CN112274586B - 一种治疗肝纤维化的中药复方制剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗肝纤维化的复方中药制剂,它是由青蒿、千日红花、无花果、萆薢按照一定重量分配比所制成,其制备方法是将上述原料药,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时。提取液合并,回收乙醇,浓缩蒸干,减压干燥,加入不同剂型相应的适量辅料,用常规的制剂方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂等。本发明所述中药复方制剂经药效学试验结果表明具有显著改善肝纤维化病变损伤的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗肝纤维化的中药复方制剂及其制备方法与应用,属中药制药领域。
背景技术
病毒性肝炎、酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝病、药源性肝病等是全球范围内常见高发的慢性肝病,其中相当大的一部分将发展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌,是严重危害人类健康的重大疾病之一。肝纤维化是各种慢性肝病的共同病理过程,逆转肝纤维化可以阻断肝脏疾病进展。现已明确,肝纤维化的发病实质是细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)过度沉积。肝纤维化时肝脏汇管区和肝小叶内大量以I、III型胶原为主的纤维组织异常增生,破坏肝脏正常结构,损害肝脏正常功能。现已公认,活化型HSC是纤维化肝脏ECM最主要的细胞来源。当肝脏处于正常生理条件时,HSC表现为静息状态,外形呈现星型,细胞内富含脂滴,低表达α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),不合成或仅合成少量ECM;当肝脏受到损伤因子刺激时,HSC表现为活化状态,外形呈现梭型,细胞内脂滴大量丢失,高表达α-SMA,过量合成ECM,并沉积于窦周间隙和肝细胞坏死区,阻碍肝血窦与肝脏细胞之间的物质交换与信息交流,导致肝纤维化的发生与发展。然而目前临床尚无疗效确切的肝纤维化治疗策略,如何有效防治肝纤维化是困扰当今医学界的重大难题。因此,研发安全有效的肝纤维化防治药物具有极其重大的临床意义。
为解决上述问题,本发明旨在提供一种可用来治疗肝纤维化的中药复方及其制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,它具有改善肝纤维化病变损伤和减少胶原沉积的功效。本发明的另一目的在于提供该中药复方制剂的制备方法。
本发明所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,由以下重量配比的原料药制成:青蒿20-40份,千日红花10-30份,无花果5-15份,萆薢3-7份。
所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,由以下重量配比的原料药制成:青蒿30份,千日红花20份,无花果10份,萆薢5份。
所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,制备方法为:将所述原料药提取后添加适宜的辅料,用常规的制备方法制成口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂或微丸。
所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,制备方法为:取青蒿、千日红花、无花果、萆薢,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时,提取液合并,回收乙醇,浓缩蒸干,减压干燥,减压干燥条件:温度为60~70℃,压力为0.08mpa,粉碎成细粉,添加辅料,压片,制备成片剂。
所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂在制备治疗肝纤维化疾病药物中的应用。
本发明所述中药复方制剂来源于南京中医药大学科研配方,从青蒿,千日红花,无花果,萆薢四种传统中草药通过严格标准筛选而来,具有配伍用药、整体调治、标本兼治等特点,对肝纤维化疾病具有明显的疗效。肝纤维化的中医病机以“正虚血瘀”为主要病机,其“正虚”为脾气虚弱和肝肾阴虚,“因虚致积”可促使疾病进一步发展为肝硬化或肝癌。本发明基于这一病证特点,运用活血化瘀,祛湿化痰,软坚散结的临证方法,制作成一种治疗慢性肝病的中药复方制剂。本发明在使用软坚散结、活血化瘀药物基础上,加用益气健脾、养阴柔肝、健胃止泻之品,在重视补益扶正之法之时,同时关注调补脏腑。
