据方面K-1到K-6中任一项的多肽，其是多价构建体。
方面K-8：根据方面K-1到K-7中任一项的多肽，其是多互补位构建体。
方面K-9：根据方面K-1到K-8中任一项的多肽，其是多特异性构建体。
方面K-10：根据方面K-1到K-9中任一项的多肽，所述多肽与根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身分别相比，具有增加的半衰期。
方面K-11：根据方面K-10的多肽，其中所述一个或多个其它结合单位提供这样的多肽，所述多肽与根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身分别相比，具有增加的半衰期。
方面K-12：根据方面K-10或K-11的多肽，其中提供具有增加的半衰期的多肽的所述一个或多个其它结合单位选自由下列各项组成的组中：血清蛋白或其片段，可以结合血清蛋白的结合单位，Fc部分，和可以结合血清蛋白的小蛋白或肽。
方面K-13：根据方面K-10到K-12的多肽，其中提供具有增加的半衰期的多肽的所述一个或多个其它结合单位选自由下列各项组成的组中：人血清白蛋白或其片段。
方面K-14：根据方面K-10到K-13的多肽，其中提供具有增加的半衰期的多肽的所述一个或多个其它结合单位选自由下列各项组成的组中：可以结合血清白蛋白(如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(如IgG)的结合单位。
方面K-15：根据方面K-10到K-14的多肽，其中提供具有增加的半衰期的多肽的所述一个或多个其它结合单位选自由下列各项组成的组中：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″’s，适合用作dAb的氨基酸序列，可以结合血清白蛋白(如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(如IgG)的纳米抗体。
方面K-16：根据方面K-10到K-15的多肽，其中提供具有增加的半衰期的多肽的所述一个或多个其它结合单位是可以结合血清白蛋白(如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(如IgG)的纳米抗体
方面K-17：根据方面K-10到K-16中任一项的多肽，所述多肽具有分别是根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身的半衰期至少1.5倍，优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的血清半衰期。
方面K-18：根据方面K-10到K-17中任一项的多肽，其具有这样的血清半衰期，所述血清半衰期与根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身比较，分别增加超过1小时，优选地超过2小时，更优选地超过6小时，如超过12小时，或甚至超过24，48或72小时。
方面K-19：根据方面K-10到K-18中任一项的多肽，所述多肽在人中具有至少约12小时，优选地至少24小时，更优选地至少48小时，甚至更优选地至少72小时以上；例如，至少5天(如约5到10天)，优选地至少9天(如约9到14天)，更优选地至少约10天(如约10到15天)，或至少约11天(如约11到16天)，更优选地至少约12天(如约12到18天以上)，或超过14天(如约14到19天)的血清半衰期。
方面L-1：化合物或构建体，其包含一种或多种根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列和/或一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体和/或一种或多种根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，或基本由一种或多种根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列和/或一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体和/或一种或多种根据方面K-1到K-19中任一项的多肽组成，并且任选地还包含任选地通过一个或多个接头连接的一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位。
方面L-2：根据方面L-1的化合物或构建体，其中所述一种或多种其它基团、残基、结构部分或结合单位是氨基酸序列。
方面L-3：根据方面L-1或L-2任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个接头，如果存在的话，是一种或多种氨基酸序列。
方面L-4：根据方面L-1到L-3中任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是免疫球蛋白序列。
方面L-5：根据方面L-1到L-4中任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个其它基团、残基、部分或结合单位选自由下列各项组成的组中：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″’s，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体。
方面L-6：根据方面L-1到L-5中任一项的化合物或构建体，其中所述本发明一种或多种氨基酸序列是免疫球蛋白序列。
方面L-7：根据方面L-1到L-6中任一项的化合物或构建体，其中所述本发明一种或多种氨基酸序列选自由下列各项组成的组中：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″’s，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体。
方面L-8：根据方面L-1到L-7中任一项的化合物或构建体，所述化合物或构建体包含一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，或基本由一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体组成，并且其中所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是纳米抗体。
方面L-9：根据方面L-1到L-8中任一项的化合物或构建体，其是多价构建体。
方面L-10：根据方面L-9的化合物或构建体，其是二价构建体。
方面L-11：根据方面L-10的化合物或构建体，其包含针对于RSV的F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够结合于RSV的F蛋白上的Synagis结合位点的两种氨基酸序列。
方面L-12：根据方面L-10到L11中任一项的化合物或构建体，其包含能够与Synagis竞争与RSV的F蛋白结合的两种氨基酸序列。
方面L-13：根据方面L-11的化合物或构建体，其包含两种针对RSV的F蛋白的抗原性位点II和/或能够结合RSV的F蛋白的抗原性位点II的氨基酸序列。
方面L-14：根据方面L-11的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的氨基酸残基250-275和/能够结合RSV的F蛋白的氨基酸残基250-275。
方面L-15：根据方面L-10到L-14中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白的两个结合位点。
方面L-16：根据方面L-10到L-15中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis相同的作用机制中和RSV。
方面L-17：根据方面L-10的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的101F结合位点和/或能够结合RSV的F蛋白的101F结合位点。
方面L-18：根据方面L-10或L-17中任一项的化合物或构建体，其包含两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与101F竞争结合于RSV的F蛋白。
方面L-19：根据方面L-17的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI和/能够结合RSV F蛋白的抗原性位点IV-VI。
方面L-20：根据方面L-17的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的氨基酸残基423-436和/能够结合RSV的F蛋白的氨基酸残基423-436。
方面L-21：根据方面L-17到L-20中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于RSV的F蛋白上的两个结合位点。
方面L-22：根据方面L-17到L-21中任一项的化合物或构建体，其通过与101F相同的机制中和RSV。
方面L-23：根据方面L-10的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点和/或能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的唾液酸结合位点。
方面L-24：根据方面L-10或L-23中任一项的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-25：根据方面L-23或L-24中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个结合位点。
方面L-26：根据方面L-10的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点。
方面L-27：根据方面L-10或L-26中任一项的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-28：根据方面L-26或L-27中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个结合位点。
方面L-29：根据方面L-26到L-28中任一项的化合物或构建体，其通过与VN04-2相同的机制中和RSV。
方面L-30：根据方面L-10的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点。
方面L-31：根据方面L-10或L-30中任一项的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-32：根据方面L-30或L-31中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个结合位点。
方面L-33：根据方面L-30到L-32中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb C179相同的机制中和RSV。
方面L-34：根据方面L-10的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点。
方面L-35：根据方面L-10或L-34中任一项的化合物或构建体，其包含这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面L-36：根据方面L-34或L-35中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白上的两个结合位点。
方面L-37：根据方面L-34到L-36中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb 8-2相同的机制中和RSV。
方面L-38：根据方面L-9的化合物或构建体，其是二互补位构建体。
方面L-39：根据方面L-38中任一项的化合物或构建体，其包含至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对病毒的包膜蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，和包含至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对不同于第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-40：根据方面L-39的二互补位化合物或构建体，其能够同时结合于病毒的包膜蛋白的所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域和病毒的包膜蛋白的所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-41：根据方面L-38到L-40中任一项的化合物或构建体，其组合分别由其一种结合单位介导的两种以上不同作用模式，其中每个结合单位在病毒的包膜蛋白的不同结合位点结合。
方面L-42：根据方面L-38到L-41中任一项的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的至少一种氨基酸序列，和针对RSV病毒的F蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域的至少一种氨基酸序列，所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域不同于所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-43：根据方面L-42的二互补位化合物或构建体，其能够同时结合于RSV病毒的F蛋白的所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域和RSV病毒的F蛋白的所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-44：根据方面L-38到L-43中任一项的化合物或构建体，其组合两种以上的分别由其一种结合单位介导的不同作用模式，其中每个结合单位在RSV病毒的F蛋白的不同结合位点结合。
方面L-45：根据方面L-42到L-44中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体与Synagis竞争与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-46：根据方面L-45的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体抑制和/或阻断Synagis与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-47：根据方面L-45到L-46中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体针对RSV病毒的F蛋白上的Synagis结合位点。
方面L-48：根据方面L-45到L-47中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体特异性结合于RSV的F蛋白的抗原性位点II。
方面L-49：根据方面L-45到L-48中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体特异性结合于RSV的F蛋白的氨基酸残基250-275的至少一种。
方面L-50：根据方面L-45到L-49中任一项的化合物或构建体，其包含至少一种针对和/或能够结合于RSV的F蛋白上的Synagis结合位点的氨基酸序列，和能够结合于RSV的F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的至少一种其它氨基酸序列。
方面L-51：根据方面L-45到L-50中任一项的化合物或构建体，其包含至少一种能够与Synagis竞争与RSV的F蛋白结合的氨基酸序列，和至少一种能够结合于RSV的F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的其它氨基酸序列。
方面L-52：根据方面L-45到L-51中任一项的化合物或构建体，其包含至少一种针对和/或能够结合RSV的F蛋白的抗原性位点II的氨基酸序列，和至少一种能够结合于RSV的F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的其它氨基酸序列。
方面L-53：根据方面L-45到L-52中任一项的化合物或构建体，其包含至少一种针对和/能够结合RSV的F蛋白的氨基酸残基250-275的氨基酸序列，和至少一种能够结合于RSV F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域的其它氨基酸序列。
方面L-54：根据方面L-45到L-53中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于RSV的F蛋白上的两个结合位点。
方面L-55：根据方面L-45到L-54中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis相同的机制中和RSV。
方面L-56：根据方面L-42到L-44中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体与101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-57：根据方面L-56的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体抑制和/或阻断101F与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-58：根据方面L-56到L-57中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体针对RSV病毒的F蛋白的101F结合位点。
方面L-59：根据方面L-56到L-58中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体特异性结合于RSV的F蛋白的抗原性位点IV-VI。
方面L-60：根据方面L-56到L-59中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体特异性结合于RSV的F蛋白的氨基酸残基423-436的至少一个。
方面L-61：根据方面L-56到L-60中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和/或能够结合于RSV的F蛋白的101F结合位点，和至少一种其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于RSV的F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-62：根据方面L-56到L-61中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与101F竞争结合于RSV的F蛋白，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于RSV的F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-63：根据方面L-56到L-62中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和/能够结合RSV的F蛋白的抗原性位点IV-VI，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于RSV的F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-64：根据方面L-56到L-63中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和/能够结合RSV的F蛋白的氨基酸残基423-436，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于RSV的F蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-65：根据方面L-56到L-64中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于RSV的F蛋白上的两个结合位点。
方面L-66：根据方面L-56到L-65中任一项的化合物或构建体，其通过与101F相同的机制中和RSV。
方面L-67：根据方面L-38到L-66中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体针对RSV病毒的F蛋白上的Synagis结合位点并且针对RSV病毒的F蛋白的101F结合位点。
方面L-68：根据方面L-38到L-67中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体与Synagis和101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-69：根据方面L-38到L-68中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体抑制和/或阻断Synagis和101F与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-70：根据方面L-38到L-69中任一项的化合物或构建体，其特异性结合RSV病毒F蛋白上的Synagis结合位点和RSV病毒F蛋白的101F结合位点。
方面L-71：根据方面L-38到L-70中任一项的化合物或构建体，其特异性结合于RSV病毒F蛋白上的抗原性位点II。
方面L-72：根据方面L-38到L-71中任一项的化合物或构建体，其特异性结合于RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275。
方面L-73：根据方面L-38到L-72中任一项的化合物或构建体，其特异性结合于RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI。
方面L-74：根据方面L-38到L-73中任一项的化合物或构建体，其特异性结合于RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436中的至少一个。
方面L-75：根据方面L-38到L-74中任一项的化合物或构建体，其特异性结合于RSV病毒的F蛋白的抗原性位点II和RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI。
方面L-76：根据方面L-38到L-75中任一项的化合物或构建体，其特异性结合于RSV病毒F蛋白的氨基酸残基250-275和RSV病毒F蛋白的氨基酸残基423-436。
方面L-77：根据方面L-38到L-76中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，其针对RSV的F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够结合于RSV的F蛋白上的Synagis结合位点，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的101F结合位点。
方面L-78：根据方面L-38到L-77中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与Synagis竞争与RSV的F蛋白的结合，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与101F竞争与RSV的F蛋白的结合。
方面L-79：根据方面L-38到L-78中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的抗原性位点II和/或能够结合RSV的F蛋白的抗原性位点II，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的抗原性位点IV-VI和/能够结合RSV的F蛋白的抗原性位点IV-VI。
方面L-80：根据方面L-38到L-79中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的氨基酸残基250-275和/能够结合RSV的F蛋白的氨基酸残基250-275，和至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV的F蛋白的氨基酸残基423-436和/能够结合RSV的F蛋白的氨基酸残基423-436。
方面L-81：根据方面L-38到L-80中任一项的二互补位的化合物或构建体，其可以同时结合于RSV的F蛋白上的Synagis结合位点和RSV的F蛋白上的101F结合位点。
方面L-82：根据方面L-38到L-81中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis和101F相同的机制中和RSV病毒。
方面L-83：根据方面L-38的化合物或构建体，其中两个互补位针对RSV的F蛋白上的Synagis结合位点。
方面L-84：根据方面L-83的化合物或构建体，其中至少一种互补位针对RSV的F蛋白的抗原性位点II。
方面L-85：根据方面L-83的化合物或构建体，其中至少一种互补位针对RSV的F蛋白的氨基酸残基250-275。
方面L-86：根据方面L-83到L-85中任一项的二互补位的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的两个结合位点。
方面L-87：根据方面L-38的化合物或构建体，其中两个互补位针对RSV的F蛋白上的101F结合位点。
方面L-88：根据方面L-87的化合物或构建体，其中至少一种互补位针对RSV的F蛋白的抗原性位点IV-VI。
方面L-89：根据方面L-87的化合物或构建体，其中至少一种互补位针对RSV的F蛋白的氨基酸残基423-436。
方面L-90：根据方面L-87到L-89中任一项的二互补位的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的两个结合位点。
方面L-91：根据方面L-38到L-41中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，和至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域，所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域不同于第一抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-92：根据方面L-91的二互补位的化合物或构建体，其能够同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域和流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-93：根据方面L-91到L-92中任一项的化合物或构建体，其组合分别由其结合单位之一介导的两种以上的不同作用模式，其中每个结合单位在流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的不同结合位点结合。
方面L-94：根据方面L-91到L-93中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-95：根据方面L-94的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体抑制和/或阻断唾液酸与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-96：根据方面L-94到L-95中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点。
方面L-97：根据方面L-94到L-96中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-98：根据方面L-94到L-97中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-99：根据方面L-94到L-98中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个结合位点。
方面L-100：根据方面L-91到L-93中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-101：根据方面L-100的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体抑制和/或阻断VN04-2与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-102：根据方面L-100到L-101中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点。
方面L-103：根据方面L-100到L-102中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点，和至少一种这样的其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-104：根据方面L-100到L-103中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-105：根据方面L-100到L-104中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个结合位点。
方面L-106：根据方面L-100到L-105中任一项的化合物或构建体，其通过与VN04-2相同的机制中和RSV。
方面L-107：根据方面L-91到L-93中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-108：根据方面L-107的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体抑制和/或阻断MAb C179与所述流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面L-109：根据方面L-107到L-108中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点。
方面L-110：根据方面L-107到L-109中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-111：根据方面L-107到L-110中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和至少一种这样的其它氨基酸序列，其能够结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-112：根据方面L-107到L-111中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的两个结合位点。
方面L-113：根据方面L-107到L-112中任一项的化合物或构建体，其通过与MAbC179相同的机制中和RSV。
方面L-114：根据方面L-38到L-41中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对狂犬病病毒的G蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，和至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对狂犬病病毒的G蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域，所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域不同于所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-115：根据方面L-114的二互补位的化合物或构建体，其能够同时结合于狂犬病病毒的G蛋白的所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域和狂犬病病毒的G-蛋白的所述第二抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-116：根据方面L-114到L-115中任一项的化合物或构建体，其组合分别由其结合单位之一介导的两种以上不同作用模式，其中每个结合单位在狂犬病病毒的G蛋白的不同结合位点结合。
方面L-117：根据方面L-114到L-116中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G蛋白的结合。
方面L-118：根据方面L-117的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体抑制和/或阻断MAb 8-2与狂犬病病毒的G蛋白的结合。
方面L-119：根据方面L-117到L-118中任一项的化合物或构建体，其中所述化合物或构建体针对狂犬病病毒的G蛋白上的MAb 8-2结合位点。
方面L-120：根据方面L-117到L-119中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对狂犬病病毒的G蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够结合于狂犬病病毒的G蛋白上的MAb 8-2结合位点，和至少一种这样的其它氨基酸序列，所述氨基酸序列能够结合于狂犬病病毒的G蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-121：根据方面L-117到L-120中任一项的化合物或构建体，其包含：至少一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G蛋白的结合，和至少一种这样的其它氨基酸序列，其能够结合于狂犬病病毒的G蛋白的至少一种其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-122：根据方面L-117到L-121中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合于狂犬病病毒的G蛋白上的两个结合位点。
方面L-123：根据方面L-117到L-122中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb 8-2相同的机制中和RSV。
方面L-124：根据方面L-9的化合物或构建体，其是三价构建体。
方面L-125：根据方面L-124的化合物或构建体，其包含针对病毒包膜蛋白的相同的抗原决定簇、表位、部分或结构域的三种氨基酸序列。
方面L-126：根据方面L-125的化合物或构建体，其可以同时结合于病毒包膜蛋白的三种抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-127：根据方面L-125到L-126中任一项的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的三种氨基酸序列。
方面L-128：根据方面L-127的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白上的Synagis结合位点和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的Synagis结合位点的三种氨基酸序列。
方面L-129：根据方面L-127到L-128中任一项的化合物或构建体，其包含与Synagis竞争与RSV病毒的F蛋白结合的三种氨基酸序列。
方面L-130：根据方面L-127到L-129中任一项的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II的三种氨基酸序列。
方面L-131：根据方面L-127到L-130中任一项的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275的三种氨基酸序列。
方面L-132：根据方面L-125到L-131中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-133：根据方面L-127到L-132中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis相同的机制中和RSV。
方面L-134：根据方面L-127的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白的101F结合位点和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的101F结合位点的三种氨基酸序列。
方面L-135：根据方面L-127和/或L-134中任一项的化合物或构建体，其包含与101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合的三种氨基酸序列。
方面L-136：根据方面L-127和/或L-134到L-135中任一项的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白上的抗原位点IV-VI和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的抗原位点IV-VI的三种氨基酸序列。
方面L-137：根据方面L-127和/或L-134到L-136中任一项的化合物或构建体，其包含针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436的三种氨基酸序列。
方面L-138：根据方面L-127和/或L-134到L-137中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-139：根据方面L-127和/或L-134到L-138中任一项的化合物或构建体，其通过与101F相同的机制中和RSV。
方面L-140：根据方面L-125到L-126中任一项的化合物或构建体，其包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白和/或特异性结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的三种氨基酸序列。
方面L-141：根据方面L-140的化合物或构建体，其包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或特异性结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点的三种氨基酸序列。
方面L-142：根据方面L-140到L-141中任一项的化合物或构建体，其包含与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白结合的三种氨基酸序列。
方面L-143：根据方面L-140到L-142中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-144：根据方面L-140的化合物或构建体，其包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或特异性结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点的三种氨基酸序列。
方面L-145：根据方面L-140和/或L-144中任一项的化合物或构建体，其包含与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的三种氨基酸序列。
方面L-146：根据方面L-140和/或L-144到L-145中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-147：根据方面L-140和/或L-144到L-146中任一项的化合物或构建体，其通过与VN04-2相同的机制中和流感病毒。
方面L-148：根据方面L-140的化合物或构建体，其包含针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或特异性结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAbC179结合位点的三种氨基酸序列。
方面L-149：根据方面L-140和/或L-148中任一项的化合物或构建体，其包含与MAbC179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合的三种氨基酸序列。
方面L-150：根据方面L-140和/或L-148到L-149中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-151：根据方面L-140和/或L-148到L-150中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb C179相同的机制中和流感病毒。
方面L-152：根据方面L-125到L-126中任一项的化合物或构建体，其包含针对狂犬病病毒的G包膜蛋白和/或特异性结合狂犬病病毒的G包膜蛋白的三种氨基酸序列。
方面L-153：根据方面L-152的化合物或构建体，其包含针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或特异性结合狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点的三种氨基酸序列。
方面L-154：根据方面L-152到L-153中任一项的化合物或构建体，其包含与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合的三种氨基酸序列。
方面L-155：根据方面L-152到L-154中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合狂犬病病毒的G包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-156：根据方面L-152到L-155中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb 8-2相同的机制中和流感病毒。
方面L-157：根据方面L-124的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，和一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-158：根据方面L-157的化合物或构建体，其可以同时结合于病毒包膜蛋白的三个抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-159：根据方面L-157到L-158中任一项的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，和一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-160：根据方面L-159的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和能够结合RSV病毒的F蛋白的Synagis结合位点，和一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-161：根据方面L-159到L-160中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与Synagis竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，和一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-162：根据方面L-159到L-161中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II，和一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-163：根据方面L-159到L-162中任一项的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-164：根据方面L-159到L-163中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-165：根据方面L-159到L-164中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis相同的机制中和RSV。
方面L-166：根据方面L-159的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的101F结合位点和/或能够结合RSV病毒的F蛋白的101F结合位点，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-167：根据方面L-159和/或L-166中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-168：根据方面L-159和/或L-166到L-167中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-169：根据方面L-159和/或L-166到L-168中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-170：根据方面L-159和/或L-166到L-169中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-171：根据方面L-159和/或L-166到L-170中任一项的化合物或构建体，其通过与101F相同的机制中和RSV。
方面L-172：根据方面L-159的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的Synagis结合位点和/或能够结合RSV病毒的F蛋白的Synagis结合位点，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的101F结合位点和/能够结合RSV病毒的F蛋白的101F结合位点。
方面L-173：根据方面L-159和/或L-172中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与Synagis竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，和一种这样的氨基酸序列，其与101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-174：根据方面L-159和/或L-172到L-173中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的抗原位点IV-VI和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的抗原位点IV-VI。
方面L-175：根据方面L-159和/或L-172到L-174中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436。
方面L-176：根据方面L-159中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的Synagis结合位点和/或能够结合RSV病毒的F蛋白的Synagis结合位点，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的101F结合位点和/能够结合RSV病毒的F蛋白的101F结合位点。
方面L-177：根据方面L-159和/或L-176中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与Synagis竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，和两种这样的氨基酸序列，其与101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合。
方面L-178：根据方面L-159和/或L-176到L-177中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI。
方面L-179：根据方面L-159和/或L-176到L-178中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436。
方面L-180：根据方面L-159和/或L-172到L-179中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-181：根据方面L-159和/或L-172到L-180中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis和101F相同的机制中和RSV。
方面L-182：根据方面L-157到L-158中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，和一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-183：根据方面L-182的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点，和一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-184：根据方面L-182到L-183中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-185：根据方面L-182到L-184中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-186：根据方面L-182的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点，和一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-187：根据方面L-182和/或L-186中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-188：根据方面L-182和/或L-186到L-187中任一项的化合物或构建体方面，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-189：根据方面L-182和/或L-186到L-188中任一项的化合物或构建体，其通过与VN04-2相同的机制中和流感。
方面L-190：根据方面L-182的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点，和一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-191：根据方面L-182和/或L-190中任一项的化合物或构建体，其包含：两种氨基酸序列，所述氨基酸序列与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-192：根据中方面L-182和/或L-190到L-191任一项的化合物或构建体方面，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-193：根据方面L-182和/或L-190到L-192中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb C179相同的机制中和流感。
方面L-194：根据方面L-157到L-158中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和/或能够结合狂犬病病毒的G包膜蛋白上的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，和一种这样的氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-195：根据方面L-194的化合物或构建体，其包含：这样的两种氨基酸序列，所述氨基酸序列针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够结合狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点，和一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-196：根据方面L-194到L-195中任一项的化合物或构建体，其包含：两种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合，和一种这样的氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-197：根据方面L-194到L-196中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合狂犬病病毒的G包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-198：根据方面L-194到L-197中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb 8-2相同的机制中和狂犬病。
方面L-199：根据方面L-124的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域，一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域，和一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对病毒包膜蛋白的第三抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-200：根据方面L-199的化合物或构建体，其可以同时结合于病毒包膜蛋白的三种抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-201：根据方面L-199或L-200中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的所述氨基酸序列，其针对和/或能够结合RSV病毒的F蛋白上的一个抗原决定簇、表位、部分或结构域，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-202：根据方面L-201的化合物或构建体，其包含：一种这样的所述氨基酸序列，其针对和/或能够结合RSV病毒的F蛋白的Synagis结合位点，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-203：根据方面L-201到L-202中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与Synagis竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-204：根据方面L-201到L-203中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-205：根据方面L-201到L-204中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-206：根据方面L-201到L-205中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-207：根据方面L-201到L-206中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis相同的机制中和RSV。
方面L-208：根据方面L-201的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的101F结合位点和/或能够结合RSV病毒的F蛋白的101F结合位点，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-209：根据方面L-201和/或L-208中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-210：根据方面L-201和/或L-208到L-209中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的抗原性位点IV-VI，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-211：根据方面L-201和/或L-208到L-210中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436，和两种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-212：根据方面L-201和/或L-208到L-211中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-213：根据方面L-201和/或L-208到L-212中任一项的化合物或构建体，其通过与101F相同的机制中和RSV。
方面L-214：根据方面L-201的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的Synagis结合位点和/或能够结合RSV病毒的F蛋白上的Synagis结合位点，一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的101F结合位点和/或能够结合RSV病毒的F蛋白上的101F结合位点，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-215：根据方面L-201和/或L-214中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与Synagis竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，一种这样的氨基酸序列，其与101F竞争与RSV病毒的F蛋白的结合，和一种这样的所述氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-216：根据方面L-201和/或L-214到L-215中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白上的抗原性位点II，一种这样的所述氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的抗原位点IV-VI和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的抗原位点IV-VI，和一种这样的所述氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-217：根据方面L-201和/或L-214到L-216中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275和/或特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基250-275，一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸残基423-436，和一种这样的氨基酸序列，其针对RSV病毒的F蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-218：根据方面L-201和/或L-214到L-217中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合RSV的F蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-219：根据方面L-201和/或L-214到L-218中任一项的化合物或构建体，其通过与Synagis和101F相同的机制中和RSV。
