CN104756759B - 一种山药虫草及其培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种山药虫草及其培养方法，以蛹虫草菌株（Cordyceps militaris）沁虫1号感染山药，经人工培育转化而成的山药与草的复合体，本发明通过山药虫草母种的制备、山药虫草液体菌种制备、寄生载体山药的制备、接种、染菌期培养、转色期培养、出草期培养步骤，得到本发明所述的山药虫草。本发明山药虫草营养成分含量高于天然虫草，药用价值与滋补作用价值高，培育方法简单，生产周期短，山药虫草规模化生产成功率达100%，生产成本低。

Description

一种山药虫草及其培养方法

技术领域

本发明属于虫草技术领域，具体涉及一种山药虫草及其培养方法。

背景技术

蛹虫草为子囊菌亚门、麦角菌科、虫草属的模式种，学名为Cordyceps militaris，又名北冬虫夏草、北虫草、虫草等，世界性分布天然资源数量很少，其药用价值与滋补功能与冬虫夏草相似，是我国极具开发价值的药用滋补真菌，可作为冬虫夏草的替代品。中医认为，虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后久虚，久咳虚弱，自汗盗汗等，是唯一一种能同时平衡、调节阴阳的珍稀中药。

目前，国内外人工培养虫草的方法有以下几种：（1）采用大米、小麦等谷类农作物与生化试剂组成的混合培养基生产虫草子实体；（2）采用桑蚕蛹、柞蚕蛹作培养载体生产蛹虫草；（3）采用纯生化试剂组成的液体培养基生产虫草菌丝体；（4）采用农作物下脚料与生化试剂组成的混合培养基生产虫草菌丝体。上述方法培养生产的虫草或虫草菌丝体，所含有效成分较天然虫草缺少，药用价值与滋补作用较低。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种山药虫草。

本发明的另一目的在于提供一种山药虫草的培养方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种山药虫草，以蛹虫草菌株（Cordyceps militaris）沁虫1号感染山药，经人工培育转化而成的山药与草的复合体；蛹虫草菌株沁虫1号保藏编号为CGMCC NO.6808。

一种山药虫草的培养方法，包括以下步骤：

（1）山药虫草母种的制备：

a. 分别取山药干粉15～23 g、琼脂15～23 g、葡萄糖15～23 g、硫酸镁0.8～1.2 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持10～15 min停火，趁热装管，封口，灭菌，趁热取出摆斜面，冷却凝固形成山药母种斜面培养基；

b. 在无菌条件下，将上述的蛹虫草菌株沁虫1号（保藏编号为CGMCC NO.6808）接种于上述斜面培养基上，温度18～20 ℃、完全黑暗的环境中培养8～10天，当菌丝发满斜面培养基表面，即成山药虫草母种；

（2）山药虫草液体菌种制备：

c. 分别取葡萄糖18～22 g、山药干粉3～5 g、蛋白胨3～5 g、磷酸二氢钾3～5 g、硫酸镁3～5 g、维生素B1 0.01～0.03 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持2～3 min停火，然后装入烧瓶中，封口，灭菌，冷却至室温，制成菌种培养液；

d. 在无菌条件下在上述菌种培养液中接入步骤（1）制备的山药虫草母种，温度18～22 ℃、自然光照环境中静止培养70～75 h，再无菌空气培养70～75 h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通空气，经检验无杂菌感染后即成山药虫草液体菌种；

（3）寄生载体山药的制备：将山药表面处理干净，切段扎孔，放入水与蚕蛹粉重量比为15～25：1的混合液中，煮沸，保持10～15 min，捞出，控去水分，装袋，封口，灭菌，即得寄生载体山药；

