CN101647822A - 一种土鳖虫的仿生酶解产物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种土鳖虫的仿生酶解产物及其用途，属中药领域。其技术方案是采用仿生酶解的方法，取土鳖虫，加水匀浆后，在适当的条件下，先以胃蛋白酶保温酶解，再以胰酶或胰蛋白酶保温酶解，所得的酶解物按不同的制剂要求制成制剂。本发明产物在治疗心脑血管疾病及跌打损伤等方面具有良好效果。

Description

一种土鳖虫的仿生酶解产物及其用途

技术领域

本发明涉及一种中药土鳖虫的仿生酶解产物及其在心脑血管疾病中的应用。属中药领域。

背景技术

土鳖虫系鳖蠊科昆虫地鳖(Eupolyphaga sinesis Walker)或冀地鳖(Steleophageplancyi(Boleny))的雌虫干燥体，为一种传统中药，最早记载于秦汉著作《神农本草经》，其性寒、味咸，有微毒。具有散血瘀、接骨续筋、消肿止痛、下乳通经等功效。

土鳖虫作为传统中药，临床应用很广泛，在入药的方式上通常采用原药材粉碎后直接服用，或水提或醇提或水提醇沉后服用，其所采取的提取方法比较传统。现在研究表明，小分子的寡肽类物质和氨基酸是很容易被小肠吸收的，而大分子的蛋白类在小肠里很难被吸收。传统的原粉直接服用，原药粉中大分子蛋白，只有少量在体内经过胃肠道的分解，变成小分子的寡肽而被吸收，由于药材粉碎的细度、胃肠道pH的变化造成水解的不完成，有效成分被吸收利用的少，造成大量药材的浪费疗效大大降低。水提、水提醇沉的提取工艺使得有大部分不溶入水、醇的蛋白被滤过除去，造成大量的药材浪费，疗效同样大大降低。

随着人们对动物药的认识深入，有人从土鳖虫中提取的单一的蛋白制成制剂，但制成口服制剂，由于经过胃肠道，容易被胃酶、胰酶酶解掉，其活性损失；若制成注射液，由于大分子的蛋白类容易引起免疫原性，存在一定的安全隐患。

应用酶解法水解动物蛋白，获得具有一定生理活性的生物活性肽是目前国内外研究的热点。由于不同的酶水解的部位不一样，得到的酶解产物也大不相同，比如胃蛋白酶主要酶解的部位为苯丙氨酸、酪氨酸和亮氨酸组成的肽键，胰蛋白酶主要酶解的部位为精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸组成的肽键，用单一的胃蛋白酶、胰酶或其他蛋白酶来酶解，均不能使蛋白被有效的吸收利用，这样就迫切的需要一种新的酶解方法——在动物或人体生物进化过程中已被证实、疗效确切的、模拟人体的消化过程的仿生酶解方法，将动物药中有效成分更容易吸收，更加安全的利用，同时更加充分利用原药材。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种更有效的，安全的土鳖虫仿生酶解产物；本发明的第二目的是提供该提取物在活血化瘀及治疗心脑血管疾病药物中的应用。

发明人提供一种土鳖虫的酶解产物，该药物采用仿生酶解的方法制备：

取土鳖虫，加水匀浆，调节pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保温酶解0.5～4小时，再调节pH至7.5～8.5，加入胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解2～8小时，即得。

进一步优化为：

取土鳖虫，加水匀浆，调节pH至1.5～2.5，加入土鳖虫量0.5％～5％的胃蛋白酶于35～45℃保温酶解1～3小时，再调节pH至7.5～8.5，加入土鳖虫量0.5％～5％的胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解3～6小时，即得。

较优的制备方法为：

取土鳖虫，加水匀浆，调节pH至2.0，加入土鳖虫量1％～2％的胃蛋白酶于40℃保温酶解1～3小时，再调节pH至8.0，加入土鳖虫量1％～2％的胰酶或胰蛋白酶于50℃保温酶解3～6小时，即得。