方面L-220：根据方面L-199或L-200中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，其针对和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的一种抗原决定簇、表位、部分或结构域，和两种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-221：根据方面L-220的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点，和两种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-222：根据方面L-220到L-221中任一项的化合物或构建体，其包含一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和两种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇，表位，部分或结构域。
方面L-223：根据方面L-220到L-222中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-224：根据方面L-220的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点，和两种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-225：根据方面L-220和/或L-224中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和两种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-226：根据方面L-220和/或L-224到L-225中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-227：根据方面L-220和/或L-224到L-226中任一项的化合物或构建体，其通过与VN04-2相同的机制中和流感。
方面L-228：根据方面L-220的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点，和两种这样的氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-229：根据方面L-220和/或L-228中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合，和这样的两种氨基酸序列，其针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-230：根据方面L-220和/或L-228到L-229中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的全部三个结合位点。
方面L-231：根据方面L-220和/或L-228到L-230中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb C179相同的机制中和流感。
方面L-232：根据方面L-199或L-200中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和/或能够结合狂犬病病毒的G包膜蛋白的一种抗原决定簇、表位、部分或结构域，和两种这样的氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的其它抗原决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-233：根据方面L-232的化合物或构建体，其包含：一种这样的所述氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的MAb 8-2结合位点和/或能够结合狂犬病病毒的G包膜蛋白的MAb 8-2结合位点，和两种这样的氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-234：根据方面L-232或L-233中任一项的化合物或构建体，其包含：一种这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合，和两种这样的氨基酸序列，其针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的其它决定簇、表位、部分或结构域。
方面L-235：根据方面L-232到L-234中任一项的化合物或构建体，其可以同时结合狂犬病病毒的G包膜蛋白的全部三个结合位点。
方面L-236：根据方面L-232到L-236中任一项的化合物或构建体，其通过与MAb 8-2相同的机制中和狂犬病。
方面L-237：化合物或构建体，其包含或其选自由下列各项组成的组：SEQ ID NO’s：2382-2415，2423-2430，2641-2659，2663-2681，2978-2998，3016-3056和3584-3591或选自由这样的氨基酸序列组成的组：所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：2382-2415，2423-2430，2641-2659，2663-2681，2978-2998，3016-3056和3584-3591的至少一种氨基酸序列具有超过80％，优选地超过90％，更优选地超过95％，如99％或更多的序列同一性(如本文定义)。
方面L-238：根据方面L-1到L-9中任一项的化合物或构建体，其是多特异性构建体。
方面L-239：根据方面L-1到L-238中任一项的化合物或构建体，分别与根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身，或根据方面K-1到K-19中任一项的多肽本身比较，其具有增加的半衰期。
方面L-240：根据方面L-1到L-239中任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位提供这样的化合物或构建体，所述化合物或构建体与根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，或根据方面K-1到K-19中任一项的多肽本身分别相比，具有增加的半衰期
方面L-241：根据方面L-240的化合物或构建体，其中提供具有增加的半衰期的化合物或构建体的所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位选自由下列各项组成的组中：血清蛋白或其片段，可以结合血清蛋白的结合单位，Fc部分，和可以结合血清蛋白的小蛋白或肽。
方面L-242：根据方面L-240或L-241中任一项的化合物或构建体，其中提供具有增加的半衰期的化合物或构建体的所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位选自由下列各项组成的组中：人血清白蛋白或其片段。
方面L-243：根据方面L-240到L-242中任一项的化合物或构建体，其中提供具有增加的半衰期的化合物或构建体的所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位选自由下列各项组成的组中：可以结合血清白蛋白(如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(如IgG)的结合单位。
方面L-244：根据方面L-240到L-243中任一项的化合物或构建体，其中提供具有增加的半衰期的化合物或构建体的所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位选自由下列各项组成的组中：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″’s，适合用作dAb的氨基酸序列，可以结合血清白蛋白(如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(如IgG)的纳米抗体。
方面L-245：根据方面L-240到L-244中任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个提供具有增加的半衰期的化合物或构建体的其它基团，残基，部分或结合单位是可以结合血清白蛋白(如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(如IgG)的纳米抗体。
方面L-246：化合物或构建体，其包含免疫球蛋白的Fc部分和两种以上根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体。
方面L-247：化合物或构建体，其包含免疫球蛋白的Fc部分和一种或多种根据方面L-10到L-246中任一项的化合物或构建体。
方面L-248：根据方面L-246和L-247的化合物或构建体，其包含免疫球蛋白的Fc部分，一种或多种根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体和一种或多种根据方面L-10到L-245中任一项的化合物或构建体。
方面L-249：根据方面L-246或L-248中任一项的化合物或构建体，其中所述Fc部分衍生自选自IgG1，IgG2，IgGA，IgM和IgE的免疫球蛋白。
方面L-250：根据方面L-246到L-249中任一项的化合物或构建体，其中根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体或根据方面L-10到L-245中任一项的化合物或构建体通过适合的接头偶联到Fc部分上。
方面L-251：根据方面L-250的化合物或构建体，其中所述接头是铰合部接头。
方面L-252：根据方面L-246到L-251中任一项的化合物或构建体，其中根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体或根据方面L-10到L-245中任一项的化合物或构建体在Fc部分的一侧偶联。
方面L-253：根据方面L-246到L-252中任一项的化合物或构建体，其中根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体或根据方面L-10到L-245中任一项的化合物或构建体在Fc部分的两侧偶联。
方面L-254：根据方面L-246到L-253中任一项的化合物或构建体，其具有如图59所示的结构。
方面L-255：根据方面L-246到L-253中任一项的化合物或构建体，其具有如图60所示的结构。
方面L-256：根据方面L-246到L-253中任一项的化合物或构建体，其具有如图61所示的结构。
方面L-257：根据方面L-246到L-253中任一项的化合物或构建体，其具有如图62所示的结构。
方面L-258：根据方面L-246到L-253中任一项的化合物或构建体，其具有如图63所示的结构。
方面L-259：根据方面L-246到L-253中任一项的化合物或构建体，其选自由下列各项组成的组中：SEQ ID NO’s：2641-2659和2978-2988。
方面L-260：根据方面L-239到L-259中任一项的化合物或构建体，所述化合物或构建体具有分别是根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身或根据方面K-1到K-19中任一项的多肽的半衰期至少1.5倍，优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的血清半衰期。
方面L-261：根据方面L-239到L-260中任一项的化合物或构建体，其具有这样的血清半衰期，所述血清半衰期与根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身或根据方面K-1到K-19中任一项的多肽比较，分别增加超过1小时，优选地超过2小时，更优选地超过6小时，如超过12小时，或甚至超过24，48或72小时。
方面L-262：根据方面L-239到L-261中任一项的化合物或构建体，所述化合物或构建体在人中具有至少约12小时，优选地至少24小时，更优选地至少48小时，甚至更优选地至少72小时以上；例如，至少5天(如约5到10天)，优选地至少9天(如约9到14天)，更优选地至少约10天(如约10到15天)，或至少约11天(如约11到16天)，更优选地至少约12天(如约12到18天以上)，或超过14天(如约14到19天)的血清半衰期。
方面G-1：单价构建体，其包含根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的一种氨基酸序列和/或根据方面H-1到H-137中任一项的一种纳米抗体，或基本由根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的一种氨基酸序列和/或根据方面H-1到H-137中任一项的一种纳米抗体组成。
方面G-2：根据方面G-1的单价构建体，其中所述本发明的氨基酸序列选自由下列各项组成的组中：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，″dAb″’s，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体。
方面G-3：单价构建体，其包含根据方面H-1到H-137中任一项的一种纳米抗体或基本由根据方面H-1到H-137中任一项的一种纳米抗体组成。
方面G-4：单价构建体，其选自由下列各项组成的组中：SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128，或选自由这样的氨基酸序列组成的组中：所述氨基酸序列与SEQ ID NO’s：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128的至少一种氨基酸序列具有超过80％，优选地超过90％，更优选地超过95％，如99％或更多序列同一性(如本文定义)。
方面G-5：根据方面G-1到G-4中任一项的单价构建体在制备根据方面L-1到L-262中任一项的多价化合物或构建体中的应用。
方面G-6：根据方面G-5的单价构建体在制备多互补位构建体如二价、二互补位、三价、三互补位构建体中的应用。
方面G-7：根据方面G-5或G-6中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体作为结合结构域或结合单位用在制备包含两种以上结合单位的多价构建体中。
方面G-8：根据方面G-5到G-7中任一项的单价构建体在制备多价构建体中的应用，所述多价构建体显示与分子间结合比较的分子内结合。
方面G-9：根据方面G-5到G-8中任一项的单价构建体，作为结合结构域或结合单位在制备多价构建体中的应用，其中所述结合结构域或结合单位通过接头连接，从而使所述多价构建体优选地显示与分子间结合比较的分子内结合。
方面G-10：根据方面G-5到G-9中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点和/或能够与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面G-11：根据方面G-5到G-10中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原位点II。
方面G-12：根据方面G-5到G-11中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基250-275。
方面G-13：根据方面G-5到G-9中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点和/或能够与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面G-14：根据方面G-5到G-9和/或G-13中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原位点IV-VI。
方面G-15：根据方面G-5到G-9和/或G-13到G-14中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436。
方面G-16：根据方面G-5到G-9中任一项的两种单价构建体的应用，其中第一单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原位点II，和更具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基250-275)和/或能够与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合，并且其中所述第二单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，和更具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436)和/或能够与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面G-17：根据方面G-5到G-9中任一项的两种单价构建体用于制备二价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白上的Synagis结合位点(和具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，和更具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基250-275)和/或能够与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面G-18：根据方面G-5到G-9中任一项的三种单价构建体用于制备三价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，和更具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基250-275)和/或能够与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面G-19：根据方面G-5到G-9中任一项的两种单价构建体用于制备二价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，和更具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436)和/或能够与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面G-20：根据方面G-5到G-9中任一项的三种单价构建体用于制备三价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，和更具体地针对RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436)和/或能够与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面G-21：根据方面G-5到G-9中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-22：根据方面G-5到G-9中任一项的两种单价构建体用于制备二价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-23：根据方面G-5到G-9中任一项的三种单价构建体用于制备三价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或能够与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-24：根据方面G-5到G-9中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-25：根据方面G-5到G-9中任一项的两种单价构建体用于制备二价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与竞争VN04-2与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-26：根据方面G-5到G-9中任一项的三种单价构建体用于制备三价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-27：根据方面G-5到G-9中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-28：根据方面G-5到G-9中任一项的两种单价构建体用于制备二价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-29：根据方面G-5到G-9中任一项的三种单价构建体用于制备三价化合物或构建体的应用，其中所述单价构建体针对流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或能够与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面G-30：根据方面G-5到G-9中任一项的单价构建体的应用，其中所述单价构建体针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面G-31：根据方面G-5到G-9中任一项的两种单价构建体用于制备二价构建体的应用，其中所述单价构建体针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面G-32：根据方面G-5到G-9中任一项的三种单价构建体用于制备三价构建体的应用，其中所述单价构建体针对狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或能够与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面M-1：核酸或核苷酸序列，其编码可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，或根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体。
方面M-2：根据方面M-1的核酸或核苷酸序列，其以遗传构建体的形式存在。
方面M-3：根据方面M-1的编码根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体的核酸或核苷酸序列用于制备遗传构建体的应用，所述遗传构建体编码根据方面L-1到L-262任一项的多价构建体。
方面M-4：根据方面M-2的核酸或核苷酸序列的应用，其中所述遗传构建体编码多互补位(如二互补位)构建体。
方面N-1：宿主或宿主细胞，其表达，或在适合的情况下能够表达，可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，或根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体；和/或包含根据方面M-1或M-2的核酸或核苷酸序列。
方面O-1：组合物，其包含至少一种根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体，或根据方面M-1或M-2的核酸或核苷酸序列。
方面O-2：根据方面O-1的组合物，其是药物组合物。
方面O-3：根据方面O-1或O-2的组合物，其是药物组合物，所述药物组合物还包含至少一种药用载体，稀释剂或赋形剂和/或辅药，和任选地包含一种或多种其它药物活性多肽和/或化合物。
方面P-1：用于生产可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体，或根据方面O-1到O-3中任一项的组合物的方法，所述方法至少包括下列步骤：
a.在适合的宿主细胞或宿主生物体中或在其它适合的表达系统中，表达根据方面M-1或M-2的核酸或核苷酸序列，
任选地随后：
b.分离和/或纯化可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，或由此获得的根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体。
方面P-2：用于生产可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体，或根据方面O-1到O-3中任一项的组合物的方法，所述方法至少包括下列步骤：：
a.在使所述宿主或宿主细胞表达和/或生产可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的至少一种氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体，或根据方面O-1到O-3中任一项的组合物的条件下，培养和/或维持根据方面N-1的宿主或宿主细胞，
任选地随后：
b.分离和/或纯化可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，或根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体，或由此获得的根据方面O-1到O-3的组合物。
方面P-3：用于制备和/或产生根据方面L-38到L-123和/或L-157到L-236中任一项的多互补位(如例如，二互补位，三互补位等)构建体的方法，所述方法至少包括下面的步骤：：
a.提供编码第一病毒包膜蛋白结合氨基酸序列的根据方面M-1的核酸序列，其融合于编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；
b.从核酸序列的所述组、集合或文库中筛选编码第二氨基酸序列的核酸序列，所述第二氨基酸序列可以结合于病毒包膜蛋白上不同于由第一病毒包膜蛋白结合氨基酸序列识别的抗原决定簇的抗原决定簇和/或对其具有亲和性；
和
c.分离编码病毒包膜蛋白结合氨基酸序列的核酸序列，所述核酸序列融合于在b)中获得的核酸序列，随后表达编码的构建体。
方面P-4：用于制备和/或产生根据方面L-38到L-123或L-157到L-236中任一项的二互补位或三互补位构建体的方法，所述方法至少包括下面的步骤：：
a.提供核酸序列的组、集合或文库，其中在所述组、集合或文库中的每种核酸序列编码这样的融合蛋白，所述融合蛋白包含第一氨基酸序列，其可以结合病毒包膜蛋白上的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性，其与第二氨基酸序列融合(任选地通过接头序列)，其中基本上每种第二氨基酸序列(或这些中的大部分)是不同氨基酸序列的组、集合或文库的不同成员；
b.从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码可以结合于病毒包膜蛋白上的第二抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性的氨基酸序列，所述第二抗原决定簇、部分、结构域或表位与病毒包膜蛋白上的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位不同；
和
c.分离这样的核酸序列，其编码在b)中获得的可以结合不同于在病毒包膜蛋白上的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位的病毒包膜蛋白上的第二抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性的氨基酸序列，任选地随后表达编码的氨基酸序列。
方面P-5：根据方面P-4的方法，其中所述第一氨基酸也由核酸序列的组、集合或文库编码，并且其中在步骤b)中，从核酸序列的所述组、集合或文库中筛选到编码这样的氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列可以结合于病毒包膜蛋白上的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位，和/或对其具有亲和性。
方面P-6：根据方面P-5的方法，其中在步骤b)中的筛选在单一步骤中进行。
方面P-7：根据方面P-5的方法，其中在步骤b)中的筛选在随后的步骤中进行。
方面P-8：根据方面P-4到P-7中任一项的方法，其中在步骤a)中使用的第一氨基酸序列优选地是这样的，以致(i)其可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，更具体地至少RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基250-275)和/或对其具有亲和性，和/或(ii)其与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-9：根据方面P-4到P-8中任一项的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码(i)可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，更具体地至少RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436)和/或对其具有亲和性的氨基酸序列，和/或(ii)可以与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合的氨基酸序列。
方面P-10：根据方面P-4到P-7中任一项的方法，其中在步骤a)中使用的第一氨基酸序列优选地是这样的，以致(i)其可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，更具体地至少RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436)和/或对其具有亲和性，和/或(ii)其与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-11：根据方面P-4到P-7和P-10中任一项的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码(i)可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，更具体地至少RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基250-275)和/或对其具有亲和性的氨基酸序列，和/或(ii)可以与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合的氨基酸序列。
方面P-12：根据方面P-4到P-7中任一项的方法，其中在步骤a)中使用的第一氨基酸序列优选地是这样的，以致(i)其可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)其与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-13：根据方面P-4到P-7中任一项的方法，其中在步骤a)中使用的第一氨基酸序列优选地是这样的，以致(i)其可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)其与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-14：根据方面P-4到P-7中任一项的方法，其中在步骤a)中使用的第一氨基酸序列优选地是这样的，以致(i)其可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAbC179结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)其与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-15：根据方面P-4到P-7中任一项的方法，其中在步骤a)中使用的第一氨基酸序列优选地是这样，的以致(i)其可以结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)其与MAb8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面P-16：根据方面P-4到P-15中任一项的方法，其中在步骤b)中的筛选在单一步骤中进行。
方面P-17：根据方面P-4到P-15中任一项的方法，其中在步骤b)中的筛选在随后的步骤中进行。
方面P-18：根据方面P-4到P-17中任一项的方法，其中在步骤b)中的筛选在存在Synagis，101F，唾液酸，VN04-2，MAb C179和/或MAb 8-2的情况下进行。
方面P-19：用于筛选在根据方面L-38到L-123或L-157到L-236中任一项的二互补位或三互补位构建体中连接第一和第二氨基酸序列的适合的和/或优选接头长度的方法，其中所述方法包含至少下述步骤：
a.提供核酸序列的组、集合或文库，其中在所述组、集合或文库中的每个核酸序列编码融合蛋白，所述融合蛋白包含可以结合于病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性的第一氨基酸序列，所述第一氨基酸序列通过接头序列融合于可以结合于病毒包膜蛋白的第二抗原决定簇、部分、结构域或表位(其可以相同或不同于病毒包膜蛋白上的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位)和/或对其具有亲和性的第二氨基酸序列，其中基本上每种核酸序列(或这些中的大部分)编码具有不同接头序列的融合蛋白，从而提供编码不同融合蛋白的组、集合或文库；
b.从核酸序列的所述组、集合或文库筛选编码这样的氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列可以结合于病毒包膜蛋白上的第一和第二抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性；
和
c.分离编码这样的氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列可以结合病毒包膜蛋白上的第一和第二抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性，任选地随后表达所编码的氨基酸序列。
方面P-20：根据方面P-19的方法，其中所述第一氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，更具体地RSV病毒的F包膜蛋白的至少氨基酸残基250-275)和/或对其具有亲和性，和/或可以与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-21：根据方面P-20的方法，其中所述第二氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，更具体地RSV病毒的F包膜蛋白的至少氨基酸残基423-436)和/或对其具有亲和性，和/或可以与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-22：根据方面P-19的方法，其中所述第一氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，更具体地至少RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436)和/或对其具有亲和性，和/或可以与101F竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-23：根据方面P-22的方法，其中所述第二氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，更具体地RSV病毒的F包膜蛋白的至少氨基酸残基250-275)和/或对其具有亲和性，和/或所述氨基酸序列可以与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-24：根据方面P-19的方法，其中所述第一氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或对其具有亲和性，和/或所述氨基酸序列可以与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-25：根据方面P-19的方法，其中所述第一氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或对其具有亲和性，和/或其可以与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-26：根据方面P-19的方法，其中所述第一氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或对其具有亲和性，和/或其可以与MAb C179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-27：根据方面P-19的方法，其中所述第一氨基酸序列是这样的氨基酸序列，其可以结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或对其具有亲和性，和/或其可以与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面P-28：根据方面P-19到P-27中任一项的方法，其中在步骤b)中的筛选在单一步骤中进行。
方面P-29：根据方面P-19到P-27中任一项的方法，其中在步骤b)中的筛选在随后的步骤中进行。
方面P-30：根据方面P-19到P-29中任一项的方法，其中在步骤b)中的筛选在存在Synagis，101F，唾液酸，VN04-2，MAb C179和/或MAb 8-2时进行。
方面P-31：用于制备和/或产生根据方面L-38到L-123或L-157到L-236中任一项的二互补位或三互补位构建体的方法，所述方法至少包括下面的步骤：
a.提供编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；
b.从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码可以结合病毒包膜蛋白和/或对病毒包膜蛋白具有亲和性的氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；
c.将编码可以结合病毒包膜蛋白和/或对病毒包膜蛋白具有亲和性的氨基酸序列的核酸序列的所述组、集合或文库连接到编码可以结合病毒的包膜蛋白和/或对病毒包膜蛋白具有亲和性的氨基酸序列的其它核酸序列(例如，编码与Synagis竞争与病毒包膜蛋白结合的氨基酸序列的核酸序列)上；
和
d.从在c)中获得的核酸序列的所述组、集合或文库分离编码可以结合病毒的包膜蛋白和/或对病毒包膜蛋白具有亲和性的二互补位氨基酸序列的核酸序列(并且例如进一步选择编码这样的二互补位氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列与单价氨基酸序列比较以更高的功效拮抗)，随后表达所编码的氨基酸序列。
方面P-32：用于制备和/或产生根据方面L-38到L-123或L-157到L-236中任一项的二互补位或三互补位构建体的方法，所述方法至少包括下面的步骤：
a.提供编码氨基酸序列的核酸序列的第一组、集合或文库；
b.从所述核酸序列的第一组、集合或文库中筛选编码可以结合病毒包膜蛋白的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性的氨基酸序列的核酸序列；
c.将在b)中获得的编码可以结合在病毒包膜蛋白上的第一抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性的所述氨基酸序列的核酸序列连接到编码氨基酸序列的其它核酸序列的组、集合或文库上，从而获得编码融合蛋白的核酸序列的组、集合或文库；
d.从在步骤c)中获得的核酸序列的所述组、集合或文库筛选编码可以结合病毒包膜蛋白上的第二抗原决定簇、部分、结构域或表位和对其具有亲和性的氨基酸序列的核酸序列，所述病毒包膜蛋白上的第二抗原决定簇、部分、结构域或表位相同或不同于病毒包膜蛋白上的所述所述第一抗原决定簇、部分、结构域或表位；
和
e.分离这样的核酸序列，其编码可以结合于病毒包膜蛋白上的所述第一和第二抗原决定簇、部分、结构域或表位和/或对其具有亲和性的氨基酸序列，任选地随后表达所编码的氨基酸序列。
方面P-33：根据方面P-32的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第一氨基酸序列，所述第一氨基酸序列(i)可以结合RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，更具体地至少RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基250-275)和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-34：根据方面P-32和/或P-33中任一项的方法，其中在步骤d)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第二氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，更具体地RSV病毒的F包膜蛋白的至少氨基酸残基423-436)和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与101F竞争结合于RSV病毒的F包膜蛋白。
方面P-35：根据方面P-32的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第一氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白上的101F结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点IV-VI，更具体地至少RSV病毒的F包膜蛋白的氨基酸残基423-436)和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与101F竞争结合于RSV病毒的F包膜蛋白。
方面P-36：根据方面P-32和/或P-35中任一项的方法，其中在步骤d)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第二氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)可以结合于RSV病毒的F包膜蛋白的Synagis结合位点(和具体地RSV病毒的F包膜蛋白的抗原性位点II，更具体地RSV病毒的F包膜蛋白的至少氨基酸残基250-275)和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与Synagis竞争与RSV病毒的F包膜蛋白的结合。
方面P-37：根据方面P-32的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第一氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的唾液酸结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与唾液酸竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-38：根据方面P-32的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第一氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的VN04-2结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与VN04-2竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-39：根据方面P-32的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第一氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)可以结合于流感病毒的血凝素H5包膜蛋白上的MAb C179结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与MAbC179竞争与流感病毒的血凝素H5包膜蛋白的结合。
方面P-40：根据方面P-32的方法，其中在步骤b)中，从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选这样的核酸序列，其编码第一氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)可以结合于狂犬病病毒的G包膜蛋白上的MAb 8-2结合位点和/或对其具有亲和性，和/或(ii)与MAb 8-2竞争与狂犬病病毒的G包膜蛋白的结合。
方面P-41：根据方面P-32到P-40中任一项的方法，其中在步骤b)和/或d)中的筛选在存在Synagis，101F，唾液酸，VN04-2，MAb C179和/或MAb 8-2时进行。
方面P-42：用于制备和/或产生根据方面L-38到L-123或L-157到L-236中任一项的二价或三价构建体的方法，所述方法至少包括下面的步骤：连接两种以上单价氨基酸序列或根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体和例如一个或多个接头。
方面P-43：根据方面P-42的方法，其包括下列步骤：：
a.连接两种以上根据方面M-1的核酸序列，其编码根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体(以及，例如编码一个或多个接头的核酸和本身已知的遗传构建体的其它一种或多种另外的元件)，从而获得根据方面M-2所述的遗传构建体；
b.在适合的宿主细胞或宿主生物体中或在其它适合的表达系统中表达在a)中获得的所述遗传构建体；
任选地随后：
c.分离和/或纯化由此获得的根据方面L-38到L-123或L-157到L-236中任一项的二互补位或三互补位构建体。
方面Q-1：用于筛选针对病毒的包膜蛋白的氨基酸序列的方法，所述方法至少包括下面的步骤：：
a.提供编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；
b.从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码可以结合于病毒的包膜蛋白和/或对其具有亲和性并且被交叉阻断或交叉阻断本发明的纳米抗体的氨基酸序列的核酸序列，所述纳米抗体例如，SEQ ID NO：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128之一(表A-1)，或本发明的纳米抗体的人源化变体，例如，SEQ ID NO：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128之一(表A-1)的人源化变体，或包含至少一种本发明的纳米抗体的多肽或构建体，例如，包含SEQ ID NO：126-407，2431-2448，2574-2581，2682-2717和3064-3128之一(表A-1)的多肽或构建体；和
c.分离所述核酸序列，随后表达所述氨基酸序列。
方面R-1：用于预防和/或治疗至少一种病毒性疾病的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的至少一种根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或根据方面O-1到O-3的组合物。
方面R-2：方法，用于预防和/或治疗至少一种与病毒进入和/或病毒复制相关和/或由病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体介导，与其生物学或药理学活性相关，和/或与其中涉及病毒的包膜蛋白和/或其病毒受体的病毒-介导的生物学途径相关的疾病或病症，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的至少一种根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或根据方面O-1到O-3的组合物。
方面R-3：预防和/或治疗至少一种这样的疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向需要所述方法的受试者施用根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或根据方面O-1到O-3的组合物进行预防和/或治疗，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的至少一种氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或根据方面O-1到O-3的组合物。
方面R-4：用于免疫治疗的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的至少一种氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或根据方面O-1到O-3的组合物。
方面R-5：根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或根据方面O-1到O-3的组合物在制备用于预防和/或治疗至少一种病毒性疾病的药物组合物中的应用；和/或用于根据方面R-1到R-4的一种或多种方法中的应用。
方面S-1：根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列的部分或片段或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体的部分或片段。
方面S-2：根据方面S-1的部分或片段，其可以特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面S-3：根据方面S-2的部分或片段，其中所述部分或片段调节在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面S-4：根据方面S-2或S-3的部分或片段，其中所述部分或片段抑制和/或防止在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面S-5：根据方面S-2到S-4中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段与所述结合配偶体竞争结合于所述包膜蛋白。
方面S-6：根据方面S-4的部分或片段，其中所述至少一种结合配偶体是病毒包膜蛋白的病毒受体。
方面S-7：根据方面S-6的部分或片段，其中所述病毒受体选自由下列各项组成的组中：唾液酸，可溶的(2，3)-唾液酸，(2，6)-唾液酸，CD4，CCR5，CXCR4，半乳糖基神经酰胺，ACE2，HveA，CD155，ICAM-1，CAR，αv整联蛋白，硫酸肝素蛋白聚糖，JAM-1，烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和神经细胞黏着分子(NCAM)。
方面S-8：根据方面S-6或S-7的部分或片段，其中所述在包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA与唾液酸和/或(2，3)唾液酸和/或(2，6)唾液酸之间的相互作用；HIV-1病毒的gp120与CD4和/或CCR5和/或CXCR4和/或半乳糖基神经酰胺之间的相互作用；SARS冠状病毒的S1与ACE2之间的相互作用；gD和/或gB和/或gC和/或单纯疱疹1病毒的异源二聚体gH/gL与HveA之间的相互作用；脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3与CD155之间的相互作用；鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3与ICAM-1之间的相互作用；腺病毒2纤维与CAR之间的相互作用；腺病毒2五邻体基质与αv整联蛋白和/或唾液酸和/或(2，3)唾液酸和/或(2，6)唾液酸和/或硫酸肝素蛋白聚糖之间的相互作用；呼肠孤病毒1的σ1与JAM-1和/或唾液酸和/或(2，3)唾液酸和/或(2，6)唾液酸之间的相互作用；狂犬病病毒的G-蛋白与烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和/或神经细胞黏着分子(NCAM)的相互作用。
方面S-9：根据方面S-4的部分或片段，其中所述至少一种结合配偶体是针对所述病毒的包膜蛋白和/或特异性结合于所述病毒的包膜蛋白的单克隆抗体。
方面S-10：根据方面S-9的部分或片段，其中所述单克隆抗体是Synagis101F，VN04-2，MAb C179或MAb 8-2。
方面S-11：根据方面S-2到S-10中任一项的部分或片段，其中所述包膜蛋白是病毒特异性蛋白。
方面S-12：根据方面S-2到S-11中任一项的部分或片段，其中所述包膜蛋白是膜蛋白。
方面S-13：根据方面S-2到S-12中任一项的部分或片段，其中所述包膜蛋白是非糖基化的蛋白。
方面S-14：根据方面S-2到S-12中任一项的部分或片段，其中所述包膜蛋白是糖蛋白。
方面S-15：根据方面S-2到S-14中任一项的部分或片段，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白。
方面S-16：根据方面S-15的部分或片段，其中所述病毒附着蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的G蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质和呼肠孤病毒1的σ1。
方面S-17：根据方面S-2到S-16中任一项的部分或片段，其中所述包膜蛋白是病毒融合蛋白。
方面S-18：根据方面S-17的部分或片段，其中所述病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的F蛋白，流感A病毒的HA蛋白，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
方面S-19：根据方面S-2到S-18中任一项的部分或片段，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白。
方面S-20：根据方面S-19的部分或片段，其中所述病毒附着蛋白和病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，和辛德毕斯病毒的E1蛋白。
方面S-21：根据方面S-17到S-20中任一项的部分或片段，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面S-22：根据方面S-21的部分或片段，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是融合蛋白三聚体。
方面S-23：根据方面S-22的部分或片段，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面S-24：根据方面S-22或S-23的部分或片段，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面S-25：根据方面S-22到S-24中任一项的部分或片段，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，人呼吸道合胞病毒F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1gp21蛋白，人syncytin-2TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白，SARS冠状病毒E2蛋白。
方面S-26：根据方面S-25的部分或片段，其中所述融合蛋白是流感A病毒HA蛋白。
方面S-27：根据方面S-25的部分或片段，其中所述融合蛋白是人呼吸道合胞病毒F蛋白。
方面S-28：根据方面S-21的部分或片段，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是蛋白二聚体。
方面S-29：根据方面S-28的部分或片段，其中所述二聚体是融合蛋白同型二聚体。
方面S-30：部分或片段根据方面S-28，其中所述二聚体是蛋白异源二聚体。
方面S-31：根据方面S-21的部分或片段，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是融合蛋白单体。
方面S-32：根据方面S-28到S-31中任一项的部分或片段，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面S-33：根据方面S-21的部分或片段，其中所述融合蛋白特征在于融合后构象状态，其是融合蛋白三聚体。
方面S-34：根据方面S-33的部分或片段，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面S-35：根据方面S-33或S-34的部分或片段，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面S-36：根据方面S-34的部分或片段，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋。
方面S-37：根据方面S-33到S-36中任一项的部分或片段，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，呼吸道合胞F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白和SARS冠状病毒E2蛋白。
方面S-38：根据方面S-34的部分或片段，其中所述发夹三聚体包含β-结构。
方面S-39：根据方面S-33到S-35和S-38中任一项的部分或片段，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面S-40：根据方面S-34，S-36和S-38中任一项的部分或片段，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
方面S-41：根据方面S-40的部分或片段，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：疱疹性口炎病毒G蛋白，狂犬病病毒G蛋白和单纯疱疹病毒gB蛋白。
方面S-42：根据方面S-41的部分或片段，其中所述融合蛋白是狂犬病病毒G蛋白。
方面S-43：根据方面S-21到S-42中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或的中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面S-44：根据方面S-43的部分或片段，其中所述部分或片段针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或中间构象状态。
方面S-45：根据方面S-43的部分或片段，其中所述部分或片段针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面S-46：根据方面S-43的部分或片段，其中所述部分或片段针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或融合后构象状态。
方面S-47：根据方面S-21到S-46中任一项的部分或片段，其中所述表位位于由根据权利要求S-22到S-27和S-33到S-42所述的三聚体形成的腔或裂缝中或由根据方面S-28到S-32所述的二聚体形成的腔或裂缝中。方面S-48：根据方面S-21到S-47中任一项的部分或片段，其中所述表位位于所述融合蛋白的干区中。
