CN103098648B - 一种分枝虫草菌株及其子实体和人工栽培方法 - Google Patents
一种分枝虫草菌株及其子实体和人工栽培方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103098648B CN103098648B CN201310037585.XA CN201310037585A CN103098648B CN 103098648 B CN103098648 B CN 103098648B CN 201310037585 A CN201310037585 A CN 201310037585A CN 103098648 B CN103098648 B CN 103098648B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cordyceps
- days
- sporophore
- ramose
- branch
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000190633 Cordyceps Species 0.000 title claims abstract description 39
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 18
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 33
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 32
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 29
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 26
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 22
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 21
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 21
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 13
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 13
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 10
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 9
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 9
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 9
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 8
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 claims description 7
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 6
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 claims description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 3
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 abstract description 8
- KQLDDLUWUFBQHP-UHFFFAOYSA-N Cordycepin Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OCC(CO)C1O KQLDDLUWUFBQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 abstract description 5
- OFEZSBMBBKLLBJ-BAJZRUMYSA-N cordycepin Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)C[C@H]1O OFEZSBMBBKLLBJ-BAJZRUMYSA-N 0.000 abstract description 5
- OFEZSBMBBKLLBJ-UHFFFAOYSA-N cordycepine Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)CC1O OFEZSBMBBKLLBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract description 5
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 abstract description 4
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 abstract description 4
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 abstract description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 abstract description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 abstract description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract 1