发明人经过试验筛选，土鳖虫药材加水匀浆加水倍量在2倍以上即可能达到较好的匀浆效果，由于匀浆时加少量的水即可达到较好的效果，故匀浆后、酶解前可再加入适量水，使酶解后的寡肽等成分能全部溶于水液中。匀浆液可预先加热至80～100℃，保温15～30分钟，再放冷至酶解所需温度，按以上操作方法酶解，其效果更强。按本发明技术方案进行酶解，当胃蛋白酶的酶活力不低于1200U/g，胰蛋白酶的酶活力不低于2500U/mg，胰酶的酪蛋白转化力达到25.0时，酶解效果较为充分；酶活力越高，酶解速度越快、效果越好。按本发明的方法操作，土鳖虫的抗凝血、溶血栓、抗菌等活性大大增强，优于以往常用的土鳖虫原粉、水提液、醇提液及水提醇沉液。

参考临床效果，土鳖虫现已制成各种剂型口服应用，疗效较好。经现代研究证明，土鳖虫中的肽类成分为确切的有效部位。人体经口服土鳖虫后，经胃蛋白酶及胰酶或胰蛋白酶的酶解、消化，以小分子肽类成分吸收而发挥疗效。发明人根据人体口服土鳖虫等动物药的过程，创造性的在体外采用人体仿生酶解的方法，先后对原料进行胃蛋白酶、胰蛋白酶或胰酶酶解，和人体直接口服药材原粉比较，所得被小肠吸收消化的有效物质群相同，但体外酶解选择较优的试验条件，酶解的更充分，进一步口服所得的药效更强，注射或粘膜、皮肤等途径用酶解成寡肽或小分子的活性部位群应用更有效。经过试验筛选，单独以胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解土鳖虫，效果均优于原粉直接口服，但都低于本发明的仿生酶解方法。原粉直接服用，蛋白水解的不充分；水提、水提醇沉、乙醇提取使蛋白质受热变性而不溶于水，被滤过除去。仿生酶解是取土鳖虫采用胃蛋白酶酶解，酶解后，继续用胰蛋白酶或胰酶酶解，这是完全模拟人体仿生酶解法能得到更多小分子小肽、寡肽类物质，疗效更高。采用体外酶解得到的小分子寡肽可以通过小肠粘膜，也可以透过阴道粘膜及皮肤，直接进入血液，发挥其药效作用；若经注射给药，小分子寡肽发挥作用更直接、迅速，同时没有引入异蛋白，减小了毒副作用。

本领域技术人员可以方便地将本发明小分子寡肽物质群，配合适当的辅料，制备成各种制成注射剂、口服制剂或外用制剂，如：

a、将酶解液直接喷雾干燥，加入适量的常规辅料如淀粉、乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠等制成胶囊剂、颗粒剂、片剂等制剂。

b、将酶解液加热至85℃杀酶后，滤过，滤液以超滤膜超滤，分取截留分子量5kD以下的溶液，可加入等渗调节剂、pH调节剂、防腐剂等制成小针或输液；也可加入甘露醇、乳糖等冻干制成冻干粉针剂。

c、将酶解液滤过，滤液以超滤膜超滤，截留分子量10kD以下的溶液，或滤液直接加卡波姆、壳聚糖等常规药用辅料，制成凝胶剂、湿敷剂、喷雾剂等制剂。

本发明提供的土鳖虫仿生酶解产物可以单独使用，也可以与其他药物成分联合使用，即：在药物活性成分中，可以只有该产物，还可以是其与其他药物的混合物，达到配合治疗、辅助治疗的目的。

本发明土鳖虫仿生酶解产物可以在活血化瘀药物中广泛应用，可用于治疗心脑血管疾病，包括中风、冠心病、心绞痛、脑血栓等；也可用于治疗癌症、跌打损伤等疾病，还可作为抗凝药使用。

有益效果

为进一步验证本发明产物相对于现有技术的进步效果，发明人进行了动物药效学的对比实验，实验中的“仿生酶解组”即为按本发明技术方案制得的土鳖虫酶解产物：

一、体外抗凝血活性试验

1、材料

1.1动物 Wister大鼠，购自北京大学实验动物科学部。

1.2药品未酶解组：取土鳖虫药材细粉(80目)40g，加入10倍量生理盐水，匀浆30分钟，搅匀，取1/4量，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

胃蛋白酶酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胃蛋白酶(酶活力为1200U/g)，同时调节pH至2.0，温度为40℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

胰蛋白酶酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胰蛋白酶(酶活力为2500U/mg)，同时调节pH至8.0，温度为50℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

