CN101697989B - 三七及其提取物在制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及三七、三七提取物、三七总皂苷以及三七总皂苷组合物的新用途，即在制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物方面的新用途。

Description

三七及其提取物在制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物的用途

技术领域

本发明涉及三七、三七提取物、三七总皂苷以及三七总皂苷组合物的新用途，特别是在制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物方面的新用途。

背景技术

近年来，随着我国经济的发展，心脑血管疾病的发病率和死亡率逐年增加，已被称为危害人类健康和生命的头号杀手。冠状动脉粥样硬化(统称冠状动脉性心脏病，简称冠心病)是一组动脉硬化的血管病中常见的最重要的一种，其特点是受累动脉病变从内膜开始。一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，病变常累及弹性及大中等肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。动脉粥样硬化就是动脉壁上沉积了一层像小米粥样的脂类，使动脉弹性减低、管腔变窄的病变。

冠状动脉粥样硬化是西方发达国家的主要死亡原因。随着我国人民生活水平提高和饮食习惯改变，该病也成为我国主要死亡原因。动脉粥样硬化始发儿童时期而持续进展，通常在中年或者中老年出现症状。

三七是五加科植物，具有活血、散瘀、消炎、镇痛的功效。除有上述作用外，还具有降低人体凝血因子的特殊作用。fg是肝脏合成的一种血浆球蛋白。其主要功能为参与凝血过程。fg升高可增高心、脑血管病发生率。口服生三七粉能降低fg水平，有利于控制心、脑血管病的发生。《中草药》2008年05期刊登的中国澳门大学中华医药研究院的王楠、万建波、李铭源、王一涛有关《三七治疗动脉粥样硬化的研究进展》一文指出：动脉粥样硬化是导致心脑血管事件发生的关键因素，为多种心脑血管疾病共同的病理生理基础。其症候、病机等属于中医理论的″血瘀证″。而三七自古便是历代医家常用的活血化瘀之要药。换而言之，三七在防治动脉粥样硬化方面有其神奇之处。

三七总皂苷是从三七植物总提取的有效物质，三七药物植物的化学成分较多，主要由四环三萜达玛烷型原人参二醇组皂苷和四环三萜达玛烷型原人参三醇组皂苷组成。三七总皂苷对高脂血症、高粘血症、高血压、心肌缺血、心律失常、动脉粥样硬化等症状均有一定疗效，而且还具有防止血栓形成、改善微循环、抗心脑缺血、促进造血细胞、抗纤维化、对神经细胞损伤的保护作用。由上所述，使用三七

总皂苷为原料做成的三七总皂苷注射制剂是一种独具多功能的注射剂，而且这些功效都具有独立性，集若干重要生物活性，能发挥若干种临床功能于一药。所有的这些功能里，有的功能是相对立的，矛盾的。由于三七总皂苷中成份十分复杂，目前尚未能真正明确具体什么成份起主要治疗作用，成份之间的作用机理也没有人作过全面的研究。

发明内容

根据冠状动脉病变的部位、范围、血管阻塞程度和心肌供血不足的发展速度、范围和程度的不同，冠状动脉粥样硬化可分为五种临床类型：无症状型冠状动脉粥样硬化、心绞痛型冠状动脉粥样硬化、心肌梗死型冠状动脉粥样硬化、缺血性心肌病型冠状动脉粥样硬化、猝死型冠状动脉粥样硬化。以上五种类型的冠状动脉粥样硬化可以合并出现。

中医中药治疗对冠状动脉粥样硬化有治标和治本两法。治标，主要在疼痛期应用，以“通”为主，有活血、化瘀、理气、通阳、化痰等法；；治本，一般在缓解期应用，以调整阴阳、脏腑、气血为主，有补阳、滋阴、补气血、调理脏腑等法。“活血化瘀”法和“芳香温通”法最为常用。

根据我公司对三七总皂苷的临床研究和药效学研究，发现三七总皂苷可用于预防和治疗冠状动脉粥样硬化各种临床类型，特别是用于治疗心绞痛型冠状动脉粥样硬化、心肌梗死型冠状动脉粥样硬化、缺血性心肌病型冠状动脉粥样硬化及心肌缺血引起的心力衰竭型冠状动脉粥样硬化有明显疗效。

现有对本专利用于治疗以上各病症的药理简要说明如下：

一、心绞痛型冠状动脉粥样硬化

心绞痛是指冠状动脉供血不足，心肌急剧的、暂时的缺血与缺氧所引起的临床综合征。动脉粥样硬化而致冠状动脉狭窄或部分分支闭塞时，其扩张性减弱，血流量减少，且对心肌的供血量相对地比较固定。心肌的血液供应如减低至尚能应付心脏平时的需要，则休息时可无症状。一旦心脏负荷突然增加，如劳累、激动、左心衰竭等，使心肌张力增加，心肌收缩力增加和心率增快等而致心肌氧耗量增加时，心肌对血液的需求增加；或当冠状动脉发生痉挛时，冠状动脉血流量进一步减少；或在突然发生循环血流量减少的情况下，冠状动脉血流量突降，心肌血液供求之间矛盾加深，心肌血液供给不足，遂引起心绞痛。

本专利药有效成分是三七总皂苷，有活血祛瘀、通脉活络之功效，正合了“活血化瘀”法，具有扩张冠状动脉，增强冠脉流量，降低心肌耗氧量，改善心肌缺氧状况的作用。而且显著降低全血比浓度，血浆比黏度，纤维蛋白原，红细胞压积指数，缩短红细胞和血小板电泳时间，血黏度降低和红细胞表面电荷增加使红细胞均匀分散在血浆中，有利于血管中的流动，血小板表面电荷的增加不容易发生黏附、聚集，因此可改善微循环，降低血液黏度，减少血小板聚集，而有利于防止血栓的形成和血栓再发，可有效防止心绞痛的发作。临床研究发现，患者应用本发明专利制剂后，降低了心绞痛的发作次数及持续时间，也减少了心肌耗氧量，同时降低了血液黏度，与对照组治疗后比较差异均有显著性。

二、心肌梗死型冠状动脉粥样硬化

心肌梗死基本病因是冠状动脉粥样硬化(偶为冠状动脉栓塞、炎症、先天性畸形、痉挛和冠状动脉口阻塞所致)，造成管腔严重狭窄和心肌血供不足，而侧支循环未充分建立。在此基础上，一旦血供进一步急剧减少或中断，使心肌严重而持久地急性缺血达1小时以上，即可发生心肌梗死。

心肌梗死往往在饱餐特别是进食多量脂肪后，晨6时至12时用力大便时发生。这与餐后血脂增高，血粘稠度增高，血小板粘附性增强，局部血流缓慢，血小板易于集聚而致血栓形成；上午冠状动脉张力高，机体应激反应性又增强，易使冠状动脉痉挛；用力大便时心脏负荷增加等有关。