方面S-49：根据方面S-48的部分或片段，其中其中所述表位位于所述融合蛋白的干区中，所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含流感HA的HA1亚基的氨基酸318-322的一个或多个的区域中的表位和/或位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸47-58的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸的1-38的一个或多个的N-端区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸38-112的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸125-175的一个或多个的区域中的表位和位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸176-185的一个或多个的区域中的表位。
方面S-50：根据方面S-21到S-47中任一项的部分或片段，其中所述表位位于所述融合蛋白的颈区中。
方面S-51：根据方面S-21到S-47中任一项的部分或片段，其中所述表位位于所述融合蛋白的球状头区域中。
方面S-52：根据方面S-51的部分或片段，其中所述球状头区域包含β-桶型结构。
方面S-53：根据方面S-51的部分或片段，其中所述球状头区域包含免疫球蛋白型β-夹层结构域和β-片层结构域。
方面S-54：根据方面S-2到S-53中任一项的部分或片段，其中所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含RSV病毒的A-抗原性位点和/或RSV病毒的F-蛋白的氨基酸255-280的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F1a位点的区域和/或包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸389的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸422-438的区域中的表位，位于包含流感病毒的H5HA包膜蛋白的唾液酸结合位点的区域中的表位，位于包含狂犬病病毒的G-蛋白的烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和/或神经细胞黏着分子(NCAM)结合位点的区域中的表位，位于融合蛋白的C-端区域中的表位，位于融合蛋白的N-端结构域中的表位，位于融合蛋白的融合肽中的表位或包含融合蛋白的融合肽的表位，位于融合蛋白的跨膜结构域中的表位，位于融合蛋白的α-螺旋卷曲螺旋中的表位，位于融合蛋白的β-结构中的表位，位于融合蛋白的结构域I中的表位，位于融合蛋白的结构域II中的表位和位于融合蛋白的结构域III中的表位。
方面S-55：根据方面S-54的部分或片段，其中位于融合蛋白的结构域II中的表位是位于融合蛋白的结构域II的融合肽中的表位。
方面S-56：根据方面S-54的部分或片段，其中位于融合蛋白的结构域III中的所述表位选自由下列各项组成的组中：位于在融合蛋白的结构域III的C端干区中的表位和位于在融合蛋白的结构域III的C-端的跨膜锚定物中的表位。
方面S-57：根据方面S-2到S-56中任一项的部分或片段，其中所述病毒选自由下列各项组成的组中：DNA病毒，RNA病毒和反转录酶(RT)病毒。
方面S-58：根据方面S-57的部分或片段，其中所述DNA病毒选自由下列各项组成的组中：ds DNA病毒和ssDNA病毒。
方面S-59：根据方面S-57的部分或片段，其中所述RNA病毒选自由下列各项组成的组中：dsRNA病毒，正义ssRNA病毒和负义ssRNA病毒。
方面S-60：根据方面S-57的部分或片段，其中所述反转录酶(RT)病毒选自由下列各项组成的组中：dsDNA-RT病毒和ssRNA-RT病毒。
方面S-61：根据方面S-2到S-60中任一项的部分或片段，其中所述病毒属于选自由下列各项组成的组中的病毒家族：正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，副黏液病毒科(Paramyxoviridae)，丝状病毒科(Filoviridae)，反转录病毒科(Retroviridae)，冠状病毒科(Coronaviridae)，披膜病毒科(Togaviridae)和黄热病毒科(Flaviviridae)，杆状病毒科(Rhabdoviridae)，疱疹病毒科(Herpesviridae)，砂粒病毒科(Arenaviridae)，玻那病毒科(Bornaviridae)，布尼亚病毒科(Bunyaviridae)，嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)和痘病毒科(Poxviridae)。
方面S-62：根据方面S-61的部分或片段，其中所述病毒属于选自由甲病毒属(Alphaviruses)和黄病毒属(Flaviviruses)组成的组的病毒属中。
方面S-63：根据方面S-2到S-62中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段中和所述病毒。
方面S-64：根据方面S-2到S-63中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段调节所述病毒的感染性。
方面S-65：根据方面S-64的部分或片段，其中所述部分或片段抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面S-66：根据方面S-64或S-65中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段在进入前阶段中和所述病毒和/或调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面S-67：根据方面S-66的部分或片段，其中所述部分或片段调节、抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中。
方面S-68：根据方面S-2到S-67中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段诱导所述病毒的病毒体聚集。
方面S-69：根据方面S-2到S-68中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段使所述病毒的病毒体结构去稳定化。
方面S-70：根据方面S-2到S-69中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段抑制病毒体附着到所述病毒的靶宿主细胞。
方面S-71：根据方面S-70的部分或片段，其中所述部分或片段通过调节在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面S-72：根据方面S-70或S-71的部分或片段，其中所述部分或片段通过抑制和/或防止在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面S-73：根据方面S-70或S-72的部分或片段，其中所述部分或片段与所述包膜蛋白竞争与病毒受体的结合。
方面S-74：根据方面S-2到S-73中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段抑制所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合。
方面S-75：根据方面S-74的部分或片段，其中在所述靶宿主细胞膜上发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面S-76：根据方面S-74的部分或片段，其中在内体或溶酶体区室中发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面S-77：根据方面S-74到S-76中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段防止所述病毒的包膜蛋白进行构象变化。
方面S-78：根据方面S-64到S-65中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段在进入后阶段中中和所述病毒和/或调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面S-79：根据方面S-2到S-78中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段调节、抑制和/或防止在靶宿主细胞中的病毒复制。
方面S-80：根据方面S-2到S-79中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段影响、抑制和/或防止病毒基因组的转录和/或翻译。
方面S-81：根据方面S-2到S-80中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段影响、抑制和/或防止病毒包装和/或功能病毒体的形成。
方面S-82：根据方面S-2到S-81中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段减少、抑制和/或防止新生病毒体在靶宿主细胞表面的出芽或释放。
方面S-83：根据方面S-2到S-82中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段针对病毒的包膜蛋白的至少两种表位和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少两种表位。
方面S-84：根据方面S-83的部分或片段，其中所述部分或片段针对病毒的一种包膜蛋白的至少两种表位和/或可以特异性结合于病毒的一种包膜蛋白的至少两种表位。
方面S-85：根据方面S-2到S-83中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段针对病毒的至少两种包膜蛋白的至少两个表位和/或可以特异性结合于病毒的至少两种包膜蛋白的至少两个表位。
方面S-86：根据方面S-2到S-83和S-85中任一项的部分或片段，其中所述部分或片段针对所述病毒的包膜蛋白的三种以上的表位和/或可以特异性结合于所述病毒的包膜蛋白的三种以上的表位。
方面S-87：根据方面S-85的部分或片段，其中所述部分或片段针对病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位和/或可以特异性结合于病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位。
方面S-88：根据方面S-83到S-87中任一项的部分或片段，其中所述至少两种或三种或更多表位是相同或不同的。
方面S-89：根据方面S-85或S-87中任一项的部分或片段，其中所述至少两种包膜蛋白是相同或不同的。
方面S-90：根据方面S-2到S-89中任一项的部分或片段，所述部分或片段可以以10-5到10-12摩尔/升以下，和优选地10-7到10-12摩尔/升以下，和更优选地10-8到10-12摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面S-91：根据方面S-2到S-90中任一项的部分或片段，所述部分或片段可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的缔合速率(kon-速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面S-92：根据方面S-2到S-91中任一项的部分或片段，所述部分或片段可以以1s-1-10-6s-1，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的解离速率(koff速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面S-93：化合物或构建体，其包含一个或多个根据方面S-1到S-92中任一项的部分或片段，并且任选地还包含任选地通过一个或多个接头连接的一种或多种其它基团、残基、结构部分或结合单位。
方面S-94：根据方面S-93的化合物或构建体，其中所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是氨基酸序列。
方面S-95：根据方面S-93或S-94的化合物或构建体，其中所述一个或多个接头，如果存在的话，是一种或多种氨基酸序列。
方面S-96：核酸或核苷酸序列，其编码根据方面S-1到S-92中任一项的部分或片段或根据方面S-93到S-95中任一项的化合物或构建体。
方面S-97：组合物，其包含至少一种根据方面S-1到S-92中任一项的部分或片段，根据方面S-93到S-95中任一项的化合物或构建体，或根据方面S-96的核酸或核苷酸序列。
方面T-1：根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体的衍生物。
方面T-2：根据方面T-1的衍生物，其可以特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面T-3：根据方面T-1或T-2的衍生物，其中所述衍生物调节在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面T-4：根据方面T-1到T-3中任一项的衍生物，其中所述衍生物抑制和/或防止在所述包膜蛋白和至少一种结合配偶体之间的相互作用。
方面T-5：根据方面T-1到T-4中任一项的衍生物，其中所述衍生物与所述结合配偶体竞争与所述包膜蛋白的结合。
方面T-6：根据方面T-5的衍生物，其中所述至少一种结合配偶体是病毒包膜蛋白的病毒受体。
方面T-7：根据方面T-6的衍生物，其中所述病毒受体选自由下列各项组成的组中：唾液酸，可溶的(2，3)-唾液酸，(2，6)-唾液酸，CD4，CCR5，CXCR4，半乳糖基神经酰胺，ACE2，HveA，CD155，ICAM-1，CAR，αv整联蛋白，硫酸肝素蛋白聚糖，JAM-1，烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和神经细胞黏着分子(NCAM)。
方面T-8：根据方面T-6或T-7中任一项的衍生物，其中所述在包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA与唾液酸和/或(2，3)唾液酸和/或(2，6)唾液酸的相互作用；HIV-1病毒的gp120与CD4和/或CCR5和/或CXCR4和/或半乳糖基神经酰胺的相互作用；SARS冠状病毒的S1与ACE2的相互作用；单纯疱疹1病毒的gD和/或gB和/或gC和/或异源二聚体gH/gL与HveA的相互作用；脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3与CD155的相互作用；鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3与ICAM-1的相互作用；腺病毒2纤维与CAR的相互作用；腺病毒2五邻体基质与αv整联蛋白和/或唾液酸和/或(2，3)唾液酸和/或(2，6)唾液酸和/或硫酸肝素蛋白聚糖的相互作用；呼肠孤病毒1的σ1与JAM-1和/或唾液酸和/或(2，3)唾液酸和/或(2，6)唾液酸的相互作用；狂犬病病毒的G-蛋白与烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和/或神经细胞黏着分子(NCAM)的相互作用。
方面T-9：根据方面T-4或T-5中任一项的衍生物，其中所述至少一种结合配偶体是单克隆抗体，所述单克隆抗体针对所述病毒的包膜蛋白和/或特异性结合于所述病毒的包膜蛋白。
方面T-10：根据方面T-9的衍生物，其中所述单克隆抗体是Synagis101F，VN04-2，MAb C179和/或MAb 8-2。
方面T-11：根据方面T-2到T-10中任一项的衍生物，其中所述包膜蛋白是病毒特异性蛋白。
方面T-12：根据方面T-2到T-10中任一项的衍生物，其中所述包膜蛋白是膜蛋白。
方面T-13：根据方面T-2到T-12中任一项的衍生物，其中所述包膜蛋白是非糖基化蛋白。
方面T-14：根据方面T-2到T-12中任一项的衍生物，其中所述包膜蛋白是糖蛋白。
方面T-15：根据方面T-2到T-14中任一项的衍生物，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白。
方面T-16：根据方面T-15的衍生物，其中所述病毒附着蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的G蛋白，流感A病毒的HA蛋白，HIV-1病毒的gp120蛋白，SARS冠状病毒的S1蛋白，单纯疱疹1病毒的gD蛋白，脊髓灰质炎病毒1的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，鼻病毒3的VP1和/或VP2和/或VP3蛋白，腺病毒2的纤维和/或五邻体基质和呼肠孤病毒1的σ1。
方面T-17：根据方面T-2到T-14中任一项的衍生物，其中所述包膜蛋白是病毒融合蛋白。
方面T-18：根据方面T-17的衍生物，其中所述病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：RSV病毒的F蛋白，流感A病毒的HA蛋白，流感C病毒的HEF蛋白，猿猴副流感病毒的5F蛋白，人副流感病毒的F蛋白，新城疫病毒的F蛋白，麻疹的F2蛋白，仙台病毒的F2蛋白，埃博拉病毒的gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒的TM蛋白，人免疫缺陷病毒1的gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒的gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1的gp21蛋白，人syncytin-2的TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒的TM蛋白，小鼠肝炎病毒的S2蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，辛德毕斯病毒的E1蛋白，狂犬病病毒的G蛋白，疱疹性口炎病毒的G蛋白和单纯疱疹病毒的gB蛋白。
方面T-19：根据方面T-2到T-18中任一项的衍生物，其中所述包膜蛋白是病毒附着蛋白和病毒融合蛋白。
方面T-20：根据方面T-19的衍生物，其中所述病毒附着蛋白和病毒融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒的HA蛋白，SARS冠状病毒的E2蛋白，蜱媒脑炎病毒的E蛋白，登革2和3病毒的E2蛋白，黄热病病毒的E蛋白，西尼罗河病毒的E蛋白，塞姆利基森林病毒的E1蛋白，和辛德毕斯病毒的E1蛋白。
方面T-21：根据方面T-17到T-20的衍生物，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态和/或中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面T-22：根据方面T-21的衍生物，其中所述病毒融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是融合蛋白三聚体。
方面T-23：根据方面T-22的衍生物，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面T-24：根据方面T-22或T-23的衍生物，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面T-25：根据方面T-22到T-24中任一项的衍生物，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，人呼吸道合胞病毒F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1gp21蛋白，人syncytin-2TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白，SARS冠状病毒E2蛋白。
方面T-26：根据方面T-25的衍生物，其中所述融合蛋白是流感A病毒HA蛋白。
方面T-27：根据方面T-25的衍生物，其中所述融合蛋白是人呼吸道合胞病毒F蛋白。
方面T-28：根据方面T-21的衍生物，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是蛋白二聚体。
方面T-29：根据方面T-28的衍生物，其中所述二聚体是融合蛋白同型二聚体。
方面T-30：根据方面T-28的衍生物，其中所述二聚体是蛋白异源二聚体。
方面T-31：根据方面T-21的衍生物，其中所述融合蛋白特征在于融合前构象状态，其是融合蛋白单体。
方面T-32：根据方面T-28到T-31中任一项的衍生物，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面T-33：根据方面T-21的衍生物，其中所述融合蛋白特征在于融合后构象状态，其是融合蛋白三聚体。
方面T-34：根据方面T-33的衍生物，其中所述融合蛋白三聚体是发夹三聚体。
方面T-35：根据方面T-33或T-34的衍生物，其中所述融合蛋白三聚体是六螺旋束。
方面T-36：根据方面T-34的衍生物，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋。
方面T-37：根据方面T-33到T-36中任一项的衍生物，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：流感A病毒HA蛋白，流感C病毒HEF蛋白，猿猴副流感病毒5F蛋白，人副流感病毒F蛋白，新城疫病毒F蛋白，呼吸道合胞F蛋白，麻疹F2蛋白，仙台F2蛋白，埃博拉病毒gp2蛋白，莫洛尼鼠白血病病毒TM蛋白，人免疫缺陷病毒1 gp41蛋白，猿猴免疫缺陷病毒gp41蛋白，人T细胞白血病病毒1 gp21蛋白，人syncytin-2 TM蛋白，绵羊髓鞘脱落病毒TM蛋白，小鼠肝炎病毒S2蛋白和SARS冠状病毒E2蛋白。
方面T-38：根据方面T-34的衍生物，其中所述发夹三聚体包含β-结构。
方面T-39：根据方面T-33到T-35和T-38中任一项的衍生物，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：蜱媒脑炎病毒E蛋白，登革2和3病毒E2蛋白，黄热病E蛋白，西尼罗河病毒E蛋白，塞姆利基森林病毒E1蛋白和辛德毕斯E1蛋白。
方面T-40：根据方面T-34，T-36和T-38中任一项的衍生物，其中所述发夹三聚体包含α-螺旋卷曲螺旋和β-结构。
方面T-41：根据方面T-40的衍生物，其中所述融合蛋白选自由下列各项组成的组中：疱疹性口炎病毒G蛋白，狂犬病病毒G蛋白和单纯疱疹病毒gB蛋白。
方面T-42：根据方面T-41的衍生物，其中所述融合蛋白是狂犬病病毒G蛋白。
方面T-43：根据方面T-21到T-42中任一项的衍生物，其中所述衍生物针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白融合前构象状态和/或的中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面T-44：根据方面T-43的衍生物，其中所述衍生物针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或中间构象状态。
方面T-45：根据方面T-43的衍生物，其中所述衍生物针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的中间构象状态和/或融合后构象状态。
方面T-46：根据方面T-43的衍生物，其中所述衍生物针对和/或可以特异性结合于所述融合蛋白的融合前构象状态和/或融合后构象状态。
方面T-47：根据方面T-22到T-46中任一项的衍生物，其中所述表位位于由根据权利要求T-22到T-27和T-33到T-42所述的三聚体形成的腔或裂缝中或由根据方面T-28到T-32所述的二聚体形成的腔或裂缝中。
方面T-48：根据方面T-22到T-47中任一项的衍生物，其中所述表位位于所述融合蛋白的干区中。
方面T-49：根据方面T-48的衍生物，其中所述表位位于所述融合蛋白的干区中，所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含流感HA的HA1亚基的氨基酸318-322的一个或多个的区域中的表位和/或位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸47-58的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸的1-38的一个或多个的N-端区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸38-112的一个或多个的区域中的表位；位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸125-175的一个或多个的区域中的表位和位于包含流感HA的HA2亚基的氨基酸176-185的一个或多个的区域中的表位。
方面T-50：根据方面T-22到T-47中任一项的衍生物，其中所述表位位于所述融合蛋白的颈区中。
方面T-51：根据方面T-22到T-47中任一项的衍生物，其中所述表位位于所述融合蛋白的球状头区域中。
方面T-52：根据方面T-51的衍生物，其中所述球状头区域包含β-桶型结构。
方面T-53：根据方面T-51的衍生物，其中所述球状头区域包含免疫球蛋白型β-夹层结构域和β-片层结构域。
方面T-54：根据方面T-2到T-53中任一项的衍生物，其中所述表位选自由下列各项组成的组中：位于包含RSV病毒的A-抗原性位点和/或RSV病毒的F-蛋白的氨基酸255-280的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F1a位点的区域和/或包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸389的区域中的表位，位于包含RSV病毒的F-蛋白的氨基酸422-438的区域中的表位，位于包含流感病毒的H5 HA包膜蛋白的唾液酸结合位点的区域中的表位，位于包含狂犬病病毒的G-蛋白的烟碱乙酰胆碱受体(AchR)和/或神经细胞黏着分子(NCAM)结合位点的区域中的表位，位于融合蛋白的C-端区域中的表位，位于融合蛋白的N-端结构域中的表位，位于融合蛋白的融合肽中的表位或包含融合蛋白的融合肽的表位，位于融合蛋白的跨膜结构域中的表位，位于融合蛋白的α-螺旋卷曲螺旋中的表位，位于融合蛋白的β-结构中的表位，位于融合蛋白的结构域I中的表位，位于融合蛋白的结构域II中的表位和位于融合蛋白的结构域III中的表位。
方面T-55：根据方面T-54的衍生物，其中位于融合蛋白的结构域II中的表位是位于融合蛋白的结构域II的融合肽中的表位。
方面T-56：根据方面T-54的衍生物，其中位于融合蛋白的结构域III中的所述表位选自由下列各项组成的组中：位于在融合蛋白的结构域III的C端干区中的表位和位于在融合蛋白的结构域III的C-端的跨膜锚定物中的表位。
方面T-57：根据方面T-2到T-56中任一项的衍生物，其中所述病毒选自由下列各项组成的组中：DNA病毒，RNA病毒和反转录酶(RT)病毒。
方面T-58：根据方面T-57的衍生物，其中所述DNA病毒选自由下列各项组成的组中：ds DNA病毒和ssDNA病毒。
方面T-59：根据方面T-57的衍生物，其中所述RNA病毒选自由下列各项组成的组中：dsRNA病毒，正义ssRNA病毒和负义ssRNA病毒。
方面T-60：根据方面T-57的衍生物，其中所述反转录酶(RT)病毒选自由下列各项组成的组中：dsDNA-RT病毒和ssRNA-RT病毒。
方面T-61：根据方面T-2到T-60中任一项的衍生物，其中所述病毒属于选自由下列各项组成的组中的病毒家族：正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，副黏液病毒科(Paramyxoviridae)，丝状病毒科(Filoviridae)，反转录病毒科(Retroviridae)，冠状病毒科(Coronaviridae)，披膜病毒科(Togaviridae)和黄热病毒科(Flaviviridae)，杆状病毒科(Rhabdoviridae)，疱疹病毒科(Herpesviridae)，砂粒病毒科(Arenaviridae)，玻那病毒科(Bornaviridae)，布尼亚病毒科(Bunyaviridae)，嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)和痘病毒科(Poxviridae)。
方面T-62：根据方面T-61的衍生物，其中所述病毒属于选自由甲病毒属(Alphaviruses)和黄病毒属(Flaviviruses)组成的组的病毒属中。
方面T-63：根据方面T-2到T-62中任一项的衍生物，其中所述衍生物中和所述病毒。
方面T-64：根据方面T-2到T-63中任一项的衍生物，其中所述衍生物调节所述病毒的感染性。
方面T-65：根据方面T-64的衍生物，其中所述衍生物抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面T-66：根据方面T-64或T-65中任一项的衍生物，其中所述衍生物在进入前阶段中和所述病毒和/或调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面T-67：根据方面T-66的衍生物，其中所述衍生物调节、抑制和/或防止病毒进入靶宿主细胞中。
方面T-68：根据方面T-2到T-67中任一项的衍生物，其中所述衍生物诱导所述病毒的病毒体聚集。
方面T-69：根据方面T-2到T-68中任一项的衍生物，其中所述衍生物使所述病毒的病毒体结构去稳定化。
方面T-70：根据方面T-2到T-69中任一项的衍生物，其中所述衍生物抑制病毒体附着到所述病毒的靶宿主细胞上。
方面T-71：根据方面T-70的衍生物，其中所述衍生物通过调节在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面T-72：根据方面T-70或T-71的衍生物，其中所述衍生物通过抑制和/或防止在所述包膜蛋白和病毒受体之间的相互作用来抑制病毒体附着于所述病毒的靶宿主细胞。
方面T-73：根据方面T-70到T-72的衍生物，其中所述衍生物与所述包膜蛋白竞争与病毒受体的结合。
方面T-74：根据方面T-2到T-73中任一项的衍生物，其中所述衍生物抑制所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合。
方面T-75：根据方面T-74的衍生物，其中在所述靶宿主细胞膜上发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面T-76：根据方面T-74的衍生物，其中在内体或溶酶体区室中发生的所述病毒与所述病毒的靶宿主细胞的融合被抑制。
方面T-77：根据方面T-74到T-76中任一项的衍生物，其中所述衍生物防止所述所述病毒的包膜蛋白进行构象变化。
方面T-78：根据方面T-64或T-65中任一项的衍生物，其中所述衍生物在进入后阶段中和所述病毒和/或调节、抑制和/或预防所述病毒的感染性。
方面T-79：根据方面T-2到T-78中任一项的衍生物，其中所述衍生物调节、抑制和/或防止靶宿主细胞中的病毒复制。
方面T-80：根据方面T-2到T-79中任一项的衍生物，其中所述衍生物影响、抑制和/或防止病毒基因组的转录和/或翻译。
方面T-81：根据方面T-2到T-80中任一项的衍生物，其中所述衍生物影响、抑制和/或防止病毒包装和/或功能病毒体的形成。
方面T-82：根据方面T-2到T-81中任一项的衍生物，其中所述衍生物减少、抑制和/或防止新生病毒体在靶宿主细胞表面的出芽或释放。
方面T-83：根据方面T-2到T-82中任一项的衍生物，其中所述衍生物针对病毒的包膜蛋白的至少两种表位和/或可以特异性结合于病毒的包膜蛋白的至少两种表位。
方面T-84：根据方面T-83的衍生物，其中所述衍生物针对病毒的一种包膜蛋白的至少两种表位和/或可以特异性结合于病毒的一种包膜蛋白的至少两种表位。
方面T-85：根据方面T-2到T-83中任一项的衍生物，其中所述衍生物针对病毒的至少两种包膜蛋白的至少两种表位和/或可以特异性结合于病毒的至少两种包膜蛋白的至少两种表位。
方面T-86：根据方面T-2到T-83和T-85中任一项的衍生物，其中所述衍生物针对所述病毒的包膜蛋白的三个以上表位和/或可以特异性结合于所述病毒的包膜蛋白的三个以上表位。
方面T-87：根据方面T-86的衍生物，其中所述衍生物针对病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位和/或可以特异性病毒的至少两种包膜蛋白的三个以上的表位。
方面T-88：根据方面T-83到T-87中任一项的衍生物，其中所述至少两个或三个或更多表位是相同或不同的。
方面T-89：根据方面T-85或T-87中任一项的衍生物，其中所述至少两种包膜蛋白是相同或不同的。
方面T-90：根据方面T-2到T-89中任一项的衍生物，所述衍生物可以以10-5到10-12摩尔/升以下，和优选地10-7到10-12摩尔/升以下，和更优选地10-8到10-12摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面T-91：根据方面T-2到T-90中任一项的衍生物，所述衍生物可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的缔合速率(kon-速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面T-92：根据方面T-2到T-91中任一项的衍生物，所述衍生物可以以1s-1-10-6s-1，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的解离速率(koff速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面T-93：根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体的衍生物或根据方面K-1到K-19中任一项的多肽的衍生物。
方面T-94：根据方面T-93的衍生物，其可以特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面T-95：根据方面T-93到T-94中任一项的衍生物，其可以以10-5到10-12摩尔/升以下，和优选地10-7到10-12摩尔/升以下，和更优选地10-8到10-12摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合于病毒的包膜蛋白。
方面T-96：根据方面T-93到T-95中任一项的衍生物，所述衍生物可以以102M-1s-1-约107M-1s-1，优选103M-1s-1-107M-1s-1，更优选104M-1s-1-107M-1s-1，诸如105M-1s-1-107M-1s-1的缔合速率(kon-速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面T-97：根据方面T-93到T-96中任一项的衍生物，所述衍生物可以以1s-1-10-6s-1，优选10-2s-1-10-6s-1，更优选10-3s-1-10-6s-1，诸如10-4s-1-10-6s-1的解离速率(koff速率)与病毒的包膜蛋白特异性结合。
方面T-98：根据方面T-1到T-97中任一项的衍生物，所述衍生物具有分别是根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身或根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体本身，或根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体本身的半衰期至少1.5倍，优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的血清半衰期。
方面T-99：根据方面T-1到T-98中任一项的衍生物，分别与根据方面A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的相应氨基酸序列本身，根据方面H-1到H-137中任一项的纳米抗体本身，根据方面K-1到K-19中任一项的多肽，根据方面L-1到L-262中任一项的化合物或构建体本身，或根据方面G-1到G-32中任一项的单价构建体本身比较，其血清半衰期增加超过1小时，优选地超过2小时，更优选地超过6小时，如超过12小时，或甚至超过24，48或72小时。
方面T-100：根据方面T-1到T-99中任一项的衍生物，所述衍生物在人中具有至少约12小时，优选地至少24小时，更优选地至少48小时，甚至更优选地至少72小时以上；例如，至少5天(如约5到10天)，优选地至少9天(如约9到14天)，更优选地至少约10天(如约10到15天)，或至少约11天(如约11到16天)，更优选地至少约12天(如约12到18天以上)，或超过14天(如约14到19天)的血清半衰期。
方面T-101：根据方面T-1到T-100中任一项的衍生物，其是聚乙二醇化的衍生物。
方面T-102：化合物或构建体，其包含一种或多种根据方面T-1到T-101中任一项的衍生物或基本由一种或多种根据方面T-1到T-101中任一项的衍生物组成，并且任选地还包含任选地通过一个或多个接头连接的一种或多种其它基团、残基、结构部分或结合单位。
方面T-103：根据方面T-102的化合物或构建体，其中所述一个或多个其它基团、残基、结构部分或结合单位是氨基酸序列。
方面T-104：根据方面T-102或T-103的化合物或构建体，其中所述一个或多个接头，如果存在的话，是一种或多种氨基酸序列。
方面T-105：核酸或核苷酸序列，其编码根据方面T-1到T-101中任一项的衍生物或根据方面T-102到T-104中任一项的化合物或构建体。
方面T-106：组合物，其包含至少一种根据方面T-1到T-101中任一项的衍生物，根据方面T-102到T-104中任一项的化合物或构建体，或根据方面T-105的核酸或核苷酸序列。
方面U-1：方法，其用于施用有效量的针对病毒的包膜蛋白(如RSV病毒的包膜蛋白，流感病毒的包膜蛋白和/或狂犬病病毒的包膜蛋白)的根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体，和/或包含其的组合物，其中所述方法包括向肺组织施用根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或包含其的组合物的步骤。
方面U-2：根据方面U-1的方法，其中根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或包含其的组合物通过使用吸入器或鼻内递送装置或气溶胶进行施用。
方面U-3：根据方面U-1或U-2中任一项的方法，其中至少5％，优选地至少10％，20％，30％，40％，更优选地至少50％，60％，70％，和甚至更优选地至少80％以上的根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或包含其的组合物在肺组织内稳定至少24小时，优选地至少48小时更优选地至少72小时。
方面U-4：根据方面U-1到U-3中任一项的方法，其中根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或包含其的组合物以纯形式施用，即当它们以液体或干粉存在时施用。
方面U-5：根据方面U-1到U-3中任一项的方法，其中根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体和/或包含其的组合物作为这样的组合物或制剂施用到肺组织中，所述组合物或制剂包含根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体，和适合于肺递送的载体。
方面U-6：药物组合物，其包含根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体，和适合于肺递送的载体
方面U-7：药物装置，其适合于经肺递送根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体，和/或适用于使用包含其的组合物。
方面U-8：根据方面U-7的药物装置，所述药物装置是用于液体(例如，精细固体颗粒的混悬液或小滴)的吸入器，所述液体包含根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体。
方面U-9：根据方面U-7的药物装置，其是气溶胶，所述气溶胶包含根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体。
方面U-10：根据方面U-7的药物装置，其是干粉吸入器，包含以干粉形式存在的根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体。
方面U-11：用于预防和/或治疗至少一种病毒性疾病的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体，和/或包含其的药物组合物。
方面U-12：预防和/或治疗由RSV、流感和/或狂犬病导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者的肺组织施用药物活性量的根据权利要求A-1到A-109，B-1到B-28，C-1到C-16，D-1到D-6，E-1到E-14和/或F-1到F-47中任一项的氨基酸序列，根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，根据权利要求K-1到K-19中任一项的多肽，根据权利要求L-1到L-262中任一项的化合物或构建体，和/或根据权利要求G-1到G-32中任一项的单价构建体，和/或包含其的药物组合物。
方面V-1：预防和/或治疗病毒感染(如例如，RSV、流感或狂犬病的感染)的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明氨基酸序列，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的纳米抗体，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的多肽，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物。
方面V-2：多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明氨基酸序列，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的纳米抗体，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的多肽，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物用于结合和/或中和病毒的应用。
方面V-3：多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明氨基酸序列，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的纳米抗体，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的多肽，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物用于结合和/或中和病毒的不同基因型的应用。
方面V-4：多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明氨基酸序列，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的纳米抗体，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的多肽，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物用于结合和/或中和病毒的不同亚型的应用。
方面V-5：多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明氨基酸序列，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的纳米抗体，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的多肽，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物用于结合和/或中和病毒的不同毒株的应用。
方面V-6：多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明氨基酸序列，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的纳米抗体，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的多肽，多价(例如，三价，二价，三互补位，二互补位，三价二互补位)本发明的化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物用于结合和/或中和病毒的一种或多种逃避突变型的应用。
方面V-7：根据方面V-1到V-6中任一项的方法或应用，其中所述多价氨基酸序列，所述多价纳米抗体，所述多价多肽，和/或所述多价化合物或构建体是二价的。
方面V-8：根据方面V-1到V-7中任一项的方法或应用，其中所述多价氨基酸序列，所述多价纳米抗体，所述多价多肽，和/或所述多价化合物或构建体是二互补位的。
方面V-9：根据方面V-1到V-6中任一项的方法或应用，其中所述多价氨基酸序列，所述多价纳米抗体，所述多价多肽，和/或所述多价化合物或构建体是三价的。
方面V-10：根据方面V-1到V-6和/或V-9中任一项的方法或应用，其中所述多价氨基酸序列，所述多价纳米抗体，所述多价多肽，和/或所述多价化合物或构建体是三互补位的。
方面V-11：根据方面V-1到V-10中任一项的方法或应用，其中所述多价氨基酸序列，多价纳米抗体，多价多肽，多价化合物或构建体和/或包含其的药物组合物根据权利要求U-1到U-5和/或U-11到U-12任一项中的方法进行施用。
方面V-12：预防和/或治疗由RSV病毒导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体和/或包含其的药物组合物。
方面V-13：根据方面V-12的方法，其中所述多价化合物或构建体选自表A-2(SEQID NO’s：2382-2415和3584-3587)，表A-5(SEQ ID NO’s：2641-2659和2978-2988)，表A-9(SEQ ID NO’s：2996-2998)或表A-10(SEQ ID NO’s：3016-3056和3588-3591)。
方面V-14：根据方面V-12或V-13中任一项的方法，其中对由一种或多种RSV逃避突变型引起的感染进行治疗。
方面V-15：根据方面V-14的方法，其中所述逃避突变型是特异于抗原性位点II的逃避突变型。
方面V-16：根据方面V-14的方法，其中所述逃避突变型是特异于抗原性位点IV-VI的逃避突变型。
方面V-17：根据方面V-14的方法，其中所述逃避突变型是特异于抗原性位点II和特异于抗原性位点IV-VI的逃避突变型。
方面V-18：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物用于结合和/或中和RSV的一种或多种不同的逃避突变型的应用。
方面V-19：根据权利要求V-18的应用，其中所述逃避突变型是特异于抗原性位点II的逃避突变型。
方面V-20：根据权利要求V-18的应用，其中所述逃避突变型是特异于抗原性位点IV-VI的逃避突变型。
方面V-21：根据权利要求V-18的应用，其中所述逃避突变型是特异于抗原性位点II和抗原性位点IV-VI的逃避突变型。
方面V-22：根据中方面V-12或V-13任一项的方法，其中治疗由RSV的一种或多种毒株导致的感染。
方面V-23：根据方面V-22的方法，其中所述RSV毒株是Long。
方面V-24：根据方面V-22的方法，其中所述RSV毒株是A-2。
方面V-25：根据方面V-22的方法，其中所述RSV毒株是B-1。
方面V-26：根据方面V-12到V-13中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和RSV毒株Long和A-2
方面V-27：根据方面V-12到V-13中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和RSV毒株Long和B-1。
方面V-28：根据方面V-12到V-13中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和RSV毒株B-1和A-2。
方面V-29：根据方面V-12到V-13中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和RSV毒株Long，A-2和B-1。
方面V-30：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物用于结合和/或中和RSV的不同的毒株的应用。
方面V-31：根据方面V-30的应用，其中所述RSV的毒株是Long和A-2。
方面V-32：根据方面V-30的应用，其中所述RSV的毒株是Long和B-1。
方面V-33：根据方面V-30的应用，其中所述RSV的毒株是A-1和B-1。
方面V-34：根据方面V-30的应用，其中所述RSV的毒株是Long，A-2和B-1。
方面V-35：预防和/或治疗由流感导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的根据权利要求H-1到H-137中任一项的纳米抗体，或根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物。
方面V-36：根据方面V-35的方法，其中所述多价化合物或构建体选自表A-4(SEQID NO’s：2423-2426和2428-2430)。
方面V-37：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中所述纳米抗体是202-C8(SEQ ID NO：138)。
方面V-38：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中所述化合物或构建体是二价的。
方面V-39：根据方面V-38的方法，其中所述化合物或构建体是二价202-C8纳米抗体。
方面V-40：根据方面V-39的方法，其中所述化合物或构建体选自SEQ IDNO’s：2423和2424。
方面V-41：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中所述化合物或构建体是三价的。
方面V-42：根据方面V-41的方法，其中所述化合物或构建体是三价202-C8纳米抗体。
方面V-43：根据方面V-42的方法，其中所述化合物或构建体选自SEQ IDNO’s：2425和2426。
方面V-44：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中所述化合物或构建体是二互补位的。
方面V-45：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中所述化合物或构建体是三价二互补位的。
方面V-46：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中所述化合物或构建体是三互补位的。
方面V-47：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中所述化合物或构建体是三价三互补位的。
方面V-48：根据方面V-35或V-36中任一项的方法，其中治疗由一种或多种流感亚型引起的感染。
方面V-49：根据方面V-48的方法，其中所述流感亚型是H5N1。
方面V-50：根据方面V-48的方法，其中所述流感亚型是H1N1。
方面V-51：根据方面V-50的方法，其中所述流感亚型导致猪流感(也称为墨西哥流感)。
方面V-52：根据方面V-48的方法，其中所述流感亚型是H3N2。
方面V-53：根据方面V-35到V-52中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和H5N1和H1N1。
方面V-54：根据方面V-35到V-52中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和H5N1和H3N2。
方面V-55：根据方面V-35到V-52中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和H1N1和H3N2。
方面V-56：根据方面V-35到V-52中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和H5N1，H1N1和H3N2。
方面V-57：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体结合和/或中和流感病毒的不同亚型的应用。
方面V-58：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体用于结合和/或中和流感亚型H5N1以及流感亚型H1N1的应用。
方面V-59：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体用于结合和/或中和流感亚型H5N1以及流感亚型H3N2的应用。
方面V-60：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体用于结合和/或中和流感亚型H3N2以及流感亚型H1N1的应用。
方面V-61：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体用于结合和/或中和流感亚型H5N1，流感亚型H3N2以及流感亚型H1N1的应用。
方面V-62：预防和/或治疗由狂犬病导致的感染的方法，所述方法包括向需要所述方法的受试者施用药物活性量的根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体，和/或包含其的药物组合物。
方面V-63：根据方面V-62的方法，其中所述多价化合物或构建体选自表A-6(SEQID NO’s：2427和2663到2681)。
方面V-64：根据方面V-62或V-63中任一项的方法，其中治疗由一种或多种狂犬病病毒基因型导致的感染。
方面V-65：根据方面V-64的方法，其中治疗狂犬病基因型1。
方面V-66：根据方面V-64的方法，其中治疗狂犬病基因型5。
方面V-67：根据方面V-62到V-66中任一项的方法，其中所述多价化合物或构建体结合和/或中和狂犬病病毒基因型1和5。
方面V-68：根据方面L-9到L-262中任一项的多价化合物或构建体用于结合和/或中和狂犬病病毒的不同基因型的应用。
方面V-69：根据权利要求V-68的应用，其中所述狂犬病病毒基因型是1和5。
方面W-1：化合物或构建体，其包含免疫球蛋白的Fc部分和在所述Fc部分的每一侧偶联的一种或多种纳米抗体。
方面W-2：根据方面W-1的化合物或构建体，其中一种纳米抗体在所述Fc部分的任一侧偶联。
方面W-3：根据方面W-1的化合物或构建体，其中两种纳米抗体在所述Fc部分的任一侧偶联。
方面W-4：根据方面W-1的化合物或构建体，其中一种纳米抗体在所述Fc部分的一侧偶联，并且两种纳米抗体在所述Fc部分的另一侧偶联。
方面W-5：根据方面W-1到W-4中任一项的化合物或构建体，其中所述Fc部分衍生自选自IgG1，IgG2，IgGA，IgM和IgE的免疫球蛋白。
方面W-6：根据方面W-1到W-5中任一项的化合物或构建体，其中所述纳米抗体通过适合的接头偶联到Fc部分上。
方面W-7：根据方面W-6的化合物或构建体，其中所述接头是铰合部接头。
方面W-8：根据方面W-1到W-7中任一项的化合物或构建体，其具有如图59所示的结构。
方面W-9：多肽链构建体，其包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”纳米抗体(5)和“第二”纳米抗体(6)，其中所述第一纳米抗体(5)任选地通过适合的接头或铰链区(7)连接到所述恒定结构域(3)上，并且其中所述第二纳米抗体(6)任选地通过适合的接头或铰链区(8)连接到所述恒定结构域(4)上。
方面W-10：根据方面W-8或W-9中任一项的构建体，其中每条多肽链中的纳米抗体针对相同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-11：根据方面W-8或W-9中任一项的构建体，其中每条多肽链中的纳米抗体针对不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-12：根据方面W-1到W-7中任一项的化合物或构建体，其具有如图62所示的结构。
方面W-13：多肽链构建体，其包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”纳米抗体(5)，“第二”纳米抗体(6)，“第三”纳米抗体(10)和“第四”单一纳米抗体(13)，其中所述第一纳米抗体(5)任选地通过适合的接头(7)连接到所述第二纳米抗体(6)上，并且还任选地(并且一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接到所述恒定结构域(3)上；并且其中所述第三纳米抗体(10)，任选地通过适合的接头(12)连接到所述第四纳米抗体(13)上，并且还任选地(并且一般地)通过适合的接头或铰链区(14)连接到所述恒定结构域(4)上。
方面W-14：根据方面W-12或W-13中任一项的构建体，其中每条多肽链中的纳米抗体针对相同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-15：根据方面W-12或W-13中任一项的构建体，其中每条多肽链一侧的纳米抗体针对相同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位，并且在每条多肽链另一侧的纳米抗体针对不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-16：根据方面W-12或W-13中任一项的构建体，其中每条多肽链一侧的纳米抗体针对两种不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位，并且在每条多肽链另一侧的纳米抗体针对同样两种不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-17：根据方面W-1到W-7中任一项的化合物或构建体，其具有如图63所示的结构。
方面W-18：多肽链构建体，其包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”纳米抗体(5)，“第二”纳米抗体(6)，和“第三”纳米抗体(10))，其中所述第一纳米抗体(5)任选地通过适合的接头(7)连接到所述第二纳米抗体(6)上，并且还任选地(并且一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接到所述恒定结构域(3)上；并且其中所述第三纳米抗体(10)，任选地(并且一般地)通过适合的接头或铰链区(14)连接到所述恒定结构域(4)上。
方面W-19：根据方面W-17或W-18中任一项的构建体，其中每条多肽链中的纳米抗体针对相同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-20：根据方面W-17或W-18中任一项的构建体，其中每条多肽链一侧的纳米抗体针对相同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位，并且在每条多肽链另一侧的纳米抗体针对另一种靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-21：根据方面W-17或W-18中任一项的构建体，其中每条多肽链一侧的纳米抗体针对两种不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位，并且在每条多肽链另一侧的纳米抗体针对另一种不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位。
方面W-22：根据方面W-17或W-18中任一项的构建体，其中每条多肽链一侧的纳米抗体针对两种不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位，并且在每条多肽链另一侧的纳米抗体针对这两种不同的靶标、抗原、抗原决定簇或表位其中之一。
附图简述
图1：本发明的纳米抗体与Synagis竞争与hRSV的F-蛋白的结合。将20μl结合hRSV FTM-的周质级分与100ng/ml Synagis共同温育，如在实施例7中所述。基于与没有接受纳米抗体(Synagis+ahFcHRP)的对照比较的OD值确定结合特异性.