仿生酶解组：取1/4匀浆液，加入1％胃蛋白酶(酶活力为1200U/g)，同时调节pH至2.0，温度为40℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，然后调pH至8.0，加入1％胰蛋白酶(酶活力为2500U/mg)，温度为50℃±2℃，保温同时搅拌酶解4h，85℃保温20min，放冷，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

空白对照组：即生理盐水组。

1.3试剂胃蛋白酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20070914；胰蛋白酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20071228；胰酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20071025；牛纤维蛋白原，供凝血酶效价测定用，购自中检所，批号：140626-200608；凝血酶，购自珠海经济开发区生物化学制药厂，批号：20071101。

2、方法与结果

2.1试验方法 大鼠腹腔静脉取血，3.8％枸橼酸钠(1∶9)抗凝，混合后，以3000r/min离心15分钟，取上清液，得到贫血小板血浆(PPP)。取血浆0.1ml，加入土鳖虫不同酶解液0.1ml，混匀，37℃保温3min，再加入已预温的凝血酶(10U/ml)0.2ml，混匀，记录出现絮状沉淀所需时间，即为凝血酶原时间(PT)。

2.2试验结果 土鳖虫不同酶解工艺对应的凝血酶原时间测定结果见表1。

表1 凝血酶原时间(PT)测定结果(n＝5)

组别	凝血酶原时间(s)
		未酶解组	48±1.43
胃蛋白酶酶解组	81±2.08
		胰蛋白酶酶解组	99±3.15*
仿生酶解组	228±1.15**
		生理盐水组	14±2.29

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

上述试验结果表明，仿生酶解工艺大大增加了土鳖虫的抗凝血活性，均比其余酶解工艺理想，较未酶解样品具有极显著性差异。

二、体外溶栓活性试验

1、材料

1.1药品 各供试品溶液的制备方法同上。

1.2试剂 琼脂糖，购自北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20080204；考马斯亮蓝R-250，购自上海展云化工有限公司，批号：0708019；胃蛋白酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20070914；胰蛋白酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20071228；胰酶，购自国药集团化学试剂有限公司，批号：F20071025；牛纤维蛋白原，供凝血酶效价测定用，购自中检所，批号：140626-200608；凝血酶，购自珠海经济开发区生物化学制药厂，批号：20071101。

2、方法与结果

2.1试验方法 取0.08g琼脂糖，加入磷酸盐缓冲液(PH7.6)10ml，加热使溶解，冷却至55℃，加入纤维蛋白原溶液(7mg/ml)0.8ml及凝血酶溶液(5U/ml)0.5ml，混匀，立即倒入已预热的培养皿中，待基本冷却后转移至7℃冰箱中放置20min，用直径0.5厘米打孔器打孔，即得。每个孔中均加入20μl对应样品液，以生理盐水做对照。于37℃培养箱中培养22h。取出，用考马斯亮蓝R-250染色20～30min，脱色液脱色，观察纤维蛋白溶圈，记录溶圈直径。

2.2试验结果 土鳖虫不同酶解工艺对应的纤溶活性测定结果见表2。

表2 纤维蛋白溶圈测定结果(n＝5)

编号	纤维蛋白溶圈直径(mm)	纤溶活性
			未酶解样品组	15±2.12	5.85±1.15
胃蛋白酶酶解样品组	20.8±1.64	11.25±2.07*
			胰蛋白酶酶解样品组	22±2.40	12.59±2.43*
仿生酶解样品组	26.5±3.15*	18.27±1.95**
			生理盐水组	6.2±2.38	1

注：与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；绝对纤溶活性均与空白组对比，以空白组为1。

上述试验结果表明，仿生酶解工艺大大增加了土鳖虫的纤溶活性，均比其余酶解工艺理想，较未酶解样品具有显著性差异。

三、对大鼠凝血时间及静脉血栓形成的影响

1、材料

1.1动物 Wister大鼠50只，雌雄各半，体重200±20g。购自北京大学实验动物科学部。

1.2药品 各供试品溶液的制备方法同上。

2、方法与结果

2.1试验方法 取Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重200±20g，随机分为5组，每组10只：未酶解样品组、胃蛋白酶酶解样品组、胰蛋白酶酶解样品组、仿生酶解样品组、空白对照组，灌胃给药每天1次，给药剂量分别为10ml/kg，空白对照组灌胃给予同体积生理盐水，连续7天。末次给药后1h，各组动物腹腔注射3.5％戊巴比妥钠麻醉，剖腹分离下腔静脉，于左肾静脉下穿一丝线结扎下腔静脉管，造成淤血，关闭腹腔。6h后，用内径为1mm的玻璃毛细管插入鼠内眦静脉丛取血，至毛细管血柱达5mm，每隔30s折断毛细管一段，检查有无出现凝血丝，计算毛细管采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间。再次打开腹腔，于结扎下方2cm处夹闭血管，纵行剖开，取出血栓，记录血栓有无并称重。

