CN102101884A - 一种阿胶多肽的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种阿胶多肽的制备方法及其应用。本发明所指的阿胶多肽是指分子量在3KD~20KD的阿胶多肽。本发明采用先超滤,再生物酶解,再超滤的方法来制备阿胶多肽,先将阿胶原料加水溶解后过分子量20KD的超滤柱,收集滤液备用;未通过的阿胶溶液再经过生物酶解后再过分子量20KD的超滤柱,收集滤液,并与之前的滤液合并后再过分子量3KD的超滤柱,收集未通过的阿胶溶液即为分子量3KD~20KD的阿胶多肽溶液。经药理研究证实,阿胶多肽优于传统阿胶制剂;同时为制作阿胶多肽的口服制剂和注射剂提供了工艺和原料。
Description
技术领域
本发明属于医药化学领域,特别涉及一种以阿胶为原料制备阿胶多肽的制备方法及其在医药行业的应用。
背景技术
阿胶,味甘性平,入肺、肝、肾经,具有补血止血、滋阴润肺的功效,始载于《神农本草经》,列为上品。《本草纲目》记载阿胶“疗吐血衄血,血淋尿血,肠风下痢,女人血痛,经水不调,无子,崩中带下,胎前产后诸疾”。阿胶的药用历史已有2000多年,多用于血虚萎黄、眩晕心悸、肌痿无力、心烦不眠、虚风内动、肺燥咳嗽、劳嗽咯血、吐血尿血、便血崩漏、妊娠胎漏等症。阿胶药用价值高,疗效确切,已成为治疗多种疾病,特别是一些疑难病症和滋补保健的重要中药。
阿胶的服用方法,一般为阿胶加一定量的水烊化后服用,或将阿胶烊化后加入药液中制成复方的液体制剂口服。现代研究证明,阿胶主要是由蛋白质(含量约80%)组成。阿胶分子为一多分散体系,其分子量分布在一个相当宽的范围内,有研究显示,阿胶分子量分布在20万左右和8~10万左右是比较集中的。大分子的阿胶蛋白成分,不容易被人体吸收利用,尤其对那些处于疾病状态下的人来说,本身消化功能就较弱,在这种情况下服用阿胶,不仅吸收利用较差,影响服用阿胶的疗效,而且还会增加胃肠道的负担。因此,现在已经有不少关于将阿胶大分子制备成低分子阿胶的相关专利研究。如专利号为CN101294186A的中国专利将阿胶原料药通过酶解技术和超滤技术制备成分子量小于3KD和5KD的阿胶低肽;专利号为CN101269090A的中国专利将纯阿胶通过酶解技术得到低分子量阿胶;专利号为CN101019890A的中国专利通过阿胶仿生学降解方法获得阿胶降解物;专利号为CN101285087A的中国专利通过复合酶制备分子量为1KD~5KD的阿胶多肽等等。上述专利研究都成功地将大分子阿胶转变为小分子阿胶,提高了阿胶的生物利用率和疗效,具有一定的社会意义和应用价值。
现代生物学实验证明,多肽与蛋白质和氨基酸相比具有更多的优点:多肽在肠道中的吸收率最好,一些低肽如二肽、三肽的吸收速度比同一组成的氨基酸快;多肽具有低抗原、促进脂质代谢、降低胆固醇、促进矿物质吸收、降血压、抗氧化等生理功能;一些多肽具有强化机体免疫、促进人体新陈代谢的作用。多肽具有较好的酸、热稳定性、水溶性,而且粘度随浓度变化迟钝。
目前多肽产品的研究主要集中在酪蛋白和水解大豆方面,有关阿胶的多肽研究并不多。药理研究表明,阿胶中含有大量的多肽,它能促进血中红细胞和血红蛋白的生成,具有补血、止血、滋阴润燥等作用。将阿胶大分子的蛋白质转化成分子量小一些的阿胶多肽,将会提高人体对阿胶的吸收利用,而且能更好地发挥阿胶的补血、止血、滋阴润燥等作用。目前国内专利一般都是制备低分子阿胶,如上述的专利号为CN101294186A、CN101269090A、CN101019890A的中国专利等,均采用酶解技术或超滤技术将阿胶大分子酶解成阿胶小分子。但由于阿胶分子是一种多分散的体系,上述专利在将阿胶大分子成功水解成小分子的同时,一些阿胶低肽如二肽、三肽等也很容易被水解成更小分子的氨基酸,从而使阿胶活性降低甚至丧失,失去了其补血、止血、滋阴润燥等作用。生物大分子活性与其结构密切相关,蛋白质的三维结构需要多种氨基酸通过肽键连接来维持,如果肽链太短或降解为氨基酸将失去生物大分子的活性,太长人体无法吸收利用。