图2：本发明的纳米抗体与VN04-2竞争与流感H5N1的血凝素的结合。将20μl周质级分与100ng/ml VN04-2一起温育，如在实施例7中所述。基于与没有接受纳米抗体(VN04-2)的对照比较的OD值确定结合特异性。
图3：本发明的纳米抗体与IgG2a竞争与狂犬病的G-蛋白的结合。将结合狂犬病G蛋白的周质级分的稀释物与小鼠IgG2a单克隆(mab)(稀释度1/106)一起温育，如在实施例7中所述。基于与没有接受纳米抗体(Mab+DAMPO)的对照比较的OD值确定结合特异性。
图4：用纯化的抗-hRSV F蛋白纳米抗体的系列稀释物进行的结合测定法。
图5：用纯化的抗-H5HA纳米抗体的系列稀释物进行的结合测定法。
图6：本发明纯化的纳米抗体与Synagis竞争与hRSV的F-蛋白的结合。结合1.4nMhRSV FTM-的纳米抗体的系列稀释物与0.67nM Synagis竞争，如在实施例8中所述。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定结合特异性(Synagis)。条显示来自一式两份重复的标准偏差。
图7：本发明的纯化的纳米抗体与VN04-2竞争与流感H5N1的血凝素的结合。结合H5HA的纳米抗体的系列稀释物与0.67nM VN04-2竞争，如在实施例8中所述。基于与没有接受纳米抗体(VN04-2 +DAMPO)的对照比较的OD值确定结合特异性。
图8：具有位点II(结合位点Synagis残基255-280)和位点IV-VI(结合位点101F；残基422-438)的hRSV FTM-蛋白。
图9：本发明的纳米抗体与9C5竞争与hRSV的F-蛋白的结合。20ul结合hRSV FTM-的周质级分与100ng/ml 9C5竞争，如在实施例11中所述。基于与没有接受纳米抗体(9C5+Rampo)的对照比较的OD值确定结合特异。
图10：本发明的纳米抗体与101F Fab竞争与hRSV的F-蛋白的结合。结合hRSV FTM-的纳米抗体与3nM 101F Fab竞争，如在实施例11中所述。使用抗-HA-HRP检测101Fab。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定结合特异性。
图11：本发明的纳米抗体与胎球蛋白竞争与流感H5N1的血凝素的结合。10μl周质级分与胎球蛋白竞争与0.7μg/ml HA-bio的结合，如在实施例13中所述。基于与没有接受纳米抗体(HA-bio+strep)的对照比较的OD值确定结合特异性。
图12：分离的结合hRSV的纳米抗体的树形图。可以区分结合hRSV的纳米抗体的9个家族：
家族1包含下列纳米抗体：192-C10，206-11H，206-12F
家族2包含下列纳米抗体：192-A8，206-10F，206-11D，206-7E，207-9G
家族3包含下列纳米抗体：192-C4，206-6A，206-5A，206-3A，206-3D，206-4G，192-F2，206-4D，192-C6，192-H2，206-5E，206-2A，207-5D，206-3E，206-2G，206-2H，206-3C，191-D3，206-2F，207-6B，206-3F，207-1D
家族4包含下列纳米抗体：191-B9，207-9A，207-9B，207-9H，206-10C，206-10D，192-D3，206-10B，207-9D，207-11D，207-11E，206-10E，191-E4，207-1C，207-1F，207-5C，207-1E，207-4D，206-2E，206-7H，207-11F，207-9F，207-11H，192-B1，206-3B，207-11B，207-4H，192-H1，206-6D，206-7B，207-11A，207-1A，207-5B，207-4A，207-4B，207-6A，207-6D，207-1B，207-5A，207-6C，207-5E，207-6E，207-6F，207-11G
家族5包含下列纳米抗体：207-9C
家族6包含下列纳米抗体：206-7G
家族7包含下列纳米抗体：207-9E
家族8包含下列纳米抗体：206-2C
家族9包含下列纳米抗体：206-7C
图13：分离的结合hRSV的纳米抗体的CDR3序列的树形图。
图14：分离的结合H5的纳米抗体的树形图。可以区分结合H5的纳米抗体的七个家族：
家族1包含下列纳米抗体：202-B8
家族2包含下列纳米抗体：202-D5
家族3包含下列纳米抗体：202-A10，202-A12，202-E6，202-F8
家族4包含下列纳米抗体：202-G3
家族5包含下列纳米抗体：202-C8
家族6包含下列纳米抗体：202-A5，202-C2，202-F3，202-F4，202-C1，202-E5，202-H2
家族7包含下列纳米抗体：202-B10，202-D8，202-E11，202-B7，202-A9，202-H8，202-C11，202-B9，202-G8，202-D7，202-F10，202-C9，202-E7，202-G11，202-F12，202-C7
图15：分离的结合H5的纳米抗体的CDR3序列的树形图。
图16：分离的结合狂犬病的纳米抗体的树形图。可以区分结合狂犬病的纳米抗体的七个家族：
家族1包含下列纳米抗体：213-B7，213-D7
家族2包含下列纳米抗体：213-E6
家族3包含下列纳米抗体：213-H7
家族4包含下列纳米抗体：2113-D6，214-C10
家族5包含下列纳米抗体：214-A8，214-E8，214-H10
家族6包含下列纳米抗体：214-D10
家族7包含下列纳米抗体：214-F8
图17：分离的结合狂犬病的纳米抗体的CDR3序列的树形图。
图18：单价纳米抗体和对照Fabs对RSV Long LM-2的微量中和(IC50值以μM表示)，如在实施例15中所述。
图19：竞争ELISA：SynagisFab与纯化的结合RSV的纳米抗体竞争与FTM-蛋白的结合，如在实施例22中所述。
图20：单价、二价和三价纳米抗体与FTM-蛋白的结合，如在实施例24中所述。
图21A和B：单价、二价和三价构建体中和Long和B-1RSV毒株的功效，如在实施例25中所述。
图22：具有不同接头长度的二价191D3纳米抗体对RSV Long的中和，如在实施例25中所述。
图23：如在实施例26中所述的191D3(抗原性位点II)和191E4(抗原性位点IV-VI)的二互补位纳米抗体对RSV Long的中和：取向和接头长度的效果。
图24：纳米抗体RSV101对病毒的体内中和。将二价纳米抗体191-D3(RSV101)，二价纳米抗体12D2biv，帕利珠单抗(palivisumab)和PBS仅鼻内接种在小鼠中，并且在4小时后，用RSVA2毒株激发，如在实施例29中所述。提供在病毒激发后3天(图24A)和5天(图24B)，在肺的匀浆物中存在感染性病毒(pfu/肺)，关于5只小鼠的感染性病毒的平均值(pfu/肺)(图24C)。
图25：在小鼠中鼻内接种后3天(图25A)和5天(图25B)纳米抗体RSV101的存在。将PBS处理的小鼠的肺匀浆物与来自RSV101处理的小鼠，12D2biv处理的小鼠和帕利珠单抗处理的小鼠的肺匀浆物进行预温育，如在实施例30中所述。
图26A和B：用血凝素免疫后，美洲驼血清的病毒中和滴度，如在实施例33中所述。
图27A：用纯化的抗-H5HA纳米抗体的系列稀释物进行的结合测定法。
图27B：纯化的纳米抗体与胎球蛋白竞争与血凝素的结合，如在实施例13中所述。
图28：由不同的纳米抗体的单10倍稀释物中和HA假型病毒，如在实施例34中所述。
图29：由纳米抗体203-B12和203-H9中和HA假型病毒，如在实施例34中所述。
图30：由纳米抗体202-C8，203-H9和203-B12的组合中和HA假型病毒，如在实施例35中所述。
图31：单价，二价和三价纳米抗体构建体中和HA假型病毒的功效，如在实施例36中所述。
图32：纳米抗体202-C8的鼻内递送针对小鼠-适应的NIBRG-14病毒的感染和复制提供保护，如在实施例38中所述。
图33：显示关于中和纳米抗体202-C8，203-B12和203-H9的结合能力的动力学描述图。
图34：用纯化的多价抗-H5HA纳米抗体的系列稀释物进行的结合测定法(ELISA)，如在实施例40中所述。
图35：纯化的多价纳米抗体与胎球蛋竞争与血凝素(H5)的结合，如在实施例41中所述。
图36：在将单一静脉内丸剂(bolus)剂量的RSV NB2(4mg/kg)，ALX-0081(5mg/kg)和RANKL008a(5mg/kg)分别施用于雄性Wistar大鼠中后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008a的个体观察的血浆浓度-时间图。
图37：RSV NB2(i.v.4mg/kg；i.t.3.6mg/kg并调整到4mg/kg)的个体(i.v.)和平均(i.t.)观察到的血浆浓度-时间图。
图38：ALX-0081(i.v.5mg/kg；i.t.3.1mg/kg并调整到5mg/kg)的个体(i.v.)和平均(i.t.)观察到的血浆浓度-时间图。
图39：RANKL008a(i.v.5mg/kg；i.t.3.2mg/kg并调整到5mg/kg)的个体(i.v.)和平均(i.t.)观察到的血浆浓度-时间图。
图40：在将RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008a(3.2mg/kg)单一气管内施用于雄性大鼠中后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008a的平均(+SD)观察到的BALF浓度-时间图谱。
图41：经肺递送的纳米抗体在施用后至少24小时在肺中是稳定的。
图42：肺施用的纳米抗体对比静脉内施用的纳米抗体的血浆生物利用度。
图43：Kaplan Meier曲线，其显示用病毒和单价抗-狂犬病纳米抗体(212-C12和213-E6)的混合物接种的小鼠的存活比例。用病毒和PBS，mab 8-2或无关纳米抗体(191-G2＝抗-人呼吸道合胞病毒)的混合物接种对照小鼠。
图44：Kaplan Meier曲线，其显示用病毒和二价/二互补位纳米抗体的混合物接种的小鼠的存活比例。用病毒和mab 8-2或无关纳米抗体(191-G2＝抗-人呼吸道合胞病毒)的混合物接种对照小鼠。
图45：Kaplan Meier曲线，其显示在纳米抗体的鼻内施用，随后1天后有毒性的CVS-11毒株鼻内接种后，小鼠的存活比例。
图46：纳米抗体构建体的非限制性实例。
图47A和B：Kaplan Meier曲线，显示用CVS-11和1IU纳米抗体或抗体的混合物鼻内接种小鼠的存活比例。将103TCID50的剂量用在图表A的实验中，并将102TCID50的剂量用在图表B和C的实验中。
图48：Kaplan Meier曲线，其显示用病毒和二价/二互补位纳米抗体的混合物接种的小鼠的存活比例。用病毒和Mab 8-2或无关纳米抗体(RSV115；SEQ ID NO：2367)的混合物接种对照小鼠。
Fig 49：在鼻内施用二价纳米抗体RSV101后小鼠的肺匀浆物的蛋白质印迹，如在实施例55中所述。M：标记；1：pos对照(100ng NB2biv)；2-6：用NB2biv纳米抗体接种的小鼠。
图50：用浓度范围在约2μM到6nM的单价纳米抗体7B2(A)，15H8，(B)NC41(C)和浓度范围在约20nM-100pM的三价纳米抗体RSV 400(D)，RSV404(E)，RSV 407(F)和RSV 403(G)进行的对RSV Long和逃避突变型R7C2/1；R7C2/11和R7.936/4的中和测定。仅关于单价纳米抗体的数据进行曲线拟合。
图51：用混合抗-狂犬病纳米抗体(1IU 213-E6)的101.5TCID50CVS-11接种的小鼠的丙酮固定的脑涂片的免疫荧光染色。用FITC-缀合的抗-核蛋白抗体(FAT)进行的染色。A：在用混合以无关纳米抗体(192-G2)的101.5TCID50 CVS-11，7DPI的小鼠的脑；B：用混合以抗-狂犬病纳米抗体(1IU 213-E6)的101.5TCID50CVS-117DPI的小鼠的脑。
图52：Kaplan Meier曲线，其显示用102TCID50病毒和二互补位纳米抗体213E6-15GS-213H7的混合物接种的小鼠的存活比例，如在实施例50中所述。将4只对照小鼠用病毒和mab RV1C5或PBS的混合物接种。
图53：Kaplan Meier曲线，其显示在鼻内或脑内接种混合以1IU212-C12的102TCID50CVS-11后的小鼠的存活比例。
图54：显示在小鼠的肺匀浆物中的功能病毒-中和性纳米抗体的存在，如在实施例30中所述。A：8μl肺匀浆物；B：2μl肺匀浆物；C：0.5μl肺匀浆物；D：0.125μl肺匀浆物；E：0.03125μl肺匀浆物；F：0.0078μl肺匀浆物；G：0.00019μl肺匀浆物；H：0μl肺匀浆物(在PBS中稀释)。LGB1是RSV101纳米抗体构建体。LGB2是12B2biv对照纳米抗体构建体。
图55：用纳米抗体RSV101(A-C)或12B2biv(D-E)接种的小鼠的肺匀浆物的蛋白质印迹。用奥德赛红外成像系统(Odyssey Infrared Imaging system)(Licor Biosciences)扫描蛋白质印迹，并用Odyssey v3.0软件进行分析(确定浓度)。标准：50ng，20ng，10ng和5ng的在均化缓冲液中的相同纳米抗体；D3：感染后3天；D5：感染后5天；m1-m5：小鼠1-5。
图56：筛选与单克隆抗体C179竞争与流感病毒的血凝素H5的结合的纳米抗体，如在实施例57中所述。
图57：在慢病毒假型中和测定法中测试的由纳米抗体202-C8的不同多价构建体中和不同的H5变体，如在实施例36中所述。C8指纳米抗体202-C8；C8Bi(9)指具有9GS接头的二价202-C8纳米抗体(SEQ ID NO：2423)；C8Bi(15)指具有15GS接头的二价202-C8纳米抗体(SEQ ID NO：2424)；C8Tri(10)指具有10GS接头的三价202-C8纳米抗体(SEQ ID NO：2425)；C8Tri(20)指具有20GS接头的三价202-C8纳米抗体(SEQ ID NO：2426)。
图58：在慢病毒假型中和测定法中测试的由纳米抗体203-H9的不同多价构建体中和不同的H5变体，如在实施例36中所述。H9指纳米抗体203-H9；H9Bi(5)指具有5GS接头的二价203-H9纳米抗体(SEQ ID NO：2429)；H9Bi(25)指具有25GS接头的二价203-H9纳米抗体(SEQ ID NO：2430)。
图59：具有四个单可变结构域和四个恒定结构域的多肽构建体。多肽链构建体包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)和“第二”单可变结构域(6)。所述第一单可变结构域(5)任选地通过适合的接头或铰链区(7)连接到所述恒定结构域(3)上。所述第二单可变结构域(6)任选地通过适合的接头或铰链区(8)连接到所述恒定结构域(4)上。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)在一起形成Fc部分(9)。
图60：具有四个单可变结构域和四个恒定结构域的多肽构建体。多肽链构建体包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)和“第二”单可变结构域(6)。所述第一单可变结构域(5)任选地通过适合的接头(7)连接到第二单可变结构域(6)上，并且还任选地(一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接到恒定结构域上。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)在一起形成Fc部分(9)。
图61：具有六个单可变结构域和四个恒定结构域的多肽构建体。多肽链构建体包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)，“第二”单可变结构域(6)和“第三”单可变结构域(10)。所述第一单可变结构域(5)任选地通过适合的接头(7)连接到第二单可变结构域(6)上，并且还任选地(一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接到恒定结构域上。第三单可变结构域(11)任选地通过适合的接头(12)连接到第二单可变结构域(6)上。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)在一起形成Fc部分(9)。
图62：具有八个单可变结构域和四个恒定结构域的多肽链构建体。多肽链构建体包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)，“第二”单可变结构域(6)，“第三”单可变结构域(10)和第四单可变结构域(13)。所述第一单可变结构域(5)任选地通过适合的接头(7)连接到第二单可变结构域(6)上，并且还任选地(一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接到恒定结构域(3)上。第三单可变结构域(10)任选地通过适合的接头(12)连接到第四单可变结构域(13)上，并且任选地(和一般地)通过适合的接头或铰链区(14)连接到恒定结构域(4)上。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)在一起形成Fc部分(9)。
图63：具有六个单可变结构域和四个恒定结构域的多肽链构建体。多肽链构建体包含两条多肽链(1)和(2)，所述多肽链每一条包含两个恒定结构域(3)和(4)，“第一”单可变结构域(5)，“第二”单可变结构域(6)，和“第三”单可变结构域(10)。所述第一单可变结构域(5)任选地通过适合的接头(7)连接到第二单可变结构域(6)上，并且还任选地(一般地)通过适合的接头或铰链区(8)连接到恒定结构域(3)上。第三单可变结构域(10)任选地(和一般地)通过适合的接头或铰链区(14)连接到第四单可变结构域(13)上，并且任选地(和一般地)通过适合的接头或铰链区(14)连接到恒定结构域(4)上。多肽链(1)的恒定结构域(3)和(4)和多肽链(2)的相应恒定结构域(3)和(4)在一起形成Fc部分(9)。
图64：由具有不同接头长度的三价NC41纳米抗体中和RSV Long和RSV B-1毒株，如在实施例58中所述。
图65：在选定的NC41变体中引入的人源化残基的示意图。点表示存在野生型残基；字母对应于人源化残基。编号根据Kabat进行。
图66：酵母产生的纳米抗体与不同的流感毒株(见表C-57)的真实抗原的结合。关于与H5毒株的结合选择在组A和B中的克隆，而关于与H7毒株的结合选择在组C和D中的克隆。将用5μg/ml流感抗原包被的ELISA板与10μg/ml纳米抗体一起温育，随后使用抗-his6过氧化物酶缀合物检测。
图67：由单价和三价人源化的NC41变体中和hRSV Long毒株和B-1毒株。
实施例
实施例1：免疫
根据标准方案用6次hRSV FTM-(融合蛋白的膜无锚定物形式，70kDa；Corrall T.等人2007，BMC生物技术(BMC Biotechnol.)7：17)的加强对两只美洲驼(156和157)进行免疫。在第六次加强后7天和第六次加强后10天从这些动物中收集血液。
根据标准方案用6次H5血凝素(HA，A/越南(Vietnam)/1203/2004(H5)，蛋白质科学(Protein Sciences)批号3006)的加强对两只美洲驼(140和163)进行免疫。在第六次加强后10天从这些动物中收集血液。
根据标准方案用狂犬疫苗(灭活的狂犬病毒；Sanofi Pasteur MSD)的6次加强对两只美洲驼(183和196)进行免疫。在第六次加强后7天，第六次加强后17天，和第六次加强后21天从这些动物中收集血液。
实施例2：文库构建
根据生产商的说明书使用Ficoll-Hypaque由血液样本制备外周血单核细胞。接下来，由这些细胞以及由淋巴结弓形细胞抽提总RNA并用作起始材料进行RT-PCR以扩增纳米抗体编码基因片段。将这些片段克隆入源自pUC119的噬菌粒载体，所述载体包含LacZ启动子，大肠杆菌噬菌体pIII蛋白编码序列，氨苄青霉素或羧苄青霉素的耐受基因，多克隆位点和gen3前导序列。在纳米抗体编码序列的框架中，该载体编码C末端c-myc标签和(His)6标签。根据标准方法制备噬菌体并保存于4℃用于进一步的使用，制备噬菌体文库156，157，140b，163b，183和196b.
实施例3：针对hRSV的选择
hRSV是副黏液病毒科家族的成员并且是具有两种主要表面糖蛋白的包膜病毒，所述两种主要表面糖蛋白形成病毒颗粒的刺突。这些糖蛋白的其中之一(蛋白G)是介导病毒结合细胞表面的附着蛋白。另一种糖蛋白(蛋白F或融合蛋白)介导病毒和细胞膜的融合，让病毒核壳体进入细胞质。抑制由G或F糖蛋白介导的步骤阻抑感染循环的起始期并中和病毒感染性。所以，针对G或F的抗体，其分别抑制它们各自的活性，中和病毒感染性并可以保护免受hRSV感染。F蛋白是高度保守的并形成三聚体刺突，其在激活下发生构象变化。
人呼吸道合胞病毒病毒(hRSV)是婴儿和非常小的儿童中的严重下呼吸道感染(细支气管炎和肺炎)的主要原因，并在冬季月份期间引发年度流行病。该病毒还在有严重hRSV病危险的患心肺病症和/或免疫抑制疾病的老年人和成人中引发实质性疾病负担。免疫反应并不能预防重复感染。
没有现有的疫苗来防止hRSV感染。市场上现有的唯一药物产品是针对病毒糖蛋白其中之一(蛋白F)的人源化的单克隆抗体(Synagis)，其在有患严重hRSV感染极高风险的儿童中预防性地使用。Synagis限制性使用至少部分地归因于这种产品的高成本。
为了鉴定识别FTM-(该融合蛋白的膜无锚定物形式，70kDa，Corrall T.等人2007，BMC生物技术(BMC Biotechnol).7：17)的纳米抗体，使用文库156和157。关于免疫使用相同的抗原用于选择。将FTM-蛋白(25ng/孔)固定在Nunc Maxisorp ELISA板上。对照包括0μg/mlFTM-。在第一和第二轮的选择中使用胰蛋白酶和Synagis(帕立珠单抗，MedImmune，人源化的单克隆抗体，在Zhao&Sullender 2005，病毒学杂志(J.Virol.)79：3962中描述)从FTM-洗脱结合的噬菌体。使用Remicade(英利昔单抗，抗TNF；Centorcor)作为Synagis的对照。使用100摩尔过量的Synagis以便鉴定在RSV上结合位点上特异性结合的纳米抗体。用Synagis洗脱的来自第一轮选择的产出物，用于第二轮选择。
对两轮选择的产出物分析富集系数(相对于对照存在于洗脱物中的噬菌体)。基于这些参数选取最佳选择物用于进一步分析。挑取单个克隆并培养于96深孔板(1ml体积)中，并通过加入IPTG进行诱导用于纳米抗体表达。根据标准方法制备细胞周质提取物(体积：～80μl)。
实施例4：针对H5N1的选择
流感是具有两个主要表面抗原、血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的包膜病毒。流感A通过识别和结合于宿主细胞的膜结合蛋白的唾液酸受体而负责病毒附着于靶宿主细胞。
通过使用单克隆抗体-抗性突变型进行分析，已经显示中和抗体结合位点与HA的球状膜远端结构域的表面上的区域匹配(map to)。与单特异性纳米抗体、或目前使用的单克隆抗体比较，二特异性或多特异性纳米抗体可以显示增加的中和功效和可以减少逃避突变型的发生率。
在1997年香港的大规模禽流感疫情爆发(poultry outbreaks)过程中首次观察到禽流感H5N1病毒对人的感染。自从其在2003年在亚洲的再次出现，在亚洲、欧洲和非洲已经报道了277个实验室证实的人H5N1病例，其中167例已经死亡(WHO，2007年3月1日)。一般地，患有人源化的流感A病毒(A型人流感病毒)的人通常具有这样的症状，包括发烧、咳嗽、咽喉痛、肌肉痛、结膜炎，并且在严重的病例中，症状包括呼吸问题、肺炎、发烧、寒战、呕吐和头痛。与致病性流感病毒感染相关的组织损伤可以最终导致死亡。由H5N1引发的炎性级联反应被某些人称为“细胞因子风暴”，这是因为似乎由免疫系统刺激导致对身体有损伤的正向反馈过程(positive feedback process)。与更常见的流感病毒类型相比，H5N1诱导更高水平的细胞因子。高度病原性的H5N1禽流感在人中的致死率很高；WHO数据显示分类为H5N1的60％病例导致死亡。流感病毒进入抑制剂可以具有作为抗病毒、预防和局部治疗(即鼻喷雾剂)的潜在应用。这些抑制剂还可以通过阐明在针对病毒的保护性免疫反应中涉及的新表位用作在H5N1疫苗和抗病毒研究中的有用工具。
为了鉴定识别流感H5N1的血凝素(HA)的纳米抗体，使用了文库140b和163b。使用相同的抗原用于关于免疫的选择。将H5N1重组HA(A/越南(Vietnam)/1203/2004(H5N1)，蛋白质科学(Protein Sciences)批号3006)固定在Nunc Maxisorp ELISA板上。对照包括0μg/ml HA。在第一轮选择中使用胰蛋白酶，和在第二轮选择中使用胰蛋白酶和VN04-2(小鼠A型单克隆抗-H5血凝素/越南/1203/04流感病毒，Rocklnad Inc.批号200-301-975)将结合的噬菌体从HA上洗脱。将小鼠IgG用作抗体对照。使用100摩尔过量的抗体来鉴定在流感HA上的结合位点特异性结合的纳米抗体。将来自第一轮选择的产出物用于第二轮选择。
对两轮选择的产出物分析富集系数(相对于对照存在于洗脱物中的噬菌体)。基于这些参数选取最佳选择物用于进一步分析。挑取单个克隆并生长于96深孔板(1ml体积)中，并通过加入IPTG进行诱导用于纳米抗体表达。根据标准方法制备细胞周质提取物(体积：～80μl)。
实施例5：针对狂犬病的选择
狂犬病病毒是属于病毒的最大家族之一(杆状病毒科)的向神经性病毒。所述病毒由包膜围绕，在包膜中包埋着糖蛋白G。糖蛋白G负责诱导保护性免疫并包含限定毒力和致病性的不同基序。
糖蛋白G由505个氨基酸组成，并且典型的狂犬病病毒体包含约1800个这些蛋白。糖蛋白G结合细胞受体，导致病毒-受体复合物的内吞作用。糖蛋白G是病毒的免疫显性抗原，并且抗体典型地针对糖蛋白G上8个抗原性位点中的1个，其中一些在不同毒株和基因型之间是高度保守的。中和抗体通过阻断病毒蛋白与靶宿主细胞的结合来防止结合和进入靶宿主细胞。
狂犬病一直是严重的世界范围内的健康问题。每年估计有55,000个人死于狂犬病并且在接触可疑动物后有1千万人被治疗。
狂犬病病毒在人和动物中导致脑炎。所述病毒由唾液分泌，并且通过与被感染动物的紧密接触，通过咬伤、搔抓或舔舐进行传播。一旦被引入伤口中，所述病毒在肌细胞中局部复制。在潜伏几天直到数年后，病毒在外周神经中缓慢上行并通过逆行的轴突运输达到脑。随后病毒在神经元的细胞质中大量复制，脑机能障碍和死亡。一旦疾病症状发展，狂犬病是致命的。
没有关于狂犬病的治愈方法，并且一旦病毒达到中枢神经系统，患者即会死亡。目前的治疗方法是在暴露后用灭活的病毒进行接种。对于被动免疫存在两种抗体来源：人狂犬病免疫球蛋白(HRIG：Imogam，Aventis Pasteur)和马狂犬病免疫球蛋白(ERIG)。这些从接种的人或马的合并血清中纯化得到，并且在咬伤后直接施用。由于技术和经济限制，狂犬病免疫球蛋白的供应受限，并且其在世界范围内都是短缺的。免疫球蛋白可以引发范围从皮肤红斑、发烧到过敏性休克的变态反应(如在患者信息传单中所述)。不能排除被血液来源的感染性病原体污染的可能性。WHO强烈推荐应当开发更经济和更安全的备选物。
为了鉴定识别狂犬病G蛋白的纳米抗体，使用文库183和196b。将狂犬病病毒(狂犬病病毒灭活的HDCV疫苗；Sanofi Pasteur MSD)固定在Nunc Maxisorp ELISA板上。对照是0μg/ml。还将预包被的8孔条(strip)(Platelia II狂犬病板，BioRad批号355-1180)在第一轮和第二轮中用于选择。将噬菌体与100mg/ml BSA预温育，因为狂犬病疫苗包含50mg/mlHSA。在第一轮选择和第二轮选择中使用胰蛋白酶将结合的噬菌体从病毒洗脱下来。在第一轮和第二轮选择中用胰蛋白酶或小鼠单克隆MAb 8-2m或Ab 8-2，小鼠IgG2a(等.1993，疫苗(Vaccine)11：1259-1266)将结合的噬菌体从G蛋白洗脱。将小鼠IgG2a用作抗体对照。使用100摩尔过量的抗体鉴定特异性结合在狂犬病病毒的结合位点的纳米抗体。将第一轮选择的产出物用于第二轮选择。
对两轮选择的产出物分析富集系数(相对于对照存在于洗脱物中的噬菌体)。基于这些参数选取最佳选择物用于进一步分析。挑取单个克隆并生长于96深孔板(1ml体积)中，并通过加入IPTG进行诱导用于纳米抗体表达。根据标准方法制备细胞周质提取物(体积：～80μl)。
实施例6：关于结合的筛选
为了确定对病毒包膜蛋白的结合特异性，将克隆在ELISA结合测定法设置中测试。简言之，将2μg/ml FTM-或5μg/ml H5N1HA直接固定在Maxisorp微量滴定板(Nunc)上。使用来自BioRad的狂犬病G蛋白预包被板(批号355-1180)。使用在PBS中的4％Marvel封闭游离结合位点。接下来，将10μl在100μl 2％Marvel PBST中包含不同克隆的纳米抗体或单克隆噬菌体的周质提取物与固定的抗原结合。在温育和洗涤步骤后，使用兔-抗-VHH二级抗体(关于周质级分)或针对噬菌体基因3的抗-M13抗体显示纳米抗体结合。在洗涤步骤后，用HRP-缀合的山羊-抗-兔抗体检测周质级分中的纳米抗体。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定结合特异性。
(a)hRSV
噬菌体结合ELISA显示在第一轮选择和Synagis洗脱后对于文库156(61％)和157(59％)二者的结合物。
噬菌体结合ELISA显示在第一轮选择和胰蛋白酶洗脱后对于文库156(85％)和157(50％)二者的结合物。
周质级分结合ELISA显示在第二轮选择和胰蛋白酶洗脱后对于文库156(83％)和157(78％)二者的结合物。
周质级分结合ELISA显示在第二轮选择和Synagis洗脱后，对于文库156(87％)和157(68％)二者的结合物。
(b)H5N1
周质级分结合ELISA显示在第二轮选择和单克隆抗体洗脱后，对于文库140b(35％)和163b(24％)二者的结合物。
周质级分结合ELISA显示在第二轮选择和胰蛋白酶洗脱后对于文库140b(37％)和163b(33％)二者的结合物。
(c)狂犬病
周质级分结合ELISA显示在关于病毒的第二轮选择和胰蛋白酶洗脱后，文库183(67％)和196(48％)中关于狂犬病病毒的结合物。在病毒选择的周质级分中没有关于G蛋白的结合物。没有关于HSA对照的结合物。
周质级分结合ELISA显示在第二轮选择和胰蛋白酶洗脱后，文库183(50％)和196(75％)二者中对于G蛋白的结合物。
周质级分结合ELISA显示在第二轮选择和单克隆抗体洗脱后，文库196(37％)对于G蛋白的结合物。
获得的纳米抗体的序列在表A-1中给出。
获得的纳米抗体聚类在图12-17中显示。
实施例7：关于竞争的筛选
用与单克隆中和抗体竞争的纳米抗体，即关于hRSV的Synagis关于H5N1的VN04-2(如在Hanson等.2006，呼吸系统研究(Respiratory Research)7：126中所述)和针对狂犬病的纳米抗体小鼠IgG2a单克隆(如在等.1993，疫苗(Vaccine)11：1259-1266中所述)设置竞争测定法。进行棋盘(chessboard)ELISA以确定抗原的最佳包被浓度和提供IC50的抗体浓度。
简言之，将抗原固定在Maxisorp微量滴定板(Nunc)上，并使用在PBS中的4％Marvel封闭游离结合位点。接下来，将100ng/ml的SynagisVN04-2或小鼠IgG2a单克隆(mab)(稀释1/106)与20μl包含不同克隆的纳米抗体的周质提取物预温育。包含针对其他病毒包膜蛋白选择的对照周质级分。使竞争抗体与或不与纳米抗体一起结合固定的抗原。在温育和洗涤步骤后，使用HRP-缀合的山羊抗-人Fc抗体(ahFcHRP；Synagis)或HRP-缀合的驴抗-小鼠抗体(DAMPO；VN04-2和IgG2a)显示抗体结合。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定结合特异性(图1，2和3)。所有的靶标具有与中和抗体竞争的周质级分。从这些克隆中，基于它们的序列，将克隆重新克隆在衍生自pUC119的表达载体中，所述载体包含LacZ启动子，关于氨苄青霉素和羧苄青霉素的抗性基因，多克隆位点和gen3前导序列。与关于纳米抗体编码序列符合阅读框，载体编码C-末端c-myc标记和(His)6标记。产生纳米抗体，并将其通过在Talon珠上的His-标记进行纯化。显示纯化的纳米抗体结合它们各自的抗原，如在图4和5中所示。
实施例8：通过滴定纯化的纳米抗体确定竞争效率
为了确定hRSV FTM-和H5N1 HA结合的纳米抗体的竞争效率，在ELISA竞争测定法设置中测试结合测定法的阳性克隆。
简言之，将2μg/ml FTM-或2.5μg/ml HA固定在Maxisorp微量滴定板(Nunc)上并使用在PBS中的4％Marvel封闭游离结合位点。接下来，使纯化的纳米抗体系列稀释物结合抗原达30分钟，之后温育100ng/ml(0.67nM)Synagis或VN04-2。将针对其他病毒包被蛋白的无关纳米抗体用作阴性对照(针对H5N1的202用于hRSV竞争；针对hRSV的191和192用于H5N1竞争)。将结果显示在图6和7中。发现关于hRSV和H5N1的与单克隆抗体竞争的纳米抗体。
实施例9：基于细胞和动物的实验
为了研究选择的纳米抗体是否识别不同的表位，可以通过使用识别已知表位的单克隆抗体进行表位作图。可以使用的针对hRSV的抗体的实例是：
-Synagis(帕立珠单抗，MedImmune，人源化的单克隆抗体，如在Zhao &Sullender 2005，病毒学杂志(J.Virol.)79：3962中所述)，涉及在F蛋白的A抗原性位点中的表位，不与9C5竞争。
-9C5(HyTest Ltd)(如在Krivitskaia等.1999，Vopr.Virusol 44：279中所述)，中和小鼠单克隆抗体，妨碍病毒渗透进入细胞中，识别RSV F-蛋白的表位F1a，不与Synagis竞争。
-101F(WO 06/050280)，人源化的小鼠单克隆抗体，涉及包含氨基酸423-436作为最小肽的RSV F-蛋白的表位，其不与Synagis和9C5竞争。
使用针对病毒的选定的纳米抗体的体外中和测定法来研究纳米抗体的中和能力。一个实例是狂犬病病毒中和测定法，快速荧光聚焦抑制测试(RFFIT)(来自狂犬病的WHO实验室技术的标准方法，1996)，其中将标准量的游离狂犬病病毒与不同的纳米抗体稀释物进行预温育。接着，将纳米抗体-病毒混合物加在敏感的幼仓鼠肾(BHK)细胞的单层上。24小时后，将细胞固定并用绿色荧光抗-狂犬病缀合物染色以量化被感染的细胞。荧光细胞不存在显示病毒接种物的在先中和。纳米抗体制备物的中和能力参照WHO标准以国际单位(IU)/ml表示(＝从接种的人的血清纯化的抗-狂犬病IgG)。
为了研究纳米抗体对狂犬病感染的体内中和能力，使用在小鼠中的脑内接种，其中将病毒和纳米抗体直接施用在脑中。
实施例10：二价-和三价纳米抗体
与选定的纳米抗体的同源二聚体或异源二聚体相比，对于二价或三价的纳米抗体观察到增加的抗体亲抗原性和功能。其是靶病毒三聚体刺突的备选项，在所述刺突上存在不同表位或相同表位。
可获得用于构建通过Gly-Ser接头连接的三价纳米抗体的方案，所述接头具有任何需要的长度和组成。其基于使用不同组引物的不同的PCR反应(1个关于N-端，1个关于中间(如果是三价的)和1个关于C-末端VHH亚基)。还可以将不同的接头长度通过引物引入。
实施例11：筛选结合三聚体刺突蛋白的不同表位的纳米抗体
关于hRSV可获得识别FTM-蛋白的不同表位的不同单克隆抗体。为了筛选识别三个不同表位的纳米抗体，使用下列抗体或Fab片段：小鼠单克隆9C5(3ReS21，Hytest)，101FFab(WO 2006/050280)和Synagis(Medimmune)。它们都结合FTM-蛋白上的不同表位并用于与选定的纳米抗体竞争。认为9C5结合氨基酸389周围的表位，在氨基酸422-438的101F和在氨基酸255-280的Synagis(见图8)。
对于与9C5竞争，将2μg/ml FTM-蛋白包被在96孔板中，封闭，接着将20μl周质级分加入，经历30分钟，之后加入竞争剂9C5(100ng/ml)。它们竞争1小时之后加入1/5000HRP缀合的兔抗-小鼠抗体，并温育1小时。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定结合特异性。发现一些周质级分与9C5竞争，显示识别除Synagis和101F之外的其它表位(图9)。
对于与101F Fab的竞争，将hRSV FTM-蛋白以1μg/ml的浓度包被。将所述板用1％酪蛋白封闭，并以500nM起始加入纯化的纳米抗体，接着稀释1/3。将3nM的101F Fab用于竞争1小时，之后加入小鼠抗-HA(1/2000)。1小时后，加入HRP缀合的兔抗-小鼠抗体(0.65μg/ml)。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定结合特异性。发现两种纳米抗体与101FFab，NB6(191-E4)和NB4(192-H1)竞争(图10)。
实施例12：关于亲和性测量的表面等离子体共振
为了测量选定的纳米抗体的亲和性，使用表面等离子体共振。对于SensorchipCM5的预温育，将10μg/ml hRSV FTM-蛋白静置120秒。对于通过胺偶联固定，将EDC/NHS用于激活，并将乙醇胺HCl用于失活(Biacore，胺偶联试剂盒)。加入100nM Synagis接着加入100nM的纳米抗体。通过用Biacore T100软件v1.1拟合1∶1相互作用模型(Langmuir结合模型(Langmuir binding model))进行解离率的评估。将解离率和亲和性常数显示在表C-2中。NB6(191-E4)显示较高的解离率，Kd是700pM。NB2(191-D3)具有2.05nM的Kd。NB6(191-E4)已经显示结合101F表位和NB2(191-D3)结合Synagis表位。注意NB4还与Synagis竞争，并且可以因此识别不同的表位。
实施例13：靶向流感血凝素的唾液酸结合位点的纳米抗体
流感病毒上的血凝素(HA)在感染过程中结合细胞上的唾液酸。HA的唾液酸结合位点形成口袋，其在流感毒株之间是保守的。禽流感病毒的大部分HA优先识别唾液酸受体，包含与糖侧链上的半乳糖的α(2，3)连接(人病毒，α(2，6)连接)。为了增加分离中和纳米抗体的机会，可以使用功能性选择方法-鉴定与可溶性2，3唾液酸(或关于一些突变遗传漂变变体，2，6唾液酸)竞争的纳米抗体。这将关于靶向HA的唾液酸结合位点的纳米抗体进行选择。这些纳米抗体可能在中和H5N1上是最有效的。
