CN105343232A - 一种用于治疗心血管疾病的土鳖虫小肽有效部位组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗心血管疾病的土鳖虫小肽有效部位组合物，属中药领域。其特征是从土鳖虫、三七、丹参、钩藤中提取的中药有效部位，依一定比例配比，加制剂辅料按常规方法制成相应的剂型。本发明药物组合物用于治疗高血压、高粘血症、冠心病、心绞痛疾病具有良好效果。本发明药物原料成本低、纯中药制剂、疗效确切，具有较好的应用前景。

Description

一种用于治疗心血管疾病的土鳖虫小肽有效部位组合物

技术领域

本发明涉及一种用于治疗心血管疾病的中药有效部位组合物及其制备方法，具体地说从土鳖虫、三七、丹参、钩藤中提取的中药有效部位组合物及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

心血管疾病，又称为循环系统疾病，是一系列涉及循环系统的疾病，是世界范围内威胁人类健康的主要疾病，并己成为中国成人首要的死亡原因，是21世纪中国所面临的主要公共卫生问题之一。心血管疾病可以细分为急性和慢性，一般都是与动脉硬化有关，其基本症状为心悸呼吸困难、紫绀、眩晕、晕厥，常见病种有冠心病、高血压、高血脂、心绞痛、急性心肌梗死和运动猝死等。2008～2009年度《中国心血管疾病报告》指出：平均每10个成年人中就有两个人患心血管疾病，平均每10秒就有一个人死于心血管疾病然而，由于心血管疾病的潜伏期较长，而且在此期间经常很少发现病毒潜入的征兆，所以在发病前，很难得到人们足够的重视。心血管疾病除了潜伏期长之外，还有另一个特点就是致死率高。平均每两个死亡人数之中，便有一个因心血管疾病死亡。由此可见，因心血管疾病死亡的人数是所有死亡人数的一半，是当之无愧的“第一杀手”。

随着现代医学的发展，心血管疾病的防治工作取得了一定的进展，新的治疗手段层出不穷。在西医中，通常采用西药（如阿司匹林、β阻滞剂等）和手术治疗。然而，西药疗法疗效虽好，但副作用大并且具有窄谱性；手术治疗法则伤害大，容易给患者留下手术后遗症。因此，西医治疗未必是治疗心血管疾病的上上之策。

心血管疾病属于中医“胸痹、心痛”的范畴。病因病机为本虚标实，虚实夹杂。本虚多表现为气虚、心阳虚及气阴两虚；标实多表现为血瘀、气滞、痰浊、寒凝，临证时要注意辨证论治。应用中医气血理论指导心血管疾病的治疗，并提出心血管疾病的基本病机是气虚血瘀，治疗应以益气活血为基本治则。《症因脉证·胸痛论》提出“痰凝气结，或过饮辛热，伤其上焦则血积于内，而胸闷胸痛矣”。指出痰瘀阻络，导致胸痛。现代人多属湿浊偏胜体质，湿浊久之则变为痰浊，阻滞经络，气血运行失常，血液瘀滞，痰瘀互阻致心脉不畅，发为胸闷心痛。中医药在防治心血管疾病上有其独到之处，对改善临床症状，提高生活质量有显著疗效。相对于治疗心血管疾病化学药物的不良反应大的弊端，中药及复方制剂因其药物的多组分性，常常对心血管疾病从抗氧化，改善微循环，扩张冠脉，增加血流量等多方面同时发挥作用。目前应用的中药多为有效部位或复方制剂，其所含的化学成分较多，作用也较复杂，因此一些药理作用机制及临床的治疗范围有待进一步的研究，以便更好的指导该类中药的临床用药。

中药通过多途径、多靶点、整合调节机制发挥药效作用，具有系统性特点，但是，传统中药化学成分复杂，药效物质基础不明确，难于质量控制。治疗心血管疾病的各种中药有效部位的功效各有不同和侧重，用有效部位的配伍代替全方，既具备中药整体作用的特点，同时降低了其复杂性，便于药物的质量控制。因此，提供更加方便有效的中药有效部位复方制剂具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种治疗心血管疾病的中药有效部位组合物；