2.2试验结果 结果见表3。

表3 对大鼠凝血时间及静脉血栓形成的影响(X±S)

组别	动物数(只)	剂量(ml/kg)	凝血时间(s)	血栓湿重(mg)
					未酶解样品组	10	10	96.00±21.23**	20.55±1.79
胃蛋白酶酶解样品组	10	10	111.00±16.72**	16.05±2.21**
					胰蛋白酶酶解样品组	10	10	126.00±16.28**	15.47±1.58**
仿生酶解样品组	10	10	234.00±23.39***	11.26±2.27***
					空白对照组	10	-	63.00±20.22	27.15±2.46

与空白对照组比较(t检验)，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

以上试验结果表明，仿生酶解样品组、胃蛋白酶酶解样品组、胰蛋白酶酶解样品组均可明显延长凝血时间，且仿生酶解样品组优于其余两组，与空白对照组比较具有显著性差异，较未酶解样品组效果好；仿生酶解样品组、胃蛋白酶酶解样品组、胰蛋白酶酶解样品组均可明显减小血栓湿重，且仿生酶解样品组优于其余两组，与空白对照组比较具有显著性差异，较未酶解样品组效果好。

四、对高脂血症大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响

1、材料

1.1动物 Wistar大鼠，购自北京大学实验动物科学部。

1.2药品与试剂

仿生酶解样品组、未酶解样品组制备方法同上。

阳性对照药：取洛伐他汀2g，以水混悬至100ml。

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测试盒，总胆固醇(TC)测试盒，甘油三酯(TG)测试盒。

1.3仪器 ZS-3型半自动生化测定仪。

2、方法与结果

2.1动物模型的建立 用1％胆固醇，0.2％甲基硫氧嘧啶，0.3％胆盐，7.5％猪油，10％蛋黄粉，81％基础饲料制成高脂饲料，喂饲大鼠。

2.2试验方法 大鼠适应性饲养5天，禁食12h，检测血清TC和TG，按体重和血脂水平将大鼠随机分为6组，每组10只：即空白对照组、模型对照组、仿生酶解样品组、未酶解样品组、洛伐他汀组。除空白对照组喂饲基础饲料外，其余各组均喂高脂饲料，平均每鼠每天18g，不足给予普通饲料补充。在给予高脂饲料的同时，灌胃给药剂量均为10ml/kg，空白组和模型组灌胃给予同体积的生理盐水，每天给药1次，连续给药30天，末次给药后，禁食12h，下腔静脉取血，酶法测定TC、TG、HDL-C。

2.3试验结果 对高脂血症大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响见表4。

表4 对高脂血症大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响(mmol/L，X±S，n＝10)

组别	剂量(ml/kg)	TC	TG	HDL-C
					空白对照组	-	1.87±0.24	0.81±0.27	0.92±0.28
模型对照组	-	6.45±0.27	2.90±0.33	0.39±0.27
					仿生酶解组	10	3.38±0.46**	1.47±0.18**	0.66±0.36*
未酶解组	10	4.08±0.32*	1.68±0.28*	0.50±0.23*
					洛伐他汀组	10	3.39±0.34**	1.51±0.23**	0.63±0.25*

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

以上试验结果表明，模型对照组大鼠血中TC、TG水平显著高于空白对照组(P＜0.01)，HDL-C显著低于空白对照组(P＜0.01)，提示造模成功；与模型对照组比较，仿生酶解样品组和洛伐他汀组均能显著降低TC、TG，并升高血HDL-C水平；未酶解样品组与模型对照组比较，能降低TC、TG，升高血HDL-C水平。