我们已经选择了结合H5N1HA的纳米抗体。为了从这些纳米抗体中鉴定结合于血凝素上的唾液酸结合位点的纳米抗体，进行了下列实验。将胎球蛋白(来自胎牛血清，F2379，西格玛-奥尔德里奇(Sigma-Aldrich)，St.Louis，MO)包被(10μg/ml)在96孔板中，并在4℃温育过夜。将所述板在2％BSA中封闭，并接着加入0.7μg/ml生物素化的HA(HA-bio)和10μl纳米抗体(202-C2；SEQ ID NO：136，202-F3；SEQ ID NO：150，202-D5；SEQ ID NO：140，202-E5；SEQ ID NO：145，202-B7；SEQ ID NO：131，202-E7；SEQ ID NO：147，202-C8；SEQ ID NO：138，202-D8；SEQ ID NO：142，202-F8；SEQ ID NO：152，202-E11；SEQ ID NO：143)的周质级分或纯化的纳米抗体(203-B1；SEQ ID NO：2431，203-H1；SEQ ID NO：2434，203-E12；SEQ IDNO：2435，203-H9；SEQ ID NO：2445，203-B12；SEQ ID NO：2439，203-A9；SEQ ID NO：2438，203-D9；SEQ ID NO：2441，202-C8；SEQ ID NO：138，189-E2；SEQ ID NO：2448)进行竞争。在温育1小时后，加入HRP缀合的链霉抗生物素蛋白并温育1小时。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定未由周质级分识别的HA-bio的结合特异性。将周质级分和胎球蛋白结合HA-bio之间的竞争结果显示在图11中。纯化的纳米抗体结合HA的结果和在纯化的纳米抗体和胎球蛋白结合HA-bio之间的竞争结果分别显示在图27A和B中。一些纳米抗体克隆显示这样的竞争，其可指示竞争纳米抗体识别HA上的唾液酸结合位点。
实施例14.病毒感染的体外中和
为了研究在周质级分中的纳米抗体针对狂犬病病毒的体外中和，使用狂犬病病毒中和测定法，快速荧光聚焦抑制测试(RFFIT)(来自狂犬病的WHO实验室技术的标准方法，1996)。将标准量的游离狂犬病病毒与周质级分中的不同纳米抗体稀释物预温育并接着将周质级分-病毒混合物加入敏感的幼仓鼠肾(BHK)细胞的单层上。24小时后，固定细胞，将其用绿色荧光抗-狂犬病缀合物染色从而量化被感染的细胞。缺乏荧光细胞指示病毒接种体的在先中和。将纳米抗体(peri)制备物的中和能力参照WHO标准以国际单位(IU)/ml表示(＝从接种的人的血清纯化的抗-狂犬病IgG)。中和测定法显示具有中和狂犬病病毒的纳米抗体的一些周质级分(表C-1)。选择针对狂犬病G蛋白的所有中和周质级分(单克隆抗体和总的稀释物)并显示与针对狂犬病病毒并具有中和能力的小鼠单克隆IgG2a抗体的竞争。包含选择的针对灭活的病毒和G蛋白的美洲驼血清和多克隆周质级分，以及关于多克隆周质级分和单克隆周质级分的对照。仅针对G蛋白选择的多克隆和单克隆周质级分显示中和。
实施例15：hRSV感染的体外中和
将hRSV微量中和测定法用于研究选定的纯化的hRSV纳米抗体的体外中和能力。在此，将Hep2细胞以1.5x104细胞/孔的浓度接种在96-孔板的DMEM培养基中并将其在5％CO2气氛下在37℃温育24小时，所述DMEM培养基包含补充了青霉素和链霉素(分别为100U/ml和100μg/ml)的10％胎牛血清FCS。所用的病毒储液称为hRSV毒株long，Long LM-2和Long M2(交互使用)，其都指来自ATCC VR-26的病毒储液，其中的F蛋白序列对应于P12568或M22643。所述病毒储液已经从ATCC储液传代数次。证实了F-蛋白的序列与P12568相同(见实施例23)。将标准量的hRSV毒株Long与纯化的纳米抗体的系列稀释物，在50μl的总体积中在37℃预温育30分钟。将Hep2细胞的培养基用预混物(premix)置换，感染2小时，随后加入0.1ml的测定培养基。将所述测定法在补充了2.5％胎牛血清和青霉素和链霉素(分别为100U/ml和100μg/ml)的DMEM培养基中进行。将细胞在5％CO2气氛中，在37℃再温育72小时，随后将细胞用在PBS中的0.05％吐温-20洗涤2次，并单独用PBS洗涤一次，随后将细胞用在PBS中的80％冷丙酮(西格玛-奥尔德里奇(Sigma-Aldrich)，St.Louis，MO)(100μl/孔)在4℃固定20分钟，静置完全干燥。接下来，在ELISA型测定法中检测F-蛋白在细胞表面上的存在。其中，将固定的Hep2细胞用在PBS中的2％牛血清白蛋白(BSA)溶液在室温封闭1小时，接着用抗-F-蛋白多克隆兔血清(Corral等.2007，BMC生物技术(BMCBiotechnol).7：17)或Synagis(2μg/ml)温育1小时。关于检测山羊抗-兔-HRP缀合的抗体或山羊抗-人IgG，使用Fcγ片段特异性-HRP(Jackson免疫研究(Jackson ImmunoResearch)，West Grove，PA)，随后根据标准方法使ELISA显影。
分析了在以前的实施例中鉴定的15种纳米抗体组的hRSV体外中和功效。所述纳米抗体由下列4组组成：
·组1由识别F蛋白的抗原性位点II的hRSV F蛋白特异性纳米抗体(192C4；SEQ IDNO：163，191D3；SEQ ID NO：159，192F2；SEQ ID NO：167，192C6；SEQ ID NO：164，192H2；SEQID NO：169，192A8；SEQ ID NO：160，192C10；SEQ ID NO：162)组成。通过在病毒逃避突变型的F蛋白中发现的突变鉴定抗原性位点II(也称为位点A)，尽管通常发现抗原性位点II指氨基酸250-275区域，抗体典型地不能识别表示该区域的线性肽(Arbiza等.1992，遗传病毒学杂志(J.Gen.Virol.)73：2225-2234)。特异于抗原性位点II的抗体可以是中和的或不是中和的(Garcia-Barreno等.1989，病毒学杂志(J.Virol.)63：925-932)。帕利珠单抗(Synagis)是结合抗原性位点II的mAb的典型实例(Zhao和Sullender 2005，病毒学杂志(J.Virol).79：3962-3968)。将与帕利珠单抗的竞争用于指定纳米抗体的抗原性位点(见实施例7)。
·组2由识别F蛋白的抗原性位点IV-VI的hRSV F-蛋白特异性纳米抗体(191E4；SEQ ID NO：166，192B1；SEQ ID NO：161，192C10；SEQ ID NO：162)组成。通过在病毒逃避突变型的F蛋白中发现的突变鉴定抗原性位点IV-VI，并且发现该位点指氨基酸区域423-436。对于该抗原性位点，已经显示抗体可以识别线性肽(Arbiza等.1992，遗传病毒学杂志(J.Gen.Vir.)73：2225-2234)。特异于抗原性位点IV-VI的抗体可以是中和的或不是中和的(Garcia-Barreno等.1989，病毒学杂志(J.Virol.)63：925-932)。101F是结合抗原性位点IV-VI的mAb的典型实例(Wu等.2007，基因病毒学杂志(J.Gen.Virol.)88：2719-2723)。将101F与Fab的竞争用于指定纳米抗体的抗原性位点(见实施例11)。
·组3由hRSV F-蛋白特异性纳米抗体(192H1；SEQ ID NO：168，192D3；SEQ ID NO：165，192B1；SEQ ID NO：161)组成，对于所述纳米抗体抗原性位点不能被表征，这是因为纳米抗体不与101F或帕利珠单抗竞争或它们显示与101F和帕利珠单抗二者的竞争。
·作为对照，使用特异于来自流感的H5血凝素的3种纳米抗体(202A5；SEQ ID NO：128，202G3；SEQ ID NO：154，202E5；SEQ ID NO：145)。
所述中和测定法显示纳米抗体191D3，192C4和192F2可以中和RSVLong感染，其中191D3比SynagisFab和101F Fab更有效(图18)。识别抗原性位点II的其它纳米抗体不能在测试的最高浓度(3μM)抑制病毒感染。
实施例16：免疫
将两只美洲驼(212和213)用1mg RNA-灭活的RSV毒株long A(Hytest，TurkuFinland；#8RSV79)在颈内进行肌内免疫，随后以两周一次的方案用0.5mg RSV进行4次加强。将两只美洲驼(206和207)用1mg RNA-灭活的RSV毒株long A肌内免疫，在2周后用0.25mg RSV加强，随后用50μg重组hRSV FTM-NN(融合蛋白的膜无锚定物形式，70kDa：Corral等.2007；BMC生物技术(BMC Biotechnol).7：17)以两周一次的方案加强3次。对于所有的免疫，将抗原制备为油-PBS乳状液，其中Stimune作为佐剂。
对于文库构建，在第四次免疫后4天和10天，从所有的动物收集血液，而在第四次免疫后4天取淋巴结活组织检查。对于纳米克隆(Nanoclone)方法，在美洲驼206和207最后一次加强后11天收集100mL血液。
实施例17：文库构建
构建来自美洲驼206，207，212和213的免疫组织的噬菌体文库，如在实施例2中所述。噬菌体根据标准方法制备，并贮存在4℃用于进一步的应用，形成噬菌体文库206，207，212和213。
实施例18：用hRSV的F-蛋白进行纳米抗体选择
为了鉴定识别RSV的融合蛋白的纳米抗体，使用文库156，157，206，207，212和213关于FTM-NN(Long融合蛋白的膜无锚定物形式，70kDa，；Corral T.等.2007，BMC生物技术(BMC Biotechnol).7：17)进行选择，如在实施例3中所述。此外，使用灭活的hRSV毒株Long(Hytest#8RSV79)进行选择。将FTM-NN蛋白(25ng/孔)或RSV(5-50μg/孔)固定在NuncMaxisorp ELISA板上，临近具有0μg/ml抗原的对照。在第一轮选择中，使用胰蛋白酶，Synagis(帕利珠单抗，人源化的单克隆抗体，在Zhao和Sullender 2005，病毒学杂志(J.Virol).79：396中所述)，或101F Fab(WO06/050280，人源化的单克隆抗体)将结合的噬菌体从FTM-NN洗脱。将来自用Synagis或101F Fab洗脱的第一轮选择的产出物用于第二轮选择，使用Numax Fab(Motavizumab或MEDI-524，从帕利珠单抗衍生的第三代人源化的单克隆抗体产物；WO 06/050166)，Synagis或101F Fab进行洗脱。将Remicade(英利昔单抗，抗-TNF)用作Synagis的对照，而将Omnitarg Fab(抗-Her2；PCT/EP2008/066363)用作Numax Fab和101F Fab的对照。使用100摩尔过量的SynagisNumax Fab或101F Fab鉴定特异性结合RSV F-蛋白上的抗原性位点II或IV-VI表位的纳米抗体。为了获得特异于抗原性位点IV-VI的纳米抗体，使用两种生物素化的肽进行第二轮选择：首先，包含F-蛋白的422-436残基的肽(Long)(Abgent，San Diego，CA)，其涵盖101F结合表位(Wu等.2007，遗传病毒学杂志(J.Gen.Virol.)88：2719-2723)，其次，Mab19的表位的肽模拟物(HWSISKPQ-PEG4-K-生物素)(Chargelegue等.1998，病毒学杂志(J.Virol).72：2040-2056)。
对两轮选择的产出物分析富集系数(相对于对照存在于洗脱物中的噬菌体)。基于这些参数选取最佳选择物用于进一步分析。挑取单个克隆并生长于96深孔板(1ml体积)中，并通过加入IPTG进行诱导用于纳米抗体表达。根据标准方法制备细胞周质提取物(体积：～80μl)。
对于在RSV中和测定中测试选定的克隆，将来自10ml培养物的周质提取物通过使用IMAC PhyTips(Phynexus Inc，San Jose，CA)部分纯化。在此，将800μl的周质提取物加载到用固定的金属亲和层析树脂预先填充的Phytips 200+柱上，随后在30μl的0.1M甘氨酸-HCl/0.15M NaCl(pH3)中洗脱His-标记的纳米抗体，随后将洗脱物用5μl的0.5M Tris-HClpH8.5中和。
实施例19：使用纳米克隆技术用RSV的FTM-NN进行纳米抗体选择
根据生产商的说明书，使用Ficoll-Hypaque从血液样品制备外周血单核细胞(PBMCs)。通过FACS分选从PBMCs分离在它们的表面上表达重链抗体的抗原特异性B-细胞(对于Nanoclone技术的描述，参见WO06/079372)。在此，将FTM-NN蛋白用Alexa Fluor 488染料(Invitrogen，Carlsbad，CA；cat.nr.A20000)进行标记，并随后根据生产商的说明书脱盐以去除残余的未缀合的Alexa Fluor 488染料。
将美洲驼的免疫前(背景对照)和免疫的PBMC用荧光染料缀合的IgG1(常规重+轻链免疫球蛋白)，IgG2-和IgG3(重链免疫球蛋白种类)特异性小鼠单克隆抗体，荧光标记的DH59B抗体(CD172a)(VMRD，Inc.Pullman，WA；批号DH59B；Davis等.1987，Vet.Immunol.Immunopathol.15：337-376)和Alexa 488标记的抗原进行染色。包含TOPRO3作为活/死细胞鉴别染料。对IgG1+B-淋巴细胞，单核细胞，嗜中性粒细胞和死细胞进行门输出(gated out)，并因此从分选中被排斥。抗原-特异性(A488+)IgG2-或IgG3阳性B细胞是被分别分选到包含RT-PCR缓冲液的单独PCR板孔中的单个细胞。
对于美洲驼206，获得IgG2/IgG3阳性活细胞总量的1.9％抗原阳性细胞(1.0％，在免疫前的参照样品中)，对于美洲驼207，获得4.2％阳性细胞(0.7％，在免疫前的参照样品中)。通过单细胞RT-PCR和巢式PCR直接从这些B-细胞中扩增重链可变区基因。随后，将PCR产物克隆到衍生自pUC119的TOPO-适应的表达载体中，所述载体包含LacZ启动子，关于氨苄青霉素或羧苄青霉素的抗性基因，多克隆位点和gen3前导序列。与纳米抗体编码序列符合阅读框地，所述载体编码C-端c-my标记和(His)6标记。通过高通量的电穿孔，将得到的构建体转化到TOP10大肠杆菌(Escherichia coli)细胞中。将单一克隆培养在96深孔板上(1ml体积)并通过加入IPTG诱导进行纳米抗体表达。通过渗压休克制备周质提取物(体积：～80μl)，并在结合ELISA中分析与FTM-的结合，如在实施例6中所述。总而言之，在52个克隆的VHHs中获得8种阳性FTM-NN结合物(4种来自美洲驼206，4种来自美洲驼207)。
实施例20：筛选结合抗原性位点II或IV-VI的纳米抗体
使用Alphascreen测定法(Perkin Elmer；Waltham，MA)(Garcia-Barreno等.1989，病毒学杂志(J.Virol).63：925-932)，分析包含单一纳米抗体的周质提取物对抗原性位点II或IV-VI的结合。在该设置中，FTM-NN同时结合Synagis和101F的Fabs，允许检测干扰各个抗原性位点II和IV-VI的每一种的结合的纳米抗体。在此，将周质提取物加入FTM-NN蛋白(0.3nM)中并温育15分钟。随后，加入生物素化的Fab Synagis(0.3nM)和Fab 101F缀合的受体珠(10μg/ml)，并将该混合物温育1小时。随后，加入链霉抗生物素蛋白包被的供体珠(10μg/ml)，温育1小时后，在Envision微板阅读器上阅读所述板。将周质提取物稀释25倍，其大致对应40nM的最终浓度。通过滴定Synagismabs 18B2(Argene，Varilhes，法国；18042 N1902)和2F7(Abcam，剑桥，UK；ab43812)的已知竞争剂来验证该测定法。此外，分析SynagisFab，Numax Fab，和101F Fab，其中Numax Fab具有最低的IC50值(8.6E-11M)，其后是SynagisFab(5.97E-10M)和101F Fab(1.12E-9M)。对于筛选周质提取物(在1/25稀释)，使用Numax Fab(40nM)和101F Fab(40nM)作为阳性对照，同时将不相关的周质提取物作为阴性对照。将这样的克隆鉴定为击中(hit)，所述克隆相对于阴性对照，在Alphascreen中干扰超过75％的与FTM-NN蛋白的结合。总而言之，在来自所有6只美洲驼的1856个克隆中鉴定了341个击中，但是大部分来自美洲驼206和207。此外，在获自纳米克隆选择的8个克隆中，3个克隆显示竞争。
将竞争剂的正确抗原位点(II或IV-VI)通过生物素化的SynagisFab(2nM)或生物素化的101F Fab(3nM)与FTM-_NN蛋白(1μg/ml)的结合的竞争ELISA，进行去褶积。所述方案基本与实施例7中所述相同，具有下列改进。将周质提取物稀释1/10并与生物素化的Fab混合，之后与固定的FTM-NN蛋白结合。通过Extravidin-HRP缀合的二级抗体(西格玛-奥尔德里奇(Sigma-Aldrich)，St.Louis，MO；批号E2886)进行检测。
对所有的击中进行序列分析，并将其根据它们的CDR3序列分类为各个家族。总而言之，133个独特序列来自美洲驼206，207，212和213，其被分类为34个不同的家族(表C-4)。仅将包含15个独特序列的6个家族分类为结合抗原性位点II。所有余下的克隆是结合抗原性位点IV-VI。8种序列是在针对hRSV的结合ELISA中鉴定的非竞争结合物。此外，5个新家族从文库156和157中被鉴定，其中一个被鉴定为结合抗原性位点II，余下的被鉴定为结合抗原性位点IV-VI。此外，鉴定了以前鉴定的来自美洲驼156和157的家族的新家族成员。
实施例21：筛选RSV中和纳米抗体
从所有的6个hRSV文库中，在微量中和测定法中将163个独特序列(鉴定的160个来自噬菌体文库，3个来自纳米克隆)作为部分纯化的蛋白分析其关于RSV Long中和能力。使用固定体积的Phytips纯化的纳米抗体(20μl)，基本如在实施例15中所述进行筛选。使用Synagis(2μg/ml)，随后山羊抗-人IgG，Fcγ片段特异性-HRP(Jackson免疫研究(JacksonImmunoResearch)，West Grove，PA)检测Hep2细胞表面上的F-蛋白。
除了在筛选中作为阳性对照的前面鉴定的RSV中和纳米抗体LG191D3和LG192C4，5个新的抗原性位点II克隆显示强烈的RSV Long中和活性：1E4(也称为207D1；SEQ ID NO：211)，新鉴定的家族成员：191D3(SEQ ID NO：159)，7B2(SEQ ID NO：364)，NC23(SEQ ID NO：380)，和相同的家族的两个成员15H8(SEQ ID NO：371)和NC41(SEQ ID NO：372)(表A-1，C-4)。抗原性位点IV-VI特异性纳米抗体没有一个显示关于hRSVLong LM-2毒株超过非常弱的中和活性。
实施例22：构建、生产和表征hRSV纳米抗体
表达5种选自上述筛选的新的中和纳米抗体(1E4，7B2，15H8，NC23和NC41)以及两种抗原性位点IV-VI纳米抗体(NC39；SEQ ID NO：359，15B3；SEQ ID NO：286)，将其进行纯化并且进一步表征。另外，将编码序列重新克隆在衍生自pUC119的表达载体中，所述载体包含LacZ启动子，卡那霉素抗性基因，多克隆位点和OmpA信号肽序列。与纳米抗体编码序列符合阅读框地，所述载体编码C-端c-myc标记和(His)6标记。
在1L体积的培养物中，在大肠杆菌TG-1细胞中表达c-myc，His6-标记的蛋白。通过加入1mM IPTG诱导表达，并使其在37℃继续3小时。在离心细胞培养物后，通过冻融沉淀物和在dPBS中重悬来制备周质提取物。将这些提取物用作起始物质进行使用Histrap FF粗柱(GE healthcare，Uppsala，Sweden)的固定金属亲和层析法(IMAC)。用250mM咪唑将纳米抗体从所述柱上洗脱，并随后脱盐到dPBS中。
所有的纯化纳米抗体在针对FTM-NN蛋白和针对hRSV的结合ELISA中显示与F-蛋白的结合。在表C-5中显示关于hRSV结合的结果。简言之，将1μg/ml FTM-NN或5μg/ml hRSV(Hytest Turku，芬兰)直接固定在Maxisorp微量滴定板上。将游离结合位点用1％酪蛋白封闭。使纯化的纳米抗体的系列稀释物结合所述抗原达1小时。使用兔抗-VHH二级抗体显示纳米抗体结合，并最终用HRP-缀合的山羊-抗-兔抗体进行检测。基于与无关纳米抗体对照比较的OD值确定结合特异性。
为了确定纯化的纳米抗体的精确结合亲和性，使用关于FTM-NN蛋白的表面等离子体共振分析进行动力学分析，随后进行在实施例12中所述的方法。将结果显示在表C-5中。
在进行如实施例8和20中所述的方法后，在ELISA中确定纯化的纳米抗体与SynagisMab或生物素化的SynagisFab竞争结合于FTM-NN的能力。图19显示竞争ELISA的代表性实例，其中纯化的纳米抗体与生物素化的SynagisFab竞争结合于FTM-NN。如在表C-5中所总结，6种RSV中和纳米抗体都与Synagis竞争，尽管程度不同。纳米抗体15H8和NC41在较低的程度上竞争，这可以指示与其它纳米抗体相比，在抗原性位点II中改变的结合表位。
纳米抗体15H8和NC41还具有相对较低的亲和性(分别为16和8.1nM的KD值)。纳米抗体7B2和NC23显示在10-4(1/s)范围内的解离率，导致约1nM的KD值，证实在ELISA中观察到的与hRSV的强烈结合。纳米抗体191D3和1E4显示由于非常高的缔合率导致的低nM亲和性。抗原性位点IV-VI结合物15B3和191E4显示与具有亚-纳摩尔亲和性的组的FTM-NN的最高亲和性。
实施例23：独特hRSV毒株的体外微量中和
通过体外微量中和测定法(见实施例15)测试纯化的纳米抗体在不同类型A和BRSV毒株的中和中的功效。RSV Long(登记号P12568；ATCCVR-26；见实施例15)，RSV A-2(ATCC VR-1540；lot nr.3199840)和RSV B-1(ATCC VR-1580；lot nr.5271356)的病毒储液在Hep2细胞中制备，并随后滴定以确定用在微量中和测定法中的最佳感染剂量。在表C-5中显示不同的纯化纳米抗体的中和功效的结果。尽管识别Synagis表位的所有6种纳米抗体都可以有效地中和A型毒株Long和A-2，但是它们不能中和B-1毒株的感染或在＞1μM的浓度才能中和感染。仅当以μM浓度施用时，101F竞争剂15B3和191E4显示关于B-1毒株的非常弱的中和功效。
通过反转录酶PCR和随后的序列分析证实了不同RSV毒株的各个F-蛋白的序列。简言之，使用RNeasy少量试剂盒(Qiagen，Venlo，荷兰)从RSV-感染的Hep2细胞中分离总RNA，随后使用Superscript III反转录酶试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)制备互补DNA。使用在Kimura等.2004(抗病毒研究(Antiviral Research)61：165-171)中所述的引物，对RSVA毒株的F-蛋白进行扩增和测序。对于RSV B-1毒株F-蛋白的扩增，使用下列引物：FB1_outer_for：cttagcagaaaaccgtga(SEQ ID NO：2419)；FB1_outer_rev：tgggttgatttgggattg(SEQ ID NO：2420)；FB1_seq_1123-for：ggactgatagaggatggta(SEQ ID NO：2421)；FB1_seq_1526-rev：gctgacttcacttggtaa(SEQ ID NO：2422)。RSV B-1毒株的序列对应于登记号P13843，伴随另外的点突变Ser540Leu。关于RSV Long M2毒株的序列完全对应报道的序列(登记号M22643)。毒株RSV A-2的序列对应登记号M11486。也见表A-3。
实施例24：构建、生产和表征多价hRSV纳米抗体
通过不同长度和组成的Gly-Ser接头连接的多价纳米抗体构建体通过使用不同引物组的单独的PCR反应(1个关于N-端纳米抗体亚基，1个关于中间纳米抗体亚基(在三价的情形中)和1个关于C-端纳米抗体亚基)来产生，所述引物组包含特异性的限制性位点。类似地，产生了通过Ala-Ala-Ala接头连接的多价纳米抗体构建体。将所有的构建体克隆到衍生自pUC119的表达载体中，所述载体包含LacZ启动子、卡那霉素的抗性基因、多克隆位点和OmpA信号肽序列。与纳米抗体编码序列符合阅读框地，所述载体编码C-端c-myc标记和(His)6标记。在35Gly-Ser-接头存在于多价构建体的情形中，使用衍生自pUC119的表达载体，所述表达载体包含LacZ启动子，卡那霉素的抗性基因和OmpA信号肽序列。紧接信号肽的下游，存在用于纳米抗体插入的多克隆位点，随后是35Gly-Ser接头编码DNA序列和用于克隆第二纳米抗体序列的第二多克隆位点。与得到的纳米抗体-35Gly-Ser-纳米抗体编码序列符合阅读框地，所述载体编码C-端c-myc标记和(His)6标记。表C-6列出用RSV-特异性纳米抗体产生的多价构建体。多价构建体的序列显示在表A-2中。
对多价RSV纳米抗体构建体进行表达、纯化和进一步表征。在大肠杆菌TG1细胞中进行生产，随后通过IMAC经过His-标记从周质级分中纯化，并脱盐，基本如在实施例22中所述。对于某些三价构建体(例如，RSV401，RSV404，RSV406)，在巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)中进行生产，随后从培养基级分中纯化。在最终的步骤中对所有的三价纳米抗体进行凝胶过滤以去除可能的二价和单价降解产物。
在关于FTM-蛋白和hRSV二者的ELISA中证实纯化的多价纳米抗体与hRSV F-蛋白的结合(见实施例22)。对于大部分的纳米抗体，格式化为二价和三价构建体导致明显但是有限(多到10倍增加)的抗体亲抗原性的效果，例外是多价7B2和NC23，其显示与它们的单价对应体类似的EC50值(图20)。
实施例25：二价和三价构建体中和hRSV的功效
在关于不同RSV毒株的RSV中和测定法中评估纳米抗体构建体的功效(见实施例15和23)。相对于它们的单价对应体，二价纳米抗体结合抗原性位点II在Long的中和中显示100到1000倍的功效显著增加(即，比亲和性的增加高得多)，其中IC50值范围在50-380pM，比Numax Fab更好或类似。然而，关于RSV B-1毒株，功效增加并没有那么强，并且二聚体构建体中没有一个比Synagis更有效。令人惊奇的是，这可以通过产生三价构建体克服，如在图21中显示。与它们的单价对应体相比，具有三个纳米抗体结合抗原性位点II的三价构建体是关于RSV B-1毒株的至少1000倍更有效的中和剂。
图22举例说明与单价191D3构建体相比，接头长度对二价191D3构建体功效增加上不具有明显效果。
实施例26：二价和三价二互补位构建体中和hRSV的功效
对由一个纳米抗体结合抗原性位点II和一个纳米抗体结合抗原性位点IV-VI组成的二互补位构建体分析中和作用。二互补位-二价构建体一般显示在中和测定法中的平曲线，妨碍了IC50值的精确确定(图21，23)。尽管如此，对两个毒株的中和显著提高(见例如，RSV205；图21)。关于第二对抗原性位点II和IV-VI结合物，191D3-191E4也注意到功能上的这种显著增加。对于该对，比较不同的长度和取向，显示接头长度的缩短明显增加IC50，但是仅关于一个取向(图23)。
此外，对具有结合抗原性位点II的两种不同纳米抗体7B2和15H8的二互补位构建体分析中和作用(RSV204和206)。此外，在该情形中，尤其对于B-1毒株观察到功效的明显提高，与单体纳米抗体相比功效增加至少1000-倍。
7B2和15B3的三价二互补位构建体是Long和B-1毒株二者的更有效的中和剂，并且没有显示如关于二价二互补位构建体观察到的平曲线(图21)。
实施例27：单价纳米抗体与Long毒株的逃避突变型的反应性
选择许多如在Lopez等.1998(病毒学杂志(J.Virol).72：6922-6928)中所述并特异于抗原性位点II(R47F/4，R47F/7，RAK13/4，R7C2/11，R7C2/1)或IV-VI(R7.936/1，R7.936/4，R7.936/6，R7.432/1)或两者的组合(RRA3)的逃避突变型，测试它们与10种单价纳米抗体的反应性，所述纳米抗体包括以前鉴定为不结合抗原性位点II或IV-VI的纳米抗体191C7(EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSSGVINAMAWHRQAPGKERELVAHISSGGSTYYGDFVKGRFTISRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCHVPWMDYNRRDYWGQGTQVTVSS；SEQ ID NO：2423)。
根据Lopez等.1998(病毒学杂志(J.Virol).72：6922-6928)进行该测定法。简言之，使用被不同逃避突变型感染的HEp-2细胞的抗原提取物，在ELISA中测试在0.2μg/ml的每种纳米抗体。关于参照病毒毒株(Long野生型)毒株以及对照纳米抗体191C7的反应性对吸光度结果进行标准化。将结果显示在表C-7中。
将＞75％的反应性显示为实心黑色正方形，深色开口正方形对应于在75和50％之间的反应性，浅色开口正方形对应于25-50％的反应性，并且少于25％的反应性由空白正方形指示。一般地，发现已经在以前的实施例中鉴定为抗原性位点II结合物的纳米抗体(192C4，191D3，191F2，NC23，15H8，7B2和NC41)对抗原性位点II中的典型突变敏感，而已经鉴定为抗原性位点IV-VI结合物的其它纳米抗体实际上对在这些位点中的突变敏感。
实施例28：多价纳米抗体与Long毒株的逃避突变型的反应性
随后，对有限的逃避病毒组分析多种多价构建体以评估结合。根据Lopez等.1998(病毒学杂志(J.Virol).72：6922-6928)进行该测定法。简言之，使用被不同逃避突变型感染的HEp-2细胞的抗原提取物，在ELISA中测试每种纳米抗体，对单价纳米抗体0.1μg/ml，对二价和三价纳米抗体0.05μg/ml。关于参照病毒毒株(Long野生型)毒株以及对照纳米抗体(191E4；SEQ ID NO：166，在该特定的测定法中)的反应性对吸光度结果进行标准化。将结果显示在表C-8中。
将＞75％的反应性显示为实心黑色正方形，深色开口正方形对应于在75和50％之间的反应性，浅色开口正方形对应于25-50％的反应性，并且少于25％的反应性由空白正方形指示。明显地，与它们的单价对应体相比，与突变体病毒R7C2/11相比，多价构建体显示提高的结合。此外，二互补位构建体RSV403对任一种突变体不敏感。
实施例29：二价纳米抗体RSV101的鼻内递送
为了测试纳米抗体RSV101(SEQ ID NO：2382)体内中和病毒的能力，使用小鼠模型。在该模型中，将雌性Balb/c小鼠(9-10周龄)用溶解在50μlPBS中的100μg纯化的RSV101鼻内接种。作为不相关的纳米抗体对照，使用二价纳米抗体12D2biv。此外，一组小鼠仅接受100μg帕利珠单抗(Synagis)，并且第四组仅接受PBS。5小时后，将106感染单位的RSV A2毒株鼻内施用。在病毒感染前4天和1天，以及感染后1天和4天，将小鼠用环磷酰胺处理(第一次给药在3mg/kg；随后在2mg/kg给药，所有的给药都s.c施用)从而抑制免疫系统并象这样增加病毒复制。
在病毒激发后3和5天，杀死小鼠；取出肺，匀浆化并通过离心从组织中分离。将在无血清培养基中温育的，亚汇合的Hep-2细胞用澄清肺匀浆物的系列稀释物感染。在感染后4小时，去除培养基并将其用包含1％FCS和0.5％琼脂糖的新鲜培养基取代。感染后2-3天，去除琼脂糖盖层以用抗-RSV抗体对RSV-蚀斑进行染色。
在激发后第3天(图24A)和第5天(图24B)，从阴性对照组(PBS和12D2biv)的所有动物的肺匀浆物中回收感染性病毒(pfu/肺)。在图24C中，表示感染性病毒滴度(pfu/肺)的平均值。在RSV101和Synagis-处理组中的动物中没有一种在激发后第3天和第5天具有可检测的感染性病毒。二价纳米抗体RSV101的鼻内递送针对小鼠中的RSV毒株A2的感染和复制提供保护。
实施例30：在鼻内施用后纳米抗体RSV101的官能性
为了测试纳米抗体或帕利珠单抗抗体在接种后3和5天是否还存在于肺中，将PBS处理的小鼠的肺匀浆物与用在感染后三天或五天制备的来自实施例29中所述的不同实验组的相同体积的肺匀浆物进行预温育。
如在图25A中显示，来自PBS处理的小鼠的肺匀浆物与来自RSV101或帕利珠单抗但是非12D2biv处理的小鼠的感染后3天制备的肺匀浆物共同温育中和了在PBS处理的小鼠的肺匀浆物中存在的病毒。与此相反，用感染后5天制备的以RSV101或Synagis处理的小鼠的肺匀浆物中没有一种能够剧烈中和在PBS处理的小鼠的肺匀浆物中存在的病毒(图25B)。
总而言之，这些数据显示在施用后，功能性二价纳米抗体RSV101仍旧在肺中存在并保持功能活性达至少72小时。
为了进一步证明，将在肺匀浆物中存在的功能性病毒-中和纳米抗体，500蚀斑形成单位(pfu)的RSV与不同量的肺匀浆物共同温育。将这些混合物在室温温育90分钟。接下来，将混合物置于在96孔板上培养的HepG2细胞上。在2小时后，洗涤细胞，并且加入具有0.5％琼脂糖的生长培养基的盖层。3天后，可见RSV蚀斑(图54)。从这些数据(图54)，清楚的是，当使用8和2μl的匀浆物时，在杀死小鼠前3天接受RSV101纳米抗体的所有5只小鼠的肺匀浆物中和500pfu的RSV。在使用来自对照纳米抗体(12B2biv)处理的小鼠的肺匀浆物时没有观察到这些。
实施例31：在用RSV101鼻内预处理的小鼠的肺中没有检测到病毒RNA
在实施例29中所述的结果证实在用RSV101处理的小鼠的肺中不存在感染性病毒。然而，仍旧存在这样的可能性，即病毒具有感染的细胞，并且病毒基因组RNA被复制，其中释放非感染性病毒颗粒或没有释放病毒颗粒。为了研究这种可能性，通过qPCR来确定病毒RNA的存在。从在感染后5天制备的每种long匀浆物(1000μl)中的100μl中分离RNA。通过使用M-基因特异性引物，通过qPCR合成和量化RSV基因组RNA特异性cDNA(重复地)。相对于显示最低qRT-PCR信号(标准化为1)的肺样品计算每种肺匀浆物中的病毒基因组RNA水平。如在表C-9中显示，在用RSV101和Synagis处理的小鼠的肺中的相对病毒基因组RNA的存在与PBS或12D2biv处理的小鼠比较明显减少。
实施例32：HA-假型中和测定法
如在Temperton等.2007(Temperton NJ，Hoschler K，Major D等.关于流感H5N1-中和抗体的敏感逆转录酶病毒假型测定法(A sensitive retroviral pseudotype assayfor H5N1-neutralizing antibodies).流感和其它呼吸病毒(Influenza and OtherRespiratory Viruses)2007 1：105-112)中所述进行HA假型中和测定法。还根据Temperton等.2007进行HA假型病毒的构建和测定。
质粒和细胞系
在NIBSC(Hertfordshire，UK)构建质粒pI.18/VN1194 HA。通过PCR扩增来自A/越南/1194/04的全长HA ORF，并将其克隆到表达载体pI.18中。这种骨架质粒是基于pUC的质粒，其结合来自人巨细胞病毒的启动子和内含子A元件。
MLV和HIV gag/pol构建体已经在前面进行了描述(Besnier C，Takeuchi Y，Towers G.2002，慢病毒在猴中的限制(Restriction of lentivirus in monkeys).美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)9：11920-11925)。萤光素酶(Luc)报道构建体MLV-Luc已经在Op De Beeck A，Voisset C，Bartosch B等.2004(功能性丙型肝炎病毒包膜糖蛋白的表征(Characterization of functional hepatitis C virus envelopeglycoproteins.)病毒学杂志(J.Virol).78：2994-3002)中进行了描述。疱疹性口炎病毒包膜蛋白(VSV-G)表达载体pMDG已经在前面进行了描述(Naldini L，Blomer U，Gallay P等.1996，由慢病毒载体导致未分裂细胞的体内基因递送和稳定的转导(In vivo genedelivery和stable transduction of nondividing cell by a lentiviral vector).科学(Science)272：263-267)。在Dulbecco’s改良的eagle培养基(DMEM)中培养所有的细胞系，所述培养基具有Glutamax和高葡萄糖(Gibco，Paisley，Scotland，UK)，补充以10％胎牛血清和青霉素/链霉素，除了对HEK 293T细胞之外(其补充15％胎牛血清)。
病毒载体生产和感染靶细胞
在感染前一天将293T细胞的汇合板以1∶4分离。293T细胞的每个板用1μg gag/pol构建体，1.5□g Luc报道构建体，和1.5□g HA-或VSV-G-表达构建体，通过使用Fugene-6转染试剂进行转染。在转染后24小时，将1U的外源神经氨酸酶(Sigma，St.Louis，MO，USA)加入以诱导HA-假型颗粒从生产细胞的表面释放。在转染后48和72小时收获上清液，将其通过0.45-lm滤器过滤，并贮存在-80℃。在人293T，鹌鹑QT6，犬MDCK，猪PK15和ST-IOWA细胞上测定MLV载体滴度，并将其表示为每毫升感染单位(IU)。简言之，将细胞用载体感染，并通过Luc测定法在72小时后测定Luc滴度。将滴度表示为关于Luc的RLU。
MLV(HA)假型中和测定法
将血清样品(5μl)在56℃进行热灭活30分钟，在培养基中两倍系列稀释，并与MLV(HA)病毒体(关于Luc 10000RLU)以1∶1v/v比例混合。将纯化的纳米抗体(10或20μl)稀释到100μl，并在培养基中两倍系列稀释，与MLV(HA)病毒体(关于Luc 10000RLU)以1∶1v/v比例混合。在37℃温育1小时后，将1x104293T细胞加入96-孔平底板的每个孔中。使用PromegaBright-Glo系统(Promega，Madison，WI，USA)，根据生产商的说明书，通过发光测定法，在48小时后评估关于Luc的相对光学单位(RLU)。将IC90/IC50-中和抗体滴度确定为导致与唯一的对照假型病毒比较感染的90/50％减少的最高血清稀释度(如通过标记基因转移测量的)。关于Luc，将滴度＜100设定为阴性。
实施例33：美洲驼在用纯化的H5HA免疫后，发展高病毒-中和抗体滴度
将第一次免疫前(免疫前)和在第一次免疫后21和48天从免疫的美洲驼中取的血清在假型中和测定法中测试，如在实施例32中所述(图26)。免疫前血清没有显示中和活性，而在美洲驼140和163中分别存在25600-51200的IC90s。
