CN105267943A - 一种地龙生物活性小肽有效部位组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种祛斑美容的地龙小肽有效部位组合物，属于中药领域。该组合物是由从地龙中提取的地龙小肽、从白芍中提取的白芍总苷、从白术中提取的白术总多糖和从白茯苓提取的白茯苓总多糖按一定配比组成，加入药剂学常规辅料，制成各种剂型。本发明药物组合物有补气益血、美白润肤作用，适于气血虚寒（内分泌失调）导致的皮肤粗糙、萎黄、黄褐斑、色素沉着、痘痘、粉刺、痤疮等。

Description

一种地龙生物活性小肽有效部位组合物

技术领域

本发明涉及一种具有祛斑美白作用的中药有效部位组合物及其制备方法，具体地说从地龙、白芍、白术、白茯苓中提取的中药有效部位组合物及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

现代生活中，由于生理机能和外部环境及乱用化妆品等诸多不良因素，在临床中就出现了很多，面部患有妊辰斑，雀斑，黄褐斑，日晒斑，粉刺，青春痘，红血丝，化妆品引起的铅沉积(铅脸)，等色素沉积，这是现代女性面部皮肤一种很常见的现象。爱美是每个女性共有的心理特别是面部，可一旦面部出现了妊辰斑，雀斑，黄褐斑，日晒斑，粉刺，青春痘，红血丝及使用化妆品引起的铅沉积(铅脸)等色素沉积现象就会痛苦不已，影响面部美观。因此，对色素斑及萎黄的合理预防治疗具有非常重要的意义。

地龙(Earthworm)是环节动物门寡毛纲类动物，是我国传统的一味中药。地龙具有广泛的药理作用，效果显著，如溶栓和抗栓、抗肿瘤、平喘、促进皮肤修复、抗菌等作用。地龙体中富含蛋白质，蛋白质总量约占干重的40%～70%，包括蚓激酶、类蛋白、钙调素结合蛋白、地龙新钙结合蛋白和蚓激酶等。目前，地龙的应用主要包括传统中药煎服或制成地龙粉直接服用的形式入药，以及生产制备天然的具有溶栓、抗栓和抗肿瘤等作用的大分子蛋白提取物。此外，地龙还是一种良好的生产肽类物质的原料，如具有防治高血压和抗菌等方面应用的地龙肽制品。但还未见报道采用地龙制备活性肽应用于祛斑美白产品的开发，而且采用地龙作为原料开发制备肽的过程中，仍存在制备分离过程繁杂，制备目标肽分子量过大以及分布范围过广，针对性不强等问题。

白芍、白术和白茯苓皆源于我国传统古方“三白汤”，是传统的润泽皮肤、美白的药物。在中医理论中，白芍味甘、酸，性微寒，有养血的作用，可以治疗面色萎黄、面部色斑、无光泽；白术性温，味甘、苦，有延缓衰老的功效；白茯苓味甘、淡，性平，能祛斑祛痘增白。现代的药理研究也证实了上述各药的美容作用：白芍有清除自由基、抗氧化的作用；白术、白茯苓可以增强免疫功能，扩张血管。

目前，市面上的祛斑美白产品中含有微量铅元素或有效部位的药效成分含量少，作用差。虽然能有效达到祛斑美白的目的，但是长期使用，对身体有害，而且易出现铅汞毒导致的反弹斑。本发明为纯中药有效部位提取的有效成分，作用效果显著且对身体健康无副作用。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种具有祛斑美白作用的中药有效部位组合物；

本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法和用途。

本发明的第一目的：以地龙小肽、白芍总苷、白术总多糖和白茯苓总多糖为原料，加入适当药用辅料，制成相关的剂型。

本发明药物的组合物的原料药的组成及配比为：地龙小肽2～5重量份、白芍总苷5～14重量份、白术总多糖2～5重量份、白茯苓总多糖8～15重量份。

本发明中药药物组合物优选的组成及配比为：地龙小肽3重量份、白芍总苷8重量份、白术总多糖4重量份、白茯苓总多糖10重量份。

上述地龙小肽有效部位中小肽的含量不低于提取物的50%，白芍总苷有效部位中总苷不低于提取物的80%，白术总多糖有效部位中总多糖不低于提取物的40%，白茯苓总多糖有效部位中总多糖不低于提取物的85%。