- 240000001307 Myosotis scorpioides Species 0.000 description 23
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 22
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 4
- 206010046788 Uterine haemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- -1 rtificial Species 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- 241000221775 Hypocreales Species 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 235000003276 Apios tuberosa Nutrition 0.000 description 1
- 241001264174 Cordyceps militaris Species 0.000 description 1
- 241000192128 Gammaproteobacteria Species 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000257212 Hypocreomycetidae Species 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241001248610 Ophiocordyceps sinensis Species 0.000 description 1
- 241001529399 Ophiocordycipitaceae Species 0.000 description 1
- 241001326562 Pezizomycotina Species 0.000 description 1
- 241000357397 Polycephalomyces prolificus Species 0.000 description 1
- 241001149964 Tolypocladium Species 0.000 description 1
- 150000003838 adenosines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 208000007106 menorrhagia Diseases 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Mushroom Cultivation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种分枝虫草菌GDIM_CR20110521（Cordyceps ramosa GDIM_CR20110521）CCTCC NO：M2013015及其子实体和人工栽培方法，其特征是通过将该菌株或其野生或栽培成功后获得的子实体进行组织分离，接入综合PDA斜面培养基制备斜面母种，斜面母种再接至液体培养基中制备一级菌种，一级菌种接入液体培养基中制备生产种，生产菌种在生产用培养基中培养获得一种人工栽培的分枝虫草子实体。本发明分枝虫草子实体生物转化率达到10%～20%，含有多种有效成分和营养成分，其含量为:腺苷0.008%～0.01%，虫草素0.001%～0.005%，虫草酸4.0%～4.82%，粗蛋白15.0%～17.9%，粗纤维10.0%～13.3%，粗多糖1.0%～1.1%，可作为食品或原料使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种虫草菌株及其子实体和人工栽培方法，具体来说是涉及一种分枝虫草（Cordyceps ramosa Teng）的菌株GDIM_CR20110521及其子实体和人工栽培方法。
背景技术
分枝虫草（Cordyceps ramose Teng）也称分枝团囊虫草、大团囊枒，在分类上隶属于子囊菌门(Ascomycota)、果囊菌亚门(Pezizomycotina)、粪壳菌纲(Sordaricomycetes)、肉座菌亚纲(Hypocreomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、线虫草科(Ophiocordycipitaceae)、团囊虫草属(Elaphocordyceps)，主要分布在安徽、福建、甘肃和广东等省区，民间常用于治疗妇科出血症包括崩漏、月经过多、更年期子宫出血、产后恶露不绝和宫内节育器所致子宫出血等。现代科学研究表明，虫草中的许多种类都含有对人体有益的营养成分及其虫草素、虫草酸、腺苷等各种有效成份，具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、滋阴壮阳、保肝益肺和提高免疫力等多种功效，尤其以冬虫夏草、蛹虫草最为著名。但野生虫草由于连年采挖，其生态环境不断遭受严重的破坏，野生虫草资源日愈贫乏。分枝虫草是中国特有的具有药用价值的真菌资源，目前野生资源十分稀少，因此，对分枝虫草的野生驯化与人工栽培技术研究具有十分重要的意义，但至今仍没有获得分枝虫草菌株和人工栽培成功的报道。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种分枝虫草菌株，另一目的是提供该分枝虫草人工栽培子实体，再一目的是提供该子实体的人工栽培方法。
本发明以2011年4月从广东省野外调查发现的一种野生虫草子实体为材料通过组织分离纯化，首次获得了一种虫草菌株，将该菌株(编号为GDIM_CR20110521)接入综合PDA斜面培养基制备斜面母种，斜面母种再接至液体培养基中制备一级菌种，一级菌种接入液体培养基中制备生产种，生产菌种接种在生产用培养基中经过培育获得了一种含有多种有效成分和营养成分的新的人工栽培虫草子实体，从而实现了本发明的目的。
