CN102100152B - 一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基，以培养瓶容量500mL所装培养基计算：其配方组分为：棉籽壳20-25g，营养液120-140mL；所述的营养液重量份组分为：小麦粉2.0-3.0份，豆粉1.0-1.5份，白糖3.0-4.0份，硫酸镁0.1-0.2份，磷酸二氢钾0.1-0.2份，硫酸锌0.05-0.1份，氯化钠0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8，其人工培养方法包括培养基制备，分装，灭菌；冷却，接种；培养；采收子实体步骤；本发明操作简单、高效节能、培养周期短、子实体产率高、无污染、无固态废弃物。

Description

一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基

技术领域：

本发明涉及一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基，属于生物医药技术领域。 

背景技术：

蛹虫草，又名北冬虫夏草、北虫草，属子囊菌亚门、核菌纲、球壳目、麦角菌科、虫草属，是我国名贵中药材之一。北虫草是虫草属的模式种，与冬虫夏草为虫草的同属异种真菌，两者的化学成分、营养成分和药用功能均非常相似；北虫草主要药用成分虫草素等的含量远高于野生冬虫夏草，而且比冬虫夏草更易于人工栽培，因此被选为冬虫夏草的最佳替代产品而进行大量人工培育。20世纪90年代以来，对作为药物和保健食品的北虫草的药化、药理、毒理和毒性等进行了大量分析和安全评价，证明人工栽培的北虫草无毒副作用，具有明显的镇静、抗疲劳、抗肿瘤、抑制癌细胞和具有雄性激素样作用，可增强机体免疫功能等，作为药品和食品使用对人体是安全可靠的。2007年国家高技术研究发展计划(863计划)已将北虫草开发与规模化生产列入重点研究项目。开发北虫草及其活性成分资源不仅有很高的经济价值，而且有重要的社会效益。 

目前，蛹虫草培养普遍采用固体培养方法，选用大米、小米、玉米、高粱等粮食作物，加入由氮源、碳源、无机元素等配置的营养液，经过高温灭菌后，接入液体菌种，在适宜的条件下培养。这种培养方法仍存在一些弊端，如：粮食利用效率低、灭菌过程中能源消耗大、且需要进行前期培养基配置、后期采收后残余培养基的清理及培养瓶的洗刷等，工作量大。 

发明内容：

本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种操作简单、高效节能、培养周期短、子实体产率高、无污染、无固态废弃物的蛹虫草子实体的人工培养方法。该方法既可以小规模种植又可以工厂化生产。 

本发明的目的可以通过如下措施来达到：一种用于培养蛹虫草子实体的培养基，其特征在于以培养瓶容量500mL所装培养基计算：其配方组分为：棉籽壳20-25g，营养液120-140mL；所述的营养液重量份组分为：小麦粉2.0-3.0份，豆粉1.0-1.5份，白糖3.0-4.0份，硫酸镁0.1-0.2份，磷酸二氢钾0.1-0.2份，硫酸锌0.05-0.1份，氯化钠0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8；

所述的棉籽壳是将棉籽壳浸入水中2-3天后，取出晒干后制成，放棉籽壳的时候应平铺于瓶底。 

一种蛹虫草子实体的人工培养方法，其特征在于包括培养基制备、灭菌、接种、培养、采收步骤，具体工艺步骤为： 

(1)培养基制备： 

以培养瓶容量500mL所装培养基计算： 

培养基构成：棉籽壳20-25g、营养液120-140mL； 

棉籽壳的处理：将棉籽壳浸入水中2-3天后，取出晒干，放棉籽壳的时候应平铺于瓶底； 

营养液重量份组分为：小麦粉2.0-3.0份，豆粉1.0-1.5份，白糖3.0-4.0份，硫酸镁0.1-0.2份，磷酸二氢钾0.1-0.2份，硫酸锌0.05-0.1份，氯化钠0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8； 

(2)培养基分装，灭菌： 

将配制好的培养基分装于培养瓶或罐头瓶中，封口，在121-125℃条件下蒸汽灭菌20-30分钟； 

(3)冷却，接种： 

灭完菌后取出培养基，自然冷却至室温，在无菌条件下，接入蛹虫草菌种； 

(4)培养： 

将接好种的蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-25℃避光培养5-10天，待菌丝长满瓶面后，转移到22-25℃、每天12-24小时散射光条件下培养60-90天； 