尽快使闭塞的冠状动脉再通，心肌得到再灌注，濒临坏死的心肌可能得以存活或使坏死范围缩小，预后改善，是一种积极的治疗措施。

本发明专利在疏通被阻塞血管、改善血管渗透性等方面有明显的作用，因此能扩张冠脉，增加冠脉血流量，增加血氧供应，使心肌得到再灌注。同时可以减少血细胞内磷酸肌酸激酶(CPK)的生成，能提高心肌细胞耐缺氧的能力及对抗再灌注造成损伤。

三、缺血性心肌病型冠状动脉粥样硬化

缺血性心肌病型冠状动脉粥样硬化的病理基础是心肌纤维化。为心肌的血供长期不足，心肌组织发生营养障碍和萎缩，以致纤维组织增生所致。患者的冠状动脉多呈广泛而严重的粥样硬化，管腔明显狭窄，但可无闭塞。纤维组织在心肌也可呈灶性、散在性或不规则分布，此种情况常由于大片心肌硬死或多次小灶性心肌梗死后的瘢痕形成，心肌细胞减少而纤维组织增多所造成，此时冠状动脉则可有闭塞性病变。

治疗在于改善冠状动脉供血和心肌的营养，控制心力衰竭和心律失常。

本发明专利采用独特提取、纯化工艺，所得制剂纯度高、水溶性好，有效成分的生物活性强。具有抗血小板聚集、降低血液黏度、抗血栓形成、扩张心脑血管、降低心脏后负荷、减少心肌耗氧量从而改善心肌缺血的作用。

本发明专利对缺血性心肌病型冠状动脉粥样硬化的疗效基于以下三个方面：①保护心肌细胞，三七皂苷(PNS)可减慢心肌细胞搏动频率，减少心肌细胞缺血损伤时细胞内酶的释放，减轻细胞形态的改变，维持DNA的合成，对心肌细胞缺血损伤具有直接的保护作用。②对细胞凋亡调节作用：在心脑缺血等诸多因素刺激下，可以启动造成心脑血管细胞主动的程序性坏死的遗传控制过程，对心脑血管的凋亡过程起到调节作用，对损伤组织的修复有重大意义；③通过抗炎作用，减少白细胞释放氧自由基。PNS能减轻缺血再灌注心肌细胞内钙蓄积。此外，PNS能抑制血小板聚集、减少微血栓形成，减轻白细胞粘附于损伤血管内皮导致的毛细血管阻塞，因而能减轻缺血再灌注心肌不能恢复灌流即“无再灌流现象”的程度，更有利于心肌代谢活动和心功能恢复。

四、心肌缺血引起的心力衰竭型冠状动脉粥样硬化

缺血性心脏病可因多种原因而发生心力衰竭，它可以是急性心肌梗死或早先心肌梗死的并发症，或可由心绞痛发作或心律失常所诱发。心力衰竭的发生发展机制是神经内分泌细胞因子系统的长期、慢性激活，促进心肌重塑，加重心肌损伤和心功能恶化，又进一步激活神经内分泌细胞因子，形成恶性循环。心力衰竭多逐渐发生，大多先呈左心衰竭，然后继以右心衰竭，出现相应的症状。

治疗方法：主要是治疗急性左心衰竭，可选用血管扩张剂减轻左心室的负荷。

中医认为，气虚、阳虚致血疲、水泛为心衰基本病机。目前己明确，慢性充血性心力衰竭患者肾素-血管紧张素一醛固酮系统激活，致血管紧张素-II(Ang II)增高，And II增高又致PA I-1增高，而PAI-1对tPA具有抑制作用。tPA可使PLC激活，转变为纤溶酶，纤溶酶可使纤维蛋白(原)溶解。另有研究发现，慢性心衰患者血浆ET-1水平升高，而ET-1是一种强效缩血管物质，可直接参与心肌重构和心衰的发展过程，与心衰的严重程度成正相关。心衰时血浆FIB和ET-1升高可进一步加重其微循环障碍。

研究显示，本发明专利可明显降低血浆PAI，FIB，PLG和ET-I水平，与对照组比较差异显著，这与既往报道相同；它可明显升高tPA水平，但与对照组比较无显著性差异。PAI下降减少了对tPA的抑制，从而有效地激活了PLG，进而使FIB下降，通过反馈作用PLG亦下降。随着PAI，FIB和ET-1下降，与对照组相比，LVESV明显下降(P＜0.05)，LVEF明显提高(P＜0.05)，从而心功能得到明显改善，总有效率明显提高(P＜0.05)。因此，本发明专利治疗充血性心力衰竭有明显疗效。

本发明专利临床应用的安全性较高，在冠状动脉粥样硬化的药物治疗中不失为一种好药，其拓宽了中药制剂治疗冠状动脉粥样硬化的新方法，在不能开展介入治疗的基层医院尤为适用。

因此，申请人提供一种制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物方面的新用途。

本发明公开了一种制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物方面的新用途，其特征在于所述三七总皂苷组合物中含有活性成份，该活性成份由三七提取的三七总皂苷活性成份组成，其中三七皂苷R₁含量大于8.0％、人参皂苷Rg₁含量大于25％、人参皂苷Re含量大于4.0％、人参皂苷Rb₁含量大于25％，三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总重量不低于活性成份总重量的75％。

优选地，Rb₁∶Rg₁为1.0∶0.5～2.0。

优选地，所述的有效成分组合物的含量是：三七皂苷R₁含量大于8.0％、人参皂苷Rg₁含量大于25％、人参皂苷Rb₁含量大于25％、人参皂苷Re含量大于4.0％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.0～1.8；

更优选地，所述的有效成分组合物的含量是：三七皂苷R₁含量大于8.0％、人参皂苷Rg₁含量大于25％、人参皂苷Rb₁含量大于25％、人参皂苷Re含量大于4.0％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.4～1.6；

优选地，三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rg₁与人参皂苷Re的总重量大于活性成份总重量的85％；

更优选地，三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rg₁与人参皂苷Re的总重量大于活性成份总重量的90％；

优选地，所述的有效成分组合物的含量是：其中三七皂苷R₁含量为8％～15％、人参皂苷Rg₁含量为35％～52％、人参皂苷Re含量为4％～10％、人参皂苷Rb₁含量为25％～40％。

本发明三七总皂苷活性成份组合物的剂型可以制成各种剂型，如制成注射液、注射用粉针剂，注射用冻干粉针剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂、滴丸剂制剂，优选制成注射液、注射用冻干粉针剂。