上述野生虫草的子实体特征是：子座多分枝，多弯曲，往往基部相互连接，高3～5cm，粗1.5～3mm，常稍扁，锈褐色至橙褐色；头部与柄无明显分界，多少呈披针形，向上尖削，形成锥形的不孕尖端，与一种中国独有的虫草品种--分枝虫草Cordyceps ramosa Teng的形态特征相似，故定名为分枝虫草。
本发明从上述野生虫草分离获得的分枝虫草菌GDIM_Cr2011521Cordyceps ramosa GDIM_Cr2011521已于2013年01月14日保藏在中国典型培养物保藏中心（简称为CCTCC，地址是中国武汉武汉大学），保藏编号为CCTCC NO：M2013015。
本发明所述的分枝虫草的纯分离物（菌株）在斜面培养基上，基生菌丝发达，气生菌丝较少，微光光照12小时/天，3～4天后，菌丝逐渐转为黄色。
本发明所述分枝虫草菌株经分子生物学技术鉴定，包括进行ITS-PCR、测序，并与Genbank中所登录的虫草序列相比对，与它最接近的虫草Cordyceps prolifica的相似性为96%。本发明的分枝虫草子实体，其特征是由分枝虫草菌GDIM_Cr2011521Cordyceps ramosa GDIM_Cr2011521CCTCC NO：M2013015或其新鲜子实体进行组织分离后人工栽培获得的，该子实体稍扁状，顶部常见尖状或图纯，不分枝或顶部有短分枝，浅暗黄褐色。
所述的新鲜子实体可以是野生或栽培成功后获得的子实体。
本发明所述的分枝虫草子实体的栽培方法，其特征包括以下：
(1)将分枝虫草菌GDIM_CR20110521Cordyceps ramosa GDIM_CR20110521CCTCC NO：M2013015或其野生或栽培成功后获得的子实体进行组织分离，取子座按黄豆大小的接种量接入综合PDA斜面培养基，25～28℃，空气相对湿度60%～80%时，进行暗培养7～10天后，光照3～4天，再暗培养15～30天，至菌丝长满斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为母种，保藏于4℃作备用或进一步培养，所述的综合PDA斜面培养基pH6.0～6.5，其原料组成为每1000mL水中加入马铃薯200g，葡萄糖20g，KH2PO43g，MgSO4·7H2O1.5g，维生素B10.02～0.05g，琼脂15～20g；
（2）将步骤（1）得到的母种按黄豆大小的菌块接入黄豆芽汁马铃薯斜面培养基中继续培养或复壮，于25～28℃，空气相对湿度60%～80%时，进行暗培养7～10天、光照3～4天，再暗培养15～30天，至菌丝长满斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为二级母种，所述的黄豆芽汁马铃薯斜面培养基pH6.0～6.5，其原料组成为每1000mL水中加入黄豆芽汁100g，马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，其制备方法是按原料组成分别称量各组分后，把马铃薯去皮切小长条，再放入黄豆芽汁，加水煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，余下的滤汁在加热状态下与其余组分混合搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，待冷却至70～80℃，制成斜面；
(3)将步骤(2)得到的二级母种按每100mL培养基接入10-15块黄豆大小的菌块的接种量接种至液体培养基中，于20～25℃，以120～150r/min的转速震荡培养6～10天，挑取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为一级菌种，所述的液体培养基pH6.0～6.5，其组成是每1000mL培养基中含葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麦芽浸出粉3g，蛋白胨5g和余量的水；
(4)将步骤(3)得到的一级菌种按液体培养基体积5%～10%的接种量接入液体培养基中，于20～25℃，以140～150r/min的转速震荡培养7～10天，挑取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为生产种，所述的液体培养基与步骤(3)的培养基相同；
（5）在无菌的环境条件下，将步骤(4)得到的生产种用水稀释，再按每1000mL生产种 接种到0.5～0.8kg生产用培养基的比例进行接种，在20～25℃，空气相对湿度50%～75%下，先暗培养7～12天，至菌丝基本长满培养基后，进行光照培养，光强400～700lx，8～10h/d，空气相对湿度80%～90%，25～28℃，经7～10天长出子实体原基，再培养50～60天，至部分子实体顶部出现白点，或出现孢子时，即可采收，得到分枝虫草子实体，所述的生产用培养基是按1kg大米和1～2L营养液的比例组成，其中每升营养液由葡萄糖10g，蛋白胨5g，麦芽浸出粉3g，酵母浸膏3g，以及余量的水组成，pH6.0～6.5。
步骤(1)所述的综合PDA斜面培养基的制备可采用通常方法：按原料组成分别称量各组分后，把马铃薯去皮切小长条，加水煮沸20～30分钟至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，余下的滤汁在加热状态下与其余组分混合搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，待冷却至70～80℃，制成斜面。
步骤(3)所述的一级菌种还可以用同样的方法按液体培养基体积5%～10%的接种量接入液体培养基进一步扩大培养为二级菌种。
步骤(5)所述的分枝虫草子实体还可以在60℃下烘4～5小时得到干品，以便于保存和再利用，所述的大米和营养液混合后，封口，121℃灭菌40min，冷却至室温备用。