本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法和用途。

本发明的第一目的：以土鳖虫小肽、三七总皂苷、丹参总酚酸和钩藤总生物碱为原料，加入适当药用辅料，制成相关的剂型。

本发明药物的组合物的原料药的组成及配比为：土鳖虫小肽8～12重量份、三七总皂苷3～7重量份、丹参总酚酸6～10重量份、钩藤总生物碱2～4重量份。

本发明中药药物组合物优选的组成及配比为：土鳖虫小肽10重量份；三七总皂苷5重量份；丹参总酚酸8重量份；钩藤总生物碱3重量份。

上述小肽有效部位中小肽的含量不低于提取物的40%，总皂苷有效部位中总皂苷不低于提取物的50%（w/w），总酚酸有效部位中总酚酸不低于提取物的50%（w/w），总生物碱有效部位中总生物碱不低于提取物的60%（w/w）。

该药物组合物可以加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂中的任一种。然后可以再加入其他具有治疗心血管疾病的有效部位、有效成分、化学合成品或者半合成品，然后再加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂中的任一种。

本发明中药组合物的制备方法包括以下步骤：

①土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至1.5～2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7.5～8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%～50%；

②三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷；其中总皂苷的含量不得低于总提取物的50%。

③丹参总酚酸的制备：取丹参药材，粉碎后加入15倍药材重量的水，于80加热提取3次，每次2小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩，醇沉至80，去醇，水溶解后以树脂：药材1:1过大孔树脂，先用6倍量水洗脱，再用70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液，减压条件下浓缩，蒸干得丹参总酚酸；其中总酚酸的含量不得低于总提取物的50%。

④钩藤总生物碱的制备：取钩藤药材，粉碎后加入15倍药材重量的70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量2%盐酸溶解后，按照树脂量：药材量1:1通过阳离子交换树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用8倍量含5%的氯化钠的50%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取3次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱；其中总生物碱有效部位中总生物碱不低于提取物的60%。

⑤按照比例取上述小肽、总皂苷、总酚酸和总生物碱，不加辅料或加入辅料，制成药学上可以接受的剂型。

增加：各树脂的型号可以是D101大孔树脂、D201大孔树脂、AB-8大孔树脂，001×2.5、001×7、001×15型阳离子交换树脂。

小肽、总皂苷、总酚酸、总生物碱的含量测定方法为：

小肽含量测定方法：取牛血清白蛋白对照品适量，精密称定，加水制成每毫升含0.25mg的溶液，即得。精密量取对照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置具塞试管中，各精密加水至1.0ml，再分别精密加碱性铜试液1．0ml，摇匀，各精密加入福林酚试液［取福林试液储备液(1→16)］4．0ml，摇匀，于55℃水浴中保温5min，取出，置冷水浴中冷却10min，迅速测定，以0管为空白，照紫外－可见分光光度法，在650nm波长处测定吸光度以吸光度为纵坐标，牛血清白蛋白质量为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。精密量取提取液1ml，别置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液;照标准曲线的制备项下自分别精密加碱性铜试液1.0ml起，依法测定吸光度，从回归方程中计算多肽的含量。

总皂苷含量测定方法：精密称取三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.962mg的溶液，既得。分别精密吸取10.0，20.0，30.0，40.0，50.0ul，分别置磨口具塞试管中，热水浴挥干溶剂，加5%香草醛-冰醋酸溶液(新配制)0.2ml，高氯酸0.8ml，于60恒温水浴15min，立即置冰水浴内冷却，精密移取冰醋酸5mL，摇匀，以相应试剂为空白，分别在560nm波长处测定A值，得回归方程。取供试品适量，按标准曲线制作方法测定，相应试剂随行空白对照，在波长560nm处测定吸收度A，从回归方程中计算总皂苷含量。

总酚酸测定方法：精密称取干燥的丹酚酸B适量，加0.1mol/L盐酸溶液成每1ml含12.96mg的溶液，既得。精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、40ml、5.0ml，分别置10ml棕色量瓶中，加0.lmol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。以0.lmol/L盐酸溶液作空白，照分光光度法，在286nnl的波长处测定A值，得回归方程。取供试品适量，按标准曲线制作方法测定，相应试剂随行空白对照，在波长286nm处测定吸收度A，从回归方程中计算总酚酸含量。

