CN103299826A - 可提高虫草素含量的北虫草培养方法 - Google Patents

可提高虫草素含量的北虫草培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种可提高虫草素含量的北虫草培养方法，与现有技术所不同的是取8ml液体菌种接种到装有固体培养基的培养瓶中，置于温度为22℃、湿度为55％～60％的条件下暗培养7～10d，得菌丝体；然后移至光下并在白昼温度为23℃、湿度为55％～60％、光照强度为180～220lx、每天光照10～12h、昼夜温差为10℃的条件下培养至菌丝体全部由白色转为黄色，增加湿度到80％～85％，并将培养瓶上的通气孔打开，继续培养至子实体生长到4～8cm高、子实体表面出现黄色粉末状物质，进行采收；所述固体培养基由大米、黑蚂蚁粉和营养液组成，大米、黑蚂蚁粉和营养液的用量比例为40g∶0.5g∶20ml。

Description

可提高虫草素含量的北虫草培养方法
技术领域
本发明涉及一种虫草培养方法，尤其是一种可提高虫草素含量的北虫草培养方法。
背景技术
冬虫夏草（虫草），是麦角菌科真菌，是由虫体及从头部长出的真菌子座组成，以虫体色泽黄亮，丰满肥大，断面黄白色，子座短小者为佳。冬虫夏草的主要活性成分为虫草素，还含有虫草多糖、虫草酸、糖类、脂肪、蛋白质、维生素B12、麦角脂醇、六碳糖醇及多种生物碱等，其药性作用温和，有多种医药和保健用途。由于天然冬虫夏草数量有限，价格昂贵，为此只能通过人工培育北虫草（北冬虫夏草，亦称蛹虫草）以满足市场需求。现有的培养方法是设置若干架体，每个架体上有多个方格，每个方格内均放置有虫草培育器皿（瓶），在虫草培育器皿（瓶）内铺有培养基，将虫草菌苗播种在培养基上进行培养。培养时先用PDA培养基（由土豆、葡萄糖、磷酸氢钾、琼脂及水构成）将北虫草菌株活化，然后再用由葡萄糖、蛋白胨、酵母粉或豆腐渣、磷酸氢钾、氯化钠、硫酸镁、维生素B1及水构成的液体培养基培养。为了改良北虫草的品质，有的在液体培养基中加入硒酸盐，以提高北虫草中硒含量；还有的在培养基中加入刺五加等，但是所培养的北虫草中的虫草素还是相对偏低，虫草素含量仅为0.17％。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种可提高虫草素含量的北虫草培养方法。
本发明的技术解决方案是：一种可提高虫草素含量的北虫草培养方法，其特征在于按如下步骤进行：
a. 将北虫草菌株接种到PDA固体培养基上，在28℃生化培养箱中暗培养5d，得到活化的菌种；
b. 将活化的菌种切成1cm×1cm的菌块，接种到200ml的液体种子培养基中，静止培养24h，再在温度为23℃、120r/min的条件下暗培养6d，得到菌悬液，然后加入400ml无菌水，得液体菌种；
c. 取8ml液体菌种接种到装有固体培养基的培养瓶中，置于温度为22℃、湿度为55％～60％的条件下暗培养7～10d，得菌丝体；然后移至光下并在白昼温度为23℃、湿度为55％～60％、光照强度为180～220lx、每天光照10～12h、昼夜温差为10℃的条件下培养至菌丝体全部由白色转为黄色，增加湿度到80％～85％，并将培养瓶上的通气孔打开，继续培养至子实体生长到4～8cm高、子实体表面出现黄色粉末状物质，进行采收；所述固体培养基由大米、黑蚂蚁粉和营养液组成，大米、黑蚂蚁粉和营养液的用量比例为40g：0.5g：20ml。
所述固体培养基中的黑蚂蚁粉末是将黑蚂蚁粉碎后过20目筛；所述营养液每升中有20g蛋白胨、20g葡萄糖、1g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁、0.05g维生素B1和余量的水，121℃高压灭菌40min。
本发明是在培养基中加入黑蚂蚁粉，有效丰富了北虫草培养基蛋白质含量，将黑蚂蚁中的有效成分转移至北虫草实体中，既利于北虫草的生长，提高了出草率，又利于虫草素的转化合成，极大地提高虫草素的含量（可达0.96％）。
具体实施方式
a. 将北虫草菌株接种到PDA固体培养基上，在28℃生化培养箱中暗培养5d，得到活化的菌种，其中的PDA固体培养基为现有技术；
b. 将活化的菌种切成1cm×1cm的菌块，接种到200ml的液体种子培养基中，静止培养24h，再在温度为23℃、120r/min的条件下暗培养6d，得到菌悬液，然后加入400ml无菌水，得液体菌种；
c. 取8ml液体菌种接种到装有固体培养基的培养瓶中，置于温度为22℃、湿度为55％～60％的条件下暗培养7～10d，得菌丝体；然后移至光下并在白昼温度为23℃、湿度为55％～60％、光照强度为180～220lx、每天光照10～12h、昼夜温差为10℃的条件下培养至菌丝体全部由白色转为黄色，增加湿度到80％～85％，并将培养瓶上的通气孔打开，继续培养至子实体生长到4～8cm高、子实体表面出现黄色粉末状物质，进行采收；所述固体培养基由大米、黑蚂蚁粉和营养液组成，大米、黑蚂蚁粉和营养液的用量比例为40g：0.5g：20ml。
固体培养基中的黑蚂蚁粉末是将黑蚂蚁粉碎后过20目筛；所述营养液每升中有20g蛋白胨、20g葡萄糖、1g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁、0.05g维生素B1和余量的水，121℃高压灭菌40min。
用现有色谱方法分析所产出的北虫草的成分，其虫草素的含量可达0.96％。

Claims (2)

1.一种可提高虫草素含量的北虫草培养方法，其特征在于按如下步骤进行：
a. 将北虫草菌株接种到PDA固体培养基上，在28℃生化培养箱中暗培养5d，得到活化的菌种；
b. 将活化的菌种切成1cm×1cm的菌块，接种到200ml的液体种子培养基中，静止培养24h，再在温度为23℃、120r/min的条件下暗培养6d，得到菌悬液，然后加入400ml无菌水，得液体菌种；
c. 取8ml液体菌种接种到装有固体培养基的培养瓶中，置于温度为22℃、湿度为55％～60％的条件下暗培养7～10d，得菌丝体；然后移至光下并在白昼温度为23℃、湿度为55％～60％、光照强度为180～220lx、每天光照10～12h、昼夜温差为10℃的条件下培养至菌丝体全部由白色转为黄色，增加湿度到80％～85％，并将培养瓶上的通气孔打开，继续培养至子实体生长到4～8cm高、子实体表面出现黄色粉末状物质，进行采收；所述固体培养基由大米、黑蚂蚁粉和营养液组成，大米、黑蚂蚁粉和营养液的用量比例为40g：0.5g：20ml。
2.根据权利要求1所述的可提高虫草素含量的北虫草培养方法，其特征在于所述固体培养基中的黑蚂蚁粉末是将黑蚂蚁粉碎后过20目筛；所述营养液每升中有20g蛋白胨、20g葡萄糖、1g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁、0.05g维生素B1和余量的水，121℃高压灭菌40min。
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PB01 Publication
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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