(5)采收子实体： 

将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基。 

为了进一步实现本发明的目的，所述的步骤(3)中接入的蛹虫草菌种为固体培养的蛹虫草菌种。 

为了进一步实现本发明的目的，所述的步骤(3)中接入的蛹虫草菌种为蛹虫草液体菌种，该蛹虫草液体菌种通过试管斜面菌种培养和三角瓶液体种子培养而成，具体工艺步骤为： 

试管斜面菌种培养： 

斜面培养基重量份组分为：葡萄糖2.0份-3.0份，蛋白胨0.5 份-1.0份，硫酸镁0.1份-0.5份，磷酸二氢钾0.1份-0.5份，琼脂粉1.0份-2.0份，水95-105份，pH值6-8；将培养基灭菌后装入试管中，室温摆斜面，将蛹虫草菌种于无菌条件下接入试管斜面，20～25℃暗培养5-10天； 

三角瓶液体种子培养： 

液体培养基重量份组分为：葡萄糖1.0份-3.0份，蛋白胨0.5份-1.0份，硫酸镁0.1份-0.5份，磷酸二氢钾0.1份-0.5份，硫酸锌0.05-0.1份，氯化钠0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8，将配制好的培养基分装入锥形瓶中，封口后在121～125℃条件下灭菌20～30分钟，取出培养基，冷却至室温，在无菌条件下接入培养后的斜面菌种，20～25℃摇瓶培养5天～10天。 

本发明同已有技术相比可产生如下积极效果和显著进步： 

1.成本低，效率高。改变了传统方法中大量使用粮食作物的方法，小麦粉和豆粉的使用提高了培养基的利用效率，不会造成粮食作物的浪费。 

2.节能。本发明减小了能源的消耗，由于棉籽壳富含大量纤维空隙大且不溶于水，在本培养基中起到一定支撑物的作用，因此无论使用高压或常压灭菌时，均可以按照液体灭菌时间长短，因此即节省了时间、又减少了灭菌过程中热能的消耗。 

3.生长周期短。由于棉籽壳间隙大，透气性好，不会像粮食作物那样灭菌后凝结在一起，因此便于蛹虫草充分的利用氧气，发菌及子实体生长时间均少于传统培养方法。 

4.不用控制相对湿度。由于培养基中含有大量水分，培养瓶内的相对湿度适合子实体的生长，因此不用像传统方法那样控制空气湿度也省去后期向培养基补充水分这一步骤。 

5.减少了工作量。省去了传统方法中虫草采摘后培养瓶中残余培养基的清洁工作，由于棉籽壳不会像粮食作物那样粘于瓶底，因此方便清洁，且棉籽壳可以重复利用。 

具体实施方式：

下面对本发明的具体实施方式作详细说明： 

实施例1：(一)菌种准备： 

低温保藏蛹虫草菌种：蛹虫草菌种cfcc5973，来源于中国林业微生物菌种保藏管理中心。蛹虫草菌种还可采用其他普通栽培品种。 

蛹虫草液体菌种：按下述工艺步骤培养： 

试管斜面菌种培养： 

斜面培养基重量份组分为：葡萄糖2.0g，蛋白胨1.0g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.1g，琼脂粉2.0g，水95g，pH值6-8；将培养基灭菌后装入试管中，室温摆斜面，将蛹虫草菌种于无菌条件下接入试管斜面，20～25℃暗培养5-10天； 

三角瓶液体种子培养： 

液体培养基重量份组分为：葡萄糖1.0g，蛋白胨1.0g，硫酸镁0.1g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸锌0.05g，氯化钠0.1g，水95g，pH值6-8，将配制好的培养基分装入锥形瓶中，封口后在121～125℃条件下灭菌20～30分钟，取出培养基，冷却至室温，在无菌条件下接入培养后的斜面菌种，18～25℃摇瓶培养5天～10天。 