本发明所用大米、马铃薯和黄豆芽汁购自农贸市场，酵母浸膏、麦芽浸出粉、蛋白胨均购自广东环凯微生物科技有限公司，葡萄糖、KH2PO4、MgSO4·7H2O、维生素B1和琼脂均由市场购得。
本发明的分枝虫草子实体的生物转化率达到10%～20%，即每千克养料能产出100g～200g的新鲜子实体。本发明的分枝虫草子实体含有多种有效成分和营养成分，其含量为腺苷0.008%～0.01%，虫草素0.001%～0.005%，虫草酸4.0%～4.82%，粗蛋白15.0%～17.9%，粗纤维10.0%～13.3%，粗多糖1.0%～1.1%，可作为食品或原料使用。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
称取马铃薯200g，葡萄糖20g，KH2PO43g，MgSO4·7H2O1.5g，维生素B10.02g，琼脂15g，水1000mL。将马铃薯去皮切成小条放入锅中，加水煮沸20分钟左右至马铃薯软而不烂，用6层纱布过滤，余下的滤汁于锅中，加入琼脂熔化，再加入葡萄糖、KH2PO4、MgSO4·7H2O和维生素B1搅拌均匀，调节pH至6.0，趁热按5mL/管的量分装于18mm×180mm试管里，塞上棉塞，包上牛皮纸或报纸，于121℃，15磅蒸汽压，灭菌20分钟，冷却到60℃倒成斜面，得到综合PDA斜面培养基，备用。
将野生的分枝虫草菌GDIM_CR20110521Cordyceps ramosa GDIM_CR20110521CCTCC NO：M2013015子实体进行组织分离，取子座按黄豆大小的接种量接入无菌的综合PDA斜面培养基，25℃，空气相对湿度60%，进行暗培养7天后，光照3天，再暗培养15天，至菌丝长满 斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为母种。
称取黄豆芽汁100g，马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，将马铃薯去皮切成小条放入锅中，再加入黄豆芽汁，加水煮沸20分钟左右至马铃薯软而不烂，用8层纱布过滤，留滤汁于锅中，将琼脂熔化，再加入葡萄糖搅拌均匀，调节pH至6.0，趁热按5mL/管的量分装于18mm×180mm试管里，塞上棉塞，包上牛皮纸，于121℃，15磅蒸汽压，灭菌20分钟，冷却到60℃倒成斜面，得到黄豆芽汁马铃薯斜面培养基。
将母种按黄豆大小的菌块接入黄豆芽汁马铃薯斜面培养基中继续培养或复壮，于25℃，空气相对湿度60%时，进行暗培养7天后，光照3天，再暗培养15天，至菌丝长满斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为二级母种。
称取葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麦芽浸出粉3g，蛋白胨5g，将各成分分别用水溶解后混合，调节pH至6.0，用水定容至1L，按装量为50%的比例装入耐高温的容器内，于121℃下，15分钟常规灭菌，冷却至室温，得到液体培养基。
将二级母种按每100mL培养基10块黄豆大小的菌块的接种量接至无菌液体培养基中，20℃下，120r/min，振荡培养6天，选取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为一级菌种。
将5mL一级菌种接种至100mL液体培养基中，20℃下，140r/min，振荡培养7天，选取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌株作为生产种。
将葡萄糖10g，蛋白胨5g，麦芽浸出粉3g，酵母浸膏3g混合用水定容到1L，pH调至6.0，得到营养液。将20g大米装入250mL的玻璃培养瓶内，在加入营养液20mL，混合，用聚乙烯薄膜和橡皮筋封口，121℃灭菌40min，冷却至室温，得到生产用培养基。
在无菌条件下，将100mL的生产菌种用300mL的无菌水稀释，再接入50g无菌的生产用培养基中，在20℃，空气相对湿度50%下，先进行暗培养7天，待菌丝长满培养基后，进行光照培养，光强400lx，8h/d，空气相对湿度80%，25℃，经7天长出子实体原基，再培养50天，待部分子实体顶部出现白点，即进行采收，得到分枝虫草子实体，将子实体在60℃下烘5小时，获得干品（水分含量不高于13%）。
经统计，本次生物转化率达到15%，即每千克培养料能产出150g的新鲜子实体，经检测，得到的分枝虫草子实体含腺苷0.008%，虫草素0.001%，虫草酸4.0%，粗蛋白含量为15.0%，粗纤维含量为10.0%，粗多糖含量为1.0%。
实施例2：
称取马铃薯400g，葡萄糖40g，KH2PO46g，MgSO4·7H2O3g，维生素B10.1g，琼脂40g，水2000mL。将马铃薯去皮切成小条放入锅中，加水，煮沸30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用8层纱布过滤，留滤汁于锅中，将剩余水加入，将琼脂熔化，再加入葡萄糖、KH2PO4、MgSO4·7H2O和维生素B1搅拌均匀，调节pH至6.5，趁热按10mL/管的量分装于20mm×200mm 试管里，塞上棉塞，包上牛皮纸，于121℃，15磅蒸汽压，灭菌30分钟，冷却到70℃倒成斜面，得到综合PDA斜面培养基，备用。
将分枝虫草菌GDIM_CR20110521Cordyceps ramosa GDIM_CR20110521CCTCC NO：M2013015从5℃保存下取出，按黄豆大小的接种量接入无菌的综合PDA斜面培养基中，28℃，空气相对湿度80%，进行暗培养10天后，光照4天，再暗培养30天，至菌丝长满斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为母种。
称取黄豆芽汁200g，马铃薯400g，葡萄糖40g，琼脂40g，将马铃薯去皮切成小条放入锅中，再加入黄豆芽汁，加水煮沸30分钟左右至马铃薯软而不烂，用6层纱布过滤，留滤汁于锅中，将剩余的水加入，将琼脂熔化，再加入葡萄糖搅拌均匀，调节pH至6.5，趁热按5mL/管的量分装于18mm×180mm试管里，塞上棉塞，包上牛皮纸，于121℃，15磅蒸汽压，灭菌20分钟，冷却到60℃倒成斜面，得到黄豆芽汁马铃薯斜面培养基。