实施例34：鉴定中和HA假型病毒的纳米抗体
在假型病毒中和测定法中测试数种纯化的纳米抗体，如在实施例32中所述。在图28中，显示对不同纳米抗体(202-A5；SEQ ID NO：128，202-B10；SEQ ID NO：130，202-B7；SEQID NO：131，202-C1；SEQ ID NO：134，202-C2；SEQ ID NO：136，202-C9；SEQ ID NO：139，202-D5；SEQ ID NO：140，202-E11；SEQ ID NO：143，202-E5；SEQ ID NO：145，202-E7；SEQ ID NO：147，202-F4；SEQ ID NO：151，202-F8；SEQ ID NO：152，202-G11；SEQ ID NO：153，202-G3；SEQ ID NO：154，202-G8；SEQ ID NO：155，202-A12；SEQ ID NO：127，202-E4；SEQ ID NO：2447，202-A10；SEQ ID NO：126，202-C8；SEQ ID NO：138，202-E6；SEQ ID NO：146)单十倍稀释的中和。仅纳米抗体202-C8强烈减少萤光素酶活性，指示该纳米抗体的病毒中和活性。在图29中描述对两种以上病毒中和纳米抗体203-B12(SEQ ID NO：2439)和203-H9(SEQ IDNO：2445)的鉴定。
实施例35：纳米抗体的组合
用不同病毒中和抗体的组合治疗可能导致加成或甚至协同中和作用(Zwick MB，Wang M，Poignard P，Stiegler G，Katinger H，等.2001，通过广泛中和抗体的混合物对1型人免疫缺陷病毒原代分离物的中和协同作用(Neutralization synergy of humanimmunodeficiency type 1 primary isolates by cocktails of broadly neutralizingantibodies.)病毒学杂志(J Virol.)，75：12198-12208；Laal S，Burda S，Gorny MK，Karwowska S，Buchbinder A等.1994，人单克隆抗体的组合对1型人免疫缺陷病毒的协同作用中和(Synergistic neutralization of human immunodeficiency virus type 1 bycombinations of human monoclonal antibodies.)病毒学杂志(J.Virol).68：4001-4008；Li A，Baba TW，Sodroski J，Zolla-Pazner S，Gomy MK，等.1998，人单克隆抗体和高滴度抗-人免疫缺陷的三重和四重组合对猿猴-人免疫缺陷病毒SHIV的协同中和(Synergistic neutralization of simian-human immunodeficiency virus SHIV bytriple and quadruple combinations of human monoclonal antibodies and high-titer anti-human immunodeficiency)病毒学杂志(J.Virol).72：3235-40)。然而，当在假型中和测定法中测试202-C8与203-B12，202-C8与203-H9或203-B12与203-H9的组合没有观察到这些(图30)。
实施例36：二价和三价纳米抗体
可获得用于构建通过具有任何需要的长度和组成的Gly-Ser接头连接的二价或三价纳米抗体的方案。这基于使用不同引物组的单独的PCR反应(1个关于N-端，1个关于中间(如果是三价的)并且1个关于C-端VHH亚基)。还可以通过所述引物引入不同的接头长度。
构建具有不同接头长度的来自202-C8和203-B12和203-H9的二价和三价纳米抗体(SEQ ID NO’s：2423to 2430；表A-4)。当在假型中和测定法中测试时，与单价结构单元相比，所有的二价和三价纳米抗体显示优越的中和功效(图31)。
为了测试不同纳米抗体形式针对不同H5毒株病毒的功效，使用慢病毒假型病毒。对于转染，在加入包含质粒DNA和Fugene6TM的复合物之前之前24小时，将5x106HEK-293T细胞接种，所述Fugene6TM有利于DNA运输到细胞中(如由生产商，Roche，UK所述)。将1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)gag-pol构建体pCMV-Δ8.91和萤火虫萤光素酶报道构建体(pCSLW，其中萤光素酶基因被克隆到pCSGW中，取代GFP)同时与需要的H5HA包膜构建体(pI.18-H5HA来自不同的H5进化枝)以1∶1.5∶1的μg比例分别转染。转染后24小时，将1U外源细菌NA加入每个板中以将颗粒释放到上清液中。在转染后48和72小时，通过0,45uM滤器过滤来收获病毒，并将其贮存在-80℃直到需要。中和测定法与前述MLV(HA)测定法非常类似地进行(实施例32)。
当使用慢病毒假型中和测定法针对这些不同的H5变体测试来自202-C8和203-H9，具有不同接头长度的二价和三价纳米抗体时，与单价结构单元相比，所有的二价和三价纳米抗体显示优越的中和功效(图57和58)。当某些病毒很难由单价纳米抗体中和时，所述变体有效地被二价和/或三价纳米抗体中和。
实施例37：由纳米抗体202-C8体内中和流感病毒
为了测试纳米抗体202-C8体内中和病毒的能力，使用小鼠模型。在该模型中，将雌性Balb/c小鼠(6-7周龄)用溶解在50μl PBS中的100μg纯化的202-C8鼻内接种。作为不相关的纳米抗体对照，使用RSV纳米抗体191-D3(SEQ ID NO：159)。此外，一组小鼠仅接受PBS。4小时后，1LD50的小鼠适应的NIBRG-14病毒(Temperton等.2007)被鼻内施用。所述NIBRG-14病毒包含HA(去除多碱基裂解位点)和A/越南/1194//2004(H5N1)病毒的NA。内部病毒基因是A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的内部病毒基因。
在病毒激发后4天和6天，杀死小鼠，取出肺并进行匀浆化。通过用肺匀浆物的系列稀释物感染MDCK细胞来确定病毒滴度(TCID50)。通过血细胞凝集测定法来确定细胞上清液中的病毒存在(表C-10)。根据Reed，L.J.和Muench，H.1938(估计50％终点的简单方法(Asimple method of estimating fifty percent endpoints)。美国卫生杂志(TheAmerican Journal of Hygiene)27：493-497)的方法计算滴度。如果没有检测到病毒，则键入“0”值。在每个时间点，关于每组报道几何平均值和标准偏差。
用202-C8处理的小鼠在整个实验过程中从未显示任何疾病迹象。PBS和191-D3-处理的小鼠显示临床迹象，包括皱褶的毛皮，不活泼，缩成一团的姿势(hunched posture)和抑郁。
在激发后第4天和第6天，从阴性对照组(PBS和191-D3)的所有动物的肺匀浆物中回收病毒，在激发后第4天和第6天，在202-C8处理组中没有一只动物具有可检测的病毒滴度(表C-10)
实施例38：接种后，纳米抗体202-C8在肺中的功能性
为了测试long纳米抗体202-C8在鼻内接种后，怎样在肺内保持活性，将雌性Balb/c小鼠(6-7周龄)用溶解在50□l PBS中的100□g纯化的202-C8鼻内接种。作为不相关的纳米抗体对照，使用RSV纳米抗体191-D3。此外，一组小鼠仅接受PBS。所有的小鼠鼻内接受1LD50的小鼠适应的NIBRG-14，但是病毒在纳米抗体接种后4，24或48小时给予。在病毒激发后4天，杀死小鼠，取出肺，并进行匀浆化。通过用肺匀浆物的系列稀释物感染MDCK细胞来确定病毒滴度(TCID50)。通过血细胞凝集测定法来确定细胞上清液中的病毒存在。根据Muench和Reed的方法计算滴度。如果没有检测到病毒，则键入“0”值。在每个时间点，关于每组报道几何平均值和标准偏差(表C-11)。
用202-C8预处理的小鼠在整个实验过程中从未显示任何疾病迹象。PBS和191-D3-处理的小鼠显示临床迹象，包括皱褶的毛皮，不活泼，缩成一团的姿势和抑郁并且体重减少(图32，右图)。
病毒从用对照纳米抗体191-D3或PBS预先处理的所有动物中回收。在病毒接种前4和24小时，不能在用202-C8处理的小鼠的肺中检测到病毒。在病毒接种前48小时，在用202-C8处理的7只小鼠中的3只的肺中没有检测到病毒(图32，左图和表C-11)。与在病毒接种前48小时，与在用191-D3处理的小鼠的肺中发现的病毒滴度相比，在余下4只小鼠中的病毒滴度平均减少50倍。
总而言之，这些数据显示在鼻内施用后，单价纳米抗体202-C8在肺中保持活性达至少48小时。
实施例39：用于亲和性测量的表面等离子体共振
为了测量选定的纳米抗体的亲和性，使用表面等离子体共振。将2000参照单位(RU)，H5偶联在10mM乙酸钠pH 5.5中的Sensorchip CM5上，并将其通过胺偶联(Biacore，胺偶联试剂盒(aminecoupling kit))固定。将纳米抗体的稀释物以250-62.5nM的浓度加入并且在无HA的参照液流通路(flow channel)上并接着在5μl/min流速的HA偶联的液流通路上运行。通过拟合1∶1相互作用模型(Langmuir结合模型)进行KA和KD的评估，从参照液流通路去除背景。将纳米抗体(62.5nM)的动力学曲线显示在图33中。202-C8具有10nM的KD，30nM的203-B12和15.5nM的203-H9。
实施例40.确定纯化的多价纳米抗体与H5的结合功效
为了确定于H5的结合特异性，在ELISA结合测定法中，以不同的浓度测试不同的多价纳米抗体。简而言之，将2μg/ml的H5直接固定在Maxisorp微量滴定板上(Nunc)。使用在PBS中的4％Marvel封闭游离结合位点。接下来，使在100μl 2％Marvel PBST中起始为10pM的纳米抗体稀释物(1/10)与固定的抗原结合。在温育和洗涤步骤后，使用兔-抗VHH二级抗体(VHH)显示纳米抗体结合。在洗涤步骤后，用HRP-缀合的山羊-抗-兔抗体(GARPO)检测纳米抗体。基于与针对HRSV的对照(192-C4；SEQ ID NO：163)和针对狂犬病的213-H7-15GS-213-H7(SEQ ID NO：2427)比较的OD值，确定结合特异性。与单价纳米抗体相比，多价纳米抗体显示更高的结合能力(图34)。
实施例41.多价纳米抗体封闭H5与胎球蛋白上的唾液酸的相互作用
为了研究多价纳米抗体是否能够封闭H5与胎球蛋白上的唾液酸的相互作用，使用如在实施例13中所述相同的实验设置。在maxisorb 96孔板中包被(10μg/ml)胎球蛋白(来自胎牛血清，F2379，西格玛-奥尔德里奇(Sigma-Aldrich))并在4℃温育过夜。将所述板在2％BSA中封闭，并接着加入0.7μg/ml的生物素化的HA(HA-bio)和纯化的多价纳米抗体的不同稀释物(稀释1/10，起始为500nM)用于竞争。在温育1小时后，加入HRP缀合的链霉抗生物素蛋白，并温育1小时。基于与接受对照纳米抗体(针对HRSV的192-C4和针对狂犬病的213H7-15GS-213H7)比较的OD值确定未由纯化的多价纳米抗体识别的HA-bio的结合特异性。纯化的多价纳米抗体和胎球蛋白关于结合HA-bio的竞争结果显示在图35中。与单价纳米抗体克隆比较，多价纳米抗体克隆显示增加的竞争，这可以指示识别HA上的唾液酸结合位点的竞争纳米抗体和多价纳米抗体具有封闭该位点的增加的能力。
实施例42：在单一气管内或静脉内施用后，在雄性Wistar大鼠中191D3，ALX-0081和RANKL008A的药物代谢动力学
42.1：测试项目：
测试项目描述在表C-12中。
42.2方法
动物模型
将101个雄性Wistar大鼠(约300克和11周龄)用于这项研究，毒株由德国CharlesRiver实验室繁殖。将动物保持至少6天进行适应。在最初的健康检查后，给动物称重，并通过计算化随机程序将它们分配到测试组中；仅使用健康动物。
在25℃的水浴中融解无菌测试物质，同时轻轻旋转10分钟。对于气管内给药，不需要另外的稀释。对于静脉内施用，将需要量的测试物质在无菌((Dulbecco’s改良的)磷酸缓冲盐水)中稀释到需要的浓度。在给药前4小时新鲜制备测试项目制剂。
剂量和施用路径
将不同的测试组和剂量水平在表C-13中给出。将i.v.丸剂剂量提供给尾静脉。根据每只动物目前的体重调节用于i.v.施用的测试项目的量。在用异氟烷深度麻醉后，用带有钝头不锈钢给药针的注射器气管内施用i.t.剂量。将用于i.t.施用的测试项目的量设定为100μL/动物，不管体重多少。基于动物的实际体重，从平均体重可以计算以mg/kg表示的大概剂量以与i.v.路径比较：关于RSV NB2为4mg/kg，关于ALX-0081为5mg/kg和关于RANKL008a为5mg/kg。
气管内给药的动物的平均体重是平均0.315kg(RSV NB2组)，0.317kg(ALX-0081组，0.323kg(RANKL008a组)。因为这些动物接受了100μL/动物的固定剂量，在3.6mg/kg(RSVNB2组)，3.1mg/kg(ALX-0081组)，3.2mg/kg(RANKL008a组)计算每b.w.的相应平均剂量。
血液和BALF取样和处理
在i.v.给药后，在0.05，0.25，0.5，1，2，4，6，和24小时，从RSV NB2-和LX-0081-给药的动物的尾静脉和在0.05，0.25，0.5，1，2，4，8，24，和48小时从RANKL008a-给药的动物取血样样品(约300μL)。将所有的血液样品置于融解的冰上。在取样后的约30分钟内，将血液样品在5℃离心10分钟(1500g)。将柠檬酸化的血浆在约≤-75℃，贮存在聚丙烯管中，直到在干冰上分配到Sponsor。
在气管内给药后，在0.05，0.333，1，2，4，6，和24小时自RSV NB2-给药的大鼠和LX-0081-给药的大鼠，和在0.05，0.333，1，2，4，8和24小时自用RANKL008a给药的动物，收集血液、肺和BALF(在用异氟烷深度麻醉后尸体剖检)。通过主动脉穿刺，吸取4mL血液。在取样后42分钟内，将血液样品在5℃离心10分钟(1500g)。将柠檬酸化的血浆贮存在约≤-75℃的聚丙烯管中，直到在干冰上分配到Sponsor。在去除血液后，收集肺。首先，将包含气管的肺用冰冷的DPBS漂洗并称重。接着，收集BALF。将5mL灌洗流体(DPBS)小心灌入肺中。约10秒后，使尽可能多的流体回到注射器。将BALF转移到空管中，并直接贮存在融解的冰上。重复该方法。将第二次收集的BALF加入第一次收集的BALF。记录并报道收集的BALF的体积。随后，将BALF贮存在约≤-75℃，直到在干冰上被分配到Sponsor。
在大鼠血浆或BALF中确定RSV NB2
将96孔微量滴定板(Maxisorp，Nunc，Wiesbaden，德国)在4℃，用100μL hRSV(12.5μg/mL，Hytest.Turku，芬兰)包被过夜。随后将孔抽吸，封闭(RT，1h，PBS-0.1％酪蛋白)并洗涤。在未包被(聚丙烯)板的100％大鼠血浆或BALF中制备标准、QC和制备测试样品的预稀释物，并在RT同时在600rpm摇动下温育30分钟。将样品在PBS-0.1％酪蛋白中的1/10稀释物(大鼠血浆或BALF的最终浓度是10％)转移到包被的板并在RT同时在600rpm摇动下温育1小时。在用PBS-0.05％吐温20进行三次洗涤步骤后，将所述板用多克隆兔抗-纳米抗体单克隆K1(在PBS-0.1％酪蛋白中1/2000，在室内)在RT同时在600rpm摇动下温育1小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，将100μl的辣根过氧化物酶(HRP)标记的多克隆山羊抗-兔(在PBS-0.1％酪蛋白中1/2000，DakoCytomation，Glostrup，Denmark)在RT同时在600rpm摇动下温育1小时。用100μL的3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(esTMB，SDT，稀释1/3)遮光观察20分钟。在20分钟后，用100μL 1NHCl终止颜色反应。在450nm确定吸光度，并在620nm关于背景吸光度校正。基于S型标准曲线确定每种样品的浓度。将不同测定法的量化的下限(LLOQ)和量化的上限(ULOQ)在表C-14中列出。
在大鼠血浆或BALF中确定ALX-0081
将96孔微量滴定板(Maxisorp，Nunc)在4℃，用100μL在PBS中的vWF(2.5μg/mL，Haemate P1200/500-ZLB Behring)包被过夜。随后将孔抽吸，封闭(RT，1h，PBS-0.1％酪蛋白)并洗涤。在未包被(聚丙烯)板的100％大鼠血浆或BALF中制备标准、QC，和制备测试样品的预稀释物，并在RT同时在600rpm摇动下温育30分钟。将样品在PBS-0.1％酪蛋白中的1/5稀释物(大鼠血浆或BALF的最终浓度是20％)转移到包被的板并在RT同时在600rpm摇动下温育1小时。在用PBS-0.05％吐温20进行三次洗涤步骤后，将所述板用抗-ALX0081 NBvWF12B2-GS9-12B2-BIO(在PBS-0.1％酪蛋白中1μg/ml，在室内)在RT同时在600rpm摇动下温育30分钟。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，将100μl的链霉抗生物素蛋白-HRP(在PBS-0.1％酪蛋白中1/2000，DakoCytomation)在RT同时在600rpm摇动下温育30分钟。用100μL的3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(esTMB，SDT，稀释1/3)遮光显现15分钟。在15分钟后，用100μL 1NHCl终止颜色反应。在450nm确定吸光度，并在620nm关于背景吸光度校正。基于S型标准曲线确定每种样品的浓度。将不同测定法的LLOQ和ULOQ在表C-15中列出。
在大鼠血浆或BALF中测定RANKL008a
在4℃，将96-孔微量滴定板(Maxisorp，Nunc)用100μL在PBS中红心抗生物素蛋白(neutravidin)(2μg/mL，Pierce，Rockford，IL)包被过夜。将孔抽吸并封闭。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，通过在RT同时在600rpm摇动温育100μL 1小时后，捕获生物素化的RANKL(0.5μg/mL，在PBS-0.1％酪蛋白中)，。在该温育步骤后，洗涤孔。在未包被(聚丙烯)板的100％大鼠血浆或BALF中制备标准，QC和制备测试样品的预稀释物，并在RT同时在600rpm摇动下温育30分钟。将在PBS-0.1％酪蛋白中的样品的1/10稀释物(大鼠血浆或BALF的最终浓度是10％)转移到包被的板并在RT同时在600rpm摇动下温育1小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，将板与多克隆兔抗-纳米抗体单克隆R23(在PBS-0.1％酪蛋白中1/2000，在室内)在RT同时在600rpm摇动下温育1小时。在用PBS-0.05％吐温20洗涤3次后，将100μl辣根过氧化物酶(HRP)标记的多克隆山羊抗-兔(在PBS-0.1％酪蛋白中1/5000，DakoCytomation，Glostrup，丹麦)在RT同时在600rpm摇动下温育1小时。用100μL的3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(esTMB，SDT，稀释1/3)遮光显现10分钟。在10分钟后，用100μL 1N HCl终止颜色反应。在450nm确定吸光度，并在620nm关于背景吸光度校正。基于S型标准曲线确定每种样品的浓度。将不同测定法的LLOQ和ULOQ在表C-16中列出。
非区室药物代谢动力学数据分析
使用WinNonlin专业软件5.1版本(Pharsight公司，Mountain View Califomia，USA)对所有大鼠的每种血浆和平均BALF浓度-时间图谱进行非区室药物代谢动力学数据分析(NCA)。将预先编程的200和201建模分别用于分析气管内和静脉内数据。将linear-up/log down梯形法则用于计算在浓度-时间数据下的面积。
1.3结果
RSV NB2，ALX-0081和RANKL008a的血浆浓度
将单一i.v.施用后的每种动物的观察到的血浆浓度-时间数据和在单一i.t.施用RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008a后的平均血浆浓度-时间数据(n＝4只动物/时间点；破坏性取样)显示在图36(i.v；关于所有化合物的数据)，图37(RSV NB2i.v.和i.t.数据)，图38(ALX-0081 i.v.和i.t.数据)，和图39(RANKL008a i.v.和i.t.数据)中。将个体(i.v.)血浆浓度和个体和平均血浆浓度(i.t.)二者分别列在表C-17，C-18和C-19中。
RSV NB2，ALX-0081和RANKL008a的血浆药物代谢动力学分析
将通过对RSV NB2(4mg/kg i.v.&3.6mg/kg i.t.)，ALX-0081(5mg/kg i.v.&3.1mg/kg i.t.)和RANKL008a(5mg/kg i.v.&3.2mg/kg i.t.)进行的非区室PK分析获得的基本药物代谢动力学参数综述提供在表C-20，C-21和C-22中。
使用非区室分析(NCA)获得本文讨论的PK参数。关于大鼠1和2(RSV NB2i.v.)，大鼠6(ALX-0081i.v.)和大鼠9(RANKL008a i.v.)，存在血液取样困难，并且由于有限的数据，这些动物被排除在随后的药物代谢动力学计算外。仅基于末期的两个数据点计算一些动物的末期参数。
在i.v.施用RSV NB2 4mg/kg和ALX-0081 5mg/kg后，观察到可比较的血浆PK模式(图36)。这也在关于单价RSV NB2和二价ALX-0081的类似药物代谢动力学参数中反映。关于RSV NB2-和ALX-0081-给药的大鼠，平均清除率估计在363mL/hr/kg和337mL/hr/kg。相应的平均Vss值是250mL/kg(RSV NB2)和252mL/kg(ALX-0081)。这些纳米抗体的血浆浓度仅在多达6小时才能检测到(对于RSV NB2检测极限是4ng/mL，对于ALX-0081检测极限是3.75ng/mL)，并且关于RSV NB2计算最终半衰期在0.926小时和关于ALX-0081计算最终半衰期在2.06小时。对于静脉内施用的三价RANKL008a(5mg/kg)，计算基本更低的平均清除率(9.00mL/hr/kg)和Vdss值。最终半衰期稍长(12.6小时)。这通过这样的事实解释，即RANKL008a是半衰期延长的纳米抗体(通过与ALB8成分的结合)，所述纳米抗体与大鼠白蛋白具有交叉反应性，但是相对于人血清白蛋白具有更低的亲和性。
在i.t.施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008a(3.2mg/kg)后，关于所述三种纳米抗体观察到血浆中的可比较的最终半衰期(RSV NB2：9.48hr，ALX-0081：10.5hr和RANKL008a：13.0hr)。关于RSVNB2和ALX-0081，在i.t.施用后比i.v施用后，半衰期更长。可想到的是，对于这些快速清除的化合物，吸收是限速步骤，其导致系统循环的翻转(flip-flop)动力学(即，动力学是吸收速率控制的，并且末期由自施用位点(肺)的缓慢吸收驱动)。
与i.v.施用后比较，所有的纳米抗体在i.t.施用后的暴露更低。这种得到的生物利用度关于RSV NB2(16.6kD)，ALX-0081(27.9kD)，和RANKL008a(40.9kD)分别是22.1％，13.9％，和6.9％。
对于肺局部应用(RSV NB2)，需要较高的肺暴露。可以预期更快和更完全的吸收(导致更高的生物利用度)将不会有利于肺暴露。因此，具有更高分子量的RSV纳米抗体(即，三价RSV纳米抗体)可能能够导致增加的局部(肺)暴露。
目前的数据指示对纳米抗体的系统暴露可以在气管内施用后实现，显示经肺路径作为递送纳米抗体的非侵入方法可能是可行的。明显地，具体递送制剂和/或装置的应用在经肺应用后可以明显提高生物利用度。显示生物利用度可以提高约5倍(i.t.对比气溶胶-见例如，在Patton J.，Fishburn S.，Weers J.2004的表2中，肺作为系统药物递送的入口(The Lung as a Portal of Entry for Systemic Drug Delivery)，Proc.Am.Thorac.Soc.1：338-344)。
RSV NB2，ALX-0081和RANKL008a的BALF浓度
将RSV NB2，ALX-0081和RANKL008a单一气管内施用到雄性大鼠后观察到的BALF浓度-时间模式平均值显示在图40中。将个体和平均BALF浓度分别列举在表C-23和C-24中。
三种纳米抗体在BALF中的最终半衰期仅基于最后两个数据点。值得注意的是，存在相当程度的个体间变异性，如由大的标准偏差指示(见表C-24)。在i.t.施用后，在血浆中(RSV NB2 9.48hr，ALX-0081 10.5hr和RANKL008a 13.0hr)和在BALF(RSV NB2 16.0hr，ALX-0081 9.21hr和RANKL008a 11.6hr)观察到可比较的最终半衰期，支持血浆动力学可能是吸收速率控制的概念。
在气管内施用后，在至少24小时(即，关于BALF的最后取样时间)观察到RSV NB2，ALX-0081，RANKL008a纳米抗体在BALF中的暴露。
RSVNB2，ALX-0081和RANKL008a在BALF中的量
在气管内给药后，在尸体剖检时收集支气管-肺泡灌流液(BALF)，如在前面详细描述。
在理论上，在给定时间点，在肺中纳米抗体的量可以通过使每种BALF样品的测量浓度乘以加入的DPBS的体积(10mL)获得，条件是纳米抗体被有效洗出。将这些分别计算的量和它们相应的平均值(+SD)分别在表C-25和C-26中列出。
然而，注意在BALF的回收中发生较大差异。对于某些动物，在注射10mL DPBS后，可以回收9.5mL流体，而对于其它动物，仅回收3mL。此外，由于灌洗进行2次，并且合并在一个瓶中，因此不能确定从第一次或第二次灌洗分别回收多少体积。而且，在第一次灌洗和第二次灌洗的浓度中是否存在差异也是未知的。
结果是当乘以测量的BALF浓度仅是简单的乘以10mL DPBS的理论体积时，可能发生对纳米抗体实际量的过分评价。
备选地，如果通过将每种BALF样品的测量浓度乘以BALF的实际回收体积估计纳米抗体的量，那么这可能导致当在未回收的BALF中存在显著量的纳米抗体时，对纳米抗体的实际量估计不足。
因此，纳米抗体在BALF中的实际量应该理论上包括在通过理论BALF体积或实际BALF体积计算的量之间。重要的是要注意回收的体积越大，预期的计算越精确。由于平均回收体积是平均约7mL(表C-27)，两种计算方法不应该提供非常不同的结果。基于实际回收体积的每种计算的量和平均值(+SD)分别在表C-28和C-29中列出。
通过将纳米抗体的计算量除以给药的实际量(RSV NB2：1.14mg，ALX-0081：0.985mg，RANKL008a：1.03mg)，计算剂量的回收分数。以百分比表示，将基于理论BALF体积(10mL)以及实际回收体积的剂量标准化的每个计算量和和它们相应的平均值(+SD)在表C-30到C-33中列出。
通过将纳米抗体的计算量除以给药的实际量，经过时间可以比较剂量的回收分数：通过实际和理论体积的最高平均量与剂量百分比关于RSVNB2分别是35.7％和49.5％(在20分钟后)，关于ALX-0081分别是74.0％和98.3％(在4分钟后)和关于RANKL008A分别是47.1％和67.4％(在1小时后)。因此，关于ALX-0081，几乎全部剂量分数可以在BALF中回收，而关于RSV NB2和RANKL008a，分数更低：约为剂量的50％。在给药后1小时的时间点，通过实际和理论体积的最高个体量对剂量百分比关于RSV NB2分别是76.6％和117.3％，关于ALX-0081分别是145％和182％，并且关于RANKL008a分别是84.1％和120％。如预期，可变性是可测量的。
在24小时后，与更早的时间点相比，关于所有的纳米抗体，在BALF中回收的剂量分数关于更低。对于三种测试的纳米抗体，通过理论体积，回收的平均分数范围是12.4％到16.5％，通过实际体积回收的平均分数范围是8.46％到12.5％。
42.3结论
在i.v.施用于大鼠后，关于RSV NB2和ALX-0081观察到类似的PK特征。对于RANKL008a，观察到基本更低的清除率值和更长的最终半衰期。这可以通过RANKL008a的抗-HSA纳米抗体与大鼠白蛋白的结合来解释。
目前的数据指示对纳米抗体的系统暴露可以通过气管内施用后获得，说明经肺途径作为递送纳米抗体的非侵入方法是可行的。有限的数据还显示系统生物利用度似乎随增加的分子量而减少。
在i.t.施用后，关于三种纳米抗体观察到可比较的最终半衰期。对于RSV NB2和ALX-0081，在i.t.施用后比在i.v.施用后，其半衰期更长，这说明吸收是限速步骤，因为药物从其给药位点(即肺)到循环被缓慢吸收。在血浆和在BALF中观察到可比较的最终半衰期。这种观察还增加了这样的可能性，即动力学可以是吸收速率控制的。
在气管内施用后，在至少24小时(即，关于BALF的最后一次取样时间)观察到在BALF中的RSV NB2，ALX-0081，RANKL008a纳米抗体暴露。
在气管内施用后，在至少24小时(即在气管内施用后最后一次血浆取样时间)观察对血浆中的RSV NB2，ALX-0081纳米抗体的系统暴露。在i.v.施用后，在无抗-HSA时，这两种纳米抗体在24小时不再能检测到。
图41和图42进一步举例说明实验结果。
实施例43：用抗-RSV纳米抗体构建体进一步研究
实施例43.1：-用RSV407在棉鼠(cotton rat)中的预防性研究
在该项研究中，将棉鼠用RSV中和纳米抗体构建体(RSV 407；SEQ IDNO：2415)或对照(PBS)i.m.或鼻内处理。1小时后，鼻内施用病毒RSV激发。在第4天，处死动物并在鼻和肺洗液和在鼻和肺组织中通过Q-PCR确定RSV滴度。
实施例43.2-用RSV407在棉鼠中进行治疗性研究
过去已经描述了RSV治疗性研究；例如，由Crowe及其同事(1994，Proc.Nat.Ac.Sci.；91：1386-1390)和Prince及其同事(1987，病毒学杂志(Journal ofVirology)61：1851-1854)描述。
在该研究中，将棉鼠用RSV鼻内感染。在感染后24小时，将第一组动物用RSV中和纳米抗体构建体(RSV 407)或对照(PBS)进行处理。将治疗通过鼻内或气溶胶施用施用于肺组织。在48和72小时重复治疗。在第4天，处死动物，并在鼻和肺洗液以及鼻和肺组织中通过Q-PCR确定RSV滴度。
在第二组中，治疗仅在感染后3天起始，并且在第4和第5天重复。最后，在第6天，处死动物，并且在鼻和肺洗液以及鼻和肺组织中通过Q-PCR确定RSV滴度。
实施例43.3-肺到系统
在该研究中，大鼠的肺组织通过气管内或气溶胶施用暴露于RSV中和纳米抗体(RSV407)。在施用后多到3天，在规律的时间点取血清和BAL样品。通过ELISA测量纳米抗体浓度，对样品进行RSV微量中和，如在实施例15中所述。通过组合来自ELISA和中和测定法的信息，可以确定每种样品的RSV IC50从而评估功能性RSV纳米抗体的系统生物利用度。
实施例44：筛选方法，关于被RSV B-1感染的Hep2细胞
除了在微量中和测定法中鉴定作为RSV Long毒株的有效中和剂的纳米抗体，还可以针对它们中和RSV B-1的能力筛选纳米抗体。将获自针对F-蛋白和RSV的选择，具体地获自胰蛋白酶洗脱，与101F Fab或与直链肽的竞争性洗脱的克隆(见实施例18)进行备选筛选方法，所述方法包括RSV B-1与F-蛋白的结合
作为第一个步骤，在ELISA中，对约1000种周质提取物分析与FTM_NN蛋白(1μg/ml)的结合(见实施例20)。平均将所有克隆中的44％鉴定为结合物(是背景的＞2倍)，将27％鉴定为强结合物(＞3-倍)。所有的结合物中仅10％来自美洲驼212和213。
对结合物进行与Synagis(67pM)竞争与RSV Long(10μg/ml；Hytest#8RSV79)的结合的竞争ELISA，以鉴定II类表位的克隆。使用山羊抗-人-HRP缀合的IgG(Jackson免疫研究实验室公司(Jackson ImmunoResearch Laboratories，Inc.)，批号109-035-098)来检测Synagis这种测定法导致了9个击中(表C-34)。
以类似方式，在与101F Fab的竞争ELISA中分析周质提取物从而鉴定IV-VI类表位的克隆(见实施例20)。使用抗-HA单克隆抗体(Zymed，32-6700，1389267)，随后使用抗-小鼠-HRP缀合的抗体(Dako，批号P0260)进行检测。在鉴定的90种竞争剂中，在1/100-1/1000稀释度范围进一步测试最佳的101F Fab竞争剂从而允许在克隆之间的区别(表C-34)。
作为第三个步骤，分析II类和IV-VI类表位克隆与感染了RSV B-1毒株的Hep2细胞的结合。在该测定法中，基本上按照关于中和测定法所述的方法将Hep2细胞接种到96-孔板上并且用RSV B-1毒株感染(见实施例15)。三天后，将细胞用冰冷的丙酮固定，并使用不同稀释度的周质提取物将板用在ELISA测定法中。使用抗-VHH兔多克隆抗体，随后使用山羊抗-兔-HRP缀合的抗体来检测结合Hep2-B1感染的细胞的纳米抗体，随后根据标准方法使ELISA显影。一般地，证实II类表位克隆与IV-VI类表位的克隆相比，是对于Hep2-B1细胞更弱的结合物(表C-34)。
序列分析减少竞争纳米抗体的总数。发现克隆8A1(SEQ ID NO：249)，8B10(SEQ IDNO：342)和1B2(SEQ ID NO：166)是多拷贝，其在针对Hep2B-1-感染的细胞的最强结合物中都是按等级排列的。克隆1B2与以前鉴定的191E4的序列相同。独特的序列19E2(SEQ ID NO：301)属于大家族4。在Synagis竞争剂组中，克隆19C4(也称为15H8；SEQ ID NO：371)和1G8(SEQ ID NO：2578)是最佳的RSV B-1结合物。基于与RSV long和B-1二者的结合，基于序列和基于101F竞争，从101F竞争剂中进行选择，将其作为纯化的蛋白用于进一步的分析(表C-34)。
实施例45：用狂犬病病毒免疫美洲驼
将两只美洲驼用狂犬病病毒抗原免疫，收集淋巴细胞作为病毒-特异性单链抗体mRNA的来源。免疫的美洲驼具有标识号183和196，来源：N.V.Neerhofdieren Bocholt，位置：比利时的公众健康科学研究所(Belgian Scientific Institute of Public Health)(IPH，授权号.LA1230177)的动物机构。由IPH的伦理道德委员会(Ethical Committee)和兽医和农业化学研究中心(VAR)(the Veterinary and Agrochemical Research Centre)(建议号070515-04)批准所有的实验方法。
由Sanofi Pasteur MSD出售的用于人的灭活的狂犬病疫苗Mérieux HDCV是抗原。该疫苗包含在人二倍体WI38肺细胞(PM/WI38 1503 3M)上培养的Pitman Moore病毒的Wistar毒株。其包含人白蛋白，但是不包含佐剂。将疫苗注射到颈中，并在第0，7，28，35，57天，将混悬液分在两个点上(0.5ml/点)。在第42，49和62天在EDTA上收集血液淋巴细胞(表C-35)。
两只美洲驼都形成范围在15-35IU/ml的中和抗体的保护性滴度。将淋巴细胞从血液中成功收集。淋巴结没有明显增大，这使它们难以被发现。为此原因，没有将淋巴结作为淋巴细胞的来源。
实施例46：用RFFIT测定法测定单价纳米抗体克隆的体外中和功效
确定纳米抗体克隆的中和功效，并且选择最有效的克隆形成二价和二互补位组合用于进一步的体内实验。通过它们结合纯化的糖蛋白G底物的能力预先选择克隆(PlateliaII ELISA板)。一些选定的克隆与单克隆抗体8-2竞争，其识别在狂犬病表面糖蛋白G上的抗原性位点IIa上的表位(JA，Lafage M，Weber P，Badrane H，Tordo N，Lafon M.1993，鼠单克隆抗体针对小鼠中的欧洲蝙蝠狂犬病病毒1(EBL1)感染的保护性活性(Protective activity of a murine monoclonal antibody against European batlyssvirus 1(EBL 1)infection in mice)。疫苗(Vaccine)11：1259-66)。
用快速荧光聚焦抑制测试(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test)(RFFIT)确定纳米抗体或抗体制备物的中和功效。该测试是病毒中和测定法，其使用幼仓鼠肾(BHK)-21细胞作为易感靶标。通过用异硫氰酸荧光素(FITC)-偶联的抗-核壳体缀合物(Bio-Rad实验室，法国)染色观察细胞的感染。所用的病毒毒株是具有高度毒力的和向神经攻击病毒标准株(Challenge Virus Standard)(CVS)-11(1基因型狂犬病病毒属，杆状病毒科家族)。CVS-11获自美国典型培养物保藏中心(ATCC参考号VR959)。参考购自生物标准和对照的英国国家研究所(United Kingdom National Institute for BiologicalStandards and Control)的“抗-狂犬病免疫球蛋白的第二国际标准”，将体外中和功效以国际单位(IU)/ml表示。将0.5IU/ml的血清滴度认为是在体内具有保护性的。根据关于陆地动物的诊断测试和疫苗手册(the Manual of Diagnostic Tests and Vaccines forTerrestrial Animals)(Office International des Epizooties，2008)和ISO 17052标准(BELAC鉴定081-TEST)进行RFFIT。将结果显示在表C-36中。
在RFFIT中中和(≥0.50IU/ml)分离自免疫的美洲驼，并基于它们与糖蛋白G的结合能力选择的大部分纳米抗体克隆(15/16)。一般地，与参照单克隆抗体(Mab)RV1C5(0.17nM IC50)相比，它们的功效显著更低。具有最强功效的克隆是212-C12(8nM IC50)，213-E6(14nM IC50)和212-F6(18nM IC50)。针对另一种病毒(人呼吸道合胞病毒)或Toll-样受体3激发的对照纳米抗体没有中和。