五、对糖尿病大鼠模型高血糖的影响

1、材料

1.1动物 Wistar大鼠，购自北京大学实验动物科学部。

1.2药品与试剂

仿生酶解样品组、未酶解样品组的制备方法同上。

阳性对照药：取优降糖3g，以水混悬至100ml。

1.3仪器 血糖分析仪。

2、方法与结果

2.1试验方法选取健康大鼠100只，体重200±20g，雌雄各半，适应性饲养1周，室温18℃～24℃。造糖尿病模型前禁食12h后，从大鼠尾静脉取血，使用血糖分析仪测血糖值，选取血糖值在5.0mmol/L～6.0mmol/L范围内大鼠以55mg/kg链脲佐菌素腹腔注射；72h后禁食12h并取血测血糖，选择血糖值相近的大鼠50只，随机分为5组：模型组、优降糖组、仿生酶解样品组、未酶解样品组，另取血糖值在5.0mmol/L～6.0mmol/L范围内大鼠10只作为空白对照组，各组灌胃给药剂量均为10ml/kg，空白组灌胃给予同体积的生理盐水，每天给药1次，连续14d，分别于给药期间第3天、第7天、第14天禁食12h取血，测血糖值。

2.2试验结果 试验结果见表5。

表5 对糖尿病大鼠模型高血糖的影响(X±S，n＝10)

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

以上试验结果表明，以55mg/kg链脲佐菌素腹腔注射后可使大鼠血糖明显升高，仿生酶解样品组及优降糖组，第7天血糖明显降低，第14天其降糖作用更为明显；未酶解样品组第14天降糖作用较为明显，仿生酶解样品组优于未酶解样品组。

六、对荷瘤小鼠的影响

1、材料

1.1试验动物

S₁₈₀肿瘤腹水传代小鼠，购自吉林省肿瘤研究所；昆明种小鼠，SPF级，安徽省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(皖)2005-0001号。

1.2受试药物

仿生酶解样品组、未酶解样品组的制备方法同上。

阳性对照药：取环磷酰胺2g，以水混悬至100ml。

2、方法与结果

2.1实验方法 取昆明种小鼠，随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组、阳性药组、仿生酶解样品组、未酶解样品组。选取移植肿瘤7天，肿瘤生长良好，腹部膨隆明显的腹水传代小鼠，腹部皮肤消毒，用一次性无菌采血器经腹壁刺入腹腔，抽取腹水放入无菌烧杯中以生理盐水稀释成1∶3的癌细胞混悬液，于各组每只试验昆明种小鼠的右腋下接种0.2ml。各组小鼠于接种肿瘤次日开始每天灌胃给予相应供试品0.25ml/10g，空白对照组灌胃给予等体积生理盐水，连续给药30天。给药结束次日，将各组试验小鼠称重后处死，剥离出皮下肿块称重，比较各组肿瘤生长情况。

2.2实验结果 具体实验结果见表6。

表6 对小鼠(接种S₁₈₀)肿瘤生长的影响(X±S，n＝10)

组别	剂量(ml/10g)	肿瘤重(g)	抑瘤率(％)
				对照组	-	1.72±0.78	-
环磷酰胺组	0.25	0.82±0.52**	52.3
				仿生酶解组	0.25	0.85±0.65**	50.6
未酶解组	0.25	1.24±0.47*	27.9

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

上述试验数据表明，仿生酶解样品组具有明显的抗肿瘤作用，对S₁₈₀小鼠移植性肿瘤的抑瘤率较高；而未酶解样品组与对照组相比仍具有一定的显著性差异(P＜0.05)，可见本发明制得的仿生酶解样品具有明显的抗肿瘤作用。

上述实验结论，提示本发明酶解产物对于中风、冠心病、心绞痛、脑血栓、肿瘤、跌打损伤等疾病具有较好的治疗效果，还可以作为抗凝药使用。

具体实施方式

下面列举实施例，进一步说明本发明，各实施例仅用于说明本发明，并不限制本发明：

实施例1

取土鳖虫500g，加10倍量水匀浆，以稀盐酸调节pH至2.0，加入5g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，以1％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入5g胰酶于50℃保温酶解4小时，喷雾干燥，加入适量的淀粉，制粒，干燥，整粒，填装胶囊。