以下是本发明中药制剂的药材来源：三七：为五加科植物的干燥根。

申请人还提供了一种制备所述的三七总皂苷活性成份组合物的方法，它包括如下步骤：

(1)取三七粉碎成粗粉1000g，加体积比为5-30倍的45-95％的乙醇提取0.5～10小时，收集提取液，过滤；

(2)取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液；

(3)溶液通过D型大孔树脂柱吸附，用乙醇-水的混合液进行梯度洗脱，流速按每小时树脂体积的倍数计为4.5BV/h，洗脱液中乙醇浓度逐步由5％调整至95％，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至在60℃下相对密度为1.10～1.20的清膏，低温干燥得三七总皂苷组合物。

优选地，步骤(1)中加入7倍的乙醇；加入的乙醇浓度为65％；提取时间为7小时。

将三七总皂苷活性成份组合物根据制药领域中的常规方法，制成各种制剂。

上述过程获得的三七总皂苷活性成份组合物中各成份含量约为：三七皂苷R₁含量大于8.0％、人参皂苷Rg₁含量大于25％、人参皂苷Re含量大于4.0％、人参皂苷Rb₁含量大于25％，且Rg₁∶Rb₁为1.0-1.2∶1.5，三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总重量大于活性成份总重量的75％。

基于上述三七总皂苷组合物，本发明的目的是提供该组合物的一种新用途，即在制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物的应用。它可以制成胶囊、注射剂、片剂、栓剂或口服液等可使用的制剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

以下实验结果说明了该组合物的新药效，表明了本发明的有益效果。

根据上述三七总皂苷组合物制备的注射液对家兔冠状动脉粥样硬化(冠心病)的治疗和/或预防作用实验。

1.实验材料：

1.1.实验药物

根据本发明实施例1制备的样品；洛伐他汀片(北京万生药业有限责任公司，国药准字H10970092，批号20070609)；阿乐(北京嘉林药业股份有限公司，国药准字H19990258，批号061108)。

1.2.试剂

血清总胆固醇(total cholesterol，TC)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号070471)；甘油三酯(triglyceride，TG)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号072011)；低密度脂蛋白(LDL-C)测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号070122)。

甲醛：北京市旭东化工厂生产，批号：20061201；乙醇：北京化工厂生产，批号：20070305；二甲苯：北京化工厂生产，批号：20061023；苏木精：北京捷康科贸公司；伊红：北京捷康科贸公司；切片石蜡58-60℃：广东省茂名市顺和特种蜡生产厂；酸性复红，国药集团化学试剂有限公司，批号：20060627；丽春红，国药集团化学试剂有限公司，批号：F20061109；橘黄G，国药集团化学试剂有限公司，批号：F20070126；亮绿，JBN公司，进口分装，批号：999/13258；铁苏木素，北京化学试剂公司，批号：20060616；三氯化铁，国药集团化学试剂有限公司，批号：F20061208；碘化钾，北京化学试剂公司，批号：20060606；碘，国药集团化学试剂有限公司，批号：20071127。

1.3.实验仪器

自清洗旋转式粘度计(LBY-W6A，北京普利生公司)；毛细管粘度计(LBY-NW1，北京普利生公司)；血凝仪(C2000-4，北京普利生公司)；微量毛细管离心机(KKH-120A，日本)；离心机(LXJ-II，上海医用分析仪器厂)；切片机(德国Leica)；包埋机(德国Leica)；展片机(德国Leica)；烤片机(德国Leica)；光学显微镜(日本Olympus)；半自动生化测定仪(Microlab 300，Vital Scientific Inc.)。

1.4.实验动物

日本大耳白兔61只，雄性，体重约2.5kg。

2.实验方法

2.1.家兔冠状动脉粥样硬化模型的建立

动物适应性喂养1周，动物统一标号后耳缘静脉采血，离心取血清，测定血脂指标。随机分为空白对照组、模型组、阿乐组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、实施例1中剂量组和实施例1低剂量组。正常对照组仅喂基本颗粒饲料，其余动物每天喂胆固醇饲料(根据文献资料确定：1％胆固醇，10％蛋黄粉，2％猪油，87％基础饲料混合制成)，喂食根据动物体重进行，每周测体重1次，根据体重调整进食量。每日根据体重给予一定量的高脂饲料，待动物食用完毕后再补充普通饲料。动物分笼饲养，自由饮水，喂养12周。

2.2.实验分组剂量设置

(1)根据本发明制备的实施例1：人的临床用药量为300mg/60kg/d，im。家兔用药量为人临床用药量的3倍。故而实验设置3个剂量组：高剂量组(临床等效剂量的2倍)30mg/kg/d；中剂量组(临床等效剂量)15mg/kg/d；低剂量组(临床等效剂量的1/2)7.5mg/kg。

(2)阿乐：人的临床用法用量为，口服，一次1-2片(10mg/片)，1次/日。选定人的临床用药量为20mg/60kg/d。家兔用药量为人临床用药量的3倍，故而阿乐家兔给药量为1mg/kg/d。

(3)洛伐他汀片：人的临床用法用量为，口服，一次1片(20mg/片)，1次/日。选定人的临床用药量为20mg/60kg/d。家兔用药量为人临床用药量的3倍，故而洛伐他汀片家兔给药量为1mg/kg/d。

2.3.实验分组及给药

动物适应性喂养1周，耳缘静脉采血，离心取血清，测定血脂指标。随机分为空白对照组、模型组、阿乐组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、实施例1中剂量组和实施例1低剂量组。正常对照组仅喂基本颗粒饲料，其余动物每天喂胆固醇饲料，然后给予相应药物干预如下：

2.4.血脂测定

每组动物在给药前、给药4周后、给药8周后和给药12周后均禁食12h，经耳缘静脉取血，常规生化测定TC、TG、LDL-C。

2.5.组织取材及病理学检测

实验前禁食16h。末次给药后1h，实验动物空气栓塞处死后解剖，立即摘取主动脉和心脏，固定于10％甲醛溶液中。组织病理学检查方法：固定降主动脉的一段取材并修块、心脏冠状动脉沟下约0.4cm左右取材、左心室(做一包埋块)、右心室和室间隔(做一包埋块)，梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片厚度5um，行HE、Masson、铁苏木素染色。光镜检查心脏冠状动脉阻塞发生率(阻塞发生率＝一个心脏标本两片有阻塞的血管数/一个心脏标本两片所有冠状动脉数×100％)和降主动脉病理改变情况并附显微照相彩色照片，采用图像分析仪测量内膜厚度和中膜厚度、内膜厚度/中膜厚度。按动脉粥样硬化基本病变分为脂纹期(I期)、纤维斑块期(II期)、粥样斑块期(III期)，按照病变程度由轻到重分级为-、±、+、++、+++、++++，对加权数(加权数＝分期×分级)进行积分统计；中膜病变按萎缩和变性作积分，弹力膜按溶解和断裂作积分，胶原纤维按增生程度分级(如上)作积分，求出各组积分平均数±标准差(x±s)，经t检验，p＜0.05具有统计学意义。