君药:青蒿,性寒,味苦、辛。归胆经、肝经。清透虚热,凉血除蒸,截疟。用于阴虚发热,夜热早凉,骨蒸劳热,疟疾寒热,湿热黄疸,可清泄肝胆和血分之热。《本草新编》记载:“青蒿,专解骨蒸劳热,尤能泄暑热之火,泄火热而不耗气血,用之以佐气血之药,大建奇功,可君可臣,而又可佐可使,无不宜也。但必须多用,因其体既轻,而性兼补阴,少用转不得力。又青蒿之退阴火,退骨中之火也,然不独退骨中之火,即肌肤之火,未尝不共泻之也,故阴虚而又感邪者,最宜用耳。又青蒿最宜沙参、地骨皮共享,则泻阴火更捷,青蒿能引骨中之火,行于肌表,而沙参、地骨皮只能凉骨中之火,而不能外泄也。”青蒿作为君药,可清退虚热,用治肝肾阴虚,对肝纤维化起主要的治疗作用。
臣药:千日红花性味甘、微咸,性平。归肺、肝经。具有止咳平喘,清肝明目,解毒的作用。我国多地本草及《中药大辞典》均收载了千日红,对其功效、主治进行了记载。如《福建民间草药》记载:祛风,镇肝,退热,明目;《南宁市药物志》记载:清肝明目,散结消瘿。治瘰疬初起,肝热目痛,血压高头痛。此药选为臣药,有辅助君药平肝定肝,二药相须为用,可加强治疗之效;兼以其显著抗腹泻之效,能够缓解君药青蒿毒性。再者取其止咳平喘之用,有未病先防之义,以期未雨绸缪之用。
佐药:无花果,果实性味甘、平,根叶性味淡、涩、平。《本草汇言》记载:“入手足太阴、手阳明经。”,主为肺经,胃经,大肠经。《便民图篡》、《常氏方》、《随息居饮食谱》等古籍皆有记载无花果可用于肝癌的治疗。现代临床证实,无花果提取液对肝癌有明显抗肿瘤能力。其含有大量有机酸及多种酶有保肝解毒功效。据《云南中草药》记载:“健胃止泻,祛痰理气。治食欲不振,消化不良,肠炎,痢疾,咽喉痛,咳嗽痰多,胸闷。”,无花果有健胃清肠,消肿解毒,治肠炎,痢疾,开胃等功效。此方所选用君药青蒿,脾胃虚寒、食欲不振及腹泻者不可食用,但佐药无花果可健脾开胃,同时可用于食欲不振及腹泻症状,即可改善君药部分副作用,协助君、臣药以加强治疗作用。
使药:萆薢,苦,平,性微温,味微酸。入肝、胃、膀胱经。祛风,利湿。治风湿顽痹,腰膝疼痛,小便不利,淋浊,遗精,湿热疮毒。《本草通玄》记载:“萆薢,胃与肝药也。搜风去湿,补肾强筋,主白浊茎中痛,阴痿失溺,恶疮。入肝搜风,故能理风与筋之病。入胃祛湿,故能理浊与疮之病。”,据现代研究表明,萆薢主要含有甾体类、二芳基庚烷类、黏液质及鞣质等化学成分,具有抗肿瘤、抗骨质疏松、降尿酸、降血脂等药理作用。萆薢和中缓急,泻中有补、利中有滋,协同发挥清热利湿、凉血之效,调和诸药,用以为使。
总之,该中药复方制剂依托于中医药传统理论,“辨证论治”与“整体观念”是本制剂研发的重要理论基础和有效的物质来源,同时也是本发明的独特优势。本制剂不仅安全无毒,而且治疗肝纤维化效果显著,本制剂的研发将会给肝纤维化疾病患者带来福祉,同时给相关企业带来巨大的经济效益,也将推动相关产业的迅速发展。
附图说明
附图1为本发明对纤维化大鼠血清肝损伤指标的影响(ALT水平)
附图2为本发明对纤维化大鼠血清肝损伤指标的影响(AST水平)
附图3为本发明对纤维化大鼠血清肝损伤指标的影响(ALP水平)
附图4为本发明对纤维化大鼠血清肝损伤指标的影响(羟脯氨酸)
附图5为本发明对纤维化大鼠血清肝纤维化指标的影响(血清LN)
附图6为本发明对纤维化大鼠血清肝纤维化指标的影响(HA水平)
附图7为本发明对纤维化大鼠血清肝纤维化指标的影响(IV-C水平)
附图8为本发明对纤维化大鼠血清肝纤维化指标的影响(PC-III水平)
附图9为本发明对肝纤维化大鼠肝脏结构的影响
附图10为本发明对肝纤维化大鼠肝组织中胶原沉积的影响
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明所述中药复方制剂的制备以及治疗肝纤维化的功效。
实施例1:口服液制备
取青蒿30g,千日红花20g,无花果10g,萆薢5g,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时,滤过,合并滤液,减压浓缩(温度为60~70℃,压力为0.08Mpa)至相对密度1.05-1.10(温度为60~70℃),加入1%阿斯巴甜,2%柠檬酸,搅匀,静置12小时以上,滤过,分装,灭菌,即得。
实施例2:胶囊剂制备
取青蒿30g,千日红花20g,无花果10g,萆薢5g,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时。提取液合并,回收乙醇,浓缩蒸干,减压干燥(温度为60~70℃,压力为0.08mpa),粉碎成细粉。加乙醇制粒,干燥,装入胶囊,即得。
实施例3:颗粒剂制备