总生物碱测定方法：精密称取钩藤碱对照品适量，加2%盐酸溶液制成含钩藤碱100μg/mL的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.2、0.4、

0.6、0.8、1.0mL分别置于10mL量瓶中，用2%盐酸溶液稀释至刻度。以相应的溶剂为空白，根据分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录VC)试验，在250nm波长处测定A值，得回归方程。取供试品适量，按标准曲线制作方法测定，相应试剂随行空白对照，在波长250nm处测定吸收度A，从回归方程中计算总生物碱含量。

经过发明人的对比优选后，确定了上述有效部位的最佳重量配比为：土鳖虫小肽8～12重量份、三七总皂苷3～7重量份、丹参总酚酸6～10重量份、钩藤总生物碱2～4重量份。按照比例取上述土鳖虫小肽、三七总皂苷、丹参总酚酸、钩藤总生物碱，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

本发明药物组合物可制成的剂型为片剂和胶囊剂。

以上所说的药剂学常规辅料包括但不限于润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁；崩解剂，如羧甲淀粉钠；粘合剂，如纤维素衍生物；赋形剂，如乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸镁，微晶纤维素等。

本发明有效部位组合物用于治疗心血管疾病。

有益效果

本发明中药组合物，是按传统中医药理论同时结合现代医学研究成果组方而成，具备中医学特色，同时符合现代医学的治疗原则。

本发明的有益之处是：本发明提供的中药组合物是从土鳖、三七、丹参、钩藤药材中提取出来的有效部位的组合物，相比较现有的治疗心血管疾病的中药，其化学成分简单明确，在药理研究方面易于陈明其作用机制在生产中更易于药物的质量控制。

本发明以传统中医理论为指导思想，同时结合国内外的相关研究成果，在治疗心血管疾病的方面效果显著。方中以丹参为君，丹参味苦，微寒。归心、肝经，功能活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈，为治心血管疾病常用药，可以活血祛瘀，痛经止痛，故为君；现代药理研究亦证明，丹参具有扩张冠状动脉，防止心肌缺血和心肌梗死，改善微循环，降低心肌耗氧量等作用，被广泛用于临床各种心血管疾病的治疗。钩藤甘，凉。归肝、心包经，息风定惊，清热平肝；现代药理作用研究表明，钩藤碱具有明显的降压作用，此外还有抗心律失常、抗癫痫、抗血小板凝集和抗血栓的形成。三七甘、微苦，温。归肝、胃经，散瘀止血，消肿定痛，亦是心血管疾病常用药；现在药理研究，三七能缩短出血和凝血时间、降低血压、减慢心率，对于药物诱发的心率失常均有保护作用。土鳖咸，寒；有小毒，归肝经，破血逐瘀，续筋接骨，现代药理研究证明，土鳖水提液有抗血栓和溶解血栓的作用，还具有调脂作用，能延缓动脉粥样硬化的形成。

本发明产品成分明确，疗效稳定，服用量小，安全性高，不仅符合传统中医药治疗心血管疾病的组方原则，而且符合中药现代化的发展要求，对推动医药产业从仿制向自主创新转变以及对推动我国中药国际化具有重要意义。经查阅相关文献和专利，未检索到以土鳖、三七、丹参、钩藤的有效部位做为原料，生产加工并制成适宜药物制剂用于心血管疾病的治疗或辅助治疗的报道。

为进一步验证本发明的药理作用，用本发明片剂和胶囊剂进行动物药效学实验。

试验内容：本发明对大鼠急性缺血心肌的保护作用。

1试剂、样品和动物

1.1试剂

硝苯地平片，北京太洋药业有限公司，批号041003，乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，肌酸激酶（CK）试剂盒。