该药物组合物可以加入相应辅料，适合于本发明的剂型选自口服制剂、外用制剂或注射剂。口服制剂选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、滴丸、糖浆剂、合剂、露剂、泡腾剂、糊剂、乳剂、茶剂、口服液、悬浮剂(干悬剂或悬浮液)或茶剂等；外用制剂选自凝胶剂、膏剂(贴膏剂、凝膏剂或软膏剂)、搽剂、洗剂、涂抹剂、膏药、霜剂、软膏剂、栓剂等；注射剂选自针剂(注射剂)、输液或冻干粉针等。可采用本领域熟知的制剂技术手段制备得到本发明的组合物。然后可以再加入其他具有祛斑美白作用的有效部位、有效成分、化学合成品或者半合成品，然后再加入相应辅料，适合于本发明的口服制剂、外用制剂或注射剂中的任意一种。

本发明中药组合物的制备方法包括以下步骤：

①地龙小肽的制备：取地龙，适当粉碎，加15倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，时时搅拌并调节pH在8.0范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH7.0，加入1%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为200D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得地龙小肽；其中地龙小肽的含量为40%～70%。

白芍总苷的制备：取白芍，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO₂流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，加入70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，每次加入的70%乙醇的量为药材重量的2倍，得萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍总苷提取物。其中芍药苷的含量60%～80%。

白术总多糖的制备：取白术，适当粉碎，加10倍量的体积分数为70%的乙醇，加热回流1.5h，过滤，收集残渣并加入10倍量的蒸馏水90℃的条件下加热回流3h，过滤，残渣用6倍量蒸馏水洗涤两次，收集滤液，浓缩，干燥，得白术总多糖。

白茯苓总多糖的制备：取白茯苓药材，粉碎成粗粉，加10倍量的水煎煮2次，第一次3h，第二次2h，合并提取液，用稀盐酸调节pH值至2.0左右，放置过夜，过滤，滤液过D101大孔吸附树脂柱，用6倍量水洗脱树脂柱，流出液继续过AB-8大孔吸咐树脂柱，用6倍量水洗脱树脂柱，再用95%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集8BV的洗脱液，减压回收乙醇至尽，真空干燥即得白茯苓提取物。

按照比例取上述小肽、总苷和总多糖，不加辅料或加入辅料，制成药学上可以接受的剂型。

其中，各树脂的型号可以是HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700、D101、AB-8。

地龙小肽、白芍总苷、白术总多糖、白茯苓总多糖的含量测定方法为：地龙小肽的含量测定方法为：取比伐芦定对照品适量，精密称定，加水溶解并制成每1mL含15.08mg的溶液，精密量取对照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL，分别置具塞试管中，各加水至1.0mL，再分别加入双缩脲试剂4.0mL，立即混匀，室温放置30min，照紫外-可见分光光度法，在540nm的波长处测定吸光度(A);同时以0号管为空白。另精密取土鳖虫仿生酶解小肽0.4g，精密加水40mL，超声处理(功率250W，频率40Hz，30min，滤过，精密量取续滤液1.0mL，同法测定。从线性回归方程计算供试品溶液中蛋白浓度，并乘以稀释倍数，计算，即得。

白芍总苷的测定方法：色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序见表1；流速：1.0mL/min；检测波长：230nm；柱温：25℃；

表1液相系统洗脱程序

另取本品中粉约0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，经0.45um的微孔滤膜滤过。取芍药苷约23mg，精密称定，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀；精密吸取芍药苷对照品和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