(二)培养基制备： 

营养液重量份组分为：小麦粉2.0g，豆粉1.5g，白糖3.0g，硫酸镁0.2g，磷酸二氢钾0.1g，硫酸锌0.1g，氯化钠0.05g，水95g，pH值6-8。 

将棉籽壳20g浸入水中2-3天后，取出晒干，然后平铺于500mL培养瓶的瓶底；将120mL的营养液装入培养瓶中； 

(三)培养基分装，灭菌： 

将配制好的培养基分装于培养瓶或罐头瓶中，封口，在121-125℃条件下蒸汽灭菌20-30分钟； 

(四)冷却，接种： 

灭完菌后取出培养基，自然冷却至室温，在无菌条件下，接入蛹虫草菌种； 

(五)培养： 

将接好种的蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-25℃避光培养5-10天，待菌丝长满瓶面后，转移到22-25℃、每天12-24小时散射光条件下培养60-90天； 

(六)采收子实体： 

将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基。 

实施例2：(一)菌种准备： 

低温保藏蛹虫草菌种：蛹虫草菌种cfcc5973，来源于中国林业微生物菌种保藏管理中心。蛹虫草菌种还可采用其他普通栽培品种。 

蛹虫草液体菌种：按下述工艺步骤培养： 

试管斜面菌种培养： 

斜面培养基重量份组分为：葡萄糖3.0g，蛋白胨0.5g，硫酸镁0.1g，磷酸二氢钾0.5g，琼脂粉1.0g，水105g，pH值6-8；将培养基灭菌后装入试管中，室温摆斜面，将蛹虫草菌种于无菌条件下接入试管斜面，20～25℃暗培养5-10天； 

三角瓶液体种子培养： 

液体培养基重量份组分为：葡萄糖3.0g，蛋白胨0.5g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.1g，硫酸锌0.1g，氯化钠0.05g，水105g，pH值6-8，将配制好的培养基分装入锥形瓶中，封口后在121～125℃条件下灭菌20～30分钟，取出培养基，冷却至室温，在无菌条件下接入培养后的斜面菌种，20～25℃摇瓶培养5天～10天。 

(二)培养基制备： 

营养液重量份组分为：小麦粉3.0g，豆粉1.0g，白糖4.0g，硫酸镁0.1g，磷酸二氢钾0.2g，硫酸锌0.05g，氯化钠0.1g，水105g，pH值6-8。 

将棉籽壳25g浸入水中2-3天后，取出晒干，然后平铺于500mL培养瓶的瓶底；将140mL的营养液装入培养瓶中； 

(三)培养基分装，灭菌： 

将配制好的培养基分装于培养瓶或罐头瓶中，封口，在121-125℃条件下蒸汽灭菌20-30分钟； 

(四)冷却，接种： 

灭完菌后取出培养基，自然冷却至室温，在无菌条件下，接入蛹虫草菌种； 

(五)培养： 

将接好种的蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-25℃避光培养5-10天，待菌丝长满瓶面后，转移到22-25℃、每天12-24小时散射光条件下培养60-90天； 

(六)采收子实体： 

将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基。 

实施例3：(一)菌种准备： 

低温保藏蛹虫草菌种：蛹虫草菌种cfcc5973，来源于中国林业微生物菌种保藏管理中心。蛹虫草菌种还可采用其他普通栽培品种。 

蛹虫草液体菌种：按下述工艺步骤培养： 

试管斜面菌种培养： 

斜面培养基重量份组分为：葡萄糖2.5g，蛋白胨0.7g，硫酸镁0.3g，磷酸二氢钾0.3g，琼脂粉1.7g，水100g，pH值6-8；将培养 基灭菌后装入试管中，室温摆斜面，将蛹虫草菌种于无菌条件下接入试管斜面，20～25℃暗培养5-10天； 

三角瓶液体种子培养： 

液体培养基重量份组分为：葡萄糖2g，蛋白胨0.6g，硫酸镁0.4g，磷酸二氢钾0.25g，硫酸锌0.08g，氯化钠0.07g，水100g，pH值6-8，将配制好的培养基分装入锥形瓶中，封口后在121～125℃条件下灭菌20～30分钟，取出培养基，冷却至室温，在无菌条件下接入培养后的斜面菌种，20～25℃摇瓶培养5天～10天。 

(二)培养基制备： 

营养液重量份组分为：小麦粉2.5g，豆粉1.2g，白糖3.5g，硫酸镁0.15g，磷酸二氢钾0.15g，硫酸锌0.08g，氯化钠0.06g，水100g，pH值6-8。 