（4）接种：在无菌条件下，将步骤（2）制备的山药虫草液体菌种接种到步骤（3）制备的山药上面，接种量为山药：液体菌种=800～1000 g：200～250 ml；

（5）染菌期培养：接种后在温度18～25 ℃、空气湿度50%～55%、黑暗环境中培养10～12天，白色菌丝发满山药表面及内部，发菌培养结束；

（6）转色期培养：在温度20～23 ℃、空气湿度60%～65%、光照180～200 lux条件下培养7～8天，白色菌丝转为橘黄色，转色结束；

（7）出草期培养：①从原基形成前后到草长到2 cm时，为前期培养阶段，培养条件为：温度20～22 ℃、空气湿度70%～75%、自然光照，培养时间为15～17天；

②从草长到2 cm以上直到山药虫草最后成熟为后期培养阶段，培养条件为：温度23～25 ℃、空气湿度80%～85%、自然光照，培养时间为25～27天，当子座顶端膨大，子座色泽变暗，并出现粉末状物时采收，即为山药虫草。

根据上述的山药虫草的培养方法，步骤（1）所述的山药干粉的粒度为60～70目。

根据上述的山药虫草的培养方法，步骤（3）所述的蚕蛹粉的粒度为20～50目。

根据上述的山药虫草的培养方法，步骤（3）所述的山药切段扎孔的方法为：将山药切成25～30 cm的段，之后用直径2 mm的铁纤扎孔，纵向并排扎行，行距为0.4～0.6 cm，孔距为2.5～3 cm，孔深为山药直径的1/3～2/3。

本发明具有积极有益的效果

1．本发明以蛹虫草菌株沁虫1号感染寄主山药，人工培育出了一种新式的虫草品种，所培养出的山药虫草色泽金黄，与天然蛹虫草完全相同，且其菌核形态保持山药原状，具有良好的观赏价值，其所食医用成分及营养成分含量高，产量品质一致性好。

2．本发明所述的山药虫草的培育方法简单，节省劳动力成本、降低工作量，生产周期短，平均为70～75天，山药虫草规模化生产成功率达100%，生产成本低，具有积极的经济效益和社会效益。

本发明所述蛹虫草（Cordyceps militaris）沁虫1号，已于2012年11月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所，该蛹虫草沁虫1号保藏编号为CGMCC NO.6808。

附图说明

图1为实施例1山药虫草的外形图；

图2为实施例1山药虫草的外形图；

图3为实施例1山药虫草的外形图。

具体实施方式

下面结合一些具体实施例对本发明进一步说明。

菌株的采集：2006年 9月，发明人李国军于吉林省长白山哈达岭南延部野生蛹虫草产区采集到虫草菌株，经在培养基培养出蛹虫草，经生物学特性观察、检测鉴定，无毒、含虫草素高，确定为蛹虫草拟青霉菌株，并经多代传代培养驯化成为能感染干蚕蛹的蛹虫草菌株沁虫1号，其保藏编号为CGMCC NO.6808。

实施例 1

一种山药虫草，以蛹虫草菌株沁虫1号感染山药，经人工培育转化而成的山药与草的复合体；蛹虫草菌株沁虫1号保藏编号为CGMCC NO.6808。

一种山药虫草的培养方法，包括以下步骤：

（1）山药虫草母种的制备：

a. 分别取山药干粉（60目）15 g、琼脂15 g、葡萄糖23 g、硫酸镁0.8 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持10 min停火，趁热装入试管，封口，灭菌，趁热取出摆斜面，冷却凝固形成山药母种斜面培养基；

b. 山药虫草母种的制备：在无菌条件下，从蛹虫草菌株沁虫1号（保藏编号CGMCC NO.6808）孕部上切取组织块，接种于该斜面培养基上，之后用棉花封口并从无菌环境中取出，置温度20 ℃、完全黑暗的环境中培养9天，当菌丝发满斜面培养基表面即成山药虫草母种；

（2）山药虫草液体菌种制备：

c. 分别取葡萄糖18 g、山药干粉4 g、蛋白胨3 g、磷酸二氢钾5 g、硫酸镁5 g、维生素B1 0.02 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持2 min停火，然后装入1000 ml烧瓶中，装量为700 ml，封口，灭菌，冷却至常温，制成菌种培养液；

d. 在无菌条件下在菌种培养液中接入步骤（2）制备的山药虫草母种，置温度22 ℃、自然光照环境中静止培养70 h，然后再无菌空气培养75 h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通空气，经检验无杂菌感染后即成山药虫草液体菌种；