白术总多糖的测定方法：精密取葡萄糖对照品溶液(0.1mg／m1)0，2，4，6，8，lOml于lOml量瓶中，加水定容，精密移取1.Oml，加5%苯酚1.Oml和浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，于40℃水浴加热20min，冷却至室温，在490nm波长处测定吸收度。另精密称取精制多糖101mg于100ml量瓶中，加水溶解定容，摇匀。移取溶液2.5ml于50ml量瓶中,加水定容,摇匀，为供试品溶液。精密移取供试液1.0ml于具塞试管中，计算出多糖供试液中以葡萄糖计的浓度和换算因子f=1.232(n=5)。另取白术多糖提取物，过二号筛，在60℃下干燥至恒重。精密称取粗粉0.2g置250ml锥形瓶中，加入50ml70%的已醇，冷浸2h，超声20min。趁热过滤，药渣用70%的热乙醇洗涤后，挥干乙醇。加入50ml蒸馏水回流提取1h，趁热过滤，药渣用热水洗涤，合并滤液于100ml量瓶中，定容，摇匀。精密移取上述溶液10ml于100ml量瓶中，定容摇匀，即为供试品溶液。计算出样品中多糖含量即得。

白茯苓总多糖的测定：同白术多糖测定方法。

经过发明人的对比优选后，确定了上述有效部位的最佳重量配比为：地龙小肽3重量份、白芍总苷8重量份、白术总多糖4重量份、白茯苓总多糖10重量份。

按照比例取上述地龙小肽、白芍总苷、白术总多糖、白茯苓总多糖，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

本发明药物组合物可制成的剂型选自胶囊剂、颗粒、合剂、乳剂、口服液、凝胶剂、膏剂(贴膏剂、凝膏剂或软膏剂)、涂抹剂、膏药、霜剂、软膏剂、针剂(注射剂)中的任意一种。

本发明所述药学上可接受的载体为本领域熟知的用于制备上述制剂的常用赋形剂或辅料。口服制剂或外用制剂常用的赋形剂或辅料包括粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠或羟丙甲基纤维素等)、淀粉浆等；填充剂，例如乳糖、糖粉、糊精等；润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇等；崩解剂，例如淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂，例如十二烷基硫酸钠、水或醇等。本发明所述注射剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于：抗氧剂，例如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠等；抑菌剂，例如0.5%苯酚、0.5%三氯叔丁醇；调节剂，例如盐酸、枸橼酸等；乳化剂，例如聚山梨酯-80、卵磷酯等；增溶剂，例如吐温-80、甘油等。

本发明有效部位组合物用于祛斑美白。

有益效果

本发明中药组合物，是按传统中医药理论同时结合现代医学研究成果组方而成，具备中医学特色，同时符合现代医学的治疗原则。

研究表明，达到祛斑美白效果有以下三种途径：一种是防止色素的生成。抑制黑色素合成过程中3种酶的活性,或者抑制内皮素对黑色素细胞分化和酪氨酸酶活性的激活作用,都能抑制与排除黑色素的生成。另一种是促使已生成的色素排出体外,包括还原淡化已合成的黑素,或者促进表皮更新,加快黑色素、脂褐素和血红素向角质层转移,最终随老化的角质细胞脱落而排出体外。此外，防晒或抑制酪氨酸酶的活性均能有效抑制皮肤色素斑的生成。中医认为，黑色素的形成是由于气血阻滞、肝气郁结、肾阴不足和劳神伤脾等原因，采用具有补血、活血和理气作用的植物中草药，通过养血、活血和舒肝解郁来减少色素沉着。