1.2供试样品

样品1：（本发明片剂）

取土鳖5kg，适当粉碎，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至1.5～2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7.5～8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽（含量40%）；取三七5kg，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷（含量50%）；取丹参药材5kg，粉碎后加入15倍药材重量的水，于80加热提取3次，每次2小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩，醇沉至80，去醇，水溶解后以树脂：药材1:1过大孔树脂，先用6倍量水洗脱，再用70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液，减压条件下浓缩，蒸干，得丹参总酚酸（含量50%）；取钩藤药材5kg，粉碎后加入15倍药材重量的70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量2%盐酸溶解后，按照树脂量：药材量1:1通过阳离子交换树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用8倍量含5%的氯化钠的50%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取3次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱（含量60%）。

取土鳖虫小肽200g、三七总皂苷100g、丹参总酚酸160g、钩藤总生物碱60g，加入微晶纤维素120g、羧甲淀粉钠10g、淀粉20g、硬脂酸镁10g，制成片剂，每片0.25g。

样品2：（本发明胶囊剂）

采用样品1制备的有效部位原料。

取土鳖虫小肽100g、三七总皂苷50g、丹参总酚酸80g、钩藤总生物碱30g，加入淀粉至300g，制成胶囊剂1000粒，每粒0.3g。

样品3：

采用样品1制备的有效部位原料。

取土鳖虫小肽100g、三七总皂苷20g、丹参总酚酸80g、钩藤总生物碱60g，加入淀粉至300g，制成胶囊剂1000粒，每粒0.3g。

样品4：

采用样品1制备的有效部位原料。

取土鳖虫小肽100g、三七总皂苷50g、丹皮提取物80g、钩藤总生物碱30g，加入淀粉至300g，制成胶囊剂1000粒，每粒0.3g。

给药前，取上述相应制剂，研细，采用纯水配制成所需要的药物浓度。

1.3动物

健康雄性大鼠，体重210-230g，由山东中医药大学试验动物中心提供。

2实验方法

健康大鼠70只，随机分为7组，1）空白组：仅开胸、穿线不结扎，2）模型组及各给药组：按照模型制作方法进行造模。阳性组，灌服硝苯地平（3mg/kg/d）；样品①组，灌服样品①用水所配成的药物（75mg/kg/d）；样品②组，灌服样品②用水所配成的药物（50mg/kg/d）；样品③组，灌服样品③用水所配成的药物（50mg/kg/d）；样品④组，灌服样品④用水所配成的药物（50mg/kg/d）；各组动物按让述剂量连续灌胃给药7d，空白组与模型组均给予等容量生理盐水（l0ml/kg/d）。造模24h后，颈总动脉取血2ml，血凝固后离心取血清用于测定CK、LDH。分别取大鼠血清20ul、10ul．按CK、LDH测定试剂盒说明书操作，测定血清CK、LDH含量。酶活性单位以U·ml^-1血清表示。

所有数据用平均是±标准差（x±s）表示，采用T检验方法统计组间差异，结果见表1。

表1本发明样品对急性心肌缺血大鼠血清CK、LDH含量的影响（x±s）

注：与正常组比较P＜0.005；与模型组比较P＜0.01。

说明本发明组（①②）对由于大鼠急性心肌缺血具有保护作用。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步阐明本发明的技术方案，但是本发明申请所要保护的内容不仅仅如此。实际生产中的用量不仅限于实例中的药物用量，可以用吨、千克、克等计量单位，但是各原料药物的用量配比仍依据本方明的技术方案。

实施例1：

处方：土鳖虫小肽200g、三七总皂苷100g、丹参总酚酸160g、钩藤总生物碱60g

制法：土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至1.5～2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7.5～8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%～50%；

三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷；其中三七皂苷R1的含量为3%～7%。

丹参总酚酸的制备：取丹参药材，粉碎后加入15倍药材重量的水，于80加热提取3次，每次2小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩，醇沉至80，去醇，水溶解后以树脂：药材1:1过大孔树脂，先用6倍量水洗脱，再用70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液，减压条件下浓缩，蒸干得丹参总酚酸；其中丹酚酸B的含量为3%～8%。

钩藤总生物碱的制备：取钩藤药材，粉碎后加入15倍药材重量的70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量2%盐酸溶解后，按照树脂量：药材量1:1通过阳离子交换树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用8倍量含5%的氯化钠的50%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取3次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱；其中钩藤碱的含量为5%～10%。