取青蒿30g,千日红花20g,无花果10g,萆薢5g,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时,滤过,合并滤液,减压浓缩(温度为60~70℃,压力为0.08Mpa)至相对密度1.05-1.10(温度为60~70℃),加入2%阿斯巴甜,搅匀,喷雾干燥,干式制粒,以铝塑复合膜分装,即得。
实施例4:片剂制备
取青蒿40g,千日红花10g,无花果15g,萆薢3g,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时。提取液合并,回收乙醇,浓缩蒸干,减压干燥(温度为60~70℃,压力为0.08mpa),粉碎成细粉,加淀粉,制粒,压片即得。
实施例5:微丸制备
取青蒿20g,千日红花10g,无花果5g,萆薢7g,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时。提取液合并,回收乙醇,浓缩蒸干,减压干燥(温度为60~70℃,压力为0.08mpa),粉碎成细粉,加辅料,制备成微丸。
本发明中千日红花属苋科千日红属,拉丁学名为Gomphrena globosa Linn,其余药材符合药典标准。
实施例6:本发明治疗肝纤维化药理作用研究
6.1动物模型制备:75只雄性SD大鼠(体重200g-220g)随机分为正常对照组、模型组、中药复方制剂低中高剂量组(150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg口服液),每组15只大鼠。大鼠送至GLP实验动物中心后,给予自由进食与饮水,大鼠饲料符合中国标准(LAD1000),大鼠饮水满足《实验动物环境与设施》(GB14925-2010)要求。大鼠给予14小时光照与10小时黑夜标准光照周期、室温控制在18-26℃之间,相对湿度维持在40-70%之间,噪音控制在85分贝以下,氨浓度维持在20PPm以下,通风换气8-12次/小时。所有大鼠经过1周适应性饲养之后再进行后续实验。将CCl4与橄榄油按体积1:1配制成50%CCl4溶液用于建立肝纤维化模型。
6.2给药方案:根据实施例1所述制备150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg中药复方制剂口服液用于药物治疗。除正常对照组之外,其余4组大鼠按照1ml/kg剂量腹腔注射50%CCl4溶液,每周3次,持续8周,正常对照组大鼠在相同时间点、相似位置、腹腔注射相同体积橄榄油作为空白对照。在腹腔注射50%CCl4溶液4周之后,中药复方制剂低中高剂量组分别按照150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg剂量灌胃本发明所述中药复方制剂,每天1次,持续4周。所有实验结束之后,严格按照实验动物处死(鼠、兔类)标准操作规程(SOP),每只大鼠称重并记录后腹腔注射50mg/kg戊巴比妥溶液进行麻醉,使用0.05mm内径的毛细管迅速采血,然后剖开腹腔分离肝脏,使用相机采集每只大鼠完整肝脏图片,利用分析天平对每个肝脏进行称重并记录。收集的血液样本室温静置2小时后,使用离心机于3500转/分钟下离心15分钟,吸取上清,-20℃条件下保存,用于后续血清学指标检测。每个大鼠肝脏选取一小部分固定于10%福尔马林溶液用于后续的组织病理学检查。
6.3实验结果:
6.3.1中药复方制剂对纤维化大鼠血清肝损伤指标的影响
我们利用生化仪对纤维化大鼠血清肝损伤指标进行了检测。结果显示,正常对照组大鼠血清ALT水平是125±2.3U/L,AST水平是47±2.7U/L,ALP水平是212±1.9U/L,羟脯氨酸水平是23±4.1U/L,肝损伤指标均处于较低水平,而模型组大鼠血清ALT水平是423±5.7U/L,AST水平是185±1.3U/L,ALP水平是538±4.2U/L,羟脯氨酸水平是73±2.5U/L,肝损伤指标均显著升高,中药复方制剂能够剂量依赖性地降低纤维化大鼠血清肝损伤指标ALT、AST、ALP、羟脯氨酸水平,高剂量组大鼠血清ALT水平是168±5.6U/L,AST水平是49±3.5U/L,ALP水平是243±6.4U/L,羟脯氨酸水平是24±2.8U/L,提示中药复方制剂能够有效改善肝损伤(见表1及图1-4)。
表1:各组大鼠血清肝损伤指标ALT、AST、ALP、HYP检测结果(x±s)
(与正常对照组相比,###P<0.001,与模型组相比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)
6.3.2中药复方制剂对纤维化大鼠血清肝纤维化指标的影响