本发明以传统中医理论为指导思想，同时结合国内外的相关研究成果，在祛斑美白的方面效果显著。方中地龙味咸，性寒。有清热定惊，通络，平喘，利尿的作用。现代药理研究亦证明，地龙具有溶栓和抗栓、抗肿瘤、平喘、促进皮肤修复、抗菌等的作用。白芍味甘、酸，性微寒，有养血的作用，可以治疗面色萎黄、面部色斑、无光泽。现代的药理研究证实了白芍有清除自由基、抗氧化、扩张冠状动脉，降低血压、护肝、解痉、镇痛的作用。白术性温，味甘、苦，有延缓衰老的功效。现代药理研究证明了白术可以增强免疫功能，扩张血管、利尿、降血糖、抗凝血、抗肿瘤、抗菌、促进蛋白质合成的作用。白茯苓味甘、淡，性平，能祛斑祛痘增白。现代药理研究证明了白茯苓可以增强免疫功能、扩张血管、抗菌、白细胞的抑制、预防肝损伤的作用。各味药相互作用，共同发挥疗效。

本发明产品成分明确，疗效稳定，服用量小，安全性高，不仅符合传统中医药祛斑美白的组方原则，而且符合中药现代化的发展要求，对推动医药产业从仿制向自主创新转变以及对推动我国中药国际化具有重要意义。经查阅相关文献和专利，未检索到以地龙小肽、白芍总苷、白术总多糖和白茯苓总多糖作为原料，生产加工并制成适宜剂型用于祛斑美白的报道。

试验内容：对组合物祛斑美白效果的评价

1实验内容

1.1供试样品

样品1：（本发明胶囊剂）

取地龙，适当粉碎，加15倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，时时搅拌并调节pH在8.0范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH7.0，加入1%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为200D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得地龙小肽；取白芍，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO₂流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，加入70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，每次加入的70%乙醇的量为药材重量的2倍，得萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍总苷提取物；取白术，适当粉碎，加10倍量的体积分数为70%的乙醇，加热回流1.5h，过滤，收集残渣并加入10倍量的蒸馏水90℃的条件下加热回流3h，过滤，残渣用6倍量蒸馏水洗涤两次，收集滤液，浓缩，干燥，得白术总多糖；取白茯苓药材，粉碎成粗粉，加10倍量的水煎煮2次，第一次3h，第二次2h，合并提取液，用稀盐酸调节pH值至2.0左右，放置过夜，过滤，滤液过D101大孔吸附树脂柱，用6倍量水洗脱树脂柱，流出液继续过AB-8大孔吸咐树脂柱，用6倍量水洗脱树脂柱，再用95%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集8BV的洗脱液，减压回收乙醇至尽，真空干燥即得白茯苓提取物。

取地龙小肽30g、白芍总苷80g、白术总多糖40g、白茯苓总多糖100g，加入羟丙纤维素12g，混匀，用50%糖浆制成软材，18目筛制粒，70℃烘干，20目筛整粒，加入硬脂酸镁2.3g，混匀，装胶囊，制成1000粒，每粒0.4g。

样品2：（本发明凝胶剂）

采用样品1制备的有效部位原料。

取卡波姆10g，加500ml水，润胀24小时，以三乙醇胺调pH9，搅拌均匀，作为基质；取地龙小肽3g、白芍总苷8g、白术总多糖4g、白茯苓总多糖10g，加入200ml水溶解，过滤，取滤液加入基质中，再加入丙二醇20g、苯甲酸钠0.5g，加纯化水至总量1000g，制成凝胶剂，共分装为50支，每支20g。

样品3：

采用样品1制备的有效部位原料。

取地龙小肽100g、白芍总苷40g、白术总多糖100g、白茯苓总多糖55g，加入羟丙纤维素12g，混匀，用50%糖浆制成软材，18目筛制粒，70℃烘干，20目筛整粒，加入硬脂酸镁2.3g，混匀，装胶囊，制成1000粒，每粒0.4g。

样品4：

采用样品1制备的有效部位原料。

地龙小肽30g、白芍总苷80g、白术总多糖40g、白茯苓总多糖100g，加入羟丙纤维素12g，混匀，用50%糖浆制成软材，18目筛制粒，70℃烘干，20目筛整粒，加入硬脂酸镁2.3g，混匀，装胶囊，制成1000粒，每粒0.4g。