将母种按黄豆大小的菌块接入黄豆芽汁马铃薯斜面培养基中继续培养或复壮，于28℃，空气相对湿度80%时，进行暗培养10天后，光照4天，再暗培养30天，至菌丝长满斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为二级母种。
称取葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麦芽浸出粉3g，蛋白胨5g，将各成分分别用水溶解后混合，调节pH至6.5，用水定容至1L，按装量为50%的比例装入耐高温的容器内，于121℃下，15分钟常规灭菌，冷却至室温，得到液体培养基。
将二级母种按每100mL培养基7块黄豆大小的菌块的接种量接至无菌的液体培养基中，25℃，150r/min，振荡培养10天，选取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为一级菌种。
将10mL一级菌种接种至100mL液体培养基中，于25℃，150r/min，振荡培养10天，挑取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌株作为生产种。
将葡萄糖10g，蛋白胨5g，麦芽浸出粉3g，酵母浸膏3g，混合用水定容到1L，pH调至6.5，得到营养液。将20g大米装入250mL的玻璃培养瓶内，在加入营养液40mL，混合，用聚乙烯薄膜和橡皮筋封口，121℃灭菌40min，冷却至室温，得到生产用培养基。
在无菌室内，将100mL的生产菌种用800mL的无菌水稀释，再接入80g无菌的生产用培养基中，于25℃，空气相对湿度75%下，先进行暗培养12天，待菌丝长满培养基后，进行光照培养，光强700lx，10h/d，空气相对湿度90%，28℃，经10天长出子实体原基，再培养60天，待部分子实体顶部出现孢子，即进行采收，得到分枝虫草子实体，将子实体在60℃下烘5小时，获得干品（水分含量不高于13%）。
经统计，本次生物转化率达到20%，即每千克培养料能产出200g的新鲜子实体，经检测，得到的分枝虫草子实体含腺苷0.01%，虫草素0.005%，虫草酸4.82%，粗蛋白含量为17.9%，粗纤维含量为13.3%，粗多糖含量为1.1%。
Claims (5)
1.分枝虫草菌（Cordyceps ramosa）GDIM_CR20110521CCTCCNO：M2013015。
2.一种分枝虫草子实体，其特征是由权利要求1所述的分枝虫草菌或其新鲜子实体进行组织分离后人工栽培获得的，该子实体稍扁状，顶部常见尖状或钝圆，不分枝或顶部有短分枝，浅暗黄褐色。
3.根据权利要求2所述的分枝虫草子实体，其特征是所述的新鲜子实体是野生或栽培成功后获得的子实体。
4.权利要求2或3所述的分枝虫草子实体的人工栽培方法，其特征包括以下的步骤：
（1）将权利要求1所述的分枝虫草菌或其野生或栽培成功后获得的子实体进行组织分离，取子座按黄豆大小的接种量接入综合PDA斜面培养基，25～28℃，空气相对湿度60%～80%时，先暗培养7～10天后，光照3～4天，再暗培养15～30天，至菌丝长满斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为母种，所述的综合PDA斜面培养基pH6.0～6.5，其原料组成为每1000mL水中加入马铃薯200g，葡萄糖20g，KH2PO43g，MgSO4·7H2O1.5g，维生素B10.02～0.05g，琼脂15～20g；
（2）将步骤（1）得到的母种按黄豆大小的菌块接入黄豆芽汁马铃薯斜面培养基中继续培养或复壮，于25～28℃，空气相对湿度60%～80%时，先暗培养7～10天后，光照3～4天，再暗培养15～30天，至菌丝长满斜面，挑取基生菌丝发达且转成黄色的斜面作为二级母种，所述的黄豆芽汁马铃薯斜面培养基pH6.0～6.5，其原料组成为每1000mL水中加入黄豆芽汁100g，马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，其制备方法是按原料组成分别称量各组分后，把马铃薯去皮切小长条，再放入黄豆芽汁，加水煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，余下的滤汁在加热状态下与其余组分混合搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，待冷却至70～80℃，制成斜面；
(3)将步骤(2)得到的二级母种按每100mL培养基接入10-15块黄豆大小的菌块的接种量接种至液体培养基中，于20～25℃，以120～150r/min的转速震荡培养6～10天，挑取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为一级菌种，所述的液体培养基pH6.0～6.5，其组成是每1000mL培养基中含葡萄糖10g，酵母浸膏3g，麦芽浸出粉3g，蛋白胨5g和余量的水；
(4)将步骤(3)得到的一级菌种按液体培养基体积5%～10%的接种量接入液体培养基中，于20～25℃，以140～150r/min的转速震荡培养7～10天，挑取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为生产种，所述的液体培养基与步骤(3)的培养基相同；
（5）在无菌的环境条件下，将步骤(4)得到的生产种用水稀释，再按每1000mL生产种接种到0.5～0.8kg生产用培养基的比例进行接种，在20～25℃，空气相对湿度50%～75%下，先暗培养7～12天，至菌丝基本长满培养基后，进行光照培养，光强400～700lx，8～10h/d，空气相对湿度80%～90%，25～28℃，经7～10天长出子实体原基，再培养50～60天，至部分子实体顶部出现白点，或出现孢子时，即可采收，得到分枝虫草子实体，所述的生产用培养基是按1kg大米和1～2L营养液的比例组成，其中每升营养液由葡萄糖10g，蛋白胨5g，麦芽浸出粉3g，酵母浸膏3g，以及余量的水组成，pH6.0～6.5。