（3）寄生载体山药的制备：选择药用、滋补成分含量高、生长健壮、形体美观的优质山药，将山药表面处理干净、整洁，切段扎孔，放入水与蚕蛹粉（20目）重量比为15：1的混合液中，煮沸保持12 min，捞出，控去水分，装袋，封口，灭菌；

切段扎孔的方法为：将山药切成28 cm的段，之后用直径2 mm的铁纤扎孔，纵向并排扎行，行距为0.4 cm，孔距为3 cm，孔深为山药直径的1/3；

（4）接种：在无菌条件下，将步骤（2）制备的山药虫草液体菌种接种到步骤（3）制备的山药上面，接种量为山药：液体菌种=800 g：210 ml；

上述接种方法为：在无菌环境中，用步骤（2）制备的山药液体菌种浸泡步骤（3）制备的山药＞10 s，封口；

（5）染菌期培养：接种后在温度18 ℃、空气湿度50%、黑暗环境中培养10天，白色菌丝发满山药表面及内部，发菌培养结束；

（6）转色期培养：在温度20 ℃、空气湿度60%、光照200 lux条件下培养7天，白色菌丝转为橘黄色，转色结束；

（7）出草期培养：①从原基形成前后到草长到2 cm时，为前期培养阶段，培养条件为：温度22 ℃、空气湿度72%、自然光照，培养时间为16天；

②从草长到2 cm以上直到山药虫草最后成熟为后期培养阶段，培养条件为：温度24℃、空气湿度82%、自然光照，培养时间为25天，子座顶端膨大，子座色泽变暗，并出现粉末状物时采收，即为山药虫草，外形图见图1，检测结果见表1。

实施例 2

一种山药虫草，以蛹虫草菌株沁虫1号感染山药，经人工培育转化而成的山药与草的复合体；蛹虫草菌株沁虫1号保藏编号为CGMCC NO.6808。

一种山药虫草的培养方法，包括以下步骤：

（1）山药虫草母种的制备：

a. 分别取山药干粉（70目）20 g、琼脂20 g、葡萄糖20 g、硫酸镁1 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持15 min停火，趁热装入试管，封口，灭菌，趁热取出摆斜面，冷却凝固形成山药母种斜面培养基；

b. 山药虫草母种的制备：在无菌条件下，从蛹虫草菌株沁虫1号（保藏编号CGMCC NO.6808）孕部上切取组织块，接种于该斜面培养基上，之后用棉花封口并从无菌环境中取出，置温度18 ℃、完全黑暗的环境中培养10天，当菌丝发满斜面培养基表面即成山药虫草母种；

（2）山药虫草液体菌种制备：

c. 分别取葡萄糖20 g、山药干粉5 g、蛋白胨4 g、磷酸二氢钾4 g、硫酸镁4 g、维生素B1 0.01 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持2 min停火，然后装入1000 ml烧瓶中，装量为800 ml，封口，灭菌，冷却至常温，制成菌种培养液；

d. 在无菌条件下在菌种培养液中接入步骤（2）制备的山药虫草母种，置温度20 ℃、自然光照环境中静止培养74 h，然后再无菌空气培养74 h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通空气，经检验无杂菌感染后即成山药虫草液体菌种；

（3）寄生载体山药的制备：选择药用、滋补成分含量高、生长健壮、形体美观的优质山药，将山药表面处理干净、整洁，切段扎孔，放入水与蚕蛹粉（30目）重量比为20：1的混合液中，煮沸保持10 min，捞出，控去水分，装袋，封口，灭菌；