取上述相应制剂，胶囊口服，一次3～6粒，一日2次，三个月为一个疗程。1个疗程后观察前后色素斑治疗情况。凝胶剂涂抹脸部，一次3～5g，早晚各一次，三个月为一个疗程。1个疗程后观察前后色素斑治疗情况。

试用于200例病例中，女性患者192例，男性患者8例；患者年龄21～60岁；临床观察对象均符合中西医诊断标准的患者。

2实验方法

实验为受试对象200人随机分为4组，每组50人。将上述样品1、样品2、样品3、样品4分别作用于组1、组2、组3、组4，持续用药至三个月，疗效标准分为痊愈、显效、有效和无效，观察受试对象皮肤颜色及色素斑的变化。

3实验结果

见表2：

表2色素斑患者用药后治疗效果

通过表格可以看出，实施例1、实施例2的有效率明显高于实施例3、实施例4。说明本发明所含地龙小肽、白芍总苷、白术总多糖、白茯苓总多糖的中药组合物安全有效，祛斑美白效果显著。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步阐明本发明的技术方案，但是本发明申请所要保护的内容不仅仅如此。实际生产中的用量不仅限于实例中的药物用量，可以用吨、千克、克等计量单位，但是各原料药物的用量配比仍依据本方明的技术方案。

实施例1：

处方：取地龙小肽30g、白芍总苷80g、白术总多糖40g、白茯苓总多糖100g

制法：地龙小肽的制备：取地龙，适当粉碎，加15倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40℃条件下酶解3h，时时搅拌并调节pH在8.0范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH7.0，加入1%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为200D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得地龙小肽；其中地龙小肽的含量为56%。

白芍总苷的制备：：取白芍，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO₂流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，加入70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，每次加入的70%乙醇的量为药材重量的2倍，得萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍总苷提取物。其中芍药苷的含量72%；

白术总多糖的制备：取白术，适当粉碎，加10倍量的体积分数为70%的乙醇，加热回流1.5h，过滤，收集残渣并加入10倍量的蒸馏水90℃的条件下加热回流3h，过滤，残渣用6倍量蒸馏水洗涤两次，收集滤液，浓缩，干燥，得白术总多糖。

白茯苓总多糖的制备：取白茯苓药材，粉碎成粗粉，加10倍量的水煎煮2次，第一次3h，第二次2h，合并提取液，用稀盐酸调节pH值至2.0左右，放置过夜，过滤，滤液过D101大孔吸附树脂柱，用6倍量水洗脱树脂柱，流出液继续过AB-8大孔吸咐树脂柱，用6倍量水洗脱树脂柱，再用95%乙醇以2BV/h的速度洗脱，收集8BV的洗脱液，减压回收乙醇至尽，真空干燥即得白茯苓提取物。

取上述个有效部位，加入羟丙纤维素12g，混匀，用50%糖浆制成软材，18目筛制粒，70℃烘干，20目筛整粒，加入硬脂酸镁2.3g，混匀，装胶囊，制成1000粒，每粒0.4g。

实施例2：

处方：地龙小肽3g、白芍总苷8g、白术总多糖4g、白茯苓总多糖10g

制法：制备各有效部位的同实施例一，取上述有效部位，加入20g丙二醇，搅拌均匀，撒入0.5g羧甲基纤维素钠，稍搅拌，静置至全部溶解，添加纯化水至1000g，搅拌均匀，静置24小时，即得。

实施例3：

处方：取地龙小肽20g、白芍总苷50g、白术总多糖20g、白茯苓总多糖60g

制法：制备各有效部位的同实施例一，取上述个有效部位，加入羟丙纤维素7.2g，混匀，用50%糖浆制成软材，18目筛制粒，70℃烘干，20目筛整粒，加入硬脂酸镁1.4g，混匀，装胶囊，即得。