5.根据权利要求4所述的分枝虫草子实体的人工栽培方法，其特征是步骤(1)所述的综合PDA斜面培养基的制备方法是按原料组成分别确定各组分的重量后，把马铃薯去皮切小长条，煮沸20～30分钟至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，余下的滤汁在加热状态下与其余组分混合搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，待冷却至70～80℃，制成斜面；步骤(3)所述的一级菌种用同样的方法按液体培养基体积5%～10%的接种量接入液体培养基进一步扩大培养为二级菌种；步骤(5)所述的分枝虫草子实体还在60℃下烘4～5小时得到干品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310037585.XA CN103098648B (zh) | 2013-01-30 | 2013-01-30 | 一种分枝虫草菌株及其子实体和人工栽培方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310037585.XA CN103098648B (zh) | 2013-01-30 | 2013-01-30 | 一种分枝虫草菌株及其子实体和人工栽培方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103098648A CN103098648A (zh) | 2013-05-15 |
| CN103098648B true CN103098648B (zh) | 2014-04-02 |
Family
ID=48307108
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310037585.XA Active CN103098648B (zh) | 2013-01-30 | 2013-01-30 | 一种分枝虫草菌株及其子实体和人工栽培方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103098648B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103283493B (zh) * | 2013-06-28 | 2015-04-22 | 广东星河生物科技股份有限公司 | 一种广东虫草子实体规模化栽培方法 |
| CN107012100B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-11-27 | 湖南省中医药研究院 | 一种雪峰虫草子座及其人工培育方法 |
| CN107637390A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-01-30 | 江苏农林职业技术学院 | 一种活体蚕及蚕蛹培养野生蝉花的方法 |
| CN108029454A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-05-15 | 崔洋 | 羊肚菌室内栽培方法 |
| CN109937795B (zh) * | 2019-04-01 | 2021-07-13 | 广西壮仁堂生物科技有限公司 | 一种以茉莉花为基质培育虫草菌丝体的方法 |
| CN114208586B (zh) * | 2021-12-31 | 2023-08-22 | 中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究所 | 一种新古尼异虫草子实体及人工栽培的生产方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102100152A (zh) * | 2010-11-17 | 2011-06-22 | 鲁东大学 | 一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基 |
| CN102742454A (zh) * | 2012-06-05 | 2012-10-24 | 安徽农业大学 | 一种人工培养长座虫草子实体的方法 |
| CN102823427A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-19 | 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所 | 用粗大米生产蛹虫草微颗粒液体菌种的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100865453B1 (ko) * | 2005-07-18 | 2008-10-28 | 학교법인 포항공과대학교 | 전분박 액체 배지를 이용한 버섯 균사체의 생산 방법 |
| CN101560472A (zh) * | 2008-04-14 | 2009-10-21 | 中国海洋大学 | 一种新型虫草菌及其人工栽培虫草的方法 |
| JP2012060974A (ja) * | 2010-09-17 | 2012-03-29 | Hypha Institute Co | キノコの人工栽培方法、及びガノデリン酸類の製造方法 |
| CN102177817B (zh) * | 2011-02-24 | 2012-08-22 | 湖北圣峰药业有限公司 | 一种富含sod北虫草的培育方法 |
| CN102876587A (zh) * | 2012-09-27 | 2013-01-16 | 江南大学 | 一株高产虫草素的蛹虫草菌株 |
-
2013
- 2013-01-30 CN CN201310037585.XA patent/CN103098648B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102100152A (zh) * | 2010-11-17 | 2011-06-22 | 鲁东大学 | 一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基 |