切段扎孔的方法为：将山药切成25 cm的段，之后用直径2 mm的铁纤扎孔，纵向并排扎行，行距为0.5 cm，孔距为2.5 cm，孔深为山药直径的2/3；

（4）接种：在无菌条件下，将步骤（2）制备的山药虫草液体菌种接种到步骤（3）制备的山药上面，接种量为山药：液体菌种=1000 g：250 ml；

上述接种方法为：在无菌环境中，用步骤（2）制备的山药液体菌种浸泡步骤（3）制备的山药＞10 s，封口；

（5）染菌期培养：接种后在温度23 ℃、空气湿度50%、黑暗环境中培养10天，白色菌丝发满山药表面及内部，发菌培养结束；

（6）转色期培养：在温度23 ℃、空气湿度62%、光照180 lux条件下培养8天，白色菌丝转为橘黄色，转色结束；

（7）出草期培养：①从原基形成前后到草长到2 cm时，为前期培养阶段，培养条件为：温度21 ℃、空气湿度70%、自然光照，培养时间为17天；

②从草长到2 cm以上直到山药虫草最后成熟为后期培养阶段，培养条件为：温度23℃、空气湿度80%、自然光照，培养时间为26天，子座顶端膨大，子座色泽变暗，并出现粉末状物时采收，即为山药虫草，外形图见图2，检测结果见表1。

实施例 3

一种山药虫草，以蛹虫草菌株沁虫1号感染山药，经人工培育转化而成的山药与草的复合体；蛹虫草菌株沁虫1号保藏编号为CGMCC NO.6808。

一种山药虫草的培养方法，包括以下步骤：

（1）山药虫草母种的制备：

a. 分别取山药干粉（60目）23 g、琼脂23 g、葡萄糖15 g、硫酸镁1.2 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持12 min停火，趁热装入试管，封口，灭菌，趁热取出摆斜面，冷却凝固形成山药母种斜面培养基；

b. 山药虫草母种的制备：在无菌条件下，从蛹虫草菌株沁虫1号（保藏编号CGMCC NO.6808）孕部上切取组织块，接种于该斜面培养基上，之后用棉花封口并从无菌环境中取出，置温度19 ℃，完全黑暗的环境中培养8天，当菌丝发满斜面培养基表面即成山药虫草母种；

（2）山药虫草液体菌种制备：

c. 分别取葡萄糖22 g、山药干粉3 g、蛋白胨5 g、磷酸二氢钾3 g、硫酸镁3 g、维生素B1 0.03 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持3 min停火，然后装入1000 ml烧瓶中，装量为750 ml，封口，灭菌，冷却至常温，制成菌种培养液；

d. 在无菌条件下在菌种培养液中接入步骤（2）制备的山药虫草母种，置温度18 ℃，自然光照环境中静止培养75 h，然后再无菌空气培养70 h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通空气，经检验无杂菌感染后即成山药虫草液体菌种；

（3）寄生载体山药的制备：选择药用、滋补成分含量高、生长健壮、形体美观的优质山药，将山药表面处理干净、整洁，切段扎孔，放入水与蚕蛹粉（50目）重量比为25：1的混合液中，煮沸保持15 min，捞出，控去水分，装袋，封口，灭菌；

切段扎孔的方法为：将山药切成30 cm的段，之后用直径2 mm的铁纤扎孔，纵向并排扎行，行距为0.6 cm，孔距为2.6 cm，孔深为山药直径的2/3；

（4）接种：在无菌条件下，将步骤（2）制备的山药虫草液体菌种接种到步骤（3）制备的山药上面，接种量为山药：液体菌种=900 g：200 ml；

上述接种方法为：在无菌环境中，用步骤（2）制备的山药液体菌种浸泡步骤（3）制备的山药＞10 s，封口；

（5）染菌期培养：接种后在温度25 ℃、空气湿度55%、黑暗环境中培养12天，白色菌丝发满山药表面及内部，发菌培养结束；

（6）转色期培养：在温度21 ℃、空气湿度65%、光照190 lux条件下培养7天，白色菌丝转为橘黄色，转色结束；

（7）出草期培养：①从原基形成前后到草长到2 cm时，为前期培养阶段，培养条件为：温度20 ℃、空气湿度75%、自然光照，培养时间为15天；

②从草长到2 cm以上直到山药虫草最后成熟为后期培养阶段，培养条件为：温度25℃、空气湿度85%、自然光照，培养时间为27天，子座顶端膨大，子座色泽变暗，并出现粉末状物时采收，即为山药虫草，外形图见图3，检测结果见表1。