2.6.血液流变学检测

末次给药后1h，耳中央动脉取血，3.8％枸橼酸钠抗凝(1∶9)，全自动血液流变仪测定高、中、低切变率下的全血黏度，以及红细胞压积、纤原含量、血浆粘度等血液流变学指标指标。

3.实验结果

3.1.实施例1预防性给药对As模型家兔血脂的影响

给药前，各组家兔的血脂水平无明显差异(见下表)。

给药前家兔的血脂水平(x±s)

与空白组比较：△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

给药4周后，模型组、阿乐组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、中剂量组、低剂量组的CHO水平均有所升高，除实施例1高剂量组外，其余各组与空白对照组相比均有显著差异；阿乐组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组明显低于模型组水平。模型组TG水平明显高于空白对照组，其余各组的TG水平与空白对照组相比均无明显差异。模型组、阿乐组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、中剂量组、低剂量组的LDL-C水平均有所升高，除实施例1高剂量组外，其余各组与空白对照组相比均有显著差异；各组LDL-C水平均明显低于模型组水平。

实施例1给药4周后对家兔血脂水平的影响(x±s)

与空白组比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

给药8周后，各组CHO水平均有所升高，与空白对照组相比均有显著差异；阿乐组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组与模型组相比有极显著差异，实施例1中剂量组明显低于模型组水平，实施例1低剂量组与模型组相比无明显差异。模型组、实施例1低剂量组的TG水平与空白对照组相比有极显著差异，实施例1中剂量组的TG水平明显高于空白对照组；各组TG水平均显著低于模型组。各组LDL-C水平均显著高于空白对照组水平；除实施例1低剂量组外，其余各组与模型组相比均有极显著差异。

实施例1给药8周后对家兔血脂水平的影响(x±s)

与空白组比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

给药12周后，各组CHO水平均有所升高，与空白对照组相比均有显著差异；阿乐组、实施例1高剂量组与模型组相比有极显著差异，实施例1中剂量组与模型组相比有明显差异，洛伐他汀组、实施例1低剂量组与模型组相比无明显差异。模型组、洛伐他汀组、实施例1低剂量组的TG水平明显高于空白对照组；各组TG水平均显著低于模型组水平。各组LDL-C水平均明显高于空白对照组水平，其中实施例1高剂量组与空白对照组相比有明显差异，其余各组与空白对照组相比均有极显著差异；除洛伐他汀组外，其余各组LDL-C水平均明显低于模型组，其中实施例1高剂量组、实施例1中剂量组与模型组相比有极显著差异，阿乐组与模型组相比有显著差异，实施例1低剂量组与模型组相比有明显差异。

实施例1给药12周后对家兔血脂水平的影响(x±s)

与空白组比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

结果表明，阳性药阿乐和洛伐他汀能够显著降低As模型家兔血清CHO、TG、LDL-C水平，且阿乐作用效果优于洛伐他汀。实施例1高剂量组能够显著降低AS模型家兔血清CHO、TG、LDL-C水平，作用效果与阿乐相似。实施例1中剂量组、低剂量组能够明显降低As模型家兔血清CHO、TG、LDL-C水平，作用效果较实施例1高剂量组差。

3.2.实施例1对As模型家兔血液流变学的影响

实施例1对As模型家兔血液流变学的影响(x±s)

与空白组比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

模型组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、中剂量组、低剂量组的红细胞压积水平均显著高于空白对照组；各给药组与模型组相比无明显差异。模型组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、中剂量组、低剂量组的纤原含量均显著高于空白对照组；各给药组均显著高于模型组水平。各给药组的血浆粘度与空白对照组水平五明显差异；阿乐组、洛伐他汀组、实施例1低剂量组均明显低于模型组。模型组、洛伐他汀组、实施例1高剂量组、中剂量组、低剂量组的低切水平均明显高于空白对照组；各给药组与模型组相比无明显差异。模型组、阿乐组、实施例1高剂量组、中剂量组、低剂量组的中切水平均明显高于空白对照组；各给药组与模型组相比无明显差异。实施例1高剂量组、中剂量组、低剂量组的高切水平均显著高于空白对照组；各给药组与模型组相比无明显差异。

结果表明，阳性药阿乐和洛伐他汀能够显著降低As模型家兔纤原含量和血浆粘度，且阿乐作用效果优于洛伐他汀。实施例1高剂量组能够显著降低As模型家兔纤原含量，作用效果与洛伐他汀相似。实施例1中剂量组能够明显降低As模型家兔纤原含量，作用效果较实施例1高剂量组差。实施例1低剂量组能够明显降低As模型家兔纤原含量和血浆粘度，作用效果与洛伐他汀相似。

3.3.实施例1对As模型家兔心脏冠状动脉阻塞率的影响

实施例1对As模型家兔心脏冠状动脉阻塞发生率的影响(x±s)

与空白对照组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

空白对照组冠状动脉未见病变。模型组与空白对照组比较，血管阻塞率明显增加(p＜0.01)。阿乐组、洛伐他汀组和高、中、低剂量组血管阻塞发生率与模型组和空白对照比较都有显著差异(p＜0.01)。

3.4.实施例1对AS模型家兔降主动脉病变的影响

3.4.1.实施例1对AS模型家兔内膜基本病变和中膜病变的影响

实施例1对AS模型家兔降主动脉内膜基本病变和中膜病变作用的积分结果。

实施例1对As模型家兔降主动脉内膜基本病变和中膜病变作用的积分结果(x±s)

与空白对照组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

空白对照组：见到2/8只动物内膜有少量脂质沉积，表现为轻微的脂纹期，中膜未见改变；其它动物降主动脉各层均正常。

模型组：所有动物内膜有中到重度的纤维斑块、其中半数动物伴有轻到中度的粥样斑块；3/9只动物中膜有萎缩或变性。本组内膜基本病变和中膜病变与空白对照组比较具有显著性差异(p＜0.01)。

阿乐组：4/9只动物有轻度的纤维斑块样改变，其中有2只动物同时见到轻度脂纹样改变，另有1只动物仅见轻度的脂纹样改变。本组内膜基本病变和中膜病变与模型组比较明显减轻(p＜0.01)，与空白对照组比较未见差异。

洛伐他汀组：有半数动物降主动脉内膜有轻度的纤维斑块样改变，其中有3只动物同时见到轻度脂纹样改变，另有1只动物仅见轻度的脂纹样改变。本组内膜基本病变和中膜病变与模型组比较明显减轻(p＜0.01)，但与空白对照组比较病变程度明显加重(p＜0.01)。