因此,如果能通过生物酶解和超滤技术相结合,在将阿胶大分子分解为更易于被人体吸收利用,提高疗效的阿胶多肽的同时,又能避免阿胶大分子酶解过度,一些多肽被水解为分子更小的氨基酸,从而使这部分阿胶活性降低甚至丧失,在实际工业化生产应用中更具有实际意义,可以节约生产成本,提高收率,而且临床疗效会更好。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种阿胶多肽的制备方法,通过先超滤、再生物酶解、再超滤的方法将人体不易吸收的阿胶大分子的水解成粘度小,人体易吸收的阿胶多肽,提高了人体对阿胶的吸收利用和疗效。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:将阿胶原料加5~20倍的水,在水浴30~60℃温度条件下加热搅拌,使阿胶烊化。去除阿胶溶液表面的脂肪层,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,备用。未通过超滤柱的为分子量大于20KD的阿胶大分子。调节水浴温度40~50℃,将分子量大于20KD的阿胶大分子溶液pH值调至适宜值,加入一定量的酶,进行酶解反应,边保温边搅拌,反应1小时。然后加热灭活酶活性,冷却,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,并与前面的滤液合并,合并后的滤液再过截留分子量为3KD的超滤柱,滤液为分子量小于3KD的阿胶溶液,未通过超滤柱的阿胶溶液即为分子量为3KD~20KD的阿胶多肽溶液。
本发明所制备的阿胶多肽是指分子量为3KD~20KD的阿胶多肽。
阿胶的原料可以采用阿胶生产过程中的阿胶浆,也可以使用成品的阿胶块,将阿胶块加水烊化后去除上层的脂肪即可使用。
本发明中所用的酶是指胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或两种或两种以上的混合物。
本发明中酶的加入量为阿胶质量的0.5%~5%。
本发明中酶解反应温度控制在40~60℃为宜,以45~55℃为最佳。
本发明中体系的pH值为1.5~8.5,视加入不同的酶而定。其中,胃蛋白酶1.5~2.0;胰蛋白酶7.5~8.5;木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶pH值控制在6.5~7.5。
本发明中酶解反应时间控制在0.8~2.0小时,以1.0~1.5小时为最佳。在一定的酶解反应时间内,阿胶多肽含量随着酶解反应时间延长而呈上升趋势;若酶解反应时间过长,阿胶分子中的多肽会继续水解生成氨基酸。因此要适当控制酶解时间,以获得更多的阿胶多肽。
本发明中所使用的超滤设备是截留分子量为3KD和20KD的中空纤维超滤装置。先用截留分子量为20KD的中空纤维超滤装置进行超滤,滤液即为分子量小于20KD的阿胶溶液,这部分溶液不再进行酶解反应,以免一些小分子的多肽如二肽、三肽等被酶解成更小分子的氨基酸而失去阿胶活性。分子量大于20KD的阿胶溶液再进行酶解反应,反应完后的溶液再用截留分子量为20KD的中空纤维超滤装置进行超滤,滤液即为分子量小于20KD的阿胶溶液。合并两次滤液,过3KD超滤装置,未通过的阿胶溶液即为分子量为3KD~20KD的阿胶多肽溶液。
对经过超滤后分子量仍大于20KD的阿胶溶液,根据需要可以进行二次或三次酶解、超滤等操作,可以得到更多的符合要求的阿胶多肽溶液,可以充分利用原料,节约生产成本。
本发明所制取的阿胶多肽溶液,可以用来制备阿胶多肽口服制剂,如阿胶多肽口服溶液、汤剂、糖浆剂、药酒、煎膏剂、酊剂、浸膏剂、茶剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂等。也可以制备阿胶多肽注射液,或经过真空冷冻干燥制备阿胶多肽粉针剂。
本发明中所得到的阿胶多肽溶液可以经过喷雾干燥或真空冷冻干燥方法得到阿胶多肽的固体粉状物。