我们利用试剂盒对纤维化大鼠血清肝纤维化标进行了检测。结果显示,正常对照组大鼠血清LN水平是56±1.7μg/L,HA水平是115±9.8μg/L,IV-C水平是15±3.1μg/L,PC-III水平是24±3.5μg/L,肝纤维化指标均处于较低水平,而模型组大鼠血清LN水平是174±5.8μg/L,HA水平是332±6.4μg/L,IV-C水平是62±2.4μg/L,PC-III水平是71±1.6μg/L,肝纤维化指标均显著升高,中药复方制剂能够剂量依赖性地降低纤维化大鼠血清肝纤维化指标LN、HA、IV-C、PC-III水平,高剂量组大鼠血清LN水平是61±3.2μg/L,HA水平是123±5.3U/L,IV-C水平是21±5.8U/L,PC-III水平是27±2.4U/L,提示中药复方制剂能够有效改善肝纤维化病理损伤(见表2及图5-8)。
表2:各组大鼠血清肝纤维化指标LN、HA、IV-C、PC-III检测结果(x±s)
(与正常对照组相比,###P<0.001,与模型组相比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)
6.3.3中药复方制剂对肝纤维化大鼠肝脏结构的影响
通过宏观的肉眼观察,我们发现正常组大鼠肝脏色泽鲜红、无组织病变,而模型组大鼠肝脏色泽泛白、出现严重纤维化组织病变;中药复方制剂能够剂量依赖性地改善CCl4致大鼠肝脏组织病变,其中高剂量中药复方制剂对肝组织损伤的改善程度最显著。我们也采用HE染色对各组大鼠肝脏进行组织病理学检查。结果显示,正常组大鼠肝脏肝小叶结构完整,肝细胞排列整齐,无炎细胞浸润;模型组大鼠肝脏出现假小叶,肝细胞排列紊乱,纤维结缔组织增生明显,炎细胞浸润严重;在中药复方制剂治疗组中,随着给药剂量的增加,大鼠肝脏假小叶逐渐消失,肝细胞逐步恢复整齐排列,纤维结缔组织明显减少,炎细胞浸润基本消失,提示中药复方制剂能够显著改善纤维化肝脏结构改变(见图9)。
6.3.4中药复方制剂对肝纤维化大鼠肝组织中胶原沉积的影响
我们使用Sirius red染色考察中药复方制剂对纤维化肝脏胶原沉积的改善作用。将固定于10%福尔马林溶液中的肝组织取出,放入通风橱内选择合适的目标位置,用手术刀小心仔细地分离适宜大小组织块,放入脱水机依次梯度酒精进行脱水,将脱水后的组织块放入包埋机进行标准化的石蜡包埋,接着将蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。用载玻片将组织固定,并放进60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。对组织切片进行常规masson染色以考察肝脏胶原沉积情况。结果显示,正常组大鼠肝脏基本没有胶原沉积,而模型组大鼠肝脏胶原沉积严重,不同剂量中药复方制剂能够不同程度地减轻胶原沉积,提示中药复方制剂能够减轻纤维化肝脏胶原沉积(见图10)。
综上所述,我们发现本发明所述中药复方制剂可以显著降低肝纤维化模型大鼠血清谷草转氨酶与谷丙转氨酶水平,减轻纤维化肝脏胶原沉积、改善纤维化肝脏病理损伤。
Claims (5)
1.一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,其特征在于,由以下重量配比的原料药制成:青蒿20-40份,千日红花10-30份,无花果5-15份,萆薢3-7份。
2.如权利要求1所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,其特征在于,由以下重量配比的原料药制成:青蒿30份,千日红花20份,无花果10份,萆薢5份。
3.如权利要求1所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,其特征在于,制备方法为:将所述原料药提取后添加适宜的辅料,用常规的制备方法制成口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂或微丸。
4.如权利要求1所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂,其特征在于,制备方法为:取青蒿、千日红花、无花果、萆薢,加60%乙醇10倍量,加热回流提取3次,每次2小时,提取液合并,回收乙醇,浓缩蒸干,减压干燥,减压干燥条件:温度为60~70℃,压力为0.08MPa ,粉碎成细粉,添加辅料,压片,制备成片剂。
5.如权利要求1所述一种治疗肝纤维化的中药复方制剂在制备治疗肝纤维化疾病药物中的应用。
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CN115475200B (zh) * | 2022-09-30 | 2023-09-01 | 南京中医药大学 | 一种治疗肝纤维化的中药复方制剂及其制备方法 |
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2020
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