实施例4：

处方：取地龙小肽50kg、白芍总苷140kg、白术总多糖50kg、白茯苓总多糖250kg

制法：制备各有效部位的同实施例一，取上述个有效部位，加入羟丙纤维素25kg，混匀，用50%糖浆制成软材，18目筛制粒，70℃烘干，20目筛整粒，加入硬脂酸镁4.8kg，混匀，装胶囊，即得。

实施例5：祛斑美白效果研究

取实施例1所制胶囊剂治疗60例色素斑患者。试验方法：在60例病例中，女性患者58例，男性患者2例；患者年龄21～60岁；临床观察对象均符合中西医诊断标准的患者，观察期限均以三个月为一疗程。疗效标准分为痊愈、显效、有效和无效。治疗方案治疗方案：口服，一次3～6粒，一日2次，三个月为一个疗程。1个疗程后观察前后色素斑治疗情况。结果见表3。

表3色素斑患者用药后治疗效果

分组	痊愈/人	显效/人	有效/人	无效/人	有效率/%
						实施例一	13	15	20	2	96

结果表明，本发明产品具有较好的祛斑美白的效果。

上述实施例仅用于说明本发明，而对本发明没有限制。

Claims (4)

1.一种用于祛斑美白的地龙小肽有效部位组合物，其特征在于是从地龙中提取的地龙小肽、从白芍中提取的白芍总苷、从白术中提取白术总多糖和从白茯苓提取的白茯苓总多糖按一定配比组成，其中，各有效部位的重量配比为：

地龙小肽2～5重量份

白芍总苷5～14重量份

白术总多糖2～5重量份

白茯苓总多糖8～15重量份。

2.如权利要求1所述的地龙小肽有效部位组合物，其特征在于各有效部位的重量配比为：地龙小肽3重量份、白芍总苷8重量份、白术总多糖4重量份、白茯苓总多糖10重量份。

3.如权利要求1或2所述的地龙小肽有效部位组合物，其特征在于其制备方法包含以下步骤：

地龙小肽的制备：取地龙，适当粉碎，加5～20倍量水匀浆5～15min，加热煮沸5～30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0～5.0，然后加入底物量0.5%～10%的胃蛋白酶，在30℃～45℃条件下酶解1～6h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至7～10，加入底物量0.5%～10%的胰蛋白酶，在45℃～55℃条件下酶解1～6h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸5～15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入1%～3%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得地龙小肽；其中地龙小肽的含量为40％～70％；

白芍总苷的制备：取白芍，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4～6%，萃取压力15～30MPa，温度30-50℃，CO2流量1～3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入60%～80%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400～600W，萃取1～4次，每次4～8分钟，每次加入的60%～80%乙醇的量为药材重量的1～4倍，得萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，40%～60%乙醇洗脱，收集3～6倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍总苷提取物；其中芍药苷的含量60%～80%；

白术总多糖的制备：取白术，适当粉碎，加5～20倍量的体积分数为50%～80%的乙醇，加热回流1～3h，过滤，收集残渣并加入5～15倍量的蒸馏水在80℃～95℃的条件下加热回流2～4h，过滤，残渣用4～6倍量蒸馏水洗涤两次，收集滤液，浓缩，干燥，得白术总多糖；

白茯苓总总多糖的制备：白茯苓药材，粉碎至粉末，然后用6～12倍于白茯苓重量的水对白茯苓粉末煎煮1～3次，每次2～4h，合并提取液，调节提取液pH至1～5，放置2～10小时，过滤，保留滤液；滤液过D101大孔吸附树脂柱，用6～10倍量水洗脱树脂柱，流出液继续过AB-8大孔吸咐树脂柱，用6～10倍量水洗脱树脂柱，再用70%～95%乙醇以1～2BV/h的速度洗脱，收集6～10BV的洗脱液，减压回收乙醇至尽，真空干燥即得白茯苓提取物合并收集的乙醇水溶液，减压回收乙醇至尽，真空干燥即得所述白茯苓总多糖提取物；

按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

4.权利要求1或2所述的地龙小肽有效部位组合物用于祛斑美白。