通过药理实验证明了本发明的阿胶多肽(分子量3KD~20KD)优于传统的阿胶制剂和低分子阿胶(分子量小于3KD)。
取60只昆明种小鼠随机分为5组:空白组、模型组、阿胶多肽组、阿胶对照组、低分子阿胶组。除空白组外,每组在第1天和第6天分别以60mg/kg剂量腹腔注射吉西他滨造模。造模后第2天每天给予空白组和模型组0.9%氯化钠溶液0.8ml灌胃;阿胶多肽组给予上述方法制备的阿胶多肽溶液0.8ml;阿胶对照组给予市售阿胶烊化后的溶液0.8ml;低分子阿胶组给予上述方法制备的分子量小于3KD的阿胶溶液0.8ml,3次/d,连续给药7天。分别于造模前、造模后及末次给药2h后眼眶取血测白细胞(WBC)、红细胞(RBC),同时定时观察各组动物全身状况、运动情况及相应的体征。结果见下:
*表示p<0.05(均与模型组相比较)
研究结果表明:模型组小鼠造模后WBC、RBC下降显著,说明造模是成功的。阿胶对照组、阿胶多肽组和低分子阿胶组均有升高小鼠WBC、RBC作用,与模型组相比,有显著性差异(p<0.05),尤以阿胶多肽组升高最明显,低分子阿胶组要略好于阿胶对照组。
观察小鼠运动状况,造模及给药后,空白组小鼠运动情况正常,食欲佳,生长状况良好;造模组小鼠食欲明显下降,出现消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征;阿胶对照组、多肽组和低分子阿胶组的小鼠食欲一般,但较模型组明显增加,未出现明显衰竭体征,尤以阿胶多肽组小鼠为最好。
具体实施方式
下面通过实施对本发明作进一步说明,其目的仅在于更好地理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围:
实施例1:
取200g阿胶,加10倍量的水(重量比),在水浴40℃温度条件下边加热边搅拌,使阿胶烊化。去除阿胶溶液表面的脂肪层,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,备用。未通过超滤柱的为分子量大于20KD的阿胶大分子溶液。调节水浴温度50℃,将分子量大于20KD的阿胶大分子溶液pH值调至5.7,加入2g木瓜蛋白酶(阿胶量的1%),进行酶解反应,边保温边搅拌,反应1小时。然后取出经90℃水浴60min灭活酶活性,冷却,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,并与前面的滤液合并,合并后的滤液再过截留分子量为3KD的超滤柱,未通过超滤柱的阿胶溶液即为分子量为3KD~20KD的阿胶多肽溶液。
实施例2:
取300g阿胶,加8倍量的水(重量比),在水浴50℃温度条件下边加热边搅拌,使阿胶烊化。去除阿胶溶液表面的脂肪层,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,备用。未通过超滤柱的为分子量大于20KD的阿胶大分子溶液。调节水浴温度55℃,将分子量大于20KD的阿胶大分子溶液pH值调至6.0,加入4.5g中性蛋白酶(阿胶量的1.5%),进行酶解反应,边保温边搅拌,反应1.5小时。然后取出经煮沸30min灭活酶活性,冷却,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,并与前面的滤液合并,合并后的滤液再过截留分子量为3KD的超滤柱,未通过超滤柱的阿胶溶液即为分子量为3KD~20KD的阿胶多肽溶液。
实施例3:
取1000g阿胶,加15倍量的水(重量比),在水浴60℃温度条件下边加热边搅拌,使阿胶烊化。去除阿胶溶液表面的脂肪层,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,备用。未通过超滤柱的为分子量大于20KD的阿胶大分子溶液。调节水浴温度45℃,将分子量大于20KD的阿胶大分子溶液pH值调至2.0,加入10g胃蛋白酶(阿胶量的1%),进行酶解反应,边保温边搅拌,反应1.2小时。然后取出经流通蒸汽灭活酶活性,冷却,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,并与前面的滤液合并,合并后的滤液再过截留分子量为3KD的超滤柱,未通过超滤柱的阿胶溶液即为分子量为3KD~20KD的阿胶多肽溶液。