| CN102742454A (zh) * | 2012-06-05 | 2012-10-24 | 安徽农业大学 | 一种人工培养长座虫草子实体的方法 |
| CN102823427A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-19 | 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所 | 用粗大米生产蛹虫草微颗粒液体菌种的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| JP特开2012-60974A 2012.03.29 |
| 一种冬虫夏草伪品分枝虫草的鉴别;李颖;《深圳中西医结合杂志》;20050828(第4期);全文 * |
| 冬虫夏草及其类似品的HPLC指纹特征分析;赖宇红 等;《中药材》;20080825(第8期);全文 * |
| 李颖.一种冬虫夏草伪品分枝虫草的鉴别.《深圳中西医结合杂志》.2005,(第4期), |
| 赖宇红 等.冬虫夏草及其类似品的HPLC指纹特征分析.《中药材》.2008,(第8期), |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103098648A (zh) | 2013-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103098648B (zh) | 一种分枝虫草菌株及其子实体和人工栽培方法 | |
| CN102138437B (zh) | 一种人工培养台湾虫草子实体的方法 | |
| CN1806495B (zh) | 利用外来入侵杂草栽培食用菌的方法 | |
| CN102210255B (zh) | 一种蛹虫草白化菌株及其子实体的栽培方法 | |
| CN103342604A (zh) | 一种生防菌素叶面肥及其制备方法和应用 | |
| CN101215527A (zh) | 一种蚕蛹虫草的培育方法 | |
| CN104478546B (zh) | 一种利用荆条屑培养猴头的方法 | |
| CN103626553B (zh) | 一种利用向日葵副产物制作银耳栽培料的方法 | |
| CN100389191C (zh) | 一种高活性野生虫草菌株及其子实体和人工栽培方法 | |
| CN109392598A (zh) | 一种灵芝仿野生栽培方法 | |
| CN103688759A (zh) | 一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法 | |
| CN109337895A (zh) | 一种优质高产富硒猴头菇菌种的生产方法 | |
| CN102845223A (zh) | 新鲜菌草温室瓶栽杏鲍菇的方法 | |
| CN105145112A (zh) | 一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法 | |
| CN101113409A (zh) | 菌草栽培鹿角灵芝的方法 | |
| CN107629967B (zh) | 用于天麻种植的萌发菌的液体培养基和天麻种植方法 | |
| CN104641938A (zh) | 准野生树舌灵芝栽培工艺 | |
| CN102174417B (zh) | 一种冬虫夏草菌丝体固体发酵提取物及其在制备抗疲劳产品的应用 | |
| CN108410741A (zh) | 一种柑橘专性am接种剂及其制备方法 | |
| CN108770592B (zh) | 一种柠檬鳞伞栽培用培养基及柠檬鳞伞的栽培方法 | |
| CN105519582B (zh) | 一种防治烟草番茄根结线虫制剂和应用 | |
| CN112931059A (zh) | 一种桑树桑黄菌种及其栽培方法 | |
| CN103299822A (zh) | 一株裂褶菌高产子实体菌株及返生态立体栽培方法 | |
| CN104756759B (zh) | 一种山药虫草及其培养方法 | |
| CN106386170A (zh) | 一种平菇培育方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: Guangzhou City, Guangdong province 510070 martyrs Road No. 100 building No. 56 Patentee after: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY) Address before: Guangzhou City, Guangdong province 510070 martyrs Road No. 100 Patentee before: Guangdong Institute of Microbiology |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: No. 56, courtyard, No. 100, Xianlie Middle Road, Guangzhou, Guangdong 510070 Patentee after: Institute of Microbiology, Guangdong Academy of Sciences Address before: No. 56, courtyard, No. 100, Xianlie Middle Road, Guangzhou, Guangdong 510070 Patentee before: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY) |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |