CN105664131A - 一种用于治疗心血管疾病的水蛭小肽有效部位组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗心血管疾病的水蛭小肽有效部位组合物，属于中药领域。该组合物是由从水蛭中提取的水蛭小肽、从三七中提取的三七总皂苷、从丹参中提取丹参总酚酸和从葛根中提取的葛根总黄酮按一定配比组成，加入药剂学常规辅料，制成各种剂型，临床可用于治疗冠心病、心绞痛、高脂血症、动脉粥样硬化等疾病。

Description

一种用于治疗心血管疾病的水蛭小肽有效部位组合物

技术领域

本发明涉及一种具有治疗心血管疾病的水蛭小肽有效部位组合物及其制备方法，具体地说从水蛭、三七、丹参、葛根中提取的中药有效部位组合物及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

心血管疾病，又称为循环系统疾病，是一系列涉及循环系统的疾病，循环系统指人体内运送血液的器官和组织，主要包括心脏、血管(动脉、静脉、微血管)，可以细分为急性和慢性，一般都是与动脉硬化有关。这些疾病都有着相似的病因、病发过程及治疗方法。心血管疾病目前最多的是冠心病、心绞痛，症状为胸闷、胸痛等。心脑血管病是全球范围造成死亡的最主要原因，与其它任何原因相比，心脑血管病每年造成的死亡最多。

西医对心血管疾病多采用强心、扩张血管及利尿等药物治疗，如硝酸甘油、消心痛、钙离子拮抗剂类抗心绞痛药(硝苯地平)、选择性冠脉扩张剂和抗病毒药(双嘧达莫)、β受体阻滞剂（塞利洛尔）、心可定、心得安，这些药物均是急症用药，且这些药物还伴有如下弊端：①毒副作用：除胃肠反应、过敏反应、中毒表现外，对中枢神经、肝肾功能也有损害，服药反应症状多达恶心、呕吐、腹泻、胃肠道不适、食欲不振、面部潮红、心悸、心动过速、体位低血压、头痛、眩晕、疲乏、失眠、皮肤过敏反应、皮疹甚至剥脱性皮炎、肌痉挛、肌无力、肌震颤、四肢发冷、瘙痒、泪液减少、情绪抑郁、皮肤发红、皮疹、灼热感、出汗甚至虚脱、长期服用会产生耐药性等反应。②不少人群不能服用：如有过敏史者、青光眼、冠状动脉闭塞及血栓形成、脑出血、颅内压增高、心源性休克、Ⅱ°或Ⅲ°房室传导阻滞、严重心力衰竭、窦性心动过缓、支气管哮喘患者、有过敏史、糖尿病、充血性心力衰竭、肺气肿或非过敏性支气管炎、肝功能不全、甲状腺功能低下、雷诺氏综合征或其它周围血管病、肾功能减退、活动性溃疡病或其他原因引起的消化道出血、血友病或血小板减少症等患者及孕妇、授乳妇、儿童等均禁服。然而，患心血管疾病的患者往往需要长期用药，且涵盖了各类不同的人群。可喜的是，中药治疗心血管疾病已显示出了其独特的优越性，中药疗效确切、持久，不良反应少，尤其以远期疗效满意而广泛应用于临床。

祖国医学认为，心血管疾病属于中医“心悸”、“郁病”的范畴，是由肝气郁结、情志所伤引起五脏气机不和形成的，主要与肝、脾、心等脏器受累与气血失调有关。其中冠心病属于中医“心痛”、“心悸”、“胸痹”的范畴，其病理机制主要为“因虚至疲，气虚血疲，脉络疲阻”。冠心病的临床表现主要为：心律失常、心绞痛及心肌梗塞等。应用中医治疗心肌缺血的药物可划分为活血化疲类、补气安神类及化痰理气类等。若按照药物的有效成分化合物分类可分为黄酮类、酚酸类及皂苷类等。

大量的研究结果和临床实践证明，中药以其耐受性较好、毒副作用小等特点显示出其独特的优势，中药在这个市场占据极其重要的位置，甚至可以说是处于强势地位，其中最主要的一个原因即在于西药在治疗心血管疾病方面不像抗生素类药品那样有绝对优势，属疗效并不很显著的品种。而中药则因其具有疗效显著、稳定可靠、无毒副作用等优势，越来越受到医学研究者和广大患者的关注。

而现阶段的中药复方，有效成分含量较低，服用量较大，药效较差。而用有效成分组方能源于中药高于中药，使用剂量小，有效成分可控，是一种非常理想的药物。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种用于治疗心血管疾病的水蛭小肽有效组物；

本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法和用途。

本发明的第一目的：以水蛭小肽、三七总皂苷、丹参总酚酸和葛根总黄酮为原料，加入适当药用辅料，制成相关的剂型。

本发明药物的组合物的原料药的组成及配比为：水蛭小肽3～9重量份、三七总皂苷2～6重量份、丹参总酚酸2～4重量份和葛根总黄酮3～7重量份。

本发明中药药物组合物优选的组成及配比为：水蛭小肽6重量份；三七总皂苷4重量份；丹参总酚酸3重量份；葛根总黄酮5重量份。

上述水蛭小肽有效部位中总小肽的含量不低于提取物的50%，总皂苷有效部位中总皂苷不低于提取物的70%，总酚酸有效部位中总酚酸不低于提取物的50%，总黄酮有效部位中总黄酮不低于提取物的80%。

该药物组合物可以加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂中的任一种。然后可以再加入其他具有预防或治疗糖尿病及其并发症的有效部位、有效成分、化学合成品或者半合成品，然后再加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂中的任一种。

本发明中药组合物的制备方法包括以下步骤：

①水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量10%的胃蛋白酶，在37℃条件下酶解2h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量10%的胰蛋白酶，在45℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入1%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽；其中小肽的含量不低于50%；

②三七总皂苷的制备：取三七粉碎成粗粉，用70%的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以80%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得；其中三七总皂苷含量不低于70%；

③丹参总酚酸的制备：取丹参，切成小段，加水于70℃~90℃提取1~3次，每次1~3小时，合并提取液，滤过，滤液于50℃~70℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为65%~80％，静置10~24小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中（HPD100大孔树脂量：生药量=1：1~1：5，g/g，上样流速10~60ml/min）流出液弃去，先用4~6BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以6~10BV15%~25%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得；其中丹总酚酸的含量不低于50%；

④葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后，加15倍量70%乙醇回流提取3次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中（AB-8大孔吸附树脂量：生药量=1：3，g/g，上样时柱流速4ml/min)流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点（展开剂：氯仿-甲醇（8：2），在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点），减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品；其中葛根总黄酮的含量不低于80%；

按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

增加：各树脂的型号可以是D101大孔树脂、D201大孔树脂、AB-8大孔树脂，001×2.5、001×7、001×15型阳离子交换树脂。

总小肽、总皂苷、总酚酸、总黄酮的含量测定方法为：

总小肽的含量测定方法为：取牛血清白蛋白对照品适量，精密称定，加水制成每毫升含0.25mg的溶液，即得。精密量取对照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置具塞试管中，各精密加水至1.0ml，再分别精密加碱性铜试液1．0ml，摇匀，各精密加入福林酚试液［取福林试液储备液(1→16)］4．0ml，摇匀，于55℃水浴中保温5min，取出，置冷水浴中冷却10min，迅速测定，以0管为空白，照紫外－可见分光光度法，在650nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，牛血清白蛋白质量为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。精密量取提取液1ml，别置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；照标准曲线的制备项下自分别精密加碱性铜试液1.0ml起，依法测定吸光度，从回归方程中计算多肽的含量。

总皂苷含量测定方法：精密称取三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，既得。分别精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml分别置磨口具塞试管中，热水浴挥干溶剂，加现配置的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，于60℃恒温水浴15min，立即置冰水浴内冷却，精密移取冰醋酸5mL，摇匀，以相应试剂为空白，分别在560nm波长处测定A值，得回归方程。取供试品适量，按标准曲线制作方法测定，相应试剂随行空白对照，在波长560nm处测定吸收度A，从回归方程中计算总皂苷含量。