实例4
取上述任一实例制得的阿胶多肽溶液,加入0.5%苯甲酸钠,500ml蒸馏水,消毒,灌装,制成1000ml口服溶液,即为本发明的阿胶多肽口服溶液
实施例5:
取上述任一实例制得的阿胶多肽溶液,加入500ml注射用水,5~10℃水沉48小时,微孔滤膜过滤,灌装,制成1000ml注射液,即为本发明的阿胶多肽注射液。也可经真空冷冻干燥制得注射用阿胶多肽。
实施例6:
取上述任一实例制得的阿胶多肽溶液,经冷冻干燥或喷雾干燥制得浅黄色阿胶多肽粉末,加入适量淀粉、微晶纤维素、乳糖、糊精等药用辅料,可以制得阿胶多肽片剂、胶囊剂或颗粒剂等多种固体制剂。
实施例6
取上述任一实例制得的阿胶多肽溶液,加入适量的蔗糖或其它辅料、矫味剂、防腐剂等,可以制成阿胶多肽汤剂、糖浆剂、药酒、煎膏剂、酊剂、浸膏剂、茶剂等多种液体制剂。
Claims (11)
1.一种制备阿胶多肽的方法,其特征在于将阿胶原料加5~20倍的水,在水浴30~100℃温度条件下加热搅拌,使阿胶烊化。去除阿胶溶液表面的脂肪层,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,备用。未通过超滤柱的为分子量大于20KD的阿胶大分子。调节水浴温度30~50℃,将分子量大于20KD的阿胶大分子溶液pH值调至适宜值,加入一定量的酶,进行酶解反应,边保温边搅拌,反应1小时。然后加热灭活酶活性,冷却,溶液通过截留分子量为20KD的超滤柱进行超滤,收集滤液,并与前面的滤液合并,合并后的滤液再过截留分子量为3KD的超滤柱,滤液为分子量小于3KD的阿胶溶液,未通过超滤柱的阿胶溶液即为阿胶多肽溶液。
2.权利要求1所述的方法,其特征在于:所制备的阿胶多肽分子量为3KD~20KD。
3.权利要求1所述的方法,其特征在于:所用的酶是胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或两种或两种以上的混合物。
4.权利要求1所述的方法,其特征在于:所用酶的加入量为阿胶质量的0.5%~5%。
5.权利要求1所述的方法,其特征在于:酶解反应时的温度为30~55℃为宜,以40~45℃为最佳。
6.权利要求1所述的方法,其特征在于:体系pH值为1.5~8.5,视加入不同的酶而定。其中,胃蛋白酶1.5~2.0;胰蛋白酶7.5~8.5;木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶pH值控制在6.5~7.5。
7.权利要求1所述的方法,其特征在于:酶解反应时间控制在0.8~2.0小时,以1.0~1.5小时为最佳
8.权利要求1所述的方法,其特征在于:使用的超滤设备是截留分子量为3KD和20KD的中空纤维超滤装置。
9.权利要求1所述的方法,其特征在于:对经过超滤后分子量仍大于20KD的阿胶溶液,根据需要可以进行二次或三次酶解、超滤等操作,可以得到更多的符合要求的阿胶多肽溶液,
10.权利要求1所述的方法,其特征在于:所得到的阿胶多肽溶液可以经过喷雾干燥或真空冷冻干燥方法得到阿胶多肽的固体粉状物。
11.权利要求1所述的方法,其特征在于:所得到的阿胶多肽溶液可以用来制备阿胶多肽口服制剂,如阿胶多肽口服溶液、汤剂、糖浆剂、药酒、煎膏剂、酊剂、浸膏剂、茶剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂等;也可以制备阿胶多肽注射液,或经过真空冷冻干燥制备阿胶多肽粉针剂。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110622 |