实施例2

取土鳖虫500g，加8倍量水匀浆，以稀盐酸调节pH至2.6，加入10g胃蛋白酶于37℃保温酶解3小时，以1％氢氧化钠溶液调节pH至7.5，加入10g胰蛋白酶于40℃保温酶解6小时，喷雾干燥，加入适量的微晶纤维素，制粒，干燥，整粒，压制成片。

实施例3

取土鳖虫500g，加15倍量水匀浆，以稀盐酸调节pH至3.0，加入25g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，以1％氢氧化钠溶液调节pH至8.5，加入25g胰蛋白酶于45℃保温酶解5小时，加热至85℃保温15分钟，滤过，滤液以超滤膜超滤，分取截留分子量5kD以下的溶液，制成注射液。

实施例4

取土鳖虫500g，加15倍量水匀浆，以稀盐酸调节pH至1.5，加入2.5g胃蛋白酶于40℃保温酶解1小时，以1％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入2.5g胰酶于50℃保温酶解3小时，加热至95℃保温30分钟，滤过，滤液以超滤膜超滤，分取截留分子量5kD以下的溶液，加入甘露醇，冷冻干燥，制成冻干粉针剂。

实施例5

取土鳖虫250g、水蛭250g，加15倍量水匀浆，以稀盐酸调节pH至2.0，加入2.5g胃蛋白酶于40℃保温酶解2小时，以1％氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入2.5g胰蛋白酶于50℃保温酶解4小时，加热至85℃保温15分钟，滤过，滤液以超滤膜超滤，分取截留分子量10kD以下的溶液，加卡波姆，润胀12小时，加三乙醇胺调pH8，搅匀，放置12h，搅匀，制成凝胶剂。

实施例6

取实施例3所制得注射剂治疗脑中风患者48例，男37例，女11例，年龄最小的45岁，最大的77岁；病程最短5h，最长4天，48例中合并高血压、冠心病、糖尿病17例，有其它合并症24例，无合并症7例。全部病例均经头颅CT或头颅核磁共振(MRI)证实为颅内动脉或椎基底动脉系统的血栓形成。治疗方案：注射，每次10ml，每日1次。用药30天后复查，基本痊愈和显著进步患者例数38例，占79.2％，症状明显改善患者例数7例，占14.6％。

Claims (10)

1、一种土鳖虫的仿生酶解产物，其特征在于该产物是按以下方法制备的：

取土鳖虫，加水匀浆，调节pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保温酶解0.5～4小时，再调节pH至7.5～8.5，加入胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解2～8小时，即得。

2、根据权利要求1所述的土鳖虫仿生酶解产物，其特征在于该产物是按以下方法制备的：

取土鳖虫，加水匀浆，调节pH至1.5～2.5，加入土鳖虫量0.5％～5％的胃蛋白酶于35～45℃保温酶解1～3小时，再调节pH至7.5～8.5，加入土鳖虫量0.5％～5％的胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保温酶解3～6小时，即得。

3、根据权利要求2所述的土鳖虫仿生酶解产物，其特征在于该产物是按以下方法制备的：

取土鳖虫，加水匀浆，调节pH至2.0，加入土鳖虫量1％～2％的胃蛋白酶于40℃保温酶解1～3小时，再调节pH至8.0，加入土鳖虫量1％～2％的胰酶或胰蛋白酶于50℃保温酶解3～6小时，即得。

4、根据权利要求1至3中任一所述的土鳖虫仿生酶解产物，其特征在于将土鳖虫加水匀浆后先加热至80～100℃并保温15～30分钟后，再放冷至所需温度进行酶解。

5、根据权利要求1至3中任一所述的土鳖虫仿生酶解产物，其特征在于所用的胃蛋白酶的酶活力不低于1200U/g，胰蛋白酶的酶活力不低于2500U/mg，胰酶的酪蛋白转化力不低于25.0。

6、权利要求1至5中任一所述的土鳖虫仿生酶解方法。

7、权利要求1至5中任一所述的土鳖虫仿生酶解产物在制备用于活血化瘀的药物中的应用。

8、权利要求1至5中任一所述的土鳖虫仿生酶解产物在制备用于治疗心脑血管和肿瘤疾病的药物中的应用。

9、权利要求1至5中任一所述的土鳖虫仿生酶解产物在制备用于抗凝的药物中的应用。

10、权利要求1至5中任一所述的土鳖虫仿生酶解产物在制备用于治疗跌打损伤的药物中的应用。