取上述有效部位，粉碎混合，加入微晶纤维素240g、羧甲淀粉钠20g、淀粉40g、硬脂酸镁20g，制成片剂，每片0.25g。

实施例2：

处方：土鳖虫小肽100g、三七总皂苷50g、丹参总酚酸80g、钩藤总生物碱30g

制法：土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至1.5～2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7.5～8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%～50%；

三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷；其中三七皂苷R1的含量为3%～7%。

丹参总酚酸的制备：取丹参药材，粉碎后加入15倍药材重量的水，于80加热提取3次，每次2小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩，醇沉至80，去醇，水溶解后以树脂：药材1:1过大孔树脂，先用6倍量水洗脱，再用70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液，减压条件下浓缩，蒸干得丹参总酚酸；其中丹酚酸B的含量为3%～8%。

钩藤总生物碱的制备：取钩藤药材，粉碎后加入15倍药材重量的70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量2%盐酸溶解后，按照树脂量：药材量1:1通过阳离子交换树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用8倍量含5%的氯化钠的50%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取3次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱；其中钩藤碱的含量为5%～10%。

取上述有效部位，粉碎混合，加入淀粉至300g，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，每粒0.3g，即得。

实施例3：

处方：土鳖虫小肽120g、三七总皂苷30g、丹参总酚酸80g、钩藤总生物碱40g

制法：土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至1.5～2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7.5～8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%～50%；

三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷；其中三七皂苷R1的含量为3%～7%。

丹参总酚酸的制备：取丹参药材，粉碎后加入15倍药材重量的水，于80加热提取3次，每次2小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩，醇沉至80，去醇，水溶解后以树脂：药材1:1过大孔树脂，先用6倍量水洗脱，再用70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液，减压条件下浓缩，蒸干得丹参总酚酸；其中丹酚酸B的含量为3%～8%。

钩藤总生物碱的制备：取钩藤药材，粉碎后加入15倍药材重量的70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量2%盐酸溶解后，按照树脂量：药材量1:1通过阳离子交换树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用8倍量含5%的氯化钠的50%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取3次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱；其中钩藤碱的含量为5%～10%。

取上述有效部位，粉碎混合，加入淀粉至300g，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，每粒0.3g，即得。

实施例4：

处方：土鳖虫小肽8kg、三七总皂苷7kg、丹参总酚酸6kg、钩藤总生物碱2kg

制法：土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至1.5～2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7.5～8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%～50%；

三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷；其中三七皂苷R1的含量为3%～7%。

丹参总酚酸的制备：取丹参药材，粉碎后加入15倍药材重量的水，于80加热提取3次，每次2小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩，醇沉至80，去醇，水溶解后以树脂：药材1:1过大孔树脂，先用6倍量水洗脱，再用70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液，减压条件下浓缩，蒸干得丹参总酚酸；其中丹酚酸B的含量为3%～8%。

钩藤总生物碱的制备：取钩藤药材，粉碎后加入15倍药材重量的70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量2%盐酸溶解后，按照树脂量：药材量1:1通过阳离子交换树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用8倍量含5%的氯化钠的50%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取3次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱；其中钩藤碱的含量为5%～10%。

取上述有效部位，粉碎混合，加入微晶纤维素2.4kg、羧甲淀粉钠2kg、淀粉4kg、硬脂酸镁2kg，制成片剂，每片0.25g。

实施例5：

处方：土鳖虫小肽80g、三七总皂苷70g、丹参总酚酸60g、钩藤总生物碱20g

制法：土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至1.5～2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH7.5～8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%～50%；

三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入15倍量70%的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，按树脂量与药材比例1:1通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用80%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液；减压条件下浓缩，蒸干，得三七总皂苷；其中三七皂苷R1的含量为3%～7%。

丹参总酚酸的制备：取丹参药材，粉碎后加入15倍药材重量的水，于80加热提取3次，每次2小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩，醇沉至80，去醇，水溶解后以树脂：药材1:1过大孔树脂，先用6倍量水洗脱，再用70%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集4BV的洗脱液，减压条件下浓缩，蒸干得丹参总酚酸；其中丹酚酸B的含量为3%～8%。