总酚酸含量测定方法：精密称取干燥的丹酚酸B适量，加0.1mol/L盐酸溶液成每1ml含12.96mg的溶液，既得。精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、40ml、5.0ml，分别置10ml棕色量瓶中，加0.lmol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。以0.lmol/L盐酸溶液作空白，照分光光度法，在286nnl的波长处测定A值，得回归方程。取供试品适量，按标准曲线制作方法测定，相应试剂随行空白对照，在波长286nm处测定吸收度A，从回归方程中计算总酚酸含量。

总黄酮含量测定方法：准确称取葛根素纯品10mg于50mL容量瓶中，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL溶液分别置于10mL容量瓶中，并各加乙醇1.0mL，再加蒸馏水稀释到刻度，摇匀，取1.0mL乙醇，加水稀释到10mL，作空白对照，照分光光度法，在250nm处测吸光度，的回归方程。取供试品适量，按标准曲线制作方法测定，相应试剂随行空白对照，在波长250nm处测定吸收度A，从回归方程中计算总黄酮含量。

经过发明人的对比优选后，确定了上述有效部位的最佳重量配比为水蛭小肽6重量份；三七总皂苷4重量份；丹参总酚酸3重量份；葛根总黄酮5重量份。按照比例取上述水蛭小肽、三七总皂苷、丹参总酚酸和葛根总黄酮，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

本发明药物组合物可制成的剂型为片剂、胶囊剂。

以上所说的药剂学常规辅料包括但不限于润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁；崩解剂，如羧甲淀粉钠；粘合剂，如纤维素衍生物；赋形剂，如乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸镁，微晶纤维素、羊毛脂、凡士林、蜂腊、木腊、液体石蜡、树脂、高级蜡等。

本发明有效部位组合物用于治疗心血管疾病。

有益效果

本发明中药组合物，是按传统中医药理论同时结合现代医学研究成果组方而成，具备中医学特色，同时符合现代医学的治疗原则。

谓心脑血管疾病就是心脏血管和脑血管的疾病统称，泛指由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生缺血性或出血性疾病。谓心脑血管疾病就是心脏血管和脑血管的疾病统称，泛指由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生缺血性或出血性疾病。本发明提供的中药组合物是从水蛭、三七、丹参、葛根药材中提取出来的有效部位的组合物，相比较现有的治疗心血管疾病的中药，其化学成分简单明确，在药理研究方面易于陈明其作用机制在生产中更易于药物的质量控制。

本发明以传统中医理论为指导思想，同时结合国内外的相关研究成果，在预防和治疗糖尿病及其并发症方面效果显著。方中以三七为君，三七味甘，微苦，性温。有止血、散学、定痛的作用，是治疗心血管疾病的常用药，故为君。现代药理作用表明，三七可以减轻心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)的作用，对抗性肥大、抑制心室重构、抗心律失常3和抗血性休克的作用。方中，丹参为臣药，丹参，味苦，性微寒，具有活血散瘀，养血安神，凉血消肿的功效。近代医学实验证明，丹参还具有抗血小板凝聚、降低血液黏度及调节内外凝血系统的功能，是一种安全又可靠的治疗心脏血管疾病的天然中药。水蛭，味咸，性平，为传统的破瘀活血药物，具有抗凝、抗粘和降低血脂作用，服用水蛭提取物，不仅可以改善血液流变学指标，而且能够增强纤溶活性及减轻氧自由基损伤等。葛根，味甘、辛，性凉，具有解表退热，生津，透疹，升阳止泻的作用。现代研究表面，葛根可以营养心肌，扩张血管葛根总黄酮和葛根素能改善心肌的氧代谢，对心肌代谢产生有益作用，同时能扩张血管，改善微循环，降低血管阻力，使血流量增加，故可用防治心肌缺血，心肌梗死，心律失常，高血压，动脉硬化等病症。葛根素有明显的降低血糖的作用，葛根所含的黄酮类化合物有降血脂作用，能降低血清胆固醇，降低油三酯，用于治疗高血糖，高血脂病症，有显著疗效。

本发明产品成分明确，疗效稳定，服用量小，安全性高，不仅符合传统中医药治疗心血管疾病的组方原则，而且符合中药现代化的发展要求，对推动医药产业从仿制向自主创新转变以及对推动我国中药国际化具有重要意义。经查阅相关文献和专利，未检索到以水蛭、三七、丹参、葛根的有效部位做为原料，生产加工并制成适宜药物制剂用于治疗心血管疾病的报道。

为进一步验证本发明的药理作用，用本发明片剂进行动物药效学实验。

试验内容：对大鼠心肌缺血的改善作用。

1试剂仪器、样品和动物

1.1试剂与仪器

复方丹参滴丸，北京天士力制药股份有限公司，批号：20060612；硝苯地平片，北京太洋药业有限公司，批号：0410030。N-BT上海前进化学试剂厂，Q/BKJS2-92。

小动物呼吸机(江西省特力麻醉呼吸公司生产TRK-200型)；多导生理记录仪，B工OPAC150型，美国生产；气浴摇床，美国Thermoforma公司生产。

1.2供试样品

样品1：（本发明片剂）

⑤取水蛭2kg，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量10%的胃蛋白酶，在37℃条件下酶解2h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量10%的胰蛋白酶，在45℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入1%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽（含量50%）；取三七5kg，粉碎成粗粉，用70%的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以80%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得三七总皂苷（含量75%）；取丹参2kg，切成小段，加水于70℃~90℃提取1~3次，每次1~3小时，合并提取液，滤过，滤液于50℃~70℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为65%~80％，静置10~24小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中（HPD100大孔树脂量：生药量=1：1~1：5，g/g，上样流速10~60ml/min）流出液弃去，先用4~6BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以6~10BV15%~25%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得丹参总酚酸（含量50%）；取葛根药材8kg，粉碎后，加15倍量70%乙醇回流提取3次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中（AB-8大孔吸附树脂量：生药量=1：3，g/g，上样时柱流速4ml/min)流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点（展开剂：氯仿-甲醇（8：2），在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点），减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品（含量80%）；

取水蛭小肽180g、三七总皂苷120g、丹参总酚酸90g、葛根总黄酮150g，加入微晶纤维素100g、羧甲淀粉钠10g、淀粉20g、硬脂酸镁10g，制成片剂，每片0.25g。

样品2：（本发明胶囊剂）

采用样品1制备的有效部位原料。

取水蛭小肽90g、三七总皂苷60g、丹参总酚酸45g、葛根总黄酮75g，加入淀粉至300g，制成胶囊剂1000粒，每粒0.3g。

样品3：

采用样品1制备的有效部位原料。

取水蛭小肽70g、三七总皂苷80g、丹参总酚酸50g、葛根总黄酮70g，加入淀粉至300g，制成胶囊剂1000粒，每粒0.3g。

样品4：

采用样品1制备的有效部位原料。

取水蛭小肽80g、三七总皂苷60g、丹参总酚酸60g、葛根总黄酮70g，加入淀粉至300g，制成胶囊剂1000粒，每粒0.3g。

给药前，取上述相应制剂，研细，采用纯水配制成所需要的药物浓度。

1.3实验动物

健康雄性Wistar大白鼠80只，由山东中医药大学试验动物中心提供。

2.实验方法

2.1动物分组健康Wistar大鼠84只，随机分为6组，1)假手术组：仅开胸、穿线不结扎。2)模型组及各给药组：按照模型制作方法进行造模。硝苯地平组，灌服硝苯地平(3mg/kg/d)；复方丹参滴丸组，灌服复方丹参滴丸(83mg/kg/d)；样品1、2、3、4组。各组动物按上述剂量连续灌胃给药7d，假手术组与模型组均给予等容量生理盐水(l0ml/kg/d)。

2.2模型制备及标本采集第8天在给药1h后，用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉大鼠。然后仰卧位固定于手术台上，分离气管，插入气管插管，连接小动物呼吸机，室内空气通气，频率90次/min，潮气量3~4mL。向大鼠四肢皮下插入针形电极，描记Ⅰ、Ⅱ，Ⅲ，aVF，aVL，aVR导联心电图。胸部去毛、消毒，沿左锁骨中线纵行切开皮肤，在第4肋间钝性分离肌层，打开胸腔，剪开心包，结扎左冠状动脉造成心肌缺血，迅速缝合胸壁，缝合关闭气管。其间监测心电图变化，以判断心肌缺血模型中否成功，未造成缺血者则弃之不用。24h后将大鼠心脏剪下，用生理盐水冲去血污，-20℃冰箱内冷冻15min，做心脏切片。

2.3梗死区心肌染色从心尖向心底方向将心脏均匀切为8片，将其置于0.1%的NBT溶液中，37℃气浴摇床摇动10min，用吸水纸吸干表面水分，按顺序摆放，拍照；分别切取梗死区与非梗死区并称量，计算心梗指数。心梗指数=梗死区湿质量/全心湿质量。

2.4统计处理所有数据用平均数±标准差（X±δ）表示，采用T检验方法统计组间差异

3结果

本药物对急性心肌缺血大鼠心梗指数的影响，见表1.

表1本药物对急性心肌缺血大鼠梗死重量的影响（X±δ）

注：模型组与假手术组相比*P＜0.01，治疗装与模型组相比**P＜0.01，本药物与硝苯地平、丹参滴丸组比较△△P＜0.01。

结果显示，模型组与假手术组比较P＜0.01，说明造模成功；硝苯地平、丹参滴丸组、样品1、2、3、4组与模型组比较P＜0.01，说明四种药物均对结扎大鼠左冠状动脉造成的急性心肌梗死有对抗作用；样品1、2、3、4组与硝苯地平、丹参滴丸组比较P＜0.01，说明本药物抗急性心肌缺血优于硝苯地平和复方丹参滴丸，样品1、2比样品3、4效果好，证明本发明疗效好，不在本发明比例的药物疗效较差。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步阐明本发明的技术方案，但是本发明申请所要保护的内容不仅仅如此。实际生产中的用量不仅限于实例中的药物用量，可以用吨、千克、克等计量单位，但是各原料药物的用量配比仍依据本方明的技术方案。

实施例1：

处方：水蛭小肽1.8kg、三七总皂苷0.6kg、丹参总酚酸0.4kg、葛根总黄酮0.7kg

制法：水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量10%的胃蛋白酶，在37℃条件下酶解2h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量0%的胰蛋白酶，在45℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH7.0，加入1%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量为50%～90%；

三七总皂苷的制备：取三七粉碎成粗粉，用70%的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以80%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得；其中三七皂苷R1的含量为1%～5%；

丹参总酚酸的制备：取丹参，切成小段，加水于80℃提取1~3次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液于50℃~70℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为70％，静置15小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中（HPD100大孔树脂量：生药量=1：4，g/g，上样流速10~60ml/min）流出液弃去，先用5BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以8BV15%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得；其中丹酚酸B的含量为10%～25%；

葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后，加10~20倍量60%~80%乙醇回流提取1~3次，每次1~3小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中（AB-8大孔吸附树脂量：生药量=1：4，g/g，上样时柱流速4ml/min)流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点（展开剂：氯仿-甲醇（8：2），在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点），减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品；其中葛根素的含量为40%～60%；

加入微晶纤维素1.2kg、羧甲淀粉钠0.1kg、淀粉0.2kg、硬脂酸镁0.1kg，制成片剂，每片0.25g。

实施例2：

处方：取水蛭小肽90g、三七总皂苷20g、丹参总酚酸40g、葛根总黄酮70g

制法：水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加5倍量水匀浆5min，加热煮沸5min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量0.5%的胃蛋白酶，在30℃条件下酶解1h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量0.5%的胰蛋白酶，在45℃条件下酶解3h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸5min，放冷，离心，收集上清液，调节pH6.5，加入2%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量为50%～90%；

三七总皂苷的制备：取三七粉碎成粗粉，用60％的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以70％的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得；其中三七皂苷R1的含量为1%～5%；

丹参总酚酸的制备：取丹参，切成小段，加水于70℃℃提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液于50℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为65%，静置10小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中（HPD100大孔树脂量：生药量=1：1，g/g，上样流速10ml/min）流出液弃去，先用4BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以6BV15%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得；其中丹酚酸B的含量为10%～25%；

葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后，加10倍量60%乙醇回流提取3次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中（AB-8大孔吸附树脂量：生药量=1：3，g/g，上样时柱流速3ml/min)流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以60%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点（展开剂：氯仿-甲醇（8：2），在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点），减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品；其中葛根素的含量为40%～60%；

加入淀粉至300g，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例3：

处方：取水蛭小肽800g、三七总皂苷600g、丹参总酚酸450g、葛根总黄酮750g。

制法：水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加20倍量水匀浆15min，加热煮沸30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量10%的胃蛋白酶，在45℃条件下酶解6h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至10，加入底物量10%的胰蛋白酶，在55℃条件下酶解6h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH7.0，加入3%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量为50%～90%；

三七总皂苷的制备：取三七粉碎成粗粉，用80%的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以90%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得；其中三七皂苷R1的含量为1%～5%；

丹参总酚酸的制备：取丹参，切成小段，加水于90℃提取3次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液于70℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为80％，静置24小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中（HPD100大孔树脂量：生药量=1：5，g/g，上样流速60ml/min）流出液弃去，先用4~6BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以10BV5%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得；其中丹酚酸B的含量为10%～25%；

葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后，加20倍量80%乙醇回流提取3次，每次3小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中（AB-8大孔吸附树脂量：生药量=1：5，g/g，上样时柱流速5ml/min)流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以80%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点（展开剂：氯仿-甲醇（8：2），在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点），减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品；其中葛根素的含量为40%～60%；

取上述各有效部位，粉碎，混合，加大豆油至3000g，混匀，压制成软胶囊，制成6000粒，即得。

实施例4：

处方：水蛭小肽1.8kg、三七总皂苷0.8kg、丹参总酚酸0.6kg、葛根总黄酮1.4kg

制法：水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸5～30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量10%的胃蛋白酶，在38℃条件下酶解3h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至9，加入底物量10%的胰蛋白酶，在45℃条件下酶解5h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH7.0，加入2%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为200D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量为50%～90%；

三七总皂苷的制备：取三七粉碎成粗粉，用70%的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以90%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得；其中三七皂苷R1的含量为1%～5%；

丹参总酚酸的制备：取丹参，切成小段，加水于80℃提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为70％，静置18小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中（HPD100大孔树脂量：生药量=1：4，g/g，上样流速30ml/min）流出液弃去，先用6BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以7BV20%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得；其中丹酚酸B的含量为10%～25%；

葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后，加10倍量80%乙醇回流提取3次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中（AB-8大孔吸附树脂量：生药量=1：3，g/g，上样时柱流速4ml/min)流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点（展开剂：氯仿-甲醇（8：2），在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点），减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品；其中葛根素的含量为40%～60%；

加入微晶纤维素1.4kg、羧甲淀粉钠0.1kg、淀粉0.4kg、硬脂酸镁0.1kg，制成片剂，每片0.25g。

实施例5：

处方：取水蛭小肽30g、三七总皂苷60g、丹参总酚酸40g、葛根总黄酮70g

制法：水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加15倍量水匀浆10min，加热煮沸20min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量0.8%的胃蛋白酶，在39℃条件下酶解2h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8.5，加入底物量0.8%的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸20min，放冷，离心，收集上清液，调节pH7.0，加入2%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量为50%～90%；

三七总皂苷的制备：取三七粉碎成粗粉，用70%的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以80%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得；其中三七皂苷R1的含量为1%～5%；

丹参总酚酸的制备：取丹参，切成小段，加水于80℃提取1~3次，每次1~3小时，合并提取液，滤过，滤液于50℃~70℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为70％，静置20小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中（HPD100大孔树脂量：生药量=1：4，g/g，上样流速10~60ml/min）流出液弃去，先用5BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以8BV25%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得；其中丹酚酸B的含量为10%～25%；

葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后，加10~20倍量70%乙醇回流提取3次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中（AB-8大孔吸附树脂量：生药量=1：4，g/g，上样时柱流速5ml/min)流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点（展开剂：氯仿-甲醇（8：2），在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点），减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品；其中葛根素的含量为40%～60%；

加入淀粉至300g，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例6：

取实施例1所制片剂治疗216例心血管疾病患者。患者平均年龄62岁，最大患者87岁，最小患者41岁，男性患者139例，女性患者77例，治疗方案：口服，一次4粒，一日3次，温开水送服，4周为一个疗程。服药期间忌生冷、辛辣食物及烟酒。4~6个疗程后观察治疗前后临床症状、体征、心电图疗效、血脂血压水平等。结果：治愈37例，显效154例，有效21例，无效4例，总有效率为98.1%。

Claims (4)

1.一种用于治疗心血管疾病的水蛭小肽有效部位组合物，其特征在于是由从水蛭中提取的水蛭小肽、从三七中提取的三七总皂苷、从丹参中提取丹参总酚酸和从葛根中提取的葛根总黄酮组成的，其中，各有效部位的重量配比为：

水蛭小肽3～9重量份

三七总皂苷2～6重量份

丹参总酚酸2～4重量份

葛根总黄酮3～7重量份。

2.如权利要求1所述的水蛭小肽有效部位组合物，其特征在于各有效部位的重量配比为：水蛭小肽6重量份、三七总皂苷4总量份、丹参总酚酸3重量份、葛根总黄酮5重量份。

3.如权利要求1或2所述的水蛭小肽有效部位组合物，其特征在于其制备方法包含以下步骤：

（1）水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加5～20倍量水匀浆5～15min，加热煮沸5～30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量0.5%～10%的胃蛋白酶，在30℃～45℃条件下酶解1～6h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至7～10，加入底物量0.5%～10%的胰蛋白酶，在45℃～55℃条件下酶解1～6h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸5～15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入1%～3%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量为50%～90%；

（2）三七总皂苷的制备：取三七粉碎成粗粉，用60％~80%的乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，滤过，过苯乙烯型非极性或弱极性共聚体大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，以70％~90%的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，脱色，精制，减压浓缩至浸膏，干燥，即得；其中三七皂苷R1的含量为1%～5%；

丹参总酚酸的制备：取丹参，切成小段，加水于70℃~90℃提取1~3次，每次1~3小时，合并提取液，滤过，滤液于50℃~70℃减压浓缩至50℃测定相对密度为1.18～1.22的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为65%~80％，静置10~24小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得丹参提取液，将丹参提取液加入预先处理好的HPD100大孔树脂中，树脂量：生药量=1：1~1：5，g/g，上样流速10~60ml/min，流出液弃去，先用4~6BV蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再以6~10BV15%~25%乙醇洗脱，收集洗脱液，并浓缩至稠膏，干燥，即得；其中丹酚酸B的含量为10%～25%；

（3）葛根总黄酮的制备：取葛根药材，粉碎后，加10~20倍量60%~80%乙醇回流提取1~3次，每次1~3小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得葛根提取液，将葛根提取液加入预先处理好的AB-8大孔吸附树脂中，树脂量:生药量=1:1～1:5，g/g，上样时柱流速3～5ml/min，流出液弃去，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，流出液均弃去，再以60%～80%乙醇洗脱，收集洗脱液至薄层层析检查无荧光斑点，减压回收乙醇，干燥，得葛根总黄酮粗品；其中葛根素的含量为40%～60%；

（4）按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

4.权利要求1或2所述的水蛭小肽有效部位组合物用于治疗冠心病、心绞痛、高脂血症、动脉粥样硬化。