实施例47：单价纳米抗体组合的功效
研究了两种不同的单价纳米抗体(没有连接)的组合的功效和与单价克隆相比对中和功效的协同作用。
通过RFFIT确定组合和单一克隆的中和功效。竞争结合实验显示克隆213-E6，214-E8和213-H7结合糖蛋白G上的相同主要表位，而212-C12结合不同的糖蛋白G上的主要表位，而212-C12结合不同的主要表位。将结果显示在表C-37中。
所有的单价克隆的测试组合没有对中和功效产生加成作用。甚至对结合不同的主要表位的克隆也没有观察到协同作用。
实施例48：选定克隆针对趋异的基因型1和5狂犬病病毒的交叉中和
对针对基因型1CVS-11毒株选择的克隆检查它们交叉中和其它基因型1狂犬病病毒(实验室毒株和马路分离株(street isolate)，获自Prof.S.Van Gucht，ScientificInstitute of Public Health(公众健康科学研究所)，狂犬病实验室，Brussels，比利时)的能力。
还检查针对基因型5狂犬病病毒(欧洲蝙蝠狂犬病病毒-1，EBLV-1；获自Prof.S.Van Gucht，Scientific Institute of Public Health(公众健康科学研究所)，狂犬病实验室，Brussels，比利时)的交叉中和。大部分人狂犬病病例(＞99％)由基因型1狂犬病病毒引起。EBLV-1在欧洲某些蝙蝠物种(主要是大棕蝠(Eptesicus serotinus))中流通。
Evelyn-Rotnycki-Abelseth(ERA)是减毒的基因型1毒株，将其用作野生型(ATCC参考VR322)免疫的口服疫苗。Chien Beersel(CB)-1是从患狂犬病的狗的脑中分离的有毒力的基因型1病毒，所述狗是从摩洛哥引入比利时的(Le Roux I.和Van Gucht S.2008.在6个月时间内在Brussels区域中的两例输入犬狂犬病(Two cases of imported canineRabies in the Brussels area within six months time).WHO Rabies Bulletin(WHO狂犬病公报)32(1)，1区)。EBLV-1毒株8919FRA属于基因型5并分离自法国的大棕蝠蝙蝠(Bourhy等.1992.欧洲的蝙蝠狂犬病病毒的抗原和分子表征(Antigenic and molecularcharacterization of bat rabies virus in Europe).临床微生物学杂志(J ClinMicrobiol.)30(9)：2419-26)。所述毒株由Dr.L.Dacheux从巴黎的巴斯德研究所提供(MTADB/EB-08/420)。将病毒储液在BHK-21细胞上培养，除了将CB-1在神经母细胞瘤N2a细胞上培养。将感染的细胞培养物的裂解物在4℃在20000×g离心20分钟，并将上清液贮存在-80℃。
此外，7个基因型1毒株由Dr.L.Dacheux从巴黎的巴斯德研究所以感染的小鼠脑的形式提供。6株毒株是野生型分离株，其中包括来自柬埔寨的狗的分离株(9912CBG，登记号EU086169/EU086132)，来自法国的狐狸的分离株(9147FRA，登记号EU293115)，来自波兰的狸的分离株(9722POL)，来自泰国的人患者的分离株(8740THA)，来自象牙海岸的狗的分离株(07059IC，登记号EU853615/FJ545659)和来自尼日尔的狗的分离株(9009NIG，登记号EU853646)。一个脑被实验室CVS IP13毒株感染。
在用目的病毒适应的RFFIT中确定针对ERA，CB-1和EBVL-1的中和功效。将中和定义为0.50等价单位(EU)/ml的最小中和功效。
对于被感染的脑，发展备选的中和测定法。简言之，在37℃和5％CO2，将感染的脑混悬液的10倍稀释物与1/50稀释的纳米抗体贮存溶液预先温育90分钟。接着，将敏感的神经母细胞瘤N2a细胞加入混合物中。2天后，通过用FITC-偶联的抗-核壳体缀合物(Bio-Rad实验室，法国)染色来测量细胞的感染。将中和定义为与无关的纳米抗体对照(172-B3抗-TLR3)比较感染滴度的最少数百倍的减少。
将结果显示在表C-38(ERA)，表C-39(CB-1)，表C-40(EBLV-1)和表C-41(感染的脑)中。表C-42提供关于所有测试克隆的中和模式的综述。
一般而言，中和原型CVS-11毒株的大部分克隆还中和大部分其它基因型1病毒。例外是克隆212-C12，其被证实是CVS-11的相对有效中和剂，但是不中和9株其它基因型1毒株中的3株。214-F8中和所有10株基因型1毒株。213-E6中和10株基因型1毒株中的9株，213-H7中和10株基因型1毒株中的8株。应该注意这样的事实，即对于213-E6和213-H7，将相对低量的纳米抗体用在该测定法中(相对地，0.1和1.7×10-3IU)。如果已经使用了更高的量，中和作用也许已经完成。17个抗-狂犬病克隆中的7个，包括克隆213-H7和214-E8也能够中和不同的EBLV-1毒株。这说明由这些克隆识别的表位在狂犬病病毒中是高度保守的。
实施例49：用RFFIT测定法测量二价和二互补位纳米抗体组合的功效
研究与单价克隆相比，两个类似(二价)或不同(二互补位)纳米抗体连接的中和功效的协同作用。
使用如上所述的RFFIT确定二价和二互补位克隆的中和功效。用3个Gly-Ser接头：5GS，15GS或25GS形成不同的融合蛋白。将针对狂犬病的多价纳米抗体构建体的序列在表A-6中提供。NB6-18GS-NB6(RSV115；SEQ ID NO：2394)是对照二价纳米抗体，所述纳米抗体针对另一种病毒(人呼吸道合胞病毒)而被激发。将关于EBLV-1毒株的中和的数据显示在表C-40中。将关于野生型基因型1毒株和实验室CVS毒株在感染的小鼠脑的混悬液中的中和数据显示在表C-41中。表C-42提供关于所有的测试克隆的中和模式的综述。将CVS-11的中和结果显示在表C-43中。
与相应的单价克隆相比，大部分的测试二价和二互补位纳米抗体具有显著更高的功效。例如，与单价纳米抗体相比，二互补位组合214E8-15GS-213H7是600倍更有效的。一般而言，与二互补位组合相比，二价组合的功效似乎更低。最有效的二价组合具有介于15和36IU/nM之间的中和功效(213H7-15GS-213H7，213E6-5GS-213E6，214F8-15GS-214F8)。对于最有效的二互补位组合，这个范围在80和230IU/nM之间(213E6-15GS-213H7，213H7-15GS-214F8，214E8-15GS-213H7)。这可以与抗-狂犬病单克隆抗体RV1C5(Santa Cruz)的中和功效(194IU/nM)相当。大部分的有效组合具有15GS接头。
实施例50：使用脑作为敏感的靶标系统用单价/二价纳米抗体体内中和有毒力的CVS-11：在小鼠中的脑内接种
50.1单价纳米抗体的体内中和
研究了被证实是体外有效中和剂的纳米抗体(单价，二价或二互补位)是否也能够体内中和病毒并且防止脑的致死感染。用与1IU的纳米抗体，1IU的单克隆抗体(mab 8-2)或PBS(阴性对照)预先温育的狂犬病病毒CVS-11脑内接种杂交繁殖的Swiss小鼠(5-6周龄)(6-9小鼠/组)。接种前，将病毒和纳米抗体或抗体的混合物在37℃，5％CO2温育30分钟。通过用26G号针头经颅引入而将20μl体积(10μl病毒+10μl纳米抗体)接种到脑内。使用体外RFFIT测定法确定中和单位(IU)。基于用与1IU mab 8-2预先温育的不同剂量的病毒的预实验使用101.5TCID50/小鼠的病毒剂量。该预备工作显示在用101.5TCID50脑内接种后，1IU剂量的mab 8-2能够保护所有的小鼠免于致死感染(0％死亡率)，而在更高的病毒剂量则不是这样(102TCID50CVS+1IU mab 8-2＝43％死亡率)。在每个工作日检查小鼠的(狂犬病)疾病迹象，并且每天给每只小鼠进行临床评分。临床评分的范围在0(无疾病迹象)到6(体重减少，抑郁，缩成一团(hunched back)，细腰，不协调和后肢瘫痪)。在6分，通过颈脱臼处死小鼠。实验在接种后(DPI)28天终止。
将关于单价抗体的结果显示在图43和表C-44中。与单克隆抗体组相反，纳米抗体组的峰值临床评分和平均死亡时间与对照组没有显著不同(P＜0.01，单向ANOVA，Dunnett’s效果测验(post-Test))。
所述单克隆抗体(mab 8-2)提供针对用101.5TCID50CVS-11进行的脑内攻击的完全保护。用不相关的纳米抗体(191-G2)进行的预先温育没有保护小鼠免于致死感染(100％死亡率)。单独用病毒接种的小鼠发展71％死亡率。关于不相关的纳米抗体死亡率更高的事实可能仅是巧合，而并不是由于纳米抗体的潜在有害作用导致。在预备实验中，接受单独的纳米抗体的小鼠没有发展疾病迹象。此外，接受病毒+不相关纳米抗体的小鼠的临床进程与典型的狂犬病模式类似。抗-狂犬病纳米抗体213-E6提供针对狂犬病病毒的部分保护，死亡率是57％。213-E6的Kaplan Meier存活曲线与典型的“楼梯”模式相似，所述“楼梯”模式类似于在更高的病毒浓度的单克隆抗体的存活曲线的模式。明显地，抗-狂犬病纳米抗体212-C12没有提供体内保护(100％死亡率)，尽管这是使用BHK细胞作为敏感靶标的体外最有效的克隆之一。
该实验证实可以在脑内攻击模型中用单价纳米抗体实现部分保护。体外和体内功效的相关性较差。尽管纳米抗体和抗体在相同的1IU的体外剂量使用，它们的体内功效明显不同(mab 8-2＞213-E6＞212-C12)。
50.2二价纳米抗体的体内中和
使用相同的脑内攻击模型测试双头(Bihead)纳米抗体。将二价和二互补位抗体的结果显示在图44和表C-45中。双头(二价和二互补位)纳米抗体组的峰值临床评分(P＜0.01)和平均死亡时间(P＜0.05)与191-G2对照组的那些显著不同(单向ANOVA，Dunnett’s效果测验(post-Test))。
如在以前的实验中，所述单克隆抗体8.2提供针对用101.5TCID50CVS-11脑内攻击的完全保护，而在用不相关的纳米抗体(191-G2)预温育后观察到高死亡率(87.5％)。二价组合214E8-15GS-214E8和213H7-15GS-213H7和所有的二互补位组合产生针对脑内狂犬病病毒攻击的完全保护(0％死亡率)。二价组合212C12-15GS-212C12目前产生明显的部分保护(22.2％死亡率)。基于关于单价和二价212-C12的死亡率数据，可能与体外相比由该克隆识别的表位，在脑内更不适用于中和。
将用二价和二互补位纳米抗体进行的进一步实验的结果显示在图48和表C-48中。214-E8-15GS-212-C12，213E6-25GS-212-C12，213-E6-15GS-13H7诱导100％的保护。在该实验阶段过程中非常晚的时候，213-E6-5GS-212-C12出现较弱的死亡率(14.3％)(FAT是非常弱的阳性(lighty positif))。213-E6-5GS-213-E6和214-E8-15GS 213-E6诱导完全保护，而213-E6-15GS-214-E8仅诱导部分保护。
二价或二互补位构象的纳米抗体组合诱导体外和体内功效的协同增加。与以单价构象存在时相比，相同的1IU体外剂量在二价/二互补位构象时有效得多。
该实验代表来自第0-21天的数据。我们预期在第21-28天在临床迹象或死亡率上没有进一步的改变。
50.3检测小鼠脑中的病毒
将小鼠的被混合以抗-狂犬病纳米抗体(1IU 213-E6)的101.5TCID50CVS-11接种的脑染色来观察病毒抗原的存在。用FITC-缀合的抗-核蛋白抗体(FAT)对丙酮-固定的脑切片进行免疫荧光染色。
图51A显示在混合以不相关的纳米抗体(192-G2)的101.5TCID50CVS-11的7DPI时病毒抗原在小鼠脑中的丰富存在。小鼠在安乐死时，具有6分的临床评分。图51B显示在与抗-狂犬病纳米抗体(1IU 213-E6)混合的101.5TCID50CVS-11的7DPI时病毒抗原小鼠脑中的存在。小鼠在安乐死时，没有表现出临床疾病迹象。
50.4用10
2
TCID
50
的剂量对小鼠进行脑内接种
大部分二价和二互补位纳米抗体提供针对101.5TCID50的病毒剂量的良好保护。在该实验中，我们检查了二价213E6-15GS-213H7是否也提供针对102TCID50CVS-11剂量的保护。将Mab RV1C5(抗-G IgG2a，Santa Cruz sc-57995)用作对照抗体。
将结果显示在表C-49和图52中。甚至在更高的102TCID50的病毒剂量，二价组合213E6-15GS-213H7提供完全保护，而在预备实验中(数据未显示)，在相同的病毒剂量，关于单价纳米抗体观察到100％死亡率。在未来的实验中，我们将用甚至更高的103TCID50的病毒剂量测试213E6-15GS-213H7。
实施例51：通过鼻内施用纳米抗体对小鼠的体内保护
在鼻内小鼠模型中测试针对狂犬病的单价纳米抗体。在用两个不同的病毒剂量预温育后，将纳米抗体鼻内注射。
将杂交繁殖的Swiss小鼠(5-6周龄)用与1IU纳米抗体或单克隆抗体(mab 8-2)预先温育的狂犬病病毒CVS-11鼻内接种。在接种前，将病毒和纳米抗体或抗体的混合物在37℃，5％CO2温育30分钟。首先将小鼠用异氟烷麻醉，并将其头支撑固定。用微量吸移管将25μl体积(12.5μl病毒+12.5μl纳米抗体)接种在鼻孔上部。施用后紧接着，通过被麻醉动物的快速和表面呼吸，接种物被吸入鼻中。使用103(IN20090310)或102TCID50(IN20090210，IN20090414)的病毒剂量。在每个工作日检查小鼠的(狂犬病)疾病迹象，并且每天给每只小鼠进行临床评分。临床评分的范围在0(无疾病迹象)到6(体重减少，抑郁，缩成一团(hunched back)，细腰，不协调和后肢瘫痪)。在评分为6分时，通过颈脱臼处死小鼠。实验在35DPI终止。
将结果显示在图47A和B和表C-47中。在更低的病毒剂量，213-E6和212-C12表现100％的保护，而在更高的剂量，它们表现出部分保护。
当与102TCID50病毒剂量的病毒在一起引入时，单价213-E6和二价214E8-15GS-213H7两者在鼻内接种模型中提供针对疾病的完全保护。在103TCID50的更高剂量，保护的是部分的。
明显地，单价克隆212-C12在该模型中提供相对较好的保护，而在脑内接种模型中，关于该克隆我们没有观察到保护。为了证实这种观察，我们进行了另外的实验，其中我们用CVS-11+212-C12向部分小鼠鼻内接种，向部分小鼠脑内接种(图53和表C-50)。此外，鼻内接种的小鼠没有得到完全的保护，而脑内接种产生100％死亡率。
用病毒和无关纳米抗体191-D3的混合物接种的组的死亡率和存活曲线与在以前的实验中仅用病毒接种的小鼠的死亡率和存活曲线相当。
令人惊奇的是，关于mab 8-2我们没有观察到保护，尽管存在这样的事实，即证实该mab在体外模型和在脑内接种模型中是非常有效的中和剂。在该实验中，与具有无关纳米抗体的组(分别为66％和13天)相比，死亡率甚至更高(89％)而平均存活时间更短(9天)。该实验用另一种mab(RV1C5)进行了重复。
实施例52：在用有毒力的向神经CVS-11毒株鼻内攻击一天后，通过鼻内应用纳米抗体体内保护小鼠
有毒力的向神经狂犬病病毒的鼻内攻击最可能在进入和感染嗅上皮的感觉神经元时，迅速导致脑侵入。
为了检查先鼻内施用抗-狂犬病纳米抗体1天后是否可以保护小鼠免于被狂犬病病毒鼻内攻击，将杂交繁殖的Swiss小鼠(5-6周龄)用鼻内剂量的纳米抗体(1IU)或mab(1IU)处理。1天后，小鼠接受每只小鼠102TCID50CVS-11的鼻内攻击。对于鼻内接种，在异氟烷麻醉下，将25μl/小鼠的体积施加在两个鼻孔中。在每个工作日检查小鼠的(狂犬病)疾病迹象，并且在每个工作日对每只小鼠进行临床评分。临床评分的范围在0(无疾病迹象)到7(结膜炎，体重减轻，抑郁，缩成一团，细腰，不协调和后肢瘫痪)。在评分为6分时，通过颈脱臼将小鼠处死。实验在使用病毒的35DPI终止。将结果显示在图45和表C-46中。与单克隆抗体组相反，抗-狂犬病纳米抗体组(212-C12，213-E6)的峰值临床评分和平均死亡时间与191-G2对照组明显不同(P＜0.01，单向ANOVA，Dunnett’s效果测验)。
与脑内接种模型类似，用mab 8-2我们观察到完全保护(0％死亡率)，而用纳米抗体212-C12则没有观察到保护(87.5％死亡率)，并且用纳米抗体213-E6只观察到较小的保护(75％死亡率)。
实施例53：纳米抗体构建体的产生
对于纳米抗体构建体的表达，使用Lonza(Basel，瑞士)的GS基因表达系统TM(GSGene Expression SystemTM)，所述系统包含无血清和混悬液适应的CHOK1SV细胞系和表达质粒pEE12.4。纳米抗体构建体的构建起点是将氨基酸序列反向翻译为相应的核苷酸序列，对其进行优化以在CHO细胞系中表达。这种对于表达的优化可以例如通过GeneArt(Regensburg，德国)或基因合成的其它专业公司进行。在纳米抗体构建体的N端，加入普通分泌信号，其允许内源蛋白输出进入生长培养基中，并且所述分泌信号在从细胞分泌出来后被裂解下来。所述一般信号序列，可以例如是鼠重链前导序列，鼠轻链前导序列，任何其它抗体重链或轻链前导序列，IL-2分泌信号等，这在本领域中是已知的。任选地，在分泌信号的5’端，加入优化的Kozak序列，所述序列起始来自mRNA转录物的有效翻译。由Lonza推荐的共有序列由9-mer(5’-GCCGCCACC-3’；SEQ ID NO：2638)组成，并且紧接于ATG起始密码子之后。所述纳米抗体构建体由双终止密码子终止以增加构建体的反应效率。
典型地将包括所有前述特征的纳米抗体构建体克隆到HindIII/EcoRI克隆位点中；这需要在纳米抗体构建体中不存在这些位点。克隆到pEE12.4质粒上的HindIII/EcoRI位点导致大多数多克隆位点的去除。将重组质粒转化到适合的大肠杆菌(E.coli)菌株(例如，TOP10)中，并且通过在生长培养基中的氨苄青霉素或羧苄青霉素选择阳性克隆。使用质粒分离试剂盒扩增和分离质粒。
为了转染细胞，例如将重组质粒DNA通过用限制性内切核酸酶(例如，PvuI)消化来线性化，所述限制性内切核酸酶只切割DNA一次；这有利于将质粒DNA重组到细胞基因组中。将新鲜融解的CHOK1SV细胞保持在培养物中(例如，在CD CHO培养基中，Invitrogen)，并再次扩增。使用例如BioRad电穿孔装置(Bio-Rad基因脉冲仪.Hercules，CA)，将约2x107细胞的等分试样用40□g线性质粒电穿孔。将转染的细胞在CD CHO培养基中重悬，并在1天后，将其置于选择压力下，例如在缺乏谷氨酰胺的培养基中。为了增加选择压力，在培养1天后，给培养基补充66.6μM的甲硫氨酸磺基肟(methionine sulfoximine)。将细胞保持在选择性压力下，并使其扩增，作为单细胞克隆(在有限的稀释后)，或作为批次培养物扩增。接着通过，例如结合ELISA确定重组蛋白的表达水平。
纳米抗体和免疫球蛋白IgG1恒定结构域CH2-CH3之间的IgG1-铰链区可以任选地通过9GS接头(GGGGSGGGS；SEQ ID NO：2639)延伸或与另一种铰链区交换，例如如衍生自IgG3(ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP；SEQ IDNO：2640)。在其中一个纳米抗体在IgG-Fc结构域之前，而另一个纳米抗体在IgG-Fc结构域之后的形式中，第二C-端纳米抗体可以直接(无接头)，或例如通过9GS接头融合于Fc结构域。
纳米抗体Fc融合构建体的非限制性实施方案包括：
(1)NC41::15GS::NC41::G1-铰合部::IgG1-Fc
(2)NC41::15GS::NC41::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc
(3)NC41::15GS::NC41::G3-铰合部::IgG1-Fc
(4)NC41::G1-铰合部::IgG1-Fc::NC41
(5)NC41::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc::NC41
(6)NC41::G3-铰合部::IgG1-Fc::NC41
(7)NC41::G1-铰合部::IgG1-Fc::9GS::NC41
(8)NC41::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc::9GS::NC41
(9)NC41::G3-铰合部::IgG1-Fc::9GS::NC41
(10)NC41::G1-铰合部::IgG1-Fc::15B3
(11)NC41::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc::15B3
(12)NC41::G3-铰合部::IgG1-Fc::15B3
(13)NC41::G1-铰合部::IgG1-Fc::9GS::15B3
(14)NC41::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc::9GS::15B3
(15)NC41::G3-铰合部::IgG1-Fc::9GS::15B3
(16)NC41::NC41::IgG1-Fc
(17)NC41::IgG1-Fc::NC41
(18)191D3::15GS::191E4::G1-铰合部::IgG1-Fc
(19)191D3::15GS::191E4::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc
(20)191D3::15GS::191E4::G3-铰合部::IgG1-Fc
(21)191D3::G1-铰合部::IgG1-Fc::NC41
(22)191D3::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc::191E4
(23)191D3::G3-铰合部::IgG1-Fc::191E4
(24)191D3::G1-铰合部::IgG1-Fc::9GS::191E4
(25)191D3::9GS-G1-铰合部::IgG1-Fc::9GS::191E4
(26)191D3::G3-铰合部::IgG1-Fc::9GS::191E4
(27)191D3::191E4::IgG1-Fc
(28)191D3::IgG1-Fc::191E4
还可以将本发明的纳米抗体构建体的非限制性实例在图46中提供。将上述构建体(1)-(28)的序列提供在下面的表A-5中。具有随机密码子应用对应于(16)和(17)的核酸序列也显示在下面的表A-5中。
实施例54：纳米抗体202-C8的交叉反应性
单价、二价和/或三价纳米抗体202-C8的交叉反应性
使用PR8(H1N1)，X47(H3N2)和NIBRG-14(H5N1)病毒在体外中和测定法中，评估单价202-C8(SEQ ID NO：138)，二价202-C8(SEQ ID NO’s：2423-2424)和三价202-C8(SEQ IDNO’s：2425-2426)的潜在异源亚型(heterosubtypic)交叉反应性。使用鸡红血细胞在血凝素抑制测定法中和使用MDCK细胞作为靶标在病毒微量中和测定法中测试中和作用。
单价、二价和/或三价纳米抗体202-C8的体内中和作用
用展示良好交叉反应性潜力的202-C8变体(单价-，二价-和/或三价)进行体内实验。小鼠用单价、二价和/或三价202-C8纳米抗体进行处理并随后用1LD50小鼠-适应的PR8，X47或NIBRG-14病毒进行攻击。
使用3只小鼠的组。在t＝0，小鼠鼻内接受100微克的202-C8(单价、二价或三价)，100微克191-D3(对照纳米抗体)或50μl PBS。4小时后，用1LD50小鼠适应的NIBRG-14，PR8或X47病毒攻击小鼠。作为发病率的指示剂，以每日基础确定小鼠的体重。在攻击后第4天，处死所有的小鼠，并在1ml PBS中制备肺匀浆物。通过在MDCK细胞上滴定和通过基因组特异性qRT-PCR来确定肺匀浆物中感染性病毒的量。实验重复至少一次。
实施例55：在小鼠的肺中评估二价RSV纳米抗体的蛋白水解抗性
通过分析小鼠肺匀浆物评估二价RSV101(191D3-15GS-191D3；SEQ ID NO：2382)在小鼠肺中的蛋白水解抗性，并与对照纳米抗体12B2biv比较。
在用RSV感染前5小时，将纳米抗体施用于小鼠。取出肺并在用RSV感染后3或5天进行匀浆化。简而言之，对来自5只小鼠的肺进行匀浆化，并将40μl SDS-样品缓冲液(6xLaemli/20％β-巯基)加入200μl匀浆物中。作为阳性对照，将在PBS中的100ng RSV101(0.1mg/ml)用于获得10μg/ml溶液(5μl NB2biv+45μl PBS+25μl SB(Invitrogen NP0008；Lot 401488)+DTT(10mg/ml))。
将24μl(＝20μl肺匀浆物)样品和15μl阳性对照加载到12％凝胶(NuPAGE Bis-Tris Invitrogen NP0341BOX；Lot 8031371)上并在200V运行45分钟。使用精确加二重颜色蛋白标准(Precision Plus Dual Color Protein Standard)(Bio-Rad；161-0374)作为标记物。在运行后，将凝胶转移到硝基纤维素膜上(Invitrogen i-印迹干燥印迹系统(Invitrogen i-blot dry blotting system)；程序2：在23V 6分钟)，并用Odyssey封闭缓冲液(Li-cor 927-40000；Lot 2782)在RT封闭1小时。在滚动板(100rpm)上进行所有的温育和洗涤步骤。用多克隆兔抗血清K1(作为在Odyssey封闭缓冲液中稀释1/1000的一级抗体)将膜在RT温育1小时。用PBS/0.1％吐温20进行洗涤3x5分钟。用山羊抗-兔IgG(H+L)-DyLight800(Pierce 35571；Lot IH112638；在Odyssey封闭缓冲液中稀释1/10000)在RT进行检测1小时。随后用PBS/0.1％吐温20进行洗涤3x5分钟。用Odyssey红外成像系统(Odyssey Infrared Imager syste)(在800通道中)扫描所述膜(在Odyssey上的敏感性：Linear manual 4；Licor BioSciences)。
将蛋白质印迹的结果显示在图49中。用K1抗血清良好检测阳性对照。还在肺匀浆物中检测RSV101，但是其强度更低。
用Odyssey v3.0软件进行浓度的确定(图55和表C-51)。
实施例56：格式化的纳米抗体对Long毒株的逃避突变型的中和作用
在实施例27和28中，描述了单价纳米抗体与典型的抗原性位点II和/或IV-VI RSV逃避突变型的结合。特异性识别这些抗原位点的纳米抗体的结合几乎丧失或明显被减少。将这些纳米抗体格式化为二价或三价构建体部分恢复结合活性，但是不是对于所有的三种逃避突变型病毒都是如此。结合逃避突变型R7C2/1(在抗原性位点II中的突变K272E)对于任何仅由抗原性位点II结合纳米抗体组成的二价或三价构建体保持低于25％的水平。结合抗原性位点IV-VI的纳米抗体15B3和191E4是仅有的能够在75％以上的水平结合该突变体的纳米抗体(象这样或在二互补位构建体中)。
对该数据的更详细的分析显示当纳米抗体的价态增加时，针对R7C2/1的结合稍稍增加。7B2构建体的结合对于单价、二价(RSV106)和三价(RSV400)形式分别是0，4.4和13％。预期这样低的残余结合水平导致中和RSV的非常高的功效丧失。
在与实施例28所述相同的选定逃避突变型组上评价纳米抗体的中和功效。为此目的，将单价纳米抗体7B2，15H8和NC41与它们各自的三价对应体RSV400，RSV 404和RSV 407进行比较。其中，在实施例28中，仅对RSV400评估与这些逃避突变型的结合。此外，还对二互补位三价分子RSV403(7B2-15B3-7B2)分析其中和能力。
基于如在实施例15中所述进行hRSV微量中和测定法。简言之，将Hep2细胞以1.5x104细胞/孔的浓度接种到96-孔板的DMEM培养基中，所述培养基包含补充以青霉素和链霉素(分别为100U/ml和100μg/ml)的10％胎牛血清(FCS)中，并将所述Hep2细胞在37℃在5％CO2气氛下温育24小时。将不同病毒的病毒储液在Hep2细胞中制备，并随后进行滴定以确定用于微量中和测定法的最佳感染性剂量。将标准量的特异性hRSV毒株与纯化的纳米抗体的系列稀释物在总体积50μl中在37℃预先温育30分钟。将Hep2细胞的培养基用预混合物置换以允许感染2小时，随后加入0.1ml的测定培养基。在补充了2.5％胎牛血清和青霉素和链霉素(分别为100U/ml和100μg/ml)的DMEM培养基中进行测定法。在37℃在5％CO2气氛中将细胞再温育72小时，随后将细胞用在PBS中的0.05％吐温-20洗涤2次，并单用PBS洗涤1次，随后将细胞在4℃用在PBS中的80％冷丙酮(西格玛-奥尔德里奇(Sigma-Aldrich)，St.Louis，MO)(100μl/孔)固定20分钟，并静置以完全干燥。接下来，在ELISA型测定法中检测F-蛋白在细胞表面上的存在。其中，将固定的Hep2细胞在室温用在PBS中的5％猪血清白蛋白溶液封闭1小时，接着用抗-F-蛋白多克隆兔血清(Corral等.2007，BMCs生物技术(BMCBiotechnol).7：17)或Synagis(2μg/ml)温育1小时。为了检测山羊抗-兔-HRP缀合的抗体或山羊抗-人IgG，使用Fcγ片段特异性-HRP(Jackson免疫研究(JacksonImmunoResearch)，WestGrove，PA)，随后根据标准方法使ELISA显影。
如在图50A-C中所显示，单价纳米抗体几乎没有针对抗原性位点II逃避突变型病毒R7C2/11和R7C2/1的中和潜力。中和R7.936/4抗原性位点IV-VI变体的功效与中和野生型Long毒株的功效相当。这些数据与实施例27的结合数据一致，并且与在实施例20中关于这些纳米抗体所述的表位作图一致。
然而，三价分子有效地中和全部3种逃避突变型(图50D-G)。在低到约20nM的浓度观察到最大抑制，而关于多到2μM浓度的单价Nbs没有观察到这种抑制水平。R7C2/1的有效中和，几乎与R7C2/11的中和等价，这是最令人惊奇的，因为实施例28显示关于三价分子RSV400结合活性的非常明显的丧失，预期三价分子RSV400导致非常高的中和功效的丧失。也识别抗原性位点II的二价IgG帕利珠单抗(Synagis)在约0.2μM的浓度不能明显地阻断R7C2/1或R7C2/11的复制。在该浓度，不能达到IC50，而R7.936/4和野生型Long病毒以几个nM的IC50被中和(数据未显示)。
实施例57：筛选与C179竞争与流感血凝素H5的结合的纳米抗体
C179是中和H1，H2和H5亚型流感病毒的小鼠单克隆抗体。其没有防止病毒附着于唾液酸，但是相反地，结合HA干上的相当保守的区域。单克隆抗体C179通过稳定亚稳定HA来中和病毒并象这样防止低pH-诱导的构象变化和病毒与细胞膜的融合。为了分离具有类似结合和中和特性的纳米抗体，在结合H5血凝素的纳米抗体和单克隆中和抗体C179之间设置竞争测定法(Okuno等.1993，病毒学杂志(J.Virol).67：2552-2558)。简言之，将H5抗原固定在Maxisorp微量滴定板上(Nunc)，并将游离结合位点使用在PBS中的4％Marvel封闭。接下来，将125ng/ml的C179与10和20μl的包含不同克隆的纳米抗体的周质提取物预温育。在有或无纳米抗体的情况下使竞争抗体与固定的抗原结合。在温育和洗涤步骤后，使用HRP-缀合的驴抗-小鼠抗体显示抗体结合。基于与没有接受纳米抗体的对照比较的OD值确定结合特异性。
以这种方式，鉴定了4种纳米抗体，所述纳米抗体与C179(LG203G8；SEQ ID NO：2683，LG203E7；SEQ ID NO：2682，LG203H10；SEQ ID NO：2446和LG203G3；SEQ ID NO：2442)竞争(图56)。
实施例58：NC41三价体(trivalent)的接头长度的优化
为了确定NC41的三价体的接头长度的影响，产生具有从3Ala，9GS，15GS，到20GS接头的不同构建体(分别是RSV408，RSV409，RSV407和RSV410)。所有这四种NC41三价体都能够完全中和RSV B-1和Long毒株(图5)。在RSV Long的中和中没有观察到接头长度的影响，因为所有的构建体都同等有效。与之相对照，具有9GS和3Ala接头的构建体在B-1毒株上具有提高的IC50值，提示15GS的最小接头长度是最大功效所必需的。这可以通过如下观察结果来解释，即二价NC41构建体对于Long已经是非常有效的中和剂，而对于B-1毒株来说，在二价和三价NC41之间的功效差异要大得多(见实施例25)。在RSV408和RSV409中，中等纳米抗体的可接近性可能并非最优。
实施例59：纳米抗体NC41的人源化作用
将纳米抗体NC41的序列与人种系VH3-23进行比对，以便选择适于纳米抗体序列进一步人源化作用的残基。此外，进行硅内(in silico)分析以鉴定潜在易于进行翻译后修饰，如Asp异构化作用的残基，并鉴定可以提高化学稳定性的突变。CDR区和所谓的标志残基，已知其是纳米抗体的稳定性和效力所必需的，被排除在修饰之外。
对于NC41，选择总共11个位置用于突变至相应的人残基：同时引入四种突变(Va15Leu，Ala14Pro，Glu44Gly，Gln108Leu)，因为预期这些残基不会显著影响纳米抗体功能(基于来自其它纳米抗体的数据)。在这种基本的变体中，使用文库方法诱变其中的七个残基(Ser19Arg，Ile20leu，Ala74Ser，Gly78Leu，Ala83Arg，Asp85Glu，Arg105Gln)，使在每个位置上存在野生型或相应的人氨基酸，对于所述七个残基并不知道其突变成人对应物是否允许。得到的文库，具有128种理论多样性，通过利用包含简并密码子应用的重叠寡核苷酸序列的基因装配产生，随后将其克隆到源自pUC119的表达载体中，所述pUC119包含LacZ启动子，卡那霉素的抗性基因，多克隆位点和OmpA前导序列。与纳米抗体编码序列符合阅读框地，所述载体编码C端c-myc标记和(His)6标记。在大肠杆菌的周质中生成纳米抗体(见实施例22)。通过序列分析确认文库的多样性。
产生来自368种单个NC41变体和野生型NC41的周质提取物并进行功能性筛选级联，以便根据功效和稳定性来鉴定最佳人源化的NC41变体。
在第一步，在ELISA中测定人源化的NC41变体与RSV Long的RSV结合(Hytest，Turku Finland；#8RSV79)(见实施例22)。
另外，对阳性结合物分析与感染了RSV B-1毒株的Hep2细胞的结合。在此，将Hep2细胞接种入96孔板中并用RSV B-1毒株感染，基本上按照对于中和测定所述的步骤(见实施例15和21)。三天后将细胞混合以冰冷的丙酮固定，并在使用不同稀释度的周质提取物的ELISA测定中使用板。使用抗VHH兔多克隆抗体，随后使用抗-兔-HRP缀合抗体，然后根据标准方法进行ELISA显色，检测纳米抗体与Hep2-B1感染细胞的结合。
此后，为了确证引入的突变是否影响温度稳定性，将所有结合物的周质提取物加热到74℃2小时，其比野生型NC41的熔解温度高5℃。在ELISA中分析加热前后对RSV Long的结合，取加热后对加热前的结合信号比率作为温度稳定性的量度。
最后，如在实施例12和22中所述，在Biacore测定中对于Ftm-NN蛋白质测定变体的动力学解离率。
对所有结合物进行测序并根据它们结合RSV的F蛋白的能力进行排列。当分析最强结合物的序列时，在所有情况下都观察到对Gln105(人残基)的明显偏爱。尽管Ile20Leu突变看起来未被充分代表，对于所有其它位置都没有对野生型或人序列的明显偏爱，其中用与野生型NC41相比包含多达10个突变的变异体。引人注目的是，在一个变体中观察到CDR2区域内的额外点突变(Gly54Asp)。这种变体，NC41变体6，显示出所有变体和野生型NC41的最低解离率，导致亲和性提高。
基于序列和功能性数据，选择18种变体(表A-8)作为纯化蛋白进一步表征(图65)。产生和纯化所有的变体，并在微量中和测定法中确定RSV Long和B-1的中和功效。尽管大多数变体显示与野生型NC41非常相似的活性，但几种变体显示对Long(2倍)和B-1(6倍)的效力提高，最强的中和剂是NC41变体6，8，917，和18。引人注目的是，变体18在所有11个位置上是最大程度人源化的，在CDR2区中额外引入了Asp54。变体10和11在中和B-1毒株上比NC41更有效，但对于Long毒株并非如此。
如实施例12和22中所述，对于选定组的NC41变体，在Biacore测定中对于Ftm-NN蛋白质测定动力学结合参数(表C-52)。对于NC41和人源化的NC41变体6，8和17没有观察到计算数据中的显著差异。应当注意所有NC41变体的缔合率都在仪器的检测限度内，但解离率可以排序为v06＜v17＜NC41＜v08。当比较v17和v18时，在CDR2中Gly向Asp的突变(位置54)的影响可以清楚地展现出来，因为这是在这些最大程度人源化变体中的唯一差异。如表B-5中所示，与NC41野生型相比，在两种独立测定中对Long毒株和B-1毒株测试中和作用。在两种测定中，NC41v18对于两种病毒都比NC41更有效，并且在两种测定中，NC41v18都比NC41v17对Long毒株更有效。在第二种测定中对B-1毒株观察到NC41v18的中和作用提高。
将所有NC41变体都进行热诱导的解折叠以评估引入的突变对蛋白质稳定性的影响。另外在Sypro Orange存在下，通过逐步提高温度来测定熔解温度(Tm)，所述SyproOrange是一种结合在蛋白质解折叠后暴露的Trp残基的染料。所有变体都显示相对于野生型NC41(69℃)具有提高的Tm，对于变体18来说提高高达9℃。
使用15GS接头，NC41变体3(RSV414)，变体6(RSV426)，和变体18(RSV427)将三种NC41变体格式化成三价构建体。序列显示于表A-9中。如实施例22中所述，生产和纯化所有的三价体。图67显示具有其相应单价纳米抗体的三价人源化NC41变体的其中两种对于RSVLong和B-1毒株的中和作用。与Synagis相比，变体3和6的三价体是对Long的81-91倍更有效力的中和剂，类似于野生型NC41三价体。对于B-1毒株，与Synagis相比，RSV414和RSV426是约16倍更加有效的中和剂，但在此与野生型NC41RSV407的三价体相比，二者都有稍微提高。因而单价变体3和6对于B-1的效力提高似乎导致了稍微改进的三价体。
实施例60：用口蹄疫病毒和禽流感病毒免疫美洲驼
在荷兰瓦赫宁根大学的中央兽医研究所和在莱利斯塔德的研究中心(CentralVeterinary Institute of Wageningen University and Research Centre inLelystad)的高度封闭单位(high containment unit)内用口蹄疫病毒(FMDV)和禽流感病毒(AIV)毒株(表C-53)的混合物免疫两只美洲驼。AIV毒株都是低病原性的禽流感毒株，其在含胚的卵上繁殖并且未被灭活。将FMDV毒株在BHK-21细胞上繁殖，通过用10mM二乙烯亚胺(binary ethyleneimine)处理进行灭活，并通过两次连续的PEG6000沉淀进行浓缩。使用蔗糖密度梯度对AIV(方法参见Arora等，1985，分析生物化学(Analytical Biochemistry)144：189-192)和FMDV抗原进行最后纯化。