高剂量组：有半数动物降主动脉内膜有轻微的纤维斑块样改变，其中有3只同时见到轻度脂纹样改变，另有3只动物仅见轻度的脂纹样改变。本组内膜基本病变和中膜病变与模型组比较明显减轻(p＜0.01)，但与空白对照组比较病变程度有所加重(p＜0.05)。

中剂量组：9/10只动物降主动脉内膜有轻度的纤维斑块样改变，其中有3只同时见到轻度脂纹样改变。本组内膜基本病变和中膜病变与模型组比较明显减轻(p＜0.01)，但与空白对照组比较病变程度明显加重(p＜0.01)。

低剂量组：所有动物降主动脉内膜有轻到重度的纤维斑块样改变，其中1只动物同时见轻微的粥样斑块、2只动物同时见到轻度脂纹样改变。本组内膜基本病变和中膜病变与模型组比较有所减轻(p＜0.05)，但与空白对照组比较病变程度明显加重(p＜0.01)。

3.4.2.实施例1对As模型家兔内膜厚度和内膜厚度/中膜厚度的影响(x±s)

与空白对照组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

空白对照组：内膜厚度和内膜厚度/中膜厚度结果见上表。

模型组：本组内膜厚度和内膜厚度/中膜厚度与对照组比较都明显增大(p＜0.01)。

阿乐组：本组内膜厚度与模型组比较明显减小(p＜0.01)，与空白对照组比较未见明显差异。内膜厚度/中膜厚度与模型组比较明显变小(p＜0.01)，与空白对照组比较有所增大(p＜0.05)。

洛伐他汀组：本组内膜厚度和内膜厚度/中膜厚度与模型组比较都明显变小(p＜0.01)，与空白对照组比较都有所增大(p＜0.05)。

高剂量组：本组内膜厚度和内膜厚度/中膜厚度与模型组比较都明显变小(p＜0.01)，与空白对照组比较未见明显差异。

中剂量组：本组内膜厚度和内膜厚度/中膜厚度与模型组比较都明显变小(p＜0.01)，与空白对照组比较都有所增大(p＜0.05)。

小剂量组：本组内膜厚度和内膜厚度/中膜厚度与模型组比较都明显变小(p＜0.01)，与空白对照组比较都明显增大(p＜0.01)。

3.5.实施例1对As模型家兔弹力膜病理改变的影响

空白对照组半数动物可见弹力膜轻度不连续的小段溶解或断裂。模型组可见明显成片的中到重度溶解和断裂，与空白对照组比较具有显著性差异(p＜0.01)。阿乐组、洛伐他汀组和高、中、低剂量组与模型组比较内弹力膜溶解和断裂等病理改变都明显减轻(p＜0.01)；中、小剂量组与空白对照组比较病变明显加重(中剂量p＜0.05、小剂量p＜0.01)(见下表)。

实施例1对As模型家兔降主动脉弹力膜溶解、断裂病变作用的积分结果(x±s)

与空白对照组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

3.6.实施例1对As模型家兔胶原纤维病理改变的影响

实施例1对As模型家兔降主动脉胶原纤维增生作用的积分结果(x±s)

与空白对照组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

空白对照组胶原纤维未观察到可见的增生。模型组降主动脉胶原纤维增生明显、有的可见很厚的整圈的纤维帽，与空白对照组比较具有显著性差异(p＜0.01)。阿乐组与模型组比较胶原纤维增生明显减轻(p＜0.01)、与空白对照组比较未见明显差异；洛伐他汀组与模型组比较胶原纤维增生有所减轻(p＜0.05)、与空白对照组比较胶原纤维增生较为明显(p＜0.05)；高、中和小剂量组与模型组比较增生程度明显减轻(p＜0.01)，小剂量组与空白对照组明显加重(p＜0.01)、高和中剂量与空白对照组比较未见明显差异。

4.结论

4.1.高脂饮食3个月模型组大耳白兔血清中TG、TC、LDL-C的水平以及红细胞压积、纤原含量、血浆粘度、低切、中切水平均明显升高，与空白对照组相比有明显差异。心脏冠状动脉阻塞发生率明显增加；降主动脉内膜有脂质沉积形成斑块，中膜有受压萎缩、变性增厚等病理现象发生；内膜厚度及内膜厚度/中膜厚度都明显增加；弹力膜有成片或段状的中到重度溶解或/和断裂；胶原纤维轻到重度增生。

4.2.在高脂饮食的同时给予阳性药干预的阿乐组和洛伐他汀组：阿乐明显降低了血清中TG、TC、LDL-C的水平和纤原含量、血浆粘度，与模型组相比有显著差异。洛伐他汀在给药8周时明显降低了血清中TG、TC、LDL-C的水平，与模型组相比有显著差异；在给药12周时明显降低了血清中TG的水平和纤原含量、血浆粘度，与模型组相比有显著差异。两种药物明显降低了心脏冠状动脉阻塞发生率，改善了降主动脉脂质沉积、中膜病变、弹力膜溶解和断裂、胶原纤维增生等病变，对于减小内膜厚度及内膜厚度/中膜厚度都有明显作用。组织学观察显示阿乐对动脉粥样硬化的治疗作用比洛伐他汀略好，但未见统计学差异。

4.3.在高脂饮食的同时给予实施例1肌肉注射3个月的高、中、低剂量组：实施例1高剂量组和中剂量组均明显降低了血清中TG、TC、LDL-C的水平和纤原含量，与模型组相比有显著差异，且高剂量组效果优于中剂量组。实施例1低剂量组可明显降低血清中TG、LDL-C的水平以及纤原含量、血浆粘度，与模型组相比有明显差异。三个剂量组均可明显降低心脏冠状动脉阻塞发生率，改善了降主动脉脂质沉积、中膜病变、弹力膜溶解和断裂、胶原纤维增生等病理改变，对于减小内膜厚度及内膜厚度/中膜厚度都有明显作用。其中高剂量组与阳性药阿乐的作用效果相似，中剂量组与阳性药洛伐他汀组相似，且高剂量组作用优于中剂量组，低剂量较两阳性药差。

临床试验

一、治疗冠状动脉粥样硬化性心绞痛疗效观察

1、实施例1与消心痛、复方丹参片对比

1.1一般治疗  选择100例患者均符合冠状动脉粥样硬化性心绞痛的诊断标准，随机分为治疗组55例，其中男35例，女20例；年龄48-70岁，平均56岁；对照组45例，男30例，女15例，年龄40-70岁，平均54岁。

1.2治疗方法  治疗组用实施例1冻干粉剂300mg加5％葡萄糖250ml静脉滴注，消心痛10mg，复方丹参片3片，每日3次口服，2周为1疗程；对照组只用消心痛10mg，复方丹参片3片，每日3次口服，2周为1疗程。两组均辅以β-受体阻滞剂、钙拮抗剂、调脂类药物。所有病例治疗终结后复查血常规、尿常规、心电图、肝肾功能等，对严重心绞痛发作者可含服硝酸日油缓解。

1.3治疗效果：

P＜0.05，两种治疗方法的总有效率差异显著，治疗组有效率明显优于对照组。

1.4毒副作用：治疗观察期间未见明显副作用，治疗终结后复查血常规、尿常规、心电图、肝肾功能均无异常。

2、实施例1与复方丹参注射液对比

2.1对象与方法

2.1.1研究对象  选择住院冠状动脉粥样硬化患者80例，随机分为两组，每组40例，治疗组用实施例1，对照组用复方丹参注射液。治疗组年龄62-89岁，平均70.3岁，对照组年龄60-88岁，平均76岁。

2.1.2方法  治疗组采用实施例1冻干粉剂420mg加5％葡萄糖250ml或生理盐水250ml，静脉滴注，每天1次，共用15天。对照组采用复方丹参注射液40ml加5％葡萄糖250ml或生理盐水250ml，静脉滴注，每天1次，共用15天。两组治疗前后抽血查肝、肾功能、血糖、血脂、血液流变学、栓溶二聚体及12导联心电图检查，并观测患者的血压、心率和胸闷、心悸、胸痛等症状变化。以症状完全消失为显效，明显减轻或发作次数减少为有效，无改善为无效。心电图变化以缺血性ST由用药前下降1mm，T波倒置，治疗后恢复正常为显效，下降有改善T波变低平或双相为有效，其余为无效。

2.1.3统计方法  治疗前后采用配对t检验，治疗组与对照组之间采用四格表确切概率法运算，数据采用PEMS统计软件包计算。

2.2结果

实施例1治疗组与对照组治疗前后肝肾功能、血脂、血糖变化不大，均在正常范围，栓溶二聚体在实施例1组有14例治疗后降至正常，对照组11例降至正常。降血压方面，两组均有不同程度的降血压作用，治疗组有16例收缩压降低，11例舒张压降低；；对照组有2例收缩压降低，4例舒张压降低。

治疗前后血液流变学变化(x±s)

2.3讨论

实施例1粉针用于治疗冠状动脉粥样硬化疗效确切，能改善患者临床症状，部分恢复心电图的ST-T改变，及心律失常；在用药期间，实施例1的降血压作用亦较为明显，在降低血粘滞方而略优于复方丹参注射液，治疗期间无副作用发生。

3、实施例1与复方丹参注射液对比治疗老年病人冠状动脉粥样硬化心绞痛疗效的临床观察

1资料方法

1.1病例选择  选择武汉市同济医院、武汉大学人民医院、湖北省中医医院共155例住院患者，年龄50-70岁，平均61.2±4.3岁，随机分为两组，治疗组80例，其中75例有缺血性心电图改变，采用实施例1粉针剂治疗；对照组75例，其中71例有缺血性心电图改变，采用复方丹参注射液治疗。

1.2方法  治疗组采用实施例1粉针剂500mg加入5％葡萄糖250ml或生理盐水250ml，静脉滴注，每天1次，共用10天。对照组采用复方丹参液40ml加入5％葡萄糖250ml或生理盐水250ml治疗，静脉滴注，每天1次，共用10天。用药前及疗程结束时检查心电图、血液流变学、血脂、血糖、出凝血时间，并观察患者血压和症状变化。

1.3疗效判定标准  心绞痛症状疗效和心电图疗效均按1993年中华人民共和国卫生部药政局颁布的《心血管系统药物临床研究指导原则》进行评定。(1)心绞痛症状疗效判定标准，显效：同等劳累程序不引起心绞痛或心绞痛发作次数减少80％以上，硝酸甘油耗量减少80％以上；有效：心绞痛发作次数及硝酸甘油消耗量均减少50-80％；无效：心绞痛发作次数及硝酸甘油消耗量均减少不到50％；加重：心绞痛发作次数、程序和持续时间加重，硝酸甘油消耗量增加。(2)心电图疗效判定标准，显效：静息心电图恢复正常，次极限运动试验心电图阳性转为阴性，或运动耐量上升2级；改善：静息心电图或次极限量运动试验心电图缺血性ST段下降，治疗后回升1.5mm以上，但未正常，或主要导联倒置T波变浅达50％以上，或T波由平坦转为直立，或运动耐量上升1级；无改变：静息心电目或次极限量运动试验心电图与治疗前基本相同；加重：静息或次极限量运动试验心电图ST段较治疗前下降＞0.5mm，主要导联倒置T波加深＞0.5mm，主要导联倒置T波加深＞50％或直立T波变为平坦，或平坦T波变为倒置或次极限量运动试验较治疗前运动耐量下降1级。

1.4统计处理  应用SPSS10.0统计软件进行统计分析。数据用均数±标准差(x±S)表示，根据资料特征采用t检验或Ridit分析。

2结果

2.1临床疗效和心电图变化  实施例1粉针剂治疗后，临床总有效率为82.5％，较对照组明显增高，经统计学处理，差异有显著性意义(P＞0.01)。对冠状动脉粥样硬化患者缺血性改变，实施例1粉针剂具有明显的改善作用，与对照组比较，统计学上差异具有显著性意义(P＞0.01)，见下表。

两组临床疗效和心电图疗效的比较表

注：与对照组比，^*P＜0.01

2.2血液流变学改变  实施例1粉针治疗后，患者血液流变学指标都具有明显改善，而复方丹参仅能使部分血液流变学指标得以改善。

治疗前后血液流变学变化

2.3血脂、血糖的影响  实施例1粉针治疗组与对照组治疗前后血脂、血糖及出凝血时间变化均不明显，故数据略。

3、讨论

根据临床观察，用实施例1冻干粉剂治疗一般在2-3个疗程内可使甘油三脂明显下降，心电图STT段有所提高，且疗效较复方丹参注射液好。另外，实施例1冻干粉剂能明显改善患者血液流变学指标，复方丹参注射液仅能改善部分血液流变学指标。临床研究发现，患者应用实施例1冻干粉剂后，降低了心绞痛的发作次数及持续时间，也减少了心肌耗氧量，同时降低了血液黏度，与对照组治疗后比较差异均有显著性。这可能是其治疗冠状动脉粥样硬化心绞痛的部分机制。