表1 实施例1～3山药虫草主要成分含量

。

Claims (5)

1.一种山药虫草的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）山药虫草母种的制备：

a. 分别取山药干粉15～23 g、琼脂15～23 g、葡萄糖15～23 g、硫酸镁0.8～1.2 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持10～15 min停火，趁热装管，封口，灭菌，趁热取出摆斜面，冷却凝固形成山药母种斜面培养基；

b. 在无菌条件下，将蛹虫草菌株沁虫1号接种于上述斜面培养基上，温度18～20 ℃、完全黑暗的环境中培养8～10天，当菌丝发满斜面培养基表面，即成山药虫草母种；

（2）山药虫草液体菌种制备：

c. 分别取葡萄糖18～22 g、山药干粉3～5 g、蛋白胨3～5 g、磷酸二氢钾3～5 g、硫酸镁3～5 g、维生素B1 0.01～0.03 g放入1000 ml蒸馏水中，加热沸腾，保持2～3 min停火，然后装入烧瓶中，封口，灭菌，冷却至室温，制成菌种培养液；

d. 在无菌条件下在上述菌种培养液中接入步骤（1）制备的山药虫草母种，温度18～22 ℃、自然光照环境中静止培养70～75 h，再无菌空气培养70～75 h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通空气，经检验无杂菌感染后即成山药虫草液体菌种；

（3）寄生载体山药的制备：将山药表面处理干净，切段扎孔，放入水与蚕蛹粉重量比为15～25：1的混合液中，煮沸，保持10～15 min，捞出，控去水分，装袋，封口，灭菌，即得寄生载体山药；

（4）接种：在无菌条件下，将步骤（2）制备的山药虫草液体菌种接种到步骤（3）制备的寄生载体山药上面，接种量为寄生载体山药：液体菌种=800～1000 g：200～250 ml；

（5）染菌期培养：接种后在温度18～25 ℃、空气湿度50%～55%、黑暗环境中培养10～12天，白色菌丝发满寄生载体山药表面及内部，发菌培养结束；

（6）转色期培养：在温度20～23 ℃、空气湿度60%～65%、光照180～200 lux条件下培养7～8天，白色菌丝转为橘黄色，转色结束；

（7）出草期培养：①从原基形成前后到草长到2 cm时，为前期培养阶段，培养条件为：温度20～22 ℃、空气湿度70%～75%、自然光照，培养时间为15～17天；

②从草长到2 cm以上直到山药虫草最后成熟为后期培养阶段，培养条件为：温度23～25 ℃、空气湿度80%～85%、自然光照，培养时间为25～27天，当子座顶端膨大，子座色泽变暗，并出现粉末状物时采收，即为山药虫草。

2.根据权利要求1所述的山药虫草的培养方法，其特征在于，所述的山药虫草以蛹虫草菌株（Cordyceps militaris）沁虫1号感染山药，经人工培育转化而成的山药与草的复合体；所述蛹虫草菌株沁虫1号保藏编号为CGMCC NO.6808。

3.根据权利要求1所述的山药虫草的培养方法，其特征在于，步骤（1）所述的山药干粉的粒度为60～70目。

4.根据权利要求1所述的山药虫草的培养方法，其特征在于，步骤（3）所述的蚕蛹粉的粒度为20～50目。

5.根据权利要求1所述的山药虫草的培养方法，其特征在于，步骤（3）所述的山药切段扎孔的方法为：将山药切成25～30 cm的段，之后用直径2 mm的铁纤扎孔，纵向并排扎行，行距为0.4～0.6 cm，孔距为2.5～3 cm，孔深为山药直径的1/3～2/3。