总共给予三次免疫。在第一次免疫后28天给予第二次免疫。在第二次免疫后21天给予第三次免疫。使用Specol(Stimune)作为佐剂肌内给予所有免疫(Bokhout等，1981，兽医免疫学和免疫途径(Vet.Immunol.Immunopath.)2：491-500)。第二次和第三次免疫后六天(分别在初次免疫[DPI]后的34和55天)，取150ml肝素处理的血液样本，用于使用FicollPaque Plus(GE Healthcare)分离外周血淋巴细胞(PBLs)。另外，在0，34和55DPI时从两只美洲驼中采集血清。
利用血细胞凝集反应抑制测试(HI)来测定针对H5和H7型血凝素的抗体反应，所述血细胞凝集反应抑制测试是根据欧盟委员会指令2005/94/EU进行的。在此测定中，将包含8个血凝单位的25μl HA抗原与25μl血清的两倍稀释系列物一起于室温在V底形96孔微量滴定板中预温育1小时。在加入25μl1％鸡红血球混悬液并在4℃温育45min后，目测HI滴度。用H5和H7毒株二者免疫的美洲驼3049，在免疫过程期间，发展了针对H5和H7型抗原的HI滴度(表C-54)。用H5但未用H7型毒株免疫的美洲驼3050，仅发展了针对H5抗原的HI反应(表C-54)。
实施例61：噬菌体展示文库的构建
使用RNeasy大量试剂盒(RNeasy maxi kit)(Qiagen)从在实施例60中获得的约108PBLs分离总RNA。使用引物NotI-d(T)18(表C-55)和Superscript III反转录酶(Invitrogen)进行cDNA合成。通过使用引物VH2B组合引物lam07，lam08或BOLI-192(表C-55)和Amplitaq Gold DNA聚合酶(应用生物系统(Applied Biosystems))扩增纳米抗体编码片段。将所述PCR片段用PstI和NotI切割并将其连接到类似切割的噬菌体展示载体pRL144上(Harmsen等.2005，疫苗(Vaccine)23：4926-4934)。
通过对大肠杆菌(Escherichia coli)TG1细胞进行电穿孔，获得12个文库(表C-56)。
实施例62：噬菌体展示选择
在实施例61中获得的噬菌体文库通过用VCS-M13辅助噬菌体感染拯救，并且噬菌体颗粒通过两次PEG沉淀纯化(McCafferty和Johnson 1996，抗体展示文库的构建和筛选(Construction and screening of antibody display libraries).In：Kay，BK，Winter，J，和McCafferty，J[eds]，肽和蛋白的噬菌体展示(Phage display of peptide andprotein).Academic出版社，San Diego，pp.79-111)。对于噬菌体展示选择，合并文库pAL442，443，444，448，449和450。在96孔聚苯乙烯微量滴定板(Greiner)中通过直接包被AI抗原进行噬菌体淘选。AI抗原获自在Madin Darby犬肾(MDCK)细胞上繁殖的AI毒株，所述细胞在无血清培养基(SFM4BHK21培养基，获自Hyclone的用于BHK21细胞开发的原型培养基)中悬浮生长，将其使用100-kDa分子量截断值离心-浓缩装置浓缩20倍。备选地，使用由HEK293细胞产生的来自H5N1毒株A/安徽(Anhui)/1/2005(Abcam，Cambridge，UK；批号ab53938)的重组his-标记的HAO三聚体或由HEK293细胞产生的来自H7N7毒株A/鸡/荷兰/01/03(Abcam，Cambridge，UK；批号ab61286)的重组his-标记的HA1进行噬菌体淘选。为此目的，将这些重组抗原在用2μg/ml亲和性纯化的多克隆兔抗-his6肽抗体(Rockland，批号600-401-382)包被的聚苯乙烯微量滴定板中捕获。备选地，使用果蝇(Drosophila)S2细胞产生的来自H7N2流感毒株(HAstr H7N2)的strep-标记的重组血凝素进行噬菌体展示选择。在淘选过程中使用的抗原浓度是0.1或0.01μg/ml。将噬菌体文库以1010TU/孔加入。将结合的噬菌体通过用在PBS缓冲液中的1mg/ml胰蛋白酶温育30分钟洗脱。
实施例63：在ELISA中结合流感抗原
使用根据前述方法制备的可溶性纳米抗体筛选在ELISA中结合流感抗原的每个克隆(McCafferty，J，和Johnson，KS，1996，抗体展示文库的构建和筛选(Construction andscreening of antibody display libraries).In：Kay，BK，Winter，J，和McCafferty，J[eds]，肽和蛋白的噬菌体展示(Phage display of prptide and protein).Academic出版社，San Diego，79-111页)。所述流感抗原获自使用无血清培养基在MDCK细胞上繁殖的病毒，并且通过蔗糖密度梯度进一步纯化。在ELISA中使用的真实抗原来自在表C-57中指示的毒株。
简言之，将96-孔ELISA板用在50mM碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液pH 9.6中的1μg/mlAIV抗原包被。接着，将这些板用在ELISA-缓冲液(1％脱脂牛乳；0.05％吐温-20；0.5MNaCl；2.7mM KCl；2.8mM KH2PO4；8.1mM Na2HPO4；pH 7.4)中10倍稀释的大肠杆菌培养物上清液温育。随后，将结合的纳米抗体使用针对c-myc标记(罗氏应用科学(Roche AppliedScience))，曼海姆，德国)的过氧化物酶缀合的单克隆抗体检测，并且用3，3’，5，5’-四甲基联苯胺染色。
在关于与真实的AIV抗原结合筛选个体克隆后，对结合来自H5毒株的AIV抗原的39个克隆和结合来自H7毒株的AIV抗原的50个克隆进行测序。使用ABI3130毛细测序仪(ABI3130 capillary sequencer)(应用生物系统(Applied Biosystems))和引物MPE26(表C-55)进行序列分析。39个H5结合克隆编码形成6个CDR3组的25个不同的纳米抗体(表A-1和表C-58)。50个H7结合克隆编码形成7个CDR3组的40个不同纳米抗体(表A-1和表C-59)。除了克隆IV28，所有的H5和H7结合克隆编码包含标志氨基酸残基、是典型的单结构域抗体的纳米抗体(Harmsen等.2000，分子免疫学(Mol.Immunol.)37：579-590)。
CDR3组A的大多数H7结合纳米抗体在位置84包含潜在的N-糖基化位点。大多数H5结合克隆特异性结合三个不同H5毒株的AIV抗原。然而，CDR3组B的克隆还结合H1毒株的抗原(表C-58)。此外，落入两个CDR3组的两个克隆(IV154和IV155)结合H1，H7和H5毒株的AIV抗原(表C-58)。这些克隆可能结合核蛋白，其是高度免疫原性的并在不同血清型的流感毒株之间是高度保守的。与该结论一致，在关于真实AIV抗原的两轮淘选中选择这些克隆，而在第二轮噬菌体展示选择中用重组血凝素选择大多数其它克隆。几乎所有的40种H7结合纳米抗体结合两株H7毒株的AIV抗原，但是不结合H1或H5毒株的AIV抗原(表C-59)。仅克隆IV18似乎结合H5抗原。然而，编码与IV18相同的纳米抗体的两个克隆不显示与H5毒株的所述交叉反应，这表明该交叉反应是假象。
实施例64：选定的纳米抗体的酵母表达
我们选择了8种H5结合纳米抗体和8种H7结合纳米抗体用于使用质粒pRL188的小规模酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))表达(Harmsen等.2007，Vet.Microbiol.120：193-206)。该质粒导致这样的纳米抗体产生，其带有具有氨基酸序列(SEQ ID NO：3063；EPKTPKPQPQPQPQPQPNPTTESKCPHHHHHH)的C端延伸。我们优选选择代表所有CDR3组的克隆用于所述酵母表达。将纳米抗体编码序列插入pRL188需要在FR4编码区中存在BstEII限制性内切核酸酶裂解位点。该位点存在于大多数纳米抗体克隆中，但不是存在于所有的纳米抗体克隆(表C-58和C-59)中。结果，我们不能以可行的方式用酵母产生作为两个CDR3组的独特代表的IV151和IV153。本领域技术人员可以通过位点定向诱变引入该BstEII位点来产生适用于酵母表达的这些克隆。此外，将IV28亚克隆到pRL188中是不成功的。纳米抗体在GAL7启动子控制下在酿酒酵母中表达，并且通过与转化酶信号肽融合被引入生长培养基中，如前所述(Harmsen等.2007，Vet.Microbiol.120：193-206及其参考文献)。使用固定的-金属亲和层析法从培养物上清液中纯化纳米抗体。浓缩纯化的纳米抗体，并通过使用5-kDa分子量截断值的离心浓缩装置(Biomax-5膜，Millipore，Bedford，MA)将缓冲液交换为磷酸缓冲盐溶液。使用Bio-Rad(Hercules，CA)蛋白测定法确定蛋白浓度。
实施例65：酵母产生的纳米抗体的表征
65.1在ELISA中的结合
我们接下来分析了选定的纳米抗体与不同血清型的毒株的流感抗原的结合。该ELISA基本上如在关于筛选大肠杆菌产生的纳米抗体的前述部分(实施例63)中所述进行，但是其中使用更高浓度的流感抗原(见表C-57)用于包被(5μg/ml)和使用过氧化物酶-缀合的抗-his6单克隆抗体(罗氏应用科学(Roche Applied Science))用于纳米抗体检测。被选择用于结合H5毒株的所述纳米抗体都与所有所用的三株H5毒株反应(图66A)。CDR3组A的五种纳米抗体不与其它H血清型的毒株交叉反应(图66A和B)。CDR3组B的单一纳米抗体(IV146)仅与H1和H2毒株交叉反应(图66A和B)。代表两个CDR3组的纳米抗体IV154和IV155与除了H15N6之外的所有的毒株交叉反应(图66A和B)。被选择用于结合H7毒株的纳米抗体都可以结合两种H7毒株(图66D)。两种纳米抗体(IV1和IV25)不与其它毒株交叉反应，而其它五种纳米抗体(IV5，IV21，IV26，IV29和IV37)显示与H2N3和H6N5毒株较弱的交叉反应性(图66C和D)。酵母产生的纳米抗体的这些结果与大肠杆菌产生的纳米抗体的结果一致(表C-58和C-59)。
我们接下来通过温育起始浓度为10μg/ml的纳米抗体的两倍系列稀释物，而在ELISA中分析了纳米抗体与选定的真实和重组抗原的结合。使用多克隆兔抗-纳米抗体血清(R907)和过氧化物酶-缀合的猪抗-兔血清(Dako，P217)来检测与重组抗原结合的纳米抗体，因为重组抗原还包含his6标记。在进行非线性回归分析后，对在450nm获得0.2(真实抗原)或1.0(重组抗原)的消光系数所需要的纳米抗体浓度进行内推。被选择结合于H5毒株的所有纳米抗体可以以最大5倍不同的滴度结合H5N9抗原(表C-60)。6个克隆也可以结合两个重组H5抗原(表C-60)，说明它们识别血凝素。两个其它克隆(IV154和IV155)根本不结合两种重组血凝素。这进一步显示这些克隆结合于核蛋白，如上基于它们与许多不同的H和N型真实流感抗原的结合所提示的。被选择用于结合H7毒株的纳米抗体都可以结合两种H7型流感毒株的真实抗原和重组HA1片段(表C-61)，这显示它们结合于血凝素。
65.2病毒中和
我们接下来确定选定的纳米抗体的体外病毒中和能力。为此目的，将感染50％的孔(TCID50)所需要的100个组织培养物感染剂量与酵母产生的纳米抗体的两倍系列稀释物在室温预温育1小时。随后，将这些加入在包含3μg/ml胰蛋白酶无血清培养基中的MDCK细胞单层中，以使病毒复制。在37℃和5％CO2生长2天后，应用核蛋白特异性单克隆抗体(HB65，也称为H16-L10-4；Yewdell等.1981，免疫学杂志(J.Immunol).126：1814-1819)，使用免疫过氧化物酶单层测定法检测孔中的流感病毒抗原。中和滴度根据Reed和Muench(1938，Am.J.Hyg.27：493)进行计算。仅克隆IV146可以在最低的分析浓度(0.75μg/ml)中和两种H5型病毒，而所有其它纳米抗体即便在50μg/ml的最高分析浓度上使用也没有中和两株病毒毒株(表C-60和C-61)。
65.3血细胞凝集的抑制
使用如上分析美洲驼血清所述的方法(实施例60)，我们类似地确定酵母产生的纳米抗体抑制血细胞凝集的能力。在分析的最高纳米抗体浓度上，我们不能检测到对血细胞凝集的任何抑制(表C-60和C-61)。
因此，克隆IV146中和流感病毒，但是不抑制血细胞凝集。这是意外的发现，因为大多数前述分离的中和流感病毒的常规单克隆抗体也抑制血细胞凝集。克隆IV146还在ELISA中与H1和H2毒株交叉反应。这也是没有预期的，因为大多数结合血凝素的常规单克隆抗体特异性结合一种血凝素类型。然而，最近，一些研究组发现了这样的H5型血凝素结合人单克隆抗体，其与H1和H2型毒株交叉反应，并且中和病毒，但是不抑制血细胞凝集(Throsby等.2008，Plos ONE 3；Sui等.自然结构生物学(Nature Struct.Biol.)16：265-273；Kashyap等.2008，美国国家科学院学报(Proc.Nat.Acad.Sci.)22：5986-5991)。这些人mAbs结合在主要存在于HA2结构域上的相对保守的表位，其涉及对于感染是关键的起始病毒与宿主细胞膜的融合。该表位可以以两种构象存在：不能使膜融合的融合前状态和能够使膜融合的另一种构象。融合前状态由这样的广泛交叉反应性的中和抗体识别(Sui等.自然结构生物学(Nature Struct.Biol.)16：265-273；Ekiert等.，2009，科学(Science)324：246-251)，说明所述抗体中和病毒的机制依赖于对HA向适于融合的构象的构象转变的抑制。IV146与这些人单克隆抗体的病毒中和类似性和毒株特异性提示IV146还识别在HA2结构域上的这一保守表位，所述保守单位涉及起始膜融合。
表
表A-2：结合hRSV的多价构建体的氨基酸序列(包括Myc-His标签)
表A-3：F-蛋白序列
表A-4：结合流感血凝素H5的多价构建体的氨基酸序列
表A-5：多价Fc构建体的序列
表A-6：结合狂犬病病毒的多价纳米抗体构建体的氨基酸序列
表A-7：接头序列
表A-8：人源化的NC41变体的序列
表A-9：结合hRSV的多价人源化构建体的氨基酸序列
表A-10：结合hRSV的多价构建体的氨基酸序列
表C-1 如在实施例14中所述，对本发明的纳米抗体的周质级分的RFFIT测试的综述
表C-2：在表面等离子体共振中选定的纳米抗体与固定的FTM-蛋白的结合
| 名称 | 克隆 | ka(1/Ms) | kd(1/s) | KD(M) |
| NB1 | 192-C4 | 1.13E+06 | 8.46E-03 | 7.47E-09 |
| NB2 | 191-D3 | 1.59E+06 | 3.24E-03 | 2.05E-09 |
| NB4 | 192-H1 | 1.65E+06 | 6.11E-03 | 3.72E-09 |
| NB5 | 192-A8 | 3.22E+05 | 9.37E-04 | 2.91E-09 |
| NB6 | 191-E4 | 2.98E+05 | 2.08E-04 | 7.00E-10 |
| NB9 | 192-C6 | 1.15E+06 | 8.08E-03 | 7.00E-09 |
| NB10 | 192-F2 | 8.07E+05 | 5.77E-03 | 7.14E-09 |
| NB11 | 191-B9 | 1.94E+05 | 4.92E-03 | 2.54E-08 |
| NB13 | 192-H2 | 8.29E+05 | 1.28E-02 | 1.54E-08 |
| NB14 | 192-B1 | 2.29E+05 | 1.27E-02 | 5.55E-08 |
| NB15 | 192-C10 | 1.75E+05 | 6.13E-04 | 3.49E-09 |
表C-3 基于它们的融合后构象的结构基序对病毒融合蛋白进行分类
表C-4：来自新文库的hRSV纳米抗体的序列分析
表C-5：结合hRSV F-蛋白的纳米抗体的表征
表C-6：针对hRSV F-蛋白的多价纳米抗体的命名
表C-7：单价纳米抗体与被Long毒株的不同逃避突变型感染的HEp-2细胞的抗原提取物的反应性
表C-8：单价纳米抗体和二价纳米抗体与被Long毒株的不同逃避突变型感染的HEp-2细胞的抗原提取物的反应性
表C-9：在病毒接种后3和5天在被处理的小鼠的肺中的相对病毒基因组RNA
在病毒接种后3天
在病毒接种后5天
表C-10：如在实施例37中所述，在病毒接种后4和6天，在用202-C8，191-D3或仅用PBS处理的小鼠中的病毒滴度
表C-11：在接种纳米抗体后的不同时间点，将纳米抗体鼻内施用于被病毒攻击的小鼠后的动物体重和病毒滴度(见实施例38)
表C-11：续
| 191-D3 4h 小鼠 1 | 20,3 | 20,42 | 20,11 | 19,72 | 19,28 | 6324600 |
| 191-D3 4h 小鼠 2 | 18,39 | 18,54 | 18,66 | 18,38 | 18,33 | 9355000 |
| 191-D3 4h 小鼠 3 | 18,39 | 18,82 | 18,44 | 17,77 | 16,3 | 3556500 |
| 平均 | 19,03 | 19,26 | 19,07 | 18,62 | 17,97 | 6412033 |
| St.Dev. | 1.10 | 1.01 | 0.91 | 1.00 | 1.52 | 2900239 |
| 191-D3 24h 小鼠 1 | 18,94 | 18,63 | 18,62 | 18,21 | 18,29 | 6324600 |
| 191-D3 24h 小鼠 2 | 19,46 | 19,62 | 19,4 | 18,48 | 18,09 | 63250000 |
| 191-D3 24h 小鼠 3 | 19,63 | 19,58 | 19,83 | 19,18 | 18,51 | 2000000 |
| 191-D3 24h 小鼠 4 | 19,03 | 18,94 | 19,07 | 18,45 | 17,49 | 6325000 |
| 191-D3 24h 小鼠 5 | 18,91 | 18,72 | 19 | 17,84 | 17,32 | 935500 |
| 平均 | 19,19 | 19,10 | 19,18 | 18,43 | 17,94 | 15767020 |
| St.Dev. | 0.33 | 0.47 | 0.46 | 0.49 | 0.51 | 26657313 |
| 191-D3 48h 小鼠 1 | 19,5 | 19,39 | 18,93 | 19,04 | 18 | 3556500 |
| 191-D3 48h 小鼠 2 | 19,53 | 19,3 | 19,2 | 18,76 | 17,94 | 3556500 |
| 191-D3 48h 小鼠 3 | 20,02 | 20,23 | 20,46 | 19,81 | 19,26 | 9355000 |
| 191-D3 48h 小鼠 4 | 18,21 | 18,09 | 18,12 | 17,75 | 17,29 | 935500 |
| 191-D3 48h 小鼠 5 | 18,38 | 18,17 | 18,32 | 17,92 | 16,53 | 6325000 |
| 191-D3 48h 小鼠 6 | 21,19 | 20,83 | 20,55 | 20,34 | 18,98 | 632460 |
| 平均 | 19,47 | 19,34 | 19,26 | 18,94 | 18,00 | 4060160 |
| st.Dev. | 1.10 | 1.09 | 1.04 | 1.02 | 1.02 | 3322192 |
表C-12：用在研究中的测试项目，如在实施例42中所述
表C-13：关于在实施例42中所述研究的研究设计
表C-14：在大鼠血浆和BALF样品中确定RSV NB2的LLOQ和ULOQ，如在实施例42中所述
表C-15：在大鼠血浆和BALF样品中确定ALX-0081的LLOQ和ULOQ，如在实施例42中所述
表C-16：在大鼠血浆和BALF样品中确定RANKL008A的LLOQ和ULOQ，如在实施例42中所述
表C-17：在单一静脉内丸剂给药RSV NB2(4mg/kg)，ALX-0081(5mg/kg)和RANKL008A(5mg/kg)后，分别相对于雄性Wistar大鼠的RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的个体血浆浓度-时间数据
表C-18：在单一i.t.给药RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，分别相对于雄性Wistar大鼠的RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的个体血浆浓度-时间数据。6/8hr时间点：关于RSV NB2和ALX-0081，6hr，关于RANKL008A，8hr
表C-19：在单一i.t.给药RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A分别相对于雄性Wistar大鼠的平均血浆浓度-时间数据
表C-20：在向Wistar大鼠单一i.v.给药RSV NB2(4mg/kg)，ALX-0081(5mg/kg)和RANKL008A(5mg/kg)后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的个体基本药物代谢动力学参数
表C-21：在向Wistar大鼠单一i.v.给药RSV NB2(4mg/kg)，ALX-0081(5mg/kg)和RANKL008A(5mg/kg)后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的平均基本药物代谢动力学参数
表C-22：在向Wistar大鼠单一i.v.给药RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的基本药物代谢动力学参数
表C-23：在向雄性大鼠单一气管内施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的个体观察的BALF浓度
BQL：低于量化极限
表C-24：在向雄性大鼠单一气管内施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的平均观察的BALF浓度
表C-25：在向雄性大鼠单一气管内施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，BALF中RSV NB2，ALX-0081，和RANKL008A的个体理论量(BALF浓度×10ml)
BQL：低于量化极限
表C-26：在气管内施用后，RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)在BALF中的平均(+SD)理论量(BALF浓度x10mL)
表C-27：在向雄性大鼠单一气管内施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，用DPBS两次灌洗(2x5mL)后BALF的个体回收体积
表C-28：在向雄性大鼠单一气管内施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，BALF中RSV NB2，ALX-0081和RANKL008A的个体实际量(BALF浓度×回收体积)
BQL：低于量化极限
表C-29：在向雄性大鼠单一气管内施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，BALF中RSV NB2，ALX-0081和RANKL008A的平均实际量(BALF浓度×回收体积)
表C-30：在向雄性大鼠单一气管内施用RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)后，BALF中RSV NB2，ALX-0081和RANKL008A的由剂量标准化(％)的个体理论量(BALF浓度×10mL)
BQL：低于量化极限
表C-31：在气管内施用后，RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)在BALF中由剂量标准化(％)的个体实际量(BALF浓度x回收体积)
BQL：低于量化极限
表C-32：在气管内施用后，RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)在BALF中的由剂量标准化(％)的平均(+SD)理论量(BALF浓度x10mL)
表C-33：在气管内施用后，RSV NB2(3.6mg/kg)，ALX-0081(3.1mg/kg)和RANKL008A(3.2mg/kg)在BALF中的由剂量标准化(％)的平均实际量(BALF浓度x回收体积)
表C-35：美洲驼的的免疫、取样和中和抗体滴度的综述
表C-43：在二价或二互补位组合中的连接纳米抗体对中和功效的影响
-a国际单位(IU)
-b1mg双头纳米抗体/ml＝35.7-38.5μM
-c＝mg/ml×1/50％稀释×(35700-38500)
表C-44：如在实施例50中所述，在小鼠的不同组中峰值临床评分、死亡率和存活时间的综合
-a临床评分范围在0(无疾病)到6(体重减少、抑郁、缩成一团、细腰、不协调和后肢瘫痪)之间
-b中位值存活时间是在Kaplan Meier曲线(存活曲线)上已经死亡一半的小鼠的时间
-cTCID50：组织培养物感染剂量50％
-d不可应用
表C-45：如在实施例50中所述，在小鼠的不同组中峰值临床评分、死亡率和存活时间的综合
-a临床评分范围在0(无疾病)到6(体重减少、抑郁、缩成一团、细腰、不协调和后肢瘫痪)之间
-b中位值存活时间是在Kaplan Meier曲线(存活曲线)上已经死亡小鼠一半的时间
-cTCID50：组织培养物感染剂量50％
-d不可应用
表C-46：如在实施例50中所述，在小鼠的不同组中峰值临床评分，死亡率和存活时间的综合
-a临床评分范围在0(无疾病)到7(结膜炎、体重减少、抑郁、缩成一团、细腰、不协调和后肢瘫痪)之间
-b中位值存活时间是在Kaplan Meier曲线(存活曲线)上已经死亡小鼠一半的时间
-cTCID50：组织培养物感染剂量50％
-d不可应用
表C-47：如在实施例51中所述，在鼻内接种病毒和纳米抗体或抗体的混合物后峰值临床评分、死亡率和存活时间的综合
a临床评分范围在0(无疾病)到6(结膜炎、体重减少、抑郁、缩成一团、细腰、不协调和后肢瘫痪)之间
b中位值存活时间是在Kaplan Meier曲线(存活曲线)上已经死亡小鼠一半的时间
cTCID50：组织培养物感染剂量50％
d不可应用
表C-50.在鼻内或脑内接种混合以1 IU 212-C12的102TCID50CVS-11时峰值临床评分、死亡率和存活时间的综合
-a临床评分范围在0(无疾病)到6(体重减少、抑郁、缩成一团、细腰、不协调和后肢瘫痪)之间
-b中位值存活时间是在Kaplan Meier曲线(存活曲线)上已经死亡小鼠一半的时间
-cTCID50：组织培养物感染剂量50％
-d不可应用
表C-51：如实施例55所述，在施用纳米抗体和感染RSV后3和5天，在用纳米抗体接种的小鼠的肺匀浆物中的纳米抗体RSV101或12B2biv的浓度(ng)
表C-53：用于美洲驼免疫的抗原
a对于每个个体免疫的抗原的量
表C-54：通过血细胞凝集抑制测试分析美洲驼抗体反应
表C-55：用于构建噬菌体展示文库和测序的寡核苷酸，如在实施例61中所述
表C-56：如实施例61中所述获得的噬菌体展示文库
a在转化大肠杆菌TG1后获得的菌落数
表C-57：如实施例63所述，用于抗原制备的流感毒株
流感毒株 血清型
A/PR/8/34(ATCC VR-1469) H1N1
A/野鸭/荷兰/2/05 H5N2
A/野鸭/丹麦/75-64650/03 H5N7
A/火鸡/威斯康星/68 H5N9
A/鸡/意大利/1067/V99 H7N1
A/天鹅/荷兰/06003448/06 H7N7
A/鸵鸟/荷兰/03006814/03 H2N3
A/Ty/荷兰/06001571-041Tr/06 H6N5
A/野鸭/荷兰/06026212-002/06 H8N4
A/鸭子/德国/R113/95 H9N2
A/野鸭/荷兰/06014516/06 H10N8
A/Chearwater/澳大利亚/2576/02 H15N6
将已经使用的术语和表述用作说明书的术语，并且没有限制，不意欲使用这样的术语和表述，其排除显示和描述的特征的任何等价物或其部分，要认识到各种改进在本发明的范围内都是可能的。
将本文中公开的所有参考文献的全部内容通过参考引入，特别是关于在上文提及的教导。
Claims (29)
1.多肽、化合物或构建体，其包含三种针对RSV病毒的F蛋白和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸序列或由三种针对RSV病毒的F蛋白和/或可以特异性结合RSV病毒的F蛋白的氨基酸序列组成，和任选地还包含任选地通过一个或多个接头连接的一种或多种其它基团、残基、结构部分或结合单位，所述多肽、化合物或构建体是三价构建体，
其中所述氨基酸序列由4个构架区FR1-FR4和3个互补性决定区
CDR1-CDR3组成并且具有通用结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，其中:
-CDR1选自由下列各项组成的组：
SEQ ID NO’s:850,918,和2595的氨基酸序列；
CDR2选自由下列各项组成的组：
SEQ ID NO’s:1414,1482,1499,和2611的氨基酸序列；
和
CDR3选自由下列各项组成的组：
SEQ ID NO’s:1978,2046,和2627的氨基酸序列；
其中所述氨基酸序列的CDR1-CDR3的组合与SEQ ID NO’s:286,354,371,和2579之一的CDR1-CDR3组合相同。
2.根据权利要求1的多肽、化合物或构建体，其中所述氨基酸序列中和所述病毒。
3.根据权利要求1-2中任一项的多肽、化合物或构建体，其包含三种这样的氨基酸序列，或由三种这样的氨基酸序列组成，所述氨基酸序列由结构域抗体,单结构域抗体,"dAb"或纳米抗体组成。
4.根据权利要求3的多肽、化合物或构建体，其中所述纳米抗体是VHH序列。
5.根据权利要求1-2中任一项的多肽、化合物或构建体，其包括或由下列序列组成：选自SEQ ID NO’s:267,286,354,371,2579,2999至3003,和3004至3014的一种或多种氨基酸序列。
6.根据权利要求1-2中任一项的多肽、化合物或构建体，其包含三种这样的氨基酸序列或由三种这样的氨基酸序列组成，所述氨基酸序列上由人源化的纳米抗体组成。
7.根据权利要求1的多肽、化合物或构建体,其中所述一种或多种其它基团、残基、结构部分或结合单位选自由下列各项组成的组：结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列,单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，"dAb"，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体。
8.根据权利要求1-2中任一项的多肽、化合物或构建体，其是二互补位构建体，包含至少一种针对RSV病毒的F蛋白的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的氨基酸序列和至少一种针对RSV病毒的F蛋白上不同于所述第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-2中任一项的化合物或构建体，其包含针对所述RSV病毒的F蛋白上的相同的抗原决定簇、表位、部分或结构域的三种氨基酸序列。
10.根据权利要求1的多肽、化合物或构建体，其包含：针对所述RSV病毒的F蛋白上的第一抗原决定簇、表位、部分或结构域的两种氨基酸序列，和针对所述RSV病毒的F蛋白上的第二抗原决定簇、表位、部分或结构域的一种氨基酸序列。
11.根据权利要求1的多肽、化合物或构建体，其包含或选自由下列各项组成的组：SEQID NO’s:2408-2412,2415,2989-2994,2996,3042-3046,3049-3055和3584-3591。
12.核酸或核苷酸序列，其编码根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体。
13.宿主或宿主细胞，其表达或在适合的情况下能够表达可以通过表达编码其的核酸或核苷酸序列获得的根据权利要求1-11中任一项的化合物或构建体，和/或包含根据权利要求12的核酸或核苷酸序列。
14.组合物，其包含至少一种根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体，或包含根据权利要求12的核酸或核苷酸序列。
15.根据权利要求14的组合物，其是药物组合物，还包含至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂和/或辅药，并且任选地包含一种或多种其它药物活性多肽和/或化合物。
16.用于生产根据权利要求1-11中任一项的化合物或构建体，或根据权利要求14或15中任一项的组合物的方法，所述方法至少包括下述步骤：
a.在适合的宿主细胞或宿主生物体或在其它适合的表达系统中表达根据权利要求12的核酸或核苷酸序列，
任选地随后：
b.分离和/或纯化根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体。
17.用于生产根据权利要求1-11中任一项的化合物或构建体,或根据权利要求14-15中任一项的组合物的方法，所述方法至少包括下述步骤：
a.在根据权利要求13的宿主或宿主细胞表达和/或生产至少一种根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体,或根据权利要求14-15中任一项的组合物的条件下，培养和/或维持所述宿主或宿主细胞，
任选地随后：
b.分离和/或纯化由此获得的根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体,或根据权利要求14-15中任一项的组合物。
18.用于制备和/或生产根据权利要求1-11中任一项的三价构建体的方法，所述方法包括至少连接包含在根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体中的单价氨基酸序列和例如一个或多个接头的步骤。
19.根据权利要求18的方法，所述方法包括下述步骤：
a.连接两种以上编码包含在根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体中的氨基酸序列的核酸序列；
b.在适合的宿主细胞或宿主生物体或在其它适合的表达系统中表达在a)中获得的遗传构建体
任选地随后:
c.分离和/或纯化由此获得的根据权利要求1-11中任一项的三价构建体。
20.根据权利要求18的方法，所述方法包括下述步骤：
a.连接两种以上编码包含在根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体中的氨基酸序列的核酸序列以及编码一个或多个接头的核酸和进一步的本身已知的遗传构建体中的一个或多个其它元件；
b.在适合的宿主细胞或宿主生物体或在其它适合的表达系统中表达在a)中获得的遗传构建体
任选地随后:
c.分离和/或纯化由此获得的根据权利要求1-11中任一项的三价构建体。
21.药物活性量的至少一种根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体、和/或根据权利要求14-15中任一项的组合物在制备用于预防和/或治疗受试者中的至少一种疾病或病症的药物中的应用，所述疾病或病症与病毒进入和/或病毒复制相关和/或由RSV病毒的F蛋白和/或其病毒受体介导，与其生物学或药理学活性相关，和/或与其中涉及RSV病毒的F蛋白和/或其病毒受体的病毒-介导的生物学途径相关。
22.根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体,和/或根据权利要求14-15中任一项的组合物在制备用于预防和/或治疗至少一种病毒性疾病的药物组合物中的应用。
23.根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体,和/或根据权利要求14-15中任一项的组合物在制备用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的药物中的应用，所述疾病或病症与病毒进入和/或病毒复制相关和/或由RSV病毒的F蛋白和/或其病毒受体介导，与其生物学或药理学活性相关，和/或与其中涉及RSV病毒的F蛋白和/或其病毒受体的病毒-介导的生物学途径相关。
24.有效量的针对RSV病毒的F蛋白的根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体,和/或包含其的组合物在制备药物中的应用，其中根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体,和/或包含其的组合物是适合于施用于肺组织的形式。
25.根据权利要求24的应用，其中根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体,或包含其的组合物是适合于通过使用吸入器、鼻内递送装置或气溶胶进行施用的形式。
26.药物组合物，其包含根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体和适合于经肺递送的载体。
27.药物装置，其是用于液体的吸入器，气溶胶或干粉吸入器，所述药物装置包含根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体。
28.根据权利要求27的药物装置，其中所述液体是精细固体颗粒的混悬液或小滴。
29.药物活性量的根据权利要求1-11中任一项的多肽、化合物或构建体和/或包含其的药物组合物在制备用于预防和/或治疗至少一种病毒性疾病的药物中的应用，其中根据权利要求1-11中任一项的化合物或构建体和/或包含其的药物组合物是适合于向受试者的肺组织施用的形式。
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