二、治疗心肌缺血疗效观察

1资料与方法

1.1一般资料  通过做心电图及活动平板试验，筛选出110例不同程度的心肌缺血病例，把他们随机分为实施例1(冻干)治疗组，复方丹参注射液对照组。治疗组56例，男27例，女29例；年龄50～69岁；其中由高血压引起的25例，高血脂引起的14例，糖尿病引起的12例，其他5例，病程2～10年。轻度心肌缺血37例，明显心肌缺血19例。对照组54例，男25例，女29例；年龄50～67岁；病程2～9年；其中由高血压引起的23例，高血脂引起的15例，糖尿病引起的11例，其他5例；轻度心肌缺血36例，明显心肌缺血18例。两组年龄、病程、病种及病情差异无显著性(P＞0.05)。

1.2治疗方法  治疗组用实施例1(冻干)静脉滴注治疗，根据病情，每次250～500mg，用5％葡萄糖液或生理盐水注射液250～500ml稀释，每日1次；对照组用复方丹参注射液，静脉滴注，根据病情每次6～10ml，用5％葡萄糖液或生理盐水注射液250～500ml稀释，每日1次，各组均针对原发病进行相应治疗。2周为1个疗程，相隔1个月后再行第2个疗程，治疗共28天，两组病例观察期间均能接受全程治疗，无中途退出者。

2结果

治疗4周后复查活动平板、相关血生化及血压检查，治疗组心肌缺血明显改善者35例，显效率62.5％；有所改善52例，有效率92.9％。对照组心肌缺血明显改善者23例，显效率42.6％；有所改善42例，有效率77.8％。两组疗效比较经统计学处理差异有显著性(P＜0.05)。各组原发疾病比治疗前均有不同程度地好转，这里不做统计学分析。本临床结果提示，实施例1能有效地改善高血压、高血脂、糖尿病及其他原因引起的心肌缺血，为临床用药提供了指导作用。

三、实施例1治疗心肌梗死临床观察

1、对象

入选标准：长征医院心内科有明显胸闷症状的冠状动脉粥样硬化住院患者；排除标准：急性心肌梗死患者或不能行走者。总共入选42例，男29例，女13例，平均年龄68±6岁。其中，38例经冠状动脉造影确诊，4例有陈旧性心肌梗死史，冠状动脉粥样硬化合并高血压及陈旧性梗死6例。

2、方法

随即分为对照组20例和实验组22例。对照组只接受常规治疗；实验组在常规治疗基础上，给予注射用实施例1针剂450mg，稀释于5％葡萄糖生理盐水250ml静滴，每日一次，7-10天为一疗程。

3、临床观察

以胸闷症状及6分钟步行距离为疗效评价指标。显效：疗程结束时，胸闷症状完全缓解，且6分钟步行距离较用药前增加2倍以上；有效：疗程结束时，胸闷症状部分缓解且6分钟步行距离增加1倍以上；无效：疗程结束时，胸闷症状无缓解且6分钟步行距离增加不到1倍。

4、结果

实验组显效14例(63.6％)，有效8例(36.4％)，无效0例，总有效率100％，其中，冠状动脉粥样硬化合并高血压及陈旧性脑梗死的3例患者主诉症状的改善更为明显。对照组显效9例(45％)，有效10例(50％)，无效1例(5％)，总有效率95％，其中，冠状动脉粥样硬化合并高血压及陈旧性脑梗死的3例患者中，2例主诉症状改善明显，1例改善不满意。疗效中未见明显副作用，病人耐受性良好。

5、讨论

我们采用实施例1观察了部分冠状动脉粥样硬化诊断明确，患者主诉胸闷而非典型胸痛的患者。结果显示，虽然注射用实施例1不能进一步提高治疗的总有效率，但可提高显效病人的比例，尤其在冠状动脉粥样硬化合并高血压及陈旧性脑梗死的患者。因此，在常规心血管病药物治疗基础上，加用注射用实施例1静脉滴注7-10天，可以进一步改善冠状动脉粥样硬化患者胸闷状况和运动耐力。

四、实施例1治疗充血性心力衰竭

1临床资料

1.1诊断标准：所有病例均符合中华医学会心血管病学分会于2002年制定的诊断标准，并按美国纽约心脏协会(NYHA)分级标准进行分级。

1.2观察对象：90例冠状动脉粥样硬化性心脏病(陈旧性心肌梗死)均为住院资料完整并排除合并糖尿病、肺心病及严重肝、肾功能损害的患者。以II、III、IV级心功能进行分层，然后每级按入院先后顺序分2组，治疗组45例；对照组45例。2组临床资料和常规基础用药之间具有良好可比性，经t及卡方检验无显著差异(P＞0.1)。见以下两表(两组基础用药比较、2组临床资料比较)

表：两组基础用药比较

表：2组临床资料比较

2治疗方法

对照组以常规抗心衰治疗(低欲饮食、吸氧、休息、利尿、抑制神经内分泌因子活性等)；治疗组在常规治疗基础上加实施例1冻干粉剂300mg，加入5％葡萄糖注射液250ml，静脉点滴，3.5h滴完，每日1次，疗程14天。在不影响治疗情况下，2组用药应尽量保持可比性。

3观察指标

3.1疗效标准：根据《中药新药临床研究指导原则》分为临床近期治愈：心功能纠正至1级，症状、体征基本消失，各项检查基本恢复正常；显效：心功能进步2级以上而未达到1级心功能，症状、体征及各项检查明显改善；有效：心功能进步1级以上而未达到1级心功能，症状、体征及各项检查有所改善；无效：心功能无明显变化或加重或死亡。

3.2左室功能：采用Hp 550型超声诊断仪，3.0MHz探头进行检查，采用双平面Simpson公式法测定左室收缩末期容积(LVESV)，左室舒张末期容积(LVEDV)及射血分数(LVEF)，以上指标均连续测定3次，取平均值。如为心房颤动者，连续测5次LVEF取其平均值。

3.3纤溶功能和内皮素-1(ET-1)测定：采用酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)法测定血浆组织纤溶酶原激活物(tPA)、组织纤溶酶原激活物抑制物(PA I)、ET-1，采用免疫浊度法测纤溶酶原(PLG)，采用法国STAGD-STA全自动血凝仪测定纤维蛋白原(FIB)。试剂盒由上海太阳生物技术公司提供，严格按试剂盒说明书进行操作。

4统计方法：疗效比较应用Ridit分析，计量资料采用2组比较t检验。

5治疗结果

5.1  2组临床疗效比较

2组相比，治疗组总有效率优于对照组(P＜0.05)。

5.2  2组治疗前后纤溶系统比较(x±s)

注：与本组治疗前比较，(1)P＜0.01，(2)P＜0.05；与对照组治疗前后比较，(3)P＜0.05

5.3  2组治疗前后左室功能比较(x±s)

注：与本组治疗前比较，(1)P＜0.01；与对照组治疗前后比较，(2)P＜0.05

6讨论

目前己明确，慢性充血性心力衰竭患者肾素-血管紧张素一醛固酮系统激活，致血管紧张素-II(Ang II)增高，And II增高又致PAI-1增高，而PAI-1对tPA具有抑制作用。tPA可使PLC激活，转变为纤溶酶，纤溶酶可使纤维蛋白(原)溶解。另有研究发现，慢性心衰患者血浆ET-1水平升高，而ET-1是一种强效缩血管物质，可直接参与心肌重构和心衰的发展过程，与心衰的严重程度成正相关。心衰时血浆FIB和ET-1升高可进一步加重其微循环障碍。实施例1有效成分为三七总皂苷，具有活血化瘀、通脉活络之功。本研究显示，实施例1可明显降低血浆PAI，FIB，PLG和ET-I水平，与对照组比较差异显著，这与既往报道相同；它可明显升高tPA水平，但与对照组比较无显著性差异。PAI下降减少了对tPA的抑制，从而有效地激活了PLG，进而使FIB下降，通过反馈作用PLG亦下降。随着PAI，FIB和ET-1下降，与对照组相比，LVESV明显下降(P＜0.05)，LVEF明显提高(P＜0.05)，从而心功能得到明显改善，总有效率明显提高(P＜0.05)。因此，实施例1治疗充血性心力衰竭有明显疗效。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数(乙醇为体积百分比)，BV/h表示以树脂体积为V计，B为倍数，溶液每小时的洗脱体积为树脂体积B×V。

实施例1：

取三七粉碎成粗粉1000g，加65％乙醇7000ml提取7小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.13(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为12.47％、人参皂苷Rg₁为45.12％、人参皂苷Re为6.04％、人参皂苷Rb₁为29.94％，以上四成份总量为93.57％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.51。

实施例2：

取三七粉碎成粗粉1000g，加50％乙醇10000ml提取6小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.4g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱(乙醇浓度在5.5小时内由5％调整至95％)，流速5.0BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，干燥，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物50mg～55mg，超滤，灌装，制成实施例1注射液。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为11.54％、人参皂苷Rg₁为45.26％、人参皂苷Re为5.06％、人参皂苷Rb₁为31.26％，以上四成份总量为93.12％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.45。

实施例3：

取三七粉碎成粗粉1000g，加75％乙醇7500ml提取8小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.6g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱(乙醇浓度在6.5小时内由5％调整至95％)，流速4.0BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.16(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加针用活性炭0.30％(重量比)，80℃以下保温搅拌30分钟，滤过，加注射用水调节每1ml含固形物150mg，冷冻干燥，分装，制成实施例1粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为13.3％、人参皂苷Rg₁为49.1％、人参皂苷Re为5.1％、人参皂苷Rb₁为30.9％，以上四成份总量为98.4％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.59。

实施例4：

取三七粉碎成粗粉1000g，加80％乙醇8000ml提取6小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.13(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为10.1％、人参皂苷Rg₁为37.4％、人参皂苷Re为4.7％、人参皂苷Rb₁为36.17％，以上四成份总量为88.37％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.03。

实施例5：

取三七粉碎成粗粉1000g，加85％乙醇8000ml提取8小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.13(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为10.4％、人参皂苷Rg₁为39.6％、人参皂苷Re为5.2％、人参皂苷Rb₁为36.0％，以上四成份总量为91.2％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.10。

实施例6：

取三七粉碎成粗粉1000g，加75％乙醇8000ml提取7小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.13(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为13.1％、人参皂苷Rg₁为41.21％、人参皂苷Re为4.9％、人参皂苷Rb₁为34.23％，以上四成份总量为93.44％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.20。

实施例7：

取三七粉碎成粗粉1000g，加65％乙醇6000ml提取8小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.12(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为9.77％、人参皂苷Rg₁为44.89％、人参皂苷Re为4.41％、人参皂苷Rb₁为26.01％，以上四成份总量为88.08％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.73。

实施例8：

取三七粉碎成粗粉1000g，加90％乙醇10000ml提取9小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.12(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例1粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为12.3％、人参皂苷Rg₁为23.12％、人参皂苷Re为5.81％、人参皂苷Rb₁为34.96％，以上四成份总量为76.19％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶0.66。

实施例9：

取三七粉碎成粗粉1000g，加85％乙醇9000ml提取10小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.12(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例9粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为13.6％、人参皂苷Rg₁为51.01％、人参皂苷Re为5.1％、人参皂苷Rb₁为28.2％，以上四成份总量为97.91％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.81。

实施例10：

取三七粉碎成粗粉1000g，加65％乙醇7500ml提取9小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.13(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成实施例10粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为10.12％、人参皂苷Rg₁为51.67％、人参皂苷Re为4.4％、人参皂苷Rb₁为27.1％，以上四成份总量为93.29％，且Rb₁∶Rg₁为1.0∶1.91。

Claims (11)

1.一种三七总皂苷组合物在制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物的应用，其特征在于：所述三七总皂苷组合物中含有活性成份，该活性成份由三七提取的三七总皂苷活性成份组成，其中三七皂苷R1含量大于8.0％、人参皂苷Rg1含量大于25％、人参皂苷Re含量大于4.0％、人参皂苷Rb1含量大于25％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re与人参皂苷Rb1的总重量不低于活性成份总重量75％，所述组合物通过下述方法制备：

(1)取三七粉碎成粗粉1000g，加体积比为5-30倍的45-95％的乙醇8000ml提取0.5～10小时，收集提取液，过滤；

(2)取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液；

(3)溶液通过D型大孔树脂柱吸附，用乙醇-水的混合液进行梯度洗脱，流速按每小时树脂体积的倍数计为4.5BV/h，洗脱液中乙醇浓度逐步由5％调整至95％，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至在60℃下相对密度为1.10～1.20的清膏，低温干燥得三七总皂苷组合物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：Rb1∶Rg1为1.0∶0.5～2.0。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：Rb1∶Rg1为1.0∶1.0～1.8。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：Rb1∶Rg1为1.0∶1.4～1.6。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re与人参皂苷Rb1的总重量大于活性成份总重量的85％。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re与人参皂苷Rb1的总重量大于活性成份总重量的90％。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：其中三七皂苷R1含量为8％～15％、人参皂苷Rg1含量为35％～52％、人参皂苷Re含量为4％～10％、人参皂苷Rb1含量为25％～40％

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤(1)中加入7倍的乙醇。

9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤(1)中加入的乙醇浓度为65％。

10.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤(1)中提取时间为7小时。

11.根据权利要求1-10所述的应用，其特征在于：其中的组合物可被制成注射液、注射用粉针剂、注射用冻干粉针剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂或滴丸剂制剂。