将棉籽壳22g浸入水中2-3天后，取出晒干，然后平铺于500mL培养瓶的瓶底；将130mL的营养液装入培养瓶中； 

(三)培养基分装，灭菌： 

将配制好的培养基分装于培养瓶或罐头瓶中，封口，在121-125℃条件下蒸汽灭菌20-30分钟； 

(四)冷却，接种： 

灭完菌后取出培养基，自然冷却至室温，在无菌条件下，接入蛹虫草菌种； 

(五)培养： 

将接好种的蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-25℃避光培养5-10天，待菌丝长满瓶面后，转移到22-25℃、每天12-24小时散射光条件下培养60-90天； 

(六)采收子实体： 

将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基。 

Claims (5)

1.一种用于培养蛹虫草子实体的培养基，其特征在于以培养瓶容量500mL所装培养基计算：其配方组分为：棉籽壳20-25g，营养液120-140mL；所述的营养液重量份组分为：小麦粉2.0-3.0份，豆粉1.0-1.5份，白糖3.0-4.0份，硫酸镁0.1-0.2份，磷酸二氢钾0.1-0.2份，硫酸锌0.05-0.1份，氯化钠0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8。

2.根据权利要求1所述的一种用于培养蛹虫草子实体的培养基，其特征在于所述的棉籽壳是将棉籽壳浸入水中2-3天后，取出晒干后制成。

3.一种蛹虫草子实体的人工培养方法，其特征在于包括培养基制备、灭菌、接种、培养、采收步骤，具体工艺步骤为：

(1)培养基制备：

以培养瓶容量500mL所装培养基计算：

培养基构成：棉籽壳20-25g、营养液120-140mL；

棉籽壳的处理：将棉籽壳浸入水中2-3天后，取出晒干，放棉籽壳的时候应平铺于瓶底；

营养液重量份组分为：小麦粉2.0-3.0份，豆粉1.0-1.5份，白糖3.0-4.0份，硫酸镁0.1-0.2份，磷酸二氢钾0.1-0.2份，硫酸锌0.05-0.1份，氯化钠0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8；

(2)培养基分装，灭菌：

将配制好的培养基分装于培养瓶或罐头瓶中，封口，在121-125℃条件下蒸汽灭菌20-30分钟；

(3)冷却，接种：

灭完菌后取出培养基，自然冷却至室温，在无菌条件下，接入蛹虫草菌种；

(4)培养：

将接好种的蛹虫草培养基置于恒温培养箱里，20-25℃避光培养5-10天，待菌丝长满瓶面后，转移到22-25℃、每天12-24小时散射光条件下培养60-90天；

(5)采收子实体：

将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基。

4.根据权利要求3所述的一种蛹虫草子实体的人工培养方法，其特征在于所述的步骤(3)中接入的蛹虫草菌种为固体培养的蛹虫草菌种。

5.根据权利要求3所述的一种蛹虫草子实体的人工培养方法，其特征在于所述的步骤(3)中接入的蛹虫草菌种为蛹虫草液体菌种，该蛹虫草液体菌种通过试管斜面菌种培养和三角瓶液体种子培养而成，具体工艺步骤为：

试管斜面菌种培养：

斜面培养基重量份组分为：葡萄糖2.0份-3.0份，蛋白胨0.5份-1.0份，硫酸镁0.1份-0.5份，磷酸二氢钾0.1份-0.5份，琼脂粉1.0份-2.0份，水95-105份，pH值6-8；将培养基灭菌后装入试管中，室温摆斜面，将蛹虫草菌种于无菌条件下接入试管斜面，20～25℃暗培养5-10天；

三角瓶液体种子培养：

液体培养基重量份组分为：葡萄糖1.0份-3.0份，蛋白胨0.5份-1.0份，硫酸镁0.1份-0.5份，磷酸二氢钾0.1份-0.5份，硫酸锌0.05-0.1份，氯化钠0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8，将配制好的培养基分装入锥形瓶中，封口后在121～125℃条件下灭菌20～30分钟，取出培养基，冷却至室温，在无菌条件下接入培养后的斜面菌种，20～25℃摇瓶培养5天～10天。