钩藤总生物碱的制备：取钩藤药材，粉碎后加入15倍药材重量的70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量2%盐酸溶解后，按照树脂量：药材量1:1通过阳离子交换树脂柱层析，先用6倍量水洗脱，再用8倍量含5%的氯化钠的50%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取3次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱；其中钩藤碱的含量为5%～10%。

取上述有效部位，粉碎混合，加入微晶纤维素240g、羧甲淀粉钠20g、淀粉40g、硬脂酸镁20g，制成片剂，每片0.25g。

实施例6：

取实施例1所制片剂治疗65例心血管疾病患者。治疗方案：治疗方案：口服，一次4粒，一日3次，4周为一个疗程。2个疗程后观察治疗前后临床症状、体征、心电图疗效、血脂血压水平等。结果：治愈28例，好转20例，显效12例，无效5例，总有效率为92.3%。

Claims (4)

1.一种用于治疗心血管疾病的土鳖虫小肽有效部位组合物，其特征在于是由从土鳖中提取的土鳖虫小肽、从三七中提取的三七总皂苷、从丹参中提取丹参总酚酸和从钩藤中提取的钩藤总生物碱组成的，其中，各有效部位的重量配比为：

土鳖虫小肽8～12重量份

三七总皂苷3～7重量份

丹参总酚酸6～10重量份

钩藤总生物碱2～4重量份。

2.如权利要求1所述的土鳖虫小肽有效部位组合物，其特征在于各有效部位的重量配比为：土鳖虫小肽10重量份、三七总皂苷5总量份、丹参总酚酸8重量份、钩藤总生物碱3重量份。

3.如权利要求1或2所述的土鳖虫小肽有效部位组合物，其特征在于其制备方法包含以下步骤：

①土鳖虫小肽的制备：取土鳖，适当粉碎，加5～20倍量水匀浆5～15分钟，加热煮沸5～30分钟，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量0.5%～2%的胃蛋白酶，在30℃～45℃条件下酶解1～3小时，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至7～9，加入底物量0.5%～2%的胰蛋白酶，在30℃～50℃条件下酶解3～6h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸5～15分钟，放冷，离心，收集上清液，用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽；其中土鳖虫小肽的含量为30%～50%；

②三七总皂苷的制备：取三七根茎，粉碎后加入5～20倍量60％～80%的乙醇回流提取2～4次，每次1～3小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用少量水溶解后，通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用水洗脱，再用70%～90%乙醇洗脱，合并乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥,得三七总皂苷；其中三七皂苷R1的含量为3%～7%；

③丹参总酚酸的制备：取丹参药材，粉碎后加入5～20倍药材重量的水，于50～100℃加热提取1～4次，每次1.0～3.0小时，滤过，合并每次提取液，冷却至室温；提取液浓缩或省略，醇沉淀或省略，去醇，水溶解后行聚酰胺柱色谱或阴离了交换树脂或大孔树脂，用小于10％乙醇或水洗脱除杂质，继以乙醇或比洗脱杂质浓度高的乙醇洗脱出有效成分，减压回收溶剂，得丹参总酚酸；其中丹酚酸B的含量为3%～8%；

④钩藤总生物碱的制备：取钩藤药材，粉碎后加入5～20倍药材重量的60%～70%乙醇，回流提取2～4次，每次1～3小时，合并乙醇提取液回收溶剂，干燥得乙醇提取物，乙醇提取物用适量1%～4%盐酸溶解后，通过阳离子交换树脂柱层析，先用水洗脱，再用含5%～10%的氯化钠的40%～60%乙醇溶液洗脱，合并洗脱液，用5%～10%氢氧化钠溶液调至近中性后，碱液浓缩至干，将干燥品用无水乙醇加热回流提取2～5次脱盐，所得乙醇提取液合并后减压浓缩乙醇，干燥，得钩藤总生物碱；其中钩藤碱的含量为5%～10%；

⑤按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

4.权利要求1或2所述的土鳖虫小肽有效部位组合物用于治疗高血压、高粘血症、冠心病、心绞痛。